JPH0236239B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0236239B2 JPH0236239B2 JP57135534A JP13553482A JPH0236239B2 JP H0236239 B2 JPH0236239 B2 JP H0236239B2 JP 57135534 A JP57135534 A JP 57135534A JP 13553482 A JP13553482 A JP 13553482A JP H0236239 B2 JPH0236239 B2 JP H0236239B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- arg
- gly
- lys
- minutes
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/30—Naphthol derivatives, e.g. alpha-naphthyl-esters, i.e. alpha-NE, beta-naphthyl-esters, i.e. beta-NE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/70—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases the product, e.g. phenol, naphthol being diazotised in situ, e.g. with Fast Red
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96455—Kallikrein (3.4.21.34; 3.4.21.35)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/968—Plasmin, i.e. fibrinolysin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/972—Plasminogen activators
- G01N2333/9723—Urokinase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/976—Trypsin; Chymotrypsin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本発明は
（式中、R1は蛋白分解酵素の合成基質となり得
るアミノ酸またはペプチドを示し、そしてR2は
水素またはブロムを示す） で示される基質と、酵素を反応させ、酵素により
（）が水解されて生成する
るアミノ酸またはペプチドを示し、そしてR2は
水素またはブロムを示す） で示される基質と、酵素を反応させ、酵素により
（）が水解されて生成する
【式】と、
で示されるFR―ITR塩（Fast Red ITR塩、
NN′―ジエチル―４―メトキシメタニラミドジ
アゾニウム塩） とを反応させることにより色素を生成させ、その
色素の量を測ることにより酵素活性、またはその
酵素の阻害剤、賦活剤、チモーゲンを測定する方
法に関する。 ここでいう酵素とは化合物（）を水解するこ
とのできる酵素である。つまりトリプシン、キモ
トリプシン、カリクレイン、プラスミン、スロン
ビン、ウロキナーゼ、factorXa，Cl，Cl等
のセリンプロテアーゼ、その他のプロテアーゼ、
エステラーゼおよびその他化合物（）を水解す
ることのできる未知の酵素を包含する。 すなわちここでいう酵素活性の測定とは上記酵
素の測定はもちろん化合物（）を用いた未知の
酵素の測定も包含する。 未知の酵素の測定としてはたとえば血液、尿等
の電気泳動による酵素パターンの測定や、細胞染
色における本発明の使用を、その例としてあげる
ことができる。 酵素の中で、E.C.3.4.21のセリンプロテアーゼ
の測定における、本発明の使用は特に優れてい
る。 さらに、セリンプロテアーゼの中で、トリプシ
ン、キモトリプシン、カリクレイン、プラスミ
ン、スロンビン、ウロキナーゼ、factor Xa、Cl
ｓ、Clの測定における、本発明の使用は、特に
優れている。 また、それらの酵素の阻害剤、賦活剤、チモー
ゲンも測定することができる（たとえば、アンチ
スロンビン、ヘパリン、α2―プラスミンインヒ
ビター、α1―トリプシンインヒビター、ストレプ
トキナーゼ、ECV、プレカリクレイン、プラス
ミノーゲン、プロスロンビンなど）。 式（）で蛋白分解酵素の合成基質となり得る
アミノ酸またはペプチドを示すR1は、それぞれ
単独のアミノ酸または同一もしくは異なる２〜４
種のアミノ酸基からなるペプチド基で、そのＮ末
端はフリー、アシル基またはスルホニル基を有し
ている。 アミノ酸の例としては、Gly，Ala，Val，
Leu，Ile，Met，Pro，Phe，Gln，Glu，
PyroGlu，Lys，Lys（Me），Arg，TyrのＬ体、
Ｄ体、DL体があげられる。 その中でR1がＡ―R3―R4―R5―R6―CO― （Ａは水素、アシル基またはスルホニル基を示し
R3〜R5はGly，Ala，Val，Leu，Ile，Pro，
Phe，Gln，Glu，pyro Gluまたは単結合を示し R6はLys，Lys（Me），Arg，MetまたはTyrを
示す。） である基質は、その例としてあげられる Ａの好ましい例として水素、Ac、Bz、Tos、
Boc、Cbz、Dansyl、Gltがあげられる。 更に、 R1がＡ―Tyr―，Ａ―Arg，Ａ―Lys，Ａ―
Gly―Lys―，Ａ―Phe―Arg―，Ａ―Gly―Gly
―Arg―，Ａ―Leu―Gly―Arg―，Ａ―Gln―
Gly―Arg―，Ａ―pyroGlu―Gly―Arg―，Ａ―
Leu―Ala―Arg―，Ａ―Pro―Phe―Arg―，Ａ
―Val―Leu―Lys―，Ａ―Phe―Val―Arg―，
Ａ―Ile―Glu―Gly―Arg―， である基質は好ましい例としてあげられる。更に
式（）が Tos―Lys―α―NE，Ac―Tyr―
α―NE Bz―Leu―Ala―Arg―α―NE，Ac―Phe―
Arg―α―NE Ｈ―Pro―Phe―Arg―α―NE，Ac―Gly―
Lys―α―NE である基質は特に好ましい例としてあげられる。
式（）でR2は水素またはブロムで、ブロム置
換体は、６位にブロムの結合した化合物がその例
としてあげられる。 すなわち本発明の方法における化合物（）
は、上記の少なくとも１つのアミノ酸基のＣ末端
と
NN′―ジエチル―４―メトキシメタニラミドジ
アゾニウム塩） とを反応させることにより色素を生成させ、その
色素の量を測ることにより酵素活性、またはその
酵素の阻害剤、賦活剤、チモーゲンを測定する方
法に関する。 ここでいう酵素とは化合物（）を水解するこ
とのできる酵素である。つまりトリプシン、キモ
トリプシン、カリクレイン、プラスミン、スロン
ビン、ウロキナーゼ、factorXa，Cl，Cl等
のセリンプロテアーゼ、その他のプロテアーゼ、
エステラーゼおよびその他化合物（）を水解す
ることのできる未知の酵素を包含する。 すなわちここでいう酵素活性の測定とは上記酵
素の測定はもちろん化合物（）を用いた未知の
酵素の測定も包含する。 未知の酵素の測定としてはたとえば血液、尿等
の電気泳動による酵素パターンの測定や、細胞染
色における本発明の使用を、その例としてあげる
ことができる。 酵素の中で、E.C.3.4.21のセリンプロテアーゼ
の測定における、本発明の使用は特に優れてい
る。 さらに、セリンプロテアーゼの中で、トリプシ
ン、キモトリプシン、カリクレイン、プラスミ
ン、スロンビン、ウロキナーゼ、factor Xa、Cl
ｓ、Clの測定における、本発明の使用は、特に
優れている。 また、それらの酵素の阻害剤、賦活剤、チモー
ゲンも測定することができる（たとえば、アンチ
スロンビン、ヘパリン、α2―プラスミンインヒ
ビター、α1―トリプシンインヒビター、ストレプ
トキナーゼ、ECV、プレカリクレイン、プラス
ミノーゲン、プロスロンビンなど）。 式（）で蛋白分解酵素の合成基質となり得る
アミノ酸またはペプチドを示すR1は、それぞれ
単独のアミノ酸または同一もしくは異なる２〜４
種のアミノ酸基からなるペプチド基で、そのＮ末
端はフリー、アシル基またはスルホニル基を有し
ている。 アミノ酸の例としては、Gly，Ala，Val，
Leu，Ile，Met，Pro，Phe，Gln，Glu，
PyroGlu，Lys，Lys（Me），Arg，TyrのＬ体、
Ｄ体、DL体があげられる。 その中でR1がＡ―R3―R4―R5―R6―CO― （Ａは水素、アシル基またはスルホニル基を示し
R3〜R5はGly，Ala，Val，Leu，Ile，Pro，
Phe，Gln，Glu，pyro Gluまたは単結合を示し R6はLys，Lys（Me），Arg，MetまたはTyrを
示す。） である基質は、その例としてあげられる Ａの好ましい例として水素、Ac、Bz、Tos、
Boc、Cbz、Dansyl、Gltがあげられる。 更に、 R1がＡ―Tyr―，Ａ―Arg，Ａ―Lys，Ａ―
Gly―Lys―，Ａ―Phe―Arg―，Ａ―Gly―Gly
―Arg―，Ａ―Leu―Gly―Arg―，Ａ―Gln―
Gly―Arg―，Ａ―pyroGlu―Gly―Arg―，Ａ―
Leu―Ala―Arg―，Ａ―Pro―Phe―Arg―，Ａ
―Val―Leu―Lys―，Ａ―Phe―Val―Arg―，
Ａ―Ile―Glu―Gly―Arg―， である基質は好ましい例としてあげられる。更に
式（）が Tos―Lys―α―NE，Ac―Tyr―
α―NE Bz―Leu―Ala―Arg―α―NE，Ac―Phe―
Arg―α―NE Ｈ―Pro―Phe―Arg―α―NE，Ac―Gly―
Lys―α―NE である基質は特に好ましい例としてあげられる。
式（）でR2は水素またはブロムで、ブロム置
換体は、６位にブロムの結合した化合物がその例
としてあげられる。 すなわち本発明の方法における化合物（）
は、上記の少なくとも１つのアミノ酸基のＣ末端
と
【式】がエステル結合した
化合物である。
酵素と基質の反応時間と、反応温度は、酵素と
基質の反応性、量等によつて決められるが、反応
時間は一般に２時間以内であり、反応温度は一般
に20℃〜40℃である。好適には30秒〜90分で、
20゜〜37℃で反応を行う。FR―ITR塩（Fast
Red ITR塩、Ｎ，N′―ジエチル―４―メトキシ
メタニラミドジアゾニウム塩）は、次の構造をも
ち、好適には1/2ZnCl2が付加された。
基質の反応性、量等によつて決められるが、反応
時間は一般に２時間以内であり、反応温度は一般
に20℃〜40℃である。好適には30秒〜90分で、
20゜〜37℃で反応を行う。FR―ITR塩（Fast
Red ITR塩、Ｎ，N′―ジエチル―４―メトキシ
メタニラミドジアゾニウム塩）は、次の構造をも
ち、好適には1/2ZnCl2が付加された。
【式】（Ｘはハロゲンを示す）
状態で使用される。酵素により化合物（）が水
解されて生成する
解されて生成する
【式】とFR
―ITR塩とが反応することにより生成する色素は
アゾ色素であり、その際の反応時間は２時間以内
であるが、30秒〜90分の範囲でさしつかえない。 なお、基質と酵素の反応と、FR―ITR塩によ
る発色反応は順次行つてもよいし、同時に行つて
もよい。 色素の量は比色計や分光光度計等の分光的測定
または視覚的方法により測定する。分光的測定の
場合の測定波長は主に450〜550nmである。また
視覚的方法による測定は標準品との対比による方
法、電気泳動における酵素パターンの測定、細胞
染色の際などに行われる。 酵素活性を測定することは、酵素製剤の品質管
理や、臨床検査、または血中や尿中の酵素濃度に
よる各種疾患の診断等の為に非常に重要である。 その測定には種々の方法が知られているが合成
基質を用いる方法はよく使用される方法の１つで
ある。 また合成基質の中で、アミノ酸またはペプチド
のナフチルエステルは優れた基質として知られて
いる。 （特開昭54−63049、特開昭55−59151）その基
質を用い酵素活性を測定する際ここに開示されて
方法は酵素により水解され遊離するナフトールを
FVB塩（Fast Violet Ｂ塩、６―ベンズアミド
―４―メトキシ―メタ―トルイジン ジアゾニウ
ム塩）と反応させアゾ色素を生成させその量によ
り測定する方法である。この開示された方法にお
いて遊離するナフトールとFVB塩を反応させる
過程は、氷水で冷して行つている。これは低温で
反応を行わない場合、ジアゾ試薬自身が加水分解
をうけたり、ジアゾ試薬間で反応するなどの為吸
光度や極大吸収波長（λnax）のバラツキが生じる
為である。 しかしながら実施例１で示す様に本発明の方法
において遊離する
アゾ色素であり、その際の反応時間は２時間以内
であるが、30秒〜90分の範囲でさしつかえない。 なお、基質と酵素の反応と、FR―ITR塩によ
