JPH02283293A - Ｃ反応性蛋白質に対するモノクローナル坑体 - Google Patents
Ｃ反応性蛋白質に対するモノクローナル坑体Info
- Publication number
- JPH02283293A JPH02283293A JP1103471A JP10347189A JPH02283293A JP H02283293 A JPH02283293 A JP H02283293A JP 1103471 A JP1103471 A JP 1103471A JP 10347189 A JP10347189 A JP 10347189A JP H02283293 A JPH02283293 A JP H02283293A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- crp
- monoclonal antibody
- antibody
- reactive protein
- mouse
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
この発明は、Ｃ反応性蛋白質と特異的に反応する新規モ
ノクローナル抗体、そのモノクローナル抗体を分泌する
ハイプリドーマ細胞、およびそのモノクローナル抗体を
用いる免疫定量法に関する。
ノクローナル抗体、そのモノクローナル抗体を分泌する
ハイプリドーマ細胞、およびそのモノクローナル抗体を
用いる免疫定量法に関する。
Ｃ反応性蛋白質（略称ＣＲＰ）は急性期蛋白質の一種で
あって、組織破壊を伴うような炎症性疾患等の際には血
中濃度が急増するが、正常人血中には微量（ｌｌ１ｇ／
ｍ以下）しか認められないので、各種の化膿症やりウマ
チ性疾患等の診断に広く利用されている。このＣＲＰは
、第１図に示すように、５つの円盤状サブユニット（分
子盟約２１，０００）からなる５看体であり、ＣＲＰに
対するモノクローナル抗体としては既に２種類のものが
作製されている（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ＋ ｖｏｌ １３１＋ ２４１１−２
４１５）。すなわち、円盤状サブユニットの円形上面（
第１図のＡ面二以下単にＡ面と称することがある）には
特異的に反応するが円盤状サブユニットの円形底面（第
１図の８面：以下単に８面と称することがある）には反
応しないモロクローナル抗体、及び円盤状サブユニット
の円形底面（８面）には特異的に反応するが円盤状サブ
ユニットの円形上面（Ａ面）とは反応しないモノクロー
ナル抗体である。しかしながら、前者のモノクローナル
抗体又は後者のモアツクローナル抗体のいずれか一方を
不溶性担体に結合させてからＣＲＰ含有試料と混合し２
ても凝集反応を起こさない。従って、上記の公知モノク
ローナル抗体を用いてＣＲＰを定量する場合には、両方
のモノクローナル抗体を利用したサンドイッチアッセイ
等を用いることが必要であった。
あって、組織破壊を伴うような炎症性疾患等の際には血
中濃度が急増するが、正常人血中には微量（ｌｌ１ｇ／
ｍ以下）しか認められないので、各種の化膿症やりウマ
チ性疾患等の診断に広く利用されている。このＣＲＰは
、第１図に示すように、５つの円盤状サブユニット（分
子盟約２１，０００）からなる５看体であり、ＣＲＰに
対するモノクローナル抗体としては既に２種類のものが
作製されている（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ＋ ｖｏｌ １３１＋ ２４１１−２
４１５）。すなわち、円盤状サブユニットの円形上面（
第１図のＡ面二以下単にＡ面と称することがある）には
特異的に反応するが円盤状サブユニットの円形底面（第
１図の８面：以下単に８面と称することがある）には反
応しないモロクローナル抗体、及び円盤状サブユニット
の円形底面（８面）には特異的に反応するが円盤状サブ
ユニットの円形上面（Ａ面）とは反応しないモノクロー
ナル抗体である。しかしながら、前者のモノクローナル
抗体又は後者のモアツクローナル抗体のいずれか一方を
不溶性担体に結合させてからＣＲＰ含有試料と混合し２
ても凝集反応を起こさない。従って、上記の公知モノク
ローナル抗体を用いてＣＲＰを定量する場合には、両方
のモノクローナル抗体を利用したサンドイッチアッセイ
等を用いることが必要であった。
［発明が解決しようとする課題］
本発明者は、１種類のモノクローナル抗体だけを用いて
ＣＲＰと凝集反応を起こさせることを目標にして研究を
行ったところ、従来公知のモノクローナル抗体とは別異
の部位でＣＲＰの円盤状サブユニットと特異的に反応す
る新規モノクローナル抗体を見出し、このモノクローナ
ル抗体が前記の目的を達成することを見出した。従って
、本発明の目的は、前記の新規モノクローナル抗体、そ
のモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマ細胞、
及びそのモノクローナル抗体を用いる免疫定量法を提供
することにある。
ＣＲＰと凝集反応を起こさせることを目標にして研究を
行ったところ、従来公知のモノクローナル抗体とは別異
の部位でＣＲＰの円盤状サブユニットと特異的に反応す
る新規モノクローナル抗体を見出し、このモノクローナ
ル抗体が前記の目的を達成することを見出した。従って
、本発明の目的は、前記の新規モノクローナル抗体、そ
のモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマ細胞、
及びそのモノクローナル抗体を用いる免疫定量法を提供
することにある。
（課題を解決するための手段〕
前記の目的は、本発明により、Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ
）の側面に特異的に反応するモノクローナル抗体、すな
わち、Ｃ反応性蛋白’ｊｉ （ＣＲＰ ）において円盤
状サブユニットの側面（第１図の０面：以下単に０面と
称することがある）に特異的に反応するモノクローナル
抗体によって達成される。
）の側面に特異的に反応するモノクローナル抗体、すな
わち、Ｃ反応性蛋白’ｊｉ （ＣＲＰ ）において円盤
状サブユニットの側面（第１図の０面：以下単に０面と
称することがある）に特異的に反応するモノクローナル
抗体によって達成される。
更に前記の目的は、本発明により、不溶性担体に固定さ
せることにより、Ｃ反応性蛋白Ｗ （ＣＲＰ ）との間
で抗原抗体反応に基づ（凝集反応を起すことのできるモ
ノクローナル抗体によって達成することができる。ＣＲ
Ｐの側面に特異的に反応する前記のモノクローナル抗体
