JPS6358262A - 特異モノクロ−ナル抗体を用いた生体成分の分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 この発明は、特異モノクローナル抗体を用いた生体成分
の分析方法に関するものである。

〈従来の技術〉 抗原抗体反応を利用した生体の像量成分を分析する方法
として、特異ポリクローナル抗体感作担体とフリーな抗
原を液体中で混合して生ずる凝集反応を、スライド凝集
板上で目視的に、または光学的に測定する方づ去が知ら
れでいる。

この方法は、多科頼の生体成分を含む試料の中で目的と
する生体成分を高選択的に測定可能なため、一般に広く
使用されており、その中には、例えば抗ヒト・ヘモグロ
ビンポリクローナル抗体をラテックス粒子に結合させた
抗体感作ラテックス粒子と、糞便中のヒト・ヘモグロビ
ンとを反応させ、糞便中のヒト・ヘモグロビンを測定す
る方法がある（特開昭５９−１２５０６４号公報参照）
。

〈発明が解決しようとする問題点〉 しかしながら、前記した従来の分析方法においては、ポ
リクローナル抗体を使用しているため次のようなポリク
ローナル抗体特有の欠点があった。

（１）ポリクローナル抗体は、種々の抗原決定基（エピ
トープ）に対する抗体を多種含む不均一な抗体であるた
め、類似の構造をもつ抗原の測定においては、免疫学的
交叉反応が王じ、測定値に影響が出て不正確となる。

（２）抗体作成に用いる抗原は、高度に′Ｎ４製して純
品化しなければならない。

（３）抗体を多量に採取するために、馬などの大きな動
物に１回毎に多量に免疫しなければならない。

（４）免疫は１７１物個々に行なうので得られた抗体の
・性状は、動物個々に異なり、同一ではないので不便で
ある。

そこで本発明者等は、ポリクローナル抗体に代えでモノ
クローナル抗体の使用を試みた。

ポリクローナル抗体をモノクローナル抗体に代える利点
は次の通りである。

（１）化学的、免疫学的性状が均一であるため、１種の
抗原決定基に対して高い特異性を有すること、また、目
的とする抗体は、抗体産生クローン細胞を培養すること
により得られるので、同一の性状をもつ、ロット差のな
い抗体を長期間安定して得られること。

（２）抗体作製のために用いる抗原の純度が、ポリクロ
ーナル抗体の場合に比較してかなり低くても影響を受け
ないこと。

（３）抗原の量が少なくて済むこと（マウスのような小
動物を使用するため少量でよい）。

前記（２）、及び（３）は、精製が困難な抗原や量的に
入手し難い稀少抗原については、ポリクローナル抗体に
比較して特に有利である。

しかし、ポリクローナル抗体に代えてモノクローナル抗
体を使用すると、モノクローナル抗体は、１種の抗原決
定基に対して高い特異性を有しているため、特異モノク
ローナル抗体感作担体と測定対象であるフリーな抗原と
を液体中で混合しても、はとんどの場合凝集反応が王し
ず、このままではフリーな抗原を測定できないことがわ
かった。

そこで、本発明者等は特異モノクローナル抗体感作担体
を使用して、凝集反応によって、フリーな抗原を測定す
る方法についで種々検討した結果、別に測定対象である
抗原と同一の抗原を使用して抗原感作担体を製作し、こ
れを前記反応系に導入（添加）する新たな方法を開発し
て、本発明を完成した。

〈問題を解決するための手段〉 すなわち、この発明は、測定対象である抗原と特異的に
反応するモノクローナル抗体感作担体と、測定対象であ
る抗原と同一の抗原感作担体とが反応して生ずる凝集現
象を、測定対象であるフリーの抗原が阻止する程度（度
合）を目視的、または光学的に測定することによって、
測定対象であるフリーの抗原を免疫学的に高特異的、か
つ高感度で測定することを目的として開発したものであ
る。　本発明に係る分析方法は、特異モノクローナル抗
体感作担体と、測定対象であるフリーの抗原が反応して
も凝集せず、目視、または光学的に測定不可能である場
合に特に有効である。

