JPH06339395A - 新規生理活性物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記式（Ｉ）で表される新規生理活性物質
を、ストレプトマイセス属に属する菌の培養物を分解す
ることにより取得した。該物質はプロリン水酸化酵素の
阻害活性を有する。 【化１】 【効果】 本発明の新規生理活性物質は低濃度でプロリ
ン水酸化酵素の阻害活性を有することから、肝硬変、肺
線維化症等の臓器線維化症に対する治療薬として有用で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、テトラサイクリン系の
骨格を有する新規生理活性物質及びその製造法に関し、
詳細にはプロリン水酸化酵素の阻害活性を有する新規生
理活性物質及びその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする問題点】肝硬
変、肺線維化症などの臓器線維化症はコラーゲンの異常
増加に起因する疾患とされているが、その線維化抑制剤
の一つとしてコラーゲン生合成に関与している酵素の一
つであるプロリン水酸化酵素の阻害剤が考えられる。阻
害剤によりプロリンの水酸化を抑制すると低水酸化コラ
ーゲン分子が得られるが、これは機能性を有さず、細胞
からわずかの量のみしか細胞外間隙に放出され得ない。
更に低水酸化コラーゲンはコラーゲンマトリックス中に
導入され得ず、しかも非常に容易に蛋白質加水分解によ
る分解が進行する。これらの効果により、結果的に細胞
外に析出されるコラーゲンの量が全体として減少するこ
とになる。従って、プロリン水酸化酵素の阻害剤はコラ
ーゲンの析出が病像に重大な影響を与えるような疾患の
治療に対して有効な手段となる。

【０００３】従来、プロリン水酸化酵素の阻害剤として
ピリジン−２，４−ジカルボン酸誘導体及びピリジン−
２，５−ジカルボン酸誘導体（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．，１３８，２３９−２４５（１９８４）；特開昭
６１−６０６５５号；同６３−２１６８７０号；同６３
−２１６８７１号；同６３−２１６８７３号；同６３−
２３８０５９号各公報等）や、各種のペプチド類（特公
昭５２−２９７４０号；同５３−２７２７３号；特開平
２−４２０９８号各公報等）が知られているが、更に新
しいタイプの薬剤の出現が望まれていた。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物が
抗生物質等の種々の生理活性物質を生産することに着目
し、自然界により多数の試料を採取してそれから分離さ
れた多種類の微生物の培養物について検討を重ねた結
果、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ）属
に属するある種の菌株の培養物分解物中に、プロリン水
酸化酵素阻害作用を有する物質が含まれることを見出
し、その構造を明らかにして、本発明を完成するに至っ
た。

【０００５】すなわち本発明の要旨は、下記式（Ｉ）で
示される生理活性物質及びその製造法に存する。

【０００６】

【化６】 ［上記式中、Ｒ¹は水素原子、

【０００７】

【化７】 または、

【０００８】

【化８】 を表し、Ｒ²は水素原子、

【０００９】

【化９】 または、

【００１０】

【化１０】 （Ｒ³及びＲ⁴はそれぞれ独立して水素原子またはメチル
基を表す）を表す］

【００１１】以下、本発明につき詳細に説明する。本発
明の新規生理活性物質としては以下のような化合物群が
挙げられる。なお、以下、本発明の新規生理活性物質を
「化合物群Ａ２１２１」と総称することもある。

【００１２】Ａ２１２１−１

【化１１】

【化１２】

【００１３】Ａ２１２１−２

【化１３】

【化１４】

【００１４】Ａ２１２１−３

【化１５】

【化１６】

【００１５】Ａ２１２１−４

【化１７】Ｒ¹＝Ｈ

【化１８】

【００１６】Ａ２１２１−５

【化１９】Ｒ¹＝Ｈ

【化２０】

【００１７】Ａ２１２１−６

【化２１】Ｒ¹＝Ｈ

【化２２】

【００１８】Ａ２１２１−７

【化２３】

【化２４】

【００１９】Ａ２１２１−８

【化２５】

【化２６】

【００２０】Ａ２１２１−９

【化２７】Ｒ¹＝Ｈ

【化２８】

【００２１】Ａ２１２１−１０

【化２９】Ｒ¹＝Ｈ

【化３０】Ｒ²＝Ｈ

【００２２】本発明の化合物群Ａ２１２１は、例えばス
トレプトマイセス属に属する化合物群Ａ２１２１生産菌
を培養し、その培養液から化合物を単離、または必要に
応じてその培養物について加水分解または加溶媒分解す
ることができる。本発明において化合物群Ａ２１２１生
産菌としてはストレプトマイセス属に属する微生物であ
って、その培養液中に採取するに十分な量の化合物群Ａ
２１２１を生産する能力を有するものであればいかなる
ものであってもよい。このような菌株の例としては、本
発明者らにより土壌より新たに分離されたストレプトマ
イセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓ
ｐ．）ＭＣＩ ２８３６号（以下、「本菌株」または
「ＭＣＩ２８３６号菌」と略す）が挙げられる。ＭＣＩ
２８３６号菌の微生物学的性質は下記の通りである。

【００２３】ａ）形態学的特徴 胞子形成培地として、グリセリン・アスパラギン寒天培
地、スターチ・無機塩寒天培地、酵母エキス・麦芽エキ
ス寒天を用い、２７℃、１４日間培養後観察した。コロ
ニーの色調は培養初期では黄味白〜黄色〜うす茶色を呈
し、培養１４日めでは緑がかった茶灰色を呈する。基生
菌糸は分枝して伸長し分断は見られない。気菌糸を豊富
に形成し、気菌糸上に１〜５回転のラセン状の分節胞子
を形成する。表面構造は平滑。

【００２４】ｂ）各培地上における性状 ＩＳＰ〔インターナショナル・ストレプトマイセス・プ
ロジェクト（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ Ｐｒｏｊｅｃｔ）〕規定の各種培地上
で２７℃、１４日間培養後の性状は次に示すとおりであ
る。

【００２５】

【表１】 培地の種類 項目 ＭＣＩ２８３６号菌の性状 ──────────────────────────────────── シュークロースー硝酸塩 Ｇ 良好、暗い黄〜灰味オリーブ色 寒天培地 ＲＣ 灰味オリーブ色 ＡＭ 極めて貧弱 ＳＰ 赤茶色 Ｓ 形成せず ──────────────────────────────────── グルコース・アスパラギン Ｇ 良好、灰色茶〜茶色 寒天培地 ＲＣ 暗い茶色 ＡＭ 豊富 ＳＰ 茶色 Ｓ 貧弱、１〜５回転のラセン状 ──────────────────────────────────── グリセリン・アスパラギン Ｇ 良好、うすい茶灰色 寒天培地 ＲＣ 暗い茶色 （ＩＳＰ５） ＡＭ 豊富、ビロード状 ＳＰ 茶色 Ｓ 中程度、１〜３回転のラセン状 ──────────────────────────────────── スターチ・無機塩 Ｇ 良好、暗い茶〜緑がかった 寒天培地 うすい茶灰色 （ＩＳＰ４） ＲＣ 暗い茶色 ＡＭ 豊富、ビロード状 ＳＰ 赤茶色 Ｓ 中程度、１〜５回転のラセン状 ───────────────────────────────────