は、これを不溶性担体に固定させるとＣＲＰとの間で凝
集反応を起こすことができる。
せることにより、Ｃ反応性蛋白Ｗ （ＣＲＰ ）との間
で抗原抗体反応に基づ（凝集反応を起すことのできるモ
ノクローナル抗体によって達成することができる。ＣＲ
Ｐの側面に特異的に反応する前記のモノクローナル抗体
は、これを不溶性担体に固定させるとＣＲＰとの間で凝
集反応を起こすことができる。
更に本発明は、Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ）で免疫したマ
ウスの脾臓細胞とマウスのミエローマ細胞との融合によ
って形成され、Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ）の側面に特異
性に反応するモノクローナル抗体を分泌することを特徴
とする、ハイブリドーマ細胞にも関する。
ウスの脾臓細胞とマウスのミエローマ細胞との融合によ
って形成され、Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ）の側面に特異
性に反応するモノクローナル抗体を分泌することを特徴
とする、ハイブリドーマ細胞にも関する。
更に本発明はＣ反応性蛋白質（ＣＲＰ）の側面に特異的
に反応するモノクローナル抗体を用いることを特徴とす
る、血漿中のＣ反応性蛋白質（ＣＲＰ）の免疫定量法に
も関する。
に反応するモノクローナル抗体を用いることを特徴とす
る、血漿中のＣ反応性蛋白質（ＣＲＰ）の免疫定量法に
も関する。
以下、本発明の詳細な説明する。
ＣＲＰに対するモノクローナル抗体である本発明による
抗ＣＲＰモノクローナル抗体は、新規なマウス・ハイブ
リドーマ細胞をイン・ビトロ（例えば培地中）またはイ
ン・ビボ（例えばマウスの腹腔内）で培養することによ
って製造することができる。
抗ＣＲＰモノクローナル抗体は、新規なマウス・ハイブ
リドーマ細胞をイン・ビトロ（例えば培地中）またはイ
ン・ビボ（例えばマウスの腹腔内）で培養することによ
って製造することができる。
ここで用いるマウス・ハイブリドーマ細胞は、−Ｉ”Ｇ
的にはＣＲＰで免疫したマウスの脾臓細胞とマウスのミ
エローマ細胞（骨髄腫細胞）とを、Ｋｏｈｌｅｒおよび
Ｍｉｌｓｔｅｉｎの方法［Ｎａｔｕｒｅ、第２５６巻４
９５頁（１９７５年）参照］により細胞融合して製造す
ることが可能である。
的にはＣＲＰで免疫したマウスの脾臓細胞とマウスのミ
エローマ細胞（骨髄腫細胞）とを、Ｋｏｈｌｅｒおよび
Ｍｉｌｓｔｅｉｎの方法［Ｎａｔｕｒｅ、第２５６巻４
９５頁（１９７５年）参照］により細胞融合して製造す
ることが可能である。
また、上記のハイブリドーマ細胞を培養する培地として
は、ハイブリドーマ細胞の培養に適した任意の培地を用
いることができ、好適にはダルベツコ氏変法イーグル氏
培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄＥｅａ
ｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ ；以下ＤＭＥと記す。）に
ウシ胎児血清、Ｌ−グルタミン、Ｌ−ピルビン酸および
抗生物質（ペニシリンＧとストレプトマイシン）を含む
培地が用いられる。
は、ハイブリドーマ細胞の培養に適した任意の培地を用
いることができ、好適にはダルベツコ氏変法イーグル氏
培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄＥｅａ
ｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ ；以下ＤＭＥと記す。）に
ウシ胎児血清、Ｌ−グルタミン、Ｌ−ピルビン酸および
抗生物質（ペニシリンＧとストレプトマイシン）を含む
培地が用いられる。
上記のハイブリドーマ細胞の培養は、イン・ビトロの場
合には例えば培地中で５％ＣＯｚ 濃度および３７“Ｃ
で約３日間、またイン・ビボ例えばマウスの腹腔内で培
養する場合には約１４日間実施する。
合には例えば培地中で５％ＣＯｚ 濃度および３７“Ｃ
で約３日間、またイン・ビボ例えばマウスの腹腔内で培
養する場合には約１４日間実施する。
このようにして製造された培養液またはマウスの腹水か
らモノクローナル抗体を分離、精製する場合には、蛋白
質の単離、精製に一般的に用いられる方法を用いること
が可能である。そのような方法としては、硫安塩析、イ
オン交換クロマトグラフィー、分子篩ゲルを用いる分子
篩カラムクロマトグラフィー、プロティンＡ結合多糖類
を用いる親和性カラムクロマトグラフィー、透析、凍結
乾燥の方法等がある。
らモノクローナル抗体を分離、精製する場合には、蛋白
質の単離、精製に一般的に用いられる方法を用いること
が可能である。そのような方法としては、硫安塩析、イ
オン交換クロマトグラフィー、分子篩ゲルを用いる分子
篩カラムクロマトグラフィー、プロティンＡ結合多糖類
を用いる親和性カラムクロマトグラフィー、透析、凍結
乾燥の方法等がある。
このようにして得られた抗ＣＲＰモノクローナル抗体は
、他の血漿蛋白とは反応しないで、ＣＲＰとだけ特異的
に結合する能力を有する。しかも、この発明による抗Ｃ
ＲＰモノクローナル抗体は円盤状サブユニットの円形上
面（Ａ面）又は円形底面（Ｂ面）とは反応せず、側面（
０面）とのみ特異的に反応する。更に、この抗ＣＲＰモ
ノクローナル抗体は、これを不溶性担体に固定させると
、ＣＲＰとの間で凝集反応を起こすことができるので、
ＣＲＰの免疫定量用試薬として有用である。例えば、錆
集反応によるＣＲＰ定量定量−の発明による抗ＣＲＰモ
ノクローナル抗体１種類のみを用い、これを公知の化学
結合法（架橋剤としてカルボジイミド、グルタルアルデ
ヒド等を用いる）又は物理吸着法によって、通常用いる
不溶性担体〔例えばラテックス（例えばポリスチレンラ
テックス粒子）〕に結合させて複合体を形成する。この
抗ＣＲＰモノクローナル抗体結合不溶性担体複合体の既
知一定量と未知量のＣＲＰを含存する水性試料（例えば
血清、血漿、尿）の一定量とを、適当な反応容器例えば
スライド板上あるいは反応セル中で接触させる。こうし
て形成される凝集の程度からＣＲＰ濃度の定量を行うこ
とができる。例えばスライド板の場合には目視的に、反
応セルの場合は特定の波長を用いて分光学的に凝集反応
を測定し、被検試料中のＣＲＰ濃度を定■することがで
きる。
、他の血漿蛋白とは反応しないで、ＣＲＰとだけ特異的
に結合する能力を有する。しかも、この発明による抗Ｃ
ＲＰモノクローナル抗体は円盤状サブユニットの円形上
面（Ａ面）又は円形底面（Ｂ面）とは反応せず、側面（
