JPH02286088A - フォスフォリパーゼａ↓２阻害物質 - Google Patents
フォスフォリパーゼａ↓２阻害物質Info
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- JPH02286088A JPH02286088A JP1109939A JP10993989A JPH02286088A JP H02286088 A JPH02286088 A JP H02286088A JP 1109939 A JP1109939 A JP 1109939A JP 10993989 A JP10993989 A JP 10993989A JP H02286088 A JPH02286088 A JP H02286088A
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- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/78—Ring systems having three or more relevant rings
- C07D311/80—Dibenzopyrans; Hydrogenated dibenzopyrans
- C07D311/82—Xanthenes
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungi isolates
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
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- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
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- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、新規なフォスフォリパーゼＡ、阻害物質に関
し、さらに詳しくは、チェラビア・テリたはそのチエロ
シン産生性変異体を液中好気性条件下に培養することに
より産生されるフォスフォリパーゼＡ、阻害作用を有す
る生理活性物質に関するものである。その物質は、チエ
ロシンと命名され、通常、性状の似通ったα−およびβ
−異性体の混合物として得られる。また、本発明は、チ
エラビア・テリコーラＲＦ−１４３株またはそのチエロ
シン産生性変異体、並びに該菌株を培養することにより
チエロシンを製造する方法、並びに該チエロシンから分
離することによりα−およびβ−異性体を製造する方法
に関するものである。
し、さらに詳しくは、チェラビア・テリたはそのチエロ
シン産生性変異体を液中好気性条件下に培養することに
より産生されるフォスフォリパーゼＡ、阻害作用を有す
る生理活性物質に関するものである。その物質は、チエ
ロシンと命名され、通常、性状の似通ったα−およびβ
−異性体の混合物として得られる。また、本発明は、チ
エラビア・テリコーラＲＦ−１４３株またはそのチエロ
シン産生性変異体、並びに該菌株を培養することにより
チエロシンを製造する方法、並びに該チエロシンから分
離することによりα−およびβ−異性体を製造する方法
に関するものである。
［従来技術と発明が解決すべき課題］
フォスフォリパーゼＡ！は多くの生物の細胞や分泌液に
含有されており、燐含有脂質に特異的に作用するエステ
ラーゼであって、、２−ジアシルグリセロリン脂質のｃ
−２位の脂肪酸エステルを特異的に加水分解し、リゾグ
リセロリン脂質と脂肪酸とを生成することが知られてい
る。その酵素活性に関連して、神経、筋肉、心臓への毒
性作用、抗凝固作用を有し、痙牽、低血圧、溶血、出血
、浮腫などを誘発し得ることが指摘されており、その他
の疾患にも直接または間接的に関与している可能性があ
る。したがって、フォスフォリパーゼＡ、の酵素活性に
対する阻害物質が得られれば、該酵素の作用に起因また
は関連する様々な病態を制限し、治療することができる
と考えられる。従来知られているフォスフォリパーゼＡ
、阻害物質には、メパクリン、ｐ−ブロモフェナシルプ
ロミドなどがあるが、新たな有効物質が待たれている。
含有されており、燐含有脂質に特異的に作用するエステ
ラーゼであって、、２−ジアシルグリセロリン脂質のｃ
−２位の脂肪酸エステルを特異的に加水分解し、リゾグ
リセロリン脂質と脂肪酸とを生成することが知られてい
る。その酵素活性に関連して、神経、筋肉、心臓への毒
性作用、抗凝固作用を有し、痙牽、低血圧、溶血、出血
、浮腫などを誘発し得ることが指摘されており、その他
の疾患にも直接または間接的に関与している可能性があ
る。したがって、フォスフォリパーゼＡ、の酵素活性に
対する阻害物質が得られれば、該酵素の作用に起因また
は関連する様々な病態を制限し、治療することができる
と考えられる。従来知られているフォスフォリパーゼＡ
、阻害物質には、メパクリン、ｐ−ブロモフェナシルプ
ロミドなどがあるが、新たな有効物質が待たれている。
［課題を解決する手段］
本発明は、カビの一種である、チエラビア・テリコーラ
ＲＦ−１４３株を培養することにより産生され得る、フ
ォスフォリパーゼＡ、阻害作用を有する生理活性物質チ
エロシンを提供するものである。上記菌株によって産生
されるチエロシンは、αおよびβの各異性体の混合物で
ある。これらの異性体は薄層クロマトグラフィー（ＴＬ
Ｃ）では分離されないが、高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）では分離される物質であって、溶液中で相
互変換する。その変換速度は溶媒によって異なっており
、一方のみを含有する溶液中で両者が平衡に達する時間
、即ち混合比がｌ：ｌになるのに要する時間は、例えば
、ジメチルスルホキシド中では比較的早（、室温で約３
時間であり、クロロホルムや酢酸エチル中では比較的遅
い。また、ｐＨ７，０〜７．５の水溶液中では極めて速
やかにα；β−９：ｌ〜８：２の平衡混合物になる。α
−およびβ−異性体の性状は殆んど同様であるが、融点
、溶解性、赤外吸収（ＩＲ）スペクトル、１ＨＮＭＲ（
核磁気共鳴スペクトル）、”ＣＮＭＨにおいて異ってい
る。
ＲＦ−１４３株を培養することにより産生され得る、フ
ォスフォリパーゼＡ、阻害作用を有する生理活性物質チ
エロシンを提供するものである。上記菌株によって産生
されるチエロシンは、αおよびβの各異性体の混合物で
ある。これらの異性体は薄層クロマトグラフィー（ＴＬ
Ｃ）では分離されないが、高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）では分離される物質であって、溶液中で相
互変換する。その変換速度は溶媒によって異なっており
、一方のみを含有する溶液中で両者が平衡に達する時間
、即ち混合比がｌ：ｌになるのに要する時間は、例えば
