JPH0265787A - Ｌ（‐）‐テトラヒドロ葉酸の製造法 - Google Patents
Ｌ（‐）‐テトラヒドロ葉酸の製造法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＬ（−）−テトラヒドロ葉酸の製造法に関する
。Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸は、Ｌ（−）−ロイコボ
リンの製造原料等として利用される。Ｌ（−）−ロイコ
ボリンは、メトトレキセートなどの葉酸拮抗体の投与後
の悪性貧血を防止する作用や制癌剤である５−フルオロ
ウラシルの効果を増大させる作用を有することが知られ
ており、医藁品として作用である。
。Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸は、Ｌ（−）−ロイコボ
リンの製造原料等として利用される。Ｌ（−）−ロイコ
ボリンは、メトトレキセートなどの葉酸拮抗体の投与後
の悪性貧血を防止する作用や制癌剤である５−フルオロ
ウラシルの効果を増大させる作用を有することが知られ
ており、医藁品として作用である。
従来の技術
Ｌ （−）−テトラヒドロ葉酸の製造方法には、大きく
分けて、有機化学的手法と酵素的手法がある。
分けて、有機化学的手法と酵素的手法がある。
有機化学的手法としては、例えば葉酸を水溶液中でＮａ
ＢＨ＜により還元して１．−（ｉ：）−テトラヒドロ葉
酸を製造して酸性条件下で析出させろ方法が知られてい
る〔ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ（：ｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ） ２２ 、７３Ｈ１９７９） 〕。
ＢＨ＜により還元して１．−（ｉ：）−テトラヒドロ葉
酸を製造して酸性条件下で析出させろ方法が知られてい
る〔ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ（：ｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ） ２２ 、７３Ｈ１９７９） 〕。
有有機化学下手を用いて葉酸からＬ （−）−テトラヒ
ドロ葉酸を製造する場合、必ず（＋）−テトラヒドロ葉
酸が副生ずるため、Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸のみを
得るには、光学分割しなければならず、そのため収率が
よくない。
ドロ葉酸を製造する場合、必ず（＋）−テトラヒドロ葉
酸が副生ずるため、Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸のみを
得るには、光学分割しなければならず、そのため収率が
よくない。
酵素的手法としては、補酵素Ｎ Ａ Ｄ Ｐ Ｈ存在下
、ジヒドロ葉酸にジヒドロ葉酸還元酵素を作用させて、
Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸を製造する方法が知られて
いる〔テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）４２
、 １１７（１９８６）］。
、ジヒドロ葉酸にジヒドロ葉酸還元酵素を作用させて、
Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸を製造する方法が知られて
いる〔テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）４２
、 １１７（１９８６）］。
ジヒドロ葉酸還元酵累を用いて、ジヒドロ葉酸１モルを
還元する出きは、通常１モルのＮ Ａ Ｄ Ｐ ）（が
１モルのＮ Ａ Ｄ Ｐに酸化される。ＮＡＤＰＩ＋は
高価であるため、通常は、製造コストの面から、Ｎ Ａ
Ｉ） Ｐを還元して、ＮΔＤ Ｐ Ｈを１１！′生さ
せる酵素系（以下Ｎ△Ｉ） Ｐ Ｈ再生系と称する）を
組み合わけて用いることが多い。
還元する出きは、通常１モルのＮ Ａ Ｄ Ｐ ）（が
１モルのＮ Ａ Ｄ Ｐに酸化される。ＮＡＤＰＩ＋は
高価であるため、通常は、製造コストの面から、Ｎ Ａ