０面）とのみ特異的に反応する。更に、この抗ＣＲＰモ
ノクローナル抗体は、これを不溶性担体に固定させると
、ＣＲＰとの間で凝集反応を起こすことができるので、
ＣＲＰの免疫定量用試薬として有用である。例えば、錆
集反応によるＣＲＰ定量定量−の発明による抗ＣＲＰモ
ノクローナル抗体１種類のみを用い、これを公知の化学
結合法（架橋剤としてカルボジイミド、グルタルアルデ
ヒド等を用いる）又は物理吸着法によって、通常用いる
不溶性担体〔例えばラテックス（例えばポリスチレンラ
テックス粒子）〕に結合させて複合体を形成する。この
抗ＣＲＰモノクローナル抗体結合不溶性担体複合体の既
知一定量と未知量のＣＲＰを含存する水性試料（例えば
血清、血漿、尿）の一定量とを、適当な反応容器例えば
スライド板上あるいは反応セル中で接触させる。こうし
て形成される凝集の程度からＣＲＰ濃度の定量を行うこ
とができる。例えばスライド板の場合には目視的に、反
応セルの場合は特定の波長を用いて分光学的に凝集反応
を測定し、被検試料中のＣＲＰ濃度を定■することがで
きる。
また、この発明の抗ＣＲＰモノクローナル抗体と別異の
抗ＣＲＰモノクローナル抗体（例えば円盤上サブユニッ
トの円形上面又は円形底面と特異的に反応するモノクロ
ーナル抗体）とを用いて各種０ＣＲＰ含有水性試料の免
疫定量法を実施することができる。
抗ＣＲＰモノクローナル抗体（例えば円盤上サブユニッ
トの円形上面又は円形底面と特異的に反応するモノクロ
ーナル抗体）とを用いて各種０ＣＲＰ含有水性試料の免
疫定量法を実施することができる。
（実施例）
次に、この発明を実施例により更に詳細に説明するが、
この発明は以下の実施例によって限定されるものではな
い。
この発明は以下の実施例によって限定されるものではな
い。
″ＸｉＪ罰辻上
（ａ）免疫化した脾臓細胞の調製：
ＣＲＰ免疫原溶液〔ベルフリーズ社（米国）〕（Ａ２８
０ｎｍ＝ ０．１ ）を等量のフロイント氏完全アジュ
バントと乳化するまで混合し、その混合液２００μノを
マウス腹腔内に投与することにより免疫を行なった（第
１回免疫）。３０日経過後、該マウスに上記と同様の混
合液２００μｌをマウス腹腔内に投与した（第２回免疫
）。第２回免疫から２１日経過後、ＣＲＰ免疫原溶液（
Ａ２８０ｎｍ−０，１）を等量の生理食塩水で希釈し、
その希釈液２００Ｉを、該マウスの静脈内に投与した（
最終免疫）。最終免疫から３日経過後、脾臓を無菌的に
マウスから取り出し、次の細胞融合工程に使用した。
０ｎｍ＝ ０．１ ）を等量のフロイント氏完全アジュ
バントと乳化するまで混合し、その混合液２００μノを
マウス腹腔内に投与することにより免疫を行なった（第
１回免疫）。３０日経過後、該マウスに上記と同様の混
合液２００μｌをマウス腹腔内に投与した（第２回免疫
）。第２回免疫から２１日経過後、ＣＲＰ免疫原溶液（
Ａ２８０ｎｍ−０，１）を等量の生理食塩水で希釈し、
その希釈液２００Ｉを、該マウスの静脈内に投与した（
最終免疫）。最終免疫から３日経過後、脾臓を無菌的に
マウスから取り出し、次の細胞融合工程に使用した。
（ｂ）細胞融合：
無菌的に摘出した上記の脾臓を、１５％ウシ胎児血清を
含むＤＭＥ培地５ｄを入れたシャーレに入れた。次に、
脾臓を１５％ウシ胎児血清を含むＤＭＥ培地約１５１ｄ
で還流して脾臓細胞を流出させた後、この脾臓細胞懸濁
液をナイロンメツシュに通した。この脾臓細胞を５０ｍ
１遠心チユーブに集め、５００Ｘｇで１０分間遠心した
。こうして得たペレットにヘモライジング溶液（１５５
ｄ ＮＩｌ、Ｃｆｆ１ 。
含むＤＭＥ培地５ｄを入れたシャーレに入れた。次に、
脾臓を１５％ウシ胎児血清を含むＤＭＥ培地約１５１ｄ
で還流して脾臓細胞を流出させた後、この脾臓細胞懸濁
液をナイロンメツシュに通した。この脾臓細胞を５０ｍ
１遠心チユーブに集め、５００Ｘｇで１０分間遠心した
。こうして得たペレットにヘモライジング溶液（１５５
ｄ ＮＩｌ、Ｃｆｆ１ 。
１抛ＭＫＨＣＯｓ 、 １ｍＭ ＮａｚＥＤＴＡ ｐＨ
７，０） ４ ｔｕｌを加え、懸濁させた。０°Ｃで５
分間放置して懸濁液中の赤血球を破壊させた。１５％ウ
シ胎児血清１０ｍ１を含むＤＭＥ培地を加えてから遠心
分離した。こうして得た細胞ペレットをＤＭＥ培地で遠
心法によって洗浄し、生きている脾臓細胞数を測定した
。
７，０） ４ ｔｕｌを加え、懸濁させた。０°Ｃで５
分間放置して懸濁液中の赤血球を破壊させた。１５％ウ
シ胎児血清１０ｍ１を含むＤＭＥ培地を加えてから遠心
分離した。こうして得た細胞ペレットをＤＭＥ培地で遠
心法によって洗浄し、生きている脾臓細胞数を測定した
。
一方、予め培養しておいたマウスミエローマ細胞（骨髄
腫細胞） ＳＰ ２１０−＾ｇ１４（理化学研究所シー
ンバンク細胞銀行）約２Ｘ１０’個に上記脾臓細胞ｌＸ
ｌ０”個を加え、ＤＭＥ培地中でよ（混合し、遠心分離
を行なった（５００Ｘ ｇ 、 １０分間）。その上清
を吸引し、ペレットをよく解きほぐし、４０％ポリエチ
レングリコール４０００溶液（３８°Ｃに保温）０、５
ｍを滴下し、遠心チューブを手で１分間穏やかに回転
することによってポリエチレングリコール溶液と細胞ペ
レットを混合させた０次に３８°Ｃに保温しておいたＤ
ＭＥ培地を３０秒毎に１−加えて、チューブを穏やかに
回転させた。この操作を１０回繰返した後、１５％ウシ
胎児血清２０ｄを含むＤＭＥ培地を加えて、遠心分離（
５００Ｘｇ、１０分間）を行なった。上清を除去した後
、細胞ペレットを１５％ウシ胎児血清を含むＨＡＴ培地
（ＤＭＥ培地にアミノプテリン４ Ｘｌ０−’Ｍ、チミ
ジン１．６Ｘ１０−５Ｍ、ヒボキサンチンｌＸｌ０−’
Ｍになるように添加したもの）で、遠心法によって２回
洗浄後、４０戚の上記ＨＡＴ培地に懸濁した。この細胞
懸濁液を９６ウエル細胞培養プレートの各ウェルに２０
０Ｉｌｌずつ分注し、３７℃、５％炭酸ガスを含む炭酸
ガス培養器で培養を開始した。培養中、２〜３日間隔で
各ウェルの培地を約１００４除き、新たに上記のＨＡＴ
培地１００Ｉｉを加えることによりＨＡＴ培地中で増殖
するハイブリドーマを選択した。８日目から１５％ウシ
胎児血清を含むＨＡＴ培地（ＤＭＥ培地にチミジン１．
６ ＸＩＯ”’Ｍ、ヒポキサンチンｌＸｌ０−’Ｍにな
るように添加したもの）に交換し、ハイブリドーマの増
殖を観察するとともに、１００日目、下達のＥＬＩＳＡ
法により、ＣＲＰ抗体産生ハイブリドーマをスクリーニ
ングした。
腫細胞） ＳＰ ２１０−＾ｇ１４（理化学研究所シー
ンバンク細胞銀行）約２Ｘ１０’個に上記脾臓細胞ｌＸ
ｌ０”個を加え、ＤＭＥ培地中でよ（混合し、遠心分離
を行なった（５００Ｘ ｇ 、 １０分間）。その上清
