JPH02247546A - 分析要素の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［従来技術とその欠点］ ドライケミストリーはその簡便性、即時性から近年臨床
検査分野に急速に普及してきた。ドライケミストリーに
於いては、小病院、医院等での使い易さを考慮すると、
較正操作を不要とすることが望ましい、較正操作不要と
は、病院等で使用される際に標準液等でシステムを、正
確な測定値が得られるよう調整する必要の無いことを言
う、このことが望まれる理由として次のことが挙げられ
る。ドライケミストリーを用いて有利な点の一つは、測
定が必要な時にすぐに測定できることである。つまりド
ライケミストリーを用いるのが有利なのは、一定数以上
の検体を集めて一度に多量に測定するのでなく、必要に
応じて、場合によってはそれが１検体であっても測定す
る場合である。このことにより測定の即時性が向上し、
より効果的な医療行為が為されることになる。しかしな
がらそのような測定をする場合、較正操作が問題となる
。即ち、このようなばらばらの測定要求が検査者に来た
場合、較正をいつ、あるいはどのような時間間隔で行う
か、極端な場合測定要求が１日に１件か２件（小病院で
は可能性が高い）でも較正操作を行うのか、較正自身も
コストがかかるので、大きな問題となる。

従って、較正操作不要ということが、即時性が向上した
より効果的な医療行為そのものに大きな意味を持ってく
るのである。　較正操作不要と言うことは、上記のよう
に使用する側にとっては大変好ましいことだが、その分
析要素を製造する側にとっては大変な負担となる。なぜ
なら、分析要素は通常ロット生産されるが、生産ロフト
は材料のロット差、工程変動などの影響をうけて性能の
ロフト間第を持つからである。

日常較正操作を要しないドライケミストリーのシステム
では、通常、システムが内蔵検量線なるものを持つ、検
量線とは分析アナライト量と測定される発色等（変色、
蛍光も含める）の光学濃度（以下、ＯＤと略記する）と
の関係を示すグラフまたは式のことで、一般に較正操作
で作られる。ドライケミストリーで較正操作不要とする
には、これを予め製造者側で作成し、システムに記憶さ
せておく必要がある。これを内蔵検量線と呼ぶ。

内蔵検量線を持つシステムでは、出荷される分析要素の
特性がこの内蔵検量線からずれないこと、出荷後分析要
素が経時変化して内蔵検量線からずれないことが、品質
保証の上で重要なポイントとなる。内蔵検量線からずれ
ないとは、出荷される分析要素の実際の検量線（これを
実検量線と呼ぶことにする）が内蔵検量線と同一である
ことを意味する。工業製品には一般にばらつきがあり、
規格が設けられているが、この考え方で、検量線が同一
であるとは、実検量線と内蔵検量線の差が規格内である
ことを意味する。

勿論この規格は、その範囲で変動しても実用上問題を生
じない狭い幅であることが要求される。

検量線は直線の場合が多く、分析アナライトの量（濃度
、活量、活性値等）をＸ軸に、発色等のＯＤをｙ軸にと
ると ｙ＝ａｘ＋ｂ なる−次の直線式で表される場合が多い、この式で、ａ
は分析アナライトの量に対してのＯＤの変化しやすさを
表しているので、ａを感度値と呼ぶことにする。この式
で、ｂは分析アナライトの量がゼロのときのブランク値
を表しているので、トをブランク値と呼ぶことにする。

ドライケミストリーでは一般に分析要素の反射光学濃度
を測定するため、検量線が直線にならないことが多い、
この場合、反射測光と透過測光の関係式により検量線を
直線にすることができる。しかし、それでも検量線が直
線にならない場合が稀ではない、これは複数層中での複
雑な反応のため反応収率等が１にならないからと考えら
れる。検量線がやや湾曲した曲線の場合でも、便宜的に
検量線を直線に近似し、感度値、ブランク値という２つ
の要素で、検量線を表現出来る。特に同種の製品の場合
にはこの近似が成り立つ、これは、層構成や反応原理が
同じなら、湾曲の度合いが変わらないためと考えられる
。

検量線の感度値とブランク値は、工程変動、原材料の変
動等の影響で変動するが、特にブランク値は原材料の変
動の影響を強く受ける。原材料は純粋なものが望まれる
が、現実には色々な不純物を含んでいるのが普通である
０例えば （１）骨ゼラチンは元々カルシウム（Ｃｍ）とともに骨
を形成していたため、Ｃａを含む、骨ゼラチンをＣｍ分
析要素に用いると、この不純物としてのＣａがブランク
値に大きく影響する。

