JPH02500639A - 活性化抗原 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 活性化抗原 ［発明の背景］ 本発明は、免疫反応に関与する細胞の活性化に関するものである。

Ｔリンパ球は、高度の特異性をもって抗原を識別すると共にエフェクタ細胞とし て作用しかつ免疫反応の性質及び強度を調整する能力を有するため、免疫反応に おいて中心的役割を演する。標的細胞の識別に関与するＴ−細胞にあける特異性 抗原の同定及びこの種の抗原を識別するモノクローナル抗体の入手性は、Ｔ−１ 胞活性化の過程及び異なるザブ群のＴ−細胞の詳細な特性化を可能にする。たと えば、抗原−リセプタ複合体Ｔ　ｉ　、／Ｔ３　（ＣＤ３　）に対するモノクロ ーナル抗体及びＴ１１　（ＣＤ２）抗原にあけるエピトープに対する抗体の組合 せは、Ｔ−細胞の増殖を誘発することが判明している。４４．０００ダルトン（ Ｄ）の異なるグリコ蛋白を識別する他の抗体９．３も蛍独で低いは腫瘍プロモー タ１２−〇−テトラデカノイルーホルホール−１３−アセテート（ＴＰＡ）と組 合せて細胞を刺戟することが報告されている。ネズミにおいて、他のＴ−細胞刺 戟性抗原を同定すべく、たとえばＬＶ６０−カス（ＴＡＰ＞とてｈｙ−１抗原と の生成物のような数種の抗体が使用されている。

Ｔ−細胞の表面にあける個々の構造の標的識別作用に加え、Ｔ−細胞増殖の制御 に際し異なるＴ−細胞抗原間に相互作用が存在すると言う知見を裏付ける証拠が 蓄積している。たとえば、Ｔ３／Ｔ　ｉ複合体に対する抗体は、Ｔ１’ｌ−誘発 増殖を阻止し、或いはその逆であると報告されている。同様に、単核細胞の不存 在下で、Ｔ３及びＴ１１抗原又はＴ３及びＴ１　（ＣＤ５）抗原のいずれかに対 する非ミトゲン抗体の組合せも、休止Ｔ−細胞の増殖をもたらすことが判明して いる。

Ｆ発明の要点］ 本発明は、精製された抗原又はその断片、この抗原に対する抗体、並びにＴ−細 胞を活性化するためのこれら抗体の使用方法を特徴とする。これらの抗体は、丁 −細胞活性化又は増殖をホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）単独との 及びＴ１１抗原のＴ］１３エピトープ［モイエル等、セル、第３６巻、第８９７ 頁（１９８４月に対する抗体（抗−Ｔ１１３）単独との相乗作用で誘発すること ができる。

好適実施態様において、抗原は還元条件下でのポリアクリルアミドゲル電気泳動 （ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）分析により測定して分子量１４０ＫＤ及び１０５ＫＤの少 なくとも２種の主ポリペプチドから構成され、特に好ましくは抗原は蛋白２Ｈ１ であり、抗体はモノクローナルでありかつ細胞ライン抗−２Ｈ１［ＡＴＣＣに奇 託されかつかつ受託番号ＨＢ　９３９９を有する］により表わされる抗体である 。

本発明は、Ｔ−細胞の活性化に適する抗体を提供する。これらの抗体はざらに、 キラー細胞を活性化させかつたとえば１２のような他の化合物に対するその感受 性を増大させる要素を細胞中に出現させるべく使用することもできる。これらを 用いて標的細胞を標識し、かつこれら細胞を他の細胞による死滅に対し感受性に することができる。インビトロに６いて、これらの抗体は、たとえばＩＬ２及び ［４のようなリンホキンの産生を開始させるにも有用である。