を吸引し、ペレットをよく解きほぐし、４０％ポリエチ
レングリコール４０００溶液（３８°Ｃに保温）０、５
ｍを滴下し、遠心チューブを手で１分間穏やかに回転
することによってポリエチレングリコール溶液と細胞ペ
レットを混合させた０次に３８°Ｃに保温しておいたＤ
ＭＥ培地を３０秒毎に１−加えて、チューブを穏やかに
回転させた。この操作を１０回繰返した後、１５％ウシ
胎児血清２０ｄを含むＤＭＥ培地を加えて、遠心分離（
５００Ｘｇ、１０分間）を行なった。上清を除去した後
、細胞ペレットを１５％ウシ胎児血清を含むＨＡＴ培地
（ＤＭＥ培地にアミノプテリン４ Ｘｌ０−’Ｍ、チミ
ジン１．６Ｘ１０−５Ｍ、ヒボキサンチンｌＸｌ０−’
Ｍになるように添加したもの）で、遠心法によって２回
洗浄後、４０戚の上記ＨＡＴ培地に懸濁した。この細胞
懸濁液を９６ウエル細胞培養プレートの各ウェルに２０
０Ｉｌｌずつ分注し、３７℃、５％炭酸ガスを含む炭酸
ガス培養器で培養を開始した。培養中、２〜３日間隔で
各ウェルの培地を約１００４除き、新たに上記のＨＡＴ
培地１００Ｉｉを加えることによりＨＡＴ培地中で増殖
するハイブリドーマを選択した。８日目から１５％ウシ
胎児血清を含むＨＡＴ培地（ＤＭＥ培地にチミジン１．
６ ＸＩＯ”’Ｍ、ヒポキサンチンｌＸｌ０−’Ｍにな
るように添加したもの）に交換し、ハイブリドーマの増
殖を観察するとともに、１００日目、下達のＥＬＩＳＡ
法により、ＣＲＰ抗体産生ハイブリドーマをスクリーニ
ングした。
（Ｃ）ハイブリドーマの樹立
ハイブリドーマ培養上清中の産生抗体の有無はＥＬＩＳ
Ａ法により測定した。９６ウエルＥＬＩＳＡ用プレート
（Ｉｍｍｕｌｏｎ ＩＩ、日本ダイナチック株式会社）
の各ウェルに、前述０ＣＲＰ免疫原溶液（Ａ２８０ｎｒ
ａ＝０．０５、生理食塩水で希釈した）５０１１１ずつ
を分注し、２５°Ｃで２時間放置した。次に、０．０５
％Ｔｗｅｅｎ ２０−生理食塩水で３回洗浄した後、各
ウェルに培養上清５０Ｊｔ１を加え、２５°Ｃで１時間
反応させた。
Ａ法により測定した。９６ウエルＥＬＩＳＡ用プレート
（Ｉｍｍｕｌｏｎ ＩＩ、日本ダイナチック株式会社）
の各ウェルに、前述０ＣＲＰ免疫原溶液（Ａ２８０ｎｒ
ａ＝０．０５、生理食塩水で希釈した）５０１１１ずつ
を分注し、２５°Ｃで２時間放置した。次に、０．０５
％Ｔｗｅｅｎ ２０−生理食塩水で３回洗浄した後、各
ウェルに培養上清５０Ｊｔ１を加え、２５°Ｃで１時間
反応させた。
次に、Ｔｗｅｅｎ ２０−生理食塩水で２００倍希釈し
たベルオキシターゼ結合抗マウス抗体（ダコ社、デンマ
ーク）５０４を各ウェルに加えた。反応終了後、０．０
５％Ｔｗｅｅｎ ２０−生理食塩水で各ウェルを３回洗
浄し、０．５ａ＋Ｍアミノアンチピリン、１０ｏ＋Ｍフ
ェルール及び０．００５％過酸化水素水を含む溶液２５
０Ｉを各ウェルに加え、２５°Ｃで３０分間反応させ、
各ウェルの４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。その
結果、１９２ウエル中４ウエルに抗体産生が認められた
。その４ウエル中の各ハイブリドーマを２４ウエルプレ
ートに写し、１５％ウシ胎児血清を含むＨＴ培地で４〜
５日間培養した。その後、再度ＥＬＩＳＡ法によって抗
ＣＲＰ抗体の産生の有無を確認してから限界希釈法によ
りクローニングした。限界希釈法は、ＨＴ培地でハイブ
リドーマが５個／戚となるように希釈した細胞浮遊液を
、予め正常ＢＡＬＢ／Ｃ系マウスの腹腔細胞がウェルあ
たり２Ｘ１０’個分注しである９６ウエルプレートの各
ウェルに１００４ずつ分注した。１０日後、ＥＬＩＳＡ
法によって抗ＣＲＰ特異的抗体を産生ずるハイブリドー
マのクローンをスクリーニングした。
たベルオキシターゼ結合抗マウス抗体（ダコ社、デンマ
ーク）５０４を各ウェルに加えた。反応終了後、０．０
５％Ｔｗｅｅｎ ２０−生理食塩水で各ウェルを３回洗
浄し、０．５ａ＋Ｍアミノアンチピリン、１０ｏ＋Ｍフ
ェルール及び０．００５％過酸化水素水を含む溶液２５
０Ｉを各ウェルに加え、２５°Ｃで３０分間反応させ、
各ウェルの４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。その
結果、１９２ウエル中４ウエルに抗体産生が認められた
。その４ウエル中の各ハイブリドーマを２４ウエルプレ
ートに写し、１５％ウシ胎児血清を含むＨＴ培地で４〜
５日間培養した。その後、再度ＥＬＩＳＡ法によって抗
ＣＲＰ抗体の産生の有無を確認してから限界希釈法によ
りクローニングした。限界希釈法は、ＨＴ培地でハイブ
リドーマが５個／戚となるように希釈した細胞浮遊液を
、予め正常ＢＡＬＢ／Ｃ系マウスの腹腔細胞がウェルあ
たり２Ｘ１０’個分注しである９６ウエルプレートの各
ウェルに１００４ずつ分注した。１０日後、ＥＬＩＳＡ
法によって抗ＣＲＰ特異的抗体を産生ずるハイブリドー
マのクローンをスクリーニングした。
その結果、各ハイブリドーマにつき、２０〜４０個の抗
体産生クローンが得られた。これらのクローンの中から
、増殖のよい、抗体分泌能の高い、しかも安定なりロー
ンを選び、前述と同様の方法で再クローン化を行い、抗
ＣＲＰ特異的抗体産生ハイブリドーマＣＲＰ−１、ＣＲ
Ｐ−２、ＣＲＰ−３及びＣＩ？Ｐ−４を樹立した。これ
らのハイブリドーマは１９８９年４月１３日から工業技
術院微生物工業技術院に寄託されている。寄託番号は以
下のとおりである。
体産生クローンが得られた。これらのクローンの中から
、増殖のよい、抗体分泌能の高い、しかも安定なりロー
ンを選び、前述と同様の方法で再クローン化を行い、抗
ＣＲＰ特異的抗体産生ハイブリドーマＣＲＰ−１、ＣＲ
Ｐ−２、ＣＲＰ−３及びＣＩ？Ｐ−４を樹立した。これ
らのハイブリドーマは１９８９年４月１３日から工業技
術院微生物工業技術院に寄託されている。寄託番号は以
下のとおりである。
ハイプリドーマ ｌε−
ＪＬ３ニーＣＲＰ−１微工研菌寄第１０６６１号（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１０６６１）ＣＲＰ−２微工研菌寄第１０６
６２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６６２）ＣＲＰ−３微工研
菌寄第１０６６３号（Ｆｔ！ＲＭ Ｐ−１０６６３）Ｃ
ＲＰ−４微工研菌寄第１０６６４号（ＦＥＲＭ Ｐ−１
０６６４）２：モノクローナル の （ａ）イン・ビトロ法 マウスハイブリドーマＣＲＰ−１、ＣＲＰ−２、ＣＲＰ
−３及びＣＲＰ−４を、それぞれ１５％ウシ胎児血清を
含むＤＭＥ培地中で３７°Ｃ１５％二酸化炭素雰囲気中
において７２〜９６時間培養した。培養物を遠心分離（
