JPH0225447A

JPH0225447A - 高度不飽和脂肪酸類の製造方法

Info

Publication number: JPH0225447A
Application number: JP63172691A
Authority: JP
Inventors: Ron Hashizume; 橋爪　論; Yukihisa Tanaka; 幸久田中; Hisae Ooguchi; 大口　寿恵; Yasuhisa Noguchi; 野口　泰久; Tadashi Funada; 船田　正
Original assignee: Nippon Oil and Fats Co Ltd
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 1988-07-13
Filing date: 1988-07-13
Publication date: 1990-01-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、高純度のエイコサペンタエン酸、ドコサヘキ
サエン酸またはそれらの低級アルキルエステル類の新し
い濃縮分離方法に関する。

（従来の技術）エイコサペンタエン酸やドコサヘキサエンは、生体内の
重要な生理活性物質である■型のプロスタグランジンな
どへの変換が予想され、各種の生理活性能を発現するこ
とが知られている。特にエイコサペンタエン酸には、血
小板の凝集を阻害し、血中コレステロール値、中性脂質
値を下げる働きがあり、高血圧症、高コレステロール血
症、脳血栓、あるいは心筋梗塞などに効果があることが
知られている。又ドコサヘキサエン酸にもエイコサペン
タエン酸と同様の働きがあることが知られているが、そ
のほかにドコサヘキサエン酸は脳や目の網膜に多（含ま
れており、その機能が注目されている。

このようにエイコサペンタエン酸やドコサヘキサエン酸
は重要な脂質成分であり、その利用も医薬、健康食品な
どとして色々考えられ、高濃度の精製品の開発が期待さ
れている。

エイコサペンタエン酸やドコサヘキサエン酸の生化学的
価値が認められているにもかかわらず、これらの化学合
成は極めて困難であるため、天然の原料から抽出、精製
することが行われている。

例えば尿素付加法、分子蒸留法、超臨界炭酸ガス抽出法
、液体クロマトグラフィー法等が個々に実施されている
。

（発明が解決しようとする課題）魚油はエイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸
を多く含む天然油脂であるが、魚油中にはその他の脂肪
酸類も多く含まれているため、エイコサペンタエン酸と
］Ｓコリ°ヘキサエン酸とを高純度で分取するには、か
なりの技術を要する。その理由として、魚油中にはエイ
コサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸の類似物が
含まれており、それらがエイコサペンタエン酸やドコサ
ヘキサエン酸と類似挙動を起こすため、これらの分取が
困難であった。

また、エイコサペンタエン酸とドコサヘキサエン酸も互
いに似た挙動を示すため、従来からある分取型高速液体
クロマトグラフィーでは、魚油を原料としてエイコサペ
ンタエン酸とドコサヘキサエン酸とを大量に高濃度で濃
縮することは、原料組成が複雑なため、コスト的に問題
があった。

また、従来からの蒸留法などでも、同様に原料組成が複
雑なため、収率の低下が生じていた。

本発明は、上記課題を解決するもので、安価で入手しや
すい天然原料である魚油から、簡単な操作によりエイコ
サペンタエン酸またはドコサヘキサエン酸あるいはそれ
らのエステル類を濃縮分離する方法を提供することを目
的としている。

（課題を解決するための手段）本発明は、魚油をギャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）族菌
由来のリパーゼにより加水分解し、得られた分解混合物
を脂肪酸とグリセリドとに分離し、これらの各成分につ
いて低級アルキルエステル化し、ついで尿素付加法によ
り高度不飽和脂肪酸成分を濃縮し、さらに分子蒸留法、
超臨界炭酸ガス抽出法または液体クロマトグラフィー法
のいずれかの方法を用いて濃縮精製することにより、上
記脂肪酸成分からエイコサペンタエン酸またはそのエス
テルを、上記グリセリド成分からドコサヘキサエン酸ま
たはそのエステルを得ることを特徴とする高度不飽和脂
肪酸類の製造方法である。

