JPH04159251A - ホスホリパーゼａ↓２阻害物質 - Google Patents
ホスホリパーゼａ↓２阻害物質Info
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- JPH04159251A JPH04159251A JP2285599A JP28559990A JPH04159251A JP H04159251 A JPH04159251 A JP H04159251A JP 2285599 A JP2285599 A JP 2285599A JP 28559990 A JP28559990 A JP 28559990A JP H04159251 A JPH04159251 A JP H04159251A
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- Japan
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- phospholipase
- compound
- present
- strain
- tericola
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、新規なホスホリパーゼＡ、阻害物質に関し、
さらに詳しくは、チェラビア属に属する菌株、例えばチ
ェラビア・テリフーラ（Ｔ ｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒ
ｒｉｃｏｌａ）ＲＦ−１４３株またはその変異体を液中
好気性条件下に培養することにより産生されるホスホリ
パーセＡ、阻害作用を有する生理活性物質に関するもの
である。また、本発明は、該化合物を産生ずるチェラビ
ア属に属する菌株、例えばチェラビア・テリコーラＲＦ
−１４３株またはその変異体を培養し、培養液から該化
合物を採取することを特徴とする該化合物の製造方法に
関するものである。
さらに詳しくは、チェラビア属に属する菌株、例えばチ
ェラビア・テリフーラ（Ｔ ｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒ
ｒｉｃｏｌａ）ＲＦ−１４３株またはその変異体を液中
好気性条件下に培養することにより産生されるホスホリ
パーセＡ、阻害作用を有する生理活性物質に関するもの
である。また、本発明は、該化合物を産生ずるチェラビ
ア属に属する菌株、例えばチェラビア・テリコーラＲＦ
−１４３株またはその変異体を培養し、培養液から該化
合物を採取することを特徴とする該化合物の製造方法に
関するものである。
「従来技術および発明か解決しようとする課題１ホスホ
リパーセＡ、は多くの生物の細胞や分泌液に含有されて
おり、リン脂質に特異的に作用するエステラーゼであっ
て、１，２−ジアシルグリセロールリン脂質のＣ−２位
の脂肪酸エステルを特異的に加水分解し、リゾグリセロ
リン脂質と脂肪酸とを生成することが知られている。そ
の酵素活性に関連して、神経、筋肉、心臓への毒性作用
、抗凝固作用を有し、痙彎、低血圧、溶血、出血、浮腫
などを誘発し得ることが指摘されており、その他の疾患
にも直接または間接的に関与している可能性かある。し
たかって、十スホリパーセＡ。
リパーセＡ、は多くの生物の細胞や分泌液に含有されて
おり、リン脂質に特異的に作用するエステラーゼであっ
て、１，２−ジアシルグリセロールリン脂質のＣ−２位
の脂肪酸エステルを特異的に加水分解し、リゾグリセロ
リン脂質と脂肪酸とを生成することが知られている。そ
の酵素活性に関連して、神経、筋肉、心臓への毒性作用
、抗凝固作用を有し、痙彎、低血圧、溶血、出血、浮腫
などを誘発し得ることが指摘されており、その他の疾患
にも直接または間接的に関与している可能性かある。し
たかって、十スホリパーセＡ。