【００２６】

【表２】 培地の種類 項目 ＭＣＩ２８３６号菌の性状 ──────────────────────────────────── チロシン寒天培地 Ｇ 中程度、茶灰色 （岡西による変法） ＲＣ 茶灰色 ＡＭ 形成せず ＳＰ 暗い茶色 Ｓ 形成せず ──────────────────────────────────── 普通寒天培地 Ｇ 貧弱、茶灰色 ＲＣ 茶灰色 ＡＭ 形成せず ＳＰ 暗い茶色 Ｓ 形成せず ──────────────────────────────────── 酵母エキス Ｇ 良好、白〜茶灰色 麦芽エキス寒天培地 ＲＣ 茶灰色 （ＩＳＰ２） ＡＭ 豊富、ビロード状 ＳＰ 暗い茶色 Ｓ 貧弱、１〜４回転のラセン状 ──────────────────────────────────── オートミール Ｇ 中程度、茶灰色 寒天培地 ＲＣ 茶灰色 （ＩＳＰ８） ＡＭ 豊富、ビロード状 ＳＰ 赤茶色 Ｓ 貧弱、１〜３回転のラセン状 ───────────────────────────────────

【００２７】

【表３】 培地の種類 項目 ＭＣＩ２８３６号菌の性状 ──────────────────────────────────── ベネット寒天培地 Ｇ 中程度、茶灰〜灰色 ＲＣ 茶灰色 ＡＭ 中程度、粉状 ＳＰ 暗い茶色 Ｓ 形成せず ──────────────────────────────────── リンゴ酸カルシウム Ｇ 中程度、うす黄色 寒天培地 ＲＣ 黄色 ＡＭ 形成せず ＳＰ 生成せず Ｓ 形成せず リンゴ酸カルシウムの資化能あり ──────────────────────────────────── Ｇ：生育、 ＲＣ：裏面の色調、 ＡＭ：気菌糸、 ＳＰ：可溶性色素、 Ｓ：胞子形成

【００２８】

【表４】 ｃ）生理学的性状 １）生育温度範囲 ９〜４０℃ ２）生育ｐＨ範囲 ｐＨ４〜８ ３）ゼラチンの液化 陽性 ４）デンプンの加水分解 陽性 ５）脱脂乳の凝固 陽性 ペプトン化 陽性 ６）メラニン様色素の生成 陽性 （ペプトン・酵母エキス・鉄寒天、トリプトン・酵母エ
キス寒天及びチロシン寒天培地上） ７）硝酸塩の還元 陽性 ８）ＮａＣｌの耐性 ５％で生育可 ７％で生育不可 ９）炭素源の資化性 炭素源無添加培地上でも若干の生育がみられた Ｄ−グルコース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ シュークロース ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ラフィノース ＋ イノシトール ＋ Ｄ−マンニトール ＋ ＋：利用する、 ±：利用が疑わしい、 −：利用しな
い

【００２９】ｄ）菌体成分について 本菌株ＭＣＩ２８３６号菌の細胞壁アミノ酸タイプは、
全菌体水解物の分析によりＬ，Ｌ−ジアミノピメリン酸
が検出されたことから、細胞壁タイプＩ型であることが
確認された。また、細胞壁糖組成についても全菌体水解
物中からグルコース及びリボースが検出されたが、特徴
的なパターンは認められなかった。

【００３０】ｅ）分類学的考察 以上の結果から、本菌株ＭＣＩ２８３６号菌はストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に帰属する
ことが判明した。種の同定のためにＩＳＰ記載の菌種を
検索したところ、本菌株はＥ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎｇ
＆ Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂ
ａｃｔ．Ｖｏｌ．１８，ＮＯ．２：ｐ１６５（１９８
６），Ｖｏｌ．２２，ＮＯ．４：ｐ３２３〜３２５（１
９７２）に記載されている、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｒｅｓｉｓｔｏｍｙｃｉｆｉｃｕｓ及びＳ．ｎｅｙａ
ｇａｗａｅｎｓｉｓに類似した種であることが示唆され
た。

【００３１】しかし下記の表に示したように、培養上の
性質及び各種の生理学的性状においてリトマスミルクの
ペプトン化、硝酸塩の還元などいくつかの相違がみられ
た。従って本菌株ＭＣＩ２８３６号菌をＳｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｓｐ．と同定した。

【００３２】

【表５】 S.resistomycificus S.neyagawaensis MCI2836号菌 (IFO12814) (IFO13477) 生育ｐＨ範囲 ｐＨ５〜１１ ｐＨ５〜１１ ｐＨ４〜８ リトマスミルク ペプトン化 − ± ＋ 凝固 − ＋ ＋ 硝酸塩の還元 − − ＋ メラニン様色素生成 ＰＹＦｅ培地 ＋ ＋ ＋ Ｔｒｙ−Ｙ培地 ＋ ＋ ＋ チロシン培地 ＋ ＋ ＋ デンプンの加水分解 ＋ ＋ ＋ ＮａＣｌ耐性 ５％ ＋ ＋ ＋ ７％ − − − １０％ − − − 炭素源の資化性 Ｄ−グルコース ＋ ＋ ＋ Ｌ−アラビノース ＋ ＋ ＋ Ｄ−キシロース ＋ｗ ＋ｗ ＋ Ｄ−フラクトース ＋ − ＋ シュークロース ＋ ＋ ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ＋ ＋ ラフィノース ＋ ＋ ＋ イノシトール ＋ ＋ ＋ Ｄ−マンニトール ＋ ＋ ＋

【００３３】ＰＴＦｅ培地：ペプトン・酵母エキス・鉄
寒天培地 Ｔｒｙ−Ｙ培地：トリプトン、酵母エキス寒天培地 ＋：陽性（強）、＋ｗ：陽性（弱）、−：陰性、±：疑
わしい ＭＣＩ２８３６号菌は、工業技術院生命工学工業技術研
究所にＦＥＲＭ Ｐ−１３５５５として寄託されてい
る。

【００３４】一般にストレプトマイセス属菌は他の菌類
の場合にみられるようにその性状が変化しやすい。例え
ば、ＭＣＩ２８３６号菌またはこの株に由来する突然変
異株（自然発生または誘発性）、形質接合体または遺伝
子組換え体であっても、化合物群Ａ２１２１の生産能を
有するものはすべて本発明の方法に使用することが出来
る。