Ｉ） Ｐを還元して、ＮΔＤ Ｐ Ｈを１１！′生さ
せる酵素系（以下Ｎ△Ｉ） Ｐ Ｈ再生系と称する）を
組み合わけて用いることが多い。
例えば、ＮΔＤ Ｐ Ｉ−ｆ再生系として、イソクエン
酸脱水素酵素またはグルコース−６−リン酸脱水素酵素
を用いた方法〔テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ）４２ １１７（１９８６）：ｌ、 リンゴ酸脱水素
酵素を用いた方法（時開Ｉｆ１４６１−１２８８９５号
公報）、６−ホスホグルコン酸脱水素酵素を用いた方法
〔メソッズ・イン・エンザイモｆコシ−（ＭｅＬｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）１２２ ．３６０（
１９＋３６） ）が報告されている。
酸脱水素酵素またはグルコース−６−リン酸脱水素酵素
を用いた方法〔テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ）４２ １１７（１９８６）：ｌ、 リンゴ酸脱水素
酵素を用いた方法（時開Ｉｆ１４６１−１２８８９５号
公報）、６−ホスホグルコン酸脱水素酵素を用いた方法
〔メソッズ・イン・エンザイモｆコシ−（ＭｅＬｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）１２２ ．３６０（
１９＋３６） ）が報告されている。
発明が解決しようとする課題
ジヒドロ葉酸にジヒドロ葉ＰＩ！還元酵素を作用させて
、Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸を生成させる酵素的手法
のうち、ＮＡＤＰＨ再生系としてイソクエン酸脱水ぶ酵
素を用いる場合は、基質として、高１コなイソクエン酸
を用いなければならず、また、反応時間が長く、収率も
低し）。Ｎ、へＤＦ）ｌＩＩ＋）′土系として、グルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素を用いる場合は、基質であ
るグルコース−６−リン酸が高価である他、グルコース
−６−リン酸を供給するために、タレアチンキナーゼや
酢酸キナーゼを用いなければならない。また、反応時間
が長く、収率も低い ＮΔＤ Ｐ Ｈ再生系として、リ
ンゴ酸脱水素酵素を用いる場合は、ジヒドロ葉酸還元酵
素に作用させるジヒドロ葉酸は２．９ｍν１と低濃度で
あり、生成するＬ （−）−テトラヒドロ葉酸の量が少
ない。またジヒドロ葉酸の量に対してＮＡＤＰＨの量が
多く、効率的な方法ではフニい。
、Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸を生成させる酵素的手法
のうち、ＮＡＤＰＨ再生系としてイソクエン酸脱水ぶ酵
素を用いる場合は、基質として、高１コなイソクエン酸
を用いなければならず、また、反応時間が長く、収率も
低し）。Ｎ、へＤＦ）ｌＩＩ＋）′土系として、グルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素を用いる場合は、基質であ
るグルコース−６−リン酸が高価である他、グルコース
−６−リン酸を供給するために、タレアチンキナーゼや
酢酸キナーゼを用いなければならない。また、反応時間
が長く、収率も低い ＮΔＤ Ｐ Ｈ再生系として、リ
ンゴ酸脱水素酵素を用いる場合は、ジヒドロ葉酸還元酵
素に作用させるジヒドロ葉酸は２．９ｍν１と低濃度で
あり、生成するＬ （−）−テトラヒドロ葉酸の量が少
ない。またジヒドロ葉酸の量に対してＮＡＤＰＨの量が
多く、効率的な方法ではフニい。
ＮＡＤＰＨ再生糸として、６−ホスホグルコン酸脱水素
酵素を用いる場合は、基質としで、高価な６−ホスホグ
ルコン酸を用し）なければならｔ；い。
酵素を用いる場合は、基質としで、高価な６−ホスホグ
ルコン酸を用し）なければならｔ；い。
また、ジヒドロ葉酸の濃度も低く、ジヒドロ葉酸の１に
対してＮＡＤＰＨの晴も多く、効率的ブ；方法ではない
。
対してＮＡＤＰＨの晴も多く、効率的ブ；方法ではない
。
課題を解決するための手段
本発明名らは、工業的に安価でかつ効率のよい１（−）
−テトラヒドロ葉酸〈以下、テトラヒドロ葉酸と略記す
