JPH0253039B2 - - Google Patents
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- JPH0253039B2 JPH0253039B2 JP15396181A JP15396181A JPH0253039B2 JP H0253039 B2 JPH0253039 B2 JP H0253039B2 JP 15396181 A JP15396181 A JP 15396181A JP 15396181 A JP15396181 A JP 15396181A JP H0253039 B2 JPH0253039 B2 JP H0253039B2
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- Japan
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- acid
- adenine dinucleotide
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Description
本発明は、酵素又は基質の改良された定量方法
に関する。 近年、酵素法による生体成分の分析法が広く普
及し、生体中の酵素あるいは非酵素成分の測定系
に、種々の酵素の共役反応を利用する場合が非常
に多くなつた。中でも脱水素酵素群は、検出が容
易なNAD又はNADPが関与するため適用範囲が
広く、クレアチンキナーゼ測定系におけるグルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素、トリグリセライド
測定系におけるグリセロール脱水素酵素などがそ
のよい例である。現在、NADH又は、NADPH
の検出は、一般にホルマザン発色系の共役によつ
て行なわれているが、この方法では色素が水に難
溶性であり、又、反応条件により発色度が異なる
ので正確な分子吸光係数を適用しにくい。さらに
測定器具に色素が吸着するなどの欠点がある。 最近、これらの諸問題を解決する新しい発色系
の利用が報告されている。例えば、脱水素酵素−
基質−NADの反応系にFe3+、電子伝達剤及び
Fe2+に特異的に反応するキレート剤を添加した
緩衝液中で次の反応を行なわせ、結果として生成
した着色化合物を比色定量することによる、トリ
グリセライドの測定法がある（特開昭54−
80192）。 NAD＋基質脱水素酵素 ―――――→ NADH＋生成物 NADH＋2Fe3+電子伝達済 ―――――→ NAD＋2Fe2+ Fe2+＋ｎ（キレート剤）→錯化合物（着色） この方法は、生成する着色物が水溶性であり、
感度もかなり高い。しかしながら試薬ブランク値
の経時変化が著しいので比色時には、検体ごとに
試薬ブランク値による分光々度計のゼロ調整をし
なければならず、測定する試料件数が限られ、多
検体処理には不適当であつた。 本発明者らは、この試薬ブランク値の経時変化
を抑制し、比色時の煩雑な操作を除くことで多検
体処理を可能にするため、種々研究を行なつた結
果、試薬ブランク値の上昇は試薬中に含まれる
種々の成分によるFe3+の非特異的還元に帰因す
るもので、特に酵素蛋白やその夾雑物量に依存し
て増大する傾向が判明したことから、それに効果
的な隠ぺい剤すなわちFe3+と錯化合物（キレー
ト）を形成するキレート剤を使用することにより
試薬ブランク値の経時変化の抑制が可能であるこ
とを発見し本発明を完成した。以上の経緯から本
発明方法は広く一般に脱水素酵素及びNAD又は
NADPを含む測定系への応用が十分に可能であ
り、ホルマザン法にかわる比色法として、
NADH又は、NADPHの検出に適用できること
は明らかである。 本発明は、脱水素酵素と酸化型ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（NAD）又は酸化型ニ
コチンアミド−アデニンジヌクレオチドリン酸
（NADP）とを含む酵素反応系により生成する還
元剤ニコチンアミド−アデニンジヌクレオチド
