JPH0264102A - 新規ヘパリン誘導体およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、任意にアルカリまたはアルカリ土類金属塩お
よび還元剤を存在させて、種々の起源のヘパリンを塩基
性媒体（ｂａｓｌｃ　ｓｅｄｉｕｍ）で処理してえられ
る、抗血栓作用を有し、出血性作用および抗凝血作用を
減少させた新規ヘパリン誘導体に関する。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題］ 塩基性媒体中で処理することにより、種々のの方法でヘ
パリン性の構造をモディファイできることは、すでに知
られている。

マルジグイアン拳ジエー・ニス （Ｍａｒｄｉｇｕｉａｎ　Ｊ、Ｓ、）の欧州公開公報第
０１３３０７８号明細書中で、０．１〜０．８モル濃度
の、有機または無機塩基を用いて、２０〜８０℃の温度
で、ヘパリンのベンジルエステルを処理することにより
、ヘパリンを４〜２０糖単位を含むオリゴ糖分画に解重
合（ｄｅｐｏｌｙ■ｅｒ１ｚｅ）　している。該解重合
（ｄｅｐｏｌｙＩＩｅｒｌｚａｔｉｏｎ）は、２ｇ０ｎ
ｓにおけるＵＶ吸収で検出できる、ウロン酸の４．５位
炭素間における二重結合の形成を伴なう。

ヒラメ・ニス（Ｈｌｒａｎｏ　Ｓ、）ら［コネクティブ
・ティシュ−・リサーチ（Ｃｏｎｎ、Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｒ
ｅｓ、）、３巻、７３〜７９頁（１９７５年）参照］は
、２〜１０モル濃度の水酸化ナトリウムまたは水酸化バ
リウムを用いて、強塩基性媒体で、８０℃以上の温度で
ヘパリンおよび他のグリコサミノグリカン類を解重合し
ている。該方法では、グルコサミン単位の１位と隣りあ
うウロン酸単位の４位とのグリコシド結合の開裂に続く
強い解重合を生じ、さらに該解重合は、ｔｌＶスペクト
ルにおける２２５〜２３０ｎ−での吸収により検出でき
る、ウロン酸の４．５位炭素間における二重結合の形成
を伴なう。

サンブソン・ピー１ａｗｐｓｏｎ　Ｐ、）およびメイヤ
ー参ケー（Ｍａｙｅｒ　Ｋ、）［プロシーディング・オ
ブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス・オブ
・ジφユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ、）
、８８巻、２３２９〜２３３１頁（１９７１年）参照］
は、水素化ホウ素ナトリウムの存在下８０℃で７時間、
ｌＮ水酸化ナトリウムでヘパリンを処理することにより
、３，６−アンヒドログルコサミンの形成を伴うグルコ
サミンにおける構造上のモデイフィケーシヨンを行なっ
た。

本発明のヘパリン誘導体は、従来技術に記載されている
ものとは全く異なる。その理由を以下に示す。実際に本
発明のヘパリン誘導体は、マルジグイアン・ジエー・ニ
スおよびヒラメ・ニスらがえた化合物の物理化学的特性
を示さない。本発明の化合物については実質的に平均分
子量が不変であることで、解重合していないことが示さ
れる点、ならびに２２５〜２３０ｎｍでのＵＶ吸収およ
び１３　Ｃ−ＮＭＲにおける二重結合の、共鳴に対応す
るピークが存在しないことでウロン酸の４．５位炭素間
の二重結合の欠如の指標となる点があげられる。

さらにサンブソン・ピーおよびメイヤー・ケーが単離し
た化合物の物理化学的特性も全く示していない。本発明
の化合物の１３　Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいては、グ
ルコサミンの６位の炭素原子のシグナルの位置および強
度が不変である点、ならびに無水誘導体形成に硫酸化さ
れた６位の炭素原子が関与するため、３．Ｂ−アンヒド
ログルコサミンの形成時に変化する硫酸化された６位の
炭素原子および硫酸化されていない６位の炭素原子の強
度比が不変である点がみとめられる。

〔課題を解決するための手段］ 本発明は、新規ヘパリン誘導体、誘導体の血栓性病状（
ｔｈｒｏｍｂｏｔｌｃ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｅｓ）にお
ける治療的用途ならびに塩基性水性媒体中で、任意に塩
および還元剤を存在させて、種々の起源の（市販の、適
当な処理で精製したまたは解重合した）ヘパリンに化学
的なモデイフィケーションを行なうことを特徴とする前
記誘導体の製造法に関する。

