JPH0251920B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、水溶液中における安定性が高いＤ−
フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニ
ンアルデヒド硫酸塩ならびにその製造方法に関す
る。 ヘパリン、関連構造を有するポリアニオン類
（ヘパリノイド）及びクマリン誘導体が現在、主
として抗凝固療法に適用されていることは知られ
ている。これらの薬剤の共通の特徴は、蛋白質分
解反応、血液凝固の惹起の直接的抑制を引き起こ
し得ないことである。ヘパリンは触媒として血漿
阻子因子の１つ、アンチトロンビンの、凝固プ
ロセスの酵素に対する抑制作用、主としてトロン
ビン形成プロセスの酵素に対する抑制作用を促進
するのに対し、クマリン誘導体はγ−カルボキシ
−グルタミン酸（Gla）部分を含む蛋白質の生合
成を抑制する。血液凝固プロセスに関与するこの
タイプの蛋白質は４つあり、それらの１つがプロ
トロンピンである。Gla残基を含まないか、また
は正常よりも少ない数のGla残基を含む血液凝固
因子は不活性であり、凝固プロセスに関与しな
い。しかしながら、この抑制はGla含有蛋白質の
全範囲の合成を網羅し、すなわち、凝固プロセス
の天然の阻止因子の１つである蛋白質Ｃ（または
因子XIV）もまたクマリン誘導体の存在下で不
活性な形で合成され、これはかなり不利なことで
あることに注意すべきである。さらに特徴的なこ
とは、クマリン誘導体が経口投与によつてのみ適
用し得るのに対し、ヘパリンは経口投与ではほと
んど不活性であるので主として静脈内注入によつ
て投与されることである。従つて、ヘパリンの作
用は短期間に急速に示され得るのに対し、合成阻
止因子であるクマリン誘導体の作用は24〜46時間
後に初めて示される。 さらに、抗凝固活性を示すトリペプチドアルデ
ヒドがあることも知られているが、これらは前記
薬剤とは逆に、トロンビンと直接反応して、アン
チトロンビンの不存在下でさえ、その蛋白質分
解反応を抑制する。ハンガリー国特許第169870号
に記載されたＤ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリ
ル−Ｌ−アルギニンアルデヒド酢酸塩及びベルギ
ー国特許第880844号に記載されたＤ−フエニルア
ラニル−Ｌ−プロリル−N^G−カルボキシ−Ｌ−
アルギニンアルデヒドは共に強力なトロンビン阻
止因子である。 前記合成アルギニン−ペプチドアルデヒド塩の
アンチトロンビン力価、特に遊離末端アミノ基を
有する化合物、すなわちＤ−フエニルアラニル−
Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒド酢酸塩
及び塩酸塩のアンチトロンビン力価は変化し、水
溶液中に放置すると急速に低下するため、治療に
用いることができない。遊離トリペプチドアルデ
ヒドのN^G−カルボキシ誘導体、すなわち、Ｄ−
フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−N^G−カルボ
キシ−Ｌ−アルギニンアルデヒドは緩衝剤水溶液
中で20〜24時間は活性を持続するが、数日後には
既にかなりの力価減少が見られ、固体の形態でも
数ケ月後にはもとの活性を失う。 本発明は、これまで知られているものとは異な
り、水溶液においても安定なＤ−フエニルアラニ
ル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒドの
新規な塩及びその製造方法に関する。 Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア
ルギニンアルデヒドの種々の塩の安定性が水溶
液、すなわち、等張塩溶液中で著しく変化するこ
とが判明した。本発明者らの試験においては、ペ
プチドは10mg／mlの濃度で溶解せしめ、５℃を貯
蔵し、そして、付随しておこるアンチトロンビン
活性の変化を180日間記録した。以下の成分を含
む系中で力価を検定した：0.9％塩化ナトリウム
溶液中の0.5％ウシフイブリノーゲン0.2ml；ペプ
チド溶液を含むトリス（ヒドロキシメチル）−ア