の酵素活性に対する阻害物質か得られれば、該酵素の作
用に起因または関連する様々な病態を制限し、治療する
ことかできると考えられる。従来知られているホスホリ
バーセＡ、阻害物質には、メパクリン、ｐ−プロモフェ
ナノルブロミドなとがあるか、新たな有効物質が侍たれ
ている。
用に起因または関連する様々な病態を制限し、治療する
ことかできると考えられる。従来知られているホスホリ
バーセＡ、阻害物質には、メパクリン、ｐ−プロモフェ
ナノルブロミドなとがあるか、新たな有効物質が侍たれ
ている。
３課題を解決するための手段二
本発明者らは、先に、チェラビア・テリコーラＲＦ−１
４３株か産生するチェロンンαおよびβか優れたホスホ
リパーセＡ２阻害活性を有することを見い出しこれを特
許出願したか（特騨平１−１０９９３９）、更に研究を
続けた結果、上記菌株がチェロ／ンとは構造を異にする
新規なホスホリパーセＡ、阻害物質を生産していること
を見い出Ｌ２かつ、その構造を決定することにより、本
発明を完成したものである。
４３株か産生するチェロンンαおよびβか優れたホスホ
リパーセＡ２阻害活性を有することを見い出しこれを特
許出願したか（特騨平１−１０９９３９）、更に研究を
続けた結果、上記菌株がチェロ／ンとは構造を異にする
新規なホスホリパーセＡ、阻害物質を生産していること
を見い出Ｌ２かつ、その構造を決定することにより、本
発明を完成したものである。
即ち、本発明は、チェラビア・テリコーラＲＦ−１４３
株を培養することにより産生され得る、ホスホリパーセ
Ａ２阻害作用を有する生理活性物質である化合物および
その製造方法を提供するものである。
株を培養することにより産生され得る、ホスホリパーセ
Ａ２阻害作用を有する生理活性物質である化合物および
その製造方法を提供するものである。
本発明の化合物の構造式および物理化学的性状を以下に
列挙する。
列挙する。
構造式
％式％
（１）分子式： ＣｓｚＨａｇｏ ｔ。
（２）融点・１９４〜１９７°Ｃ
（３）外観、無色粉末
（４）Ｓ ＩＭＳ（ｍ／ｚ）： １１３１（ＭＨ”）（
５）ＨＲＭＳ（ａ＋／ｚ） 実測値： １１３１．４２２６（ＭＨ”）計算値：１１
３１．４２２２ （６）ＩＲ（ＫＢｒ）：３４１０，１７４０゜１６５０
．１６１０．１５７５，１４６０゜１１４３．１０９４
，１０７４，９８６゜７９０ｃｙｔ−’（第１図参照ン （７） ＵＶ（ｎｍ（ｇ）） ： ２７６（３９，７６
０）。
５）ＨＲＭＳ（ａ＋／ｚ） 実測値： １１３１．４２２６（ＭＨ”）計算値：１１
３１．４２２２ （６）ＩＲ（ＫＢｒ）：３４１０，１７４０゜１６５０
．１６１０．１５７５，１４６０゜１１４３．１０９４
，１０７４，９８６゜７９０ｃｙｔ−’（第１図参照ン （７） ＵＶ（ｎｍ（ｇ）） ： ２７６（３９，７６
０）。
３０６（肩、１１，６９０ＸＭｅＯＨ）； ２７６（４
０，２１０）、３０６（肩、１０，７１５Ｘ希ＨｃＩ２
−ＭｅＯＨ） （８）溶解性・ジメチルスルホキシド、メタノール、ク
ロロホルムおよび酢酸エチルに可溶、ｎｍへ牛サン、エ
ーテル、石油エーテルおよび水に不溶 （９）呈色反応 ＦＣＣ（２３・陽性 ニンヒドリン：陰性 坂ロ：陰性 エールリッヒ：陰性 （１０）薄層クロマトグラフィーＲｆ値（ノリ力ゲルＦ
、５４（メルク））。
０，２１０）、３０６（肩、１０，７１５Ｘ希ＨｃＩ２
−ＭｅＯＨ） （８）溶解性・ジメチルスルホキシド、メタノール、ク
ロロホルムおよび酢酸エチルに可溶、ｎｍへ牛サン、エ
ーテル、石油エーテルおよび水に不溶 （９）呈色反応 ＦＣＣ（２３・陽性 ニンヒドリン：陰性 坂ロ：陰性 エールリッヒ：陰性 （１０）薄層クロマトグラフィーＲｆ値（ノリ力ゲルＦ
、５４（メルク））。
りｏｎネルム ： ＭｅＯＨ： Ｈ，０（６２：２
５：２）１媒系 ：ｏ、ｏｇりａｎネルム ： Ｅｔ
ＯＨ（２：１）溶媒系 ： ０．０６りａ吋ルＡ