本発明のヘパリン誘導体は、１３　Ｃ−ＮＭＲにおいて
約５３および約５４ｐｐｍ付近に新しいシグナルをもち
、出発物質であるヘパリン（Ｓｔａｒｔｉｎｇｈｅｐａ
ｒｌｎ）と比較して＋５０〜＋９０”まで比旋光度が増
加している、という固有の物理化学的特性を示す。

このような構造上のモデイフィケーション（ｌ１ｏｄ　
ｌｆ　ｆｅａｔ　ｔｏｎ）により、抗血栓作用を充分維
持したまま、イン・ビボ（１ｎ　ｖｌｖｏ）で出血作用
およびイン・ビトロ（ｉｎ　ｖｆｔｒｏ）で抗凝血作用
を減少させる、というヘパリンの生物学的特性の改良が
なされた。

換言すれば、モディファイされたヘパリン性の構造（ｈ
ｅｐａｒｌｎｌｃ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ）をもつ新規化
合物は、出発化合物のものとは異なる、特異な比旋光度
および１３　Ｃ−ＮＭＲピークを示すという物理化学的
特性を有し、ならびに出血性作用および抗凝血力（ａｎ
ｔｌｃｏａｇｕｌａｎｔ　ｐｏｗｅｒ）を低下させなが
ら抗血栓性の性質は実質上維持するという、より優れた
作用特異性（ａｅｔｌｏｎ　５ｐｅｃＩＨｃｉｔｙ）を
示すという異なる生物学的活性をも示す。実際に、該化
合物は、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて約５３およ
び約５４９ｐ■付近に２つの新しいシグナルをもち、比
旋光度は水溶液において＋５０〜＋９００と、出発物質
としてのヘパリンと比較して高い比旋光度を示すことを
特徴とする。

すなわち、本発明は＋３０−ＮＭＲスペクトルにおいて
５３および５４ｐｐｍ付近にシグナルをもち、水溶液に
おける比旋光度が＋５０〜＋９０″であり、イオウ含量
が８〜ＩＩ％であり、およびカルボキシル基に対する硫
酸基の比率が１．５０〜２．２０であることを特徴とす
る新規ヘパリン誘導体およびヘパリン性の物質の水溶液
に０．Ｏ１〜１Ｎのアルカリまたはアルカリ土類金属の
塩基を存在させ、０．５〜２４時間、３５〜７０℃で処
理し、中性付近のｐＨで炭素数１〜３のアルコールを２
〜４倍量加えて、モディファイされた構造をもつ化合物
を沈殿させることを特徴とする、ＯＣ−ＮＭＲスペクト
ルにおいて５３および５４ｐｐ禦付近にシグナルをもち
、水溶液における比旋光度が＋５０〜＋９０＃であり、
イオウ含量が８〜１１％であり、およびカルボキシル基
に対する硫酸基の比率が１．５０〜２．２０であること
を特徴とする新規ヘパリン誘導体の製造法に関する。

［実施例］ ヘパリン性の構造の化学的なモデイフィケーションは、
塩基、好ましくはアルカリまたはアルカリ土類金属の水
酸化物の存在下、任意にアルカリまたはアルカリ土類金
属の塩、および還元剤、好ましくは水素化ホウ素ナトリ
ウムを存在させて、中性より高いｐｎの水性媒体で行な
われる。

反応は、０．５〜２４時間、約３５〜７０℃の温度で、
約０．０１〜１Ｎの濃度の塩基および０へ約１Ｎの濃度
の塩を用いて、任意に還元剤、たとえば水素化ホウ素ナ
トリウムなどを存在させて行なわれる。

アルカリまたはアルカリ土類金属の塩基および塩は、好
ましくは主にナトリウム、カリウム、カルシウム、マグ
ネシウムおよびバリウムの塩基および塩が用いられる。

塩基としては、ナトリウム、カリウムおよびバリウムの
水酸化物を有利に用いることができる。

塩としては、ナトリウム、カリウム、バリウム、カルシ
ウムおよびマグネシウムの酢酸塩および塩化物ならびに
ナトリウム、カリウムおよびマグネシウムの硫酸塩を有
利に用いることができる。

ヘパリン性の構造のモデイフィケーションの方法は、任
意に１Ｎ以下の濃度のアルカリまたはアルカリ土類金属
の塩および触媒量の還元剤を存在させ、約０．Ｏ１〜１
Ｎのアルカリまたはアルカリ土類金属の塩基を含有する
水溶液にへバリン性の物質（ｈｅｐａｒｉｎｌｃ　ｍａ
ｔｅｒｉａｌ）を溶かし、約０．５〜２４時間、約３５
〜７０℃に温度調節をすることによりて行なう。