ミノ−メタンヒドロクロリド−塩酸緩衝液（PH
7.2）0.1ml：及び、米国規格ヒトトロンビン（US
Standard Human Thrombin）〔NIH、ベテス
ダ、メリランド、米国〕の10単位／ml溶液0.1ml。
ペプチドを含まない系のトロンビン時間は、「シ
ユナイザー−グロス凝固計（Schnither−Gross
Coagulometer）」で測定して15秒である。 トリペプチドアルデヒド溶液の活性は、反応混
合物が3.5×10^-7Mの最終濃度（トリペプチドア
ルデヒドスルフエート0.175μｇ／mlの場合）にお
いて５倍の相対トロンビン時間を惹起した時に任
意に100とした。 試験データを第表に要約する。等張塩溶液中
の対応する塩酸塩の活性が５日後に減少し始め、
そして酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩及びｐ−ト
ルエンスルホン酸塩の活性が既に数日後に減少し
始める（関連した性質を有する遊離トリペプチド
アルデヒドのN^G−カルボキシ誘導体と同様）の
に対し、Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−
Ｌ−アルギニンアルデヒド硫酸塩は90日間アンチ
トロンビン活性を持続する。持続性安定性試験に
おいては、Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル
−Ｌ−アルギニンアルデヒド硫酸塩は水性媒体中
で180日後でも安定であることが判つた。これは
同様に固体の形態では６ケ月間活性を失うことが
なかつた。

【表】 生理的条件をシユミレートするために、トリペ
プチドアルデヒド塩のアンチトロンビン活性及び
カルバミン酸誘導体のアンチトロンビン活性をヒ
ト血漿について次の系で試験した：クエン酸塩添
加ヒト血漿0.2ml；ペプチド溶液を含むトリス
（ヒドロキシメチル）−アミノ−メタン塩酸塩−塩
酸緩衝溶液（PH7.2）0.1ml：及び、米国規格ヒト
トロンビン（NIH、ベテスダ、メリランド、
USA）の10単位／ml溶液0.1ml。ペプチドを含ま
ない系のトロンビン時間は「シユナイダー−グロ
ス凝固計」中で測定して15秒である。

【表】 第２表のデータは、対照に比較して２倍のトロ
ンビン時間増加を達成するのに必要なペプチド量
は酢酸塩及び塩酸塩の場合、用いられるバツチに
従つて変化し、トリペプチドアルデヒド硫酸塩の
場合に必要とされる量の多数倍（カルバミン酸誘
導体の場合には２倍）であることを明らかに示し
ている。 トリペプチドアルデヒド硫酸塩の生体内試験を
第３表に要約する。Ｄ−フエニルアラニン−Ｌ−
プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒド硫酸塩は生
体内で相当なアンチトロンビン力価を有する。静
脈内及び皮下投与においてはその効力は一般に治
療に適用されるヘパリンの効力の範囲にあるが、
ヘパリンに比較して次のような主要な利点を有す
る。ヘパリンは経口投与の場合には不活性である
が、トリペプチドアルデヒド硫酸塩25mg／Kgの経
口投与によつて治療効果が達成され得る（カルバ
ミン酸誘導体では50mg／Kgによつて始めて達成で
きる）。

【表】

【表】 Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア
ルギニンアルデヒド硫酸塩の毒性データはまた、
酢酸塩またはカルバミン酸誘導体の毒性データよ
りも有利である。急性毒性データを第４表に要約
する。これはトリペプチドアルデヒド硫酸塩の場
合には経口投与において２ｇ／Kgであつた。

【表】 Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア
ルギニンアルデヒド硫酸塩の低い毒性及び高い力
価を考えれば、薬物の治療価の最も特徴的な指標
である、この低毒性及び高力価の両方を含む治療
指数は他のトリペプチドアルデヒド誘導体の治料
指数よりも有利である。 イヌへの静脈内注入試験に基づき、ヒト静脈内
注入の投与量は１〜２mg／Kg／時間と決定され
た。 Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア
ルギニンアルデヒド硫酸塩はそれ自体公知の方法
で、当量の硫酸の存在下でベンジルオキシカルボ
ニル−Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−
N^G−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニ
ンアルデヒド〔Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−Arg（Ｚ）−
Ｈ〕を水添分解することによつて製造し得ること
が判明した。さらに、Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ
−プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒド硫酸塩
は、トリフエニルメチルもしくはｔ−アルキルオ
キシカルボニル保護基を含む酸感受性誘導体か
ら、すなわち、ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ
−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギ
ニンアルデヒドヘミスルフエートもしくはｔ−ブ
チルオキシカルボニル−Ｄ−フエニルアラニル−
Ｌ−プロリル−N^G−カルボキシ−Ｌ−アルギニ
ンアルデヒドから１乃至12Nの硫酸を用いて充分
な純度で簡易に製造できる。しかし、次のそれ自
体公知の方法では満足な結果を提供できなかつ
た。 ａ 酢酸中に溶解した硫酸によるｔ−ブチルオキ
シカルボニル基のアシドリシス〔ベイヤーマン
（Beyerman）ら：ペプタイヅ（Peptides）、
1970、H.ネスバドバ（Nesvadba）編、138ペ
ージ、北オランダ、アムステルダム、1973〕： ｂ ベルギー国特許第880844号のＤ−Phe−Pro
−Arg（COOH）−Ｈカルバミン酸誘導体の、硫
酸による未保護トリペプチドアルデヒド硫酸塩
への直接変換；及び ｃ イオン交換樹脂もしくは硫酸による、種々の
他の未保護トリペプチドアルデヒド塩、たとえ
ば、ハンガリー国特許第169870号のＤ−フエニ
ルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニンア
ルデヒド硫酸塩の硫酸塩への変換。 ａ〜ｃ法のいずれかで得られた生成物は水溶液
中における均質性及び／または安定性が低いこと
が判明した。 前述の記載につき、本発明はＤ−フエニルアラ
ニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒド
硫酸塩ならびにアミノ末端に保護基を含むＤ−フ
エニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニン
アルデヒドヘミ硫酸塩またはＤ−フエニルアラニ
ル−Ｌ−プロリル−N^G−カルボキシ−Ｌ−アル
ギニンアルデヒドからのＤ−フエニルアラニル−
Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒド硫酸塩
の製造方法でつて、アミノ末端保護基及び場合に
よつてはさらにN^G−カルボキシ基を、１乃至12
当量で適用される１乃至12Nの硫酸で除去し、そ
して得られた遊離トリペプチドアルデヒド硫酸塩
を単離することを含んでなる製造方法に関する。 本発明の好ましい方法によれば、グアニジノ基
がベンジルオキシカルボニル基で保護されたＬ−
アルギニンラクタムをｔ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリンと縮合
させ、得られた保護されたトリペプチドラクタム
を還元し、そして得られた保護されたトリペプチ
ドアルデヒドのグアニジノ基にあるベンジルオキ
シカルボニル基を水30〜40％を含むテトラヒドロ
フラン−ｔもしくはエタノール中で１当量の硫酸
の存在下で水添分解する。アミノ末端がまだ保護
されている、得られたトリペプチドアルデヒドヘ
ミ硫酸塩を４〜6N、好ましくは5Nの硫酸の８〜
12当量、好ましくは10当量中に溶解せしめ、そし
て20乃至40分間、好ましくは30分間、40〜60℃、
好ましくは50℃に加熱し、次いで溶液を炭酸カル