本発明の他の特徴及び利点は好適具体例に関する以下の説明及び請求の範囲から 明らかとなるであろう。

［好適具体例の説明］ 先ず最初に図面につき簡単に説明する。

巨星 第１図及び第２図は特異性抗体により沈澱させた抗原のポリアクリルアミドゲル 電気泳動（ＰＡＧＥ）分析の写真である。

！ｌ Ｔ−細胞抗原 Ｔ−細胞抗原はＴ−細胞【こ見られる蛋白であって、これに対し抗体を産生させ ることができる。一般に、これらの抗体はＰＭＡ及び抗−丁１１３の両者との相 乗作用でＴ−細胞活性化及び（又は）Ｔ−細胞増殖を誘発することができる。す なわち、Ｐ　Ｍ　、Ａ及び抗−Ｔ１１３の両者は単独でこれら抗体と相乗作用し て、この種の活性化若しくは増殖を誘発することができる。好ましくは、この抗 原は霊長動物、特に好ましくはアオツス・トリビルガラス（ＡＯｌＵＳ　ｔｒｉ Ｖｉｒ（７ａｔＵＳ　）のＴ−細胞に見られる。Ａ９　トリビルガラスにおいて 、この種の１種の抗原は２Ｈ１と呼ばれ、分子１１４０ＫＤ７ｉ［１０５ＫＤの ２種の主ポリペプチドで構成される。

これらの抗原は常法を用いる親和性クロマトグラフィーにより精製することがで き、たとえば２Ｈ１に対するモノクローナル抗体を固相に結合させ、かつ破＠Ｔ −細胞からの蛋白をカラムに通過させることができる。結合したものを、ざらに 常法により精製することができる。

この種の精製の後、遺伝子工学の標準技術を用いてこれら抗原をコードする遺伝 子を単離することができ、その際たとえば抗原のＮ−末端配列を決定し、このア ミノ酸配列の１部をコードしうるＤＮＡプローブを作成し、かつこのプローブを 用いてｃＤＮＡ或いはプローブと同類のＤＮＡをもったゲノム保存物にあけるク ローンを検出する。これらのクローンは一般に、少なくとも抗原の１部をコード するＤＮＡで構成される。関連する遺伝子もこの手順によって分離することがで きかつ組換蛋白を産生させるのに有用であり、次いでこれら蛋白を用いて下記す るように本発明に適した抗体を産生させることができる。

２Ｈ１又はその他のこの種の抗原の断片も、下記するように抗体を産生させるの に有用で必る。これら断片は、たとえば全抗原の酵素切断により或いは組換ＤＮ Ａ技術により常法で形成させることができる。たとえば、抗原の断片は、発現ベ クターを含有する宿主＠胞にて抗原をコードする構造遺伝子の１部のみを発現さ せることにより、発現させることができる。この種の断片は抗原的に作用して、 全抗原を有するＴ−細胞を識別しうるような抗体を誘発せねばならない。

相乗性抗体 相乗性抗体は、上記抗原若しくは断片に対し産生される抗体である。これらの抗 体はこれら抗原における少なくとも１種のエピトープを識別し、かつＰＭＡ又は 抗−丁１１３と一緒に作用してＴ−細胞活性化を誘発する。これらの抗体はポリ クローナルとしうるが、好ましくはモノクローナルである。

これらは、精製された抗原又はその断片を用いて常法により生成されるＣ特に好 ましくは、抗体は２Ｈ１に対し産生きれる。

以下の実施例はＡ、トリビルガラスの２Ｈ１に対するモノクローナル抗体の産生 を示している。これらの実施例は本発明を限定する目的でなく、当業者は上記の ような他の抗原及び抗体を本発明の思想内で単離しかつ用いることを了解するモ ノクローナル抗体抗−２Ｈ１を、新世界霊長動物Ａ、トリビルカツスから得られ たＴリンパ球ラインの細胞によりＢａｆｂ／ＣＪネズミ（ジャクンン・ラボラド リース社、バール・ハーバ−、メイン州）を免疫化した後に、標準技術によって 産生させた。この動物からの末梢血液リンパ球をＰＨＡ　（フィトヘマグルチニ ン）によりインビトロで刺戟し、次いで丁−細胞成長因子と共に連続培養に維持 した。抗原刺戟した動物からの牌細胞を集め、Ｈ、Ａ　Ｔ−感受性の骨髄腫ライ ンＮ５−１と融合させ、かつモリモト等によりジャーナル、イミュノロジー、第 １３４巻、第１５０８及び３７６２頁（１９８５）に記載された選択培地で培養 した。次いで、上澄液がヒト下リンパ球に対し反応性であると判明したハイブリ ドーマ細胞を発生させてざらに特性化した。