本発明において原料に用いる魚油は特に制限はないが、
俗に青みの魚といわれているイワシ、サバ、サンマ、カ
ツオ、マグロなどが好ましい。

般にこれらの油脂の脂肪酸組成はＣ１，４：０　、５．
９％、Ｃ１６：０　、１５．９％、Ｃ１８：１　；　６
．６％、Ｃ１８：ＯＦ２．５％、Ｃ１，８：Ｉ　；　１
３．６％、Ｃ１８：２；１．２％、Ｃ１８：４　；２．
５％、Ｃ２０：１　；　８．６％、Ｃ２０：４　、０．
９％、エイコサペンタエン酸；　１２．９％、Ｃ２２：
１　；　７．８％、Ｃ２２：５　、１．９％、ドコサヘ
キサエン酸；８．８％、Ｃ２４：１　；　１．０％、そ
の他約１０％であるが、この数値は魚種、季節、産地に
よりいろいろと異なる。

本発明者らは、このような組成を持つ魚油からエイコサ
ペンタエン酸、またはドコサヘキサエン酸あるいはそれ
らのエステルを効率よく取り出すために、以下のような
手段を見出した。

ます魚油を、ドコサヘキサエン酸を加水分解しにくい特
性を持つキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）族由来リパー
ゼで加水分解すると、ドコサヘキサエン酸を高濃度に含
有するグリセリドと、エイコサペンタエン酸を多く含有
する脂肪酸の混合物を得ることができる。ついでこの分
解混合物を脂肪酸成分とグリセリド成分とに分離する。

すなわち、混合物にエタノールとヘキサンと水を加え分
層させ、これに水酸化ナトリウムの水溶液を滴下して、
水層側へエイコサペンタエン酸を高濃度に含む脂肪酸を
すトリウム塩として溶かし出し、後に塩酸等で脂肪酸に
戻す。他方、ヘキサン層から回収したドコサヘキサエン
酸を高濃度に含有するグリセリド画分を、水酸化ナトリ
ウムによりケン化分解し、塩酸で脂肪酸に戻した脂肪酸
混合物を得る。

ついで上記の各々の成分について低級アルコール中で少
量の触媒（塩酸、硫酸等）の存在下でエステル化して脂
肪酸低級アルキルエステルを得る。

また、上記のグリセリド画分を低級アルコール中で少量
の触媒（ナトリウムメチラート、水酸化ナトリウム、水
酸化カリウム等）の存在下でアルコリシスして同様に脂
肪酸低級アルキルエステルを得る。

ついで尿素付加法により、これらの成分から高度不飽和
脂肪酸成分を濃縮する。尿素付加法は尿素と結晶性付加
物を形成させることによって直鎖状炭化水素、脂肪酸、
アルコール類を分離、分別する方法である。一般に油脂
化学の分野では、飽和またはモノエンの脂肪酸が尿素と
結晶性付加物を形成することを利用し、高度不飽和脂肪
酸の濃縮などに用いられる。尿素（−１加物を生成させ
るには、例えば試料に対して２〜４倍量（Ｗ：Ｗ）（７
）尿素を、６〜１０倍量メタノールに加熱上溶解してお
き、これに試料を加え攪拌する。５〜３０℃まで冷却し
て飽和またはモノエンの脂肪酸を結晶化させ、濾過、洗
浄の後、目的とする高度不飽和脂肪酸を分離する。

本発明においては上記の工程の後、さらに分子蒸留法、
超臨界炭酸ガス抽出法または液体クロマトグラフィー法
のいずれかの方法を用いて濃縮精製工程を実施する。

分子蒸留法は、低級アルコールのエステルと成した脂肪
酸エステルを、ｌ×１０″３〜３　Ｘｌ０−２ｍｍ１ｇ
に減圧下、１００〜１５０℃に加熱し、各脂肪酸エステ
ルの沸点の差を利用して分離する方法である。