次に、本願発明に係る特異モノクローナル抗体を用いた
生体成分の分析方法の原理をより詳細に記載する。

従来使用されていたポリクローナル抗体感作担体は、こ
れをフリーの抗原と混合すると、ポリクローナル抗体が
、抗原分子上の多種の抗原決定基と次々と反応可能なた
め凝集塊となる。しかし、モノクローナル抗体感作担体
は、これをフリーの抗原と混合しても、モノクローナル
抗体には反応可能な抗原決定基の数に制限があるので、
目視的に観察可能な凝集は生じない場合が多い。

そこで、測定対象と同一の抗原の抗原感作担体そ別に製
作し、この抗原感作担体を前記反応系内に添加してモノ
ウローナル抗体感作担体と凝集反応を確実に生しさせ、
測定対象であるフリーの抗原は、前記７集反応を阻止す
る要因（成分）として機能させることとした。これによ
り、前記反応において生ずる凝集の程度を目視的、また
は光学的に測定する（測定対象であるフリーの抗原を添
加する場合と、添加しない場合についで）ことにより測
定対象であるフリーの抗原を、高感度に測定することが
可能となったのである。

次に本発明の具体的な一例として、特異モノクローナル
抗体に抗ヒト・ヘモグロビンモノクローナル抗体を、抗
原にはヒト・ヘモグロビンを用い、これらから各々、抗
ヒト・ヘモグロビンモノクローナル抗体感作担体、及び
ヒト・ヘモグロビン感作担体を製造し、これを使用して
便潜血を測定する方法についで述べる。

本発明に使用する抗ヒト・ヘモグロビンモノクローナル
抗体の製造に用いるヒト・ヘモグロビン（抗原）は、過
電市販されでいるものをそのまま使用することかできる
。この中に含まれている程度の挾雑物は、ボリウローナ
ル抗体を製造する場合と異ｔつ無視することができる。

本発明の抗ヒト・ヘモグロビンモノクローナル抗体の作
製法は、通常の文献に記載されでいる方法で充分であり
、特別な方法を必要としない、すなわち、マウスに市販
のヘモグロビンをアジュバント（補助物質）と共に２回
免疫し、牌臓細胞を取り出してポリエチレングリコール
等を用いマウスミエローマ細胞と融合させる。そして、
この融合細胞の中から、当該抗体を産生するものをクロ
ーニングによって、モノクローナル細胞として増殖させ
、マウス腹腔内で増殖させることによって単一抗体、す
なわち抗ヒト・ヘモグロビンモノクローナル抗体を大量
に同一性状のものとして製造することができる。

本発明に使用する担体粒子は、間接凝集反応用のものを
使用すればよい、すなわち、ポリエチレンラテックス、
各種ラテックス、動物の赤血球、カオリン、炭素粒子等
を使用することができる。

本発明の抗ヒト・ヘモグロビンモノクローナル抗体やヒ
ト・ヘモグロビン抗原を担体に感作する方法も一般の抗
体を感作する公知の方法によればよい６例えば、物理的
に吸着させる方法は、最も一般的である。また、カルボ
キシル化ポリスチレンラテックスによる共有結合法、グ
ルクールアルデヒド、トリレンジイソシアナート、カル
ボジイミド類、及び塩化クロム等のいわゆるカップリン
グ剤を使用する方法もある。

次に具体的手法についで更に詳細に述べる。

（ａ）　　本発明の実施に使用する特異モノクローナル
抗体感作担体は次のように調製した。

（イ）免疫化した牌臓細胞の調製： ヒト・ヘモグロビン免疫原溶液（Ａ２８０ｎｍ＝２．０
）％等ｆｆｉのフロイント氏完全アジュバントと乳化す
るまで混合し、その混合液１００Ｕβをマウス腹腔内に
投与することにより免疫を行った（第１回免疫）、３０
日経過復、該マウスに上記と同様な方法でマウス腹腔内
に投与した（第２回免疫）。第２回免疫から２１日経過
復、ヒト・ヘモグロビン免疫原溶液（Ａ２８０ｎｍ＝２
．０）を等量の生理食塩水で稀釈し、その稀釈液１００
ｕｆｆを、該マウスの静脈内に投与した（ＲＰ免疫）、
免疫から３日経過１＆、牌臓細胞をマウスから取り出し
、細胞融合に使用した。