１００ＯＯＸ ｇ 、 １０分）後、上清に固形の硫酸
アンモニウムを５０％最終濃度となるように徐々に加え
た。混合物を水冷下で３０分間撹拌した後、６０分間放
置し、遠心分離（１００００ｘ ｇ 、 １０分）後、
得られた沈渣を少量の１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８，
０）に溶解し、１０００倍量の１０ｍＭリン酸緩衝液に
対して透析した。これを、１０ｍＭリン酸緩衝液ですで
に平衡化したＤＥＡＥ ・−セルロースのカラムに充填
した。モノクローナル抗体の溶出は１０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ８，０）と０．２ＭＮａＣｊ２を含む１０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ８，０）の間で濃度勾配法により行
なった。溶出されたモノクローナル抗体を限外濾過法で
濃縮し、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）に対して
透析した。ウシ血清１ｇＧを除くために、透析物をやぎ
抗つシ血清ＩｇＧ−セファロース４Ｂのカラムに通した
。次に通過液を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）で
平衡化したプロティンＡ−セファロース４Ｂのカラムに
充填した。カラムをｐＨ３，５の緩衝液で溶出して、精
製した抗ＣＲＰ特異抗体ＣＲＰ−１（同様にしてＣＲＰ
−２、ＣＲＰ−３及びＣＲＰ−４）の溶液を得た。
ＪＬ３ニーＣＲＰ−１微工研菌寄第１０６６１号（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１０６６１）ＣＲＰ−２微工研菌寄第１０６
６２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６６２）ＣＲＰ−３微工研
菌寄第１０６６３号（Ｆｔ！ＲＭ Ｐ−１０６６３）Ｃ
ＲＰ−４微工研菌寄第１０６６４号（ＦＥＲＭ Ｐ−１
０６６４）２：モノクローナル の （ａ）イン・ビトロ法 マウスハイブリドーマＣＲＰ−１、ＣＲＰ−２、ＣＲＰ
−３及びＣＲＰ−４を、それぞれ１５％ウシ胎児血清を
含むＤＭＥ培地中で３７°Ｃ１５％二酸化炭素雰囲気中
において７２〜９６時間培養した。培養物を遠心分離（
１００ＯＯＸ ｇ 、 １０分）後、上清に固形の硫酸
アンモニウムを５０％最終濃度となるように徐々に加え
た。混合物を水冷下で３０分間撹拌した後、６０分間放
置し、遠心分離（１００００ｘ ｇ 、 １０分）後、
得られた沈渣を少量の１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８，
０）に溶解し、１０００倍量の１０ｍＭリン酸緩衝液に
対して透析した。これを、１０ｍＭリン酸緩衝液ですで
に平衡化したＤＥＡＥ ・−セルロースのカラムに充填
した。モノクローナル抗体の溶出は１０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ８，０）と０．２ＭＮａＣｊ２を含む１０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ８，０）の間で濃度勾配法により行
なった。溶出されたモノクローナル抗体を限外濾過法で
濃縮し、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）に対して
透析した。ウシ血清１ｇＧを除くために、透析物をやぎ
抗つシ血清ＩｇＧ−セファロース４Ｂのカラムに通した
。次に通過液を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）で
平衡化したプロティンＡ−セファロース４Ｂのカラムに
充填した。カラムをｐＨ３，５の緩衝液で溶出して、精
製した抗ＣＲＰ特異抗体ＣＲＰ−１（同様にしてＣＲＰ
−２、ＣＲＰ−３及びＣＲＰ−４）の溶液を得た。
（ｂ）イン・ビボ法
プリスタン（２、６，１０，１４−テトラメチルペンタ
デカン）０．５ｍを１０〜１２週齢のＢＡＬＢ／Ｃ系マ
ウスの腹腔内に投与後１４〜２０日目のマウ、ス腹腔内
にインビトロで増殖させたハイプリドーマＣＲＰ−ＩＣ
ＲＰ−２、ＣＲＰ−３又はＣＲＰ−４をマウス−匹あた
り２×１０ｈ細胞となるように接種した。
デカン）０．５ｍを１０〜１２週齢のＢＡＬＢ／Ｃ系マ
ウスの腹腔内に投与後１４〜２０日目のマウ、ス腹腔内
にインビトロで増殖させたハイプリドーマＣＲＰ−ＩＣ
ＲＰ−２、ＣＲＰ−３又はＣＲＰ−４をマウス−匹あた
り２×１０ｈ細胞となるように接種した。
各ハイプリドーマにつき一匹のマウスから約ｌＯ〜１５
−の腹水が得られた。その抗体濃度は、２〜１０■／Ｉ
Ｉｄｌであった。覆腹中のモノクローナル抗体の精製は
、上記のインビトロ精製法と同様の方法（但し、ヤギ抗
つシ血清ＩｇＧ−セファロース４Ｂのカラムを通す操作
を除く）で行なった。
−の腹水が得られた。その抗体濃度は、２〜１０■／Ｉ
Ｉｄｌであった。覆腹中のモノクローナル抗体の精製は
、上記のインビトロ精製法と同様の方法（但し、ヤギ抗
つシ血清ＩｇＧ−セファロース４Ｂのカラムを通す操作
を除く）で行なった。
抗ＣＲＰ特異モノクローナル抗体ＣＲＰ−１、ＣＲＰ２
、ＣＲＰ−３及びＣＲＰ−４の免疫グロブリン・クラ
ス及び特異性の同定はそれぞれオフテロニー免疫拡散法
及びエンザイムイムノアッセイ法により行った。結果は
表１に示す通りである。
、ＣＲＰ−３及びＣＲＰ−４の免疫グロブリン・クラ
ス及び特異性の同定はそれぞれオフテロニー免疫拡散法
及びエンザイムイムノアッセイ法により行った。結果は
表１に示す通りである。
４表−」−
ラテックス溶液（２％、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａ１社：
粒径０．４８２ａｎ） ２ｍｌと、ＣＲＰ−１抗体２．
０ｍｇ／ｄを含有する水溶液２戒とを混合し、約１時間
撹拌した。
粒径０．４８２ａｎ） ２ｍｌと、ＣＲＰ−１抗体２．
０ｍｇ／ｄを含有する水溶液２戒とを混合し、約１時間
撹拌した。
遠心後（２０，０００ｇ、１０分間）、沈殿を０．１％
ＢＳＡ溶液に懸濁し、約１時間撹拌した。再び遠心（２
０，０００ｇ 、 １０分間）した後、沈殿を水に懸濁
し、約２時間撹拌した。こうして、ＣＲＰ−１抗体−ラ
テックス複合体含有液を得た。同様にしてＣＲＰ−２抗
体、ＣＲＰ−３抗体及びＣＲＰ−４抗体を用いて複合体
含有液を調製した。
