JPH02283290A - 発酵法によるｌ―オルニチンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ―オルニチンの製造法Info
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- JPH02283290A JPH02283290A JP1101011A JP10101189A JPH02283290A JP H02283290 A JPH02283290 A JP H02283290A JP 1101011 A JP1101011 A JP 1101011A JP 10101189 A JP10101189 A JP 10101189A JP H02283290 A JPH02283290 A JP H02283290A
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- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
Ｌ−オルニチンは肝機能促進薬、総合アミノ酸製剤等の
重要な成分である。本発明はこのＬ−オルニチンを発酵
法で製造する方法を改良するものである。
重要な成分である。本発明はこのＬ−オルニチンを発酵
法で製造する方法を改良するものである。
Ｌ−オルニチン生産能を有するブレビバクテリウム属及
びコリネバクテリウム属の微生物については、ブレビバ
クテリウム属のチトルリン又はアルギニン要求株（特公
昭４３−８７１２号公報）、バチルス属のチトルリン又
はアルギニン要求株（特公昭４３−１０９９６号公報）
、アースロバフタ−属のチトルリン又はアルギニン要求
株（特公昭４４−２４３０３号公報）、コリネバクテリ
ウム属のアルギニンアナログに耐性を有する変異株（特
開昭５３−２４０９６号公報）、あるいはコリネバクテ
リウム属の２−チアゾールアラニン、サルファグアニジ
ン又は２−フルオロピルビン酸に耐性を有する変異株（
特開昭６１−１１９１９４号公報）が知られている。
びコリネバクテリウム属の微生物については、ブレビバ
クテリウム属のチトルリン又はアルギニン要求株（特公
昭４３−８７１２号公報）、バチルス属のチトルリン又
はアルギニン要求株（特公昭４３−１０９９６号公報）
、アースロバフタ−属のチトルリン又はアルギニン要求
株（特公昭４４−２４３０３号公報）、コリネバクテリ
ウム属のアルギニンアナログに耐性を有する変異株（特
開昭５３−２４０９６号公報）、あるいはコリネバクテ
リウム属の２−チアゾールアラニン、サルファグアニジ
ン又は２−フルオロピルビン酸に耐性を有する変異株（
特開昭６１−１１９１９４号公報）が知られている。
Ｌ−オルニチンの製造コストを低下させるために菌株を
育種して発酵収率を向上させることは、工業生産のうえ
で、大切な課題である。
育種して発酵収率を向上させることは、工業生産のうえ
で、大切な課題である。
本発明は上記問題点を解決するためになされたものであ
り、従来より知られているブレビバクテリウム属、コリ
ネバクテリウム属及びアルスロバクタ−属に属するＬ−
オルニチン生産能を有する微生物を改良して、更に発酵
収率の向上した優良菌株を見いだすべく研究した結果、
アルギニン又はチトルリン要求性を有し、且つミコフェ
ノール酸耐性又はオルニチノール耐性を付与した菌株の
中に、従来のＬ−オルニチン生産菌よりも高収率でＬ−
オルニチンを生産する菌株が存在する事を発見した。
り、従来より知られているブレビバクテリウム属、コリ
ネバクテリウム属及びアルスロバクタ−属に属するＬ−
オルニチン生産能を有する微生物を改良して、更に発酵
収率の向上した優良菌株を見いだすべく研究した結果、
アルギニン又はチトルリン要求性を有し、且つミコフェ
ノール酸耐性又はオルニチノール耐性を付与した菌株の
中に、従来のＬ−オルニチン生産菌よりも高収率でＬ−
オルニチンを生産する菌株が存在する事を発見した。
即ち、本発明はブレビバクテリウム属、コリネバクテリ
ウム属又はアルスロバクタ−属に属し、ミコフェノール
酸耐性又はオルニチノール耐性を有し、かつＬ−オルニ
チン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地
中に生成蓄積したし−オルニチンを採取することを特徴
とするＬ−オルニチンの！！！！遣法に関する。
ウム属又はアルスロバクタ−属に属し、ミコフェノール
酸耐性又はオルニチノール耐性を有し、かつＬ−オルニ
チン生産能を有する微生物を液体培地中で培養し、培地