反応終了後、溶液を室温まで冷やし、ｐＨを中性にする
。任意に、たとえばイオン交換樹脂、透析などで精製し
、最後に約２〜４倍量、好ましくは２．５倍量のたとえ
ばエチルアルコールのような炭素数１〜３のアルコール
を加えて、モディファイされたヘパリン誘導体を沈殿さ
せる。

前記の製造法でえたモディファイされたヘパリンは、従
来技術で知られているアルカリ処理によるヘパリンとは
、全く異なる固有の物理化学的特性を示す。これは、主
に塩基の濃度、温度および任意に用いる塩に関するパラ
メーターの値などの本発明に用いられる反応条件による
もので、この反応条件は、以前に用いられたものとは有
意に異なるものである。新規ヘパリン誘導体の構造上の
変化は、主には１３　Ｃ−ＮＭＲにおける共鳴の位置お
よび相対的な強度から、ならびに電気泳動での挙動（ｅ
ｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｅｂｅｈａｖｉｏｕｒ）　
、比旋光度の増加、イオウ含量の減少および硫酸基／カ
ルボキシル基（カルボキシル基含量は不変）の比率の減
少からも示される。

新規ヘパリン誘導体の構造におけるより特徴的な変化は
、１３　Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて生じる大きな変
化を調べることで確認される。これらの変化は、スペク
トルの特有のゾーン（ｚｏｎｅ）に関連し、新しいピー
クの出現および他のピークの変化をともに含む。注目す
べき点は、約５３および約５４ｐｐｍ付近に２つの新し
いシグナルが出現すること、ならびにイズロンおよびグ
ルコサミン単位の１位炭素原子に対応するピークが、９
２〜１０２ｐｐ−のゾーンにシフトすることである。

新規化合物およびその出発化合物の１３　Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルの比較チエツクにより、スペクトルゾーンのい
くつかは変化していないことが確認でき、その結果、ヘ
パリン性の構造のいくつかの部分は全くモディファイさ
れていないことが確認できる。とくに、硫酸化されたま
たは硫酸化されていないグルコサミン単位の６位炭素に
関連するシグナルは変化していない。さらにヘパリン形
態においてウロン残基の平均２０％である、イズロン酸
のカルボキシル基に、グルクロン酸単位に、硫酸化また
はアセチル化されたグルコサミン単位の２位炭素に、関
連したピークは、変化していないことがわかる。

それらに限定されないが、後記する実施例の記載から判
断できるように反応条件をより激しくするほど、新規ヘ
パリン誘導体の物理化学的特性はより変化をうける。し
たがりて、反応のパラメーターの調整により、構造にお
いて巧妙に（ｍｏｒｅ　ｏｒ　１ｅｓｓ　ｄｅｅｐｌｙ
）モディファイされた化合物かえられることを可能にす
る。

化学的なモデイフィケーションの量は、約５３および約
５４ｐｐ麿付近のピークのインテグラルの和ならびにグ
ルコサミン単位の６位炭素原子の約６２，５および約８
９ｐｐｍ付近のピークのインテグラルの和の比を用いて
計算する。後者が便宜上のリファレンスとして選ばれる
のは、それらの強度は安定に保たれ、かつ該ピークが他
のピークのないスペクトルゾーンに現われるからである
。約５３および約５４ｐｐａ＋付近での共鳴が増すのに
並行して、５８９ｎｍ　（ナトリウムのＤ線）における
旋光度は増加するので、比旋光度の測定をヘパリン性の
構造において生じる化学的なモデイフィケーションの程
度の評価に直接利用することができる。光学活性試薬を
反応媒体中に用いていないので、比旋光度の測定を反応
の進行を調べるために直接利用することができる。

１３　Ｃ−ＮＭＲにおけるピークのインテグラルの比お
よび出発物質と比較した比旋光度の増加を第１表に示す
。

［以下余白］ 前記のモディファイされたヘパリンはさらに、ｐＨ５，
８の０．１Ｍ酢酸バリウムバッファー中で高い易動度を
示す［ビー・オレステ（Ｐ、０ｒｅｓｔｏ）およびジー
・トリー（Ｇ、Ｔｏｒｒｌ）　、ジャーナル・オブ・ク
ロマトグラフ４−（Ｊ、Ｃｈｒｏｍ、）、　１９５巻、
３９８頁（１９８０年）参照〕という、出発物質とは異
なる電気泳動での挙動を示し、イオウ含量が約８〜１１
％、硫酸基／カルボキシル基の比率が約１．５０〜２．
２０および比旋光度［α］ｆが＋５０〜＋９０”である
という特性を示す。そのデータを第２表に示す。カッコ
内に対応する出発物質の値を示す。