シウムで中和し、過し、そして好ましくは凍結
乾燥する。 こうして製造された生成物は事実上硫酸カルシ
ウム４〜６％を含む可能性があるが、これはその
生物活性または治療への適用に何ら影響を与えな
い。 本発明をさらに以下の実施例について説明する
がこれらは本発明を何ら限定するものではない。 実施例中のR_F値は、シリカゲル薄層クロマト
グラフイー〔キーゼルゲル（Kieselgel）Ｇ、リ
ーナル、ブダペスト〕により以下の系中で測定し
た： １ 酢酸エチル−ピリジン−酢酸−水−480：
20：６：11： ２ 酢酸エチル−ピリジン−酢酸−水−60：20：
60：11： ３ 酢酸エチル−ピリジン−酢酸−水−30：20：
６：11. 実施例 １ Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア
ルギニンアルデヒド硫酸塩 ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−フエニルア
ラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒ
ドヘミ硫酸塩（2.74ｇミリモル）を水（５ml）中
に溶解せしめ、これに絶えず撹拌しながら10N硫
酸（５ml）を加え、そして混合物を50℃に加熱す
る。この溶液を50℃で15分間撹拌し、次いで氷水
（25ml）で稀釈し、そして氷冷下に炭酸カルシウ
ム（約2.25ｇ）を用いてPHを6.5に調製する。析
出した硫酸カルシウムを過し、そして水（５
ml）で２回洗浄する。液をｎ−ブタノール（10
ml）で２回抽出し、約30mlに濃縮し、必要ならば
過し、そして凍結乾燥する。 収量：硫酸カルシウム4.8％を含む目的化合物
2.25ｇ（79％）． R_F＝0.35〜0.40 〔α〕²⁰ _D＝−117±1゜（ｃ＝１、水）。 分析：C₂₀H₃₀O₃N₆SO₄・3H₂O・0.2CaSO₄
（565.85） 計算値：C42.45、H6.77、N14.85、SO₄20.37、
Ca1.41、H₂O9.55％。 実測値：C42.2、H6.9、N14.85、SO₄19.8、
Ca1.3、H₂O9.75％。 出発原料は以下の手法に従つて合成する： 工程１：ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−フエ
ニルアラニル−Ｌ−プロリル−N^G−ベンジル
オキシカルボニル−Ｌ−アルギニンラクタム ｔ−ブチルオキシカルボニル−N^G−ベンジル
オキシカルボニル−Ｌ−アルギニンラクタム
（8.6ｇ、22ミリモル、ベルギー国特許第880844
号）を酢酸エチル（20ml）中に懸濁せしめ、そし
て５℃において絶えず撹拌しながらこれに酢酸エ
チル（40ml）中の4M塩酸溶液を加える。反応混
合物を氷冷下において30分間撹拌し、冷酢酸エチ
ル（100ml）で稀釈し、形成された沈澱物を過
し、酢酸エチルで洗浄し、そして乾燥器中、水酸
化カリウム上で減圧下において乾燥する。得られ
たN^G−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−アルギ
ニンラクタム塩酸塩をジメチルホルムアミド（20
ml）中に溶解せしめ、そして−10℃においてこれ
にトリエチルアミン（6.2ml、44ミリモル）を加
える。形成された懸濁液を次の混成無水物に加え
る。 ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−フエニルア
ラニル−Ｌ−プロリン〔U.ルーデシヤー
（Ludescher）及びR.シユバイザー
（Schwyzer）：Helv Chim.Acta55、2052（1972）〕
（7.25ｇ、20ミリモル）及びＮ−メチル−モルホ
リン（2.22ml、20ミリモル）をジメチルホルムア
ミド（20ml）中に溶解せしめる。この溶液を−15
℃に冷却し、クロロ蟻酸イソブチルエステル
（2.64ml、20ミリモル）を撹拌しながら加え、次
いで５分後にジメチルホルムアミド中の前記溶液
を加える。−15℃において１時間及び０℃におい
て１時間撹拌を続け、次いで反応混合物をベンゼ
ン（30ml）で稀釈し、析出した塩を過し、そし
てベンゼン（10ml）で２回洗浄する。ベンゼン−