（２）発色剤として用いられるジアゾニウム塩は不安定
なため、精製の過程で一部分解して、可視部に吸収をも
つ色素を含むことが多い、ビリルビンの測定にジアゾニ
ウム塩を用いる場合、この不純物としての色素がブラン
ク値に影響する。

（３）中間生成物として過酸化水素を利用する酸化還元
系の発色系を用いる場合、原材料に含まれると見られる
酸化物らしきものによりブランク値に影響が出る場合が
ある。

これらはいずれもブランク値の変動因子となるので、ブ
ランク値を一定にするためには原材料を良く精製し、高
い純度で用いることが考えられる。しかし、原材料の高
純度化は原材料の値段を引き上げ、コスト高を招く、だ
からといって精製しないままでは検査規格値を度々外れ
、結果としてコスト高を招いてしまう、材料コストを引
き上げることなく、検量線のブランク値を一定にする方
法が望まれた。

［解決しようとする技術的課題］ 本発明の技術的課題は、水浸透性層を有し、該水浸透性
層に水性液体中の特定成分の存在下に、光学的に検出し
得る物質を生成する、試薬組成物を含む多層分析要素の
製造において、原材料の精製等によるコスト上昇を招く
ことなく、ドライケミストリーに用いる乾式化学分析要
素の検量線のブランク値を一定にすることである。

また、原材料の精製、選別を特に厳密にしなくても、生
産ロット間で検量線のブランク値が一定な乾式化学分析
要素を製造する方法を実現することである。

［技術的課題の解決手段］ 上記課題は、支持体の上に塗布組成物を塗布するかまた
は多孔性層に含浸組成物を含浸させる工程と、前記塗布
または含浸された層を乾燥する工程から成る、多層分析
要素の製造方法において、前記塗布組成物または含浸組
成物に、前記水性液体の存在下にしかし前記特定成分の
不存在下に前記光学的に検出し得る物質を生成する物質
を、添加する工程を含む事を特徴とする、多層分析要素
の製造方法により、解決された。

水性液体の存在下にしかし前記特定成分の不存在下に、
前記光学的に検出し得る物質を生成する物質を、本明細
書ではカブリ剤と呼ぶ。

カブリ剤から生成される光学的に検出し得る物質の具体
例には、以下のごときものが挙げられる。

１）ロイコ色素の酸化体として生成した色素（例えば米
国特許４，０８９，７４７号、特開昭５９−１９３３５
２号等に記載されたようなアリールイミダゾールロイコ
色素）、２）ジアゾニウム塩からカップリングにより生
成したジアゾ色素、例えばとリルビンとジアゾニウム塩
とのカップリング反応生成物 ３）酸化された水素供与体とカプラーとのカップリング
により生成したアゾメチン色素（例えば４−アミノアン
チピリン類と、フェノール類またはナフトール類）また
はケトメチレン色素 ４）還元型補酵素（例えばＮＡＤＨ，ＮＡＤＰＨ）と電
子伝達剤（例えばジアホラーゼ）の存在下で生成するホ
ルマザン色素 ５）例えばｐ−ニトロフェノール、０−クロロ−ｐ−ニ
トロフェノール、ｐ−ニトロアニリンのような、解離ア
ニオンが可視光を吸収する物質 ６）有色金属錯塩、例えばオルトクレゾールフタレイン
コンブレキソンのカルシウム錯体 上記光学的に検出し得る物質は、色素以外、例えばＮＡ
ＤＨのように紫外線を吸収する物質であってもよい。

本発明で用いられるカブリ剤は、分析要素に水性液体の
試料を付着させたとき、試料中に分析の目的物である特
定成分が存在しなくても上記のような色素等を分析要素
の中で生成することができる物質である。

この物質、つまりカブリ剤は、具体的には、その分析要
素の持つ分析反応系に関与して、検出可能な色素等を生
成することのできる物質である。

カブリ剤の具体例としては、 １）酸化によって色素を生成する組成物、例えば過酸化
水素とペルオキシダーゼ。

２）酸化されたときに他の化合物とカップリングにより
色素を生成する化合物を含む組成物（例えば４−アミノ
アンチピリン類と、フェノール類またはナフトール類）
から色素を生成する組成物、例えば過酸化水素とペルオ
キシダーゼ。