この工程を複数回くりかえすと、より高純度の製品が得
られる。

超臨界炭酸ガス抽出法は、炭酸ガスを温度３１．１〜１
００°Ｃ１圧カフ５．２〜２００　ｋｇ／ｃｌで超臨界
状態にし、各脂肪酸エステルの超臨界炭酸ガスへの溶解
度の差により抽出分別する方法である。

液体クロマトグラフィー法は、通常の液体クロマトグラ
フィーあるいはオープンカラムのクロマトグラフィー等
があり、溶離液としてはヘキサン、ヘキサン／アセトン
、ヘプタン、オクタン、イソオクタン等が使用でき、カ
ラム充填材としてはステアリルメタクリレートポリマー
ゲル、スチレンジビニルベンゼンポリマーゲル、メタク
リル酸メチル−エチレングリコールジメククリレートボ
リマーゲル等が使用できる。他にカラム充填材を用いな
い遠心液々クロマトグラフィーがある。

遠心液々クロマトグラフィーは、液体混合物の原液に比
重の異なる２種の溶剤を作用させて、混合物の中のある
特定の物質を他の物質から分離する方法である。液々抽
出の特徴は原液と溶剤の二層を形成して、この二層を比
重の差により分離することであって、遠心力を用いて短
時間で希望する物質を選択的に溶剤層に移動分離するこ
とができる。魚油の分解物の精製には、ｎ−ヘキサンを
移動相、アセトニトリルまたは９０％エタノールを固定
相とし、移動相で溶出する成分を正溶出画分とし、送液
方向を反転し固定相を送液して固定相内に残留する成分
を反転溶出画分とする。なお、本発明の実施例では、遠
心液々分配クロマトグラフモデルＣＰＣ−ＬＬＮ（三鬼
エンジニアリング（（榊）を用い、分配カートリッジ２
５０Ｗ型を使用して回転数７００〜９００、送液速度１
．０〜３．Ｏｍβで分画した。

（発明の効果）本発明のように魚油を原料として、特定のリパーゼでエ
イコサペンタエン酸とドコサヘキサエン酸を選択加水分
解し、分離処理を行うことにより、直接加水分解して得
られた原料と比較して、エイコサペンタエン酸またはド
コサヘキサエン酸の高純度濃縮に有利な中間原料が得ら
れるようになり、また、従来では同一の原料からエイコ
サペンタエン酸とドコサヘキサエン酸を濃縮するには複
雑な分離工程が必要であったが、本発明のように特定の
濃縮工程を組み合わせることにより、高純度エイコサペ
ンタエン酸とドコサヘキサエン酸とを別々に大量に得る
ことが可能となった。本性により安価な魚油より高純度
エイコサペンタエン酸またはドコサヘキサエン酸を大量
に簡単に得られることができるので、試薬、医薬、健康
食品などの素材として、安価に供給することができる。

（実施例）以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明する。

実施例１魚油５ｋｇと水２．５ｋｇを３０４容量の反応釜に入れ
、５０００ユニツトのキャンディダ・シリンドラセ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ　）由来リパー
ゼを５００　ｍｌ。

の水に溶かしたものを加え、３７℃に保温しながら回転
攪拌し２４時間反応させた。分解物にヘキサン１１１１
を加え分層させ、下層を抜き去った後、ヘキサン層を温
水で洗い酵素を洗い落とした。これにエタノール５．２
　βと水２１を加え、さらにＩＮの水酸化ナトリウム水
溶液１１．５　Ａを滴下攪拌後、静置して上層からグリ
セリド画分８８０ｇを得た。下層は塩酸を加えて脂肪酸
を遊離させ、３５５０　ｇの脂肪酸画分を得た。

それぞれの両分中のエイコサペンタエン酸、ドコサヘキ
サエン酸濃度は、ガスクロマトグラフィーによる分析の
結果、グリセリド画分がエイコサヘンクエン酸５．２％
、ドコサヘキサエンＭ４０．７％、脂肪酸画分がエイコ
サペンタエン酸１５．６％、ドコサヘキサエン酸１．３
％であった。