、ジメチルスルホキシド中では比較的早（、室温で約３
時間であり、クロロホルムや酢酸エチル中では比較的遅
い。また、ｐＨ７，０〜７．５の水溶液中では極めて速
やかにα；β−９：ｌ〜８：２の平衡混合物になる。α
−およびβ−異性体の性状は殆んど同様であるが、融点
、溶解性、赤外吸収（ＩＲ）スペクトル、１ＨＮＭＲ（
核磁気共鳴スペクトル）、”ＣＮＭＨにおいて異ってい
る。
以下に各異性体の性状を示す。
チエロシンα
（１）分子式：Ｃ，４Ｈ，。Ｏｌ、（分子量９９６）（
２）Ｓ Ｉ −ＭＳ ：ｍ／ｚ９９７（Ｍ＋１）く３）
酸性、融点１９０〜１９４℃の無色粉末（４）溶解性ニ
ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、クロロホルム
、酢酸エチル、アセトンに可溶、メタノール、エタノー
ルに僅かに可溶、エチルエーテル、ヘキサン、石油エー
テル、水に難溶または不溶 （５）赤外吸収スベク、トル（臭化カリウム錠）：３５
６０〜３４４０．２９５０．１７４０〜１６７５．１５
７５．１４６０．１３２５．１２７５．１１５０．１０
９５．１０７０．９８５（ＣＩ−つ（第２図（ａ）参照
） （６）紫外吸収スペクトル（ＭｅＯＨ） ：末端吸収お
よび２４５ｎｍ（肩）、２７５ ｎａ＋（肩）（７）Ｃ
Ｄ（ＣＨＣ１２３）： ２３０〜３００ｎｉで殆どゼロ （８）ＮＭＲ：下記の表１参照。
２）Ｓ Ｉ −ＭＳ ：ｍ／ｚ９９７（Ｍ＋１）く３）
酸性、融点１９０〜１９４℃の無色粉末（４）溶解性ニ
ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、クロロホルム
、酢酸エチル、アセトンに可溶、メタノール、エタノー
ルに僅かに可溶、エチルエーテル、ヘキサン、石油エー
テル、水に難溶または不溶 （５）赤外吸収スベク、トル（臭化カリウム錠）：３５
６０〜３４４０．２９５０．１７４０〜１６７５．１５
７５．１４６０．１３２５．１２７５．１１５０．１０
９５．１０７０．９８５（ＣＩ−つ（第２図（ａ）参照
） （６）紫外吸収スペクトル（ＭｅＯＨ） ：末端吸収お
よび２４５ｎｍ（肩）、２７５ ｎａ＋（肩）（７）Ｃ
Ｄ（ＣＨＣ１２３）： ２３０〜３００ｎｉで殆どゼロ （８）ＮＭＲ：下記の表１参照。
ｉ玉兄乞ヱＩ
（１）分子式： ＣＳ４Ｈｓｏｏ １ｓ（分子１１９９
６）（２） ｓ Ｉ −ＭＳ ： ａ／ｚ９９７ （Ｍ
＋ １）（３）酸性、融点２４４〜２４７℃の無色粉末
（４）溶解性ニジメチルスルホキシドに可溶、アセトニ
トリル、クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、メタノ
ール、エタノールに僅かに可溶、エチルエーテル、ヘキ
サン、石油エーテル、水に難溶または不溶 （５）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム錠）：３４９
０．２９５０．１７４０〜１６７５．１５７７．１４６
０．１３２５．１２７２．１２２２．１１５５．１０９
５．１０７５．１０５０．９８５ （ＣＪＩ−つ（第２
図（ｂ）参照）（６）紫外吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）
：末端吸収および２４５ ｎｍ（肩）、２７５ ｎｍ（
Ｐ１）（７）ＣＤ（ｃ： ０．０７８２、ＣＨＣ（２３
）：［θ］、、。０、［θ］、、、−３００、［θ］２
．。、、−１ＩＯ１［θ］ ２７７．５−２３０、［θ
］ 、、、０（８）ＮＭＲ：下記の表１参照。
６）（２） ｓ Ｉ −ＭＳ ： ａ／ｚ９９７ （Ｍ
＋ １）（３）酸性、融点２４４〜２４７℃の無色粉末
（４）溶解性ニジメチルスルホキシドに可溶、アセトニ
トリル、クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、メタノ
ール、エタノールに僅かに可溶、エチルエーテル、ヘキ
サン、石油エーテル、水に難溶または不溶 （５）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム錠）：３４９
０．２９５０．１７４０〜１６７５．１５７７．１４６
０．１３２５．１２７２．１２２２．１１５５．１０９
５．１０７５．１０５０．９８５ （ＣＪＩ−つ（第２
図（ｂ）参照）（６）紫外吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）
：末端吸収および２４５ ｎｍ（肩）、２７５ ｎｍ（
Ｐ１）（７）ＣＤ（ｃ： ０．０７８２、ＣＨＣ（２３
）：［θ］、、。０、［θ］、、、−３００、［θ］２
．。、、−１ＩＯ１［θ］ ２７７．５−２３０、［θ
］ 、、、０（８）ＮＭＲ：下記の表１参照。
チエロシンαおよびチエロシンβのＮＭＲ測定結果を以
下の表１に示す。測定条件：溶媒、ＣＤＣｌ２．、−Ｃ
Ｄ３ＯＤ（２０： １）、温度、２４℃、内部基準ＴＭ
Ｓ ｆｉｔ チエロシンαおよびβの１ＨＮＭＲおよび１
３ＣＮＭＲ測定値の比較 α−異性体（約４５ｚ９１０．６ｘ（１） β−
異性体（飽和溶液）烏ＨＮＭＲデータ δ（多重度、プロトン数） １ＨＮＭＲデータ δ（多重度、プロトン数） 、５１９（ｓ、 ３１１） １、７５２（ｓ、 ３１り ２、１３４（ｓ、 ３１１） ２、１９２（ｓ、 ３１１） ２、２０９（ｓ、 ３１１） ２、２１７（ｓ、 ３Ｂ） ２．２４ （ｓｘ２，６ｆ１） ２、２４８（ｓ、 ３１［） ２．２８２（８×２、６Ｈ） ２、３４３（ｓ、 ３Ｈ） ２、３７０（ｓ、 ３１１） ２、３９６（ｓ、 ３ｆ１） ２、７２０（ｄ（Ｊ・１６）、 １Ｈ）３．３８０（ｄ
（Ｊ・１６）、 １１）３、７７５（ｓ、 ：（Ｅ１） ３、８０９（ｓ、 ３Ｂ） ３、８２１（ｓ×２、６１０ １３ＣＮＭＲデータ δ（多重度、炭素数） １、３３０（ｓ、 ３１［） １、８９０（ｓ、 ３１１） ２、２３３（ｓ、 ３ｆ１） ２、２３８（ｓ、 ａｌ１） ２、２６４（ｓ、 ３１［） ２、２６９（Ｓ×２、６１１） ２、２７４（ｓ、 ３＋１） ２、２９５（ｓ×２、６Ｈ） ２、３２２（ｓ×２、６Ｈ） ２、３９６（ｓ、 ３ｆ１） ２、４０６（ｓ、 ３８） ２、７４２（ｄ（Ｊ＝１６）、 １１１）３、３００（
ｄ（Ｊ＝１６）、 １１）３、８３３（ＳＸ３．９１１
