JPH02268690A - ビスホモ―γ―リノレン酸含有脂質の製造法 - Google Patents

ビスホモ―γ―リノレン酸含有脂質の製造法

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JPH02268690A
JPH02268690A JP1089982A JP8998289A JPH02268690A JP H02268690 A JPH02268690 A JP H02268690A JP 1089982 A JP1089982 A JP 1089982A JP 8998289 A JP8998289 A JP 8998289A JP H02268690 A JPH02268690 A JP H02268690A
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JP
Japan
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linolenic acid
bishomo
medium
lipid
sesame oil
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JP1089982A
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Toshiaki Nakajima
中島 寿昭
Toshiji Shimauchi
島内 敏次
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Idemitsu Petrochemical Co Ltd
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Idemitsu Petrochemical Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 [産業上の利用分野] 本発明はビスホモ−γ−リノレン酸(8−11−14エ
イコサトリエン酸)含有脂質を安価に大量生産する方法
に関する。
[従来の技術及び発明が解決しようとする課題]ビスホ
モーγ−リノレン酸を生産する微生物としては、モルテ
ィニラ属、エントモフソラ属、コニディオボラス属等が
知られている。しかしながら、これらの微生物をグルコ
ースを炭素源として培養すると、ビスホモ−γ−リノレ
ン酸の生産量が低いという欠点があった。
[課題を解決するための手段] そこで、本発明者らはビスホモ−γ−リノレン酸の生産
性の向上を図るべく検討した結果、培地にゴマ油または
ゴマ油中の成分を添加することによりビスホモ−γ−リ
ノレン酸を効率よく大量生産できることを見出し、この
知見に基づき本発明を完成するに到った。
すなわち、本発明はコニディオボラス属に属し、ビスホ
モ−γ−リノレン酸含有脂質生産能を有する微生物を、
ゴマ油を含有する培地で培養し、培養物からビスホモ−
γ−リノレン酸含有脂質を採取することを特徴とするビ
スホモ−γ−リノレン酸含有脂質の製造法を提供するも
のである。
本発明において使用するコニディオボラス属に属し、ビ
スホモ−γ−リノレン酸含有脂質生産能を有する微生物
としては、例えばコニディオポラス・ナノデス(Con
idiobolus nanodes) CB5183
/62.コニディオボラス・ランブラウジニス(Con
idiaboIus lamprauges)八TCC
12585,コニデイオボラス・ヘテロスポラス(Co
口1dioboIusheterosporus) A
TCC12941等が挙げられる。これらの中でコニデ
ィオボラス・ナノデスCB5183/62が好ましい。
本発明では、上記微生物を培養してビスホモ−γ−リノ
レン酸含有脂質を製造するための培地にゴマ油またはゴ
マ油中の成分を含むことを必須とする。ここで、ゴマ油
とはゴマの種子から得られる油を指し、食用、薬用を問
わず用いることができ、特に圧搾端出したものが好まし
く、さらにゴマやすりゴマなどからジクロロメタン−メ
タノール等で抽出した抽出物、圧搾抽出したものを水蒸
気蒸留して得られる抽出物、ゴマ油中のトリグリセライ
ドをシリカゲルカラムクロマトにより除いたもの等も用
いることができる。ゴマ油の添加量としては0.1〜1
5 voR%の割合である。ゴマ油を培地に添加する時
期は培養を初ぬる前が好ましいが、培養途中から加えて
もよい。