ＢＳＡ溶液に懸濁し、約１時間撹拌した。再び遠心（２
０，０００ｇ 、 １０分間）した後、沈殿を水に懸濁
し、約２時間撹拌した。こうして、ＣＲＰ−１抗体−ラ
テックス複合体含有液を得た。同様にしてＣＲＰ−２抗
体、ＣＲＰ−３抗体及びＣＲＰ−４抗体を用いて複合体
含有液を調製した。
それとは別に、前述のＴｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｉｎ＋ｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｖｏｌ １３１．２４１１−
２４１５）に準じて、ＣＲＰのＡ面に特異的に反応し、
Ｂ面とは反応しないモノクローナル抗体（Ａ抗体）及び
ＣＲＰ０Ｂ面に特異的に反応し、Ａ面とは反応しないモ
ノクローナル抗体（Ｂ抗体）を調製し、上記操作と同様
にして複合体含有液を得た。
Ｉｎ＋ｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｖｏｌ １３１．２４１１−
２４１５）に準じて、ＣＲＰのＡ面に特異的に反応し、
Ｂ面とは反応しないモノクローナル抗体（Ａ抗体）及び
ＣＲＰ０Ｂ面に特異的に反応し、Ａ面とは反応しないモ
ノクローナル抗体（Ｂ抗体）を調製し、上記操作と同様
にして複合体含有液を得た。
これら複合体含有液３０ｍと、２０ｎ／Ｉ１１のＣＲＰ
含有液３０ｕ１とをスライドガラス上で混合し、凝集像
を目視的に観察した。その結果、Ａ抗体及びＢ抗体にお
いては凝集は認められず、それに対して本発明のＣＲＰ
−１，２，３及び４の各抗体においては凝集が確認され
た。本発明のＣＲＰ−１，２゜３及び４抗体は、従来の
Ａ面にのみ特異的な抗体及びＢ面にのみ特異的な抗体と
は、明らかに異る性質であることがわかる。
含有液３０ｕ１とをスライドガラス上で混合し、凝集像
を目視的に観察した。その結果、Ａ抗体及びＢ抗体にお
いては凝集は認められず、それに対して本発明のＣＲＰ
−１，２，３及び４の各抗体においては凝集が確認され
た。本発明のＣＲＰ−１，２゜３及び４抗体は、従来の
Ａ面にのみ特異的な抗体及びＢ面にのみ特異的な抗体と
は、明らかに異る性質であることがわかる。
そこで、ＣＲＰのＡ面を対応する抗体でマスキングした
ＣＲＰ２０躍／−含有液、及びＣＲＰのＢ面を対応する
抗体でマスキングしたＣＲＰ２Ｏｆｆ／ｍ！含有液を調
製し、これらの液３０１１１に、上記の抗体複合体含有
液３０Ｉｌ！を加え、スライドガラス上で混合したとこ
ろ、本発明によるＣＲＰ−１，２，３及び４各抗体にお
いて、凝集が確認された。このことは、本発明の各抗体
の特異的反応部位が、ＣＲＰＯＡ面、及びＢ面とは異る
部位であること、又、本発明の各抗体複合体において、
ＣＲＰとの反応により凝集を示すことから、本抗体は、
ＣＲＰの側面部位に特異的に反応していることを示唆す
るものである。
ＣＲＰ２０躍／−含有液、及びＣＲＰのＢ面を対応する
抗体でマスキングしたＣＲＰ２Ｏｆｆ／ｍ！含有液を調
製し、これらの液３０１１１に、上記の抗体複合体含有
液３０Ｉｌ！を加え、スライドガラス上で混合したとこ
ろ、本発明によるＣＲＰ−１，２，３及び４各抗体にお
いて、凝集が確認された。このことは、本発明の各抗体
の特異的反応部位が、ＣＲＰＯＡ面、及びＢ面とは異る
部位であること、又、本発明の各抗体複合体において、
ＣＲＰとの反応により凝集を示すことから、本抗体は、
ＣＲＰの側面部位に特異的に反応していることを示唆す
るものである。
５：スーイ′ による
実施例４で調製した抗体−ラテックス複合体含有液３０
μｌと種々な濃度のＣＲＰを含有する水溶液３０ｐＩと
をスライドガラス上で混合し、揺動して３分後に凝集像
を目視的に判定した。結果を以下の表２に示す。
μｌと種々な濃度のＣＲＰを含有する水溶液３０ｐＩと
をスライドガラス上で混合し、揺動して３分後に凝集像
を目視的に判定した。結果を以下の表２に示す。
表−２
表２において＋は凝集ありを、そして−は凝集なしを各
々意味する。
々意味する。
“に
実施例４で調製したモノクローナル抗体ＣＲＰ−ＩＣＲ
Ｐ−２、ＣＲＰ−３及びＣＲＰ−４で感作したラテック
ス（粒径０．４８２ｎ、ダウ社、ドイツ）を用い、自動
分析機（注ニ一般名）（ＬＰＩＡ Ｌ−１：三菱化成社
）によって凝集反応速度のヒトＣＲＰ濃度依存性を調べ
た。ヒトＣＲＰとしてはベルフリーズ社（アメリカ）か
ら市販のものを用い、濃度０．０４ｎ／ｍｌ〜８０ａｇ
／ｄのヒトＣＲＰを含有する１２種の水溶液を調製した
。結果を第２図に示す、第２図から明らかなように、４
種類のラテックスの各々は、ＣＲＰ濃度に依存した凝集
反応速度（Ｖ値：単位時間当りの透過度変化）を示した
。
Ｐ−２、ＣＲＰ−３及びＣＲＰ−４で感作したラテック
ス（粒径０．４８２ｎ、ダウ社、ドイツ）を用い、自動
分析機（注ニ一般名）（ＬＰＩＡ Ｌ−１：三菱化成社
）によって凝集反応速度のヒトＣＲＰ濃度依存性を調べ
た。ヒトＣＲＰとしてはベルフリーズ社（アメリカ）か
ら市販のものを用い、濃度０．０４ｎ／ｍｌ〜８０ａｇ
／ｄのヒトＣＲＰを含有する１２種の水溶液を調製した
。結果を第２図に示す、第２図から明らかなように、４
種類のラテックスの各々は、ＣＲＰ濃度に依存した凝集
反応速度（Ｖ値：単位時間当りの透過度変化）を示した
。
第１図はＣ反応性蛋白質（ＣＲＰ）の構造を模式的に示
す説明図であり、第２図は凝集反応速度とＣＲＰ濃度と
の関係を示すグラフである。
す説明図であり、第２図は凝集反応速度とＣＲＰ濃度と
の関係を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、Ｃ反応性蛋白質の側面に特異的に反応するモノクロ
ーナル抗体。 ２、不溶性担体に固定させることにより、Ｃ反応性蛋白
質との間で抗原抗体反応に基づく凝集反応を起すことの
できるモノクローナル抗体。 ３、Ｃ反応性蛋白質で免疫したマウスの脾臓細胞とマウ
スのミエローマ細胞との融合によって形成され、Ｃ反応
性蛋白質の側面に特異的に反応するモノクローナル抗体
を分泌することを特徴とする、ハイブリドーマ細胞。 ４、Ｃ反応性蛋白質の側面に特異的に反応するモノクロ
ーナル抗体を用いることを特徴とする、血漿中のＣ反応
性蛋白質の免疫定量法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1103471A JP2840852B2 (ja) | 1989-04-25 | 1989-04-25 | Ｃ反応性蛋白質に対するモノクローナル坑体 |
| DE69020315T DE69020315T2 (de) | 1989-04-25 | 1990-04-25 | Monoklonaler antikörper gegen c-reaktives protein. |