） ３、３４８（ｓ、 ３８） ”ＣＮＭＲデータ δ（多重度、炭素数） ９、２５（ｑ、 １） １０、１９（ｑ×２、２） １０、５２（ｑ、 ｔ） １３、０１（Ｑ×２、２） １３、２３（ｑ、 １） １５、７７（ｑ、 １） １６、０９（Ｑ、 １） １６、７９（Ｑ×２、２） １７、２８（４，１） ２２、６１（Ｑ、 １） ２３、２８（Ｑ、 １） ２８、８４（ｔ、 １） ４９、５２（ｓ、 １） ６２、０１（ｑ×２、２） ６２、０６（ｑ×２、２） ７６、１８（ｓ、 １） １００、０５（ｓ、 １） １１６、８２（ｓ、 １） １１６、９１（ｓ、 １） １２１、３７（ｓ、 １） ９、１４（ｑ、 １） １０、２３（Ｑ×２、２） １０、５８（Ｑ、 １） １（、０５（ｑ×２、２） Ｌ（、２９（ｑ、 １） １５、８２（Ｑ、 １） １６、４３（Ｑ、 １） ｌａ、 ８０（ｑ×２、２） １７、３３（Ｑ、 １） ２２、 ａ３（ｑ、 １） ２２、６７（４，１） ３０、１１（ｔ、 １） ４６、７３（ｓ、 １） ６２、００（ＱＸ３．３） ６２、０９（Ｑ、 １） ７４、５９（ｓ、 １） ９７、９９（ｓ、 １） １１５、９８（ｓ、 １） １１７、１８（ｓ、 １） １２１、２０（ｓ、 １） １２１、８０（ｓ、 １） １２１、８３（ｓ、 １） １２２、１８（ｓ、 １） １２５、５３（ｓ×２、２） １２５、９２（ｓ、 １） １２６、２４（ｓ、 １） １２７、８４（ｓ、 １） ！２７．９Ｊ（ｓ、 １） １２８、７１（ｓ、 １） １３２、１５（ｓ、 １） １３２、１９（ｓ、 １） １３２、５８（ｓ、 １） １３３、３２（ｓ、 １） １４８、８６（ｓ、 １） １４９、０４（ｓ、 １） １４９、２３（ｓ、 １） １５０、４１（ｓ、 １） １５２、９１（ｓ×２、２） １５４、０３（ｓ、 １） １５４、６２（ｓ、 １） １２１、８３（８に２．２） １２２、２９（ｓ、 り １２５、５５（ｓ×２、２） １２６、０１（ｓ、 １） １２６、２７（ｓ、 り １２７、８５（ｓ、 １） １２７、９３（ｓ、 １） １２９、５４（ｓ、 １） １３２、１５（ｓ、 １） ｌａ３．２２（ｓ、 １） １３３、３３（ｓ、 １） １３３、４５（ｓ、 １） １４８、８９（ｓ、 １） １４９、０７（ｓ、 １） １４９、３７（ｓ、 １） １５０、４５（ｓ、 １） １５２、９２（ｓ×２、２） １５４、０６（ｓ、 １） １５４、８０（ｓ、 １） １５８、７３’（ｓ、 １） １６０、４４（ｓ、 １） １Ｈ，９９
（ｓ、 １）１６３．８４（ｓ、 １）
■６６、３５（ｓ、 １）１６６、３１（ｓ、 １
） １６６、７５（ｓ、 １）１６６、
６３（ｓ、 １） １７０．４２（ｓ
×２、２）１７０、５０（ｓ×２、２）
１９６．３０（ｓ、 １）１９４、５２（ｓ、 １） （ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線。
下の表１に示す。測定条件：溶媒、ＣＤＣｌ２．、−Ｃ
Ｄ３ＯＤ（２０： １）、温度、２４℃、内部基準ＴＭ
Ｓ ｆｉｔ チエロシンαおよびβの１ＨＮＭＲおよび１
３ＣＮＭＲ測定値の比較 α−異性体（約４５ｚ９１０．６ｘ（１） β−
異性体（飽和溶液）烏ＨＮＭＲデータ δ（多重度、プロトン数） １ＨＮＭＲデータ δ（多重度、プロトン数） 、５１９（ｓ、 ３１１） １、７５２（ｓ、 ３１り ２、１３４（ｓ、 ３１１） ２、１９２（ｓ、 ３１１） ２、２０９（ｓ、 ３１１） ２、２１７（ｓ、 ３Ｂ） ２．２４ （ｓｘ２，６ｆ１） ２、２４８（ｓ、 ３１［） ２．２８２（８×２、６Ｈ） ２、３４３（ｓ、 ３Ｈ） ２、３７０（ｓ、 ３１１） ２、３９６（ｓ、 ３ｆ１） ２、７２０（ｄ（Ｊ・１６）、 １Ｈ）３．３８０（ｄ
（Ｊ・１６）、 １１）３、７７５（ｓ、 ：（Ｅ１） ３、８０９（ｓ、 ３Ｂ） ３、８２１（ｓ×２、６１０ １３ＣＮＭＲデータ δ（多重度、炭素数） １、３３０（ｓ、 ３１［） １、８９０（ｓ、 ３１１） ２、２３３（ｓ、 ３ｆ１） ２、２３８（ｓ、 ａｌ１） ２、２６４（ｓ、 ３１［） ２、２６９（Ｓ×２、６１１） ２、２７４（ｓ、 ３＋１） ２、２９５（ｓ×２、６Ｈ） ２、３２２（ｓ×２、６Ｈ） ２、３９６（ｓ、 ３ｆ１） ２、４０６（ｓ、 ３８） ２、７４２（ｄ（Ｊ＝１６）、 １１１）３、３００（
ｄ（Ｊ＝１６）、 １１）３、８３３（ＳＸ３．９１１
） ３、３４８（ｓ、 ３８） ”ＣＮＭＲデータ δ（多重度、炭素数） ９、２５（ｑ、 １） １０、１９（ｑ×２、２） １０、５２（ｑ、 ｔ） １３、０１（Ｑ×２、２） １３、２３（ｑ、 １） １５、７７（ｑ、 １） １６、０９（Ｑ、 １） １６、７９（Ｑ×２、２） １７、２８（４，１） ２２、６１（Ｑ、 １） ２３、２８（Ｑ、 １） ２８、８４（ｔ、 １） ４９、５２（ｓ、 １） ６２、０１（ｑ×２、２） ６２、０６（ｑ×２、２） ７６、１８（ｓ、 １） １００、０５（ｓ、 １） １１６、８２（ｓ、 １） １１６、９１（ｓ、 １） １２１、３７（ｓ、 １） ９、１４（ｑ、 １） １０、２３（Ｑ×２、２） １０、５８（Ｑ、 １） １（、０５（ｑ×２、２） Ｌ（、２９（ｑ、 １） １５、８２（Ｑ、 １） １６、４３（Ｑ、 １） ｌａ、 ８０（ｑ×２、２） １７、３３（Ｑ、 １） ２２、 ａ３（ｑ、 １） ２２、６７（４，１） ３０、１１（ｔ、 １） ４６、７３（ｓ、 １） ６２、００（ＱＸ３．３） ６２、０９（Ｑ、 １） ７４、５９（ｓ、 １） ９７、９９（ｓ、 １） １１５、９８（ｓ、 １） １１７、１８（ｓ、 １） １２１、２０（ｓ、 １） １２１、８０（ｓ、 １） １２１、８３（ｓ、 １） １２２、１８（ｓ、 １） １２５、５３（ｓ×２、２） １２５、９２（ｓ、 １） １２６、２４（ｓ、 １） １２７、８４（ｓ、 １） ！２７．９Ｊ（ｓ、 １） １２８、７１（ｓ、 １） １３２、１５（ｓ、 １） １３２、１９（ｓ、 １） １３２、５８（ｓ、 １） １３３、３２（ｓ、 １） １４８、８６（ｓ、 １） １４９、０４（ｓ、 １） １４９、２３（ｓ、 １） １５０、４１（ｓ、 １） １５２、９１（ｓ×２、２） １５４、０３（ｓ、 １） １５４、６２（ｓ、 １） １２１、８３（８に２．２） １２２、２９（ｓ、 り １２５、５５（ｓ×２、２） １２６、０１（ｓ、 １） １２６、２７（ｓ、 り １２７、８５（ｓ、 １） １２７、９３（ｓ、 １） １２９、５４（ｓ、 １） １３２、１５（ｓ、 １） ｌａ３．２２（ｓ、 １） １３３、３３（ｓ、 １） １３３、４５（ｓ、 １） １４８、８９（ｓ、 １） １４９、０７（ｓ、 １） １４９、３７（ｓ、 １） １５０、４５（ｓ、 １） １５２、９２（ｓ×２、２） １５４、０６（ｓ、 １） １５４、８０（ｓ、 １） １５８、７３’（ｓ、 １） １６０、４４（ｓ、 １） １Ｈ，９９
（ｓ、 １）１６３．８４（ｓ、 １）
■６６、３５（ｓ、 １）１６６、３１（ｓ、 １
） １６６、７５（ｓ、 １）１６６、
６３（ｓ、 １） １７０．４２（ｓ
×２、２）１７０、５０（ｓ×２、２）
１９６．３０（ｓ、 １）１９４、５２（ｓ、 １） （ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線。
Ｊニスピン結合定数）
上記のＮＭＲデータから、α−異性体およびβ異性体の
いずれも、交換性プロトンを除いては、メチル基１８個
（うち４個はメトキシ基）、メチレン基１個に由来する
５６個のプロトンの存在することが示された。
いずれも、交換性プロトンを除いては、メチル基１８個
（うち４個はメトキシ基）、メチレン基１個に由来する
５６個のプロトンの存在することが示された。
１３Ｃデータからは、α−異性体、β−異性体ともに上
記のメチル基１８個、メチレン基１個のほかに四級炭素
（３５個分）の存在が示され、炭素総数は５４個の物質
と推定される。