： ＥｔＯＨ： １０％酢酸（４： ７ ： ２）溶媒
系： ０．４９（１１）カスクロマトグラフィー（Ｒ
ｔ（分））Ｅカラム ヌクレオンル５ｃ、、４６φＸ１
５０ｘｍ。
５：２）１媒系 ：ｏ、ｏｇりａｎネルム ： Ｅｔ
ＯＨ（２：１）溶媒系 ： ０．０６りａ吋ルＡ
： ＥｔＯＨ： １０％酢酸（４： ７ ： ２）溶媒
系： ０．４９（１１）カスクロマトグラフィー（Ｒ
ｔ（分））Ｅカラム ヌクレオンル５ｃ、、４６φＸ１
５０ｘｍ。
移動相 ＣＨ３ＣＮ： ０．１％Ｈ３Ｐ０．（７６・２
４）。
４）。
流速：２．Ｏｍ（１／分
検出：ＵＶ２５４ｎｍ’ｊ： ７．７
本発明化合物の塩としては、Ｎａ、になどアルカリ金属
、Ｍｇ、Ｃａなどアルカリ土類金属、アンモニアなどの
有機塩基なと本発明化合物のカルボキシ基と塩を形成し
得るすへての塩基との塩が例示され、製薬上許容し得る
塩が好ましい。
、Ｍｇ、Ｃａなどアルカリ土類金属、アンモニアなどの
有機塩基なと本発明化合物のカルボキシ基と塩を形成し
得るすへての塩基との塩が例示され、製薬上許容し得る
塩が好ましい。
ホスホリパーセＡ２阻害物質である本発明化合物を産生
ずるチェラビア・テリコーラＲＦ−１４３株は、通商産
業省工業技術院微生物工業技術研究所に、受託番号微工
研条寄第２１９６号の下で寄託されている（寄託臼 昭
和６３年１２月１９日）。
ずるチェラビア・テリコーラＲＦ−１４３株は、通商産
業省工業技術院微生物工業技術研究所に、受託番号微工
研条寄第２１９６号の下で寄託されている（寄託臼 昭
和６３年１２月１９日）。
本発明で使用されるチェラビア・テリコーラＲＦｉ４３
の菌学的性状は以下の通りである。
の菌学的性状は以下の通りである。
ＲＦ−１４３株の栄養菌糸はコーンミール寒天上で肉眼
的に白色を呈する。子のう果（ａｓｃｏｃａｒｐ）は寒
天培地の表面に形成され、その形は球形て茶黒色を呈す
る。その大きさは直径１００〜３００μｍで、外壁の表
面組織（ｔｅｘｕｔｒａ ｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄｅａ）
は茶色である。子のうは３０〜３５Ｘ１５〜１７μ肩の
大きさで、洋す／形を示し、その中に８個の子のう胞子
を有する。子のうは成熟時には溶解する。子のう胞子は
幅の広い紡錘形をしており、オリーブ色から茶灰色を呈
しその一端に１個の発芽孔を有する。子のう胞子の大き
さは１２〜１８Ｘ６〜８μ肩である。本閑の不完全世代
は認められない。
的に白色を呈する。子のう果（ａｓｃｏｃａｒｐ）は寒
天培地の表面に形成され、その形は球形て茶黒色を呈す
る。その大きさは直径１００〜３００μｍで、外壁の表
面組織（ｔｅｘｕｔｒａ ｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄｅａ）
は茶色である。子のうは３０〜３５Ｘ１５〜１７μ肩の
大きさで、洋す／形を示し、その中に８個の子のう胞子
を有する。子のうは成熟時には溶解する。子のう胞子は
幅の広い紡錘形をしており、オリーブ色から茶灰色を呈
しその一端に１個の発芽孔を有する。子のう胞子の大き
さは１２〜１８Ｘ６〜８μ肩である。本閑の不完全世代
は認められない。
以上の性状からＲ１−１４３株はチェラビア・テリコー
ラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒｒｉｃｏｌａ”）と同
定された。
ラ（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｔｅｒｒｉｃｏｌａ”）と同
定された。
参考文献
１） シー・タブリュー・エモンズ（Ｃ，Ｗ、 Ｅｍｍ
。
。
ｎｓ）、Ｂｕｌｌ、 Ｔｏｒｒｅｙ Ｂｏｔ、 Ｃ１ｕ
ｂ ５７．１２４２） シー・トケノト（Ｇ、 Ｄｏｇ
ｕｅｔ）、Ｒｅｖ、 Ｍｙｃｏ１２１、 ５ｕｐｐ１．