上記微生物を培養するための境地としては、炭素源、窒
素源、無機塩類などを含むものが用いられる。炭素源と
しては、上記ゴマ油のほかにブドウ糖、オリーブ油、サ
フラワー油、γ−リノレン酸含有油脂などの炭水化物や
油脂等が用いられる。これらの炭素源の中でもγ−リノ
レン酸含有油脂が好ましい。ここで、γ−リノレン酸含
有油脂としては、月見草油;モルティエレラfMort
ierellaJ属、ムコール(Mucor)属、カニ
ンガメラ(CunniBhamella) X等に属す
る糸状菌から抽出された微生均油があげられる。
これらの炭素源は複数の種類を用いてもよく、また培養
途中から加えてもよい。通常、これらの炭素源は培地に
2〜15 voR%添加すればよい。
また、窒素源としては酵母エキス、ペプトン。
大豆粕などの有機窒素源が好ましく、無機塩類としては
リン酸カリウム(KH2PO4)、鉄塩(FeSO4・
71120)、マグネシウム塩(MgSO4・7N、0
) 、亜鉛塩(ZnSO4)などが用いられる。その他
、必要に応じて微量元素や栄養源を添加することもでき
る。
上記微生物の培養は通常、液体培地にて振どう培養1通
気攪拌培養などにより行なわれ、培養の温度、時間など
は微生物の性質等を考慮して目的とする脂質の生a量が
高くなるような条件を設定すればよく、通常は15〜4
0℃、好ましくは20〜30℃で2〜7日間、好ましく
は3〜5日間行なう。
このようにして目的とする脂質を生産せしめた後、培養
物から該脂質を採取する。ビスホモ−γ+ IJルン酸
含有脂質は培養物から直接採取することもできるが、培
養物には未利用のゴマ油や炭素源として加えた油脂が含
まれているので、培養物より菌体を分離し、得られた菌
体から目的とする脂質を採取することが好ましい。この
場合、ビスホモ−γ−リノレン酸を分離、精製するため
の常法を適用すればよく、たとえは溶剤抽出、クロマト
グラフィーなどにより行なうことができる。
[実施例] 次に、本発明を実施例により詳しく説明するが、本発明
はこれらによって制限されるものではない。
比較例1 第1表に示した組成の培地に炭素源としてグルコース3
ロ 油3voJZ%またはγーリルン酸含有油3vo℃%を
各々加えた培地を作製した。この培地100mρを50
0mA!の三角フラスコに入れ、121 ’Cで15分
間滅菌後、コニディオボラス・ナノデスCB5 183
156を接種し、30℃で4日間振どう培養した。
第1表 Kl(2PO4 MgSO4 ペプトン イーストエキストラフ FeSO4 1g 0g ト        5  g 0、01 g 培養終了後、遠心分離により菌体を集菌し、リン酸緩衝
液(p)17.0)を用いて洗浄した後、吸引ろ過によ
り菌体を採取した。この菌体をアルミ製のカップに入れ
、ガラスピーズ メタノール クロロホルムを加えてホ
モジナイザーで菌体を破砕し、菌体内の脂質を抽出した
。抽出した脂質をメチルエステル化して、ガスクロマト
グラフィーにより脂肪酸組成を分析した。この結果を第
2表にボす。
第2表 (g#)  (g#+) グルコース   19.0   3.8オリーブ油  
21.6    B、3サフラワー油 26.6  1
0.2 (g/R) 0.06 0.21 率(ネ) 12.0 6.1 (g/R) 0.46 0.50 なお、ビスホモ−γ−リノレン酸の同定は、以下の方法
により行なった。ビスホモ−γ−リノレン酸の標品と菌
体から抽出した脂質のメチルエステル化物を混合してキ
ャピラリーガスクロマトグラフィー(カラム: PEG
 20M )で分析したところ、ビスホモ−γ−リノレ
ン酸画分のピークが大きくなった。また、菌体から抽出
した脂質のメチルエステル化物を硝酸銀含浸薄層クロマ
トグラフィーにより、トリエン画分を分取した。
この画分にはγ−リノレン酸とビスホモ−γ−リノレン
酸が含まれていた。分取したトリエン画分から、液体ク
ロマトグラフィー(カラム二〇DS)によりビスホモ−
γ−リノレン酸を分取した。このビスホモ−γ−リノレ
ン酸をピコリニル誘導体化し、キャピラリーガスマスス
ペクトラムにより同定した。
実施例1 第1表に示した培地にゴマ油(オレイン酸37%、リノ
ール酸44%)を培地1℃に対して3〜5vo、ff%
加えた培地を作製した。この培地100mA!を500
m!!の三角フラスコに入れ、コニディオボラス・ナノ
デス[:BS 183762を接種し、30℃で4日間
振どう培養した。培養終了後、比較例1と同様の方法で