【００３５】本発明においては、前記の菌を通常の微生
物が利用し得る栄養物を含有する培地で培養する。栄養
源としては、グルコース、水あめ、デキストリン、シュ
ークロース、澱粉、糖密、動・植物油等を使用できる。
また窒素源として、大豆粉、小麦胚芽、麦芽粉末、コー
ンスティープ・リカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、
酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を
使用できる。その他、必要に応じ、ナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐
酸、硫酸及びその他のイオンを生成することができる無
機塩類を添加することは有効である。また菌の生育を助
け、化合物群Ａ２１２１の生産を促進しようとするよう
な有機物及び／または無機物を適当に添加することがで
きる。

【００３６】培養法としては、好気的条件での培養法が
適している。培養に適当な温度は２０〜３０℃である
が、多くの場合、２６〜３０℃付近で培養する。化合物
群Ａ２１２１の生産は培地や培養条件により異なるが、
通常３〜１０日の間でその蓄積が最適に達するので、培
養物中の化合物群Ａ２１２１の蓄積量が最大となったと
きに培養を停止する。

【００３７】化合物群Ａ２１２１は脂溶性物質であるの
で、培養物から化合物群Ａ２１２１を精製する際には、
その特性を利用して行うことができる。すなわち、酢酸
エチル、クロロホルム等による溶媒抽出法；シリカゲ
ル、アルミナ、オクダデシルシリカゲル、ダイヤイオン
ＨＰ−２０（三菱化成社製）等の合成吸着剤、またセフ
ァデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）等のゲル濾
過剤等によるカラムクロマトグラフィー；さらにシリカ
ゲル等を担体とした分取薄層クロマトグラフィー、場合
によっては水または各種有機溶媒による再結晶等が有効
である。

【００３８】上記で述べたＡ２１２１−４〜１０はＡ２
１２１−１〜３を加水分解または加溶媒分解することに
よっても得られる。具体的にはＡ２１２１−１〜３の分
解は、通常酸性条件下で、例えば水、エタノール、メタ
ノール等の溶媒中で、反応させることにより行われる。
Ａ２１２１−１〜３の溶解性を増すために、反応液中に
例えばジメチルスルホキシドまたはアセトニトリル等の
溶媒を加えることは有効である。ここで用いる酸として
は、通常用いられる塩酸、酢酸、硫酸、トリフルオロ酢
酸等を使用することができる。分解に用いるＡ２１２１
−１〜３は、培養液そのままでも、培養液の粗精製物ま
たはＡ２１２１−１〜１０との混合物、もしくは単離精
製したＡ２１２１−１〜３のいずれであってもよい。Ａ
２１２１−４〜１０は脂溶性物質であるので、反応物中
から単離精製する際にはその特性を利用し、前記と同様
な方法を用いることができる。

【００３９】本発明者らは、化合物群Ａ２１２１を上記
のような手段・方法を用いて製造し、その物理化学的性
状を調べた結果、化合物群Ａ２１２１が前記（Ｉ）式の
構造式で示される化合物であること、かつ本化合物が新
規化合物であることを明らかにした。このようにして化
合物群Ａ２１２１を製造することができるが、その物理
的性状は、以下の通りである。

【００４０】

【表６】 Ａ２１２１−１ １）外観：黄色粉末 ２）融点：１５８−１５９．５℃ ３）分子量：１１９９ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₅₉Ｈ₇₇ＮＯ₂₅ ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４３ｎｍ（ε＝３．６×１０⁴ ） ４３３ｎｍ（ε＝５．１×１０³ ） ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２４５ｎｍ（Δε＝６．７） ２５９ｎｍ（Δε＝０．０） ２６０ｎｍ（Δε＝−１．０） ２６４ｎｍ（Δε＝０．０） ２８５ｎｍ（Δε＝２７．４） ３１４ｎｍ（Δε＝０．０） ３５５ｎｍ（Δε＝−３．７） ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３４１４，２９３６，１７３２，１６９
０，１６２８，１５９５，１１１５，１０６７，１００
１ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.63(3H,brs);0.99(9H,d,J=6.5Hz);1.10(3H,d,
J=6.0Hz);1.11(3H,d,J=5.5Hz);2.91(1H,m);3.03(3H,m);
3.12(2H,m);3.79(1H,q,J=7.0Hz);3.83(1H,q,J=6.5Hz);
3.89(3H,s);4.02(1H,q,J=6.5Hz) 4.13(1H,brs);4.42(1H,d,J=7.0Hz);4.61(1H,d,J=5.5H
z);4.64(1H,d,J=6.5Hz);4.74(3H,m);4.80(1H,brs);6.40
(1H,s);7.35(1H,s);9.21(1H,brs);9.46(1H,brs,);12.76
(1H,brs,);13.42(1H,s);18.03(1H,brs)

【００４１】

【表７】 ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：190.26(s);188.81(s);178.43(s);173.11(s);16
8.09(s);166.63(s);161.75(s);160.76(s);152.26(s);13
3.45(s);124.26(s);119.16(d);112.20(s);110.20(d);10
2.44(d);101.79(d);99.68(s);98.51(d);98.39(d);98.28
(d);98.21(d);84.91(s);78.77(d);78.17(d);75.42(d);7
4.17(d);74.01(d);73.81(d);73.67(d);69.99(d);69.92
(d);66.34(d);66.15(d);64.85(d);57.03(q);41.73(t);4
1.52(d);30.97(t);30.76(t);30.56(t);29.95(t);28.79
(t);27.38(t);24.30(t);24.10(t);23.93(t);23.75(t);2
2.43(t);18.32(q);18.04(q);17.58(q);16.94(q);16.92
(q);16.76(q)

【００４２】

【表８】 Ａ２１２１−２ １）外観：黄色粉末 ２）融点：１６２−１６４℃ ３）分子量：１２１３ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₆₀Ｈ₇₉ＮＯ₂₅ ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４３ｎｍ（ε＝３．７×１０⁴ ） ４３３ｎｍ（ε＝５．６×１０³ ）

【００４３】

【表９】 ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２４８ｎｍ（Δε＝７．４） ２５８ｎｍ（Δε＝０．０） ２６２ｎｍ（Δε＝−３．３） ２６７ｎｍ（Δε＝０．０） ２８５ｎｍ（Δε＝２８．７） ３１４ｎｍ（Δε＝０．０） ３５５ｎｍ（Δε＝−３．９） ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３４１２，２９３６，１７３２，１６９
０，１６３０，１５９５，１１１５，１０６９，１００
３ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.63(3H,brs);0.99(9H,d,J=6.0Hz);1.10(3H,d,
J=5.5Hz);1.11(3H,d,J=5.5Hz);1.26(3H,d,J=7.5Hz);2.9
2(1H,m);3.03(3H,m);3.11(2H,m);3.79(1H,q,J=6.5Hz);
3.83(1H,q,J=6.5Hz);3.89(3H,s);4.02(1H,q,J=6.5Hz)4.
13(1H,brs);4.42(1H,d,J=7.5Hz);4.60(1H,d,J=8.0Hz);
4.64(1H,d,J=6.0Hz);4.73(3H,m);4.80(1H,brs);6.40(1
H,s);7.35(1H,s);9.20(1H,brs);9.46(1H,brs,);12.79(1
H,brs,);13.42(1H,s);18.02(1H,brs)