Ｃｏ１ｏｎｉａｌ １． ２（１９５６）３ン
／−・フ゛−ス（Ｃ，Ｂｏｏｔｈ）、１ｌｙｃｏ１．
Ｐａｐ８３、 ７（１９６０ ４） ニス・ウタカワ（Ｓ、 Ｕｄａｇａｗａ）、Ｔｒ
ａｎｓＭｙｃｏｌ、 Ｓｏｃ、 Ｊａｐ、 ４．
９９（１９６３）５） シェイ・ニー・ホン・アーク
ス（Ｊ、Ａν○ｎＡｒｘ）、 ５ｔｕｄ、 Ｍｙｃｏ
ｌ、 ８． ８（１９７５）チェラビア・テリコーラ
も菌類の特徴として、突然変異を起こす可能性かある。
ｂ ５７．１２４２） シー・トケノト（Ｇ、 Ｄｏｇ
ｕｅｔ）、Ｒｅｖ、 Ｍｙｃｏ１２１、 ５ｕｐｐ１．
Ｃｏ１ｏｎｉａｌ １． ２（１９５６）３ン
／−・フ゛−ス（Ｃ，Ｂｏｏｔｈ）、１ｌｙｃｏ１．
Ｐａｐ８３、 ７（１９６０ ４） ニス・ウタカワ（Ｓ、 Ｕｄａｇａｗａ）、Ｔｒ
ａｎｓＭｙｃｏｌ、 Ｓｏｃ、 Ｊａｐ、 ４．
９９（１９６３）５） シェイ・ニー・ホン・アーク
ス（Ｊ、Ａν○ｎＡｒｘ）、 ５ｔｕｄ、 Ｍｙｃｏ
ｌ、 ８． ８（１９７５）チェラビア・テリコーラ
も菌類の特徴として、突然変異を起こす可能性かある。
そのような突然変異体は、自然発生的にも出現するか、
当業者周知の物理的または化学的な方法で容易に誘導す
ることかできる。従って、充分量の本発明化合物を産生
ずる能力を保持、しているチェラビア・テリコーラＲＦ
−１４３の変異体もまた本発明の範囲に包含されるとい
うことか当業者には理解されるであろう。
当業者周知の物理的または化学的な方法で容易に誘導す
ることかできる。従って、充分量の本発明化合物を産生
ずる能力を保持、しているチェラビア・テリコーラＲＦ
−１４３の変異体もまた本発明の範囲に包含されるとい
うことか当業者には理解されるであろう。
チェラビア・テリコーラＲＦ−１４３の培養には、通常
の培養法を利用することかできる。適当な炭素源、窒素
源、無機塩、および微量金属等の存在下、好気性条件下
で液中培養することか好ましい。通常、チェラビア・テ
リコーラＲＦ−１４３を温度約２０〜４０°Ｃ１好まし
くは２８°Ｃて通気しなから振盪フラスコ培養すると、
約１〜１０日間培養すればよい。次いて、培養物からの
生成物の分離における当業者既知の方法で本発明化合物
を分離すればよい。即ち、培養物を濾過して濾液および
沈殿（菌体成分）をそれぞれ適当な溶媒で抽出し、得ら
れた抽出液を濃縮して溶媒抽出、クロマトグラフィー処
理等によって活性物質を単離する。
の培養法を利用することかできる。適当な炭素源、窒素
源、無機塩、および微量金属等の存在下、好気性条件下
で液中培養することか好ましい。通常、チェラビア・テ
リコーラＲＦ−１４３を温度約２０〜４０°Ｃ１好まし
くは２８°Ｃて通気しなから振盪フラスコ培養すると、
約１〜１０日間培養すればよい。次いて、培養物からの
生成物の分離における当業者既知の方法で本発明化合物
を分離すればよい。即ち、培養物を濾過して濾液および
沈殿（菌体成分）をそれぞれ適当な溶媒で抽出し、得ら
れた抽出液を濃縮して溶媒抽出、クロマトグラフィー処
理等によって活性物質を単離する。
本発明に係る化合物のホスホリバー上Ａ２５０％阻害濃
度（ホスホリバーセＡ、活性を５０％阻害する濃度）は
、ブタ膵臓由来のホスホリパーゼＡ２に対しては３０μ
９／ｙＱ、ラット血小板由来のホスホリパーゼＡ、に対
しては０．０１４μ９／１ｇである。従って、本発明の
化合物は、ホスホリパーゼＡ、の酵素活性に起因する様
々な疾患の予防および治療に有用と考えられる。
度（ホスホリバーセＡ、活性を５０％阻害する濃度）は
、ブタ膵臓由来のホスホリパーゼＡ２に対しては３０μ
９／ｙＱ、ラット血小板由来のホスホリパーゼＡ、に対
しては０．０１４μ９／１ｇである。従って、本発明の
化合物は、ホスホリパーゼＡ、の酵素活性に起因する様
々な疾患の予防および治療に有用と考えられる。
以下に実施例を挙げ、本発明の詳細な説明する。