グリセリド画分５００ｇに５００ｇのエタノールと５ｇ
の水酸化カリウムを加え、リフランクス下２時間エステ
ル交換し、塩酸で中和し水洗後、脂肪酸エステルを１゜
５１のヘキサンで抽出した。ロータリーエバポレータで
脱溶媒後、４６０ｇの脂肪酸エステルを回収した。その
中から脂肪酸エステル２００ｇ、尿素８００ｇおよびヘ
キサン１６００ｍｐ、メタノール４８ｍ２を攪拌機の付
いたフラスコに仕込み、２時間室温で攪拌しながら反応
させた。付加体を濾別、ヘキサンで洗浄し、濾液と洗浄
液をロータリーエバポレータで減圧上脱溶剤し、１０４
ｇの濃縮エステルを得た。

濃縮エステルのエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエ
ン酸濃度はガスクロマトグラフィーによる分析の結果、
エイコサペンタエン酸９．１％、ドコサヘキサエン酸７
２．７％、その他１８．２％であった。

更にこのうちの５２ｇを分子蒸留（３Ｘ　１０−’＋ｕ
＋Ｈｇ、９５℃）にかけ、それを２回繰り返すことによ
り、２９．２ｇの高純度ドコサヘキサエン酸エチルエス
テル（エイコサペンタエン酸１．３％、ドコサヘキサエ
ン酸９７．８％、その他０．９％）を得た。このうちの
Ｌｏｇをとり、メタノール５０艷、ＫＯＨ３ｇ、水０．
５ｇを加え、リフラックス１３時間加水分解し、塩酸で
中和後、５００　ｍｌ、のヘキサンで抽出し、８．５ｇ
の高純度ドコサヘキサエン酸を得た。

また、脂肪酸画分５００ｇに５００ｇのエタノールと硫
酸５ｇを加え、リフランクス下２時間エステル化し、水
洗後指肪酸エステルを１．５１のヘキサンで抽出した。

ロータリーエバポレータで脱溶媒後、４４０ｇの脂肪酸
エステルを回収した。その中から脂肪酸エステル２００
ｇ、尿素８００ｇおよびヘキサン１６００ｍＢ、メタノ
ール４８ｍ１を攪拌機のついたフラスコに仕込み２時間
室温で撹拌しながら反応させた。付加体を濾別、ヘキサ
ンで洗浄し、濾液と洗浄液をロータリーエバポレータで
減圧上脱溶剤し、５０ｇのン農縮エステルを得た。

濃縮エステルのエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエ
ン酸濃度はガスクロマトグラフィーによる分析の結果、
エイコサペンタエン酸６０．２％、ドコサヘキサエン酸
５．１％、その他３４．７％であった。

更にこのうちの２５ｇを分子蒸留（３Ｘ１０−３１１１
ｇ１９５℃）にかけ、それを２回繰り返すことにより、
脂肪酸画分から１２．３ｇの高純度エイコサペンタエン
酸エチルエステル（エイコサペンタエン１９４．７％、
ドコサヘキサエン酸２．６％、その他２．７％）を得た
。このうちの１０ｇをとり、メタノール５０ｍＬＫＯＨ
３ｇ、水０．５ｇを加え、リフラックス１３時間加水分
解し、塩酸で中和後、１００ｍｆのヘキサンで抽出し、
７．９ｇの高純度エイコサペンタエン酸を得た。

実施例２実施例１で得た尿素付加後のドコサヘキサエン酸濃縮エ
ステル（エイコサペンタエンｔ１９．１％、ドコサヘキ
サエン酸７２．７％、その他１８．２％）５２ｇを液体
クロマトグラフィー（ステアリルメタクリレートポリマ
ーゲルカラム、溶離液ヘキサン）で分画し、８．３ｇの
高純度ドコサヘキサエン酸エステル（エイコサペンタエ
ン酸０．８％、ドコサヘキサエン酸９８．５％、その他
０．７％）を得た。