中に生成蓄積したし−オルニチンを採取することを特徴
とするＬ−オルニチンの！！！！遣法に関する。
本発明において用いられる微生物は、ブレビバクテリウ
ム属、コリネバクテリウム属又はアルスロバクタ−属に
属し、ミコフェノール酸耐性又はオルニチノール耐性を
有し、かつＬ−オルニチン生産能を有する変異株である
。耐性はミコフェノール酸耐性及びオルニチノール耐性
の一方でもよ（、両方を有していてもよい。本発明の変
異株を得るには、下記の野生株に、先にＬ−オルニチン
生産能を付与し、次いでミコフェノール酸耐性又はオル
ニチノール耐性を付与してもよいし、又先にミコフェノ
ール酸耐性又はオルニチノール耐性を付与し、次いでア
ルギニン要求又はチトルリン要求等のＬ−オルニチン生
産能を付与してもよい。
ム属、コリネバクテリウム属又はアルスロバクタ−属に
属し、ミコフェノール酸耐性又はオルニチノール耐性を
有し、かつＬ−オルニチン生産能を有する変異株である
。耐性はミコフェノール酸耐性及びオルニチノール耐性
の一方でもよ（、両方を有していてもよい。本発明の変
異株を得るには、下記の野生株に、先にＬ−オルニチン
生産能を付与し、次いでミコフェノール酸耐性又はオル
ニチノール耐性を付与してもよいし、又先にミコフェノ
ール酸耐性又はオルニチノール耐性を付与し、次いでア
ルギニン要求又はチトルリン要求等のＬ−オルニチン生
産能を付与してもよい。
本変異株の親株となる野生株は、ブレビバクテリウム属
、コリネバクテリウム属又はアルスロバクタ−属の特に
Ｌ−グルタミン酸生産性細菌として知られているもので
よく、例えば、以下のものがある。
、コリネバクテリウム属又はアルスロバクタ−属の特に
Ｌ−グルタミン酸生産性細菌として知られているもので
よく、例えば、以下のものがある。
ブレビバクテリウム ・ ヂイバリ力タム
ＡＴＣＣ１４０２０九ビバクテリウム ・ フラバム
八ＴＣＣ１４０６７プレビバクテリウ
ム ・ ラクトフェルメンタム ＡＴＣＣ１３８６
９ブレビバクテリウム ・ サフｔＩｒ１リティカム
ＡＴＣＣ１４０６６コリネバクテリウム ・ ア
セトアシドフィラム ＡＴＣＣ１３８７０プリネバ
クテリウム ・ グルタミクム 八ＴＣＣ
１３０３２フルスロバクター ・ シトレウム
ＡＴＣＣ１７７７５これらの親株より本発
明の変異株を変異誘導する方法は、Ｎ−メチル−Ｎ”−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンに接触せしめる等の通
常の変異誘導方法が適用できる。
ＡＴＣＣ１４０２０九ビバクテリウム ・ フラバム
八ＴＣＣ１４０６７プレビバクテリウ
ム ・ ラクトフェルメンタム ＡＴＣＣ１３８６
９ブレビバクテリウム ・ サフｔＩｒ１リティカム
ＡＴＣＣ１４０６６コリネバクテリウム ・ ア
セトアシドフィラム ＡＴＣＣ１３８７０プリネバ
クテリウム ・ グルタミクム 八ＴＣＣ
１３０３２フルスロバクター ・ シトレウム
ＡＴＣＣ１７７７５これらの親株より本発
明の変異株を変異誘導する方法は、Ｎ−メチル−Ｎ”−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンに接触せしめる等の通
常の変異誘導方法が適用できる。
本発明の変異株の具体的な変異誘導方法の例と、ミコフ
ェノール酸又はオルニチノール濃度と菌株の生育度の関
係を以下に示す。
ェノール酸又はオルニチノール濃度と菌株の生育度の関
係を以下に示す。
変異誘導法
ブイヨン寒天スラント上に３０℃で２４時間生育させた
アルギニン要求性のアルスロバクタ−・シトレウスＡＪ
１２４４１（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３４１）の菌体をＭ
／３０リン酸緩衝液にけん濁し、これに１００ｘ／ｍの
Ｎ−メチル−Ｎｏ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを
加え、３０°Ｃ１３０分静置反応した。次いで集苗しＭ
／３０１Ｊン酸緩衝液でよく洗浄後、下記の培地組成を
有するプレート上に塗抹し、３１．５°Ｃで５日間培養
した。培地上に生育した菌株のうち、コロニーの大きな
ものを主に釣菌した。釣菌した菌株のほとんどが高いＬ
−オルニチン生産能を有していた。
アルギニン要求性のアルスロバクタ−・シトレウスＡＪ
１２４４１（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３４１）の菌体をＭ
／３０リン酸緩衝液にけん濁し、これに１００ｘ／ｍの