ジメチルホルムアミドの溶液を水（50ml）で稀釈
し、そして相を分離する。水層をベンゼン（10
ml）で２回抽出し、次いで合したベンゼン抽出物
を10％炭酸ナトリウム溶液（30ml）で３回、水
（30ml）で、0.5N硫酸（30ml）で３回、水（30
ml）で２回洗浄し、そして無水硫酸ナトリウム上
で乾燥後、減圧蒸発せしめる。蒸発残渣を石油エ
ーテルで均質化し、過し、石油エーテルで洗浄
し、そして空気乾燥する。 収量：目的化合物9.65ｇ（76％）。 R_F＝0.81〜0.89。 工程２：ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−フエ
ニルアラニル−Ｌ−プロリル−N^G−ベンジル
オキシカルボニル−Ｌ−アルギニンアルデヒド トリペプチドラクタム（9.52ｇ、15ミリモル、
工程１）をテトラヒドロフラン（45ml）中に溶解
せしめ、そして−20℃において激しく撹拌しなが
らこれにテトラヒドロフラン（0.4M溶液約28ml）
中で水素化リチウムアルミニウム（11.25ミリモ
ル）を加える。還元の進行を薄層クロマトグラフ
イーによつて管理する〔R¹ _F＝0.71〜0.77（ラクタ
ム）及びR¹ _F＝0.31〜0.39（アルデヒド）〕。必要な
らば、水素化物溶液の追加量を加える。反応完了
時に、テトラヒドロフラン溶液を0.5N硫酸を用
いて注意深くPH３まで酸性化し、次いで沈澱が生
じないように稀釈する（約100ml）。テトラヒドロ
フラン水溶液を塩化メチレン（75ml）で３回抽出
し、そして合した塩化メチレン抽出物を10％炭酸
ナトリウム溶液（10ml）で３回、次いで水（10
ml）で２回洗浄する。続いて、塩化メチレン溶液
を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして減圧蒸
発する。蒸発残留物をベンゼン（50ml）中に溶解
せしめ、そしてこの溶液を繰り返し減圧蒸発す
る。次いで、溶解及び蒸発操作をもう１度繰り返
す。蒸発残留物をエーテルで処理し、過し、ジ
エチルエーテルで洗浄し、そして空気乾燥する。 収量：目的化合物6.9（72％） R¹ _F＝0.3〜0.4。 工程３：ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−フエ
ニルアラニル−Ｌ−プロリル−アルギニンアル
デヒドヘミ硫酸塩 保護されたトリペプチドアルデヒド（6.4ｇ、
10ミリモル、工程２）を水（50ml）、テトラヒド
ロフラン（50ml）及び1N硫酸（10ml）の混合物
中に溶解せしめ、そして10％パラジウム担持木炭
触媒（１ｇ）の存在下で水添分解する。反応の進
行を薄層クロマトグラフイーによつて管理する。
〔R² _F＝0.95〜1.0（グアニジノ基が保護されたトリ
ペプチドアルデヒド）及びR² _F＝0.45〜0.54（未保
護トリペプチドアルデヒド）〕。 反応完了後に、触媒を過し、50％テトラヒド
ロフラン水溶液（30ml）で洗浄し、そして合した
液を約60mlまで減圧濃縮する。残留物をｎ−ブ
タノールで４回抽出する。ｎ−ブタノール層を合
し、そして減圧下において蒸発乾固する。蒸発残
渣をジエチルエーテルとジイソプロピルエーテル
との１：１混合物で処理し、過し、前記混合物
で洗浄し、次いで乾燥器中で減圧乾燥する。 収量：目的化合物4.4ｇ（80％）。 R² _F＝0.45〜0.54 〔∝〕²⁰ _D＝−65±1゜（ｃ＝１、水） 分析：C₂₅H₃₈O₅N₆・0.5H₂SO₄（551.64）： 計算値：
C54.43、H7.13、N15.23、SO₄8.71％。 実測値： C54.5、H7.3、N15.2、SO₄8.7％。 実施例 ２ Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア
ルギニンアルデヒド硫酸塩 ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−フエニルア
ラニル−Ｌ−プロリル−N^G−カルボキシ−Ｌ−
アルギニンアルデヒド（2.85ｇ、５ミリモル）を
水（５ml）中に溶解せしめ、これに10N硫酸（５
ml）を加え、そして50℃に加熱する。溶液を50℃
で15分間撹拌し、次いで氷水（25ml）で稀釈し、