【００４４】

【表１０】 ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：190.27(s);188.83(s);178.44(s);173.13(s);17
1.23(s);171.20(s);169.89(s);169.84(s);161.77(s);16
0.76(s);152.27(s);133.46(s);124.27(s);119.17(d);11
2.20(s);110.21(d);102.44(d);101.80(d);99.68(s);98.
52(d);98.40(d);98.23(d);84.92(s);78.78(d);78.18
(d);75.43(d);74.14(d);74.02(d);73.82(d);73.69(d);7
0.00(d);69.86(d);66.35(d);66.16(d);64.97(d);64.85
(d);56.62(q);45.78(q);45.65(q);41.54(d);30.97(t);3
0.76(t);30.56(t);29.89(t);28.97(t);28.89(t);27.39
(t);24.29(t);24.10(t);23.93(t);23.76(t);22.43(t);2
2.35(t);18.31(q);18.03(q);17.57(q);16.93(q);16.91
(q);16.76(q);16.68(q);13.53(q);13.51(q)

【００４５】

【表１１】 Ａ２１２１−３ １）外観：黄色粉末 ２）融点：１６５−１６７℃ ３）分子量：１２２７ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₆₁Ｈ₈₁ＮＯ₂₅ ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４２ｎｍ（ε＝３．７×１０⁴ ） ４３４ｎｍ（ε＝５．４×１０³ ）

【００４６】

【表１２】 ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２４５ｎｍ（Δε＝７．６） ２５７ｎｍ（Δε＝０．０） ２６０ｎｍ（Δε＝−３．５） ２６７ｎｍ（Δε＝０．０） ２８５ｎｍ（Δε＝２９．０） ３１４ｎｍ（Δε＝０．０） ３５７ｎｍ（Δε＝−３．６） ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３３９５，２９３６，１７３２，１６９
０，１６３０，１５９５，１１１５，１０６９，１００
３ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.63(3H,brs);0.97(3H,d,J=6.5Hz);0.99(6H,d,
J=6.5Hz);1.10(3H,d,J=6.0Hz);1.11(3H,d,J=6.0Hz);1.3
2(3H,s);1.33(3H,s);2.92(1H,m);3.03(3H,m);3.11(2H,
m);3.79(1H,q,J=6.5Hz);3.83(1H,q,J=6.5Hz);3.89(3H,
s);4.02(1H,q,J=6.5Hz);4.12(1H,brs);4.41(1H,d,J=7.5
Hz);4.60(1H,d,J=8.0Hz);4.64(1H,d,J=6.5Hz);4.72(3H,
m);4.80(1H,brs);6.39(1H,s);7.35(1H,s);9.20(1H,br
s);9.46(1H,brs,);12.80(1H,brs,);13.42(1H,s);18.03
(1H,brs)

【００４７】

【表１３】 ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：190.26(s);188.83(s);178.42(s);173.72(s);17
3.10(s);172.12(s);161.74(s);160.75(s);152.25(s);13
3.44(s);124.25(s);119.15(d);112.19(s);110.20(d);10
2.43(d);101.77(d);99.67(s);98.49(d);98.37(d);98.19
(d);98.11(d);84.91(s);78.77(d);78.16(d);75.41(d);7
4.05(d);73.99(d);73.78(d);73.66(d);69.98(d);69.80
(d);66.34(d);66.14(d);64.95(d);57.03(q);49.30(s);4
1.51(d);30.97(t);30.75(t);30.56(t);29.94(t);29.88
(t);28.95(t);27.37(t);24.29(t);24.09(t);23.92(t);2
3.78(t);22.53(q);22.49(q);22.37(t);22.30(t);18.32
(q);18.04(q);17.58(q);16.94(q);16.92(q);16.75(q)

【００４８】

【表１４】 Ａ２１２１−４ １）外観：黄色粉末 ２）融点：１５７−１５９℃ ３）分子量：９７１ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₄₇Ｈ₅₇ＮＯ₂₁ ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４２ｎｍ（ε＝３．１×１０⁴ ） ４３３ｎｍ（ε＝４．０×１０³ ） ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２５０ｎｍ（Δε＝７．１） ２８６ｎｍ（Δε＝２０．５） ３１４ｎｍ（Δε＝０．０） ３５１ｎｍ（Δε＝−３．３）

【００４９】

【表１５】 ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３４０３，２９３６，１７３４，１６９
０，１６２８，１５９５，１２４８，１２２４，１１１
５，１０７１，１００１ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.64(3H,d,J=5.0Hz);0.99(9H,d,J=6.5Hz);2.68
(1H,dd,J=12.0,4.0Hz);3.03(2H,m);3.40(2H,s);3.46(1
H,brs);3.79(1H,q,J=7.0Hz);3.83(1H,q,J=6.5Hz);3.89
(3H,s) 4.02(1H,q,J=6.5Hz);4.13(1H,brs);4.62(1H,d,J=8.0H
z);4.74(3H,m);4.79(1H,brs);6.39(1H,s);6.93(1H,br
s);7.37(1H,s);9.17(1H,brs);9.40(1H,brs,);12.77(1H,
brs,);13.38(1H,s);17.99(1H,brs) ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：192.31(s);190.04(s);178.51(s);173.01(s);16
8.07(s);166.63(s);161.80(s);160.63(s);151.21(s);13
3.34(s);124.04(s);119.26(d);112.50(s);110.30(d);10
1.74(d);98.35(d);98.24(d);98.17(d);98.00(s);78.15
(d);77.90(s);74.12(d);73.77(d);73.63(d);69.90(d);6
6.32(d);66.12(d);64.82(d);57.01(q);43.50(d);41.73
(t);29.97(t);28.93(t);27.11(t);24.27(t);24.07(t);2
3.90(t);23.73(t);22.40(t);17.56(q);16.95(q);16.92
(q);16.76(q)

【００５０】

【表１６】 Ａ２１２１−５ １）外観：黄色粉末 ２）融点：１６１−１６２．５℃ ３）分子量：９８５ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₄₈Ｈ₅₉ＮＯ₂₁ ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４２ｎｍ（ε＝３．７×１０⁴ ） ４３３ｎｍ（ε＝５．０×１０³ ） ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２５０ｎｍ（Δε＝１０．４） ２８５ｎｍ（Δε＝２４．２） ３１４ｎｍ（Δε＝０．０） ３５７ｎｍ（Δε＝−４．５） ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３４０１，２９３８，１７３２，１６９
０，１６２８，１５９５，１２４８，１２２３，１１１
３，１０７１，１００３ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.63(3H,d,J=5.5Hz);0.99(9H,m);1.26(3H,d,J=
7.5Hz) 2.68(1H,dd,J=12.5,4.5Hz);3.03(2H,m);3.49(H,q,J=7.5
Hz) 3.79(1H,q,J=6.5Hz);3.83(1H,q,J=6.5Hz);3.89(3H,s) 4.02(1H,q,J=6.0Hz);4.13(1H,brs);4.62(1H,d,J=8.5H
z);4.74(3H,m);4.80(1H,brs);6.39(1H,s);6.95(1H,br
s);7.37(1H,s);9.18(1H,brs);9.40(1H,brs,);12.78(1H,
brs,);13.38(1H,s);17.99(1H,brs)