菌体内の脂質の分析を行なった。この結果を第3表に示
す。
第3表 fvog主)  (g#) (g/i’)  (*) 
 (g#)率(U (g#)3    26.0   
8.0   8.8   0.70  11.1  0
.884     2B、2   9.4   7.9
   0,74   7.6  0.715     
31.0  10.7   6.7   0.72  
 6.8  0.73第3表から明らかなように、5v
of1%で菌体収量はほぼ最高に達した。また、ビスホ
モ−γ−リノレン酸の含有率は3vofL%のときが最
も高く8.8%であり、収量は4voj2%のときが最
も高く0.74g/Rであった。
実施例2 実施例1においてゴマ油を培地1℃に対し3vou%と
し、コニディオボラス・ナノデスCB5183/62の
代わりにコニディオボラス・ヘテロスポラスAT(:(
: 12941を用いたこと以外は実施例1と同様に行
った。
その結果、菌体収量は25.1g/i’ 、油脂収量は
8.0g/i’、 ビスホモ−γ−リノレン酸の含有率
は42%であり、収量は0.34g/f!であった。な
お、アラキドン酸の含有率は1.4%であり、収量はo
、ttg/a であった。
実施例3 第1表に示した培地に炭素源としてγ−リノレン酸含有
油(オレイン酸40%、リノール酸10%。
γ−リノレン酸16%)1vo、Q%およびゴマ油2 
vof1%を加えた培地を作製した。この培地100m
Nを500mA’の三角フラスコに入れ、コニディオボ
ラス・ナノデスCB5183/62を接種し、30℃で
4日間培養した。培養終了後、比較例1と同様の方法で
菌体内の脂質の分析を行った。この結果を第4表に示す
第4表 29.1     9.3        8.0  
          0.74実施例4 ゴマ油3gをシリカゲルカラムを用いて分画した。まず
、ヘキサンで抽出したところ、ヘキサン抽出画分はほと
んどトリグリセライドであり、約2.7gであった。次
いで、ヘキサンで抽出した後の残漬をクロロホルムで抽
出し、さらにその残漬をメタノールで抽出した抽出画分
(クロロホルム・メタノール抽出画分)は約300mg
であった。
この両分を用いて以下の実験を行なった。
第1表に示した培地にクロロホルム・メタノール抽出画
分約300mgとγ−リノレン酸含有油3Vo℃%を加
えた培地にコニデイオボラス・ナノデス(:BS 18
3/62を接種し、30℃で4日間振どう培養した。培
養終了後、比較例1と同様の方法で菌体内の脂質の分析
を行った。その結果、ビスホモ−γ−リノレン酸含有率
13%、アラキドン酸含有率5.7%であり、ビスホモ
−γ−リノレン酸収量は1.1g/f、アラキドン酸収
量は0 、47 g/!!であった。
実施例5 第5表に示した培地にゴマ油を培地IJ2に対して9 
vou%加えた培地を作製した。この培地6.12を1
oflのジャーファーメンタ−に入れ、121℃で15
分間滅菌した。ここに第1表に示した培地にゴマ油3v
oj2%を加えた培地600+ni!を用いて前培養し
たコニディオボラス・ナノデスにBS 183/62を
接種し、30℃で4日間通気攪拌培養した。培養終了後
、比較例1と同様の方法で菌体内の脂質の分析を行った
。その結果、総菌体収量480g、総油脂収量168g
、総ビスホモーγ−リノレン酸の含有率は7.1%、収
量は12゜Ogであった6なお、ビスホモ−γ−リノレ
ン酸の収量は培地1亘あたり2.0gであった。また、
アラキドン酸の含有率は4.8%であり、収量は1.3
g/xであった。
第5表 にH2PO4 gSO4 ペプトン イーストエキストラフ FeSO4−7)i20 蒸留水 g 0g ト        15g 0.033 fL 実施例6 第5表に示した培地にゴマ油、オリーブ油およびサフラ
ワー油の等量混合油脂を培地11に対して9voβ%加
えた培地を作製した。この培地6JZをl0flのジャ
ーファーメンタ−に入れ、実施例5と同様にして前培養
したコニデイオボラス・ナノデスces xa3/62
を接種し、30℃で4日間通気攪拌培養した。培養終了
後、比較例1と同様の方法で菌体内の脂質の分析を行っ
た。その結果、総菌体収量420g、総油脂収量132
g、総ビスホモーγ−リノレン酸収量は789gであっ
た。ビスホモ−γ−リノレン酸の含有量は6゜0%であ
り、収量は培地1flあたり1.3 gであった。なお
、アラキドン酸の含有率は4.3%で、収量はx、og
/pであった。
実施例7 第5表に示した組成の培地にゴマ油を培地IIlに対し