記のメチル基１８個、メチレン基１個のほかに四級炭素
（３５個分）の存在が示され、炭素総数は５４個の物質
と推定される。
上記のごとく、αおよびβ異性体は幾分異なった性状を
有するがその生理学的作用においては全く同様と考えら
れ、本発明の目的を達成する上で、これらを分離するこ
とは必須ではない。従って、本明細書中においては、チ
エロシンというときは各異性体を区別することなく混合
物を指すものとする。
有するがその生理学的作用においては全く同様と考えら
れ、本発明の目的を達成する上で、これらを分離するこ
とは必須ではない。従って、本明細書中においては、チ
エロシンというときは各異性体を区別することなく混合
物を指すものとする。
本発明はまた、フォスフォリパーゼＡ、阻害物質チエロ
シン産生性のチエラビア・テリコーラＲＦ−１４３株を
提供するものである。この菌株は、通商産業省工業技術
院微生物工業技術研究所に、受託番号微工研条寄第２１
９６号の下で寄託されている（寄託日：昭和６３年１２
月１９日）。
シン産生性のチエラビア・テリコーラＲＦ−１４３株を
提供するものである。この菌株は、通商産業省工業技術
院微生物工業技術研究所に、受託番号微工研条寄第２１
９６号の下で寄託されている（寄託日：昭和６３年１２
月１９日）。
本発明にかかるチエラビア・テリコーラＲＦ−１４３の
菌学的性状は以下の通りである。
菌学的性状は以下の通りである。
ＲＦ−１４３株の栄養菌糸はフーンミール寒天上で肉眼
的に白色を呈する。子のう果（ａｓｃｏｃａｒｐ）は寒
天培地の表面に形成され、その形は球形で茶黒色を呈す
る。その大きさは直径１００〜３００Ｂｍで、外壁の表
面粗１１（ｔｅｘｕｔｒａ ｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄｅａ
）は茶色である。子のうは３０〜３５Ｘ１５〜１７μ履
の大きさで、洋ナシ形を示し、その中に８個の子のう胞
子を有する。子のうは成熟時には溶解する。子のう胞子
は幅の広い紡錘形をしており、オリーブ色から茶灰色を
呈し、その一端に１個の発芽孔を有する。子のう胞子の
大きさは１２〜１８Ｘ６〜８μｌである。本田の不完全
世代は認められない。
的に白色を呈する。子のう果（ａｓｃｏｃａｒｐ）は寒
天培地の表面に形成され、その形は球形で茶黒色を呈す
る。その大きさは直径１００〜３００Ｂｍで、外壁の表
面粗１１（ｔｅｘｕｔｒａ ｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄｅａ
）は茶色である。子のうは３０〜３５Ｘ１５〜１７μ履
の大きさで、洋ナシ形を示し、その中に８個の子のう胞
子を有する。子のうは成熟時には溶解する。子のう胞子
は幅の広い紡錘形をしており、オリーブ色から茶灰色を
呈し、その一端に１個の発芽孔を有する。子のう胞子の
大きさは１２〜１８Ｘ６〜８μｌである。本田の不完全
世代は認められない。
以上の性状からＲＦ−１４３株はチェラビアテリコーラ
（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒｒｉｃｏｌａ”）と同定
された。
（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒｒｉｃｏｌａ”）と同定
された。
参考文献
１） シー・ダブり１−・エモンズ（Ｃ０ｆ、 Ｅｍａ
。
。
ｎｓ）、Ｂｕｌｌ、 Ｔｏｒｒｅｙ Ｂｏｔ、 Ｃ１ｕ
ｂ ５７．１２４２） ジー・ドゲット（Ｇ、 Ｄｏ
ｇｕｅｔ）、Ｒｅｖ、 Ｍｙｃｏｌ。
ｂ ５７．１２４２） ジー・ドゲット（Ｇ、 Ｄｏ
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２１、５ｕｐｐ、 Ｃｏ１ｏｎｉａｌ ｌ、 ２（１９
５６）３） シー・ブース（Ｃ０Ｂｏｏｔｈ）、Ｍｙｃ
ｏｌ、 Ｐａｐ８３、７（１９６１） ４） ニス・ウダガワ（Ｓ、 Ｕｄａｇａｗａ）、Ｔｒ
ａｎｓ。
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Ｍｙｃｏｌ、 Ｓｏｃ、 Ｊａｐ、 ４．９９（１９６
３）５） ジェイ・ニー・ボン・アークス（Ｊ、＾、
ｖａｎＡｒｘ）、５ｔｕｄ、 １Ｊｙｃｏｌ、 ８．８
（１９７５）チエラビア・テリコーラも菌類の特徴とし
て、突然変異を起こす可能性がある。そのような突然変
異体は、自然発生的にも出現するが、当業者周知の物理
的または化学的な方法で容易に誘導することができる。
３）５） ジェイ・ニー・ボン・アークス（Ｊ、＾、
ｖａｎＡｒｘ）、５ｔｕｄ、 １Ｊｙｃｏｌ、 ８．８
（１９７５）チエラビア・テリコーラも菌類の特徴とし
て、突然変異を起こす可能性がある。そのような突然変
異体は、自然発生的にも出現するが、当業者周知の物理
的または化学的な方法で容易に誘導することができる。
従って、充分量のフォスフォリパーゼＡ、を産生する能
力を保持しているチエラビア・テリコーラＲＦ−１４３
の変異体もまた本発明の範囲に包含されるということが
当業者には理解されるであろう。
力を保持しているチエラビア・テリコーラＲＦ−１４３
の変異体もまた本発明の範囲に包含されるということが
当業者には理解されるであろう。
チエラビア・テリコーラＲＦ−１４３の培養には、通常
の培養法を利用することができる。適当な炭素源、窒素
源、無機塩、および微量金属等の存在下、好気性条件下
で液中培養することが好ましい。通常、チエラビア・テ
リコーラＲＦ−１４３を温度約２０〜４０℃、好ましく
は２８℃で通気しながら振盪フラスコ培養すると、約１
−１０日間培養すればよい。次いで、培養物からの生成
物の分離における当業者既知の方法でチエロシンを分離
すればよい。即ち、培養物を濾過して濾液および沈殿（
菌体成分）をそれぞれ適当な溶媒で抽出し、得られた抽
出液を濃縮して溶媒抽出、クロマトグラフィー処理等に
よって活性物質を単離する。次いで、所望によりαおよ
びβ異性体を分離する。
の培養法を利用することができる。適当な炭素源、窒素
源、無機塩、および微量金属等の存在下、好気性条件下
で液中培養することが好ましい。通常、チエラビア・テ
リコーラＲＦ−１４３を温度約２０〜４０℃、好ましく
は２８℃で通気しながら振盪フラスコ培養すると、約１
−１０日間培養すればよい。次いで、培養物からの生成
物の分離における当業者既知の方法でチエロシンを分離
すればよい。即ち、培養物を濾過して濾液および沈殿（
菌体成分）をそれぞれ適当な溶媒で抽出し、得られた抽
出液を濃縮して溶媒抽出、クロマトグラフィー処理等に
よって活性物質を単離する。次いで、所望によりαおよ
びβ異性体を分離する。
本発明のチエロシンの５０％阻害濃度（活性を５０％阻
害する濃度）は、ブタ膵臓由来の７オスフオリパーゼＡ
、に対しては４７μ９／Ｒ１２、蛇毒由来のフォスフォ
リパーゼＡ、に対しては１０μｇ／ＪＩＱ、ラット血小
板由来のフォスフォリパーゼＡ、に対しては０．００５
μ９／ｘ（ｌである。従って、本発明のチエロシンは、
フォスフォリパーゼＡ、の酵素活性に起因する様々な疾