【００５１】

【表１７】 ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：192.31(s);190.03(s);178.51(s);173.02(s);17
1.20(s);171.15(s);169.87(s);169.81(s);161.79(s);16
0.63(s);151.20(s);133.33(s);124.03(s);119.25(d);11
2.49(s);110.30(d);101.73(d);98.34(s);98.17(d);97.9
8(s);78.14(d);77.89(s);74.07(d);73.75(d);73.62(d);
69.82(d);66.31(d);66.11(d);64.92(d);64.81(d);57.01
(q);45.73(d);45.60(d);43.50(d);29.96(t);28.93(t);2
7.11(t);24.26(t);24.06(t);23.90(t);23.74(t);22.39
(t);22.31(t);17.55(q);16.95(q);16.92(q);16.77(q);1
6.69(q);13.54(q);13.52(q)

【００５２】

【表１８】 Ａ２１２１−６ １）外観：黄色粉末 ２）融点：１６７−１６８．５℃ ３）分子量：９９９ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₄₉Ｈ₆₁ＮＯ₂₁ ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４２ｎｍ（ε＝３．７×１０⁴ ） ４３１ｎｍ（ε＝５．１×１０³ ） ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２４８ｎｍ（Δε＝１０．１） ２８６ｎｍ（Δε＝２５．２） ３１３ｎｍ（Δε＝０．０） ３５７ｎｍ（Δε＝−４．６）

【００５３】

【表１９】 ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３３９３，２９３８，１７３２，１６９
０，１６２８，１５９５，１２４８，１２２３，１１１
５，１０７１，１００３ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.63(3H,d,J=5.0Hz);0.98(3H,d,J=6.5Hz);0.99
(3H,d,J=6.5Hz);1.33(3H,s);1.32(3H,s) 2.68(1H,dd,J=12.5,5.0Hz);3.03(2H,m);3.46(1H,brs) 3.79(1H,q,J=6.5Hz);3.83(1H,q,J=6.5Hz);3.89(3H,s) 4.03(1H,q,J=6.5Hz);4.13(1H,brs);4.62(1H,d,J=8.5H
z); ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：192.30(s);190.03(s);178.50(s);173.69(s);17
3.02(s);172.10(s);161.79(s);160.63(s);151.20(s);13
3.33(s);124.04(s);119.25(d);112.49(s);110.30(d);10
1.73(d);98.34(d);98.16(d);98.08(d);97.98(s);78.14
(d);77.89(s);74.01(d);73.75(d);73.62(d);69.78(d);6
6.31(d);66.11(d);64.91(d);57.00(q);49.28(s);43.50
(d);29.96(t);28.92(t);27.10(t);24.26(t);24.06(t);2
3.90(t);23.75(t);22.52(q);22.47(q);22.27(q);17.55
(q);16.94(q);16.92(q);16.74(q);

【００５４】

【表２０】 Ａ２１２１−７ １）外観：黄色粉末 ２）融点：１７８−１８１℃ ３）分子量：７７１ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₃₈Ｈ₄₅ＮＯ₁₆

【００５５】

【表２１】 ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４２ｎｍ（ε＝３．５×１０⁴ ） ４３５ｎｍ（ε＝５．１×１０³ ） ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２４６ｎｍ（Δε＝６．８） ２５７ｎｍ（Δε＝０．０） ２６３ｎｍ（Δε＝−４．２） ２６８ｎｍ（Δε＝０．０） ２８５ｎｍ（Δε＝２７．８） ３１４ｎｍ（Δε＝０．０） ３５６ｎｍ（Δε＝−３．７） ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３４２４，２９３４，２８７２，１６９
０，１６２８，１５９５，１２４８，１２２７，１１６
５，１１１３，１０６７，９８８ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.65(3H,d,J=4.5Hz);1.10(3H,d,J=5.5Hz);1.11
(3H,d,J=5.0Hz);2.90(3H,m);3.03(1H,m);3.12(2H,m);3.
37(1H,dd,J=11.5,6.0Hz);3.42(1H,d,J=18.5Hz);3.74(1
H,dd,J=18.5,5.5Hz);3.89(3H,s);4.12(1H,brs);4.42(1
H,d,J=7.5Hz);4.57(1H,d,J=7.0Hz);4.64(1H,d,J=7.0H
z);6.40(1H,s);7.34(1H,s);9.20(1H,brs);9.45(1H,br
s);13.42(1H,s);18.04(1H,brs)

【００５６】

【表２２】 ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：190.24(s);188.81(s);178.41(s);173.09(s);16
1.71(s);160.73(s);152.28(s);133.42(s);124.23(s);11
9.15(s);112.17(s);110.20(d);102.42(d);101.98(d);9
9.71(s);98.41(d);78.78(d);75.40(d);75.32(d);73.98
(d);69.97(d);57.03(q);41.50(d);30.96(t);30.75(t);3
0.54(t);30.13(t);29.88(t);27.38(t);18.32(q);18.04
(q);17.71(q);

【００５７】

【表２３】 Ａ２１２１−８ １）外観：黄色粉末 ２）融点：１９０．５−１９２．５℃ ３）分子量：６５７ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₃₂Ｈ₃₅ＮＯ₁₄ ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４２ｎｍ（ε＝３．７×１０⁴ ） ４３４ｎｍ（ε＝５．４×１０³ ） ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２４７ｎｍ（Δε＝７．２） ２５７ｎｍ（Δε＝０．０） ２６３ｎｍ（Δε＝−３．８） ２６８ｎｍ（Δε＝０．０） ２８６ｎｍ（Δε＝２９．１） ３１４ｎｍ（Δε＝０．０） ３５４ｎｍ（Δε＝−４．１）

【００５８】

【表２４】 ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３４１２，２９３４，２８７２，１６８
８，１６２８，１５９５，１２４８，１２２７，１１６
３，１１１３，１０５７，９９０ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.64(3H,d,J=4.5Hz);1.12(3H,d,J=6.0Hz);2.90
(3H,m);3.10(1H,dd,J=12.5,4.5Hz);3.26(1H,dq,J=11.5,
6.0Hz);3.42(1H,d,J=18.0Hz);3.75(1H,dd,J=18.5,5.5H
z);3.89(3H,s);4.12(1H,brs);4.57(1H,d,J=9.5Hz);4.62
(1H,d,J=8.5Hz);4.67(1H,d,J=5.0Hz);4.73(1H,d,J=5.5H
z);6.40(1H,s);7.34(1H,s);9.19(1H,brs);9.46(1H,br
s);13.42(1H,brs);18.05(1H,brs) ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：190.25(s);188.92(s);178.42(s);173.07(s);16
1.63(s);160.74(s);152.27(s);133.42(s);124.26(s);11
9.08(d);112.15(s);110.20(d);101.97(d);99.71(s);98.
64(d);75.73(d);75.28(d);69.95(d);69.68(d);57.03
(q);41.53(d);31.09(t);30.75(t);30.72(t);30.11(t);2
7.36(t);18.22(q);17.69(q);