（ロ）細胞融合： 無菌的に摘出した上記の牌臓を、１０〜１５％ウシ胎児
血清を含むＤＭＥ培地５ｍＩ２を入れたシャーレに入れ
る０次に、牌臓を１０〜１５％とウシ胎児血清を含むＤ
ＭＥ培地１５ｒｒｌで還流して牌臓細胞（ｓｐｌｅｅｎ
　ｃｅｌｌ　）を流出させた後、この牌臓細胞懸濁液を
ナイロン製のメツシュに通す。

この牌臓細胞を５０ｒｎβの遠心チューブに集めて５０
０Ｘ９，１０分間遠心する。こうして得たベレットに３
〜５ｍｕのへモライジング溶液（１５５ｍ　ｌ　ＮＨ２
Ｃｌ　　、　　　１　０ｍＭ　　ＫＨＣＯ３，１ｍＭ　
　　Ｎａｚ　　ＥＤＴＡ。

ｐＨ７，０）を加え懸濁させる。０℃で１０〜２０分間
放百すると懸濁液中の赤血球は破壊される。更に、１０
〜２０ｍβの１０〜１５％ウシ胎児血清を含むＤＭＥ培
地を加えてから遠心分離する、このようにして得た細胞
ベレットをＤＭＥ培地で遠心法によって洗浄し、王きて
いる牌臓細胞を測定する。一方、予め培養してあいたマ
ウス骨髄腫綿＃２！（ミエロ−マ細胞）ＳＰ２１０−へ
９１４約２×１０７個にｌＸｌ０’個の上記牌臓細胞を
加え、ＤＭＥ培地でよく混合し、遠心分Ｍを行なった（
５００Ｘ９，１０分間）、その上清を吸引し、ベレット
をよく解きほぐし、３８°Ｃに保温してあいた４０％ポ
リニチレングリコール４００ｏの溶液０．５ｒｒｌを滴
下し、遠心チューブを手で１分間穏やかに回転すること
によってポリエチレングリコール溶液と細胞ベレットを
混合させた０次に、３８℃に保存してあいたＤＭＥ培地
を、３０秒毎に１ｍＪ２加えてチューブを穏やかに回転
させる。この操作を１０回繰り返した徒、１０〜２０ｍ
Ｉ２の１０〜１５％ウシ胎児血清を含むＤＭＥ培地を加
えて、遠心分＠（５００ｘｑ。

１０分間）を行なった。上清を除去した後、細胞ベレッ
トを１０〜１５％ウシ胎児血清を含むＨＡＴ培地（ＤＭ
Ｅ培地にアミノプテリン４Ｘ１０−７Ｍ、チミジン１．
６ｘ　１０−５Ｍ、ヒボキサンチンｌＸｌ０−’Ｍにな
るように添加したもの）で、遠心法により２同法浄猪、
４０ｍ１の上記ＨＡＴ培ｔＴ！！に懸濁する。この細胞
懸濁液を９６ウエル細胞培養プレートの各ウェルに２ｏ
ＯｕＩ２ずつ分注し、３７℃、５％炭酸ガスを含む炭酸
ガス培養器で培養を開始した。培養中、２〜３日間隔で
各ウェルの培地を約１００ｕｎ除き、新たに上記のＨＡ
Ｔ培地８１００ｕｊ２加えることによりＨＡＴ培地中で
増殖するバイブリドーマを選択した。８日目頃から１０
〜１５％ウシ胎児血清を含むＨＴ培地（ＤＭＥ培地にチ
ミジン１．６　Ｘ　１０−’Ｍ、ヒボキサンチンｌＸｌ
０−’Ｍになるように添加したもの）に交換し、ハイブ
リドーマの増殖を観察するとともに、約１０８目に下記
のＥＬＩＳＡ法により、ヒト・ヘモグロビン抗体Ｍ主ハ
イブリドーマをスクリーニングした。