る）の１２造法について、鋭意検討した結果、酵素手法
を用いてテトラヒドロ葉酸を製造する方法においてＮ
Ａ Ｄ Ｐ Ｈ再生系としてグルコース脱水素酵素を用
いれば、少量のＮ Ａ Ｄ Ｐ Ｈで、高濃度のジヒド
ロ葉酸をジヒドロ葉酸還元酵素に作用させることができ
、効率よくテトラヒドロ葉酸を得ることができることを
見い出し、本発明を完成させた。
−テトラヒドロ葉酸〈以下、テトラヒドロ葉酸と略記す
る）の１２造法について、鋭意検討した結果、酵素手法
を用いてテトラヒドロ葉酸を製造する方法においてＮ
Ａ Ｄ Ｐ Ｈ再生系としてグルコース脱水素酵素を用
いれば、少量のＮ Ａ Ｄ Ｐ Ｈで、高濃度のジヒド
ロ葉酸をジヒドロ葉酸還元酵素に作用させることができ
、効率よくテトラヒドロ葉酸を得ることができることを
見い出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、（１）ＮＡＤＰまたはＮ Ａ Ｄ
Ｐ Ｈ及び■グルコースとグルコース脱水素酵素の存在
下でジヒドロ葉酸にジヒドロ葉酸還元酵素を作用させて
Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸を生成させることを特徴と
するテトラヒドロ葉酸の製造法を提供する。
Ｐ Ｈ及び■グルコースとグルコース脱水素酵素の存在
下でジヒドロ葉酸にジヒドロ葉酸還元酵素を作用させて
Ｌ（−）−テトラヒドロ葉酸を生成させることを特徴と
するテトラヒドロ葉酸の製造法を提供する。
本発明に用いるジヒドロ葉酸還元酵素は、精製標品、粗
精製標品、ジヒドロ葉酸還元酵素含有物、例えばジヒド
ロ葉酸還元酵素活性を有する微生物の菌体または菌体処
理物などいずれも用いることができる。
精製標品、ジヒドロ葉酸還元酵素含有物、例えばジヒド
ロ葉酸還元酵素活性を有する微生物の菌体または菌体処
理物などいずれも用いることができる。
菌体処理物としては、菌体の乾板処理物、界ｉ１１活性
剤処理物、酵素処理物、超音波処理物、機械的摩砕処理
物、溶媒処理物、菌体の蛋白質分画、菌体および菌体の
固定化物などが用いられる。
剤処理物、酵素処理物、超音波処理物、機械的摩砕処理
物、溶媒処理物、菌体の蛋白質分画、菌体および菌体の
固定化物などが用いられる。
本発明に用いるグルコース脱水素酵素はＮＡＤＰを還元
して、Ｎ Ａ Ｄ Ｐ’Ｈを生成する酵素であれば、精
製標品、粗精製標品、該酵素含有物、例えば該酵素活性
を存する微生物の菌体処理物などいずれも用いることが
できる。例えば、了セトバタター（ＡｃｅＬｏｂａｃｔ
ｅｒ）属、バタテリウム（Ｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ）属、
バシラス（ｆｌａ ｃ目１ｕｓ）属、グルコノバクタ−
（Ｇｌｕｃｏｎ。
して、Ｎ Ａ Ｄ Ｐ’Ｈを生成する酵素であれば、精
製標品、粗精製標品、該酵素含有物、例えば該酵素活性
を存する微生物の菌体処理物などいずれも用いることが
できる。例えば、了セトバタター（ＡｃｅＬｏｂａｃｔ
ｅｒ）属、バタテリウム（Ｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ）属、
バシラス（ｆｌａ ｃ目１ｕｓ）属、グルコノバクタ−
（Ｇｌｕｃｏｎ。
ｂａｃｔｅｒ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ） ＩａＳ、キサントモナス（ＸａｎＬｈｏｒｎ
ｏｎａｓ） 属などに属する微生物が生産する酵素や高
等動物の肝由来の酵素などを用いることができるａ精製
標品は例えば、該酵素を生産する微生物の菌体の破砕液
を塩析、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマト
グラフィー、アブィニティクロマトグラフイーなどの手
段により精製することにより得られる。
ｎａｓ） ＩａＳ、キサントモナス（ＸａｎＬｈｏｒｎ
ｏｎａｓ） 属などに属する微生物が生産する酵素や高
等動物の肝由来の酵素などを用いることができるａ精製
標品は例えば、該酵素を生産する微生物の菌体の破砕液
を塩析、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマト
グラフィー、アブィニティクロマトグラフイーなどの手