【００５９】

【表２５】 Ａ２１２１−９ １）外観：黄色粉末 ２）融点：２０５−２０６℃（分解） ３）分子量：５４３ （ＳＩＭＳ ｎｅｇａｔｉｖｅ
Ｍ^- ） ４）分子式：Ｃ₂₆Ｈ₂₅ＮＯ₁₂

【００６０】

【表２６】 ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４１ｎｍ（ε＝３．５×１０⁴ ） ４３３ｎｍ（ε＝５．０×１０³ ） ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２５０ｎｍ（Δε＝１０．３） ２８６ｎｍ（Δε＝２５．３） ３１３ｎｍ（Δε＝０．０） ３５５ｎｍ（Δε＝−４．６） ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３４０９，２９３２，１６８６，１６５
３，１６２６，１５９５，１２５０，１２２５，１１１
１，１０６９，１０５３ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：0.65(3H,d,J=4.0Hz);1.26(1H,m);1.41(1H,m);
1.85(2H,m);2.67(1H,dd,J=12.0,4.0Hz);2.90(2H,m);3.3
2(1H,dd,J=18.0,5.0Hz);3.40(1H,d,J=18.0Hz);3.89(3H,
s);4.14(1H,brs);4.59(1H,d,J=9.0Hz);4.67(1H,d,J=4.0
Hz);6.38(1H,s);6.93(1H,brs);7.36(1H,s);9.17(1H,br
s);9.40(1H,brs);13.37(1H,s);18.01(1H,brs) ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：192.28(s);190.02(s);178.54(s);173.03(s);16
1.80(s);160.63(s);151.24(s);133.34(s);124.04(s);11
9.27(d);112.50(s);110.31(d);101.97(d);98.64(s);77.
89(s);75.31(d);72.81(d);69.98(d);57.01(q);43.52
(d);30.76(t);30.16(t);27.13(t);17.70(q);

【００６１】

【表２７】 Ａ２１２１−１０ １）外観：赤黄色粉末 ２）融点：１９８−２０２℃ ３）分子量：４２９ （ＦＤ−ＭＳ Ｍ⁺ ） ４）分子式：Ｃ₂₀Ｈ₁₅ＮＯ₁₀ ５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_MAX ：２４１ｎｍ（ε＝３．４×１０⁴ ） ４３１ｎｍ（ε＝４．９×１０³ ） ６）ＣＤスペクトル：アセトニトリル溶液中 λ_EXT ：２４８ｎｍ（Δε＝ ７．９） ２８５ｎｍ（Δε＝ ３４．７） ３１２ｎｍ（Δε＝ ０．０） ３５４ｎｍ（Δε＝− ４．１３） ７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法 ν（ｃｍ^-1）：３３８０，１６７２，１６２２，１５９
３，１２５０，１２２３，１１１３ ８）水素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 δ_ppm ：2.63(1H,dd,J=12.0,4.0Hz);3.34(1H,d,J=18.5H
z);3.40(1H,dd,J=18.5,4.0Hz);3.89(4H,m);5.92(1H,br
s);6.37(1H,s);6.89(1H,brs);7.46(1H,s);9.11(1H,br
s);9.38(1H,brs,);13.36(1H,s);18.16(1H,brs) ９）炭素核核磁気共鳴スペクトル：ジメチルスルホキシ
ド−ｄ₆ 溶液中 ７０℃ δ_ppm ：26.81(t);44.82(d);56.62(q);68.04(d);77.71
(s);97.72(s);109.92(d);112.72(s);118,23(d);124.01
(s);133.52(s);150.07(s);160.53(s);161.51(s);172.91
(s);178.22(s);189.49(s);191.95(s);193.33(s);195.07
(s)

【００６２】

【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明はその要旨をこえない限り以下の実施
例によって限定されるものではない。 実施例１ 麦芽粉末３．５％、コーンスターチ３．０％、コーンス
ティープリカー１．５％、ファーマメディア１．５％、
サングレイン０．５％及び炭酸カルシウム０．２％を含
有する培地（ｐＨ７．０）を２００ｍｌの三角フラスコ
２０本に４０ｍｌづつ分注し、１２１℃において２０分
間高圧滅菌する。

【００６３】これに、ＭＣＩ２８３６号菌を１白金耳づ
つ植菌し、２７℃において３日間、毎分２１０回転にて
振とう培養する。別に上記と同一組成からなる培地を調
製し、その８０ｍｌを５００ｍｌ三角フラスコ１００本
に分注し、１２１℃において２０分間高圧滅菌する。こ
の主発酵培地に前記種培養液を４ｍｌずつ接種し、２７
℃において５日間、毎分２１０回転にて振とう培養す
る。得られた培養物を遠心法により、培養上清液２．０
ｌと培養菌体３．２ｌに分離した。

【００６４】ここで得られた培養上清に濃塩酸を加え、
ｐＨを２に調整したのち、等量の酢酸エチルにて抽出を
行い、抽出物を減圧下濃縮し、５．７４ｇの油状物質Ａ
を得た。一方培養菌体に、４ｌのアセトンを加え抽出
し、セライトでろ去し、アセトンを減圧下留去した。こ
の残渣に濃塩酸を加え、ｐＨを２に調整したのち、等量
の酢酸エチルにて抽出した。抽出物を減圧下濃縮し、１
２．１１ｇの油状物質Ｂを得た。油状物質Ａと油状物質
Ｂをあわせ、オクタデシルシリカゲルを用いた逆層分配
クロマトグラフィーに付した。この油状物質をＭＣＩ
ＧＥＬ ＯＤＳ１ＭＹ（三菱化成社製）５００ｇを充填
しアセトニトリル−水混液（３：７）で平衡化したカラ
ムにのせ、アセトニトリル−水混液（３：７）０．７５
ｌで洗浄した。次いでアセトニトリル１．２５ｌにて溶
出し、溶出液を減圧下濃縮乾固し１２．８７ｇの油状物
質を得た。