じトＥ十細胞に対し反応性の抗体を含有するハイブリドーマ培養物を選択し、ク ローン化させ、かつフィーダー細胞の存在下に制限希釈法によって再クローン化 した。次いで、悪性腹水を発生させて分析用に用いた。１種のハイブリドーマ抗 体、すなわち抗−２Ｈ１はＩに］Ｇ１サブクラスである。

Ｔ−細胞及び胸腺細胞に対する抗−２Ｈ１抗原の抗−２ｄ１反応性及び分布のパ ターンは抗−Ｔ１１、抗−Ｔ３及び抗−９，３並びにその各抗原とは異なってい る。たとえば、抗−２Ｈ１に対し反応性であるＴ−細胞及び胸腺細胞の蛍光特性 、並びに抗−Ｔ１１、抗−Ｔ３及び抗−９，３抗体［ラインヘルツ等、セル、第 １９看、第８２１頁：モイエル等、ジャーナル・エキスペリメンタル・メジメン 、第１５８巻、第９８８頁（１９８３）　：モイエル等、セル、第３６巻、第８ ９７頁（１９８４）　：及びハンセン等、イミューノゲネテイツクス、第１０巻 、第２４７頁（１９８０＞にそれぞれ記載されたように作成］との反応後の特性 を検討した。

抗−２８１抗体は、禾梢Ｔ−細胞の９０％と反応しかつ胸腺細胞の僅か１０％と 反応する。これに対し、抗−Ｔ１１抗体は末梢下−細胞の９５％と反応しかつ胸 腺細胞の９０％と反応し、また抗−Ｔ３は末梢Ｔ−細胞の９２％及び胸腺細胞の ５０％と反応する。抗−９，３抗体は末梢Ｔ−細胞の８５％及び胸腺細胞の６０ ％と反応する。

実施例　２　：　２Ｈ１抗原の構造 ２Ｈ１の構造を、この抗原に対し特異性の抗体で沈澱させて決定した。要するに 、Ｃｏｎ　Ａ−刺戟末梢血球（２ｄ）をラクトペルオキシダーゼ触媒による沃素 化で標識し、かつ免疫沈澱分析用のＮＰｄ０溶解緩衝液中に溶解させた。２．０ ｘ１０７　／ｄｏＷＡ胞をＮＰ４（１ｇ解緩衝液（１％Ｗ／Ｖ）　にｍＷｉＭせ た。２０ｍＨトリス−ＨＣ１緩衝液、ｐｈ８．２に６けるノニデットｐ　４０ハ １５０ｎ＋ｔ４のＮａＣｊと１ｍＭのＥＤＴＡと１ｍＭのフェニルメチル−スル ホニルフルオライド（ＰＭＳＦ＞と２．５＋ｎＨのイオドアセタミドと１０μ９ 　／　ｒｐＪ！のトリプシン阻止剤（シグマ・ケミカル・カンパニー社）とを含 有する。細胞溶解物（１ｄ）をスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙ ｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒ　−ｅｕｓ）：＋−ワン菌株１の１０％（Ｗ／Ｖ）懸 濁物１００度により４℃にて１晩予備清浄した。蛋白Ａセファロースに結合した ２ｄ１抗体（ビーズ１１０１ｊ当り５０馬の抗体）を溶解物に数時間かけて添〃 口した後、遠心分離しかつ洗浄した。免疫沈澱物を、０．１％（Ｗ／Ｗ）のラウ リル＠酸ナトリウム（ＳＯ３）を含有する溶解緩衝液で洗浄し、かつ溶解緩衝液 単独で２回洗浄した。次いで、沈澱物をＳＯ３−ポリアクリルアミド勾配ゲル（ ５〜１０％）に流した。その結果を第１図に示し、レーンはそれぞれ次の通りで おる：（Ａ）ネズミ■Ω比較：Ａ　（Ｂ）還元条件下く５％Ｖ／Ｖ２−メルカプ トエタノール）での抗−２ｄ１抗体；並びに（Ｃ）非還元条件下での抗−２８１ 抗体。