３）ジアゾニウム塩とカップリングするカプラー４）還
元型補酵素（例えばＮＡＤＨ，ＮＡＤＰＨ）と電子伝達
剤（例えばジアホラーゼ）の存在下に、ホルマザン色素
前駆体（例えばニトロテトラゾリウムブルー）から生成
するホルマザン色素を検出する系では、還元型補酵素、
５）アンモニアをｐＨ指示薬で検出する系では、アンモ
ニアまたは、アンモニウム塩とＭ衝剤５ ６）有色キレート化合物を生成する系では、金属塩例え
ばカルシウム塩、 フ）酵素活性が関与する反応では、酵素、等を挙げるこ
とができる。

本発明の好ましい具体的実施形態は次の通りである。即
ち、コスト高にならない程度に精製された材料または選
定されたロットの材料を用いて、予備試験を行ってブラ
ンク値を求める。予備試験は溶液による湿式法でもよい
し、試験用の多層分析要素を少量作製してもよい、内蔵
検量線のブランク値との差を求め、この差に相当する量
の色素等の光学的に検出し得る物質を生成することがで
きる量のカブリ剤（先に定義された）を、いずれかの塗
布組成物または含浸組成物に添加して多層分析要素を製
造する。

本発明の実施に当たっては、前述から明らかなように内
蔵検量線のブランク値は、コスト高にならない程度に精
製又は選定された材料で製造された多層分析要素のブラ
ンク値の変動領域より充分高く、例えば１．５ないし３
倍程度に、設定されていることが必要である。もし、設
定された内蔵検量線のブランク値が、多層分析要素の予
想されるブランク値の変動領域と大差ない場合には、本
発明の方法を適用しても効果がない。

本発明は種々の乾式分析要素に適用できる０例えば、特
公昭５３−２１，６７７号、特開昭５５−１６４．３５
６号、特開昭６０−２２２゜７６９号（特願昭５９−７
９１５８号）等に記載されたものに適用できる０本発明
は、例えば次のような層構成を有する分析要素の製造に
適用できる。

（１）水平浸透性・光透過性支持体上に試薬組成物を含
む液体展開層を有するもの。

（２）支持体（同上）上に試薬層と液体展開層を、この
順に有するもの。

（３）支持体く同上）上に検出層、試薬層、液体展開層
をこの順に有するもの。

（４）支持体（同上）上に試薬層、光反射層、液体展開
層をこの順に有するもの。

（５）支持体（同上）上に検出層、試薬層、光反射層、
液体展開層をこの順に有するもの。

（６）支持体（同上）上に検出層、光反射層、試薬層、
液体展開層をこの順に有するもの。

上記（１）、（２）または（４）において、支持体と液
体展開層（以下、展開層と言う）または試薬層との間に
吸水層を設けたもの、上記（２）ないしく４）において
試薬層と検出層または展開層との間に血球ろ過層を設け
たもの、上記（４）ないしく６）において光反射層と検
出層、試薬層もしくは展開層との間、試薬層と検出層と
の間、または試薬層と展開層の間に、さらに血球ろ過層
や妨害物除去層を設けたもの、上記（１）ないしく６）
において支持体が水浸透性であるもの、同じく支持体を
有しないもの等にも、本発明が適用できる。

検出層は一般に、被検成分の存在下で生成した色素等が
拡散し、光透過性支持体を通して光学的に検出され得る
層で、通常、親水性ポリマーにより構成される。吸水層
は一般に、被検成分の存在下で生成する色素が実質的に
拡散しない層で、通常、膨潤しやすい親水性ポリマーに
より構成される。

水浸透性層の少なくとも一つが多孔性層である場合には
、分析要素は支持体を有しなくてもよい。

展開層は付与（点着）された単位面積当たりほぼ均一な
量の試料液を、隣接する水浸透性層に対して供給するも
のが好ましい、有用な展開層は、特開昭５５−１６４，
３５６号（米国特許第４，２９２，２７２号）に記載さ
れた織物や、特開昭６０−２２２７６９号に記載された
編物のような繊維材料から成るものである。織物等には
特開昭５７−６６３５９号に記載されたようなグロー放
電処理を施してもよい、展開層には、展開面積、展開速
度等を調節するため親水性高分子あるいは界面活性剤を
含有させてもよい。

展開層を接着し積層するための接着層を、試薬層、光反
射層、濾過層、吸水層、検出層等の層の上に設けてもよ
い。

接着層は一般に、水で膨潤したときに多孔性層を接着す
ることができるような親水性ポリマー、例えばゼラチン
、ゼラチン誘導体等からなる。接着層の塗布組成物に前
記カブリ剤を添加してもよい。