Ｎ−メチル−Ｎｏ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを
加え、３０°Ｃ１３０分静置反応した。次いで集苗しＭ
／３０１Ｊン酸緩衝液でよく洗浄後、下記の培地組成を
有するプレート上に塗抹し、３１．５°Ｃで５日間培養
した。培地上に生育した菌株のうち、コロニーの大きな
ものを主に釣菌した。釣菌した菌株のほとんどが高いＬ
−オルニチン生産能を有していた。
捜】ｌ１父
ＫＨ，ＰＯ。
ＭｇＳＯ４・７Ｈ，０
ＦｅＳＯａ ＋ ＩＨｚＯ
０，１〃
０．１ 〃
０．００２ 〃
ｐＨ７，２
寒天培地に生育した菌株の中から、Ｌ−オルニチン生産
能の高い菌株として、アルスロバクタ−・シトレウスへ
Ｊ １２４４２（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３４２；アルギニ
ン要求性又はチトルリン要求性かつミコフェノール酸耐
性）を得た。
能の高い菌株として、アルスロバクタ−・シトレウスへ
Ｊ １２４４２（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３４２；アルギニ
ン要求性又はチトルリン要求性かつミコフェノール酸耐
性）を得た。
上記の培地のうちＬ−アルギニン及びミコフェノール酸
をそれぞれの要求するあるいは耐性を付与する薬剤に変
えたほかは上記と同様の育種方法によりブレビバクテリ
ウム・ラクトフェルメンタムＡＪ １２４４３（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−２３４３；アルギニン又は千トルリン要求性
）から、オルニチノール耐性のブレビバクテリウム・ラ
クトフェルメンタムへＪ １２４４４（ＦＥＲＭ ＢＰ
−２３４４）を育種し、コリネバクテリウム・グルタミ
クムＡＪ １１５８９ （ＦＥＲＭ Ｐ−５６４４；ア
ルギニン又はチトルリン要求性且つビタミンＰ耐性）か
ら、２回の育種法によってコリネバクテリウム・グルタ
ミクムＡＪ １２４４５（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３４５；
アルギニン又はチトルリン要求性かつビタミンＰ耐性、
ミコフェノール酸耐性、オルニチノール耐性）ヲ採取し
た。
をそれぞれの要求するあるいは耐性を付与する薬剤に変
えたほかは上記と同様の育種方法によりブレビバクテリ
ウム・ラクトフェルメンタムＡＪ １２４４３（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−２３４３；アルギニン又は千トルリン要求性
）から、オルニチノール耐性のブレビバクテリウム・ラ
クトフェルメンタムへＪ １２４４４（ＦＥＲＭ ＢＰ
−２３４４）を育種し、コリネバクテリウム・グルタミ
クムＡＪ １１５８９ （ＦＥＲＭ Ｐ−５６４４；ア
ルギニン又はチトルリン要求性且つビタミンＰ耐性）か
ら、２回の育種法によってコリネバクテリウム・グルタ
ミクムＡＪ １２４４５（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３４５；
アルギニン又はチトルリン要求性かつビタミンＰ耐性、
ミコフェノール酸耐性、オルニチノール耐性）ヲ採取し
た。
このようにして得られた変異株のミコフェノール酸又は
オルニチノール耐性度を親株と比較した。
オルニチノール耐性度を親株と比較した。
グルコース ０．５ｇ／ｄｉ、尿素０．１５ｇ／ｄ１、
硫安０、１５ｇ／ｄｉ、ＫＨｚＰＯ４０，３ｇ７ｄｌ、
ＫｚｌｌＰＯｎ ０．１ｇ／ｄ１、ＭｇＳＯ４・７１
１ｚＯＯ，０１ｇ／ｄ、ＣａＣＩｚ ・２ＦＩＺ８０．
１ｇ／ｄ１、ビオチン１００河／ｌ、サイアミン塩酸塩
１１００ｊｔ／ｌ、Ｆｅ５Ｏｎ ・７８ｚ００．００２
ｇ／ｄ１、ＭｎＳＯ４・７ＨｚＯＯ，００２ｇ／ｄ１、
Ｌ−アルギニン１５ｍｇ／ｄＩｌおよび表に示す量のミ
コフェノール酸又はオルニチノールを含み、ｐＨ７，０
に調節した培地に、天然培地（ポリペプトンＩｇ／面、
酵母エキスＩｇ／ｄ１、ＮａＣｌ ０．５ｇ／ｄ１、ｐ
Ｈ７，０）スラントで２４時間、３１．５°Ｃで培養し
た菌体を殺菌水に懸濁して接種し、２４時間試験管にて
振盪培養して生育度を濁度で測定した。
硫安０、１５ｇ／ｄｉ、ＫＨｚＰＯ４０，３ｇ７ｄｌ、
ＫｚｌｌＰＯｎ ０．１ｇ／ｄ１、ＭｇＳＯ４・７１
１ｚＯＯ，０１ｇ／ｄ、ＣａＣＩｚ ・２ＦＩＺ８０．
１ｇ／ｄ１、ビオチン１００河／ｌ、サイアミン塩酸塩
１１００ｊｔ／ｌ、Ｆｅ５Ｏｎ ・７８ｚ００．００２
ｇ／ｄ１、ＭｎＳＯ４・７ＨｚＯＯ，００２ｇ／ｄ１、