還元条件下にて抗−２８１抗体は約１４０，０ＯＯＤ及び１０５．０００１）の ２種のサブ単位を沈澱させる［第１（Ｂ）図］。

これに対し、非還元状態において２Ｈ１抗原は約１２０，０００［）及び９０． ＯＯＯ［）の２種のサブ単位として移動することが判る［第１（Ｃ）図コ。この 実施例において各ポリペプチドは同じ強度をもって出現するが、各バンドの相対 強度は細胞種類及び実験に応じて変化することが判明した。たとえば、Ｔ−細胞 ラインＨＰ８−ＡＬＬからの沈澱物は還元条件下で１３５．００００に主バンド を生じた。このデータは、２Ｈ”ｌサブ単位のそれぞれに連鎖内ジスルフィド結 合が存在することを示している。非還元条件下にて検出可能なバンドがより高い Ｍｒに存在しないことは、連鎖内ジスルフィド結合により形成された複合体の存 在に対する反証となる（ただし若干量は存在しうる）。

抗−２ｄ１抗体はＴ３／Ｔ　ｉ複合体又はＴ１’ｌ抗原の生成物に対し反応せず 、又は共沈しない。これは第２図に示され、ここではこれらの抗原に対し各種の 抗体で形成された免疫沈澱物を５Ｏ８−ＰＡＧＥ分析により直接比較した。この 分析には、細胞をラクトペルオキシダーゼ−触媒での沃素化により標識し、かつ 上記したような免疫沈澱にかけた。第２図におけるレーンはそれぞれ次の通りで ある＝（Ａ）比較ミズミＩｑ：（Ｂ＞抗−Ｔ３３抗（ＲＷ２　８Ｃ８）；　（Ｃ ）抗−Ｔ１１抗体（７Ｔ４−７Ｅ１０）：　（Ｄ）抗−２ｄ１抗体；並びに（Ｅ ＞比較ネズミ１ｇ（展開し過ぎ）、Ｔ−３抗原は約１９，０００〜２０，０００ ［）及び２５，０ＯＯＤのサブ単位を含む（第２図）（４２，０ＯＯＤ〜５０， ０ＯＯＤにあける微量の物質がしばしば見られた）。Ｔ１１抗原は５０．ＯＯＯ ［）におけるポリペプチドである［第２（Ｃ）図］。これに対し、抗−２Ｈ１抗 体はＴ３／Ｊｉ若しくはｔ１１抗原のいずれの範囲にも検出可能な物質を伴わず に１４０，０００Ｄ及び１０５，０ＯＯＤ！ごてサブ単位を沈澱させる［第２（ Ｄ）図コ。約７０．０ＯＯＤにあける他のバンドが抗−２Ｈ１沈澱物に見られた が、過剰露出された比較沈澱物にあけるバンドの存在はこのバンドが非特異性あ ることを示している［第２（Ｅ）図］。これらのデータは、２Ｈ１抗原がＴ３／ Ｔ　ｉ抗原及びＴ１１−抗原とは相違することを示している。ざらに、抗−２Ｈ １沈澱物における４４，０００［）の検出可能なポリペプチドの不存在は、２Ｈ １抗原が９．３抗原とは相違することを示している。

２Ｈ１抗原の構造に関する他の情報は、沃素化細胞から抗−２Ｈ１抗体により沈 澱させたサブ単位の二次元非平衡ゲル（ＮＥＰＨＧＥ／５ＤＳ−ＰＡＧＥ）分析 により得られた。

細胞を沃素化しかつ上記のように免疫沈澱にかけた。

ＮＥＰＨＧＥ／ＰＡＧＥを２０％（ｗ／ｖ）ｐＨ２，ａ及び８０％（Ｗ／Ｖ）　 ｐＨ２〜１１のセルパライト（セルバ・リミテッド社）の下で行なって、２％セ ルパライトを含有するゲルを作成した。この分析は、ｉａｏ、ｏｏｏ□及び１０ ５，０ＯＯＤにおけるバンドのそれぞれが３〜５のｌ）Ｈ範囲にわたって伸びる 一連の個々のスポットで構成されることを示した。ざらに、これらスポットのそ れぞれはほぼ同じ強度を有した。ゲルの酸性末端に一連のこれら蛋白が存在する ことは、２Ｈ１サブ単位のそれぞれに複数のシアル酸残基が存在することに一致 する。