患の予防および治療に有用と考えられる。
害する濃度）は、ブタ膵臓由来の７オスフオリパーゼＡ
、に対しては４７μ９／Ｒ１２、蛇毒由来のフォスフォ
リパーゼＡ、に対しては１０μｇ／ＪＩＱ、ラット血小
板由来のフォスフォリパーゼＡ、に対しては０．００５
μ９／ｘ（ｌである。従って、本発明のチエロシンは、
フォスフォリパーゼＡ、の酵素活性に起因する様々な疾
患の予防および治療に有用と考えられる。
以下に実施例を挙げ、本発明の詳細な説明する。
火梅輿１
１）発酵
チエラビア・テリコーラＲＦ−１４３株をバレイシジブ
ドウ糖寒天斜面で７〜ｌＯ日間、２８℃で培養し、−斜
面の全菌体および胞子を２ｇ容量のエルシンマイヤーフ
ラスコ中の培地８００１１Ｉｉ２（培地組成ニブドウ糖
２．０％、ポリペプトン、０％、肉エキス０．３％、酵
母エキス０．２％、食塩０１％、ｐＨ７，０）に植菌し
た。植菌されたフラスコを２８℃で２日間振盪培養した
。上記培養液（８００ｊｌｆｆ）を２０１２の上記組成
の培地を含む３０Ｉ２のジャー・ファーメンタ−に加え
、２８℃で１日間、通気撹拌培養を行った（通気量２０
Ｑ／分、撹拌１５０ ｒｐｍ）。次に上記の培養液６ｇ
をバレイショ浸出液（２００ｙ／のおよびショ糖（２０
ｇ／の組成の培地（ｐＨ無修正） ｌ ５０（を含む２
５０Ｑ発酵タンクに移した。発酵は、２８℃で、開始時
から１６時間までは２０ｒ陣、その後は３７０ ｒｐＩ
ｌｌで撹拌し、通気量は１５０ｆｆ／分（１，ＯＶＶＭ
）で７日間通気撹拌培養を行った。
ドウ糖寒天斜面で７〜ｌＯ日間、２８℃で培養し、−斜
面の全菌体および胞子を２ｇ容量のエルシンマイヤーフ
ラスコ中の培地８００１１Ｉｉ２（培地組成ニブドウ糖
２．０％、ポリペプトン、０％、肉エキス０．３％、酵
母エキス０．２％、食塩０１％、ｐＨ７，０）に植菌し
た。植菌されたフラスコを２８℃で２日間振盪培養した
。上記培養液（８００ｊｌｆｆ）を２０１２の上記組成
の培地を含む３０Ｉ２のジャー・ファーメンタ−に加え
、２８℃で１日間、通気撹拌培養を行った（通気量２０
Ｑ／分、撹拌１５０ ｒｐｍ）。次に上記の培養液６ｇ
をバレイショ浸出液（２００ｙ／のおよびショ糖（２０
ｇ／の組成の培地（ｐＨ無修正） ｌ ５０（を含む２
５０Ｑ発酵タンクに移した。発酵は、２８℃で、開始時
から１６時間までは２０ｒ陣、その後は３７０ ｒｐＩ
ｌｌで撹拌し、通気量は１５０ｆｆ／分（１，ＯＶＶＭ
）で７日間通気撹拌培養を行った。
２）単離
人−粗辿損
上記１）で得られた発酵液１４６ｇを稀塩酸でｐＨ３，
０に調整し、ろ過した。ろ液を更にｐＨ２゜５に調整し
た後、食塩７＆９を加え、酢酸エチル３６Ｑで抽出した
。菌体部分を８０％アセトン１８Ｃで２回抽出、抽出液
を合わせた後、アセトンを留去して７ａまで濃縮した。
０に調整し、ろ過した。ろ液を更にｐＨ２゜５に調整し
た後、食塩７＆９を加え、酢酸エチル３６Ｑで抽出した
。菌体部分を８０％アセトン１８Ｃで２回抽出、抽出液
を合わせた後、アセトンを留去して７ａまで濃縮した。
これに水６ｇを加えた後、ｐＨ２，５において酢酸エチ
ル１８＆で抽出した。
ル１８＆で抽出した。
ろ液および菌体からの酢酸エチル抽出液を合わせて、減
圧下約１５１２まで濃縮した。この濃縮液から活性物質
をｐＨ８，１（稀重曽液便用）の水１８Ｑで３回抽出し
た。この抽出液を合わせ、活性物質を再びｐＨ２，５で
酢酸エチル２０＆で抽出した。
圧下約１５１２まで濃縮した。この濃縮液から活性物質
をｐＨ８，１（稀重曽液便用）の水１８Ｑで３回抽出し
た。この抽出液を合わせ、活性物質を再びｐＨ２，５で
酢酸エチル２０＆で抽出した。
酢酸エチル抽出液を水６Ｑで洗浄後、減圧下濃縮乾固し
、活性物質を含む粗粉末８２９を得た。
、活性物質を含む粗粉末８２９を得た。
Ｂ、精製ｌ
上記Ａ、で得た粗粉末８２ｙを９０％アセトン４００！
１１２に溶解し、種水酸化ナトリウムでｐＨ８，０に調
整した後、水、２Ｑを加丸た。生成した沈澱をろ別し、
ろ液をＨＰ−２０（三菱化成）のカラム（５ｅ）にかけ
た。カラムをアセトン−２０ｍＭ、 リン酸緩衝液ｐＨ
７，５（１： ９）とアセトンを用いる濃度勾配溶出法
により溶出した。活性のある分画を集め、減圧下アセト
ンを留去し、更に水を加えて水性溶液とした後、ｐＨ２
，０で酢酸エチルで抽出し、抽出液を水洗後、減圧下濃
縮乾固し、石油エーテルで洗浄し、前よりも活性の高い
粗粉末２９ｇを得た。
１１２に溶解し、種水酸化ナトリウムでｐＨ８，０に調
整した後、水、２Ｑを加丸た。生成した沈澱をろ別し、
ろ液をＨＰ−２０（三菱化成）のカラム（５ｅ）にかけ
た。カラムをアセトン−２０ｍＭ、 リン酸緩衝液ｐＨ
７，５（１： ９）とアセトンを用いる濃度勾配溶出法
により溶出した。活性のある分画を集め、減圧下アセト
ンを留去し、更に水を加えて水性溶液とした後、ｐＨ２
，０で酢酸エチルで抽出し、抽出液を水洗後、減圧下濃
縮乾固し、石油エーテルで洗浄し、前よりも活性の高い
粗粉末２９ｇを得た。
ｑ−精製２
上記（精！２１）の粗粉末１５９をアセトン４Ｍに溶解
し２０ａ＋Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，５，１３ａｘｅを
加えた。この溶液をＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化成）のカラ
ム（５Ｘ ４２ｃｍ＞にかけ、カラムをアセトン−２０
１１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，５（１： ９）で洗浄し
た後、この溶媒と純アセトンとの間の濃度勾配溶出法に
より溶出した。アセトン濃度約５０〜６０％の所に溶出
される活性な溶出分画を集め、稀リン酸でｐＨ３，５に
調整すると褐色の沈澱が生成した。この沈澱をろ取し、
メタノール４０ｊＩＱに溶解し、シリカゲル（メルク社
製）のカラム（４，６Ｘ３０ＣＩ）にかけた。カラムを
クロロホルム−メタノール−水（６２： ２５ ： ４
）の溶媒で溶出し、活性な溶出分画（約２００１１２）
を得た。これを約２０村まで濃縮した後、ヌクレオシル
６Ｃ１８カラム（２，Ｏｘ ２０ｃｊ＋）（マーチェリ
イ・ナーゲル社製）とアセトニトリル−０，１％ＩＪ
／酸（５７：４３）を用いる高速液体クロマトグラフィ
ーにより精製した。チエロシンαおよびβのピークを各
々分取し、分取液を濃縮後、酢酸エチルで抽出した。
し２０ａ＋Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，５，１３ａｘｅを
加えた。この溶液をＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化成）のカラ
ム（５Ｘ ４２ｃｍ＞にかけ、カラムをアセトン−２０
１１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，５（１： ９）で洗浄し
た後、この溶媒と純アセトンとの間の濃度勾配溶出法に
より溶出した。アセトン濃度約５０〜６０％の所に溶出