本発明により製造される分析要素は光反射層を有しても
よい（例えば、試薬層と検出層の間、または試薬層と展
開層の間）、光反射層は、検出層、試薬層等に生じた検
出可能な変化（色変化、発色等）を光透過性を有する支
持体側から反射測光する際に、展開層に点着供給された
被検液の色、特に試料が全血である場合のヘモグロビン
の赤色、ビリルビンの黄色等を遮蔽するとともに光反射
層または背景層として機能する。光反射層は、親水性ポ
リマーをバインダーとして、酸化チタン等の光反射性微
粒子が分散された水浸透性の層であることが好ましい。

本発明により製造される分析要素の試薬層等の水浸透性
層には、光学的に検出し得る物質、例えば染料を生成し
得る組成物を含む、ロイコ色素の酸化によって染料を生
成する組成物（例として、米国特許４，０８９，７４７
号、特開昭５９−１９３３５２号等に記載されたような
アリールイミダゾールロイコ色素）、ジアゾ色素をカッ
プリングにより生成するジアゾニウム塩、酸化されたと
きに他の化合物とカップリングによって染料を生成する
化合物を含む組成物（例えば、４アミノアンチピリン類
と、フェノール想またはナフトール類）、還元型補酵素
と電子伝達剤の存在下で染料を生成することのできる化
合物から成るもの、金属と有色の錯塩を形成し得る化合
物等を、用いることができる。また、酵素活性を測定す
る分析要素の場合に、例えばｐ−ニトロフェノールのよ
うな有色物質を遊離しうる自己顕色性基質を、試薬層や
展開層に含むことができる。

試薬組成物は酵素を含むものでもよく、特開昭６２−２
７９８５９号明細書第１８ページから第２０ページに記
載されたものを用いることができる。

試薬組成物は、全部を親水性ポリマーを結合剤とする無
孔性層に含ませてもよい０Ｍｉ水性ポリマーとして例え
ば、ゼラチンおよびこれらの誘導体（例えばフタル化ゼ
ラチン）、セルロース誘導体（例えばヒドロキシエチル
セルロース）、アガロース、アクリルアミドまたはメタ
アクリルアミド重合体（各種ビニル性モノマーとの共重
合体を包含）等が利用できる。カブリ剤は、このような
試薬組成物を含む無孔性層を形成するための塗布液に添
加してもよい。

試薬組成物は全部または一部を多孔性層に含んでもよい
。

被検成分の存在下に発色を生ずる試薬組成物又はその一
部を多孔性層に含有させるには、試薬組成物の適当な溶
液または分散液を予め含浸させた多孔性展開層を、他の
水浸透性層、例えば試薬層の上に特開昭５５−１６４３
５６号のような方法で接着させる方法も有用である。

カブリ剤の全部または一部は多孔性層に含まれてもよい
。

それ故、上記の多孔性層に予め含浸させる試薬組成物の
溶液または分散液にカブリ剤を添加してもよいし、試薬
組成物とは別の含浸組成物に添加し、これを多孔性層に
含浸してもよい。

試薬組成物を含まない多孔性層を他の水浸透性Ｍ（例え
ば接着層、吸水層）の上に前記特開昭５５−１６４３５
６号のような方法で接着させた後、試薬組成物の溶液ま
たは分散液を多孔性層に塗布して含浸させてもよい、カ
ブリ剤は、接着された多孔性層に含浸させる試薬組成物
（溶液または分散液）に添加してもよいし、試薬組成物
とは別の含浸組成物に加えてもよい。

親水性ポリマーを結合剤とし試薬組成物を含む均一層を
塗布した後、試薬組成物を含まない多孔性層を特開昭５
５１６４３５６号のような方法で接着させることによっ
て、試薬組成物を多孔性層に実質的に含有させることが
できる。この際、試薬組成物を含む塗布液にカブリ剤を
添加してもよい。

試薬層の塗布、その他の無孔性水浸透性層を構成するた
めの組成物の塗布や、多孔性層への試薬組成物の塗布に
は、公知の方法を利用でき、例えばデイツプ塗布、ドク
ター塗布、ホッパー塗布、カーテン塗布、押し出し塗布
、多層押し出し塗布等を適宜選択して用いる。

塗布された層の乾燥には公知の方法を用いることができ
るが、特願昭６３−９６０６５号、同６３−９６０６６
号に記載された方法は有利である。含浸された層の乾燥
についても同様である。