そして氷冷下において固体水酸化カルシウム（約
1.6ｇ）でPHを6.5に調製する。液をｎ−ブタノ
ール（10ml）で２回抽出し、約30mlまで減圧濃縮
し、所望ならば過し、次いで凍結乾燥する。 収量：硫酸カルシウム4.9％を含む目的化合物2.3
ｇ（81％）。 R³ _F＝0.35〜0.40。 〔α〕²⁰ _D＝−117±1゜（ｃ＝１、水）。 出発原料は以下の手法で製造する： ｔ−ブチルカルボニル−Ｄ−フエニルアラニル
−Ｌ−プロリル−N^G−ベンジルオキシカルボニ
ル−Ｌ−アルギニンアルデヒド（6.4ｇ、10ミリ
モル、実施例１、工程２）を75％水性石油エタノ
ール（100ml）中に溶解せしめ、そして10％パラ
ジウム担持木炭触媒（１ｇ）の存在下で水添分解
する。反応の進行は薄層クロマトグラフイーで管
理する〔R² _F＝0.90〜0.95（保護されたトリペプチ
ドアルデヒド）及び0.45〜0.55（N^G−カルボキシ
誘導体）〕。反応の最後に触媒を過し、水（30
ml）で洗浄し、そして液を減圧下において30〜
40mlに濃縮する。残留物を水（100ml）で稀釈し、
塩化メチレン（20ml）で２回抽出し、そして凍結
乾燥する。 収量：目的化合物5.1ｇ（85％）。 R² _F＝0.45〜0.55。 アミノ酸分析：Phe＝0.96：Pro＝１（対照アミノ
酸）。アミノ酸分析による分子量：570ｇ。 実施例 ３ 医薬組成物の調製 ６もしくは12時間の静脈内注入に適当な２−ア
ンプル製剤を次のようにして調製する： Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア
ルギニンアルデヒド硫酸塩（420〜840mg）及びヒ
トアルブミン（40〜80mg）を合わせて凍結乾燥す
る。凍結乾燥アンプルの内容物は、使用前に微生
物を含まない滅菌等張塩溶液（100〜200ml）中に
溶解せしめる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−
   アルギニンアルデヒド硫酸塩。 ２ アミノ末端に保護基を含むＤ−フエニルアラ
   ニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒド
   ヘミ硫酸塩からのＤ−フエニルアラニル−Ｌ−プ
   ロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒド硫酸塩の製造
   方法であつて、アミノ末端保護基を、１乃至12当
   量で適用される１乃至12Nの硫酸で除去し、そし
   て得られた遊離トリペプチドアルデヒド硫酸塩を
   単離することを含んでなる、前記製造方法。 ３ 出発原料の保護基としてｔ−アルコキシカル
   ボニル基を用いる特許請求の範囲第２項記載の製
   造方法。 ４ 出発原料の保護基としてｔ−ブチルオキシカ
   ルボニル基を用いる特許請求の範囲第３項記載の
   製造方法。 ５ アミノ末端に保護基を含むＤ−フエニルアラ
   ニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニンアルデヒド
   ヘミ硫酸塩またはＤ−フエニルアラニル−Ｌ−プ
   ロリル−N^G−カルボキシ−Ｌ−アルギニンアル
   デヒドからのＤ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリ
   ル−Ｌ−アルギニンアルデヒド硫酸塩の製造方法
   であつて、アミノ末端保護基およびN^G−カルボ
   キシ基を、１乃至12当量で適用される１乃至12N
   の硫酸で除去し、そして得られた遊離トリペプチ
   ドアルデヒド硫酸塩を単離することを含んでな
   る、前記製造方法。 ６ 出発原料の保護基としてｔ−アルコキシカル
   ボニル基を用いる特許請求の範囲第５項記載の製
   造方法。 ７ 出発原料の保護基としてｔ−ブチルオキシカ
   ルボニル基を用いる特許請求の範囲第６項記載の
   製造方法。 ８ Ｄ−フエニルアラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−
   アルギニンアルデヒド硫酸塩を活性成分として含
   んでなる抗凝固剤。