される活性な溶出分画を集め、稀リン酸でｐＨ３，５に
調整すると褐色の沈澱が生成した。この沈澱をろ取し、
メタノール４０ｊＩＱに溶解し、シリカゲル（メルク社
製）のカラム（４，６Ｘ３０ＣＩ）にかけた。カラムを
クロロホルム−メタノール−水（６２： ２５ ： ４
）の溶媒で溶出し、活性な溶出分画（約２００１１２）
を得た。これを約２０村まで濃縮した後、ヌクレオシル
６Ｃ１８カラム（２，Ｏｘ ２０ｃｊ＋）（マーチェリ
イ・ナーゲル社製）とアセトニトリル−０，１％ＩＪ
／酸（５７：４３）を用いる高速液体クロマトグラフィ
ーにより精製した。チエロシンαおよびβのピークを各
々分取し、分取液を濃縮後、酢酸エチルで抽出した。
抽出液を水洗し、硫酸ソーダで脱水した後、濃縮乾固す
る事によりチエロシンαの無色粉末（ｓｐ、 １９０−
１９４℃）３５ｍ９およびチエロシンβの無色粉末（ｍ
ｐ、 ２４４−２４７℃）２０Ｒ９を得た。
る事によりチエロシンαの無色粉末（ｓｐ、 １９０−
１９４℃）３５ｍ９およびチエロシンβの無色粉末（ｍ
ｐ、 ２４４−２４７℃）２０Ｒ９を得た。
３）分析
（１）チエロシンαとβはＴ Ｌ Ｃ（１層クロマトグ
ラフィー）では分離しなかった。
ラフィー）では分離しなかった。
チエロシンを以下の条件下でＨＰＬＣ（高速液体クロマ
トグラフィー）にかけた場合の保持容量はａ ： ｌ
’？、６ｊ！（１，１３： ２Ｂ、４ｘＱＣ’あった（
α；第１図（ａ）およびβ：第１図（ｂ）参照）。
トグラフィー）にかけた場合の保持容量はａ ： ｌ
’？、６ｊ！（１，１３： ２Ｂ、４ｘＱＣ’あった（
α；第１図（ａ）およびβ：第１図（ｂ）参照）。
カラム：ヌクレオシルＢＣ１ｓ＋
４．６す８１５０ｘｍ
移動相ニアセトニトリル−０，１％リン酸（５５：４５
） 流速：２．０ｘ（１／分 チャートスピード：０，５ｃ虞／分 波長２２０ｎａ＋での吸光度で検出 チエロシンαおよびβは溶液中で相互変換を行う。変換
速度は溶媒により異なり、例えばＤＭＳＯ中では変換速
度は比較的に速く、室温約３時間でほぼα：β＝１＝１
の平衡状態に達する。ＣＨＣｌ２．やＥｔＯＡｃ中では
変換速度は比較的に遅い。
） 流速：２．０ｘ（１／分 チャートスピード：０，５ｃ虞／分 波長２２０ｎａ＋での吸光度で検出 チエロシンαおよびβは溶液中で相互変換を行う。変換
速度は溶媒により異なり、例えばＤＭＳＯ中では変換速
度は比較的に速く、室温約３時間でほぼα：β＝１＝１
の平衡状態に達する。ＣＨＣｌ２．やＥｔＯＡｃ中では
変換速度は比較的に遅い。
また、ｐＨ７，０〜７．５の水溶液中では極めて速やか
にα：β＝９＝１〜８：２の平衡混合物になる。
にα：β＝９＝１〜８：２の平衡混合物になる。
α−異性体
分子′式：Ｃ６４Ｈ，ｌ、Ｏ１，（分子量＝９９６）元
素分析値（Ｃｓ４１’（ｓｏＯ、ａ−Ｈ，Ｏとして）実
測値：Ｃ，６３，５２：Ｈ，６，２８計算値：Ｃ，６３
，９１；Ｈ，６，１１その他の各種の性状は既述の通り
である。
素分析値（Ｃｓ４１’（ｓｏＯ、ａ−Ｈ，Ｏとして）実
測値：Ｃ，６３，５２：Ｈ，６，２８計算値：Ｃ，６３
，９１；Ｈ，６，１１その他の各種の性状は既述の通り
である。
ｉ五三ヱヱＩ
分子式： Ｃｓ＊Ｈａ６０Ｈ
元素分析値（Ｃｉ−Ｈａ。０４．・ＨｔＯとして）実測
値：Ｃ，６３，６３；Ｈ，６，０６計算値：Ｃ，６３，
９１、Ｈ，６，１１その他の各種の性状は既述の通りで
ある。
値：Ｃ，６３，６３；Ｈ，６，０６計算値：Ｃ，６３，
９１、Ｈ，６，１１その他の各種の性状は既述の通りで
ある。
以下の実験例に示す方法でチエロシンのフオスフォリパ
ーゼＡ、阻害活性を調べた。
ーゼＡ、阻害活性を調べた。
実験例１
互法
ラベル体の基質として、Ｌ−３−ホスファチジルエタノ
ールアミン、バルミトイル−２−［ｉ目Ｃ］リルオイル
（Ａ＋ｎｅｒｓｈａ＋ａ社、 ５９ ａｃ ｉ／ｍｍ
ｏ１）を使用した。また、コールドの基質として、Ｌ−
α−ホスファチジルエタノールアミン（Ｓ ｉｇｍａ社
。
ールアミン、バルミトイル−２−［ｉ目Ｃ］リルオイル
（Ａ＋ｎｅｒｓｈａ＋ａ社、 ５９ ａｃ ｉ／ｍｍ
ｏ１）を使用した。また、コールドの基質として、Ｌ−
α−ホスファチジルエタノールアミン（Ｓ ｉｇｍａ社
。
卵白由来）を使用し、これをソニケエートしたものを基
質に用いた。ＰＬＡｔには、蛇毒由来（Ｓｉｇｍａ社）
、豚、膵臓由来（Ｓｉｇｍａ社）う・ノド血小板由来の
ものを使用した。反応は、トリス／イ・ノファー（０，
１Ｍ、ｐＨ７，４）、ＣａＣｉ＞＊（３ｍＭ）の溶液中
にＰＬＡｔおよび基質調整液を加え、３７℃で２０分間
反応後にドールズ試薬、２５１Ｑを入れ直ちに撹拌し反
応を止めた。これに蒸留水０．５＊Ｑとｎ−へブタン０
．８１１２を加え撹拌後遠心し、上層を別に分取した。
質に用いた。ＰＬＡｔには、蛇毒由来（Ｓｉｇｍａ社）
、豚、膵臓由来（Ｓｉｇｍａ社）う・ノド血小板由来の
ものを使用した。反応は、トリス／イ・ノファー（０，
１Ｍ、ｐＨ７，４）、ＣａＣｉ＞＊（３ｍＭ）の溶液中
にＰＬＡｔおよび基質調整液を加え、３７℃で２０分間
反応後にドールズ試薬、２５１Ｑを入れ直ちに撹拌し反
応を止めた。これに蒸留水０．５＊Ｑとｎ−へブタン０
．８１１２を加え撹拌後遠心し、上層を別に分取した。
さらにｎ−へブタン０．８１ｅとシリカゲルを加え撹拌
後、遠心し上清をバイアル瓶に分取し、これにトルエン
カクテルを加え、液体シンナレーションカウンターによ
りＰＬＡｔにより遊離されてくる脂肪酸量を測定した。
後、遠心し上清をバイアル瓶に分取し、これにトルエン
カクテルを加え、液体シンナレーションカウンターによ
りＰＬＡｔにより遊離されてくる脂肪酸量を測定した。
阻害活性値（％）は、（（阻害剤添加時のＤＰＭ値Ｐ
Ｌ Ａ ＊無添加時のＤＰＭ値）／（ＰＬＡ、単独作用
時のＤＰＭ値−ＰＬＡ！無添加時のＤＰＭ値））×１０
０により算出した。
Ｌ Ａ ＊無添加時のＤＰＭ値）／（ＰＬＡ、単独作用
時のＤＰＭ値−ＰＬＡ！無添加時のＤＰＭ値））×１０
０により算出した。
閂
フォスフォリパーゼＡ、の活性を５０％阻害する濃度は
、ブタ膵臓由来のフオスフオリパーゼＡ、に対しては４
７μ９ＩＲＱ、蛇毒由来のフオスフオリパーゼＡ、に対
してはＩＯμｇ／ｘＱｓラット血小板由来のフォスフオ
リパーゼＡ、に対しては０．００５μ９／ ３！１２で
あった。
、ブタ膵臓由来のフオスフオリパーゼＡ、に対しては４
７μ９ＩＲＱ、蛇毒由来のフオスフオリパーゼＡ、に対
してはＩＯμｇ／ｘＱｓラット血小板由来のフォスフオ
リパーゼＡ、に対しては０．００５μ９／ ３！１２で
あった。
第１図はチエロシンのＨＰＬＣによる分離像を示すチャ
ートの模写図、第２図はチエロシンαおよびβのＩＲス
ペクトルの模写図である。 第 図 （ｂ）
ートの模写図、第２図はチエロシンαおよびβのＩＲス
ペクトルの模写図である。 第 図 （ｂ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、チエラビア・テリコーラＲＦ−１４３株を培養する
ことにより産生され得るフォスフォリパーゼＡ＿２阻害