試薬組成物を、異なる無孔性層、異なる多孔性層、又は
多孔性層と無孔性層（例えば検出Ｊｉｌ）に、分けて含
有させてもよい０例えば被検成分と試薬との反応により
中間体を生成する組成物を多孔性層に、生成した中間体
と反応して染料等を与える組成物（指示薬）を無孔性層
に含んでもよい。

試薬組成物には必要に応じ、活性化剤、緩衝剤、硬膜剤
、界面活性剤等を含有させることができる０本発明の分
析要素の試薬層に含有させることができるｗＬ街剤の例
としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やＢｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ誌　第５巻　第２号、４６７ページより４７
７ページ（１９６６年）に記載されているグツド（Ｇｏ
ｏｃｔ）のＭ衝剤などを挙げることができる。

［実施例１］ ゼラチン下塗りしである厚さ１８０μ次のポリエチレン
テレフタレート無色透明平滑フィルム上に、下記組成物
（ａ）を、各成分の乾燥後の塗布量が記載の通りになる
ように塗布し、乾燥したく指示薬層）。

（ａ） 脱イオンゼラチン（Ｃａ含量７１１１９１１）　　　　
　１６．８Ｆｉ／ｍ２ポリオキシエチレンノニルフェニ
ル エーテル（オキシエチレン単位的１０　＞　　　１．１
　ｇｈａ２３−シクロへキシルアミノプロパン −１−スルホン酸　　　　　　　　　　　　　２．８　
ｇ／ｖａ”０−クレゾールフタレインコンプレクソン　
　０．１５ｇ／ｍ２０−ヒドロキシキノリン−５−スル
ホン酸　　　０．５６ｇ７ｍ２（希ＮａＯＨ溶液でｐＨ
を１０．６に調整した）指示薬層塗布前に、Ｃａとして
０．４２　ｍｇ／ｓ２になる量のＣａ　Ｃ１２水溶液を
添加した。Ｃ＆Ｃ１２溶液は日立７０５０形自動分析装
置（（株）日立製作断裂）により濃度を検定して使用し
た。

さらにその上に下記組成物（ｂ）を、各成分の乾燥後の
塗布量が記載の通りになるように塗布し、乾燥した（接
着層）。

（ｂ） 脱イオンゼラチン　　　　　　　　　　　　１．４６ｇ
７ｍ”ポリオキシエチレン−ｐ ノニルフェニルエーテル　　　　　　　　０．１　ｇ７
ｍ２（オキシエチレン単位１０） 酸化チタン（右派産業（株）　Ｒ７８０）　　　　　（
１，８５ｇ／鵠２（希ＮａＯＨ溶液でｐＨを１０．６に
調整した）接着層表面を約２５℃の水でほぼ一様に濡ら
した後、１００Ｓ相当のＰＥＴ紡績糸からなる厚さ約２
５０μ−のトリコット編物生地を一様に圧着し、乾燥さ
せて、接着させた。

編物布地の上から、下記組成物（ｃ）を塗布した。

（Ｃ） ポリビニルピロリドン　　　　　　　　　　４．１　ｇ
／ｍ”（平均分子量３６万） ポリオキシエチレン−ｐ− ノニルフェニルエーテル　　　８．６６７ｍ２（オキシ
エチレン単位１０） くえん酸　　　　　　　　　　　　　　　　０．６　ｇ
／鵠２（溶媒：エタノール） ［実施例２］ Ｃａ含有量２２ρｐ−のゼラチンを用い、指示薬層の塗
布組成物に０　、１５　ｍｇ／ｍ”のＣａに相当するＣ
ａＣｅｚを加えた以外は実施例１と同様とした。

［比較例１］ 実施例１と同じで、ＣａＣｌ２添加を省略した。

［比較例２］ 実施例２と同じで、Ｃａ　Ｃ１２添加を省略した。

［測定例１］ 実施例１．２、比較例１．２の各分析要素を用いて、市
販管理血清モニトロールｌｘのカルシウム濃度を測定し
た結果を第１表に示す。

第１表 第１表から明らかなように、本発明の製造方法を用いて
製作された分析要素は、ゼラチン中のカルシウム含有量
が変化しても、カルシウム濃度の測定値の変動が僅かで
あった。これに対し比較例の分析要素の間では、カルシ
ウム濃度測定値がゼラチンのカルシウム含有量により変
動した。