（MADH）又は還元型ニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチドリン酸（NADPH）の量に対応し
て、電子伝達剤の存在下で第二鉄イオン（Fe3+）
から還元生成する第一鉄イオン（Fe2+）の量を、
Fe2+に特異的に反応するキレート剤の作用によ
り生成する着色化合物として比色定量する方法で
あつて、 ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸
（EDTA−OH）、ジエチレントリアミン五酢酸
（DTPA）、ジアミノプロパノール四酢酸
（DPTA−OH）、トランスシクロヘキサンジアミ
ン四酢酸及びリン酸塩類からなる群から選んだ少
なくとも一種のキレート剤を、一定時間反応後に
添加することを特徴とする、酵素又は基質の改良
された定量方法である。 本発明方法におけるキレート剤の効果は、
Fe3+と安定な錯化合物（キレート）を形成し、
Fe3+が還元されるのを抑制する作用で説明され
る。従つて、反応時にキレート剤を共存させた場
合、反応に由来するFe3+の還元を阻害する可能
性がある。そこで、実際には、基質の定量の場合
には反応が終結した時点で、酵素の定量の場合に
は、規定時間反応させた直後に酵素反応停止剤と
共にキレート剤を加える。キレート剤が同時に酵
素反応を停止する作用を有する場合もある。 本発明で使用されるキレート剤として、次のも
のが挙げられる： エチレンジアミン四酢酸（EDTA） ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸
（EDTA−OH） ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA） ジアミノプロパノール四酢酸（DPTA−OH） トランスシクロヘキサンジアミン四酢酸
（CyDTA） リン酸塩 キレート剤は、その種類と濃度及びPHによりそ
の効果がかなり左右されるため、使用する際には
条件設定が重要となる。次にその実例を示す。表
１、２は、後述の実施例１の乳酸脱水素酵素
（LDH）測定試薬を用いて、試験した結果であ
る。表１には、PHが試薬ブランク値の経時変化に
及ぼす影響を示した。これより、PHの選択によつ
ては、かえつて逆効果となつてしまうことがわか
る。表２には、キレート剤の濃度が試薬ブランク
値の経時変化と呈色に及ぼす影響を示した。これ
よりキレート剤が高濃度になるに従つて経時的に
試薬ブランク値は減少するが、反応による呈色を
も減少させる傾向にあることがわかる。従つて
LDHを測定する場合のキレート剤には、１〜８
ｍMEDTA−OHPH8.6や１〜８ｍＭ DPTA−
OHPH8.6、４〜８ｍMCyDTAPH8.6が有効と考え
られる。表３、４は同様に後述の実施例３のトリ
グリセライド測定時に用いるキレート剤を検討し
た結果である。表から、１〜４ｍＭ EDTAPH
8.6、１〜８ｍＭ DTPAPH8.6、４〜８ｍＭ
CyDTAPH10及び50ｍＭリン酸緩衝液PH6.0が使用
可能なものと判断した。後述の実施例に従つて
CKを測定する場合には、ここで生じる色素が中
性以上のPHで不安定なためキレート剤は、弱酸性
の条件で用いることが望ましい。又表５に示す様
に使用する緩衝液の種類によつて、効果の異なる
ものもある。濃度をかえての実験結果は表６に示
した。これより0.5〜２ｍＭのEDTA、EDTA−
OH、DTPA及びCyDTAが有効と考えられる。 本発明方法に用いられるFe3+は、硫酸第二鉄
アンモニウム、塩化第二鉄などであり、Fe3+に
特異的に反応するキレート剤としてはたとえば、
バソフエナンスロリンスルホン酸ナトリウム、２
−ピリジルアルドキシム、３−（２−ピリジル）−
5.6−ビス（４−スルフオニル）−１，２，４−ト
リアジンスルホン酸ナトリウム、オルトフエナン
スロリンが適当である。又、電子伝達剤として
は、たとえばフエナジンメトサルフエート
（PMS）、メルドラブルー、メトキシフエナジン
メトサルフエート（Ｍ−PMS）、デイアフオラー
ゼが適している。緩衝液には、トリエタノールア
ミン緩衝液の他、反応に関わる酵素等の反応至適