［以下余白］ 本発明の目的である新規ヘパリン誘導体は、著しい抗血
栓作用をもつとともに、出発物質としてのヘパリンと比
較して低い出血作用および抗凝血作用を示す。これらの
生物学的作用は、ヘパリンの多くの典型的なテストで評
価した。

具体的には、抗Ｘａ因子、ＡＰＴＴ、出血時間および実
験的な血栓症からの保護の試験を行なった。

ＡＰＴＴ活性は、ラリュー・エム・ジェイ（Ｌａｒｒｌ
ｅｕＭ、　Ｊ、）およびウェイランド・ジー（Ｗｅｉｌ
ａｎｄＣ，）の方法［ルビュー・デマトロジー（Ｒｅｖ
ｕｅｄ’ｌｌｅＩＩａｔｏ１ｏｇ１ｅ）、１２巻、　１
９９頁（１９５７年）参照］にしたがって測定し、一方
抗Ｘａ活性は、イン・イー・ティー（Ｙｌｎ　Ｅ、　Ｔ
、）およびウニスラー・ニス（Ｖｅｓｓｌｅｒ　Ｓ、）
の方法［バイオケミ力・エト・バイオフィジカ・アクタ
（Ｂｌｏｃｈａｓ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ａｃｔａ）、２０１巻、３８７頁（１９７０年）参照］
にしたがって測定した。

すべての試験化合物は絶食ラットから採った血漿中に溶
解し、比例した希釈溶液 （ｐｒｏｐｏｒｔｌｏｎａｌ　ｄｉｌｕｔｉｏｎｓ）を
調整して方法に供する濃度をえた。それぞれの化合物に
ついて、両方の活性について１０回測定し、対応する試
験において、より有意な変化をみせた量をａｃｇ／ｍｌ
で示した。とくに、それぞれの生成物の活性は、Ａ　Ｐ
ＴＴ活性に関してはＡＰＴＴ時間をそれぞれ２倍にする
、また抗Ｘａ活性に関しては抗Ｘａｆｆｉを３０％増加
させる濃度をｓｃｇ／ｍｌで表した。

２つの試験でえられた数値（第３表参照）により、新規
化合物が抗凝血力の低下を示すことが確認される。

出血時間は、デジャーナ・イー（Ｄｅｊａｎａ　Ｅ、）
らによる方法［トロンボシス・ヒモスタシス（Ｔｈｒｏ
ｍｂ、　Ｊｌａｅｓｏｓｔ、）、４８巻、　１０ｇ頁（
１９８２年）参照］でラットを用いて測定され、結果は
対応する出発物質としてのヘパリンで処理したラットに
おいて出血が延長した時間を１００％として、新規ヘパ
リンで処理したラットにおいて出血が延長した時間をパ
ーセントで表した。モディファイされたヘパリン性の構
造をもつすべての本発明の新規誘導体において、対応す
る出発物質としてのヘパリンと比較して、出血時間の減
少がみられ、あるものは極めて著しい。

抗血栓活性はレヤーズ・ニス（Ｒｅｙｅｒｓ　Ｓ、）ら
の方法［トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ。

Ｒｅｓ、）　、１８巻、　６６９〜７４頁（１９８０年
）参照］にしたがって、うっ血性静脈血栓症（ｓｔａｓ
ｌｓｖｅｎｏｕｓ　ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）の試験を行
なった。新規化合物による保護は、出発物質としてのヘ
パリンによる血栓形成からの保護 （ａｎｔｌｔｈｒｏａｂｏｔｌｃ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏ
ｎ）を　１０［１としてパーセントで表した。

えられた結果から、抗血栓作用の本試験に関して、２つ
の系の実質的な同等性が示された。

前記の生物学的試験の値を以下の第３表に示す。抗Ｘａ
活性およびＡＰＴＴ活性に関して、対応する出発物質と
してのヘパリンにおける値をカッコ内に示す。

前記の薬理学的特性により、本新規ヘパリン誘導体は、
血栓性の症状に有用である。好ましい投与方法は、無菌
水溶液の形態で、非経口および皮下投与で行なわれ、任
意に溶液の等張化のための塩および保存剤を加えてもよ
い。

投与範囲は、用いられる製剤形態および患者の状態によ
るが、好ましくは、抗Ｘａ因子の単位（Ｕ、Ａ、Ｘａ）
で５，０００〜２０．０００　Ｕ、Ａ、Ｘａと同等の本
発明のヘパリン誘導体の量を１日１回またはそれ以上投
与する。

出発物質として、異なる起源のヘパリン性の物質を用い
ることができる。たとえば、従来技術として知られてい
る方法にしたがって解重合してえた低分子量ヘパリンは
もちろん、市販のヘパリンおよび市販のヘパリンを処理
して精製したヘパリンを、本発明のモディファイされた
ヘパリン性の物質をえるために用いた。