［実施例３コ ゼラチン下塗りしである厚さ１８０μ肩のポリエチレン
テレフタレート無色透明平滑フィルム上に下記組成（ａ
、）の液を、各成分の乾燥後の塗布量が記載の通りにな
るように塗布し、乾燥した（吸水層を形成）。

（ａ、） ポリビニルピロリドン　　　　　　　　　２２．Ｏ６７
ｍ２（平均分子量３６万） ポリオキシエチレン〜ｐ ノニルフェニルエーテル　　　　　　　　０．２８６７
ｍ２（オキシエチレン単位４０） 硫酸亜鉛　　　　　　　　　　　　　　　　１．８ｇ／
鰺２ナフタレンジスルホン酸 ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　１．８　ｇｅ
ｔｓ”界面活性剤（エアロゾルＯＴ　）　　　　　　　
０．２３ｇ／ｍ”スルホサルチル アラルダイト　　　　　　　　　　　　　　０．７４ｇ
７ａ２上記ポリビニルピロリドンにはロット１を用いた
。

接着層表面を約２５℃の水でほぼ一様に濡らした後、１
００Ｓ相当のＰＥＴ紡績糸からなる厚さ約２５０μ−の
トリコット編物生地を重ね合わせ、圧着、乾燥させて、
接着させた。

編物布地の上から、下記組成（ｂ，）の液を塗布して、
布地に含浸させ、乾燥した。

（ｂ，） ダイフィリン　　　　　　　　　　　　　　１９．０　
ｇ７輪２ポリ（２−アクリルアミド−２−メチルプロパ
ンスルホン酸　　　　　　　　　　３．１　ｇ７ｍ”ナ
フタレンジスルホン酸ナトリウム　　　０．７４Ｈ／ａ
＋２ジー２−エチルへキシルスルホこはく酸ナトリウム
　　　　　　　　　　　　　　０．４　ｇ７ｍ２スルホ
サリチル酸・２水和物　　　　　　７．４２ｇ／ｎ２２
、４−ジクロロベンゼンジアゾニウムスルホサリチレー
ト　　　　　　　　　　０．８６ｇ／端２クロモトロー
プ酸２ナトリウム塩 ２水和物（和光純薬（株）製）　　　　　　８．２　ｒ
ａＨ／ｍ２溶媒：水 ［実施例４］ 下記以外は実施例３と同様とした。

塗布組成物（ａ、）中のポリビニルピロリドンにはロッ
ト２を用いた。

塗布組成物（ｂ３）中のクロモトロープ酸２ナトリウム
塩２水和物の量を３　、５　ｍｇ／ｖｂ２とした。

［実施例５］ 下記以外は実施例３に同じ。

塗布組成物（ｂ、）中のジアゾニウム塩には製造後室温
で１年経過したものを用い、クロモトロープ酸２ナトリ
ウム塩２水和物の量を４　、０　ｍｇ７ｍ”とした。

［比較例３］ クロモドロー１酸の添加を省略した以外、実施例３に同
じ。

［比較例４］ タロモトロープ酸の添加を省略した以外、実施例４に同
じ。

［比較例５］ クロモトロープ酸の添加を省略した以外、実施例５に同
じ。

［測定例２］ 実施例３．４．５、比較例３．４．５の各分析要素を用
いて市販管理血清モニトロールＩｘのビリルビン濃度を
測定した結果を第２表に示す。

第２表 第２表から明らかなように、本発明の製造方法を用いて
製作された分析要素は、ポリビニルピロリドンのロット
が変っても、ビリルビン濃度の測定値の変動が僅かであ
った。

これに対し比較例の分析要素の間では、ビリルビン濃度
測定値がポリビニルピロリドンのロットや保存期間によ
り変動した。

［実施例６］ ゼラチン下塗りしである厚さ１８０μ凝のポリエチレン
テレフタレート無色透明平滑フィルム上に下記組成（ａ
、）の液を、各成分の乾燥後の塗布量が記載の通りにな
るように塗布し、乾燥した（指示薬層を形成）。

（ａ、） ブロムフェノールブルー　　　　　　　　３４０１酢酸
ビニル・アクリル酸エチル 共重合体ラテックス（ロット１）　　　　８．５ｇＮ−
ポリオキシエチレン ｎ−オクタンスルホンアミド （オキシエチレン単位数平均１６　）　　　　１００ｍ
ｇ指示薬層の上に、ポリプロピレンより成るメンブラン
フィルタ−（平均孔径０．２μ転全空隙率７５、厚さ１
７０μｍ）を均一に圧着した（気体透過障壁層）。