| PCT/JP1990/000538 WO1990012884A1 (en) | 1989-04-25 | 1990-04-25 | Monoclonal antibody against c-reactive protein |
| CA002031504A CA2031504C (en) | 1989-04-25 | 1990-04-25 | Monoclonal antibodies to c-reactive protein |
| EP90906370A EP0431171B1 (en) | 1989-04-25 | 1990-04-25 | Monoclonal antibody against c-reactive protein |
| ES90906370T ES2073569T3 (es) | 1989-04-25 | 1990-04-25 | Anticuerpo monoclonal contra la proteina c reactiva. |
| AU54493/90A AU631192B2 (en) | 1989-04-25 | 1990-04-25 | Monoclonal antibody against c-reactive protein |
| US08/357,540 US5500345A (en) | 1989-04-25 | 1994-12-16 | Hybridomas producing monoclonal antibodies specific for C-reactive protein and methods for detection of C-reactive protein |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1103471A JP2840852B2 (ja) | 1989-04-25 | 1989-04-25 | Ｃ反応性蛋白質に対するモノクローナル坑体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02283293A true JPH02283293A (ja) | 1990-11-20 |
| JP2840852B2 JP2840852B2 (ja) | 1998-12-24 |
Family
ID=14354924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1103471A Expired - Lifetime JP2840852B2 (ja) | 1989-04-25 | 1989-04-25 | Ｃ反応性蛋白質に対するモノクローナル坑体 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0431171B1 (ja) |
| JP (1) | JP2840852B2 (ja) |
| AU (1) | AU631192B2 (ja) |
| CA (1) | CA2031504C (ja) |
| DE (1) | DE69020315T2 (ja) |
| ES (1) | ES2073569T3 (ja) |
| WO (1) | WO1990012884A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112574304A (zh) * | 2019-09-30 | 2021-03-30 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 一种抗c反应蛋白的抗体 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5292270B2 (ja) * | 2009-12-21 | 2013-09-18 | 富士フイルム株式会社 | 犬ｃｒｐ測定用乾式分析要素 |
| US8685009B2 (en) * | 2011-05-16 | 2014-04-01 | Covidien Lp | Thread-like knife for tissue cutting |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6236399A (ja) * | 1985-08-09 | 1987-02-17 | Nippon Baiotesuto Kenkyusho:Kk | ヒトｃｒｐの回収、精製法 |
| JPS62210985A (ja) * | 1986-03-12 | 1987-09-17 | Zenkoku Nogyo Kyodo Kumiai Rengokai | 牛のｃ−反応性蛋白に対するモノクロ−ナル抗体産生ハイブリド−マとその抗体を用いた牛ｃ−反応性蛋白の分離精製法 |
| JPS62210984A (ja) * | 1986-03-12 | 1987-09-17 | Zenkoku Nogyo Kyodo Kumiai Rengokai | 犬のｃ−反応性蛋白に対するモノクロ−ナル抗体産生ハイブリド−マとその抗体を用いた犬ｃ−反応性蛋白の分離精製法 |
| GB2218100A (en) * | 1988-03-02 | 1989-11-08 | Erling Sundrehagen | Conjugates for the detection and/or quantification of antigenic substances in body fluids |
| JPH06236399A (ja) * | 1993-02-10 | 1994-08-23 | Nec Corp | 翻訳機能付きワードプロセッサ |
-
1989
- 1989-04-25 JP JP1103471A patent/JP2840852B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-04-25 CA CA002031504A patent/CA2031504C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-25 ES ES90906370T patent/ES2073569T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-25 WO PCT/JP1990/000538 patent/WO1990012884A1/ja not_active Ceased