以下に本発明で用いた出発物質としてのヘパリン性の物
質の製造法を示す。

市販のヘパリンナトリウム２５ｇを水２０００　ｍｌに
溶解し、水２０００　ｍｌに溶解させた酢酸カルシウム
−水征物１１１．２ｇ　、酢酸５７ｍ１およびエチルア
ルコール６００　ｍｌを含有する溶液中に、前記水溶液
を温度を８〜ｌＯ℃に保ちながら、約３０分間かけて注
いだ。５℃で１５時間放置したのち、えられた懸濁液を
ろ過し、ろ液にエチルアルコール１０００　ｍｌを加え
る。５℃で３時間放置したのち、えられた沈殿をろ過し
た。沈殿物を水２００　ｍｌに溶解し、１Ｎ水酸化ナト
リウム溶液を用いてｐＨ７，０にした。そののち、Ｄｏ
ｖｅｘ　５０　ＷＸ８　（ナトリウム型）樹脂１００　
ｍｌおよび水７０ｍ１を用いて２０分間処理した。溶液
および樹脂を、同じ樹脂８０ｍ１をつめたクロマトグラ
フィー用のカラム（直径：１．６ｃｌ１１％長さ：１０
ｃｍ）に移した。溶液を浸出し、全溶液量が４００ｍ１
になるまで蒸留水で溶出したのち、この溶液と、酢酸ナ
トリウム三水和物１２ｇおよびエチルアルコールｌ　Ｏ
ＯＯｍｌとを合わせた。

沈殿をろ過し、真空下で乾燥して、精製されたヘパリン
ナトリウムを１９．２ｇえ、ＡＬＰＡ　８７−７８とし
た。以下に物理化学的特性を示す。

Ｓ　：　１０．０９％、 硫酸基／カルボキシル基の比率：　　２．１３、［α］
武：千４３°（Ｃ−１％、水中）１３　Ｃ−ＮＭＲスペ
クトル　δ（９ｐｌ）　：　　１７７．３．１０４．７
．１０２．０．９９．４．８ｏ、０．７８．６．７２．
３．７１．９．６９．０．６２．５．６０．６ヘパリン
ナトリウム　ＡＬＦＡ　８７−８１出発物質としてＡＬ
Ｆ八８へ−７８と同じ市販のヘパリンナトリウムを５０
［用い、同様の方法で精製し、ヘパリンナトリウムＡＬ
ＦＡ　８７−８１を３Ｇ、５ｇえた。以下にその物理化
学的特性を示す。

Ｓ　：　１０．５６％、 硫酸基／カルボキシル基の比率：２．２０゜［α］　：
　：　＋４７＠（Ｃ−１％、水中）１３　Ｃ−ＮＭＲス
ペクトル　δ（ｐｐｍ）　：　　１７７．３．１０４．
７．１０２．０．９９，５．８０．１．７Ｂ、Ｇ、７２
．４．７２．０、Ｇ９．１．６２．７．６０．７市販の
ヘパリンナトリウム 以下に物理化学的特性を示す。

Ｓ　　：　　１１．０％、 硫酸基／カルボキシル基の比率：２、 ［α］：：＋４４°（Ｃ−１％、水中）１３　Ｃ−ＮＭ
Ｒスペクトル　δ（ｐｐｍ）　：　　１７７．４．１０
４．６．１０Ｌ、９．９９，８．７９．９．７８，６．
７２．２．７１．８．６９，０．６２，６．６０，８低
分子ｆｆｌヘハ’）　ンｆ−ト！Ｊ　’７　ムＬＭＷ　
ＡＬＦＡ　８Ｂ−０２低分子ロヘパリンナトリウムＬ）
ＩＷ　ＡＬＰＡ　８Ｂ−０２は、国際特許公開公報（Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｐａｔｅｎｔ　ｐｕｂｌｌｃ
ａｔｌｏｎ）第８６１００７２９号明細書記載の方法に
したがって、銅イオンの存在下、過酸化水素を用いた解
重合反応によってえた。以下に物理化学的特性を示す。

平均分子量：　４２００ダルトン、 Ｓ　：　１１．４０％、 硫酸基／カルボキシル基の比率：　　２．２７、［α］
　、：　：　＋　４５＠（Ｃ−１％、水中）１３０−Ｎ
ＭＩ？スペクトル　δ（ｐｐｌｌ）　：　　１７７．４
．１０４、Ｇ、１０１．９．９９，８．７９．９．７８
．６．７２．６．７２．２．７１．９．６９．１．６２
．７．８０，７低分子量ヘパリンナトリウムＬＭＷ　Ａ
ＬＦＡ８７−１９８低分子量ヘパリンナトリウムＬＭＷ
　ＡＬＦＡ　８Ｇ−０２と同様の方法にしたがって、解
重合反応により低分子量ヘパリンナトリウムＬＭＷ　Ａ
ＬＰＡ　８７−１９８をえた。以下にその物理化学的特
性を示す。