（ハ）ハイブリドーマの樹立 ハイプリドーマ培養上清中の産生抗体の有無はＥＬＩＳ
Ａ法により測定した。９６ウエルＥＬＩＳＡ用プレート
（Ｉｍｍｕｌｏｎ■１日本グイナテック■）の各ウェル
に、前記の精製ヒトヘモグロビン溶液（Ａ２８０ｎｍ＝
０．０５．生理食塩水で稀釈した。）！５０ｕｕずつ分
注し、２５℃で２時開放言した０次に１０．０５％丁ｗ
ｅｅｎ２０−生理食塩水で３回洗浄した後、各ウェルに
培養上清を５０ｕＩ２加え、２５℃で１時間反応させた
。

次に、Ｔｗｅｅｎ　２０−生理食塩水で２００倍稀釈し
たベルオキシダーセ結合抗マウス抗体（ダコ社、デンマ
ーク）５０ｕＩ２を各ウェルに加えた。

反応終了祷、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０−生理食塩水°
　で各ウェルを３回洗浄し、０．５ｍＭアミノアンチど
リン、１０ｍＭフェノール、及び０．００５％過酸化水
素を含む溶液２５０Ｌｌ！を各ウェルに加え、２５℃で
３０分間反応させ、各ウェルの４９０ｎｍにおける吸光
度を測定した。その結果、１９２ウエル中、１２ウエル
に抗体産生が認められた。

次に、前記のクローンを限界稀釈法によりクローニング
した。限界稀釈法は、ＨＴｉｇ地でハイブリドーマが５
個／　ｍ　１２となるよう（こ稀釈した細胞浮遊液を、
予め正常ＢＡＬＢ／Ｃ系マウスの腹腔細胞がウェルあた
つ２Ｘ１０’個分注してある９６ウエルプレートの各ウ
ェルに１００ＬＩβずつ分注した。約１０日後、ＥＬＩ
ＳＡ法によって、抗ヒト・ヘモグロどン特異的抗体を産
生するハイブリドーマのクローンをスクリーニングした
。その結果、各ハイブリドーマにつき、２０〜４０個の
抗体産生クローンが得られた。これらのクローンの中か
ら、増殖のよい、抗体分泌能の高い、しかも安定なりロ
ーンを選び、前記と同様の方法で再クローン化を行ない
、抗ヒト・ヘモグロビン特異的抗体産生ハイブリドーマ
ｌ−１−１を樹立した。

（ｂ）モノクローナル抗体の製造 （イ）イン・ビトロ法 マウスハイブリドーマＨ−１ｖ！：各々１５％ウシ胎児
血清を含むＤＭＥ培地で３７℃、５％炭酸ガス雰囲気中
７２〜９６時周培養した。培養物を遠ｑ、＞分Ｍ（１０
０００ｘｑ、１０分）猪、上清に固形の硫酸アンモニウ
ムを５０％最終濃度となるように徐々に加えた。混合物
を水冷下３０分間攪拌した後６０分間放ゴし、遠心分！
（１００００ｘ９．１０分）後、得られた沈渣を少量の
１０ｍＭ’）ンＭｎ衝液（ｐＨ８，０）　に溶解Ｌ、１
０００倍屋の１ＯｍＭリン酸緩衝液に対して透析した。

これを、１０ｍＭリン酸緩衝液ですでに平衡化したＤＥ
ＡＥ−セルロースのカラムに充填した。モノクローナル
抗体の溶出は＋ＯｒｎＭリンＭ緩衝液（ｐＨ８，０）と
０．２Ｍ　　Ｎａ（１２＠含む１０ｍＭリンＭ！ｉ衡液
（ｐ　Ｈ８、０）　ノｍ　テＪｉＭ、　勾配法により行
なった。溶出されたモノクローナル抗体を限外が適法で
濃縮し、０．１１ＭリンＭＩＳ衡液（ｐＨ８，０）に対
して透析した。ウシ血清工９Ｇを除くために、透析物を
ヤギ抗ウシ血清ｌ９Ｇ−セファロース４Ｂのカラムに通
した０次に透過液％Ｏ，ＩＭリン酸緩衝液（ｐＨ８，ｏ
）’で平衡化したプロティンＡ−セファロース４Ｂのカ
ラムに充填した。カラムを１））−１３，５の緩衝液で
溶出して精製した抗ヒト・ヘモグロビン抗体坑体Ｈ−１
を得た。