実施例１
１）発酵
チェラビア・テリコーラＲＦ−１４３Ｋ（微工研条寄第
２１９６号）を７・レインヨブトウ糖寒天斜面で７〜１
０日間、２８°Ｃで培養し、−斜面の全菌体および胞子
を２Ｌ容量のエルシンマイヤーフラスコ中の培地８００
＋（（培地組成 ブドウ糖２０％、ポリペプトン１０％
、肉エキス０３％、酵母エキス０２％、食塩０１％、ｐ
Ｈ７，０）に植菌した。植菌されたフラスコを２８°Ｃ
て２日間振盪培養した。上記培養液（８００肩のを２Ｏ
Ｌの上記組成の培地を含む３０Ｌのンヤー・）７−メン
タ−に加え、２８°Ｃて１日間、通気撹拌培養を行った
（通気量２０Ｌ／分、撹拌１５０ｒｐ＋ｎ）。
２１９６号）を７・レインヨブトウ糖寒天斜面で７〜１
０日間、２８°Ｃで培養し、−斜面の全菌体および胞子
を２Ｌ容量のエルシンマイヤーフラスコ中の培地８００
＋（（培地組成 ブドウ糖２０％、ポリペプトン１０％
、肉エキス０３％、酵母エキス０２％、食塩０１％、ｐ
Ｈ７，０）に植菌した。植菌されたフラスコを２８°Ｃ
て２日間振盪培養した。上記培養液（８００肩のを２Ｏ
Ｌの上記組成の培地を含む３０Ｌのンヤー・）７−メン
タ−に加え、２８°Ｃて１日間、通気撹拌培養を行った
（通気量２０Ｌ／分、撹拌１５０ｒｐ＋ｎ）。
次に上記の培養液６Ｌをバレイ／ヨ浸出液（２００ｇ／
Ｌ ）およびショ糖（２０ｇ／Ｌ）組成の培地（ｐＨ
無修正）１５０Ｌを含む２５０Ｌ発酵タンクに移した。
Ｌ ）およびショ糖（２０ｇ／Ｌ）組成の培地（ｐＨ
無修正）１５０Ｌを含む２５０Ｌ発酵タンクに移した。
発酵は、２８°Ｃて、開始時から１６時間までは１２
Ｏｒｐｍ、その後は３７０ ｒｐｍで撹拌し、通気量は
１５０Ｌ／分（１，ＯＶＶＭ）て７日間通気撹拌培養を
行った。
Ｏｒｐｍ、その後は３７０ ｒｐｍで撹拌し、通気量は
１５０Ｌ／分（１，ＯＶＶＭ）て７日間通気撹拌培養を
行った。
２）単離
上記１）で得た発酵液３５６Ｌを希塩酸でｐＨ２゜５に
調整し、ろ過した。菌体部分をアセトン１０８Ｌで抽出
、抽出液（ｐＨ３，８）を減圧下で濃縮した。水層（３
０Ｌ）をｐＨ２，５に調整し、酢酸エチル（２５Ｌ）で
抽出した。抽出液を減圧下で濃縮し、石油エーテル（２
Ｌ）を加えて沈澱を生じさせた。
調整し、ろ過した。菌体部分をアセトン１０８Ｌで抽出
、抽出液（ｐＨ３，８）を減圧下で濃縮した。水層（３
０Ｌ）をｐＨ２，５に調整し、酢酸エチル（２５Ｌ）で
抽出した。抽出液を減圧下で濃縮し、石油エーテル（２
Ｌ）を加えて沈澱を生じさせた。
得られた粗抽出物４４８９をアセトン（３，６Ｌ）に溶
解し、２００ｍＭ リン酸バッフｙ−（ＰＢ）（ｐＨ７
５，８４Ｌ）を加え、これをＣＨＰ−２０Ｐカラム（２
ＯＬ）にかけた。アセトン ３％ＮａＣＱ−２０ｍＭ
ＰＢ（ｐＨ７，５）−３： ７の混液（１０Ｌ）で洗浄
し、次いてアセトン：３％ＮａＣ（！−２０ｍＭ ＰＢ
（ｐＨ７，５）−３： ７の混液（３０Ｌ）とアセトン
： ２０ｍＭ ＰＢ（ｐＨ７，５）＝７ ： ３の混液
（３０Ｌ）とのりニア−グラジェントにより溶出した。
解し、２００ｍＭ リン酸バッフｙ−（ＰＢ）（ｐＨ７
５，８４Ｌ）を加え、これをＣＨＰ−２０Ｐカラム（２
ＯＬ）にかけた。アセトン ３％ＮａＣＱ−２０ｍＭ
ＰＢ（ｐＨ７，５）−３： ７の混液（１０Ｌ）で洗浄
し、次いてアセトン：３％ＮａＣ（！−２０ｍＭ ＰＢ
（ｐＨ７，５）−３： ７の混液（３０Ｌ）とアセトン
： ２０ｍＭ ＰＢ（ｐＨ７，５）＝７ ： ３の混液
（３０Ｌ）とのりニア−グラジェントにより溶出した。
この溶出により下表のごとくＡ分画（２２０９）、Ｂ分
画＜２４．６９）、Ｃ分画（１０８９）およびＤ分画（
１７，６９）を得、Ｂ分画を更に次の様に処理した。
画＜２４．６９）、Ｃ分画（１０８９）およびＤ分画（
１７，６９）を得、Ｂ分画を更に次の様に処理した。
分画 Ｆｒ、Ｎｏ 容量（Ｌ）−１〜 ７