さらにその上に下記（ｂｉ）、（ｃｍ）、（ｄｓ）各組
成物を、各成分の乾燥後の塗布量（１ｍ”あたり）が記
載の通りになるように順に塗布し、乾燥した。

反応層組成物：（ｂｇ） ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　　１１．７ｇ四
はう酸ナトリウム　　　　　　　　　　　１．７ｇｐ−
ノニルフェノキシポリグリシドール（グリシドール単位
的１０　）　　　　　　　　０．３ｇ４％アンモニア水
　　　（ＮＨ２として）１６０μｇクレアチニンイミノ
ヒドロラーゼ　　　７５０Ｕ（ｐＨを９．５に調整） アンモニア拡散防止層組成物：（ｃ＝）ゼラチン　　　
　　　　　　　　　　　　８．３ｇ四はう酸ナトリウム
　　　　　　　　　　　０．７５ｇｐ−ノニルフェノキ
シポリグリシドール（グリシドール単位的１０＞　　　
　　　　　０．２ｇ（ｐＨを９．０に調整） 内因性アンモニア捕捉層組成物：（ｄｉ）ゼラチン　　
　　　　　　　　　　　　　７・５ｇ四はう酸ナトリウ
ム　　　　　　　　　　　１．３５ｇｐ−ノニルフェノ
キシポリグリシドール（グリシドール単位的１０）　　
　　　　　　０．１７ｇα−ゲトグルタール酸　　　　
　　　　　　２．５ｇＮＡＤＰ８　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１．６ｇＧＬＤＨ７００００Ｕ ＜ｐＨを８．０に調整） 接着層表面を約２５℃の０．２％ｐ−ノニルフエノキシ
ボリグリシドール（グリシドール単位的１０）水溶液で
ほぼ一様に濡らした後、ＰＥＴ紡績糸からなる厚さ約２
５０μ−のトリコット編物生地を重ね合わせ、圧着、乾
燥させて、接着させた。

編物布地の上から、下記組成（ｅ、）の液を塗布して布
地に含浸させ、乾燥した。

展開層含浸組成物：（ｅ＝） メチルセルロース　　　　　　　　　　　８ｇ（２％水
溶液の２０℃で粘度５０ｃｐｓ）ヒドロキシプロピルメ
チルセルロース　　８ｇ（セルロースのメタノールおよ
び １．２−プロピレングリコールとの混合エーテル、メチ
ル化度的３０％、 ２−ヒドロキシ１０ピル化度約１０％）酸化チタン　　
　　　　　　　　　　　１０．７　ｇ（ルチル型、粒子
径０．２５〜０．４μ−）ポリエチレンオキシド−ｐ−
ノニル フェニルエーテル　　　　　　　　　ｚ、ｏ　ｇ（オキ
シエチレン単位的４０） ｐ−ノニルフェノキシポリグリシドール　　０．２２ｇ
（グリシドール単位的１０） （希ＮａＯＨ溶液でｐＨを７．５に調整した）。

［実施例７］ 実施例６において組成物（ａ６）中に酢酸ビニル・アク
リル酸エチル共重合体ラテックスのロット２を用い、組
成物（ｂ６）の４％アンモニア水の量をＮＨ，として７
０ｇｇ／ｌ１１２とした他は、実施例６と同様にして分
析要素を製作した。

［比較例６］ アンモニアの添加を省略した他は実施例６に同じ。

［比較例７］ アンモニアの添加を省略した他は実施例７に同じ。

［測定例３］ 実施例６．７、比較例６．７の各分析要素を用いて市販
管理血清モニトロールＩｘのクレアチニン濃度を測定し
た結果を第３表に示す。

第３表 第３表から明らかなように、本発明の製造方法を用いて
製作された分析要素は、ラテックスのロットが変っても
、クレアチニン濃度の測定値の変動が僅かであった。こ
れに対し比較例の分析要素の間では、クレアチニン濃度
測定値がラテックスのロットにより大きく変動した。

［実施例８］ ゼラチン下塗りしである厚さ１８０μｌのポリエチレン
テレフタレート無色透明平滑フィルム上に、下記組成物
（ａ−）を、各成分の乾燥後の塗布量が記載の通りにな
るように塗布し、乾燥した（指示薬層）。