条件を満足するような成分とPHを選択することが
できる。
に関する。 近年、酵素法による生体成分の分析法が広く普
及し、生体中の酵素あるいは非酵素成分の測定系
に、種々の酵素の共役反応を利用する場合が非常
に多くなつた。中でも脱水素酵素群は、検出が容
易なNAD又はNADPが関与するため適用範囲が
広く、クレアチンキナーゼ測定系におけるグルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素、トリグリセライド
測定系におけるグリセロール脱水素酵素などがそ
のよい例である。現在、NADH又は、NADPH
の検出は、一般にホルマザン発色系の共役によつ
て行なわれているが、この方法では色素が水に難
溶性であり、又、反応条件により発色度が異なる
ので正確な分子吸光係数を適用しにくい。さらに
測定器具に色素が吸着するなどの欠点がある。 最近、これらの諸問題を解決する新しい発色系
の利用が報告されている。例えば、脱水素酵素−
基質−NADの反応系にFe3+、電子伝達剤及び
Fe2+に特異的に反応するキレート剤を添加した
緩衝液中で次の反応を行なわせ、結果として生成
した着色化合物を比色定量することによる、トリ
グリセライドの測定法がある（特開昭54−
80192）。 NAD＋基質脱水素酵素 ―――――→ NADH＋生成物 NADH＋2Fe3+電子伝達済 ―――――→ NAD＋2Fe2+ Fe2+＋ｎ（キレート剤）→錯化合物（着色） この方法は、生成する着色物が水溶性であり、
感度もかなり高い。しかしながら試薬ブランク値
の経時変化が著しいので比色時には、検体ごとに
試薬ブランク値による分光々度計のゼロ調整をし
なければならず、測定する試料件数が限られ、多
検体処理には不適当であつた。 本発明者らは、この試薬ブランク値の経時変化
を抑制し、比色時の煩雑な操作を除くことで多検
体処理を可能にするため、種々研究を行なつた結
果、試薬ブランク値の上昇は試薬中に含まれる
種々の成分によるFe3+の非特異的還元に帰因す
るもので、特に酵素蛋白やその夾雑物量に依存し
て増大する傾向が判明したことから、それに効果
的な隠ぺい剤すなわちFe3+と錯化合物（キレー
ト）を形成するキレート剤を使用することにより
試薬ブランク値の経時変化の抑制が可能であるこ
とを発見し本発明を完成した。以上の経緯から本
発明方法は広く一般に脱水素酵素及びNAD又は
NADPを含む測定系への応用が十分に可能であ
り、ホルマザン法にかわる比色法として、
NADH又は、NADPHの検出に適用できること
は明らかである。 本発明は、脱水素酵素と酸化型ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（NAD）又は酸化型ニ
コチンアミド−アデニンジヌクレオチドリン酸
（NADP）とを含む酵素反応系により生成する還
元剤ニコチンアミド−アデニンジヌクレオチド
（MADH）又は還元型ニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチドリン酸（NADPH）の量に対応し
て、電子伝達剤の存在下で第二鉄イオン（Fe3+）
から還元生成する第一鉄イオン（Fe2+）の量を、
Fe2+に特異的に反応するキレート剤の作用によ
り生成する着色化合物として比色定量する方法で
あつて、 ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸
（EDTA−OH）、ジエチレントリアミン五酢酸
（DTPA）、ジアミノプロパノール四酢酸
（DPTA−OH）、トランスシクロヘキサンジアミ
ン四酢酸及びリン酸塩類からなる群から選んだ少
なくとも一種のキレート剤を、一定時間反応後に
添加することを特徴とする、酵素又は基質の改良
された定量方法である。 本発明方法におけるキレート剤の効果は、
Fe3+と安定な錯化合物（キレート）を形成し、
Fe3+が還元されるのを抑制する作用で説明され
る。従つて、反応時にキレート剤を共存させた場
合、反応に由来するFe3+の還元を阻害する可能
性がある。そこで、実際には、基質の定量の場合
には反応が終結した時点で、酵素の定量の場合に