また、実施例１で得た尿素付加後のエイコサペンタエン
酸濃縮エステル（エイコサヘンクエン酸６０６２％、ド
コサヘキサエン酸５．１％、その他３４．７％）２５ｇ
を液体クロマトグラフィー（ステアリルメタクリレート
ポリマーゲルカラム、溶離液ヘキサン）で分画し、５．
６ｇの高純度エイコサペンタエ】　４ン酸エチルエステル（エイコサペンタエン酸９７．７％
、ドコサヘキサエン酸１．１％、その他１．２％）を得
た。

実施例３実施例１と同様に魚油をリパーゼで分解した後、４００
ｇの分解物にヘキサン８８０　ｍｌを加え分層させ、下
層を抜き去った後、ヘキサン層を温水で洗い酵素を洗い
落とした。これにエタノール４２０　ｍＢと水１６０ｍ
ｊ！を加え、更にＩＮの水酸化ナトリウム水溶液９．２
０　ｒｄを滴下攪拌後静置して上層からグリセリド画分
７０ｇを得た。下層は塩酸で中和し、遊離した脂肪酸画
分３０５ｇを得た。

それぞれの両分中のエイコサペンタエン酸、ドコサヘキ
サエン酸濃度はガスクロマトグラフィーによる分析の結
果、グリセリド画分がエイコサペンタエン酸４．８％、
ドコサヘキサエン酸３８．８％、脂肪酸画分がエイコサ
ペンタエン酸１４．７％、ドコサヘキサエン酸２．０％
であった。

グリセリド画分５０ｇに５０ｇのエタノールと０．５ｇ
の水酸化カリウムを加え、リフラックス下２時間エステ
ル交換し、塩酸で中和し水洗後、脂肪酸エステルを１５
０ｍβのヘキサンで抽出した。ロータリーエバポレータ
で脱溶媒後、４５ｇの脂肪酸エステルを回収した。その
中から脂肪酸エステル１０ｇ、尿素４０ｇおよびヘキサ
ン８０ｍ１、メタノール２．４ｍｌを攪拌機の付いたフ
ラスコに仕込み、２時間室温で攪拌しながら反応させた
。付加体を濾別、ヘキサンで洗浄し、濾液と洗浄液をロ
ータリーエバポレータで減圧上脱溶剤し、５．１ｇの濃
縮エステルを得た。

濃縮エステルのエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエ
ン酸濃度はガスクロマトグラフィーによる分析の結果、
エイコサペンタエン酸８．７％、ドコサヘキサエン酸６
９．９％、その他２１．４％であった。

これを更に遠心液々クロマトグラフィー（分配液ｎ−ヘ
キサン：９０％エタノール−１：１、操作温度２０°Ｃ
１回転数８００ｒｐｍ）で分画し、２．８ｇの高純度ド
コサヘキサエン酸エチルエステル（エイコサペンタエン
酸０．９％、ドコサヘキサエン酸９５．８％、その他３
．３％）を得た。

脂肪酸画分５０ｇに５０ｇのエタノールと０．５ｇの硫
酸を加え、リフランクス下２時間エステル化し、水洗後
、脂肪酸エステルを１５０ｍｆのヘキサンで抽出した。

ロータリーエバポレータで脱溶媒後、４０ｇの脂肪酸エ
ステルを回収した。その中から脂肪酸エステル１０ｇ１
尿素４０ｇおよびヘキサン８０ｍ２、メタノール２．４
慴βを攪拌機の付いたフラスコに仕込み、２時間室温で
攪拌しながら反応させた。付加体を濾別、ヘキサンで洗
浄し、濾液と洗浄液をロータリーエバポレータで減圧上
脱溶剤し、２．６ｇの濃縮エステルを得た。