（ａ、） 脱イオンゼラチン　　　　　　　　　　　　１６．８Ｈ
／ｍ２（Ｃａ含量７ｐ９−のもの） 界面活性剤　　　　　　　　　　　　　　　１．１　ｇ
／鋤２（ポリオキシエチレンノニルフェニル エーテル、オキシエチレン単位的１０）３−シクロへキ
シルアミノプロパン −１−スルホン酸　　　　　　　　　　　　　　２．８
　ｇ／ａ２０−クレゾールフタレインコンプレクソン　
　０．１５１１／１１２０−ヒドロキシキノリン−５−
スルホン酸　　　０．５６ｇ／ｅｘ”（希ＮａＯＨ溶液
でＰＨを１０．６に調整した）さらにその上に、下記組
成物（ｂａ）を、各成分の乾燥後の塗布量が記載の通り
になるように塗布し、乾燥した（接着層）。

（ｂ、） 脱イオンゼラチン　　　　　　　　　　　　１．４６ｇ
／ｍ”ポリオキシエチレン−ｐ ノニルフェニルエーテル　　　　　　　　０．１　ｇ７
ｍ”（オキシエチレン単位１０） 酸化チタン（石層産業（株）　Ｒ７８０）　　　　　０
．８５　ｇ／ｍ”（希ＮａＯＨ溶液でｐＨを１０．６に
調整した）接着層表面を約２５℃の水でほぼ一様に濡ら
した後、１００Ｓ相当のＰＥＴ紡績糸からなる厚さ約２
５０μ面のトリコット編物生地を重ね合わせ、圧着、乾
燥させて、接着させた。

展開層に用いる編み物布地には０　、４２　ｖａｇ／ｍ
”のＣａ含量となるように予めＣａＣｌ２水溶液を含浸
した。ＣａＣ１ｚ水溶液は日立７０５０形自動分析装置
（（株）日立製作断裂）により濃度を検定して用いた。

編物布地の上から、下記組成物（Ｃ８）を塗布した。

（Ｃ１） ポリビニルピロリドン　　　　　　　　　　４．１　ｇ
／Ｊ（平均分子量３６万） ポリオキシエチレン−ｐ− ノニルフェニルエーテル　　　　　　　　８．６　ｇ／
ｖａ’（オキシエチレン単位１０） くえん酸　　　　　　　　　　　　　　　　（１，６ｇ
／＋ａ’（溶媒：エタノール） 、［実施例９］ Ｃａ含有量が２２ρｐｐｍのゼラチンが用いられ、展開
層の布に０　、１５Ｈ／ｍ’のＣａに相当するＣａＣＬ
水溶液を予め含浸したこと以外は、実施例８と同様にし
た。

し比較例８コ 実施例８において展開層布地のＣａＣｌ２含浸を省略し
た。

［比較例９コ 実施例９において展開層布地のＣａ　Ｃ１２含浸を省略
した。

［測定例４］ 実施例８．９、比較例８．９の各分析要素を用いて１、
市販管理血清モニトロールｌｘのカルシウム濃度を測定
した結果を第４表に示す。

第４表 第４表から明らかなように、本発明の製造方法を用いて
製作された分析要素は、ゼラチン中のカルシウム含有量
が変化しても、カルシウム濃度の測定値の変動が僅かで
あった。これに対し比較例の分析要素の間では、カルシ
ウム濃度測定値がゼラチンのカルシウム含有量により変
動した。

特　　許

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）支持体上に水浸透性層を有し、水性液体中の特定成
   分の存在下に、光学的に検出し得る物質を生成する試薬
   組成物を、該水浸透性層に含む多層分析要素の製造方法
   であり、かつ支持体の上に無孔性の水浸透性層を構成す
   る塗布組成物を塗布するか又は多孔性層に含浸組成物を
   含浸させる工程と、この塗布又は含浸された層を乾燥す
   る工程を含む方法において、 前記塗布組成物または含浸組成物に、前記水性液体の存
   在下にしかし前記特定成分の不存在下に前記光学的に検
   出し得る物質を生成する物質を、添加する工程を含む事
   を特徴とする、多層分析要素の製造方法。 ２）前記塗布組成物に、水の存在下にしかし前記特定成
   分の不存在下に、前記光学的に検出し得る物質を生成す
   る物質を含む請求項１）の製造方法。 ３）前記含浸組成物に、水の存在下にしかし前記特定成
   分の不存在下に、前記光学的に検出し得る物質を生成す
   る物質を含む請求項１）の製造方法。 ４）前記支持体が水平浸透性である請求項１）の製造方
   法。