【００６５】さらにこの油状物質について再度オクタデ
シルシリカゲルを用いた逆層分配クロマトグラフィーに
付した。油状物質をＭＣＩ ＧＥＬ ＯＤＳ １ＭＹ
２０ｇにまぶし、減圧乾燥後、ＭＣＩ ＧＥＬ ＯＤＳ
１ＭＹ ４８０ｇを充填しアセトニトリル−水混液
（３：７）で平衡化したカラムにのせた。アセトニトリ
ル−水混液（３：７）１．２５ｌで洗浄し、アセトニト
リル−水混液（２：３）１．２５ｌ、さらにアセトニト
リル−水混液（１：１）１．２５ｌで洗浄した後、アセ
トニトリル−水混液（３：２）０．７５ｌで溶出し、減
圧下アセトニトリルを留去した。残渣を酢酸エチルで抽
出し、硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下濃縮し、
９．３２ｇの油状物質を得た。この油状物質のうちの
０．８４ｇを３ｍｌのアセトニトリルに溶解し、Ｉｎｅ
ｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ−ＯＤＳ（５０ｍｍ×２５０ｍ
ｍ）（ＧＬサイエンス社製）を装着した分取高速液体ク
ロマトグラフィーに付した。０．００２％トリフルオロ
酢酸含有アセトニトリル−水混液（１１：９）３２５ｍ
ｌで洗浄した後、０．００２％トリフルオロ酢酸含有ア
セトニトリル−水混液（１１：９）で溶出し、溶出液を
２５ｍｌずつ分取し、フラクション５〜８をＣ−１、２
４〜２６をＣ−２、２８〜３１をＣ−３、３４〜３７を
Ｃ−４、３８〜４３をＣ−５、４９〜５４をＣ−６、５
７〜６２をＣ−７として集めた。同様にしてさらに５回
分取を行い、得られた溶出液Ｃ−１〜７をそれぞれ集
め、減圧下アセトニトリルを留去し、等量の酢酸エチル
で２回抽出を行い、硫酸マグネシウムで乾燥した後、減
圧下濃縮乾固してＣ−１よりＤ−１（０．６１ｇ）、Ｃ
−２よりＤ−２（０．１９ｇ）、Ｃ−３よりＤ−３
（０．２６ｇ）、Ｃ−４よりＤ−４（０．１９ｇ）、Ｃ
−５よりＤ−５（０．２７ｇ）、Ｃ−６よりＤ−６
（０．１７ｇ）、Ｃ−７よりＤ−７（０．２２ｇ）を得
た。

【００６６】画分Ｄ−３のうち１０２．８ｍｇをアセト
ニトリル３ｍｌに溶解し、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ
−ＯＤＳ（５０ｍｍ×２５０ｍｍ）を装着した分取高速
液体クロマトグラフィ−に付した。［０．００２％トリ
フルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：
９）８００ｍｌで洗浄した後、［０．００２％トリフル
オロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：９）１
７５ｍｌで溶出し、溶出液を減圧下濃縮乾固して、Ａ２
１２１−１を含む画分７２．９ｍｇを得た。酢酸エチル
とｎ−ヘキサンの混液より再結晶を行い、Ａ２１２１−
１ ５６．１ｍｇを得た。

【００６７】画分Ｄ−５のうち１００．６ｍｇをアセト
ニトリル３ｍｌに溶解し、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ
−ＯＤＳ（５０ｍｍ×２５０ｍｍ）を装着した分取高速
液体クロマトグラフィ−に付した。［０．００２％トリ
フルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：
９）１０７５ｍｌで洗浄した後、［０．００２％トリフ
ルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：９）
１５０ｍｌで溶出し、溶出液を減圧下濃縮乾固して、Ａ
２１２１−２を含む画分７６．２ｍｇを得た。酢酸エチ
ルとｎ−ヘキサンの混液より再結晶を行い、Ａ２１２１
−２ ４９．０ｍｇを得た。

【００６８】画分Ｄ−７のうち１０１．０ｍｇをアセト
ニトリル３ｍｌに溶解し、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ
−ＯＤＳ（５０ｍｍ×２５０ｍｍ）を装着した分取高速
液体クロマトグラフィ−に付した。［０．００２％トリ
フルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：
９）１５００ｍｌで洗浄した後、［０．００２％トリフ
ルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：９）
２００ｍｌで溶出し、溶出液を減圧下濃縮乾固して、Ａ
２１２１−３を含む画分６７．７ｍｇを得た。酢酸エチ
ルとｎ−ヘキサンの混液より再結晶を行い、Ａ２１２１
−３ ５９．４ｍｇを得た。

【００６９】画分Ｄ−２のうち９９．７ｍｇをアセトニ
トリル３ｍｌに溶解し、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ−
ＯＤＳ（５０ｍｍ×２５０ｍｍ）を装着した分取高速液
体クロマトグラフィ−に付した。［０．００２％トリフ
ルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：９）
７００ｍｌで洗浄した後、［０．００２％トリフルオロ
酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：９）２００
ｍｌで溶出し、溶出液を減圧下濃縮乾固して、Ａ２１２
１−４を含む画分６７．１ｍｇを得た。酢酸エチルとｎ
−ヘキサンの混液より再結晶を行い、Ａ２１２１−４
５１．２ｍｇを得た。

【００７０】画分Ｄ−４ ０．１９ｇをアセトニトリル
３ｍｌに溶解し、そのうち２ｍｌをＩｎｅｒｔｓｉｌ
ＰＲＥＰ−ＯＤＳ（５０ｍｍ×２５０ｍｍ）を装着した
分取高速液体クロマトグラフィ−に付した。［０．００
２％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液
（１１：９）１０００ｍｌで洗浄した後、［０．００２
％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１
１：９）１００ｍｌで溶出した。残りのアセトニトリル
溶液についても同様に分取を行い、得られた溶出液を合
わせ、減圧下濃縮乾固して、Ａ２１２１−５を含む画分
１０４．４３ｍｇを得た。そのうち７０．０ｍｇについ
て酢酸エチルとｎ−ヘキサンの混液より再結晶を行い、
Ａ２１２１−５ ６１．７ｍｇを得た。

【００７１】画分Ｄ−６のうち１００．１ｍｇをアセト
ニトリル３ｍｌに溶解し、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ
−ＯＤＳ（５０ｍｍ×２５０ｍｍ）を装着した分取高速
液体クロマトグラフィ−に付した。［０．００２％トリ
フルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：
９）１３２５ｍｌで洗浄した後、［０．００２％トリフ
ルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液（１１：９）
１７５ｍｌで溶出し、溶出液を減圧下濃縮乾固して、Ａ
２１２１−６を含む画分６１．９ｍｇを得た。酢酸エチ
ルとｎ−ヘキサンの混液より再結晶を行い、Ａ２１２１
−６ ４５．０ｍｇを得た。

【００７２】画分Ｄ−１をアセトニトリル４ｍｌに溶解
し、不純物をろ去した後、２ｍｌをＩｎｅｒｔｓｉｌ
ＰＲＥＰ−ＯＤＳ（５０ｍｍ×２５０ｍｍ）を装着した
分取高速液体クロマトグラフィ−に付した。［０．００
２％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル］−水混液
（３：７）で溶出し、溶出液を２５ｍｌずつ分取し、フ
ラクション２４〜２７をＥ−１、３０〜３４をＥ−２、
８３〜９３をＥ−３として集めた。さらに残りのアセト
ニトリル溶液についても同様に分取を行い、得られた溶
出液をそれぞれ集め、減圧下アセトニトリルを留去し、
等量の酢酸エチルで２回抽出を行い、硫酸マグネシウム
で乾燥した後、減圧下濃縮乾固してＥ−１からはＡ２１
２１−９（９７．６ｍｇ）、Ｅ−２からはＦ−１（２
２．１ｍｇ）、Ｅ−３からはＦ−２（４３．１ｍｇ）を
得た。