Ｌ−アルギニン１５ｍｇ／ｄＩｌおよび表に示す量のミ
コフェノール酸又はオルニチノールを含み、ｐＨ７，０
に調節した培地に、天然培地（ポリペプトンＩｇ／面、
酵母エキスＩｇ／ｄ１、ＮａＣｌ ０．５ｇ／ｄ１、ｐ
Ｈ７，０）スラントで２４時間、３１．５°Ｃで培養し
た菌体を殺菌水に懸濁して接種し、２４時間試験管にて
振盪培養して生育度を濁度で測定した。
ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属又はアル
スロバクタ−属の本発明の方法を適用しうる他の微生物
も上記と同様にして取得できる。
スロバクタ−属の本発明の方法を適用しうる他の微生物
も上記と同様にして取得できる。
このような変異株を培養する際に用いる培地は、炭Ｘ源
、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地でよい。
、窒素源、無機イオン、上記要求性を満足させるべき物
質及び必要に応じビタミン等その他の有機微量栄養素を
含有する通常の培地でよい。
すなわち、炭素源としては、グルコース、シュクロース
等の炭水化物、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはア
ンモニア水、アンモニアガス、アンモニア塩等が好適で
ある。無機イオンとしてはカリウムイオン、ナトリウム
イオン、マグネシウムイオン、リン酸イオンその他が必
要に応じ適宜培地に添加される。
等の炭水化物、酢酸等の有機酸等が、窒素源としてはア
ンモニア水、アンモニアガス、アンモニア塩等が好適で
ある。無機イオンとしてはカリウムイオン、ナトリウム
イオン、マグネシウムイオン、リン酸イオンその他が必
要に応じ適宜培地に添加される。
培養は好気的条件で行ない、培養の間培地のρ１］を４
ないし８に温度を２５°Ｃないし３７°Ｃに調節しつつ
行えばより好ましい結果が得られる。かくして１ないし
７日間も培養すれば培地中に著量のＬオルニチンが生成
ＭＭＪされる。
ないし８に温度を２５°Ｃないし３７°Ｃに調節しつつ
行えばより好ましい結果が得られる。かくして１ないし
７日間も培養すれば培地中に著量のＬオルニチンが生成
ＭＭＪされる。
培養液よりＬ−オルニチンを採取する方法は、イオン交
換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
換樹脂による方法等通常の方法で採取できる。
以下実施例にて説明する。
グルコースＬｏｇ／ｄｌ、（Ｎｌ１４） ２５０４７ｇ
／ｄｉ、ＫＩ１２ＰＯ４０，１５ｇ／ｄｆ！、、ＭｇＳ
Ｏ４・７１１ｚ００．０４ｇ／ｄｉ、Ｆｅ５０． ・７
１１．０１ ｍｇ／ｄｌ、 ＭｎＳＯ４−７８ｚ０１１
１ｔｇ／ｄ、サイアミン・塩酸塩１１００Ｉ１／ｊ２、
ビオチン１００ｉ＃！、大豆蛋白酸加水分解液６０■／
ｄ１（全窒素として）、Ｌ−アルギニン１５■／ｄ１．
、炭酸カルシウム５ｇ／ｄ１（別殺菌）を含む培地をｐ
１１７．２に調節し、その２５瀬を５００ｍｎ容肩付フ
ラスコに入れ加熱殺菌した。これに第２表に示す菌株を
一白金耳接種し、３１．５°Ｃに保ちつつ４日間振盪し
た。各菌株の培養液中には、第２表に示す量のＬ−オル
ニチンがそれぞれ生成蓄積していた。
／ｄｉ、ＫＩ１２ＰＯ４０，１５ｇ／ｄｆ！、、ＭｇＳ
Ｏ４・７１１ｚ００．０４ｇ／ｄｉ、Ｆｅ５０． ・７
１１．０１ ｍｇ／ｄｌ、 ＭｎＳＯ４−７８ｚ０１１
１ｔｇ／ｄ、サイアミン・塩酸塩１１００Ｉ１／ｊ２、
ビオチン１００ｉ＃！、大豆蛋白酸加水分解液６０■／
ｄ１（全窒素として）、Ｌ−アルギニン１５■／ｄ１．
、炭酸カルシウム５ｇ／ｄ１（別殺菌）を含む培地をｐ
１１７．２に調節し、その２５瀬を５００ｍｎ容肩付フ
ラスコに入れ加熱殺菌した。これに第２表に示す菌株を
一白金耳接種し、３１．５°Ｃに保ちつつ４日間振盪し
た。各菌株の培養液中には、第２表に示す量のＬ−オル
ニチンがそれぞれ生成蓄積していた。
本発明の方法によってＬ−オルニチンの発酵収率を向上
させ、製造コストを低下させることができる。
させ、製造コストを低下させることができる。
Claims (1)
- ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属又はアル
スロバクター属に属し、アルギニン又はチトルリン要求
性であり、ミコフェノール酸又はオルニチノールに耐性
を有するＬ−オルニチン生産能を有する微生物を液体培
地中で培養し、培地中に生成・蓄積したＬ−オルニチン
を採取することを特徴とするＬ−オルニチンの製造法