（ロ）イシ・どポ法 ブリスタン（２，６，１０，１４−テトラメチルへンタ
デカン）０．５ｍＡを１０〜１２週齢の８４ＬＢ／Ｃ系
マウスの腹腔内に投与後１４〜２０日目のマウス腹腔内
にインビトロで増殖させたパイプリド〜マＨ−１ｊ！マ
ウス１匹あたり２ｘ１０６細胞となるように接種した。

各バイブリドーマにつき１匹のマウスから約１０〜１５
ｍＡの腹水が得られた。その抗体濃度は、２〜１０ｍ９
／ｍβであった。腹水中のモノクローナル抗体の精製（
但し、ヤギ抗ウシ血清ｌ９Ｇ−セフアロース４Ｂのカラ
ムを通す操作は除く、）は、前記のインビトロ精製法と
同様の方法で行なった。

（Ｃ）　　モノクローナル抗体の免疫グロブリンクラス
の同定 抗ヒト・ヘモグロビン特異モノクローナル抗体Ｈ−１免
疫グロブリンクラス、及び特異性の同定は、各々オフテ
ロ二−免疫拡散法、及びエンザイムのアッセイにより行
なった。

その結果は次の表１、及び表２の通りであった。

表１ 免疫グロブリンのクラス 表２ 反応、特異性 （ｄ）抗Ｈｂモノクロナール抗体感作担体（ラテックス
）の調製法 精製抗Ｈｂモノクロナール抗体と担体（ラテックス粒子
）との結合は、物理的結合、あるし）は−般の化学的結
合により行なうことができる０次にその結合方法の具体
例を示す。

（イ）物理的方法 ポリスチレンラ・ンテクス粒子（日本合成ゴム■製、直
？１０．２２１　ｕｍ）の懸濁液を、０．１５Ｍ塩化ナ
トリウムを含む０．　１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐ）−１
８，０）で１０倍に稀釈し、この緩衝液で３度遠心洗浄
する。この沈澱を前記緩衝液で１％に調製した懸濁液と
する。これに抗Ｈｂモノクロナール抗体（０，６ｒｎｑ
／ｍβ）を添加し、室温で１時間攪拌した後、ラテック
スに結合しない余剰の抗体を遠心洗浄する。これに牛血
清アルブミン０．０１％を含有する０、１５Ｍ塩化ナト
リウム含何トリスー塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）を添加し
、１％ラテックス懸濁液に調製する。

（ロ）化学的方法 カルボキシル基を導入したポリスチレンラッテクス粒子
（日本合成ゴム■製、直径０．２６４ｕｍ）の１０％懸
濁液そＯ，ＩＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で］Ｏ
倍に稀釈する。この稀釈液に、抗Ｈｂモノクロナール抗
体（０，６ｍ　ｇ　／　ｍβ）とカップリング剤を順に
添加し、よ＜ａ押して共有結合させる。ラテックスに結
合しない余剰の抗体を遠心洗浄する。これに牛血清アル
ブミン０．０１％を含有する０、１５Ｍ塩化ナトリウム
含有トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）′Ｊ８添加し、
１％ラテックス懸濁液に調製する。

（ｅ）Ｈｂ感作担体（ラテックス粒子）の調製法 Ｈｔ）と担体（ラテックス粒子）との結合は、物理的、
あるいは一般の化学的結合により行なうことができる。

その結合方法は、前記（ｄ）抗Ｈｂモノクローナル抗体
感作担体（ラテックス）の調製法と同様に行なうことが
でき、そのときのＨｂＪ度は、（０，６ｍｑ／ｍβ）に
調製する。