濃縮エステルのエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエ
ン酸濃度は、ガスクロマトグラフィーによる分析の結果
、エイコサペンタエン酸５８．６％、ドコサヘキサエン
酸４．５％、その他３６．９％であった。これを更に遠
心液々クロマトグラフィー（分配液ｎ−ヘキサン：９０
％エタノール−１＝１、操作温度２０°Ｃ１回転数８０
Ｏｒｐｍ）で分画し、１．７ｇの高純度エイコサペンタ
エン酸エチルエステル（エイコサペンタエン酸９３．３
％、ドコサヘキサエン酸４．９％、その他１．８％）を
得た。

実施例４魚油５　ｋｇと水２．５ｋｇを３０！容量の反応釜に入
れ、１０００ユニツトの実施例１と同じリバーゼヲ！１
ｉｏｏ　ｍｐ。

の水に溶かしたものを加え、３７℃に保温しながら回転
攪拌し、６時間反応させた。分解物にヘキサン１１βを
加え分層させ、下層を抜き去った後、ヘキサン層を温水
で洗い酵素を洗い落とした。これにエタノール５．２１
と水２１を加え、更にＩＮの水酸化すｌ−ＩＪウム水溶
液７．５１を滴下攪拌後、静置して、上層からグリセリ
ド画分１８００　ｇを得た。

下層は塩酸を加えて脂肪酸を遊離させ、２２５０　ｇの
脂肪酸画分を得た。

それぞれの両分中のエイコサペンタエン酸、ドコサヘキ
サエン酸濃度はガスクロマトグラフィーによる分析の結
果、グリセリド画分がエイコサペンタエン酸１６．２％
、ドコサヘキサエン酸２１．５％、脂肪酸画分がエイコ
サペンタエン酸９．８％、ドコサヘキサエン酸１．９％
であった。

このうちグリセリド画分５００ｇを実施例１と同様］　
８の方法でエチルエステル化し、４４０ｇのエステルを得
た。このエステル１０ｈを実施例１と同様の方法で尿素
付加し、濃縮エステルを４３ｇ回収した。濃縮エステル
のエイコサベンクエン酸、ドコサヘキサエン酸濃度はガ
スクロマトグラフィーによる分析の結果、エイコサペン
タエン酸３３．２％、ドコサヘキサエン酸４６．１％、
その他２０．７％であった。更にこれを超臨界炭酸ガス
抽出法（５５℃、１２０　ｋｇ／ｃｆｆｌ）を用いて分
画し、１９．５　ｇの高純度ドコサヘキサエン酸エチル
エステル（エイコサペンタエン酸７．５％、ドコサヘキ
サエン酸８８．２％、その他３．３％）を得た。

また、脂肪酸画分５００ｇを実施例１と同様の方法でエ
チルエステル化し、４３０ｇのエステルを得た。

このエステル１００ｇを実施例１と同様の方法で尿素付
加し、濃縮エステルを１９．６ｇ回収した。濃縮エステ
ルのエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸濃度は
ガスクロマトグラフィーによる分析の結果、エイコサペ
ンタエン酸４５．９％、ドコサヘキサエン酸８．７％、
その他４５．４％であった。更にこれを超臨界炭酸ガス
抽出法（５５°Ｃ１１２０ｋｇ　／　ｃｎｔ　）を用い
て分画し、９．５ｇの高純度エイフサベンクエン酸エチ
ルエステル（エイコサペンタエン酸８２．３％、ドコサ
ヘキサエン酸３．４％、その他１４．３％）を得た。

実施例５実施例４と同様に魚油を分解した後、４００ｇの分解物
にヘキサン８８０　ｍｌを加え分層させ、下層を抜き去
った後、ヘキサン層を温水で洗い酵素を洗い落とした。