■ 上記抗原はこの種の抗原を有する細胞の個数を決定すべく使用しうる抗体を産生 させるのに有用であり、したがってこの種の抗原分子の欠如又は過剰量に対し成 る種の病状を相関させることができる。ざらに抗原自身を用いて、動物内又は体 液内のこれら抗原に対する抗体のレベルを決定することもできる。

たとえば、第１表に示したように、抗−２８１抗体の反応性を間接免疫蛍光法若 しくは細胞蛍光撮影法により決定した。

抗−２Ｈ１は末梢Ｂ１１１胞、ヌル細胞及びマクロファージに対し反応しない。

抗−２Ｈ１は、ざらに試験した６種のリンパ芽球Ｂ細胞ライン及び４種の造血ラ インに対しても非反応性である。これに対し、抗−２８１は７種のヒトＴ細胞ラ インの内４種［ペー／Ｌ、ＩＶ、ＨＰＢ、Ｈ３Ｂ、５ＫＷ３］　に；１反応性で おり、かつＪ　Ｍ細胞ラインに対し弱く反応する。これらの結果は、２Ｈ１エピ トープがＴリンパ球に制限されかつ造血源の他の細胞には発現されないことを示 している。したがって、上記方法又はその均等方法により全ゆる試料にてこの種 のリンパ球のレベルを容易に決定することができる。

第１表 抗−２Ｈ１抗体とヒトリンホイド 及び細胞ラインとの反応性 工、リンホイドＩＩ胞 Ｔ−細胞　十 Ｂｉｌ！胞　− ヌル細胞　− ＭＯ− Ｉｌ、　Ｔ−細胞ライン ５ＫＷ３　＋ ■、Ｂ細胞ライン Ｒａｊ　ｉ　− ＲａｍＯＳ　− ［）ａｕｄ　ｉ　− ＬａＺ３８８　− ＬａＺ５０９　− １−ａｚ’１５６　− ＩＶ、造血ライン ＫＧ−１− （−）はバックグランド比較よりも５％未満の反応性を示し、士は５〜３０％の 反応性を示し、かつ（＋）は３０％より大きい反応性を示す。

抗−２Ｈ１と活性化胸腺細胞との反応性についても決定することができる。たと えば、Ｃ０ｎＡ及びＰＭＡ活性化の後の胸腺細胞にあける２’１−１１抗原の発 現の時間経過を検査することができる。代表的実験は、１日後に２８１抗原の発 現が活性化胸腺細胞にて著しく増大しかつこれら細胞にあけるＩＬ−２リプセタ 発現に一致することを示す。同様に、ＣｏｎＡ／ＰＡＭ活性化の俊、胸腺ｍ胞は 平均して抗−２Ｈ１反応性を有する細胞の比率で７倍増加して発現された（活性 化後の８６％に対し活性化前の１３％）。このことは、２８１分子の発現が胸腺 の活性化に相関することを示唆している。末梢Ｔ−Ｉｊｊ胞における２Ｈ１抗原 密度は、Ｔ１１及びＴ３抗原密度と同様に、活性化後に徐々に増大する。

ざらに、上記抗体は相乗性分子抗−Ｔ１１３若しくはＰＭＡを用いるＴ−細胞の 活性化にも有用である。これらの抗体及びＰＭＡをインビボで使用してこれらの ａ胞を活性化させ、或いはインビトロで使用してたとえばＩＬ２若しくはＩＬ４ のようなリンホキンを人工的に出現させることもできる。ざらに、抗体分子の１ 部を腫瘍特異性の抗体と組合せて、腫瘍細胞に対し特異的に反応するハイブリッ ド分子を産生ざぜたり、或いはＴ−細胞と接触させる場合はＴ−細胞を活性化し て腫瘍を死滅させることもできる。