３．２ 八 ８〜１８ ８１ ８ １９〜２６ ３６ Ｃ３０〜３３ ４８ Ｄ ３４〜３５ ９．０ Ｄ分画（８，８９）をセファデックスＬＨ−２０カラム
（１２６φ×９５Ｃ肩、５０４費Ｑメタノール充填、４
．５９／分画）にかけ、分画９６〜１１０を集め減圧下
で濃縮した。得られた残留物１４４ｍｇから１３Ｂｘｔ
ｉをとり、調製用高速液体クロマトグラフィーＥカラム
ヌクレオシルアＣ，１Ｉ（２，０φＸ ２０ ｃｍ）
、溶出液・０．１％ リン酸含有６３％水性ＣＨ３ＣＮ
→０．１％ リン酸含有８７％水性ＣＨ３ＣＨによるリ
ニアーグラジェント、流速：１８Ｊｌ！＋２／分、検出
：ＵＶ２４０ｎｍ］にかけた。
３．２ 八 ８〜１８ ８１ ８ １９〜２６ ３６ Ｃ３０〜３３ ４８ Ｄ ３４〜３５ ９．０ Ｄ分画（８，８９）をセファデックスＬＨ−２０カラム
（１２６φ×９５Ｃ肩、５０４費Ｑメタノール充填、４
．５９／分画）にかけ、分画９６〜１１０を集め減圧下
で濃縮した。得られた残留物１４４ｍｇから１３Ｂｘｔ
ｉをとり、調製用高速液体クロマトグラフィーＥカラム
ヌクレオシルアＣ，１Ｉ（２，０φＸ ２０ ｃｍ）
、溶出液・０．１％ リン酸含有６３％水性ＣＨ３ＣＮ
→０．１％ リン酸含有８７％水性ＣＨ３ＣＨによるリ
ニアーグラジェント、流速：１８Ｊｌ！＋２／分、検出
：ＵＶ２４０ｎｍ］にかけた。
保持時間９分（保持容量：３２４ｚのの分画を減圧下で
濃縮し、残留物を酢酸エチルで抽出し、抽出液を飽和食
塩水で洗浄した後Ｎａ、Ｓ０４で乾燥し、減圧下に蒸発
乾固して得られる残留物を酢酸エチル−石油エーテルか
ら沈澱させて本発明化合物８５ｚｇを得た。この化合物
は、先に示した物理化学的性状を示した。
濃縮し、残留物を酢酸エチルで抽出し、抽出液を飽和食
塩水で洗浄した後Ｎａ、Ｓ０４で乾燥し、減圧下に蒸発
乾固して得られる残留物を酢酸エチル−石油エーテルか
ら沈澱させて本発明化合物８５ｚｇを得た。この化合物
は、先に示した物理化学的性状を示した。
以下の実験例に示す方法で本発明化合物のホスホリパー
ゼＡ、阻害活性を調べた。
ゼＡ、阻害活性を調べた。
実験例１
方法
基質には、Ｌ−３−ホスファチジルエタノールアミン、
］−］バルミトイルー２−１−”Ｃ］リルオイノ喧Ａ
ｍｅｒｓｈａｒｆ１社、 ５９ ｍＣｉ／ ｍｍｏｌ
）を、Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン（Ｓ
ｉｇｍａ社、卵白由来）により希釈（２，ＯＯＯｄｐｍ
／ｎｍｏυし、これをソニケートしたものを用いた。Ｐ
ＬＡ、には、豚膵臓由来およびラット血小板由来のもの
を使用した。反応は、トリスバッファー（０，１Ｍ。
］−］バルミトイルー２−１−”Ｃ］リルオイノ喧Ａ
ｍｅｒｓｈａｒｆ１社、 ５９ ｍＣｉ／ ｍｍｏｌ
）を、Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン（Ｓ
ｉｇｍａ社、卵白由来）により希釈（２，ＯＯＯｄｐｍ
／ｎｍｏυし、これをソニケートしたものを用いた。Ｐ
ＬＡ、には、豚膵臓由来およびラット血小板由来のもの
を使用した。反応は、トリスバッファー（０，１Ｍ。
ｐＨ７，４）、ＣａＣＱ−（３ｍＭ）の溶液中にＰＬＡ
、、および基質調整液を加え、３７°Ｃで２０分間反応
後にドールズ試薬１．２５ｆｆ（！を入れ直ちに撹拌し
反応を止めた。これに蒸留水０．５ｊｌＱとｎ−ヘプタ
ン０．８ｊ１１２を加え撹拌後遠心し、上層を別に分取
した。さらにｎ−ヘプタン０．８１と７リカケルを加え
撹拌後、遠心し上清をバイアル瓶に分取し、これにトル
エンカクテルを加え、液体シンチレーンヨンカウンター
によりＰＬＡ、によって遊離されてくる脂肪酸量を測定
した。
、、および基質調整液を加え、３７°Ｃで２０分間反応
後にドールズ試薬１．２５ｆｆ（！を入れ直ちに撹拌し
反応を止めた。これに蒸留水０．５ｊｌＱとｎ−ヘプタ