これにエタノール４２０ｍ１と水１６０ｍｆｆを加え、
更にＩＮの水酸化す１〜リウム水溶液９２０　ｍｌを滴
下攪拌後、静置して、上層からグリセリド画分１４０ｇ
を得た。下層は塩酸で中和し、Ｍ離した脂肪酸画分１６
０ｇを得た。それぞれの両分中のエイコサペンタエン酸
、ドコサヘキサエン酸濃度はガスクロマトグラフィーに
よる分析の結果、グリセリド画分がエイコサペンタエン
酸１５．５％、ドコサヘキサエン酸２０．８％、脂肪酸
画分がエイコサペンタエン酸１０．６％、ドコサヘキサ
エン酸１．５％であった。

このうちグリセリド画分５０ｇを実施例３と同様の方法
でエチルエステル化し、４３ｇのエステルを得た。この
エステル１０ｇを実施例３と同様に尿素付加し、４．２
ｇのドコサヘキサエン酸濃縮エステルヲ得た。濃縮エス
テルのエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸濃度
はガスクロマトグラフィーによる分析の結果、エイコサ
ペンタエン酸３１．５％、ドコサヘキサエン酸４４．８
％、その他２３．７％であった。全量の濃縮エステルを
、２００ｍβのスチレンジビニルベンゼン共重合体樹脂
を充填したオープンカラムでヘキサン／アセトン−８７
２の混合溶媒を用いて精製し、０．８ｇの高純度ドコサ
ヘキサエン酸エチルエステル（エイコサペンタエン酸１
．３％、ドコサヘキサエン酸９３．３％、その他５．４
％）を得た。

また、脂肪酸画分５０ｇを実施例３と同様の方法でエチ
ルエステル化し、４１ｇのエステルを得た。

このエステル１０ｇを実施例２と同様の方法で尿素付加
し、２．３ｇのエイコサベンクエン酸濃縮エステルヲ得
た６濃縮エステルのエイコサペンタエン酸、ドコサヘキ
サエン酸濃度はガスクロマトグラフィーによる分析の結
果、エイコサペンタエン酸４３．９％、ドコサヘキサエ
ン酸７．７％、その他４８．４％であった。全量の濃縮
エステルを、１．００　ｍｌのスチレンジビニルベンゼ
ン共重合体樹脂を充填したオープンカラムでヘキサン／
アセトン−８／２の混合溶媒を用いて精製し、０．３ｇ
の高純度エイコサペンタエン酸エチルエステル（エイコ
サペンタエン酸８５．２％、ドコサヘキサエン酸２．５
％、その他１２．３％）を得た。

比較例１魚油５００ｇをエタノール５００ｇ、　Ｋ　ＯＨ５００
ｇで実施例１と同様の方法でエチルエステル化し、４７
０ｇのエステルを得た。そのうちの１００ｇを実施例１
と同様の方法で尿素イ」加し、濃縮エステルを２８．１
ｇ回収した。ｆｉ縮エステルのエイコサペンタエン酸、
ドコサヘキサエン酸濃度はガスクロマトグラフィーによ
る分析の結果、エイコサペンタエン酸４２．９％、ドコ
サヘキサエン酸２５．３％、その他３２．７％であった
。

これを実施例１と同条件で２回繰り返し分子蒸留し、９
．５ｇのドコサヘキサエン酸両分（エイコサベンクエン
酸２８．４％、ドコサヘキサエン酸４６．４％、その他
２５．２％）を得た。

また、実施例１と同条件下で２回繰り返し分子蒸留し、
１１．３ｇのエイコサペンタエン酸画分（エイコサベン
クエン酸７４．３％、ドコサヘキサエン酸１８．６％、
その他７．１　％）を得た。

キャンディダ族菌由来のリパーゼによる処理をしないの
で、実施例１に比して目的物の純度が低いことがわかる
。

比較例２角ｊ［ｌｌ　５　ｋｇと水２．５ｋｇを３０β容量の反
応釜に入れ、５０００ユニツトのクロモバクテリウム由
来リパーゼを５００　ｍＲの水に溶かしたものを加え、
３７℃に保温しながら回転撹拌し２４時間反応させた。