Ｓ　：　１１．００％、 硫酸基／カルボキシル基の比率：　　２．３２、［α］
：Ｇ：＋４７°（Ｃ−」％、水中）１３Ｃ−ＮＭＲスペ
クトル　δ（ｐｐｍ）　：　　１７７．７．１０４．８
．１０２．０．９９．６．８０．２．７８．６．７２．
４．７１．９．６９．２．６２，７．６０．６比旋光度
［α］Ｈは、水性媒体中、１％の濃度で測定した。

硫酸基／カルボキシル基の比率は、電位差法でｄ１１１
定した。

イオウ含量のパーセンテージの測定は、電位差法および
シエニーゲル（Ｓｃｈｏｏｎ　Ｉｇｅｒ）法の二法で行
なった。

１３　Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、パリアンＣＰＴ−１５
スペクトロメーター（Ｖａｒｌａｎ　ＣＰＴ−７５ｓｐ
ｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）を用いて、７５．４７ＭＨｚに
おいて、溶媒として０２０を、関連内部標準としては３
−トリメチルシリルプロパンスルホン酸ナトリウムを用
いて測定した。

つぎに実施例にもとづいて本発明をさらに詳しく説明す
るが、本発明はもとよりこれらに限られるものではない
。

実施例１ ヘパリンＡＬＰＡ　８７−８１１．８ｇを水酸化ナトリ
ウム０．４ｇ（０，２２５Ｎ）、酢酸ナトリウム２．３
ｇ（０，６２５Ｎ）および水素化ホウ素ナトリウム１０
５ｇを含有する水溶液４５ｍ１に加えた。３．５時間Ｂ
Ｏ℃に保温したのち、室温まで冷やし、氷酢酸を用いて
中性にし、エタノールを２．５倍量加えた。沈殿をろ過
し、フィルター上においてエタノール６に対して水１の
割合の混合液で洗浄したのち、乾燥し、生成物を１．７
ｇえた。以下に特徴的なシグナルをもつ１３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。

δ（ｐｐｌ）　　：　１７７．３．１０４．３．１０１
．９．９９．４．９８．４．９７．２．９Ｂ、８．７９
．７．７９．１．７８．５、７２．Ｌ　　７１．８、７
１．２、６８，８、Ｂ２．４、８０．６、６０．３、５
４．Ｌ　　５３．１実施例２ ヘパリンＡＬＰＡ　８７−７８１．８ｇを水酸化ナトリ
ウム０．４ｇ（０，２２５Ｎ）、酢酸ナトリウム２．３
ｇ（０，８２５Ｎ）および水素化ホウ素ナトリウムｌｈ
ｇを含有する水溶液４５ｍ１に加えた。１５時間ＢＯ℃
に保温し、冷却したのち、酢酸で中性にした。Ｄｏｖｅ
ｘ　Ｉ　Ｘ２（塩素型）アニオン樹脂をつめたカラム（
直径＝１　、２ｃｍ、長さ：８ｃｍ）を通して浸出した
。浸出液および洗液を共にし、エタノールを２，５倍量
加えた。沈殿をろ過し、エタノール６に対して水１の割
合の混合液で洗浄し、乾燥して生成物１．８５ｇをえた
。以下に特徴的なシグナルをもつ１３　Ｃ−ＮＭＲスペ
クトルを示す。

δ（ｐｐ＋１）　　：　１７７．４．１０４．６．１０
１．８．９ｇ、６．９７．２．９６．８．７９．６．７
９．１．７ｇ、９．７２．２．７１．５．７１．２．６
８．８．６２．５．６０．３．５４、■、５３．１ 実施例３ ヘパリンＡＬＰＡ８７−７８１．８ｇを水酸化ナトリウ
ム４−８ｇ（１Ｎ）を含有する水溶液１２０ｍ１に加え
た。

３．５時間Ｂθ℃に保温し、酢酸で中性にしたのち、流
水で一夜、および蒸留水で６時間透析した。

溶液に酢酸ナトリウム３．５ｇを加え、酢酸で中性にし
、エタノールを２．５倍量加えた。沈殿をろ過し、エタ
ノール６に対して水１の割合の混合液で洗浄したのち、
乾燥して生成物を１．７ｇえた。