てQvo℃%加えた培地を作製した。この培地6kをl
iのジャーファーメンタ−に入れ、実施例5と同様にし
て前培養したコニデイオボラス・ナノデスCBS 1f
13/62またはコニディオボラス・ランブラウジニス
ATCC12585を接種し、30’Cで4日間通気攪
拌培養した。
培養終了後、比較例1と同様の方法で菌体内の脂質の分
析を行なった。この結果を第6表に示す。
第6表 (g#)  (g/ff)   鴎)   (g#) 
 (g#)CBS  183/62 ATCC12585 比較例2 実施例7において、ゴマ油の代わりにγ−リノレン酸含
有油(オレイン酸40%、リノール酸10%、γ−リノ
レン酸16%)を用いたこと以外は実施例7と同様の操
作を行なった。この結果を第7表に示す。
第7表 (g#) (呂/ρ) 輸) (g#) (g/++) CBS  xa3/a2 コニディオボラス・ ランブラウジニス      55 3 18.8  
 3.5   0,66  6.58ATCC1258
5 実施例8 実施例4のメタノール・クロロホルム画分およびγ−リ
ノレン酸含有油の代わりにゴマ油から分離したセサミン
、セサモリンをそれぞれ30m8を加えた境地を用いた
こと以外は実施例4と同様に行った。その結果を第8表
に示す。
第8表 (g#り (g#’)  (宅)  (g#)重陽) 
(g/−りセサミン    25.0    B、6 
 15.8  136   7.3   0.63七サ
モリン   27.7   8.7  12.5  1
.09  10.0   0.87[発明の効果] 本発明によれば、微生物を用いてビスホモ−γ−リノレ
ン酸を製造するにあたり、培地にゴマ油を添加すること
によりビスホモ−γ−リノレン酸を効率よく、安価に大
量生産でざる。得られたビスホモ−γ−リノレン酸は医
薬品、生化学用試薬として有用である。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)コニディオボラス属に属し、ビスホモ−γ−リノ
    レン酸含有脂質生産能を有する微生物を、ゴマ油を含有
    する培地で培養し、培養物からビスホモ−γ−リノレン
    酸含有脂質を採取することを特徴とするビスホモ−γ−
    リノレン酸含有脂質の製造法。
JP1089982A 1989-04-10 1989-04-10 ビスホモ―γ―リノレン酸含有脂質の製造法 Pending JPH02268690A (ja)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5376541A (en) * 1991-09-30 1994-12-27 Suntory Limited Process for production of 8,11-eicosadienoic acid using Mortierella alpina
US6280982B1 (en) 1991-09-30 2001-08-28 Suntory Limited Process for production of dihomo-γ-linolenic acid and lipid containing same

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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US5376541A (en) * 1991-09-30 1994-12-27 Suntory Limited Process for production of 8,11-eicosadienoic acid using Mortierella alpina
US6280982B1 (en) 1991-09-30 2001-08-28 Suntory Limited Process for production of dihomo-γ-linolenic acid and lipid containing same
US6602690B2 (en) 1991-09-30 2003-08-05 Suntory, Ltd. Process for production of dihomo-γ-linolenic acid and lipid containing same

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