分解物を実施例１と同様の方法で脂肪酸とグリセリドに
分画し、グリセリド画分７９０ｇと脂肪酸画分３６８０
　ｇを得た。

それぞれの両分中のエイコサベンクエン酸、ドコサヘキ
サエン酸濃度は、ガスクロマトグラフィーによる分析の
結果、グリセリド画分がエイコサペンタエン酸１０．５
％、ドコサヘキサエン酸１．０．３％、脂肪酸画分がエ
イコサベンクエン酸１６．３％、ドコサヘキサエン酸７
．６％であった。

グリセリド画分７００ｇを実施例１と同様の方法でエチ
ルエステル化し、６６４ｇの脂肪酸エステルを回収した
。その中から脂肪酸エステル４００ｇを取り、実施例１
と同様の方法で尿素付加し、１１７ｇの濃縮エステルを
得た。濃縮エステルのエイコサベンクエン酸、ドコサヘ
キサエン酸濃度はガスクロマトグラフィーによる分析の
結果、エイコサベンクエン酸３０．３％、ドコサヘキサ
エン酸２７．２％、その他４２．５％であった。このう
ち５０ｇを実施例Ｉと同条件下で２回繰り返し分子蒸留
し、１５．２　ｇのドコサヘキサエン酸両分（エイコサ
ベンクエン酸３１．２％、ドコサヘキサエン酸３５．４
％、その他３３．４％）ヲ得た。

また脂肪酸画分１０００　ｇを実施例１と同様の方法で
エチルエステル化し９１６ｇの脂肪酸エステルを回収し
た。その中から脂肪酸エステル４００ｇを取り、実施例
１と同様の方法で尿素付加し１０８ｇの濃縮エステルを
得た。濃縮エステルのエイコサベンクエン酸、ドコサヘ
キサエン酸濃度は、ガスクロマトグラフィーによる分析
の結果、エイコサペンタエン酸３８．３％、ドコサヘキ
サエン酸３２．４％、その他２９．３％であった。この
うち５０ｇを実施例１と同条件下で２回繰り返し分子蒸
留し、１２．３　ｇのエイコサペンタエン酸画分（エイ
コサベンクエン酸３６．８％、ドコサヘキサエン酸３２
．４％、その他３０．８％）を得た。キャンディダ族菌
由来のリパーゼによる処理をしないので、実施例１に比
して目的物の純度が低いことがわかる。

比較例３比較例２で得た尿素付加後のドコサヘキサエン酸濃縮エ
ステル５０ｇを液体クロマトグラフィー（ステアリルメ
タクリレートポリマーゲルカラム、溶離液ヘキサンで分
画し、２．８ｇのドコサヘキサエン酸エチルエステル（
エイコサペンタエン！１２．５％、ドコサヘキサエン酸
６２．３％、その他２５．３％）を得た。

また、比較例２で得た尿素付加後のエイコサベンクエン
酸濃縮エステル５０ｇを、液体クロマトグラフィー（ス
テアリルメタクリレートポリマーゲルカラム、溶離液ヘ
キサン）で分画し、１．２ｇのエイコサペンタエン酸エ
チルエステルくエイコサペンタエン１１６５．８％、ド
コサヘキサエン９２０．０％、その他１４．２％）を得
た。

Claims

【特許請求の範囲】

魚油をキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）族菌由来のリパ
ーゼにより加水分解し、得られた分解混合物を脂肪酸と
グリセリドとに分離し、これらの各成分について低級ア
ルキルエステル化し、ついで尿素付加法により高度不飽
和脂肪酸成分を濃縮し、さらに分子蒸留法、超臨界炭酸
ガス抽出法または液体クロマトグラフィー法のいずれか
の方法を用いて濃縮精製することにより、上記脂肪酸成
分からエイコサペンタエン酸またはそのエステルを、上
記グリセリド成分からドコサヘキサエン酸またはそのエ
ステルを得ることを特徴とする高度不飽和脂肪酸類の製
造方法。