【００７３】画分Ｆ−２を１ｍｌアセトニトリルに溶解
し、ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８（３０ｍｍ×２５
０ｍｍ）（資生堂製））を装着した分取高速液体クロマ
トグラフィ−に付した。［０．００２％トリフルオロ酢
酸含有アセトニトリル］−水混液（２：３）３６９ｍｌ
で洗浄した後、［０．００２％トリフルオロ酢酸含有ア
セトニトリル］−水混液（２：３）３６ｍｌで溶出し、
減圧下濃縮乾固してＡ２１２１−７（６．３ｍｇ）を得
た。

【００７４】画分Ｆ−１を１ｍｌアセトニトリルに溶解
し、ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８（３０ｍｍ×２５
０ｍｍ）を装着した分取高速液体クロマトグラフィ−に
付した。［０．００２％トリフルオロ酢酸含有アセトニ
トリル］−水混液（３：７）２２５ｍｌで洗浄した後、
［０．００２％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル］
−水混液（３：７）３６ｍｌで溶出し、減圧下濃縮乾固
してＡ２１２１−８（８．８ｍｇ）を得た。

【００７５】実施例２ 実施例１と同様にしてＭＣＩ２８３６号菌を三角フラス
コ１００本分培養し、得られた培養物を遠心法により、
培養上清液３．５ｌと培養菌体３ｌに分離した。ここで
得られた培養上清に濃塩酸を加え、ｐＨを３に調整した
のち、等量の酢酸エチルにて抽出を行い、抽出物を減圧
下濃縮し、３．７０ｇの油状物質Ａを得た。一方培養菌
体に、４ｌのアセトンを加え抽出し、菌体をセライトで
ろ去し、アセトンを減圧下留去した。この抽出液に濃塩
酸を加え、ｐＨを３に調整したのち、等量の酢酸エチル
にて抽出した。抽出物を減圧下濃縮し、８．４５ｇの油
状物質Ｂを得た。油状物質Ａと油状物質Ｂをあわせ、オ
クタデシルシリカゲルを用いた逆層分配クロマトグラフ
ィーに付した。この油状物質をＭＣＩ ＧＥＬ ＯＤＳ
１ＭＹ（三菱化成社製）２０ｇにまぶし、減圧乾燥後、
ＭＣＩ ＧＥＬ ＯＤＳ１ＭＹ ４８０ｇを充填しアセ
トニトリル−水混液（３：７）で平衡化したカラムにの
せ、アセトニトリル−水混液（３：７）２．５ｌで洗浄
した。次いでアセトニトリル−水混液（２：３）２．５
ｌ、さらにアセトニトリル−水混液（１：１）０．５ｌ
で洗浄した後、アセトニトリル−水混液（１：１）２．
０ｌで溶出し、次いでアセトニトリル−水混液（３：
２）２．５ｌにて溶出した。溶出液を集め減圧下濃縮乾
固し４．８２ｇの残渣を得た。この残渣のうち２．２６
ｇを５０ｍｌのアセトニトリルに溶解し、５０ｍｌの
０．３規定硫酸を加え、室温で５時間反応した。反応液
に２５０ｍｌの水を加え、それぞれ５００ｍｌの酢酸エ
チルを用い２回抽出を行った。有機層を集め、無水硫酸
マグネシウムで乾燥した後、減圧下溶媒を留去した。得
られた残渣１．５７ｇをアセトニトリルから２回結晶化
してＡ２１２１−１０ ４９５ｍｇを得た。本物質の物
理的性質は、前記の通りである。

【００７６】実施例３ Ａ２１２１−２ ２０．４ｍｇに１ｍｌの０．３規定ト
リフルオロ酢酸−アセトニトリル溶液と０．５ｍｌの水
を加え溶解し、室温で５時間分解した。析出した結晶を
ろ取し、Ａ２１２１−１０ ５．０ｍｇを得た。 試験例１ 次にＡ２１２１−１０によるプロリン水酸化酵素の活性
を阻害する作用を示す。

【００７７】Ａ２１２１によるプロリン水酸化酵素の阻
害活性の測定は、Ｋ．Ｉ．Ｋｉｖｉｒｉｋｋｏ等の方法
［Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５２，９−
１６（１９７５）］に準じて鶏胚より調製した部分精製
酵素を使用し、（Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ）₁₀・９Ｈ₂
Ｏを基質として、Ｒ．Ｅ．Ｒｈｏａｄ等の方法［Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ＸVIIIＢ，３
０６（１９７１）］に準じて行った。すなわち反応液２
００μｌ中に、０．０５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
８）、上記基質４０μｇ、硫酸第一鉄０．０５ｍＭ、ア
スコルビン酸２ｍＭ、ジチオスレイトール０．１ｍＭ、
牛血清アルブミン０．４ｍｇ、¹⁴Ｃでラベルした放射性
のα−ケトグルタル酸を含む０．１ｍＭα−ケトグルタ
ル酸、カタラーゼ５０μｇ及びプロリン水酸化酵素０．
４ｍｌを含有させ、３７℃で２０分間反応を行った。つ
いで、反応液と等量の２５％トリクロロ酢酸で反応を停
止し、放出される二酸化炭素を捕集し放射能を測定し
た。同様に基質を含まない反応液でも反応を行い基質を
含む場合の反応での放射能測定値から基質を含まない反
応での放射能測定値を引き、それをプロリン水酸化酵素
の活性の指標とし、その活性を５０％阻害するのに必要
な阻害物質の濃度を５０％阻害濃度とした。その結果、
Ａ２１２１−１０の５０％阻害濃度は０．９μＭであっ
た。

【００７８】

【発明の効果】本発明の新規生理活性物質化合物群Ａ２
１２１は低濃度でプロリン水酸化酵素の阻害活性を有す
ることから、肝硬変、肺線維化症等の臓器線維化症に対
する治療薬として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/65 ＡＣＳ 9454−4Ｃ ＡＥＤ 9454−4Ｃ Ｃ１２Ｎ 9/99 9359−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 29/00 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 千葉 紀子 神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地 三 菱化成株式会社総合研究所内 (72)発明者 指田 玲子 神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地 三 菱化成株式会社総合研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式（Ｉ）で表される新規生理活性物
   質。 【化１】 ［上記式中、Ｒ¹は水素原子、 【化２】 または、 【化３】 を表し、Ｒ²は水素原子、 【化４】 または、 【化５】 （Ｒ³及びＲ⁴はそれぞれ独立して水素原子またはメチル
   基を表す）を表す］
2. 【請求項２】 ストレプトマイセス属に属する請求項１
   記載の新規生理活性物質生産菌を培養し、分離すること
   を特徴とする請求項１記載の新規生理活性物質の製造
   法。