たとえば、Ｔ−細胞を標準法により患者から取出し、インビトロにて抗−２Ｈ１ 及びＴ１１３で処理し、次いで患者に戻すこともできる。この手順は、Ｔ−細胞 を活性化させると共に病気に対する患者の免疫性を増大させる。

ざらに、インビトロにて末梢下−細胞を活性化させることもできる。たとえば、 単核ＩＢ胞欠失したＴ−細胞をＰＭＡと共に又はそれなしにモノクローナル抗体 と一緒に培養し、かつＴ−細胞の増殖反応を測定した。単核細胞欠失したＴ−細 胞をモノクローナル抗体（たとえば抗−２Ｈ１）及びＴＰＡ［シグマ・ケミカル ・カンパニー社、セントルイス、ミズーリ州コと丸底微小測定ウェル［コスタ− 社、ケンブリッジ、マサチューセッツ州］にて１０％ＡＢＩｆ！ｌ清と２００ｍ ＭのＬ−グルタミンと２５ｍＭのＩ−ＩＥＰＥｓ緩笥液（マイクロバイオロジカ ル・アソシエーツ社）と０．５％の重炭酸ナトリウムと１％のペニシリン−スト レプトマイシンとが補充させた０、２ｄのＲＰＭ　Ｉ　１６４０培地中で混合し た。培養を開始した後に定期的に（３日間）、プレートにトリチウム化チミジン （Ｉ３−ＴｄＲ：　０．０５　ｆｄ！中ｉｍｃｉ）を１８時間り口え、カッマツ シュ■セルハーベスタを用いて収穫した。

第２表に示したように、抗−２Ｈ１、抗−Ｉ４及び抗−Ｔ１１１並びに抗Ｔ３は それぞれ単独で、０．５％の単核細胞を含有するＴ−細胞調製物に対し有糸分裂 促進性でなかった。

しかしながら、ＰＭＡの存在下で抗−２８１及び抗−Ｔ３はＴ−細胞に対し有糸 分裂促進性でめったが、抗−Ｉ４及び抗−Ｔ１１は促進性でなかった。同様に、 抗−２Ｈ１は単独でマクロファージの存在下でもＴ−リンパ球に対し有糸分裂促 進性でなかったが、ＰＭＡＴ−細胞の存在下で抗−２８１抗体の種々のＲ度によ り刺戟した後には、ＰＭＡによる抗−２Ｈ１腹水の１０−５希釈物の存在下（２ 部Ｍｄ）でも有糸分裂促進効果を示した。

抗−２８１及び抗−Ｔ１１３の組合せもＴ−細胞増殖を刺戟しうるのに対し、い ずれの抗体も単独ではＴ−細胞の増殖に対し作用を示さなかった。たとえば、第 ３表に示したように、末梢血液リンパ球の増殖反応（１０５／　２００ＪＩＩり を、１０％ＡＢ血清と２００ｍＭのＬ−グルタミンと２５ｍＭのｈＥｐＥｓ緩ｉ 液と１％のペニシリン−ストレプトマイシンとが補充されたＲ　ＰＭ　Ｔ　１６ ４０にて３反復で分析した。モノクローナル抗体（１：２００希釈）を培養の開 始時点に添加し、その後培養物には１６時間にわたり所定時点で［Ｈ３］チミジ ン（１μＣｉ／ウ工ル１個）を加えた。一般に、刺戟のレベルは抗−Ｔ１１２及 び抗−１’−１”ｊ３の組合せにつき見られるよりも約５０〜７０％低かった［ 第３表、第４行対第７行の比較、数値はＣ０ｐ８ｍ、を表わＶ］。これらの結果 は、２Ｈ１抗原もＴ１１抗原（Ｔ１１３）と相乗的に作用してＴ−細胞の増殖を 誘発させうろことを示している。