以下に特徴的なシグナルをもつ１３　Ｃ−ＮＭＲスペク
トルを示す。

δ（ｐｐｌ）　　：　１７７．４．１０４．８．１０１
．７．９ｇ、１３．９８．４．９７．２．９６．８．７
９，７．７９．１゜７８．６．７３．５．７２．５．７
２．３．７２．１．７１．５．８８．８、Ｂ２．６、Ｂ
Ｏ０４，６０，２，５４，０、５３，１ 実施例４ ヘパリンＡＬＰＡ　８７−８１４ｇを、水酸化ナトリウ
ム４．８ｇ（１Ｎ）、酢酸ナトリウム６、．２ｇ（０，
８２５Ｎ）および水素化ホウ素ナトリウム２５ｍｇを含
有する水溶液１２０ｍ１に加えた。３６５時間６０℃に
保温し、酢酸で中性にしたのち、流水で２４時間透析し
た。

Ｄｏｖｅｘ　Ｉ　Ｘ４　（塩素型）アニオン樹脂をつめ
たカラム（直径：　１．８ｃｏ＋　ｓ長さ：　１５ｃｍ
）を通して浸出した。浸出液および洗液、ならびに酢酸
ナトリウム４ｇを合わせたのち、エタノールを２．５倍
量加えた。沈殿をろ過し、フィルター上においてエタノ
ール６に対して水１の割合の混合液で洗浄したのち、乾
燥して生成物３．５５ｇをえた。

特徴的なピークを示す１３　Ｃ−ＮＭＲスペクトルを以
下に示す。

δ（ｐＩ）１１）　　：　１７７．４．１０４．５．１
０１．８．９９．４．９８．７．９７．１．７９．５．
７８．６．７３．５．７１．８．６８，８、Ｂ２．４．
６０．３．５４．０．５３．１ 実施例５ ヘパリンＬＭＷ　ＡＬＰＡ　８Ｂ−０２１，８ｇ　’１
ｒ−５水Ｍ　化ｆ−トリウム０．０８ｇ（０，０４Ｎ）
、酢酸ナトリウム２．６ｇ（０，６２５Ｎ）および水素
化ホウ素ナトリウム１１０ｆｆ１を含有する水溶液５０
　ｍｌに加えた。２１０分間６０°Ｃに保温し、室温に
冷却したのち、まずアニオン樹脂Ｄｏｗｅｘ　ｌ　Ｘ４
　（ＯＨ−型）をつめたカラム（直径：１．２ｃ＋＊　
％長さ；　１０ｃｍ）で、次にカチオン樹脂Ｄｏｖｅｘ
　５０　ＶＸ８（Ｈ＋型）をつめたカラムで浸出を行な
った。浸出液および洗液を２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
で中性にしたのち、酢酸ナトリウム４ｇを加えて、エタ
ノールを２．５倍量加えた。

えられた沈殿を、エタノール６に対して水１の割合の混
合液で洗浄したのち、乾燥して生成物１．４ｇをえた。

特徴的なピークを示す’３　Ｃ−ＮＭＲスペクトルを以
下に示す。

δ（ｐｐｓ）　　：　１７７．４．１０４．６．１０１
．９．９９．４．９８．１３．９８．４．９７，２．９
６．８．７９．９．７８．６．７２．３．７１．９．６
８．８．６２．６．６０．３．５４．１．５３．１ 実施例６ ヘパリンＬＭＷ　ＡＬＦＡ　８７−１９８１０ｇを、水
酸化ナトリウム２．７ｇ（０，２２５Ｎ）、酢酸ナトリ
ウム１５ｇ（０，８２５Ｎ）および水素化ホウ素ナトリ
ウム６０ＩＩ１ｇを含有する水溶液３００ｍ１に加えた
。５０分間６０℃に保温し、室温に冷却したのち、蒸留
水で５００ｍ１に希釈した。まずアニオン樹脂Ｄｏｖｅ
ｘ　ｌ　Ｘ２（０１ド型）をつめたカラム（直径：２ｃ
Ｉ１１１長さ：１５ｃｍ）で浸出し、つぎにカチオン樹
脂Ｄｏｖ６ｘ　５０ＷＸ８（Ｈ＋型）をつめたカラム（
直径：２ｃｍ、長さ：１５ＣＯ＋）で、浸出を行なった
。浸出液および洗液を４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用
いて中性にしたのち、酢酸ナトリウム２０ｇを加えて、
エタノールを２．５倍量加えた。えられた沈殿をエタノ
ール６に対して水ｌの割合の混合液で洗浄したのち、乾
燥して生成物９．１ｇをえた。以下に特徴的なピークを
示す１３　Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