ン０．８ｊ１１２を加え撹拌後遠心し、上層を別に分取
した。さらにｎ−ヘプタン０．８１と７リカケルを加え
撹拌後、遠心し上清をバイアル瓶に分取し、これにトル
エンカクテルを加え、液体シンチレーンヨンカウンター
によりＰＬＡ、によって遊離されてくる脂肪酸量を測定
した。
阻害活性を酵素対照（コントロール）の値に対するパー
セント（％）で表し、これより５０％阻害濃度を算出し
た。
セント（％）で表し、これより５０％阻害濃度を算出し
た。
結男
ホスホリパーゼＡ、の活性を５０％阻害する濃度は、ブ
タ膵臓由来のホスホリパーゼＡ、に対しては３０μ９ｈ
Ｑ、ラット血小板由来のホスホリパーゼＡ、に対しては
０．０１４μ９／１１２であった。
タ膵臓由来のホスホリパーゼＡ、に対しては３０μ９ｈ
Ｑ、ラット血小板由来のホスホリパーゼＡ、に対しては
０．０１４μ９／１１２であった。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明化合物の赤外吸収スペクトルを示すグラ
フである。 特許出願人 塩野義製薬株式会社 代理人弁理士青山 葆（外１名）
フである。 特許出願人 塩野義製薬株式会社 代理人弁理士青山 葆（外１名）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、以下の構造式で示される化合物またはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ２、チエラビア属に属する請求項１に記載の化合物を産
生する菌株を液中好気性条件下で培養し、培養液から該
化合物を採取することを特徴とする該化合物の製造方法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2285599A JPH04159251A (ja) | 1990-10-22 | 1990-10-22 | ホスホリパーゼａ↓２阻害物質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2285599A JPH04159251A (ja) | 1990-10-22 | 1990-10-22 | ホスホリパーゼａ↓２阻害物質 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04159251A true JPH04159251A (ja) | 1992-06-02 |
Family
ID=17693631
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2285599A Pending JPH04159251A (ja) | 1990-10-22 | 1990-10-22 | ホスホリパーゼａ↓２阻害物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04159251A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0547231A4 (en) * | 1991-07-03 | 1994-06-08 | Shionogi & Co | Phospholipase a 2? inhibitor |
-
1990
- 1990-10-22 JP JP2285599A patent/JPH04159251A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0547231A4 (en) * | 1991-07-03 | 1994-06-08 | Shionogi & Co | Phospholipase a 2? inhibitor |
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