は、規定時間反応させた直後に酵素反応停止剤と
共にキレート剤を加える。キレート剤が同時に酵
素反応を停止する作用を有する場合もある。 本発明で使用されるキレート剤として、次のも
のが挙げられる： エチレンジアミン四酢酸（EDTA） ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸
（EDTA−OH） ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA） ジアミノプロパノール四酢酸（DPTA−OH） トランスシクロヘキサンジアミン四酢酸
（CyDTA） リン酸塩 キレート剤は、その種類と濃度及びPHによりそ
の効果がかなり左右されるため、使用する際には
条件設定が重要となる。次にその実例を示す。表
１、２は、後述の実施例１の乳酸脱水素酵素
（LDH）測定試薬を用いて、試験した結果であ
る。表１には、PHが試薬ブランク値の経時変化に
及ぼす影響を示した。これより、PHの選択によつ
ては、かえつて逆効果となつてしまうことがわか
る。表２には、キレート剤の濃度が試薬ブランク
値の経時変化と呈色に及ぼす影響を示した。これ
よりキレート剤が高濃度になるに従つて経時的に
試薬ブランク値は減少するが、反応による呈色を
も減少させる傾向にあることがわかる。従つて
LDHを測定する場合のキレート剤には、１〜８
ｍMEDTA−OHPH8.6や１〜８ｍＭ DPTA−
OHPH8.6、４〜８ｍMCyDTAPH8.6が有効と考え
られる。表３、４は同様に後述の実施例３のトリ
グリセライド測定時に用いるキレート剤を検討し
た結果である。表から、１〜４ｍＭ EDTAPH
8.6、１〜８ｍＭ DTPAPH8.6、４〜８ｍＭ
CyDTAPH10及び50ｍＭリン酸緩衝液PH6.0が使用
可能なものと判断した。後述の実施例に従つて
CKを測定する場合には、ここで生じる色素が中
性以上のPHで不安定なためキレート剤は、弱酸性
の条件で用いることが望ましい。又表５に示す様
に使用する緩衝液の種類によつて、効果の異なる
ものもある。濃度をかえての実験結果は表６に示
した。これより0.5〜２ｍＭのEDTA、EDTA−
OH、DTPA及びCyDTAが有効と考えられる。 本発明方法に用いられるFe3+は、硫酸第二鉄
アンモニウム、塩化第二鉄などであり、Fe3+に
特異的に反応するキレート剤としてはたとえば、
バソフエナンスロリンスルホン酸ナトリウム、２
−ピリジルアルドキシム、３−（２−ピリジル）−
5.6−ビス（４−スルフオニル）−１，２，４−ト
リアジンスルホン酸ナトリウム、オルトフエナン
スロリンが適当である。又、電子伝達剤として
は、たとえばフエナジンメトサルフエート
（PMS）、メルドラブルー、メトキシフエナジン
メトサルフエート（Ｍ−PMS）、デイアフオラー
ゼが適している。緩衝液には、トリエタノールア
ミン緩衝液の他、反応に関わる酵素等の反応至適
条件を満足するような成分とPHを選択することが
できる。
【表】
【表】
示した。
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
に溶解
次に実施例により本発明を更に詳しく説明す
る。 実施例 １ 血清中の乳酸脱水素酵素（LDH）活性の測定 (1) 試薬 溶液Ａ：11.6ｍＭオルトフエナンスロリン、
400ｍＭ乳酸リチウムを含む200ｍＭトリエタノ
ールアミン緩衝液PH8.0。 溶液Ｂ：20ｍＭ NAD、3U／mlデイアフオ
ラーゼ、1.25ｍＭ硫酸第二鉄アンモニウムを含
む50ｍＭトリエタノールアミン緩衝液PH7.2。 溶液Ｃ（キレート剤）：50ｍＭシユウ酸、４ｍ
Ｍ EDTA−OHを含む0.1Mトリエタノールア
ミン緩衝液PH8.6。 (2) 操作方法 血清30μ、溶液B0.5mlを試験管にとり、溶
液A0.5mlを加えて37℃で正確に10分間反応さ
せた後、ただちに溶液C2mlを添加して室温に
戻す。別に血清を加えずに、同様に操作したも
のを試薬ブランクとして、510nｍの吸光度を
測定する。次に血清試料と同一方法で処理した
既知LDH活性の溶液によつて示される吸光度
と測定吸光度との比較によつて、血清試料の