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1101011A JP2817185B2 (ja) | 1989-04-20 | 1989-04-20 | 発酵法によるｌ―オルニチンの製造法 |
| EP90107555A EP0393708B1 (en) | 1989-04-20 | 1990-04-20 | Process for producing L-ornithine by fermentation |
| US07/512,108 US5188947A (en) | 1989-04-20 | 1990-04-20 | Process and microorganism for producing l-ornithine by corynebacterium, brevibacterium, or athrobacter |
| DE69010256T DE69010256T2 (de) | 1989-04-20 | 1990-04-20 | Verfahren zur Herstellung von L-Ornithin durch Fermentation. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1101011A JP2817185B2 (ja) | 1989-04-20 | 1989-04-20 | 発酵法によるｌ―オルニチンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02283290A true JPH02283290A (ja) | 1990-11-20 |
| JP2817185B2 JP2817185B2 (ja) | 1998-10-27 |
Family
ID=14289293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1101011A Expired - Lifetime JP2817185B2 (ja) | 1989-04-20 | 1989-04-20 | 発酵法によるｌ―オルニチンの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5188947A (ja) |
| EP (1) | EP0393708B1 (ja) |
| JP (1) | JP2817185B2 (ja) |
| DE (1) | DE69010256T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009112205A (ja) * | 2007-11-02 | 2009-05-28 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | Ｌ−オルニチン含有物の製造方法 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102005017508A1 (de) * | 2005-04-15 | 2006-10-19 | Basf Ag | Verfahren zur Gewinnung einer basischen Aminosäure aus einer Fermentationsbrühe II |
| CN101691555B (zh) * | 2009-09-17 | 2011-11-09 | 北京化工大学 | 游离细胞或固定化细胞微生物转化生产l-鸟氨酸的方法 |
| KR101174267B1 (ko) | 2010-01-06 | 2012-08-14 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-오르니틴 또는 ｌ-아르기닌 생산 변이주 및 이의 제조방법 |
| DE102010003419B4 (de) | 2010-03-30 | 2019-09-12 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Ornithin |
| RU2496867C2 (ru) | 2011-04-25 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты семейства глутамата с использованием коринеформной бактерии |
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