る発色反応は順次行つてもよいし、同時に行つて
もよい。 色素の量は比色計や分光光度計等の分光的測定
または視覚的方法により測定する。分光的測定の
場合の測定波長は主に450〜550nmである。また
視覚的方法による測定は標準品との対比による方
法、電気泳動における酵素パターンの測定、細胞
染色の際などに行われる。 酵素活性を測定することは、酵素製剤の品質管
理や、臨床検査、または血中や尿中の酵素濃度に
よる各種疾患の診断等の為に非常に重要である。 その測定には種々の方法が知られているが合成
基質を用いる方法はよく使用される方法の１つで
ある。 また合成基質の中で、アミノ酸またはペプチド
のナフチルエステルは優れた基質として知られて
いる。 （特開昭54−63049、特開昭55−59151）その基
質を用い酵素活性を測定する際ここに開示されて
方法は酵素により水解され遊離するナフトールを
FVB塩（Fast Violet Ｂ塩、６―ベンズアミド
―４―メトキシ―メタ―トルイジン ジアゾニウ
ム塩）と反応させアゾ色素を生成させその量によ
り測定する方法である。この開示された方法にお
いて遊離するナフトールとFVB塩を反応させる
過程は、氷水で冷して行つている。これは低温で
反応を行わない場合、ジアゾ試薬自身が加水分解
をうけたり、ジアゾ試薬間で反応するなどの為吸
光度や極大吸収波長（λnax）のバラツキが生じる
為である。 しかしながら実施例１で示す様に本発明の方法
において遊離する
【式】とFR
―ITR塩を反応させる過程で、０℃〜40℃におい
て吸光度や極大吸収波長のバラツキを生じること
はない。 また開示された方法において遊離するナフトー
ルとFVB塩を反応させる過程の時間は正確に行
う必要がある、これはこの反応時間により吸光度
に差を生じる為である。しかしながら本発明の方
法における、遊離する
て吸光度や極大吸収波長のバラツキを生じること
はない。 また開示された方法において遊離するナフトー
ルとFVB塩を反応させる過程の時間は正確に行
う必要がある、これはこの反応時間により吸光度
に差を生じる為である。しかしながら本発明の方
法における、遊離する
【式】
とFR―ITR塩の反応は、すみやかに完結し、ま
たその後においても吸光度の変化は認められな
い。 この様に、開示された方法は酵素と基質の反応
過程の温度（通常20〜40℃）から発色反応過程の
温度（０℃付近）へ、温度を変更し、その測定の
際は、正確な時間を決める必要があつた。 しかし本発明の方法は、酵素と基質の反応過程
の温度と発色過程の温度への変更が必要なくな
り、また発色過程の正確な時間設定の必要がなく
なつた事に大きな利点がある。 このことは本発明により操作方法が非常に簡単
になつたことのみならず操作過程で温変更が困難
である自動分析装置への適用が可能になつたこと
に大きな意義がある。 また開示された方法による尿中酵素活性の測定
においてしばしば測定値にバラツキのあることが
観察されていた。このことは、尿中に含まれてい
る亜硝酸イオンがその原因であることが判明し
た。しかしながら尿中に、微生物が混在している
場合、亜硝酸イオンが生成することは避けられな
いことであり、この尿中酵素と無関係である亜硝
酸の存在は、尿中酵素の測定における開示された
方法の使用の大きな障害となつていた。 （日本臨床37巻夏季増刊号、2668，1979） しかしながら実施例２で示す通り本発明の方法
は、この亜硝酸イオンに影響されないことに大き
な利点を有している。 また酵素と基質とを反応させた後、発色させる
過程に移る際、反応液を酸性にして酵素と基質と
の反応を止める場合が多いが、FVB塩を使用す
る開示された方法では反応液が酸性（PH１〜４）
の場合発色反応は進化しない。しかしながら本発
明の方法によればこの酸性領域でも発色が可能で
ある。すなわち本発明の方法によれば、酵素と基
質とを反応させた後、酸性にすることによりこの
反応を停止させてそのそのままの状態で発色過程
へ移行できるという特長を有している。 このように発色剤としてFR―ITR塩を用いた
本発明の方法は多くの非常に優れた利点を有する
酵素活性測定方法である。 なお、特許請求の範囲、発明の詳細な説明中の
略語は以下の意味を示す。
たその後においても吸光度の変化は認められな
い。 この様に、開示された方法は酵素と基質の反応
過程の温度（通常20〜40℃）から発色反応過程の
温度（０℃付近）へ、温度を変更し、その測定の
際は、正確な時間を決める必要があつた。 しかし本発明の方法は、酵素と基質の反応過程
の温度と発色過程の温度への変更が必要なくな
り、また発色過程の正確な時間設定の必要がなく
なつた事に大きな利点がある。 このことは本発明により操作方法が非常に簡単
になつたことのみならず操作過程で温変更が困難
である自動分析装置への適用が可能になつたこと
に大きな意義がある。 また開示された方法による尿中酵素活性の測定
においてしばしば測定値にバラツキのあることが
観察されていた。このことは、尿中に含まれてい
る亜硝酸イオンがその原因であることが判明し
た。しかしながら尿中に、微生物が混在している
場合、亜硝酸イオンが生成することは避けられな
いことであり、この尿中酵素と無関係である亜硝
酸の存在は、尿中酵素の測定における開示された
方法の使用の大きな障害となつていた。 （日本臨床37巻夏季増刊号、2668，1979） しかしながら実施例２で示す通り本発明の方法
は、この亜硝酸イオンに影響されないことに大き
な利点を有している。 また酵素と基質とを反応させた後、発色させる
過程に移る際、反応液を酸性にして酵素と基質と
の反応を止める場合が多いが、FVB塩を使用す
る開示された方法では反応液が酸性（PH１〜４）
の場合発色反応は進化しない。しかしながら本発
明の方法によればこの酸性領域でも発色が可能で
ある。すなわち本発明の方法によれば、酵素と基
質とを反応させた後、酸性にすることによりこの
反応を停止させてそのそのままの状態で発色過程
へ移行できるという特長を有している。 このように発色剤としてFR―ITR塩を用いた
本発明の方法は多くの非常に優れた利点を有する
酵素活性測定方法である。 なお、特許請求の範囲、発明の詳細な説明中の
略語は以下の意味を示す。
【表】
｜
−NH−CH−CO−
｜
−NH−CH−CO−
【表】
｜
CH３
｜
CH３
【表】
次に実施例をあげ本発明の酵素活性測定方法を
更に詳細に説明する。 特記しない限り、実施例に記載されているアミ
ノ酸は全てＬ体である。 実施例 １ 基質としてＨ―Pro―Phe―Arg―α―NEを用
い、発色剤としてFR―ITR塩またはFVB塩を
用い、尿中カリクレイン活性を測定する時の反
応温度、反応時間の及ぼす影響 0.015％Sodium dodecyl Sulfate（SDS）を含
む50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.0mlに、
尿0.1ml及び1.5mM Ｈ―Pro―Phe―Arg―α―
NEの水溶液0.1mlを加え、37℃で30分間インキユ
ベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液
0.1mlまたは１％FVB塩水溶液0.1mlを加えた後、
それぞれ０℃で10分間、25℃で10分間、25℃で30
分間、37℃で10分間、37℃で30分間と条件を変え
て反応させ、その後氷酢酸1.0mlを加えて、吸光
度を測定した。結果を表１に示す。
更に詳細に説明する。 特記しない限り、実施例に記載されているアミ
ノ酸は全てＬ体である。 実施例 １ 基質としてＨ―Pro―Phe―Arg―α―NEを用
い、発色剤としてFR―ITR塩またはFVB塩を
用い、尿中カリクレイン活性を測定する時の反
応温度、反応時間の及ぼす影響 0.015％Sodium dodecyl Sulfate（SDS）を含
む50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.0mlに、
尿0.1ml及び1.5mM Ｈ―Pro―Phe―Arg―α―
NEの水溶液0.1mlを加え、37℃で30分間インキユ
ベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液
0.1mlまたは１％FVB塩水溶液0.1mlを加えた後、
それぞれ０℃で10分間、25℃で10分間、25℃で30
分間、37℃で10分間、37℃で30分間と条件を変え
て反応させ、その後氷酢酸1.0mlを加えて、吸光
度を測定した。結果を表１に示す。
【表】
この結果からわかる様にFVB塩を用いた方法
は、反応温度、反応時間によつて吸光度、極大吸
収波長（λnax）に変化を生じ見かけ上尿中カリク
レイン濃度が変化している様に観察されるが、
FR―ITR塩を用いた本発明の方法によれば吸光
度、極大吸収波長（λnax）はほとんど影響される
一定の値を示している。 実施例 ２ 基質としてＨ―Pro―Phe―Arg―α―NEを用
い、発色剤としてFR―ITR塩またはFVB塩を
用い、尿中カリクレイン活性を測定する時の、
亜硝酸ナトリウムの及ぼす影響 0.015％SDSを含む50mM Na Phosphate
buffer（PH7.0）1.0mlに、それぞれ０、１、２、
３、４、5mMの濃度になる様に亜硝酸ナトリウ
ムを含んだ尿0.1ml及び1.5mMH―Pro―Phe―
Arg―α―NE水溶液0.1mlを加え、37℃で30分間
インキユベートを行つた。続いてFR―ITR塩を
用いる時は、１％FR―ITR塩水溶液0.1mlを加
え、37℃で５分間反応させた後氷酢酸1.0mlを加
え475nmにおける吸光度を測定した。またFVB
塩を用いる時は、１％FVB塩水溶液0.1mlを加え
０℃で10分間反応させた後、氷酢酸1.0mlを加え
505nmにおける吸光度を測定した。 この結果を図１に示す。図中で縦軸は吸光度
を、横軸は亜硝酸ナトリウムの濃度を示す。●印
は本発明のFR―ITR塩を用いた時、〇印はFVB
塩を用いた時を示す。この結果からわかる様に、
発色剤としてFVBB塩を用いた方法は、亜硝酸
イオンの影響を受け吸光度が大きく変化し見かけ
上、尿中カリクレイン量が変化している様に観察
されるが、発色剤としてFR―ITR塩を用いた本
発明の方法は亜硝酸イオンにはほとんど影響され
ず一定の値を示している。 実施例 ３ Tos―Lys―α―NEを用いてスロンビンを測
定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（１，２，
3HIH―Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Tos―Lys―α
―NE水溶液0.2mlを加え、25℃で10分間インキユ
ベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液
0.2mlを加え、25℃で２分間反応させた後、50％
酢酸2.0mlを加えて、475nmにおける吸光度を測
定した。 この方法による測定結果を図２に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はスロンビンの量を表わして
いる。 実施例 ４ Tos―Lys―α―NEを用いてトリプシンを測
定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたトリプシン（0.25、0.5、
0.75μｇ／ml）0.1ml及び1mM Tos―Lys―α―
NE水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間インキユベ
ートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液0.2
mlを加え、25℃で５分間反応させた後、50％酢酸
2.0mlを加えて、475nmにおける吸光度を測定し
た。 この方法による測定結果を図３に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はトリプシンの量を表わして
いる。 実施例 ５ Ac―Gly―Lys―α―NEを用いてウロキナー
ゼを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたウロキナーゼ（60、120、
180、240、300IU／ml）0.1ml及び1mM Ac―Gly
―Lys―α―NE水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％FR―
ITR塩水溶液0.2mlを加え、25℃で５分間反応さ
せた後、50％酢酸2.0mlを加えて、475nmにおけ
る吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図４に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はウロキナーゼの量を表わし
ている。 実施例 ６ Ｈ―Ｄ―Val―Leu―Lys―α―NEを用いてプ
ラスミンを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたプラスミン（0.125、0.25、
0.375、0.5、0.625CU／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―
Ｄ―Val―Leu―Lys―α―NEの10％DMSO水溶
液0.2mlを加え、25℃で15分間インキユベートを
行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液0.2mlを加
え、25℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0ml
を加えて、475nmにおける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図５に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はプラスミンの量を表わして
いる。 実施例 ７ Bz―Ile―Glu―Gly―Arg―α―NEを用いて
FactorXaを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたFactorXa（0.05、0.1、
0.15、0.2U／ml）0.1ml及び1mM Bz―Ile―Glu
―Gly―Arg―α―NEの10％DMSO水溶液0.2ml
を加え、20℃で15分間インキユベートを行つた。
続いて１％FR―ITR塩水溶液0.2mlを加え、20℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0ml加えて、
475nmにおける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図６に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はFactorXaの量を表わして
いる。 実施例 ８ Ac―Gly―Lys―α―NEを用いてClを測定
する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたCl（2.5、５、7.5、10μ
ｇ／ml）0.1ml及び1mM Ac―Gly―Lys―α―
NE水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間インキユベ
ートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液0.2
mlを加え、25℃で５分間反応させた後、50％酢酸
2.0ml加えて、475nmにおける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図７に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はClの量を表わしている。 実施例 ９ Ac―Tyr―α―NEを用いてClを測定する方
法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたCl（2.5、５、7.5、10μ
ｇ／ml）0.1ml及び1mM Ac―Tyr―α―NEの10
％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間イン
キユベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水
溶液0.2mlを加え、25℃で５分間反応させた後、
50％酢酸2.0ml加えて、475nmにおける吸光度を
測定した。 この方法による測定結果を図８に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はClの量を表わしている。 実施例 10 Ac―Tyr―α―NEを用いてキモトリプシンを
測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたキモトリプシン（0.2、
0.4、0.6、0.8μｇ／ml）0.1ml及び1mM Ac―Tyr
―α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃
で15分間インキユベートを行つた。続いて１％
FR―ITR塩水溶液0.2mlを加え、25℃で５分間反
応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、475nmに
おける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図９に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はキモトリプシンの量を表わ
している。 実施例 11 Bz―Leu―Ala―Arg―α―NEを用いてスロ
ンビンを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（0.25、0.5、
0.75、1.0NIH―Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Bz―
Leu―Ala―Arg―α―NE水溶液0.2mlを加え、
25℃で15分間インキユベートを行つた。続いて１
％FR―ITR塩水溶液0.2mlを加え、25℃で５分間
反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、475nm
における吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図１０に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はスロンビンの量を表わし
ている。 実施例 12 Tos―Lys（Me）―β―NEを用いてトリプシ
ンを測定する方法 50mMトリス塩酸緩衡液（PH7.0）1.7mlに生理
食塩水に溶かしたトリプシン（0.25、0.5、0.75、
1.0μｇ／ml）0.1ml及び1mM Tos―Lys（Me）―
β―NE水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間インキ
ユベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶
液0.2mlを加え、25℃で５分間反応させた後、氷
酢酸2.0ml加えて、495nmにおける吸光度を測定
した。 この方法による測定結果を図１１に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はトリプシンの量を表わし
ている。 実施例 13 Ac―Gly―Lys―６―Br―β―NEを用いてウ
ロキナーゼを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたウロキナーゼ（300、600、
900、1200IU／ml）0.1ml及び1mM Ac―Gly―
Lys―６―Br―β―NE水溶液0.2mlを加え、25℃
で15分間インキユベートを行つた。続いて１％
FR―ITR塩水溶液0.2mlを加え、25℃で５分間反
応させた後、氷酢酸2.0mlを加えて、500nmにお
ける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図１２に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はウロキナーゼの量を表わ
している。 実施例 14 Tos―Lys―α―NEを用いてアンチスロンビ
ンを測定する方法 1IU／mlヘパリンを含む、50mM Na
Phosphate buffer（PH7.4）1.0mlに正常血漿の０、
25、50、75、100、125％のアンチスロンビンを
含む血漿1.5μ及び生理食塩水に溶かしたスロン
ビン（1.5NIH―Ｕ／ml）0.1mlを加え、37℃で10
分間インキユベート後、2mM Tos―Lys―α―
NE水溶液0.1mlを加え、37℃で10分間インキユベ
ートを行つた。続いて１％FR―ITR塩の50％酢
酸溶液0.1mlを加え、37℃で５分間反応させた後、
50％酢酸1.0mlを加て、475nmにおける吸光度を
測定した。 この方法による測定結果を図１３に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はアンチスロンビンの量
を表わしている。 実施例 15 オートアナライザーによるTos―Lys―α―
NEを用いたアンチスロンビンの測定方法 正常血漿の０、25、50、75、100、125％のアン
チスロンビスを含む血漿20μにスロンビン
（4U／ml）、ヘパリン（5U／ml）、BSA（１mg／
ml）を含む50mM Na Phosphate buffer（PH7.4）
1.0mlを加え37℃で２分間インキユベートさせた
後、１％Fast Red ITR塩を含む2mM Tos―
Lys―α―NE水溶液0.1mlを加え37℃で30秒間イ
ンキユベートさせ、50％酢酸1.0mlを添加して、
１分後の540nmでの吸光度を測定した。 なおオートアナライザーはコーバスバイオ
（Kabi社）を使用した。 この方法による測定結果を図１４に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はアンチスロンビンの量
を表わしている。 実施例 16 Ｈ―Pro―Phe―Arg―α―NEを用いて血漿プ
レカリクレインを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH6.0）2.0mlに
クエン酸加血漿（５、10、15μ）及び水に溶か
したデキストラン硫酸（分子量500000）（30μ
ｇ／ml）10μを加え、37℃で５分間インキユベ
ートを行つた後、0.1％SDSを含む2mM Ｈ―Pro
―Phe―Arg―α―NE水溶液0.2mlを加え、37℃
で10分間インキユベートを行つた。続いて１％
FR―ITR塩の50％酢酸溶液0.2mlを加え、37℃で
５分間反応させた後、50％酢酸2.0ml加えて、
475nmにおける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図１５に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸は血漿プレカリクレインの
量を表わしている。 実施例 17 Tos―Lys―α―NEを用いてスロンビンを測
定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH8.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（0.5、１、
1.5NIH―Ｕ／ml）0.1ml及び1.5mM Tos―Lys―
α―NE水溶液0.2mlを加え、37℃で10分間インキ
ユベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩の50
％酢酸溶液0.2mlを加え、37℃で５分間反応させ
た後、50％酢酸2.0ml加えて、475nmにおける吸
光度を測定した。 この方法による測定結果を図１６に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はスロンビンの量を表わし
ている。 実施例 18 電気泳動による血中酵素パターンの測定 内径４mm、長さ７cmのガラス管を用いポリアク
リルアミドゲルカラムを調製した。これに血清
40μを添加し、2mAで約50分間泳動した後、ゲ
ルを取り出した。このゲルを100mM Na
Phosphate buffer（PH7.0）に溶かした0.5mMTos
―Lys―α―NE10mlに浸し、25℃で30分間イン
キユベートし、次に１％Fast Red ITR塩水溶液
１mlを加え、25℃で10分間放置し染色した。以上
の方法により、血中酵素パターンを橙赤色の帯状
として観察することができた。 図１７に正常人血清を用いた場合の結果を示
す。 実施例 19 血液細胞の酵素活性染色法 血液塗抹標本を作り、ホルマリン蒸気で固定し
た。水洗後、0.2mM基質（Ac―Tvr―α―NE，
Tos―Lys―α―NEまたはAc―Gly―Lys―α―
NE）及び0.1％Fast Red ITR塩を含む100mM
Na phosphate buffer（PH7.0）10ml中に浸し、25
℃で90分間インキユベートを行ない、水洗を行な
い鏡検した。 表２に染色の結果を示す。
は、反応温度、反応時間によつて吸光度、極大吸
収波長（λnax）に変化を生じ見かけ上尿中カリク
レイン濃度が変化している様に観察されるが、
FR―ITR塩を用いた本発明の方法によれば吸光
度、極大吸収波長（λnax）はほとんど影響される
一定の値を示している。 実施例 ２ 基質としてＨ―Pro―Phe―Arg―α―NEを用
い、発色剤としてFR―ITR塩またはFVB塩を
用い、尿中カリクレイン活性を測定する時の、
亜硝酸ナトリウムの及ぼす影響 0.015％SDSを含む50mM Na Phosphate
buffer（PH7.0）1.0mlに、それぞれ０、１、２、
３、４、5mMの濃度になる様に亜硝酸ナトリウ
ムを含んだ尿0.1ml及び1.5mMH―Pro―Phe―
Arg―α―NE水溶液0.1mlを加え、37℃で30分間
インキユベートを行つた。続いてFR―ITR塩を
用いる時は、１％FR―ITR塩水溶液0.1mlを加
え、37℃で５分間反応させた後氷酢酸1.0mlを加
え475nmにおける吸光度を測定した。またFVB
塩を用いる時は、１％FVB塩水溶液0.1mlを加え
０℃で10分間反応させた後、氷酢酸1.0mlを加え
505nmにおける吸光度を測定した。 この結果を図１に示す。図中で縦軸は吸光度
を、横軸は亜硝酸ナトリウムの濃度を示す。●印
は本発明のFR―ITR塩を用いた時、〇印はFVB
塩を用いた時を示す。この結果からわかる様に、
発色剤としてFVBB塩を用いた方法は、亜硝酸
イオンの影響を受け吸光度が大きく変化し見かけ
上、尿中カリクレイン量が変化している様に観察
されるが、発色剤としてFR―ITR塩を用いた本
発明の方法は亜硝酸イオンにはほとんど影響され
ず一定の値を示している。 実施例 ３ Tos―Lys―α―NEを用いてスロンビンを測
定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（１，２，
3HIH―Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Tos―Lys―α
―NE水溶液0.2mlを加え、25℃で10分間インキユ
ベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液
0.2mlを加え、25℃で２分間反応させた後、50％
酢酸2.0mlを加えて、475nmにおける吸光度を測
定した。 この方法による測定結果を図２に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はスロンビンの量を表わして
いる。 実施例 ４ Tos―Lys―α―NEを用いてトリプシンを測
定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたトリプシン（0.25、0.5、
0.75μｇ／ml）0.1ml及び1mM Tos―Lys―α―
NE水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間インキユベ
ートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液0.2
mlを加え、25℃で５分間反応させた後、50％酢酸
2.0mlを加えて、475nmにおける吸光度を測定し
た。 この方法による測定結果を図３に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はトリプシンの量を表わして
いる。 実施例 ５ Ac―Gly―Lys―α―NEを用いてウロキナー
ゼを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたウロキナーゼ（60、120、
180、240、300IU／ml）0.1ml及び1mM Ac―Gly
―Lys―α―NE水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％FR―
ITR塩水溶液0.2mlを加え、25℃で５分間反応さ
せた後、50％酢酸2.0mlを加えて、475nmにおけ
る吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図４に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はウロキナーゼの量を表わし
ている。 実施例 ６ Ｈ―Ｄ―Val―Leu―Lys―α―NEを用いてプ
ラスミンを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたプラスミン（0.125、0.25、
0.375、0.5、0.625CU／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―
Ｄ―Val―Leu―Lys―α―NEの10％DMSO水溶
液0.2mlを加え、25℃で15分間インキユベートを
行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液0.2mlを加
え、25℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0ml
を加えて、475nmにおける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図５に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はプラスミンの量を表わして
いる。 実施例 ７ Bz―Ile―Glu―Gly―Arg―α―NEを用いて
FactorXaを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたFactorXa（0.05、0.1、
0.15、0.2U／ml）0.1ml及び1mM Bz―Ile―Glu
―Gly―Arg―α―NEの10％DMSO水溶液0.2ml
を加え、20℃で15分間インキユベートを行つた。
続いて１％FR―ITR塩水溶液0.2mlを加え、20℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0ml加えて、
475nmにおける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図６に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はFactorXaの量を表わして
いる。 実施例 ８ Ac―Gly―Lys―α―NEを用いてClを測定
する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたCl（2.5、５、7.5、10μ
ｇ／ml）0.1ml及び1mM Ac―Gly―Lys―α―
NE水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間インキユベ
ートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶液0.2
mlを加え、25℃で５分間反応させた後、50％酢酸
2.0ml加えて、475nmにおける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図７に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はClの量を表わしている。 実施例 ９ Ac―Tyr―α―NEを用いてClを測定する方
法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたCl（2.5、５、7.5、10μ
ｇ／ml）0.1ml及び1mM Ac―Tyr―α―NEの10
％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間イン
キユベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水
溶液0.2mlを加え、25℃で５分間反応させた後、
50％酢酸2.0ml加えて、475nmにおける吸光度を
測定した。 この方法による測定結果を図８に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はClの量を表わしている。 実施例 10 Ac―Tyr―α―NEを用いてキモトリプシンを
測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたキモトリプシン（0.2、
0.4、0.6、0.8μｇ／ml）0.1ml及び1mM Ac―Tyr
―α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃
で15分間インキユベートを行つた。続いて１％
FR―ITR塩水溶液0.2mlを加え、25℃で５分間反
応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、475nmに
おける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図９に示す。図中で
縦軸は吸光度を横軸はキモトリプシンの量を表わ
している。 実施例 11 Bz―Leu―Ala―Arg―α―NEを用いてスロ
ンビンを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（0.25、0.5、
0.75、1.0NIH―Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Bz―
Leu―Ala―Arg―α―NE水溶液0.2mlを加え、
25℃で15分間インキユベートを行つた。続いて１
％FR―ITR塩水溶液0.2mlを加え、25℃で５分間
反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、475nm
における吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図１０に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はスロンビンの量を表わし
ている。 実施例 12 Tos―Lys（Me）―β―NEを用いてトリプシ
ンを測定する方法 50mMトリス塩酸緩衡液（PH7.0）1.7mlに生理
食塩水に溶かしたトリプシン（0.25、0.5、0.75、
1.0μｇ／ml）0.1ml及び1mM Tos―Lys（Me）―
β―NE水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間インキ
ユベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩水溶
液0.2mlを加え、25℃で５分間反応させた後、氷
酢酸2.0ml加えて、495nmにおける吸光度を測定
した。 この方法による測定結果を図１１に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はトリプシンの量を表わし
ている。 実施例 13 Ac―Gly―Lys―６―Br―β―NEを用いてウ
ロキナーゼを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたウロキナーゼ（300、600、
900、1200IU／ml）0.1ml及び1mM Ac―Gly―
Lys―６―Br―β―NE水溶液0.2mlを加え、25℃
で15分間インキユベートを行つた。続いて１％
FR―ITR塩水溶液0.2mlを加え、25℃で５分間反
応させた後、氷酢酸2.0mlを加えて、500nmにお
ける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図１２に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はウロキナーゼの量を表わ
している。 実施例 14 Tos―Lys―α―NEを用いてアンチスロンビ
ンを測定する方法 1IU／mlヘパリンを含む、50mM Na
Phosphate buffer（PH7.4）1.0mlに正常血漿の０、
25、50、75、100、125％のアンチスロンビンを
含む血漿1.5μ及び生理食塩水に溶かしたスロン
ビン（1.5NIH―Ｕ／ml）0.1mlを加え、37℃で10
分間インキユベート後、2mM Tos―Lys―α―
NE水溶液0.1mlを加え、37℃で10分間インキユベ
ートを行つた。続いて１％FR―ITR塩の50％酢
酸溶液0.1mlを加え、37℃で５分間反応させた後、
50％酢酸1.0mlを加て、475nmにおける吸光度を
測定した。 この方法による測定結果を図１３に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はアンチスロンビンの量
を表わしている。 実施例 15 オートアナライザーによるTos―Lys―α―
NEを用いたアンチスロンビンの測定方法 正常血漿の０、25、50、75、100、125％のアン
チスロンビスを含む血漿20μにスロンビン
（4U／ml）、ヘパリン（5U／ml）、BSA（１mg／
ml）を含む50mM Na Phosphate buffer（PH7.4）
1.0mlを加え37℃で２分間インキユベートさせた
後、１％Fast Red ITR塩を含む2mM Tos―
Lys―α―NE水溶液0.1mlを加え37℃で30秒間イ
ンキユベートさせ、50％酢酸1.0mlを添加して、
１分後の540nmでの吸光度を測定した。 なおオートアナライザーはコーバスバイオ
（Kabi社）を使用した。 この方法による測定結果を図１４に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はアンチスロンビンの量
を表わしている。 実施例 16 Ｈ―Pro―Phe―Arg―α―NEを用いて血漿プ
レカリクレインを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH6.0）2.0mlに
クエン酸加血漿（５、10、15μ）及び水に溶か
したデキストラン硫酸（分子量500000）（30μ
ｇ／ml）10μを加え、37℃で５分間インキユベ
ートを行つた後、0.1％SDSを含む2mM Ｈ―Pro
―Phe―Arg―α―NE水溶液0.2mlを加え、37℃
で10分間インキユベートを行つた。続いて１％
FR―ITR塩の50％酢酸溶液0.2mlを加え、37℃で
５分間反応させた後、50％酢酸2.0ml加えて、
475nmにおける吸光度を測定した。 この方法による測定結果を図１５に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸は血漿プレカリクレインの
量を表わしている。 実施例 17 Tos―Lys―α―NEを用いてスロンビンを測
定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH8.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（0.5、１、
1.5NIH―Ｕ／ml）0.1ml及び1.5mM Tos―Lys―
α―NE水溶液0.2mlを加え、37℃で10分間インキ
ユベートを行つた。続いて１％FR―ITR塩の50
％酢酸溶液0.2mlを加え、37℃で５分間反応させ
た後、50％酢酸2.0ml加えて、475nmにおける吸
光度を測定した。 この方法による測定結果を図１６に示す。図中
で縦軸は吸光度を横軸はスロンビンの量を表わし
ている。 実施例 18 電気泳動による血中酵素パターンの測定 内径４mm、長さ７cmのガラス管を用いポリアク
リルアミドゲルカラムを調製した。これに血清
40μを添加し、2mAで約50分間泳動した後、ゲ
ルを取り出した。このゲルを100mM Na
Phosphate buffer（PH7.0）に溶かした0.5mMTos
―Lys―α―NE10mlに浸し、25℃で30分間イン
キユベートし、次に１％Fast Red ITR塩水溶液
１mlを加え、25℃で10分間放置し染色した。以上
の方法により、血中酵素パターンを橙赤色の帯状
として観察することができた。 図１７に正常人血清を用いた場合の結果を示
す。 実施例 19 血液細胞の酵素活性染色法 血液塗抹標本を作り、ホルマリン蒸気で固定し
た。水洗後、0.2mM基質（Ac―Tvr―α―NE，
Tos―Lys―α―NEまたはAc―Gly―Lys―α―
NE）及び0.1％Fast Red ITR塩を含む100mM
Na phosphate buffer（PH7.0）10ml中に浸し、25
℃で90分間インキユベートを行ない、水洗を行な
い鏡検した。 表２に染色の結果を示す。
【表】
−：非染色 ±〜：染色段階
実施例 20―(1)〜20―(11) 実施例 20―(1) Ｈ―pyro Glu―Gly―Arg―α―NEを用いて
スロンビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―pyro―Glu―Gly―
Arg―α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、
25℃で15分間インキユベートを行つた。続いて１
％Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加
え、37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0ml
を加えて、495nmにおける吸光度を測定した。同
時に酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操
作して得た対照液を試薬ブランクとして測定し
た。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(2) Ｈ―Leu―Gly―Arg―α―NEを用いてスロン
ビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Leu―Gly―Arg―
α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で
15分間インキユベートを行つた。続いて１％
Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、
37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加
えて、495nmにおける吸光度を測定した。同時に
酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操作し
て得た対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(3) Ｈ―Ｄ―Val―Leu―Arg―α―NEを用いてカ
リクレインを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたカリクレイン（1.0KU／
ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Ｄ―Val―Leu―Arg―
α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で
15分間インキユベートを行つた。続いて１％
Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、
37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加
えて、495nmにおける吸光度を測定した。同時に
酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操作し
て得た対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(4) Bz―Phe―Val―Arg―α―NEを用いてスロ
ンビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Bz―Phe―Val―Arg―
α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で
15分間インキユベートを行つた。続いて１％
Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、
37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加
えて、495nmにおける吸光度を測定した。同時に
酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操作し
て得た対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(5) Tos―Gly―Pro―Arg―α―NEを用いてカリ
クレインを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたカリクレイン（0.1KU／
ml）0.1ml及び1mM Tos―Gly―Pro―Arg―α
―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15
分間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(6) Ｈ―Phe―Val―Arg―α―NEを用いてスロン
ビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Phe―Val―Arg―
α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で
15分間インキユベートを行つた。続いて１％
Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、
37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加
えて、495nmにおける吸光度を測定した。同時に
酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操作し
て得た対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(7) Glt―Gly―Arg―α―NEを用いてスロンビン
を測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Glc―Gly―Arg―α―
NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(8) Ｈ―Gly―Gly―Arg―α―NEを用いてスロン
ビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Gly―Arg―α―
NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(9) Ｈ―Phe―Arg―α―NEを用いてカリクレイ
ンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたカリクレイン（0.1KU／
ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Gly―Gly―Arg―α―
NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(10) Tos―Gly―Pro―Lys―α―NEを用いてウロ
キナーゼを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたウロキナーゼ（120IU／
ml）0.1ml及び1mM Tos―Gly―Pro―Lys―α―
NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(11) Ac―Met―α―NEを用いてカリクレインを測
定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたカリクレイン（0.1KU／
ml）0.1ml及び1mM Ac―Met―α―NEの10％
DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間インキ
ユベートを行つた。続いて１％Fast Red ITR塩
の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃で５分間反
応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、495nmに
おける吸光度を測定した。同時に酵素を添加しな
い生理食塩液につき同様に操作して得た対照液を
試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。
実施例 20―(1)〜20―(11) 実施例 20―(1) Ｈ―pyro Glu―Gly―Arg―α―NEを用いて
スロンビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―pyro―Glu―Gly―
Arg―α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、
25℃で15分間インキユベートを行つた。続いて１
％Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加
え、37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0ml
を加えて、495nmにおける吸光度を測定した。同
時に酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操
作して得た対照液を試薬ブランクとして測定し
た。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(2) Ｈ―Leu―Gly―Arg―α―NEを用いてスロン
ビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Leu―Gly―Arg―
α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で
15分間インキユベートを行つた。続いて１％
Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、
37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加
えて、495nmにおける吸光度を測定した。同時に
酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操作し
て得た対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(3) Ｈ―Ｄ―Val―Leu―Arg―α―NEを用いてカ
リクレインを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたカリクレイン（1.0KU／
ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Ｄ―Val―Leu―Arg―
α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で
15分間インキユベートを行つた。続いて１％
Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、
37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加
えて、495nmにおける吸光度を測定した。同時に
酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操作し
て得た対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(4) Bz―Phe―Val―Arg―α―NEを用いてスロ
ンビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Bz―Phe―Val―Arg―
α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で
15分間インキユベートを行つた。続いて１％
Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、
37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加
えて、495nmにおける吸光度を測定した。同時に
酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操作し
て得た対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(5) Tos―Gly―Pro―Arg―α―NEを用いてカリ
クレインを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたカリクレイン（0.1KU／
ml）0.1ml及び1mM Tos―Gly―Pro―Arg―α
―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15
分間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(6) Ｈ―Phe―Val―Arg―α―NEを用いてスロン
ビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Phe―Val―Arg―
α―NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で
15分間インキユベートを行つた。続いて１％
Fast Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、
37℃で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加
えて、495nmにおける吸光度を測定した。同時に
酵素を添加しない生理食塩液につき同様に操作し
て得た対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(7) Glt―Gly―Arg―α―NEを用いてスロンビン
を測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Glc―Gly―Arg―α―
NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(8) Ｈ―Gly―Gly―Arg―α―NEを用いてスロン
ビンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたスロンビン（1.0NIH―
Ｕ／ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Gly―Arg―α―
NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(9) Ｈ―Phe―Arg―α―NEを用いてカリクレイ
ンを測定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたカリクレイン（0.1KU／
ml）0.1ml及び1mM Ｈ―Gly―Gly―Arg―α―
NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(10) Tos―Gly―Pro―Lys―α―NEを用いてウロ
キナーゼを測定する方法 50mM Na Phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたウロキナーゼ（120IU／
ml）0.1ml及び1mM Tos―Gly―Pro―Lys―α―
NEの10％DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分
間インキユベートを行つた。続いて１％Fast
Red ITR塩の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃
で５分間反応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、
495nmにおける吸光度を測定した。同時に酵素を
添加しない生理食塩液につき同様に操作して得た
対照液を試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。 実施例 20―(11) Ac―Met―α―NEを用いてカリクレインを測
定する方法 50mM Na phosphate buffer（PH7.0）1.7mlに
生理食塩水に溶かしたカリクレイン（0.1KU／
ml）0.1ml及び1mM Ac―Met―α―NEの10％
DMSO水溶液0.2mlを加え、25℃で15分間インキ
ユベートを行つた。続いて１％Fast Red ITR塩
の50％酢酸水溶液0.2mlを加え、37℃で５分間反
応させた後、50％酢酸2.0mlを加えて、495nmに
おける吸光度を測定した。同時に酵素を添加しな
い生理食塩液につき同様に操作して得た対照液を
試薬ブランクとして測定した。 この方法による測定結果を表３に示す。
【表】
実施例 21
Tos―Lys―α―NEを用いて血漿プラスミノ
ーゲンを測定する方法 人血漿60μに50mM Na Phosphate Buffer
（PH7.4）10mlを加えた液を希釈して、３，2.5，
２，1.5，１，0.5μ血漿／mlBufferになるよう
に試料液を調製した。この試料液それぞれ1.0ml
に水で溶かしたストレプトキナーゼ（1000U／
ml）0.1mlずつ加え37℃で10分間保温後、2mM
Tos―Lys―α―NE0.1mlを加え37℃で10分間保
温した。 次に50％の酢酸に溶かした１％FR―ITR塩に
0.1mlを加え、37℃で10分間反応させ、氷酢酸1.0
mlを加えて475nmでの吸光度を測定した。 この方法による測定結果を第１８図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸は、血漿の量を表わして
いる。 実施例 22 Tos―Lys―α―NEを用いて血漿アンチプラ
スミンを測定する方法 人血漿150μに50mM Na Phosphate Buffer
（PH7.4）10mlを加えた液を希釈して、15，12.5，
10，7.5，５，2.5μ血漿／mlBufferになるよう
に試料液を調製した。この試料液をそれぞれ1.0
mlに水で溶かしたプラスミン（0.1CU／ml）0.1
mlずつ加え、37℃で20秒間保温後、2mM Tos―
Lys―α―NE0.1mlを加え、37℃で10分間保温し
た。次に50％の酢酸に溶かした１％FR―ITR塩
に0.1mlを加え、37℃で10分間反応させ、さらに
氷酢酸1.0mlを加え475nmでの吸光度を測定した。 この方法による測定結果を第１９図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸は、血漿の量を表わして
いる。 実施例 23 Tos―Lys―α―NEを用いてヘパリンを測定
する方法 0.01，0.02，0.03，0.04IU／mlになるように水
に溶かしたヘパリン液それぞれ0.05mlに生理食塩
水で10倍に希釈した標準血漿0.05ml、50mM Na
Phosphate Buffer1.0ml及び水に溶かしたトロン
ビン（1.5NIH―Ｕ／ml）0.1mlを加え、37℃で10
分間保温後、2mM Tos―Lys―α―NE0.1mlを
加え37℃で10分間保温した。次に50％酢酸に溶か
した１％FR―ITR塩0.1mlを加え、37℃で10分間
反応させ、氷酢酸1.0mlを加えて475nmでの吸光
度を測定した。 この方法による測定結果を第２０図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸はヘパリンの量を表わし
ている。 実施例 24 Tos―Lys―α―NEを用いてアンチスロンビ
ンを測定する方法 血漿０，５，10，15，20，25μにそれぞれ
50mMリン酸ナトリウム緩衝液、PH7.4（0.8NIH
―Ｕ／mlスロンビン、4IU／mlヘパリン、
10KIE／mlアプロチニンを含む）3.0mlを加えた。
この液50μをそれぞれ別の試験管にとり、37℃
で10分間インキユベートし、2mM Tos―Lys―
NE0.1mlを加え37℃で10分間インキユベートし
た。次に、10％酢酸に溶かした１％FR―ITR塩
0.1mlを加え、37℃で10分間反応させ、30％酢酸
2.0mlを加えたのち475nmでの吸光度を測定した。 この方法による測定結果を第２１図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸は血漿の量を表わしてい
る。 実施例 25 Tos―Lys―α―NEを用いて血漿プロスロン
ビンを測定する方法 人血漿200μに50mMリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）10mlを加えた液を希釈して2.0，1.6，
1.2，0.8，0.4μ血漿／ml緩衝液になるように試
料液を調製した。この試料液それぞれ1.0mlに、
緩衝液で溶かして蛇毒（Echis Carinatus
Venom：10μｇ／ml）を、0.1mlずつ加え37℃で
５分間保温後、2mMTos―Lys―α―NE0.1mlを
加え25℃で30分間保温した。 次に50％の酢酸に溶かした１％FR―ITR塩0.1
mlを加え、37℃で10分間反応させ、氷酢酸1.0ml
を加えて475nmでの吸光度を測定した。 この方法による測定結果を第２２図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸は血漿の量を表わしてい
る。
ーゲンを測定する方法 人血漿60μに50mM Na Phosphate Buffer
（PH7.4）10mlを加えた液を希釈して、３，2.5，
２，1.5，１，0.5μ血漿／mlBufferになるよう
に試料液を調製した。この試料液それぞれ1.0ml
に水で溶かしたストレプトキナーゼ（1000U／
ml）0.1mlずつ加え37℃で10分間保温後、2mM
Tos―Lys―α―NE0.1mlを加え37℃で10分間保
温した。 次に50％の酢酸に溶かした１％FR―ITR塩に
0.1mlを加え、37℃で10分間反応させ、氷酢酸1.0
mlを加えて475nmでの吸光度を測定した。 この方法による測定結果を第１８図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸は、血漿の量を表わして
いる。 実施例 22 Tos―Lys―α―NEを用いて血漿アンチプラ
スミンを測定する方法 人血漿150μに50mM Na Phosphate Buffer
（PH7.4）10mlを加えた液を希釈して、15，12.5，
10，7.5，５，2.5μ血漿／mlBufferになるよう
に試料液を調製した。この試料液をそれぞれ1.0
mlに水で溶かしたプラスミン（0.1CU／ml）0.1
mlずつ加え、37℃で20秒間保温後、2mM Tos―
Lys―α―NE0.1mlを加え、37℃で10分間保温し
た。次に50％の酢酸に溶かした１％FR―ITR塩
に0.1mlを加え、37℃で10分間反応させ、さらに
氷酢酸1.0mlを加え475nmでの吸光度を測定した。 この方法による測定結果を第１９図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸は、血漿の量を表わして
いる。 実施例 23 Tos―Lys―α―NEを用いてヘパリンを測定
する方法 0.01，0.02，0.03，0.04IU／mlになるように水
に溶かしたヘパリン液それぞれ0.05mlに生理食塩
水で10倍に希釈した標準血漿0.05ml、50mM Na
Phosphate Buffer1.0ml及び水に溶かしたトロン
ビン（1.5NIH―Ｕ／ml）0.1mlを加え、37℃で10
分間保温後、2mM Tos―Lys―α―NE0.1mlを
加え37℃で10分間保温した。次に50％酢酸に溶か
した１％FR―ITR塩0.1mlを加え、37℃で10分間
反応させ、氷酢酸1.0mlを加えて475nmでの吸光
度を測定した。 この方法による測定結果を第２０図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸はヘパリンの量を表わし
ている。 実施例 24 Tos―Lys―α―NEを用いてアンチスロンビ
ンを測定する方法 血漿０，５，10，15，20，25μにそれぞれ
50mMリン酸ナトリウム緩衝液、PH7.4（0.8NIH
―Ｕ／mlスロンビン、4IU／mlヘパリン、
10KIE／mlアプロチニンを含む）3.0mlを加えた。
この液50μをそれぞれ別の試験管にとり、37℃
で10分間インキユベートし、2mM Tos―Lys―
NE0.1mlを加え37℃で10分間インキユベートし
た。次に、10％酢酸に溶かした１％FR―ITR塩
0.1mlを加え、37℃で10分間反応させ、30％酢酸
2.0mlを加えたのち475nmでの吸光度を測定した。 この方法による測定結果を第２１図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸は血漿の量を表わしてい
る。 実施例 25 Tos―Lys―α―NEを用いて血漿プロスロン
ビンを測定する方法 人血漿200μに50mMリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）10mlを加えた液を希釈して2.0，1.6，
1.2，0.8，0.4μ血漿／ml緩衝液になるように試
料液を調製した。この試料液それぞれ1.0mlに、
緩衝液で溶かして蛇毒（Echis Carinatus
Venom：10μｇ／ml）を、0.1mlずつ加え37℃で
５分間保温後、2mMTos―Lys―α―NE0.1mlを
加え25℃で30分間保温した。 次に50％の酢酸に溶かした１％FR―ITR塩0.1
mlを加え、37℃で10分間反応させ、氷酢酸1.0ml
を加えて475nmでの吸光度を測定した。 この方法による測定結果を第２２図に示す。図
中で縦軸は吸光度を横軸は血漿の量を表わしてい
る。
第１図は本発明の方法と従来の方法に及ぼす亜
硝酸イオンの影響を示す。第２図は本発明の方法
によるスロンビンの測定を示す。第３図は本発明
の方法によるトリプシンの測定を示す。第４図は
本発明の方法によるウロキナーゼの測定を示す。
第５図は本発明の方法によるプラスミンの測定を
示す。第６図は本発明の方法によるFactor Xaの
測定を示す。第７図は本発明の方法によるClの
測定を示す。第８図は本発明の方法によるClの
測定を示す。第９図は本発明の方法によるキモト
リプシンの測定を示す。第１０図は本発明の方法
によるスロンビンの測定を示す。第１１図は本発
明の方法によるトリプシンの測定を示す。第１２
図は本発明の方法によるウロキナーゼの測定を示
す。第１３図は本発明の方法によるアンチスロン
ビンの測定を示す。第１４図は本発明の方法に
よるアンチスロンビンの測定を示す。第１５図
は本発明の方法による血漿プレカリクレインの測
定を示す。第１６図は本発明の方法によるスロン
ビンの測定を示す。第１７図は血中酵素パターン
を示す。図中の↑は原点を示す。第１８図は、本
発明の方法による血漿プラスミノーゲンの測定を
示す。第１９図は本発明の方法による血漿アンチ
プラスミンの測定を示す。第２０図は本発明の方
法によるヘパリンの測定を示す。第２１図は本発
明の方法によるアンチスロンビンの測定を示
す。第２２図は本発明の方法による血漿プロスロ
ンビンの測定を示す。
硝酸イオンの影響を示す。第２図は本発明の方法
によるスロンビンの測定を示す。第３図は本発明
の方法によるトリプシンの測定を示す。第４図は
本発明の方法によるウロキナーゼの測定を示す。
第５図は本発明の方法によるプラスミンの測定を
示す。第６図は本発明の方法によるFactor Xaの
測定を示す。第７図は本発明の方法によるClの
測定を示す。第８図は本発明の方法によるClの
測定を示す。第９図は本発明の方法によるキモト
リプシンの測定を示す。第１０図は本発明の方法
によるスロンビンの測定を示す。第１１図は本発
明の方法によるトリプシンの測定を示す。第１２
図は本発明の方法によるウロキナーゼの測定を示
す。第１３図は本発明の方法によるアンチスロン
ビンの測定を示す。第１４図は本発明の方法に
よるアンチスロンビンの測定を示す。第１５図
は本発明の方法による血漿プレカリクレインの測
定を示す。第１６図は本発明の方法によるスロン
ビンの測定を示す。第１７図は血中酵素パターン
を示す。図中の↑は原点を示す。第１８図は、本
発明の方法による血漿プラスミノーゲンの測定を
示す。第１９図は本発明の方法による血漿アンチ
プラスミンの測定を示す。第２０図は本発明の方
法によるヘパリンの測定を示す。第２１図は本発
明の方法によるアンチスロンビンの測定を示
す。第２２図は本発明の方法による血漿プロスロ
ンビンの測定を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ （式中、R1は蛋白分解酵素の合成基質となり得
るアミノ酸またはペプチドを示し、そしてR2は
水素またはブロムを示す） で示される基質と、酵素を反応させ、酵素により
（）が水解されて生成する 【式】と、 で示されるFR―ITR塩（Fast Red ITR塩、Ｎ，
N′―ジエチル―４―メトキシメタニラミドジア
ゾニウム塩） とを反応させることにより色素を生成させ、その
色素の量を測ることにより酵素活性、またはその
酵素の阻害剤、賦活剤、チモーゲンを測定する方
法。 ２ R1がＡ―R3―R4―R5―R6―CO― （Ａは水素、アシル基またはスルホニル基を示し
R3〜R5はGly，Ala，Val，Leu，Ile，Pro，
Phe，Gln，Glu，pyroGluまたは単結合を示しR6
はLys，Lys（Me），Arg，MetまたはTyrを示す） である特許請求の範囲第１項の方法。 ３ Ａが水素、Ac，Bz，Tos，Boc，Cbz，
Dansyl，Gltである特許請求の範囲第２項の方
法。 ４ R1がＡ―Tyr―，Ａ―Arg―，Ａ―Lys―，
Ａ―Gly―Lys―，Ａ―Phe―Arg―，Ａ―Gly―
Gly―Arg―，Ａ―Leu―Gly―Arg―，Ａ―Gln
―Gly―Arg―，Ａ―PyroGlu―Gly―Arg―，Ａ
―Leu―Ala―Arg―，Ａ―Pro―Phe―Arg―，
Ａ―Val―Leu―Lys―，Ａ―Phe―Val―Arg―，
Ａ―Ile―Glu―Gly―Arg―， である特許請求の範囲第３項の方法。 ５ 式（）がTos―Lys―α―NE，Ac―Tyr
―α―NE，Bz―Leu―Ala―Arg―α―NE，Ac
―Phe―Arg―α―NE，Ｈ―Pro―Phe―Arg―
α―NE，Ac―Gly―Lys―α―NE， である特許請求の範囲第１項、２項、３項または
４項のいずれか一つの方法。 ６ 酵素が、E.C.3.4.21.のセリンプロテアーゼで
ある、特許請求の範囲第１項、２項、３項、４項
または５項のいずれか一つの方法。 ７ 酵素がトリプシン、キモトリプシン、カリク
レイン、プラスミン、スロンビン、ウロキナー
ゼ、factor Xa、Cl、Clであり、また、阻害
剤、賦活剤、チモーゲンがアンチスロンビン、
ヘパリン、アンチプラスミン、プレカリクレイ
ン、プラスミノーゲンである特許請求の範囲第１
項、２項、３項、４項または５項のいずれか一つ
の方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57135534A JPS5925699A (ja) | 1982-08-03 | 1982-08-03 | 酵素活性測定方法 |
| DE3327873A DE3327873C2 (de) | 1982-08-03 | 1983-08-02 | Verfahren zur Bestimmung der Aktivität von Serinproteasen |
| FR8312710A FR2531453B1 (fr) | 1982-08-03 | 1983-08-02 | Procede pour determiner l'activite des enzymes |
| GB08320832A GB2126720B (en) | 1982-08-03 | 1983-08-02 | A method for determination of enzyme activity |
| US06/875,161 US4772553A (en) | 1982-08-03 | 1986-06-17 | Method for determination of enzyme activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57135534A JPS5925699A (ja) | 1982-08-03 | 1982-08-03 | 酵素活性測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5925699A JPS5925699A (ja) | 1984-02-09 |
| JPH0236239B2 true JPH0236239B2 (ja) | 1990-08-16 |
Family
ID=15154018
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57135534A Granted JPS5925699A (ja) | 1982-08-03 | 1982-08-03 | 酵素活性測定方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4772553A (ja) |
| JP (1) | JPS5925699A (ja) |
| DE (1) | DE3327873C2 (ja) |
| FR (1) | FR2531453B1 (ja) |
| GB (1) | GB2126720B (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8803109D0 (en) * | 1988-02-11 | 1988-03-09 | Deltanine Research Ltd | Improvements in/relating to clinical testing monitoring & pharmaceutical compositions for treatment of auto-immune diseases |
| US5663055A (en) * | 1989-12-29 | 1997-09-02 | Oklahoma Medical Research Foundation | Methods for diagnosing human influenza and 4-position modified chromogenic N-acetylneuraminic acid substrated for use therein |
| US5252458A (en) * | 1990-12-31 | 1993-10-12 | Symex Corp. | Method for visually detecting the presence of a virus in a clinical specimen |
| CA2104683C (en) * | 1990-12-31 | 2004-06-29 | Avraham Liav | Method for visually detecting the presence of a virus in a clinical specimen |
| US5849510A (en) * | 1994-04-26 | 1998-12-15 | Selectide Corporation | Factor Xa inhibitors |
| AU697785B2 (en) | 1994-07-19 | 1998-10-15 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. | Analytical element,composition and method using modified apo-horseradish peroxidase |
| US5719020A (en) * | 1996-09-25 | 1998-02-17 | Oklahoma Medical Research Foundation | 4,7-dialkoxy N-acetylneuraminic acid derivatives and methods for detection of influenza type A and B viruses in clinical specimens |
| US6566330B1 (en) | 1996-10-22 | 2003-05-20 | Medical University Of South Carolina Foundation Research Development | Positively charged non-natural amino acids, methods of making and using thereof in peptides |
| US6043218A (en) | 1996-10-22 | 2000-03-28 | Medical University Of South Carolina | Positively charged non-natural amino acids, methods of making thereof, and use thereof in peptides |
| US6303764B1 (en) | 1998-09-24 | 2001-10-16 | Zymetx, Inc. | Synthesis of 4,7-dialkyl chromogenic glycosides of N-acetylneuraminic acids |
| US6528652B1 (en) | 1999-01-21 | 2003-03-04 | Chronimed | Composition and device for detecting leukocytes in urine |
| US6348324B1 (en) | 1999-01-21 | 2002-02-19 | Hypoguard America Limited | Composition and device for detecting leukocytes in urine |
| US6420552B1 (en) | 1999-09-10 | 2002-07-16 | Zymetx, Inc. | Syntheses of 4-alkyl chromogenic glycosides and 7-alkyl chromogenic glycosides of N-acetylneuraminic acids |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR853177A (fr) * | 1938-04-16 | 1940-03-12 | Ig Farbenindustrie Ag | Colorants mono-azoïques et procédé de préparation de ces colorants |
| US3862011A (en) * | 1971-08-16 | 1975-01-21 | Robert E Smith | Method for quantitatively determining enzyme concentrations in homogenates |
| CA1007555A (en) * | 1971-08-16 | 1977-03-29 | Robert E. Smith | Carbobenzoxydiglycyl-1-arginyl-4-methoxy-2-naphthylamide and process for determining enzyme concentrations |
| US4275153A (en) * | 1978-08-03 | 1981-06-23 | American Hospital Supply Corporation | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes |
| JPS5559149A (en) * | 1978-10-30 | 1980-05-02 | Torii Yakuhin Kk | Aminoacid derivative |
| JPS5559150A (en) * | 1978-10-30 | 1980-05-02 | Torii Yakuhin Kk | Aminoacid derivative |
| US4229528A (en) * | 1978-11-13 | 1980-10-21 | Smith Robert E | Fluorescence method for enzyme analysis which couples aromatic amines with aromatic aldehydes |
| US4308202A (en) * | 1979-10-25 | 1981-12-29 | Torii & Co., Ltd. | Prolylphenylalanylarginine derivatives, process for producing same and method for measuring activity of enzymes using same |
| JPS6035117B2 (ja) * | 1980-10-28 | 1985-08-13 | 富士写真フイルム株式会社 | リパ−ゼ活性測定用試薬 |
-
1982
- 1982-08-03 JP JP57135534A patent/JPS5925699A/ja active Granted
-
1983
- 1983-08-02 FR FR8312710A patent/FR2531453B1/fr not_active Expired
- 1983-08-02 GB GB08320832A patent/GB2126720B/en not_active Expired
- 1983-08-02 DE DE3327873A patent/DE3327873C2/de not_active Expired
-
1986
- 1986-06-17 US US06/875,161 patent/US4772553A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3327873C2 (de) | 1986-10-23 |
| GB2126720B (en) | 1985-08-29 |
| JPS5925699A (ja) | 1984-02-09 |
| FR2531453A1 (fr) | 1984-02-10 |
| DE3327873A1 (de) | 1984-02-09 |
| GB8320832D0 (en) | 1983-09-01 |
| US4772553A (en) | 1988-09-20 |
| GB2126720A (en) | 1984-03-28 |
| FR2531453B1 (fr) | 1985-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4275153A (en) | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes | |
| US5567596A (en) | Rapid assay of activators and inhibitors of clotting | |
| JPH0236239B2 (ja) | ||
| NO151787B (no) | Tripeptidderivater og anvendelse av disse ved bestemmelser av enzymer | |
| EP0034586B1 (en) | 4-trifluoromethylcoumarin peptide derivatives and their use in proteinase assays | |
| EP0046742A1 (en) | Peptide substrates for determination of protease activity | |
| NO135362B (ja) | ||
| US4190574A (en) | Substrate for the quantitative determination of plasminogen activators | |
| US4336186A (en) | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes | |
| JPS60241900A (ja) | 新規な第Ｘａ因子活性測定用基質 | |
| JPH0346119B2 (ja) | ||
| NL8201987A (nl) | Werkwijze voor het bepalen van de activiteit van plasminogeenactivator van het weefseltype, alsmede voor gebruik bij deze werkwijze geschikte combinatie van het "kit"-type. | |
| JPH11235197A (ja) | アンチトロンビンｉｉｉの測定方法 | |
| Banda et al. | Interaction of mouse macrophage elastase with native and oxidized human alpha 1-proteinase inhibitor. | |
| Clavin et al. | Use of peptidyl-4-methoxy-2-naphthylamides to assay plasmin | |
| JPS61178000A (ja) | 血漿の線維素溶解状態を測定する方法及び試薬 | |
| JPS6356501B2 (ja) | ||
| US4409140A (en) | Substrates and method for determining enzymes | |
| EP0194472B1 (en) | Fluorescence polarization assay for macromolecular hydrolases. | |
| JPS62220199A (ja) | 体液の試料中の総−ビリルビンの測定のための方法および試薬 | |
| Ryan et al. | Specificity of thrombin: evidence for selectivity in acylation rather than binding for p-nitrophenyl α-amino-p-toluate | |
| Trautschold et al. | Kallikrein | |
| Smith | Contributions of histochemistry to the development of the proteolytic enzyme detection system in diagnostic medicine | |
| Kinoshita et al. | Fluorescence polarization assay of plasmin, plasminogen, and plasminogen activator | |
| JP4043535B2 (ja) | ペプチド基質並びにこれを用いるプロテイナーゼａ活性およびビールの泡安定性の測定方法 |