δ（ｐｐｍ）　　：　１７７．４．１０４・、８．１０
１．９．９９．８．９８．６．９８．４．９７．２．９
６．８．７９．８．７８．６．７２．２．７１．８．６
８．９．６２．５．６０．３．５４．１．５３．１ 実施例７ 市販のヘパリンナトリウム１５ｇを、水酸化ナトリウム
５．４ｇ（０，２２５Ｎ）、酢酸ナトリウム３０ｇ（０
，６２５Ｎ）および水素化ホウ素ナトリウム１２０＋＊
ｇを含有する水溶液６００ｍ１に加えた。４時間４２℃
に保温し、室温で冷却したのち、酢酸で中性にした。−
夜、流水で透析したのち、アニオン樹脂Ｄｏｖｅｘ　Ｉ
　Ｘ２　（塩素型）をつめたカラム（直径：２．８ｃｍ
、長さ：１５ｃｍ）で浸出を行なった。浸出液および洗
液と酢酸ナトリウムＩＯｇを合わせ、２Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液を用いてｐＨ７に調整し、エタノールを２．
５倍量加えた。えられた沈殿をエタノール６に対して水
１の割合の混合液で洗浄したのち、乾燥して生成物を１
３．９ｇえた。特徴的なピークを示す’３　Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルを以下に示す。

δ（ＰｐＩ）　　：　１７７．３．１０４．８　、１０
１．９．９９．８．９８．６．９８．４．９７，２．９
Ｂ、８．７９．９．７８．６．７２，２．７１．８、Ｂ
９．０．６２．５．６０．３．５４．１．５３．１ 実施例８ 非経口用途のための１バイアル中の含量：実施例１でモ
ディファイされたヘパリン１００００　Ｕ、Ａ、Ｘａ Ｆ、Ｕ、塩化ナトリウムＦ、Ｕ、　　　　５ｍｇＢ、Ｐ
ベンジルアルコール　　　ｇ　ｍｇ無菌蒸留水　　　　
　　　　　１　ｍｌ（注）Ｐ、Ｕ、：薬局方［ファルマ
コボエイアウフィシアレ（ＰａｒｍａｃｏｐｏｅｌａＵ
ｆｆｉｃｌａｌｅ）］ Ｂ、Ｐ、　：英国薬局方 ［発明の効果］ 本発明によれば、抗血栓作用を充分維持し、出血作用お
よび抗凝血作用を減少させたヘパリン誘導体をうろこと
ができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて５３および
   ５４ｐｐｍ付近にシグナルをもち、水溶液における比旋
   光度が＋５０〜＋９０゜であり、イオウ含量が８〜１１
   ％であり、およびカルボキシル基に対する硫酸基の比率
   が１．５０〜２．２０であることを特徴とする新規ヘパ
   リン誘導体。 ２　ヘパリン性の物質の水溶液に０．０１〜１Ｎのアル
   カリまたはアルカリ土類金属の塩基を存在させ、０．５
   〜２４時間、３５〜７０℃で処理し、中性付近のｐＨで
   炭素数１〜３のアルコールを２〜４倍量加えて、モディ
   ファイされた構造をもつ化合物を沈殿させることを特徴
   とする＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて５３およ
   び５４ｐｐｍ付近にシグナルをもち、水溶液における比
   旋光度が＋５０〜＋９０゜であり、イオウ含量が８〜１
   １％であり、およびカルボキシル基に対する硫酸基の比
   率が１．５０〜２．２０であることを特徴とする新規ヘ
   パリン誘導体の製造法。 ３　０〜１Ｎの濃度のアルカリまたはアルカリ土類金属
   の塩を存在させて行なう請求項２記載の製造法。 ４　触媒量の還元剤を存在させて行なう請求項２または
   ３記載の製造法。 ５　沈殿させる前に、イオン交換樹脂を用いるパーコレ
   ーションまたは透析により精製を行なう請求項２、３ま
   たは４記載の製造法。 ６　塩基が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよび
   水酸化バリウムからなる群より選ばれたものである請求
   項２、３、４または５記載の製造法。 ７　塩が、ナトリウム、カリウム、バリウム、カルシウ
   ムおよびマグネシウムの塩化物および酢酸塩ならびにナ
   トリウム、カリウムおよびマグネシウムの硫酸塩からな
   る群より選ばれたものである請求項３、４または５記載
   の製造法。 ８　還元剤が水素化ホウ素ナトリウムである請求項４ま
   たは５記載の製造法。 ９　エチルアルコールを２．５倍量加えることによりモ
   ディファイされた化合物を沈殿させてなる請求項２、３
   、４または５記載の製造法。