第２表 ＰＭＡプラス抗−２Ｈ１抗体によるＴ−細胞の活性化Ｈ３−チミジン（ＰＭＡ） 　ａ 媒体　実験］　実験２　実験３ ２旧　３９３±１１０　５９３±２３０　６３ａ±１２５１４−　４４１±　１ ２４　２７８±　１５０　８４６±　１８２Ｔ　ｉｉｌ　３７１±１１０　３９ ３±１１０　３９３±１１０Ｔ３　９７２±１３９　１５１７±３６０　１０２ ４±２０５Ｐ）ＩＡ　９７８±２４５　１４２８±１９４　４２５±　９０２旧 ／ＰＨＡ　４５４Ｂ？±４３８２　３６４６３±５２５９　２９０６７±３００ ４Ｔ４／ＰＨＡ　１０６４±１９４　１５２８±２１８　１３４６±１１２Ｔ　 １１１　／ＰＭＡ　Ｉ２１ｄ±　１４３　１６４３±　１７４　１１５６±　９ ８Ｔ３／ＰＨＡ　７６４１８±５４６５　６０８８２±６４９８９６３７５±４ ２０１ａ　：　ＰＭＡ　（２ｎ　ｇ／ｄ＞の存在下又は不存在下にて単核細胞欠 失したＴ−細胞（１ｘ１０５　）を１：１００希釈の抗体く腹水）と共に培養し た。Ｉ３−チミジンの吸収を３日後に測定した。

ｂ＝数値は３反復試料の平均値±ＳＭＥＭとして表わした。

第３表 抗−２Ｈ１抗体と抗−Ｔ１１３抗体と の組合せによるＴリンパ球の活性化 培養物添加　実験１　実験２ 比較（媒体＞　１５４　９２ Ｔ１１２　＋Ｔ１１３　９７７２４　５３４４３Ｈ１＋Ｔ１１３　２９６４１　 ３３２２９亙低 抗−２８１はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されて、Ａ ＴＣＣ受託番号ＨＢ　９３９９が付与されている。この培養物は３０年間又は任 憲の菌株につき要求がめった後５年間又は特許期間の終了までのいずれか長０期 間維持される。本出願人で必るダナ・ファーバー・キャンサー・インステイチュ ートは、！ｉ）許期間の終了前に死滅した場合に（よ、この培養物を交換する＠ 務を認めると共に特許の発行【ごつきＡＴＣＣに通知する義務を認め、その時点 で寄託物は公開されるものとする。その時点まで、寄託物は米国特許法の規定に したがい米国特許庁に対し利用することができる。

国際調査報告

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. １．ＰＭＡ単独との及び抗−Ｔ１１３単独との相乗作用でＴ−細胞活性化若しく は増殖を誘発しうるが、抗体単独では前記活性化若しくは増殖を誘発しえない抗 体。
2. ２．抗体が、２種の主ポリペプチドを有する抗原を識別する請求の範囲第１項記 載の抗体。
3. ３．ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により決定されるポリペプチドの分子量が還元条件下 で１４０ＫＤ及び１０５ＫＤである請求の範囲第２項記載の抗体。
4. ４．抗体がモノクローナルである請求の範囲第１項記載の抗体。
5. ５．抗体が、ＡＴＣＣに寄託されかつ受託番号ＨＢ９３９９が付与された細胞ラ イン抗−２Ｈ１により発現される請求の範囲第４項記載の抗体。
6. ６．ＰＭＡ単独との及び抗−Ｔ１１３単独との相乗作用でＴ−細胞活性化若しく は増殖を誘発しうるが、単独では前記活性化若しくは増殖を誘発しえない抗体を 識別する精製抗原又はその断片。
7. ７．２種の主ポリペプチドを有する請求の範囲第６項記載の抗原。
8. ８．ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により決定されるポリペプチドの分子量が還元条件下 で１４０ＫＤ及び１０５ＫＤである請求の範囲第７項記載の抗原。
9. ９．抗体が１種のポリペプチドにおけるエピトープを識別する請求の範囲第８項 記載の抗原。
10. １０．２Ｈ１である請求の範囲第８項記載の抗原。
11. １１．細胞を請求の範囲第１項、第２項、第３項、第４項又は第５項記載の抗体 及びＰＭＡ若しくは抗−Ｔ１１３と混合することを特徴とするＴ−細胞の活性化 方法。