LDH活性を算出する。上記の諸条件下で、直
線的な吸光度の応答が図１の通り約1200ウロブ
レウスキー（Wroblewski）単位のLDH活性の
レベルまで認められた。 実施例 ２ 血清中のクレアチンキナーゼ（CK）活性の測
定 (1) 試薬 溶液Ａ：６ｍM3−（２−ピリジル）−５，６
−ビス（４−フルフオニル）−１，２，４−ト
リアジンスルホン酸ナトリウム、40ｍＭクレア
チンリン酸を含む200ｍＭトリエタノールアミ
ン緩衝液PH7.6。 溶液Ｂ：２ｍＭ NADP、40μM PMS、４
ｍＭアデノシン−２−リン酸、６ｍＭ硫酸第二
鉄アンモニウム、12ｍＭ塩化マグネシウム、80
ｍＭグルコース、0.1w／ｖ％ウシ血清アルブ
ミン、0.8U／mlグルコース６リン酸脱水素酵
素、1.3U／mlヘキソキナーゼを含む50ｍＭト
リエタノールアミン緩衝液PH7.2。 溶液Ｃ（キレート剤）：１ｍＭ DTPAを含
む0.1M3，３−ジメチルグルタル酸緩衝液PH
6.0。 (2) 操作方法 血清10μと溶液A0.25mlを試験管にとり、
溶液B0.25mlを加えて37℃で正確に10分間反応
させた後、ただちに溶液C4mlを添加し、室温
に戻す。別に血清を加えずに同様に操作したも
のを試薬ブランクとして、564nｍの吸光度を
測定する。次に血清試料と同一方法で処理した
既知CK活性溶液によつて示される吸光度と測
定吸光度との比較によつて血清試料のCK活性
を算出する。上記の諸条件下で直線的な吸光度
の応答が図２の通り200I.U.／のCK活性のレ
ベルまで認められた。 実施例 ３ 血清中のトリグリセライドの測定 (1) 試薬 溶液Ａ：5.8ｍＡバソフエナンスロリンスル
ホン酸ナトリウム、200ｍＭ塩化カルシウムを
含む200ｍＭトリエタノールアミン緩衝液PH
8.0。 溶液Ｂ：40ｍＭ NAD、40μMメトキシ
PMS、25ｍＡ硫酸第二鉄アンモニウム、
0.1w／ｖ％ウシ血清アルブミン、400U／mlリ
ポプロテインリパーゼ、32U／mlグリセロール
脱水素酵素を含む50ｍＭトリエタノールアミン
緩衝液PH7.2。 溶液Ｃ：50ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液。 (2) 操作方法 血清10μ、溶液A0.25mlを試験管にとり、
溶液B0.25mlを加えて、37℃で20分間インキユ
ベートした後、ただちに溶液C4mlを添加して
室温に戻す。別に血清を加えずに同様に操作し
たものを試薬ブランクとして535nｍの吸光度
を測定する。次に血清試料のトリグリセライド
含量を血清試料と同一方法で処理した既知トリ
グリセライド含量の溶液によつて示される吸光
度と測定吸光度との比較によつて算出する。上
記の諸条件下で直線的な吸光度の応答が図３の
通りほぼ1000mg／dlのトリグリセライドのレベ
ルまで認められた。 以上述べたことから、本発明方法は広く一般に
脱水素酵素及びNAD又はNADPを含む測定系へ
の応用が十分可能であり、比色時の煩雑な操作は
必要とせず、信頼度の高い測定を多検体にわたり
可能とする。又、本法は高い感度を期待できるた
め、反応時間の短縮や試料の微量化も可能である
ことが明らかである。
次に実施例により本発明を更に詳しく説明す
る。 実施例 １ 血清中の乳酸脱水素酵素（LDH）活性の測定 (1) 試薬 溶液Ａ：11.6ｍＭオルトフエナンスロリン、
400ｍＭ乳酸リチウムを含む200ｍＭトリエタノ
ールアミン緩衝液PH8.0。 溶液Ｂ：20ｍＭ NAD、3U／mlデイアフオ
ラーゼ、1.25ｍＭ硫酸第二鉄アンモニウムを含
む50ｍＭトリエタノールアミン緩衝液PH7.2。 溶液Ｃ（キレート剤）：50ｍＭシユウ酸、４ｍ
Ｍ EDTA−OHを含む0.1Mトリエタノールア
ミン緩衝液PH8.6。 (2) 操作方法 血清30μ、溶液B0.5mlを試験管にとり、溶
液A0.5mlを加えて37℃で正確に10分間反応さ
せた後、ただちに溶液C2mlを添加して室温に
戻す。別に血清を加えずに、同様に操作したも
のを試薬ブランクとして、510nｍの吸光度を
測定する。次に血清試料と同一方法で処理した
既知LDH活性の溶液によつて示される吸光度