く実施例１〉 スライド凝集板法による便中潜血の検出健康者の便１９
を０．１Ｍトリス−塩Ｍ緩衝液１０ｒｒ１７に懸濁し、
遠心分離機にかけ上清液を採取する。次に精製ヒトＨｂ
を前記上清液に添加し、７００ｕ９／ｒｎＩ！、５０ｕ
９／ｍＩ２．２５ｕｑ／ｍ！２．１０ｕｑ／ｍｕ、５ｕ
ｑ／ｍＩ２゜２．５ｕｑ／ｍβ、Ｏｕｑ／ｍβ濃度のサ
ンプルを各々調製する。これらの各濃度のサンプルの４
０ｕＩ！を、各々スライド凝集板上に滴下した復、前記
（ｄ）の（イ）で調製した抗Ｈｂモノクロナール抗体感
作うテ・ンクス２０ｕｆ２．及び前記（ｅ）で調製した
＋ｂ抗原感作ラうックスＴＯｕＩ２を追加して滴下し、
２分間ゆるやかに攪拌しながら観察する。

その結果、凝集像が鮮明に生じたのは、Ｏｕｑ／ｍｊ２
．２．５ｕｑ／ｍｕで、５　ＩＪ　９／ｍｊ２では凝集
像が弱くなり、１０　ｕ　ｑ／ｍβ以上では、はとんど
凝集像が１しなかった。

この結果から、感度は、５ｕ９／ｍＪ７　（５０Ｌ１９
／９（便））となり従来の化学的呈色反応による感度（
約６００ＯＬ１にｌ／９）と比較して非常に感度が良好
であると共に、抗Ｈｂモノクロナール抗体を使用してい
るため特異性が高く、共存物質の影響も受けない方法で
あることがわかる。

く実施例２〉 分光光度計を用いた便中潜血の検出（反応）０、ＩＭｌ
−リス−塩酸緩衝液１０００ｕＩ２に、実施例１で使用
したサンプルｖ！１ｏｏｕβ加え、これに前記（ｄ）の
（イ）で調製した抗Ｈｂモノク０ナール抗体感作ラテッ
クス４０μβ、及び前記（ｅ）で調製したＨｂ抗原感作
ラテックス４゜ＬＩρを加え、手早く混合した後、光路
長０．５ｍｍのセルに入れ、分光光度計（日立３２０型
）７ａ用い、波長７００ｎｍにあける、反応開始０．５
分〜１．５分間の吸光度を測定した。

その結果は第３表の通りであった。

第３表 便中ヒトＨｂ濃度と吸光度の変化 第３表に示される吸光度の減少から、便中ヒトＨｂ濃度
を、実施例１のスライド凝集法より、更に感度よく測定
することができる。

次に、抗ヒト・ヘモグロビンモノクローナル抗体以外の
例をあげる。

〈実施例３〉 スライド凝集板による血清中Ｃ反応性蛋白（以下０日Ｐ
という）の検出 （１）試薬 ■抗ＣＲＰモノクローナル抗体は、前記抗Ｈｌ）モノク
ローナル抗体と同様の方法で調製した。なお、免疫グロ
ブリンのクラスは、ｌ９Ｇ１であった。

■抗ＣＲＰモノクローナル抗体感作担体の調製は、前記
（ｄ）の（イ）の方法で行なった。

（３）　ＣＲＰ抗原感作担体の調製は、前記（ｅ）の方
法で行なった。

（２）操作 ＣＲＰフリーの血清に、腹水より精製したＣ日Ｐを添加
し、１０００ｎｑ／ｒｒｌ、５００ｎ９／ｍｃ　　２５
０ｎｇ／ｍｃ　　Ｉ　○Ｏｒ＋ｑ／ｍｃ　　５０　ｎ　
９／ｍβ、　　２５ｎ９／ｍｃ　　Ｏｎｑ／ｍｕＪ１度
のサンプルを各々調製する。これらの各Ｊ度のサンプル
４０ｕβを各々凝集板上に滴下した後、前記試薬■抗Ｃ
ＲＰモノクローナル抗体感作担体（ラテックス）２０ｕ
β、及び前記試薬■Ｃ日Ｐ抗原感作担体（ラテックス）
１０ｕβを追加して滴下し、２分間ゆるやか（と攪拌し
ながら観察する。