物質であって、その性状が下記で示されるチエロシンα
： （１）分子式：Ｃ＿５＿４Ｈ＿８＿０Ｏ＿１＿８（２）
Ｓｉ−ＭＳ：ｍ／ｚ９９７（Ｍ＋１）（３）酸性、融点
１９０〜１９４℃の無色粉末（４）溶解性：ジメチルス
ルホキシド、アセトニトリル、クロロホルム、酢酸エチ
ル、アセトンに可溶、メタノール、エタノールに僅かに
可溶、エチルエーテル、ヘキサン、石油エーテル、水に
難溶または不溶 （５）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム錠）：３５６
０〜３４４０、２９５０、１７４０〜１６７５、１５７
５、１４６０、１３２５、１２７５、１１５０、１０９
５、１０７０、９８５（ｃｍ＾−＾１）（６）紫外吸収
スペクトル（ＭｅＯＨ）：末端吸収および２４５ｎｍ（
肩）、２７５ｎｍ（肩）（７）ＣＤ（ＣＨＣｌ＿３）：
２３０〜３００ｎｍで殆どゼロ （８）ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ＿３、−ＣＤ＿３Ｏ
Ｄ（２０：１）、温度、２４℃、ＴＭＳ基準）：＾１Ｈ
ＮＭＲデータ δ（多重度、プロトン数） １．５１９（ｓ、３Ｈ） １．７５２（ｓ、３Ｈ） ２．１３４（ｓ、３Ｈ） ２．１９２（ｓ、３Ｈ） ２．２０９（ｓ、３Ｈ） ２．２１７（ｓ、３Ｈ） ２．２４（ｓ×２、６Ｈ） ２．２４８（ｓ、３Ｈ） ２．２８２（ｓ×２、６Ｈ） ２．３４３（ｓ、３Ｈ） ２．３７０（ｓ、３Ｈ） ２．３９６（ｓ、３Ｈ） ２．７２０（ｄ（Ｊ＝１６）、１Ｈ） ３．３８０（ｄ（Ｊ＝１６）、１Ｈ） ３．７７５（ｓ、３Ｈ） ３．８０９（ｓ、３Ｈ） ３．８２１（ｓ×２、６Ｈ） ＾１＾３ＣＮＭＲデータ δ（多重度、炭素数） ９．２５（ｑ、１） １０．１９（ｑ×２、２） １０．５２（ｑ、１） １３．０１（ｑ×２、２） １３．２３（ｑ、１） １５．７７（ｑ、１） １６．０９（ｑ、１） １６．７９（ｑ×２、２） １７．２８（ｑ、１） ２２．６１（ｑ、１） ２３．２８（ｑ、１） ２８．８４（ｔ、１） ４９．５２（ｓ、１） ６２．０１（ｑ×２、２） ６２．０６（ｑ×２、２） ７６．１６（ｓ、１） １００．０５（ｓ、１） １１６．８２（ｓ、１） １１６．９１（ｓ、１） １２１．３７（ｓ、１） １２１．８０（ｓ、１） １２１．８３（ｓ、１） １２２．１８（ｓ、１） １２５．５３（ｓ×２、２） １２５．９２（ｓ、１） １２６．２４（ｓ、１） １２７．８４（ｓ、１） １２７．９３（ｓ、１） １２８．７１（ｓ、１） １３２．１５（ｓ、１） １３２．１９（ｓ、１） １３２．５８（ｓ、１） １３３．３２（ｓ、１） １４８．８６（ｓ、１） １４９．０４（ｓ、１） １４９．２３（ｓ、１） １５０．４１（ｓ、１） １５２．９１（ｓ×２、２） １５４．０３（ｓ、１） １５４．６２（ｓ、１） １６０．４４（ｓ、１） １６３．８４（ｓ、１） １６６．３１（ｓ、１） １６６．６３（ｓ、１） １７０．５０（ｓ×２、２） １９４．５２（ｓ、１） （ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、
Ｊ：スピン結合定数）。 ２、チエラビア・テリコーラＲＦ−１４３株を培養する
ことにより産生され得るフォスフォリパーゼＡ、阻害物
質であって、その性状が下記で示されるチエロシンβ： （１）分子式：Ｃ＿５＿４Ｈ＿６＿０Ｏ＿１＿８（２）
ＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ９９７（Ｍ＋１）（３）酸性、融点
２４４〜２４７℃の無色粉末（４）溶解性：ジメチルス
ルホキシドに可溶、アセトニトリル、クロロホルム、酢
酸エチル、アセトン、メタノール、エタノールに僅かに
可溶、エチルエーテル、ヘキサン、石油エーテル、水に
難溶または不溶 （５）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム錠）：３４９
０、２９５０、１７４０〜１６７５、１５７７、１４６
０、１３２５、１２７２、１２２２、１１５５、１０９
５、１０７５、１０５０、９８５（ｃｍ＾−＾１） （６）紫外吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）：末端吸収およ
び２４５ｎｍ（肩）、２７５ｎｍ（肩）（７）ＣＤ（ｃ
：０．０７８２、ＣＨＣｌ＿３）：［θ］＿２＿６＿０
Ｏ［θ］＿２＿６＿７−３００、［θ］＿２＿７＿０＿
．＿５−１１０、［θ］＿２＿７＿７＿．＿５−２３０
、［θ］＿２＿８＿５Ｏ（８）ＮＭＲスペクトル（ＣＤ
Ｃｌ＿３−ＣＤ＿３ＯＤ（２０：１）、温度、２４℃、
ＴＭＳ基準）：＾１ＨＮＭＲデータ δ（多重度、プロトン数） １．３３０（ｓ、３Ｈ） １．８９０（ｓ、３Ｈ） ２．２３３（ｓ、３Ｈ） ２．２３８（ｓ、３Ｈ） ２．２６４（ｓ、３Ｈ） ２．２６９（ｓ×２、６Ｈ） ２．２７４（ｓ、３Ｈ） ２．２９５（ｓ×２、６Ｈ） ２．３２２（ｓ×２、６Ｈ） ２．３９６（ｓ、３Ｈ） ２．４０６（ｓ、３Ｈ） ２．７４２（ｄ（Ｊ＝１６）、１Ｈ） ３．３００（ｄ（Ｊ＝１６）、１Ｈ） ３．８３３（ｓ×３、９Ｈ） ３．３４８（ｓ、３Ｈ） ＾１＾３ＣＮＭＲデータ δ（多重度、炭素数） ９．１４（ｑ、１） １０．２３（ｑ×２、２） １０．５８（ｑ、１） １３．０５（ｑ×２、２） １３．２９（ｑ、１） １５．８２（ｑ、１） １６．４３（ｑ、１） １６．８０（ｑ×２、２） １７．３３（ｑ、１） ２２．３３（ｑ、１） ２２．６７（ｑ、１） ３０．１１（ｔ、１） ４６．７３（ｓ、１） ６２．００（ｑ×３、３） ６２．０９（ｑ、１） ７４．５９（ｓ、１） ９７．９９（ｓ、１） １１５．９８（ｓ、１） １１７．１８（ｓ、１） １２１．２０（ｓ、１） １２１．８３（ｓ×２、２） １２２．２９（ｓ、１） １２５．５５（ｓ×２、２） １２６．０１（ｓ、１） １２６．２７（ｓ、１） １２７．８５（ｓ、１） １２７．９３（ｓ、１） １２９．５４（ｓ、１） １３２．１５（ｓ、１） １３３．２２（ｓ、１） １３３．３３（ｓ、１） １３３．４５（ｓ、１） １４８．８９（ｓ、１） １４９．０７（ｓ、１） １４９．３７（ｓ、１） １５０．４５（ｓ、１） １５２．９２（ｓ×２、２） １５４．０６（ｓ、１） １５４．８０（ｓ、１） １５８．７３（ｓ、１） １６３．９９（ｓ、１） １６６．３５（ｓ、１） １６６．７５（ｓ、１） １７０．４２（ｓ×２、２） １９６．３０（ｓ、１） （ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、
Ｊ：スピン結合定数）。 ３、チエラビア・テリコーラＲＦ−１４３株を培養する
ことにより産生され得る、チエロシンαおよびチエロシ
ンβの混合物。 ４、チエラビア・テリコーラＲＦ−１４３株またはその
チエロシン産生性変異体。 ５、チエラビア・テリコーラＲＦ−１４３株またはその
チエロシン産生性変異体を液中好気性条件下、チエロシ
ンが産生されるまで培養することを特徴とするチエロシ