と測定吸光度との比較によつて、血清試料の
LDH活性を算出する。上記の諸条件下で、直
線的な吸光度の応答が図１の通り約1200ウロブ
レウスキー（Wroblewski）単位のLDH活性の
レベルまで認められた。 実施例 ２ 血清中のクレアチンキナーゼ（CK）活性の測
定 (1) 試薬 溶液Ａ：６ｍM3−（２−ピリジル）−５，６
−ビス（４−フルフオニル）−１，２，４−ト
リアジンスルホン酸ナトリウム、40ｍＭクレア
チンリン酸を含む200ｍＭトリエタノールアミ
ン緩衝液PH7.6。 溶液Ｂ：２ｍＭ NADP、40μM PMS、４
ｍＭアデノシン−２−リン酸、６ｍＭ硫酸第二
鉄アンモニウム、12ｍＭ塩化マグネシウム、80
ｍＭグルコース、0.1w／ｖ％ウシ血清アルブ
ミン、0.8U／mlグルコース６リン酸脱水素酵
素、1.3U／mlヘキソキナーゼを含む50ｍＭト
リエタノールアミン緩衝液PH7.2。 溶液Ｃ（キレート剤）：１ｍＭ DTPAを含
む0.1M3，３−ジメチルグルタル酸緩衝液PH
6.0。 (2) 操作方法 血清10μと溶液A0.25mlを試験管にとり、
溶液B0.25mlを加えて37℃で正確に10分間反応
させた後、ただちに溶液C4mlを添加し、室温
に戻す。別に血清を加えずに同様に操作したも
のを試薬ブランクとして、564nｍの吸光度を
測定する。次に血清試料と同一方法で処理した
既知CK活性溶液によつて示される吸光度と測
定吸光度との比較によつて血清試料のCK活性
を算出する。上記の諸条件下で直線的な吸光度
の応答が図２の通り200I.U.／のCK活性のレ
ベルまで認められた。 実施例 ３ 血清中のトリグリセライドの測定 (1) 試薬 溶液Ａ：5.8ｍＡバソフエナンスロリンスル
ホン酸ナトリウム、200ｍＭ塩化カルシウムを
含む200ｍＭトリエタノールアミン緩衝液PH
8.0。 溶液Ｂ：40ｍＭ NAD、40μMメトキシ
PMS、25ｍＡ硫酸第二鉄アンモニウム、
0.1w／ｖ％ウシ血清アルブミン、400U／mlリ
ポプロテインリパーゼ、32U／mlグリセロール
脱水素酵素を含む50ｍＭトリエタノールアミン
緩衝液PH7.2。 溶液Ｃ：50ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液。 (2) 操作方法 血清10μ、溶液A0.25mlを試験管にとり、
溶液B0.25mlを加えて、37℃で20分間インキユ
ベートした後、ただちに溶液C4mlを添加して
室温に戻す。別に血清を加えずに同様に操作し
たものを試薬ブランクとして535nｍの吸光度
を測定する。次に血清試料のトリグリセライド
含量を血清試料と同一方法で処理した既知トリ
グリセライド含量の溶液によつて示される吸光
度と測定吸光度との比較によつて算出する。上
記の諸条件下で直線的な吸光度の応答が図３の
通りほぼ1000mg／dlのトリグリセライドのレベ
ルまで認められた。 以上述べたことから、本発明方法は広く一般に
脱水素酵素及びNAD又はNADPを含む測定系へ
の応用が十分可能であり、比色時の煩雑な操作は
必要とせず、信頼度の高い測定を多検体にわたり
可能とする。又、本法は高い感度を期待できるた
め、反応時間の短縮や試料の微量化も可能である
ことが明らかである。
第１図は本発明による血清中のLDH活性の測
定におけるウロブレウスキー単位と吸光度とのグ
ラフを、第２図はCK活性の測定グラフを、第３
図はトリグリセライドの測定グラフをそれぞれ示
す。
定におけるウロブレウスキー単位と吸光度とのグ
ラフを、第２図はCK活性の測定グラフを、第３
図はトリグリセライドの測定グラフをそれぞれ示
す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 脱水素酵素と酸化型ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチド（NAD）又は酸化型ニコチンア
ミド−アデニンジヌクレオチドリン酸（NADP）
とを含む酵素反応系により生成する還元型ニコチ
ンアミド−アデニンジヌクレオチド（NADH）