- 1990-04-25 DE DE69020315T patent/DE69020315T2/de not_active Revoked
- 1990-04-25 AU AU54493/90A patent/AU631192B2/en not_active Expired
- 1990-04-25 EP EP90906370A patent/EP0431171B1/en not_active Revoked
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112574304A (zh) * | 2019-09-30 | 2021-03-30 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 一种抗c反应蛋白的抗体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0431171B1 (en) | 1995-06-21 |
| AU5449390A (en) | 1990-11-16 |
| ES2073569T3 (es) | 1995-08-16 |
| DE69020315T2 (de) | 1996-01-11 |
| CA2031504A1 (en) | 1990-10-26 |
| EP0431171A1 (en) | 1991-06-12 |
| AU631192B2 (en) | 1992-11-19 |
| DE69020315D1 (de) | 1995-07-27 |
| EP0431171A4 (en) | 1991-11-21 |
| WO1990012884A1 (en) | 1990-11-01 |
| JP2840852B2 (ja) | 1998-12-24 |
| CA2031504C (en) | 2000-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5500345A (en) | Hybridomas producing monoclonal antibodies specific for C-reactive protein and methods for detection of C-reactive protein | |
| JPH09294584A (ja) | ヒト腫瘍壊死因子に対するモノクロナール抗体 | |
| JPS6352890A (ja) | 第９因子コンホメ−シヨン特異性モノクロ−ナル抗体 | |
| JPWO1995012617A1 (ja) | 抗ヒト可溶性フィブリン抗体、ハイブリドーマ及び免疫学的測定法 | |
| JP3889084B2 (ja) | 新規なモノクローナル抗体並びにｅ−Ｄダイマー及びｅ−ＤＤ／Ｅ複合体の免疫学的測定法 | |
| AU706547B2 (en) | An antifactor Xa-tissue factor pathway inhibitor complex monoclonal antibody and use thereof | |
| JP3307422B2 (ja) | ヒトｐｉｖｋａ−ｉｉの免疫学的測定方法 | |
| US5888749A (en) | Anti-human plasmin-α2 -plasmin inhibitor complex antibodies, hybridomas, and immunological determination method | |
| JPS62138187A (ja) | 抗トロンビン・アンチトロンビン３複合体モノクローナル抗体、及びその製造方法、並びにそれを用いるトロンビン・アンチトロンビン３複合体の免疫定量法、及びそれを用いるトロンビン・アンチトロンビン３複合体の精製方法 | |
| JPS6378066A (ja) | Ｆｄｐの測定法 | |
| JPWO1992011384A1 (ja) | 抗ヒトプラスミン−α↓２−プラスミンインヒビター複合体抗体、ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法 | |
| JPH02283293A (ja) | Ｃ反応性蛋白質に対するモノクローナル坑体 | |
| JPS63123395A (ja) | 抗ｐｃｉモノクローナル抗体、これを用いた抗ｐｃｉの精製法及び免疫学的測定法 | |
| JPH0548119B2 (ja) | ||
| JP3841364B2 (ja) | 抗ヒトビトロネクチン・トロンビン・アンチトロンビンｉｉｉ 複合体モノクローナル抗体、ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法 | |
| JPS60155198A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JP4361579B2 (ja) | コンドロイチナーゼａｂｃに対するモノクローナル抗体 | |
| JP3865364B2 (ja) | コンドロイチナーゼ画分 | |
| JPH01231893A (ja) | 抗ヒトプロテインｓモノクローナル抗体およびその利用 | |
| JP4090486B2 (ja) | コンドロイチン硫酸リアーゼｉｉに対するモノクローナル抗体 | |
| JP4361578B2 (ja) | コンドロイチン硫酸リアーゼｉｉに対するモノクローナル抗体 | |
| JP4090487B2 (ja) | コンドロイチナーゼａｂｃに対するモノクローナル抗体 | |
| JPS63253098A (ja) | ヒト抗体に対するモノクロ−ナル抗体、その製法及び用途 | |
| JPH04179496A (ja) | ヒトカルパイン２特異認識モノクローナル抗体とこれを産生するハイブリドーマ細胞株、ならびにこれを用いた免疫学的測定法 | |
| JPS6358262A (ja) | 特異モノクロ−ナル抗体を用いた生体成分の分析方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20071023 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081023 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091023 Year of fee payment: 11 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091023 Year of fee payment: 11 |