その結果、凝集像が鮮明に生じたのは、Ｏｎ　ｇ　／　
ｍβ、２５ｎ９／ｍβで、５０ｎｑ／ｍｊ２．では、凝
集像が弱くなり、１００ｎ９／ｍＩ２以上では、はとん
ど凝集像が生じなかった。

この結果から感度は、血清中５０　ｎ　ｇ　／　ｍβ（
５００ｎｑ／９　（便））となった。

〈実施例４〉 スライド凝集板による血清中α−フェトプロティン（以
下ＡＦＰという）の検出 （１）試薬 ■抗ハＦＰモノクローナル抗体は、前記抗Ｈｂモノクロ
ーナル抗体と同様の方法で調製した。なあ、免疫グロブ
リンのクラスは、ｌ９Ｇ１であった。

■抗ＡＦＰモノクローナル抗体感作担体の調製は、前記
（ｄ）の（イ）の方法で行なった。

■ＡＦＰ抗原感作担体（ラテックス）の調製は、前記（
ｅ）の方法で行なった。

（２）操作 ＡＦＰフリーの血清に、ｙｆＲ帯血より精製したＡＦＰ
を添加し、１０００　ｎ　ｑ　／　ｍβ、５００ｎ　９
　、／　ｍβ、２５Ｏｒ＋ｑ／ｍＩ２．１００ｎｑ／ｍ
ｐ、５０ｎｇ／ｍβ、２５ｒ＋ｑ／ｍｆｆ。

Ｏｎｑ／ｍｆｆＪ度のサンプルを各々調製する。これら
の各ＡＩＨのサンプル４０Ｌｌβを各々凝集板上に滴下
した後、前記試薬■抗ＡＦＰモノクローナル抗体感作担
体（ラテックス）２０ｕＣ及び前記試薬■ＡＦＰ抗原感
作担体（ラテックス）１０ＵＩ２Ｕ追加して清下し、２
分間ゆるやかに攪拌しながら観察する。

その結果、凝集像が鮭明に生したのは、Ｏｎ　９／ｍβ
、２５ｎ９／ｍβ、５０ｎ９／ｍβで、１１００ｎ／ｍ
！２では、凝集像が弱くなり、２５０ｎｇ／ｍＡ以上で
は、はとんど凝集像が生しなかった。

この結果から感度は、血清中１００ｎ９／ｍρ（１００
０ｎ９／ｑ　（便））となった。

〈発明の効果〉 以上のようにこの発明に係る特異モノクローナル抗体を
用いた生体成分の分析方法によれば、他１！の物質を含
む生体試料中の目的とする物質を高選択的、かつ高感度
で測定でき、特に、ヒト便中の像量の潜血を簡便、かつ
高感度で測定できるという効果を有する。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）次に示す（Ａ）、及び（Ｂ）成分を含有する溶液
   を混合して生ずる凝集反応と、前記（Ａ）、及び（Ｂ）
   成分に、更に次に示す（Ｃ）成分を含有する溶液を添加
   混合して生ずる凝集反応の両者の程度を比較測定するこ
   とを特徴とする特異モノクローナル抗体を用いた生体成
   分の分析方法。 （Ａ）測定対象である抗原と特異的に反応するモノクロ
   ーナル抗体感作担体 （Ｂ）測定対象である抗原と同一の抗原感作担体（Ｃ）
   測定対象である抗原
2. （２）特異モノクローナル抗体として、抗ヒト・ヘモグ
   ロビンモノクローナル抗体を用い、抗原としてヒト・ヘ
   モグロビンを用いる特許請求の範囲第１項記載の特異モ
   ノクローナル抗体を用いた生体成分の分析方法。
3. （３）便潜血を測定対象である抗原とする特許請求の範
   囲第２項記載の特異モノクローナル抗体を用いた生体成
   分の分析方法。