又は還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ドリン酸（NADPH）の量に対応して、電子伝
達剤の存在下で第二鉄イオン（Fe3+）から還元
生成する第一鉄イオン（Fe2+）の量を、Fe2+に
特異的に反応するキレート剤の作用により生成す
る着色化合物として比色定量する方法であつて、 ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸
（EDTA−OH）、ジエチレントリアミン五酢酸
（DTPA）、ジアミノプロパノール四酢酸
（DPTA−OH）、トランスシクロヘキサンジアミ
ン四酢酸及びリン酸塩類からなる群から選んだ少
なくとも一種のキレート剤を、一定時間反応後に
添加することを特徴とする、酵素又は基質の定量
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15396181A JPS5856698A (ja) | 1981-09-30 | 1981-09-30 | 基質又は酵素の改良された定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15396181A JPS5856698A (ja) | 1981-09-30 | 1981-09-30 | 基質又は酵素の改良された定量方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15768390A Division JPH0343096A (ja) | 1990-06-18 | 1990-06-18 | 基質又は酵素の定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5856698A JPS5856698A (ja) | 1983-04-04 |
| JPH0253039B2 true JPH0253039B2 (ja) | 1990-11-15 |
Family
ID=15573847
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15396181A Granted JPS5856698A (ja) | 1981-09-30 | 1981-09-30 | 基質又は酵素の改良された定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5856698A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7225158B2 (en) | 1999-12-28 | 2007-05-29 | Sony Corporation | Image commercial transactions system and method |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4701420A (en) * | 1985-04-01 | 1987-10-20 | Eastman Kodak Company | Analytical compositions, elements and methods utilizing reduction of ferric ion chelates to form detectable dyes |
-
1981
- 1981-09-30 JP JP15396181A patent/JPS5856698A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7225158B2 (en) | 1999-12-28 | 2007-05-29 | Sony Corporation | Image commercial transactions system and method |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5856698A (ja) | 1983-04-04 |
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