ンα、チエロシンβまたはその混合物の製造方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1109939A JP2842613B2 (ja) | 1989-04-28 | 1989-04-28 | フォスフォリパーゼａ▲下２▼阻害物質 |
| DE69019591T DE69019591T2 (de) | 1989-04-28 | 1990-04-26 | Phospholipase-A2-Inhibitor, Verfahren zu seiner Herstellung und diesen enthaltende pharmazeutische oder veterinäre Zusammensetzungen. |
| AT90304552T ATE123028T1 (de) | 1989-04-28 | 1990-04-26 | Phospholipase-a2-inhibitor, verfahren zu seiner herstellung und diesen enthaltende pharmazeutische oder veterinäre zusammensetzungen. |
| DK90304552.4T DK0395418T3 (da) | 1989-04-28 | 1990-04-26 | Phospholipase A2-inhibitor, fremgangsmåde til fremstilling deraf og farmaceutiske eller veterinære formuleringer omfattende inhibitoren |
| EP90304552A EP0395418B1 (en) | 1989-04-28 | 1990-04-26 | A phospholipase A2 inhibitor, method for producing it and pharmaceutical or veterinary formulations comprising said inhibitor |
| ES90304552T ES2075154T3 (es) | 1989-04-28 | 1990-04-26 | Un inhibidor de fosfolipasa a2, metodo para producirlo y formulaciones farmaceuticas o veterinarias que comprenden dicho inhibidor. |
| US07/516,982 US5011952A (en) | 1989-04-28 | 1990-04-30 | Phospholipase A2 inhibitor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1109939A JP2842613B2 (ja) | 1989-04-28 | 1989-04-28 | フォスフォリパーゼａ▲下２▼阻害物質 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02286088A true JPH02286088A (ja) | 1990-11-26 |
| JP2842613B2 JP2842613B2 (ja) | 1999-01-06 |
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP1109939A Expired - Fee Related JP2842613B2 (ja) | 1989-04-28 | 1989-04-28 | フォスフォリパーゼａ▲下２▼阻害物質 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JP2842613B2 (ja) |
| AT (1) | ATE123028T1 (ja) |
| DE (1) | DE69019591T2 (ja) |
| DK (1) | DK0395418T3 (ja) |
| ES (1) | ES2075154T3 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| CA2100640A1 (en) * | 1992-07-23 | 1994-01-24 | Shigeru Matsutani | Substitute benzoate derivatives |
| GB9226724D0 (en) * | 1992-12-22 | 1993-02-17 | Xenova Ltd | Pharmaceutical compounds |
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- 1989-04-28 JP JP1109939A patent/JP2842613B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1990
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- 1990-04-26 ES ES90304552T patent/ES2075154T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-26 AT AT90304552T patent/ATE123028T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-04-26 EP EP90304552A patent/EP0395418B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-26 DE DE69019591T patent/DE69019591T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-04-30 US US07/516,982 patent/US5011952A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0395418T3 (da) | 1995-08-07 |
| DE69019591D1 (de) | 1995-06-29 |
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| DE69019591T2 (de) | 1996-01-25 |
| ES2075154T3 (es) | 1995-10-01 |
| ATE123028T1 (de) | 1995-06-15 |
| US5011952A (en) | 1991-04-30 |
| EP0395418A1 (en) | 1990-10-31 |
| EP0395418B1 (en) | 1995-05-24 |
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |