JPH0242357A - 細胞分析装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

（イ）産業上の利用分野 この発明は、フローサイトメトリーを適用した細胞分析
装置に関し、詳しく言えば、試料中の特定細胞集団につ
いての細胞光学的情報を選別収集する処理に関する。 （ロ）従来の技術 フローサイトメトリーは、例えば蛍光色素で標識された
細胞（又はこれに準する粒子）を、細い液流中に流し、
流体力学的焦点合わせ効果により１列になって流れる細
胞の一つ一つにレーザ光を照射し、細胞より生じる散乱
光や蛍光の強度、すなわち細胞光学的情報を瞬時に測定
し、細胞を分析するものである。このフローサイトメト
リーは、大量の細胞を高速度かつ高精度に分析できる特
長を有している。 上記フローサイトメトリーを適用した細胞分析装置とし
ては、細い液流を形成するためのフローセルと、このフ
ローセル内を流れる細胞に光ビームを照射する光源（例
えばレーザ）と、この光ビームが照射された細胞より細
胞光学的情報を検出し電気信号に変換する光検出器と、
この電気信号に変換された細胞光学的情報の解析処理等
を行うコンピュータを備えてなるものが知られている。 この従来の細胞分析装置は、蛍光色素で染色した細胞浮
遊液（試料）をシース液と共にフローセル内に流す。フ
ローセル内には、シースフローが形成され、流体力学的
焦点合わせ効果により、細胞は、フローセル中心軸上を
一列になって流れていく。 これら細胞に光ビームが照射されることにより生じる散
乱光及び蛍光の強度は、細胞光学的情報を構成するパラ
メータとして、光電子増倍管等の光検出器により検出さ
れる。 さて、細胞浮遊液中に複数の細胞集団が含まれている時
に、これら細胞集団の１つについて分析を行いたい場合
がある０例えば、人体血液中のリンパ球サブセットの分
析の場合には、試料として血液を溶血したものが使用さ
れるが、この試料中には、リンパ球の他に、単球、顆粒
球が含まれており、測定により得られた細胞光学的情報
より、リンパ球についてのものを選別する必要が生じる
。 そこで、必要な細胞集団の細胞光学的情報を選別して収
集する方法としては、いわゆるウィンドウ法が知られて
いる（例えば特開昭６２−１３４５５９号公報参照）。 このウィンドウ法は、細胞光学的情報のうちの１又は２
以上のパラメータを座標系とする空間に、ウィンドウと
呼ばれる分析領域を操作者が設定し、この領域に属する
細胞の光学的情報を目的の細胞集団の細胞光学的情報と
して収集していた。 例えば、上記リンパ球のサブセットの分析の場合には、
細胞光学的情報のうち、９０”散乱光強度Ｉ、。及び前
方散乱光強度Ｉｏの２つのパラメータを用いる。第６図
は、■、。を横軸に、■。を縦軸にとったサイトダラム
の模式図を示している。ｂはリンパ球の分布、Ｃは単球
の分布、ｄは顆粒球の分布をそれぞれ示している。なお
、ａはデブリスの分布を示しているが、このデブリスは
、赤血球の膜成分等より構成されるもので、通常ノイズ
処理の段階で取除かれることが多い。 リンパ球について分析を行うには、対照試料（健常者の
試料）を用いて、第６図に二点鎖線で示すように、ウィ
ンドウｅを設定する。このウィンドウｅに属する細胞光
学的情報を、測定された全細胞光学的情報より収集し、
蛍光特性について解析処理を行い、結果をＣＲＴに表示
し、また、プリンタより出力する。 しかし、上記ウィンドウ法では、試料によっては操作者
がウィンドウの変更をしなければ、目的の細胞集団の細
胞光学的情報を収集することができないことがある０例
えば、リンパ球サブセットの分析において、第６図に示
すリンパ球の分布すの位置、大きさや形状が試料によっ
て変化し、ウィンドウｅをそれに応じて操作者が変更し
なければならない。このようなウィンドウの変更は、多
くの試料を効率良く自動的に測定するのを妨げている。 そこで、細胞光学的情報の収集を、操作者がウィンドウ
を設定することなく自動的に行える細胞分析装置が、本
願出願人によりすでに出願されている（特願昭６２−２
２８８４号）、この細胞分析装置は、細胞光学的情報の
内、１又は２以上のパラメータについてヒストグラムを
作成し、これらヒストグラムの変曲点を抽出し、この変
曲点に基づいて細胞集団を分画し、ｌ又は２以上の画分
を分析領域として、これに属する細胞の光学的情報を、
目的の細胞集団の細胞光学的情報として収集する。 例えば、上記リンパ球サブセットの分析の場合には、９
０°散乱光強度■、。及び前方散乱光強度■。のヒスト
グラムを作成する〔第７図（ａ）及び第７図（ｂ）参照
〕。そして、■、。のヒストグラムより変曲点Ｐ＋　ｓ
　ｐｚＳＰ３、Ｉｏのヒストグラムより変曲点Ｐａ、Ｐ
ｓを抽出する。これら変曲点ｐ、〜Ｐ５をＩ、。、■。 サイトグラム上に表せば、第６図に破線で示す画分に分
画される。リンパ球の分布すは、画分Ｂに含まれている
ので、この百分Ｂに属する細胞の光学的情報、すなわち
、■、。 が２１以上２２以下、かつ■。がｐ４以以下、以下とな
るような細胞の光学的情報を、測定された全細胞の細胞
光学的情報より検索し、リンパ球の細胞光学的情報を収
集する。 （ハ）発明が解決しようとする課題 上記従来の細胞分析装置においては、細胞光学的情報収
集手段が目的細胞集団の細胞光学的情報を画分に基づい
て収集するが、この画分は第６図に示すように、サイト
グラム上で方形の領域である。従って、この画分は目的
細胞集団の分布の形状に完全には適合しておらず、不要
な細胞の光学的情報が、収集された目的細胞集団の光学
的情報に含まれて、分析精度が低下する問題点があった
。 より目的細胞集団の分布の形状に適合する分析領域を求
める方法としては、輪郭追跡法が知られているが、演算
処理に時間を要し、分析の効率化の面から好ましくない
。 この発明は、上記に鑑みなされたものであり、より目的
細胞集団の分布に適合する画分を短い処理時間で決定で
きる細胞分析装置の提供を目的としている。 （ニ）課題を解決するための手段 上記課題を解決するため、この発明の細胞分析装置は、 細胞（これに準する粒子も含む）浮遊液が流されるフロ
ーセルと、 このフローセル内を流れる細胞に光ビームを照射する光
源と、 この光ビームが照射されたそれぞれの細胞について、複
数のパラメータよりなる細胞光学的情報を検出する細胞
光学的情報検出手段と、この細胞光学的情報検出手段で
得られる、１又は２以上のパラメータに基づいて前記細
胞浮遊液中の細胞集団を分画する細胞集団分画手段と、
この細胞集団分画手段で得られた画分のうち、１又は２
以上の画分に基づいて、目的とする細胞集団の細胞光学
的情報を収集する細胞光学的情報収集手段と、 前記細胞光学的情報検出手段で検出された細胞光学的情
報及び前記細胞光学的情報収集手段で収集された目的細
胞集団の細胞光学的情報を処理する細胞光学的情報処理
手段と、 この細胞光学的情報処理手段の処理結果を出力する出力
手段とを備えてなるものにおいて、前記細胞光学的情報
収集手段で収集された細胞光学的情報について、１つの
パラメータの所定度数ごとに、もう一つのパラメータの
ヒストグラムをそれぞれ求めるヒストグラム作成手段と
、このヒストグラム作成手段で得られたそれぞれのヒス
トグラムより境界点を抽出する境界点抽出手段と、 この境界点抽出手段で抽出された境界点を結んで形成さ
れる領域を最終画分とし、この最終画分に基づき、目的
細胞集団の細胞光学的情報を収集する第２の細胞光学的
情報収集手段とを備えたことを特徴とするものである。 （ホ）作用 この発明の細胞分析装置の作用を、実施例に対応する第
１図及び第２図を用いて説明すると、細胞集団分画手段
で得られた画分Ｂについて、細胞光学的情報収集手段が
、目的細胞集団の細胞光学的情報を収集した後、この収
集された細胞光学的情報について、前記ヒストグラム作
成手段が、一つのパラメータ■。の所定度数Δ■。ごと
に、もう一つのパラメータ■、。のヒストグラムを作成
する。前記境界点抽出手段は、例えばこれらヒストダラ
ムが所定のしきい値ｎｔｈと交わる点、あるいはヒスト
グラムの変曲点Ｘｔ、Ｘｚ等を境界点ｒｍ、ｒｂとして
抽出する〔第２図（ａ）（ロ）参照〕。 そして、各境界点を結んで得られる領域Ｂ゛は、第１図
にも示すように、最初の百分Ｂよりも目的細胞集団によ
く適合している。よって、この領域Ｂ゛を最終画分とし
細胞光学的情報を収集すれば、不要な細胞光学的情報が
解析処理に係る細胞光学的情報に含まれず、分析精度の
向上が可能となる。 （へ）実施例 この発明の一実施例を、図面に基づいて以下に説明する
。 この実施例細胞分析装置は、細胞光情報（以下単にデー
タという場合がある）として、前方散乱光強度ｔ、、９
０°散乱光強度ＩＱＱ　、異なる二色の蛍光強度１．、
Ｉ、の計４つのパラメータを採用している。 第２図は、実施例細胞分析装置の構成を示す図である。 ２は、オートサンプラーであり、その試料ラック２ａに
は複数の試料容器３、・・・、３が装填されている。こ
の試料ラック２ａは、図示しない駆動機構により駆動さ
れ、指定の試料を、試料吸引チューブ４直下に位置させ
る。さらに、このオートサンプラー２は、図示しない振
とう機構、冷却機構を備えており、定時的に試料を振と
うすると共に、装填された試料容器３、・・・、３内の
試料を低温（例えば４°Ｃ〜１０°Ｃ）に保持する。 前記試料吸引チューブ４は、三方弁５の１つのボートに
接続されている。三方弁５の他の２つのボートには、試
料送液チューブ６８％　６　ｂがそれぞれ接続されてお
り、試料送液チューブ６ａと試料吸引チューブ４、ある
いは試料送液チューブ６ａと６ｂとを連通させることが
できる。試料送液チューブ６ａの他端には、試料ポンプ
７が設けられている。一方、試料送液チューブ６ｂの他
端は、シース液送液チューブ８内に開口している。 このシース液送液チューブ８は、一端が送液ポンプ９に
接続され、他端がフローセル１０に接続されている。フ
ローセル１０は、石英ガラス等により構成され、内部の
フローチャネル１０ａ内にシースフローが形成され、流
体力学的焦点合わせ効果により、試料中の細胞又は粒子
がフローチャネル１０ａ中心軸上を一列になって流され
る。 フローセル１０より流出した液は、廃液チューブ１１に
導かれて、廃液タンク１２に収容される。 なお、この細胞分析装置は、図示しないシース液タンク
を備えており、前記試料ポンプ７、送液ポンプ９にシー
ス液が補充される。また、オートサンプラー２、ポンプ
７．９等を含む送液系は密閉可能で、バイオハザードを
防止できる。 フローセル１０の周囲には、レーザ（光源）１４、光検
出器（細胞光情報検出手段）１５ａ、１５ｂ、、４５ｃ
、１５ｄが配設される。レーザ１４よりのレーザビーム
２は、フローチャネル１０ａを流れる細胞ｌ又は粒子に
照射される。この細胞１又は粒子よりは、信号光が発生
するが、その自前方向のものは、前方散乱光として、レ
ンズ１６ａに集光されて、光検出器１５ａに入射する。 １７は、レーザビームｌが直接光検出器１５ａに入射す
るのを防止するビームブロッカである。 一方、細胞１よりの９０’方向の信号光は、レンズ１６
ｂで集光される。この信号光はその一部がグイクロイッ
クミラー１８ａで反射されて、９０゜散乱光検出用の光
検出器１５ｂに入射する。グイクロイックミラー１８ａ
を透過した信号光は、さらにその一部がもう一つのグイ
クロイックミラー１８ｂにより反射されて、フィルタ１
９ａを透過して、緑色蛍光用の光検出器１５ｃに受光さ
れる。 グイクロイックミラー１８ｂは、フィルタ１９ｂを透過
して赤色蛍光用の光検出器１５ｄに受光される。なお、
例えばレーザ１４には、アルゴンレーザやヘリウムネオ
ンレーザ、前方散乱光用の光検出器１５ａにはホトダイ
オード、その他の検出器１５ｂ、１５ｃ、１５ｄには光
電子増倍管が適用される。 光検出器１５　ａ、　１５　ｂＳｌ　５　ｃ、　１５　
ｄの受光信号は、図示しないアナログ／デジタル変換器
によりデジタル信号に変換されて、ＭＰＵ２１に取込ま
れる０ＭＰＵ２１は、前方散乱光強度Ｉ０．９０°散乱
光強度Ｉ、。についてのサイトダラム及びそれぞれのヒ
ストグラムを作成する機能、このヒストグラムより変曲
点を抽出し、細胞光学的情報を画分に分画する機能、こ
の画分に属する細胞光学的情報を収集する機能、さらに
、この収集された細胞光学的情報について最終の画分を
決定する機能、この最終画分に属する細胞光学的情報を
収集し、蛍光特性を解析する機能、前記試料ポンプ７、
送液ポンプ９及びオートサンプラー２を制御する機能等
を存している。 ＭＰＵ２１には、キーボード２２、ＣＲＴ２３、プリン
タ２４が接続されている。キーボード２２は、プロトコ
ル（測定条件）の選択・設定あるいはその他の指令をＭ
ＰＵ２１に人力するためのものである。ＣＲＴ２３は、
測定をモニタするものであり、プリンタ（出力手段）２
４は、ＭＰＵ２１の処理結果、例えばサイトグラムやヒ
ストグラム等をプリントアウトするためのものである。 次に、実施例細胞分析装置の動作を説明する。 まず、分析目的に応じた処理が施された試料が、それぞ
れ試料容器３に入れられて、試料ラック２ａに装填され
る。例えば、リンパ球サブセットの解析を行う試料は、
溶血処理した患者の血液にフルオレセインイソチオシア
ネート（ＦＩＴＣ）で標識した０ＫＴ４モノクロ一ナル
抗体及びファイコニリスリン（ＰＥ）で標識した０ＫＴ
８モノクロ一ナル抗体と反応させて得られる。 細胞分析装置の電源がオンされると、図示しなイＲＯＭ
よりＭＰＵ２１にプログラムが読込まれ、システムが立
上がる〔ステップ（以下ＳＴという）１、第４図（ａ）
参照〕。次に、測定する試料に適合するプロトコルが選
択・設定される。このプロトコルには、光検出器１５ａ
、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄの検出ゲインや補正演算等の
測定条件を内容とするものである。これは、試料の処理
方法が測定目的に応じて異なるためであり、例えば各処
理に用いられるモノクローナル抗体の細胞との反応性は
それぞれ異なるため、光検出器１５ａ、１５ｂ、１５ｃ
、１５ｄの検出ゲインを変更する必要があり、また各モ
ノクローナル抗体と蛍光色素の結合様式がそれぞれ異な
るため補正演算もそれに応じて変更する必要がある。 Ｓｒ２の処理が終了すると、試料ラック２ａが駆動され
、最初に測定を行う試料が入れられた試料容器３を、試
料吸引チェープ４直下に位置させる。そして、三方弁５
が試料吸引チューブ４と試料送液チューブ６ａとが連通
ずるように切換えられ、試料吸引チューブ４が試料容器
３内に降下し、試料ポンプ７が吸引側に駆動されて、試
料が試料送液チューブ６ａに吸引される（Ｓｒ１）。 次に、三方弁５が、試料送液チューブ６ａと６ｂを連通
ずるように切換えられ、試料ポンプ７が送液側に駆動さ
れ、試料が送液チューブ８に送られる。一方、送液ポン
プ９が送液側に駆動され、シース液がフローセル１０に
送られる。フローチャネル１０ａ内では、シースフロー
が形成され、流体力学的焦点合わせ効果により、ａｍフ
ローチャネル１０ａ中心軸上を一列になって流れていく
。この細胞の一つ一つについてレーザビームｌが照射さ
れ、前方散乱光強度１．．９０°散乱光強度Ｉ、。、緑
色蛍光強度Ｉ９、赤色蛍光強度ｒ、、がそれぞれ測定さ
れてい＜　（Ｓｒ４）。 Ｓｒ５では、ＭＰＵ２１は、前方散乱光強度！。、９０
°散乱光強度！、。を直交軸とするサイトグラム（第６
図参照）、及びそれぞれのヒストグラム〔第７図（ａ）
（ｂ）参照〕が作成される。そしで、Ｓｒ６では、■、
。ヒストグラムより変曲点が抽出できるか否かを判定す
る。 試料が正常である場合には、１９゜ヒストグラムより３
つの変曲点ＰＩ　ｓ　Ｐｚ　、Ｐ３が抽出できる

【リン
パ球サブセット分析の場合、第７図（ａ）参照］。 この場合には、Ｓｒ１へ分岐するが、試料が異常であり
、変曲点が抽出できない場合には、Ｓｒ７に分岐し、操
作者に異常を報知する。この報知はＣＲＴ２３への表示
、あるいは音声等により行われる。そして、操作者によ
る画分の手動補正が行われて（Ｓｒ８）、Ｓｒ１へ進む
。 Ｓｒ１では、■、。ヒストグラムより変曲点ｐ１、Ｐ！
、Ｐ３を抽出し、■、。がＰ＋　と２２との間であるデ
ータを、当該試料についての全測定データより選別収集
する。第５図（ａ）（ｂ）は、この選別収集されたデー
タについて、■、。及び■。のヒストグラムを示してい
る。さらに、第５図（ｂ）に示すＩｏのヒストグラムよ
り、変曲点を抽出し、これら変曲点に基づいて最終的に
画分Ｂが決定される（ＳＴＩＯ１第６図も参照）。 続＜５ＴＩＩでは、画分Ｂ内で前方散乱光強度１ｏ（Ｄ
の線上で、９０″散乱光強度ｌ、。のヒストグラムを作
成する〔第１図及び第２図（ａ）（ｂ）参照〕。 ５Ｔ１２では、このヒストグラム上で境界点ｒ１、ｒｂ
ｔを決定する。この境界点の決定は、第２図（ａ）に示
すようにヒストグラムに変曲点がない場合には、ヒスト
グラムが所定のしきい値ｎＬｋと交わる点を境界点ｒａ
ｔ、ｒｂＡと決定する。また、第２図（ｂ）に示すよう
に、ヒストグラムに変曲点Ｘ１１Ｘ２がある場合には、
これを境界点ｒ　ｍｉｓ　ｒ　ｂｉと決定する。もちろ
ん、２つの境界点のうち、一方をしきい値ｎｔｈにより
、他方を変曲点により決定してもよい。ヒストグラム全
体がしきい値ｎ１より小さい場合、あるいはヒストグラ
ムより変曲点が抽出できない場合には、境界点なしとす
る。 ５Ｔ１３では、境界点ｒａｉ、ｒｂｉがすべて決定され
たか否かを判定する。この判定がＮＯの場合には、５Ｔ
ＩＩへ戻り、前回のＩ　ｏ（ｉ）よりΔ■。 大きいＩ　ｏ（ｉ＋１）について同様にヒストグラムを
作成し、境界点を決定する（ＳＴ１２）。すなわち、画
分Ｂ内において、Δ■。ごとに引−かれる■。（１）、
・・・　Ｉｏ（ｍ）の線上で、それぞれヒストグラムを
作成し、境界点を順次決定して行くわけである。 ５Ｔ１３の判定がＹＥＳの場合には、５Ｔ１４へ分岐し
、境界点ｒ。、ｒ５．を結んで得られる領域を最終画分
Ｂ゛に決定する。この最終画分Ｂ゛は５ＴＩＯで得られ
た百分Ｂよりも、リンパ球の分布に適合する形となって
いる。また、５ＴＩＩ、１２の処理は、輪郭追跡法を行
う場合に比べて処理時間を短くすることができる。 ５Ｔ１４で決定された最終画分に属するデータについて
は、さらに蛍光特性解析が行われる（ＳＴ１５）。この
蛍光特性解析では、例えば緑色蛍光強度Ｉ９、赤色蛍光
強度■、についてそれぞれヒストグラムを作成し、陽性
率の算出等が行われる。この蛍光特性解析の結果は、Ｃ
ＲＴ２３に表示され（ＳＴ１６）、プリンタ２４よりプ
リンドア六トされる（ＳＴ１７）。 ５ＴＩ−８では、測定すべき試料があるか否かが判定さ
れる。この判定がＹＥＳの場合には、ＳＴ２へ戻り、次
の試料の測定を行い、ＮＯの場合には、測定を終了する
。 なお、上記説明では、リンパ球サブセットの分析を例に
とっているが、この発明はこれに限定されるものではな
く、各種細胞（あるいはこれに準する粒子）集団、例え
ば赤血球、網赤血球、血小板等の分析に広く適用可能な
ものである。また、用いるパラメータも、前方散乱光強
度、９０°散乱光強度、緑色蛍光強度、赤色蛍光強度の
４種類に限られるものではない。さらに、この発明はウ
ィンドウ法を用いる細胞分析装置にも適用可能であり、
この場合にはウィンドウ内で最終画分を決定する。 （ト）発明の詳細 な説明したように、この発明の細胞分析装置は、細胞光
学的情報収集手段で収集された細胞光学的情報について
、１つのパラメータの所定度数ごとに、もう一つのパラ
メータのヒストグラムをそれぞれ求めるヒストグラム作
成手段と、このヒストグラム作成手段で得られたそれぞ
れのヒストグラムより境界点を抽出する境界点抽出手段
と、この境界点抽出手段で抽出された境界点を結んで形
成される領域を最初画分とし、この最終画分に基づき、
目的細胞集団の細胞光学的情報を収集する第２の細胞光
学的情報収集手段とを備えてなるものであるから、目的
細胞集団に適用する画分を短い処理時間で決定でき、分
析精度の向上を図ることができる利点を有している。 【図面の簡単な説明】 第１図は、この発明の一実施例に係る細胞分析装置の最
終画分決定を説明する三次元表示すイトダラムの要部を
示す図、第２図（ａ）及び第２図（ｂ）は、同細胞分析
装置の最終画分決定をそれぞれ説明するヒストグラムの
模式図、第３図は、同細胞分析装置の構成を説明するブ
ロック図、第４図は、同細胞分析装置の動作を説明する
フロー図、第５図（ａ）及び第５図［有］）は、同細胞
分析装置の画分抽出演算を説明するためのそれぞれ９０
°散乱光強度、前方散乱光強度のヒストグラム、第６図
は、前方散乱光強度、９０°散乱光強度のサイトダラム
の一例を示す模式図、第７図（ａ）及び第７図（ｂ）は
、それぞれ９０°散乱光強度と前方散乱光強度のヒスト
グラムの一例をそれぞれ示す図である。 ＩＯ＝フローセル、　　　１４：レーザ、１５ａ１５ｂ
−１５ｃｍ１５ｄ：光検出器、２１：ＭＰＵ　　　　　
　２３：ＣＲＴ。 ２４：プリンタ。 特許出願人　　　　　立石電機株式会社代理人　　弁理
士　　中　村　茂　信 第 図（ａ） ト１ ［ｂｉ ｌｏ（Ｃ／’ｌ）−一φ 第 図 ｔυす Ｉ９０　（ｃｈ　）　− 補正の内容 ８．添付書類の目録 （１）訂正全文明細書 （ａ） 手続補正書 （自発） 昭和６３年特許願第１９３０３３号 ２゜ 発明の名称 細胞分析装置 ｌ９ｏ（ｃｈ）　− ３゜ 補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　　京都市右京区花園土堂町１０番地名称　　（２
９４）立石電機株式会社 代表者　立石義雄 ４、代理人 住所 ＠６０４ 京都市中京区壬生賀陽御所町３番地の１京都幸ビル５Ｆ ｒｏ　（ｃｈ）　− （訂正） 明細書 １通 １、発明の名称 細胞分析装置 ２、特許請求の範囲 （１）細胞浮遊液が流されるフローセルと、このフロー
セル内を流れる細胞に光ビームを照射する光源と、 この光ビームが照射されたそれぞれの細胞について、複
数のパラメータよりなる豊凶１１報を検出する却ｌυ口
１報検出手段と、 この５検出手段で得られる、１又は２ 以上のパラメータに基づいて前記細胞浮遊液中の細胞集
団を分画する細胞集団分画手段と、この細胞集団分画手
段で得られた百分のうち、１又は２以上の画分に基づい
て、目的とする細胞集団の鳳腹叉豊皿を収集する亘盗光
１祖収集集団と、 前記６検出手段で検出された■盗友菫 皿及び前記皇盗笈１報収集手段で収集された目的細胞集
団の■１尺１皿を処理する■鼠太ユ祖処理手段と、 この豊盗光菫皿処理手段の処理結果を出力する出力手段
とを備えてなる細胞分析装置において、前記豊胞叉豊互
収集手段で収集された貴腹人籠且について、１つのパラ
メータの所定度数ごとに、もう一つのパラメータのヒス
トグラムをそれぞれ求めるヒストグラム作成手段と、 このヒストグラム作成手段で得られたそれぞれのヒスト
グラムより境界点を抽出する境界点抽出手段と、 この境界点抽出手段で抽出された境界点を結んで形成さ
れる領域を最終画分とし、この最終画分に基づき、目的
細胞集団の豊夾人１皿を収集する第２の６収集手段とを
備えたことを特徴とする細胞分析装置。 ３、発明の詳細な説明 （イ）産業上の利用分野 この発明は、フローサイトメトリーを適用した細胞分析
装置に関し、詳しく言えば、試料中の特定細胞集団につ
いての細胞光情報を選別収集する処理に関する。 （ロ）従来の技術 フローサイトメトリーは、例えば蛍光色素で標識された
細胞（又はこれに準する粒子）を、細い液流中に流し、
流体力学的焦点合わせ効果により１列になって流れる細
胞の一つ一つにレーザ光を照射し、細胞より生じる散乱
光や蛍光の強度、すなわち細胞光情報を瞬時に測定し、
細胞を分析するものである。このフローサイトメトリー
は、大量の細胞を高速度かつ高精度に分析できる特長を
有している。 上記フローサイトメトリーを適用した細胞分析装置とし
ては、細い液流を形成するためのフローセルと、このフ
ローセル内を流れる細胞に光ビームを照射する光源（例
えばレーザ）と、この光ビームが照射された細胞より細
胞光情報を検出し電気信号に変換する光検出器と、この
電気信号に変換された細胞光情報の解析処理等を行うコ
ンピュータを備えてなるものが知られている。 この従来の細胞分析装置は、蛍光色素で染色した細胞浮
遊液（試料）をシース液と共にフローセル内に流す。フ
ローセル内には、シースフローが形成され、流体力学的
焦点合わせ効果により、細胞は０、フローセル中心軸上
を一列になって流れていく。 これら細胞に光ビームが照射されることにより生じる散
乱光及び蛍光の強度は、細胞光情報を構成するパラメー
タとして、光電子増倍管等の光検出器により検出される
。 さて、細胞浮遊液中に複数の細胞集団が含まれている時
に、これら細胞集団の１つについて分析を行いたい場合
がある。例えば、人体血液中のリンパ球サブセットの分
析の場合には、試料として血液を溶血したものが使用さ
れるが、この試料中には、リンパ球の他に、単球、顆粒
球が含まれており、測定により得られた細胞光情報より
、リンパ球についてのものを選別する必要が生じる。 そこで、必要な細胞集団の細胞光情報を選別して収集す
る方法としては、いわゆるウィンドウ法が知られている
（例えば特開昭６２−１３４５５９号公報参照）。この
ウィンドウ法は、細胞光情報のうちの１又は２以上のパ
ラメータを座標系とする空間に、ウィンドウと呼ばれる
分析領域を操作者が設定し、この領域に属する細胞の光
情報を目的の細胞集団の細胞光情報として収集していた
。 例えば、上記リンパ球のサブセットの分析の場合には、
細胞光情報のうち、９０°散乱光強度！、。 及び前方散乱光強度■。の２つのパラメータを用いる。 第６図は、■９゜を横軸に、Ｉｏを縦軸にとったサイト
ダラムの模式図を示している。ｂはリンパ球の分布、Ｃ
は単球の分布、ｄは顆粒球の分布をそれぞれ示している
。なお、ａはデブリスの分布を示しているが、このデブ
リスは、赤血球の膜成分等より構成されるもので、通常
ノイズ処理の段階で取除かれることが多い。 リンパ球について分析を行うには、対照試料（（！！常
者の試料）を用いて、第６図に二点鎖線で示すように、
ウィンドウｅを設定する。このウィンドウｅに属する細
胞光情報を、測定された全細飽充情報より収集し、蛍光
特性について解析処理を行い、結果をＣＲＴに表示し、
また、プリンタより出力する。 しかし、上記ウィンドウ法では、試料によっては操作者
がウィンドウの変更をしなければ、目的の細胞集団の細
胞光情報を収集することができないことがある。例えば
、リンパ球サブセットの分析において、第６図に示すリ
ンパ球の分布すの位置、大きさや形状が試料によって変
化し、ウィンドウｅをそれに応じて操作者が変更しなけ
ればならない。このようなウィンドウの変更は、多くの
試料を効率良く自動的に測定するのを妨げている。 そこで、細胞光情報の収集を、操作者がウィンドウを設
定することなく自動的に行える細胞分析装置が、本願出
願人によりすでに出願されている（特願昭６２−２２８
８４号）。この細胞分析装置は、細胞光情報の内、１又
は２以上のパラメータについてヒストグラムを作成し、
これらヒストグラムの変曲点を抽出し、この変曲点に基
づいて細胞集団を分画し、■又は２以上の画分を分析領
域として、これに属する細胞の光情報を、目的の細胞集
団の細胞光情報として収集する。 例えば、上記リンパ球サブセットの分析の場合には、９
０°散乱光強度！、。及び前方散乱光強度■。のヒスト
グラムを作成する〔第７図（ａ）及び第７図Φ）参照〕
。そして、Ｌｏのヒストグラムより変曲点Ｐ＋、Ｐｚ、
ｐ＋、Ｉｏのヒストグラムより変曲点Ｐ４、ＰＳを抽出
する。これら変曲点Ｐ、〜Ｐ、を■、。、■。サイトグ
ラム上に表せば、第６図に破線で示す画分に分画される
。リンパ球の分布すは、百分Ｂに含まれているので、こ
の百分Ｂに属する細胞の光情報、すなわち、■９゜がｐ
１以以下２以下、かつＩｏがｐ４以以下、以下となるよ
うな細胞の光情報を、測定された全細胞の細胞光情報よ
り検索し、リンパ球の細胞光情報を収集する。 （ハ）発明が解決しようとする課題 上記従来の細胞分析装置においては、細胞光情報収集手
段が目的細胞集団の細胞光情報を画分に基づいて収集す
るが、この画分は第６図に示すように、サイトグラム上
で方形の領域である。従って、この画分は目的細胞集団
の分布の形状に完全には適合しておらず、不要な細胞の
光情報が、収集された目的細胞集団の光情報に含まれて
、分析精度が低下する問題点があった。 より目的細胞集団の分布の形状に適合する分析領域を求
める方法としては、輪郭追跡法が知られているが、演算
処理に時間を要し、分析の効率化の面から好ましくない
。 この発明は、上記に鑑みなされたものであり、より目的
細胞集団の分布に適合する画分を短い処理時間で決定で
きる細胞分析装置の提供を目的としている。 （ニ）課題を解決するための手段 上記課題を解決するため、この発明の細胞分析装置は、 細胞（これに準する粒子も含む）浮遊液が流されるフロ
ーセルと、 このフローセル内を流れる細胞に光ビームを照射する光
源と、 この光ビームが照射されたそれぞれの細胞について、複
数のパラメータよりなる細胞光情報を検出する細胞光情
報検出手段と、 この細胞光情報検出手段で得られる、１又は２以上のパ
ラメータに基づいて前記細胞浮遊液中の細胞集団を分画
する細胞集団分画手段と、この細胞集団分画手段で得ら
れた画分のうち、１又は２以上の画分に基づいて、目的
とする細胞集団の細胞光情報を収集する細胞光情報収集
集団と、 前記細胞光情報検出手段で検出された細胞光情報及び前
記細胞光情報収集手段で収集された目的細胞集団の細胞
光情報を処理する細胞光情報処理手段と、 この細胞光情報処理手段の処理結果を出力する出力手段
とを備えてなるものにおいて、前記細胞光情報収集手段
で収集された細胞光情報について、１つのパラメータの
所定度数ごとに、もう一つのパラメータのヒストグラム
をそれぞれ求めるヒストグラム作成手段と、 このヒストグラム作成手段で得られたそれぞれのヒスト
グラムより境界点を抽出する境界点抽出手段と、 この境界点抽出手段で抽出された境界点を結んで形成さ
れる領域を最終画分とし、この最終画分に基づき、目的
細胞集団の細胞光情報を収集する第２の細胞光情報収集
手段とを備えたことを特徴とするものである。 （ホ）作用 この発明の細胞分析装置の作用を、実施例に対応する第
１図及び第２図を用いて説明すると、細胞集団分画手段
で得られた画分Ｂについて、細胞光情報収集手段が、目
的細胞集団の細胞光情報を収集した後、この収集された
細胞光情報について、前記ヒストグラム作成手段が、一
つのパラメータＩ０の所定度数Δ■。ごとに、もう一つ
のパラメータ■、。のヒストグラムを作成する。前記境
界点抽出手段は、例えばこれらヒストグラムが所定のし
きい値ｎｔｋと交わる点あるいはヒストグラムの変曲点
Ｘ１、Ｘ２等をを境界点ｒｌｌｓｒｂとじて抽出する〔
第２図（ａ）　（ｂ）参照〕。そして、各境界点を結ん
で得られる領域Ｂ”は、第１図にも示すように、最初の
画分Ｂよりも目的細胞集団によく適合している。よって
、この領域Ｂ゛を最終画分として細胞光情報を収集すれ
ば、不要な細胞光情報が解析処理に係る細胞光情報に含
まれず、分析精度の向上が可能となる。 （へ）実施例 この発明の一実施例を、図面に基づいて以下に説明する
。 この実施例細胞分析装置は、細胞光情報（以下単にデー
タという場合がある）として、前方散乱光強度■。、９
０”散乱光強度■、。、異なる二色の蛍光強度Ｉｒ、■
９の計４つのパラメータを採用している。 第２図は、実施例細胞分析装置の構成を示す図である。 ２は、オートサンプラーであり、その試料ラック２ａに
は複数°の試料容器３、・・・、３が装填されている。 この試料ラック２ａは、図示しない駆動機構により駆動
され、指定の試料を、試料吸引チューブ４直下に位置さ
せる。さらに、このオートサンプラー２は、図示しない
振とう機構、冷却機構を備えており、定時的に試料を振
とうすると共に、装填された試料容器３、・・・、３内
の試料を低温（例えば４°Ｃ〜１０°Ｃ）に保持する。 前記試料吸引チューブ４は、三方弁５の１つのポートに
接続されている。三方弁５の他の２つのボートには、試
料送液チューブ６ａ、６ｂがそれぞれ接続されており、
試料送液チューブ６ａと試料吸引チューブ４、あるいは
試料送液チューブ６ａと６ｂを連通させることができる
。試料送液チューブ６ａの他端には、試料ポンプ７が設
けられている。一方、試料送液チューブ６ｂの他端は、
シース液送液チューブ８内に開口している。 このシース液送液チューブ８は、一端が送液ポンプ９に
接続され、他端がフローセル１０に接続されている。フ
ローセル１０は、石英ガラス等により構成され、内部の
フローチャネル１０ａ内にシースフローが形成され、流
体力学的焦点合わせ効果により、試料中の細胞又は粒子
ｌがフローチャネル１０ａ中心軸上を一列になって流さ
れる。 フローセル１０より流出した液は、廃液チューブ１１に
導かれて、廃液タンク１２に収容される。 なお、この細胞分析装置は、図示しないシース液タンク
を備えており、前記試料ポンプ７、送液ポンプ９にシー
ス液が充填される。また、オートサンプラー２、ポンプ
７．９等を含む送液系は密閉可能で、バイオハザードを
防止できる。 フローセル１０の周囲には、レーザ（光源）１４、光検
出器（細胞光情報検出手段）１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、
１５ｄが配設される。レーザ１４よりのレーザビーム２
は、フローチャネル１０ａを流れる細胞又は粒子１に照
射される。この細胞又は粒子１よりは、信号光が発生す
るが、その内部方向のものは、前方散乱光として、レン
ズ１６ａに集光されて、光検出器１５ａに入射する。１
７は、レーザビームｌが直接光検出器１５ａに入射する
のを防止するビームブロッカである。 一方、細胞又は粒子１よりの９０”方向の信号光は、レ
ンズ１６ｂで集光される。この信号光はその一部がダイ
クロイックミラー１８ａで反射されて、９０°散乱光検
出用の光検出器１５ｂに入射する。ダイクロイックミラ
ー１８ａを透過した信号光は、さらにその一部がもう一
つのダイクロイックミラー１８ｂにより反射されて、フ
ィルタ１９ａを透過して、緑色蛍光用の光検出器１５ｃ
に受光される。ダイクロイックミラー１８ｂは、フィル
タ１９ｂを透過して赤色蛍光用の光検出器１５ｄに受光
される。なお、例えばレーザ１４には、アルゴンレーザ
やヘリウムネオンレーザ、前方散乱光用の光検出器１５
ａにはホトダイオード、その他の検出器１５ｂ、１５　
ｃ、　１５　ｄには光電子増倍管が適用される。 光検出器１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄの受光信号は
、図示しないアナログ／デジタル変換器によりデジタル
信号に変換されて、ＭＰＵ２１に取込まれる。ＭＰＵ２
１は、前方散乱光強度■。、９０″散乱光強度■、。に
ついてのサイトグラム及びそれぞれのヒストグラムを作
成する機能、このヒストグラムより変曲点を抽出し、細
胞光情報を画分に分画する機能、この画分に属する細胞
光情報を収集する機能、さらに、この収集された細胞光
情報について最終の画分を決定する機能、この最終画分
に属する細胞光情報を収集し、蛍光特性を解析する機能
、前記試料ポンプ７、送液ポンプ９及びオートサンプラ
ー２を制御する機能等を有している。 ＭＰＵ２１には、キーボード２２、ＣＲＴ２３、プリン
タ２４が接続されている。キーボード２２は、プロトコ
ル（測定条件）の選択・設定あるいはその他の指令をＭ
ＰＵ２１に入力するためのものである。ＣＲＴ２３は、
測定をモニタするものであり、プリンタ（出力手段）２
４は、ＭＰＵ２１の処理結果、例えばサイトグラムやヒ
ストグラム等をプリントアウトするためのものである。 次に、実施例細胞分析装置の動作を説明する。 まず、分析目的に応じた処理が施された試料が、それぞ
れ試料容器３に入れられて、試料ラック２ａに装填され
る。例えば、リンパ球サブセットの解析を行う試料は、
患者の血液にフルオレセインイソチオシアネート（Ｆ　
ＩＴＣ）で標識した０ＫＴ４モノクロ一ナル抗体及びフ
ァイコニリスリン（ＰＥ）で標識した０ＫＴ８モノクロ
一ナル抗体を反応させた後、溶血処理して得られる。 細胞分析装置の電源がオンされると、図示しないＲＯＭ
よりＭＰＵ２１にプログラムが読込まれ、システム立上
がる〔ステップ（以下ＳＴという）１、第４図（ａ）参
照〕。次に、測定する試料に適合するプロトコルが選択
・設定される。このプロトコルには、光検出器１５ａ、
１５ｂ、１５ｃ、１５ｄの検出ゲインや補正演算等の測
定条件を内容とするものである。これは、試料の処理方
法が測定目的に応じて異なるためであり、例えば各処理
に用いられるモノクローナル抗体の細胞との反応性はそ
れぞれ異なるため、光検出器１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、
１５ｄの検出ゲインを変更する必要があり、また各モノ
クローナル抗体と蛍光色素の結合様式がそれぞれ異なる
ため補正演算もそれに応じて変更する必要がある。 Ｓｒ２の処理が終了すると、試料ラック２ａが駆動され
、最初に測定を行う試料が入れられた試料容器３を、試
料吸引チューブ４直下に位置させる。そして、三方弁５
が試料吸引チューブ４と試料送液チューブ６ａとが連通
ずるように切換えられ、試料吸引チューブ４が試料容器
３内に降下し、試料ポンプ７が吸引側に駆動されて、試
料が試料送液チューブ６ａに吸引される（Ｓｒ１）。 次に、三方弁５が、試料送液チューブ６ａと６ｂを連通
ずるように切換えられ、試料ポンプ７が送液側に駆動さ
れ、試料が送液チューブ８に送られる。一方、送液ポン
プ９が送液側に駆動され、シース液がフローセル１０に
送られる。フローチャネル１０ａ内では、シースフロー
が形成され、流体力学的焦点合わせ効果により、細胞は
フローチャネル１０ａ中心軸上を一列になって流れてい
く。この細胞の一つ一つについてレーザビームｌが照射
され、前方散乱光強度ｒ、、９０°散乱光強度Ｉ、。、
緑色蛍光強度Ｉ９、赤色蛍光強度Ｉｒがそれぞれ測定さ
れてい＜　（Ｓｒ４）。 Ｓｒ５では、ＭＰＵ２１は、前方散乱光強度■。、９０
°散乱光強度■、。を直交軸とするサイトダラム（第６
図参照）、及びそれぞれのヒストグラム〔第７図（ａ）
（ｂ）参照〕が作成される。そして、Ｓｒ６では、夏、
。ヒストグラムより変曲点が抽出できるか否かを判定す
る。 試料が正常である場合には、■、。ヒストグラムより３
つの変曲点ｐＩ、ｐ２、ｐ３が抽出できる〔リンパ球サ
ブセット分析の場合、第７図（ａ）参照〕。 この場合には、Ｓｒ１へ分岐するが、試料が異常であり
、変曲点が抽出できない場合には、Ｓｒ７に分岐し、操
作者に異常を報知する。この報知はＣＲＴ２３への表示
、あるいは音声等により行われる。そして、操作者によ
る画分の手動補正が行われて（Ｓｒ８）、Ｓｒ１へ進む
。 Ｓｒ１では、■、。ヒストグラムより変曲点ｐ３、Ｐ２
、Ｐ３を抽出し、■、。がｐ、と２２との間であるデー
タを、当該試料についての全測定データより選別収集す
る。第５図（ａ）（ｂ）は、この選別収集されたデータ
について、■、。及び■。のヒストグラムを示している
。さらに、第５図（ロ）に示すＩｏのヒストグラムより
、変曲点を抽出し、これら変曲点に基づいて最終的に百
分Ｂが決定される（ＳＴＩＯ１第６図も参照）。 続＜５ＴＩＩでは、画分Ｂ内で前方散乱光強度１ｏ（ｉ
）の線上で、９０°散乱光強度■、。のヒストグラムを
作成する〔第１図及び第２図（ａ）（ロ）参照〕。 ５Ｔ１２では、このヒストグラム上で境界点ｒＭいｒｂ
ｉを決定する。この境界点の決定は、第２図（ａ）に示
すようにヒストグラムに変曲点がない場合には、ヒスト
グラムが所定のしきい値ｎいと交わる点を境界点ｒａｉ
、ｒ５と決定する。また、第２図（ｂ）に示すように、
ヒストグラムに変曲点Ｘ１、ｘ２がある場合には、これ
を境界点ｒａｔ、ｒｂｔと決定する。もちろん、２つの
境界点のうち、一方をしきい値ｎｔｈにより、他方を変
曲点により決定してもよい。ヒストグラム全体がしきい
値ｎいより小さい場合、あるいはヒストグラムより変曲
点が抽出できない場合には、境界点なしとする。 ５Ｔ１３では、境界点ｒ　１ｌｉｓ　ｒ　ｂｉがすべて
決定されたか否かを判定する。この判定がＮｏの場合に
は、５ＴＩＩへ戻り、前回の！。（ｉ）よりΔ■。 大きい■。（ｉ＋１）について同様にヒストグラムを作
成し、境界点を決定する（ＳＴ１２）。すなわち、画分
Ｂ内においＤ１Δ■。ごとに引かれる■。（１）、・・
・　■。（ｍ）の線上で、それぞれヒストグラムを作成
し、境界点を順次決定して行くわけである。 ５Ｔ１３の判定がＹＥＳの場合には、５Ｔ１４へ分岐し
、境界点ｒａｉ、ｒｂｔを結んで得られる領域を最終画
分Ｂ゛に決定する。この最終画分Ｂ。 は５ＴＩＯで得られた画分Ｂよりも、リンパ球の分布に
適合する形となっている。また、５ＴＩＩ、１２の処理
は、輪郭追跡法を行う場合に比べて処理時間を短（する
ことができる。 ５Ｔ１４で決定された最終画分に属するデータについて
は、さらに蛍光特性解析が行われる（ＳＴ１５）。この
蛍光特性解析では、例えば緑色蛍光強度１．赤色蛍光強
度■、についてそれぞれヒストグラムを作成し、陽性率
の算出等が行われる。この蛍光特性解析の結果は、ＣＲ
Ｔ２３に表示され（ＳＴ１６）、プリンタ２４よりプリ
ントアウトされる（ＳＴ１７）。 ５Ｔ１８では、測定すべき試料があるか否かが判定され
る。この判定がＹＥＳの場合には、Ｓｒ２へ戻り、次の
試料の測定を行い、Ｎｏの場合には、測定を終了する。 なお、上記説明では、リンパ球サブセットの分析を例に
とっているが、この発明はこれに限定されるものではな
く、各種細胞（あるいはこれに準する粒子）集団、例え
ば赤血球、網赤血球、血小板等の分析に広く適用可能な
ものである。また、用いるパラメータも、前方散乱光強
度、９０°散乱光強度、緑色蛍光強度、赤色蛍光強度の
４種類に限られるものではない。さらに、この発明はウ
ィンドウ法を用いる細胞分析装置にも適用可能であり、
この場合にはウィンドウ内で最終画分を決定する。 （ト）発明の詳細 な説明したように、この発明の細胞分析装置は、細胞光
情報収集手段で収集された細胞光情報について、１つの
パラメータの所定度数ごとに、もう一つのパラメータの
ヒストグラムをそれぞれ求めるヒストグラム作成手段と
、このヒストグラム作成手段で得られたそれぞれのヒス
トグラムより境界点を抽出する境界点抽出手段と、この
境界点抽出手段で抽出された境界点を結んで形成される
領域を最終画分とし、この最終画分に基づき、目的細胞
集団の細胞光情報を収集する第２の細胞光情報収集手段
とを備えてなるものであるから、目的細胞集団に適用す
る画分を短い処理時間で決定でき、分析精度の向上を図
ることができる利点を有している。

【図面の簡単な説明】

第１図は、この発明の一実施例に係る細胞分析装置の最
終画分決定を説明する三次元表示すイトダラムの要部を
示す図、第２図（ａ）及び第２図（ｂ）は、同細胞分析
装置の最終画分決定をそれぞれ説明するヒストグラムの
模式図、第３図は、同細胞分析装置の構成を説明するブ
ロック図、第４図は、同細胞分析装置の動作を説明する
フロー図、第５図（ａ）及び第５図（ｂ）は、同細胞分
析装置の画分抽出演算を説明するためのそれぞれ９０°
散乱光強度、前方散乱光強度のヒストグラム、第６図は
、前方散乱光強度、９０°散乱光強度のサイトグラムの
一例を示す模式図、第７図（ａ）及び第７図（ｂ）は、
それぞれ９０°散乱光強度と前方散乱光強度のヒストグ
ラムの一例をそれぞれ示す図である。 １０：フローセル、　　　　１４；レーザ、１５ａ１５
ｂ１５ｃ・１５ｄ：光検出器、２１：ＭＰＵ、　　　　
　　　２３：ＣＲＴ。 ２４：プリンタ。 特許出願人　　　　　立石電機株式会社代理人　　弁理
士　　中　村　茂　信

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）細胞浮遊液が流されるフローセルと、このフロー
   セル内を流れる細胞に光ビームを照射する光源と、 この光ビームが照射されたそれぞれの細胞について、複
   数のパラメータよりなる細胞光学的情報を検出する細胞
   光学的情報検出手段と、 この細胞光学的情報検出手段で得られる、１又は２以上
   のパラメータに基づいて前記細胞浮遊液中の細胞集団を
   分画する細胞集団分画手段と、この細胞集団分画手段で
   得られた画分のうち、１又は２以上の画分に基づいて、
   目的とする細胞集団の細胞光学的情報を収集する細胞光
   学的情報収集手段と、 前記細胞光学的情報検出手段で検出された細胞光学的情
   報及び前記細胞光学的情報収集手段で収集された目的細
   胞集団の細胞光学的情報を処理する細胞光学的情報処理
   手段と、 この細胞光学的情報処理手段の処理結果を出力する出力
   手段とを備えてなる細胞分析装置において、 前記細胞光学的情報収集手段で収集された細胞光学的情
   報について、１つのパラメータの所定度数ごとに、もう
   一つのパラメータのヒストグラムをそれぞれ求めるヒス
   トグラム作成手段と、このヒストグラム作成手段で得ら
   れたそれぞれのヒストグラムより境界点を抽出する境界
   点抽出手段と、 この境界点抽出手段で抽出された境界点を結んで形成さ
   れる領域を最終画分とし、この最終画分に基づき、目的
   細胞集団の細胞光学的情報を収集する第２の細胞光学的
   情報収集手段とを備えたことを特徴とする細胞分析装置
   。