段により精製することにより得られる。
ジヒドロ葉／ｉ１２還元酵素、グルコース脱水素酵素上
もその晴！Ｉ！標品−上たは粗精製標品をアルギン酸な
どの担保に公知の方法で固定化することにより繰り返し
使用１−ることがＩＴＪ能である。
もその晴！Ｉ！標品−上たは粗精製標品をアルギン酸な
どの担保に公知の方法で固定化することにより繰り返し
使用１−ることがＩＴＪ能である。
本発明のジヒドＩ−１葉酸にジヒドロ９！酸還元酵素を
作用さける反応は、ジヒド［１葉酸、グル７」−ス１（
こ（Ｎ Ａ Ｄ Ｐ Ｈを自存する水または、リン酸緩
（析液またはトリス塩酸緩１ｉ液などの緩衝液に、ジヒ
ド［ｊ葉酸還元酵素及びグルコース脱水素酵素を添加し
、温度２０〜４０℃、好ましくは２８〜３２℃で、ｐ
Ｈ５〜８、好ましくは６〜７で行う。反応は攪拌しなか
：）行うのが好ましく、また、反応液中に窒素カ゛ス、
アルゴンガス等を吹きこんで、反応液中の酸素を除去す
るのが好ましい。
作用さける反応は、ジヒド［１葉酸、グル７」−ス１（
こ（Ｎ Ａ Ｄ Ｐ Ｈを自存する水または、リン酸緩
（析液またはトリス塩酸緩１ｉ液などの緩衝液に、ジヒ
ド［ｊ葉酸還元酵素及びグルコース脱水素酵素を添加し
、温度２０〜４０℃、好ましくは２８〜３２℃で、ｐ
Ｈ５〜８、好ましくは６〜７で行う。反応は攪拌しなか
：）行うのが好ましく、また、反応液中に窒素カ゛ス、
アルゴンガス等を吹きこんで、反応液中の酸素を除去す
るのが好ましい。
反応に用いるジヒド０葉酸の濃度はｌＯ〜３００ｒｒ＋
Ｍ、好ましくは３０〜１００ｍＭであり、グルコースの
濃度は１０〜ｌｏｏＯｍＭ、好ましくは、５０〜３０
（］ ｍ〜１である。Ｎ 、Ａｔ Ｄ ｒンＦ（の濃度
１ま、０．０２−１０ｍ〜１、好ましくは０．５〜５ｍ
Ｍであり、ＮＡ Ｄ Ｐ Ｈの代わりにＮ Ａ Ｄ Ｐ
を用いてもよい。
Ｍ、好ましくは３０〜１００ｍＭであり、グルコースの
濃度は１０〜ｌｏｏＯｍＭ、好ましくは、５０〜３０
（］ ｍ〜１である。Ｎ 、Ａｔ Ｄ ｒンＦ（の濃度
１ま、０．０２−１０ｍ〜１、好ましくは０．５〜５ｍ
Ｍであり、ＮＡ Ｄ Ｐ Ｈの代わりにＮ Ａ Ｄ Ｐ
を用いてもよい。
反応液に添加するジヒド「Ｊ葉酸還元酵素及びグルコー
ス脱水素酵素の濃度は１〜２０Ｌｌ／ｍｌ、好ましくは
３〜ｌ ＯＬｌ／ｍｌである。
ス脱水素酵素の濃度は１〜２０Ｌｌ／ｍｌ、好ましくは
３〜ｌ ＯＬｌ／ｍｌである。
ジヒドロ葉酸還元酵素活性は、バイオケミストリー＜Ｂ
ｉｏｃｈｅ＋ｎ１ｓｔｒｙ） １４．５２６７（１９７
５）に記載の方法に従って、ｐＨ７，４で測定する。グ
ルコース脱水素酵素活性は、３０℃、１００ｍＭのリン
酸緩衝液（ｐ Ｈ７）中で、１分間に１μｍｏｌｅのグ
ルコースを還元する力価を１単位（ＩＵ）として表わす
。
ｉｏｃｈｅ＋ｎ１ｓｔｒｙ） １４．５２６７（１９７
５）に記載の方法に従って、ｐＨ７，４で測定する。グ
ルコース脱水素酵素活性は、３０℃、１００ｍＭのリン
酸緩衝液（ｐ Ｈ７）中で、１分間に１μｍｏｌｅのグ
ルコースを還元する力価を１単位（ＩＵ）として表わす
。
反応液中のジヒドロ葉酸はジヒドロ葉酸還元酵素により
還元されて、テトラヒドロ葉酸が反応液中に生成蓄積す
る。反応液中、ジヒドロ葉酸の濃度を経時的に測定し、
ジヒド０葉酸がずべてテトラヒドロ葉酸に還元されて消
失した時点で、反応液中に生成蓄積したテトラヒドロ葉
酸を直ちに回収する。反応時間は３０分〜１８時間であ
る。
還元されて、テトラヒドロ葉酸が反応液中に生成蓄積す
る。反応液中、ジヒドロ葉酸の濃度を経時的に測定し、
ジヒド０葉酸がずべてテトラヒドロ葉酸に還元されて消
失した時点で、反応液中に生成蓄積したテトラヒドロ葉
酸を直ちに回収する。反応時間は３０分〜１８時間であ
る。
反応液中のジヒドロ葉酸を定量する代わりに、消費され
たグルコースを定量して、ジヒドロ葉酸を定量すること
も可能である。
たグルコースを定量して、ジヒドロ葉酸を定量すること
も可能である。
ジヒドロ葉酸の定量はメソフズ・イン・エンザイモ［］
ジー（’ＪｅＬｈｏｄｓ ＋ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
） １８１．６０５（＋９７１）記載の方法に従って行
う。グルーコースの定Ｉｔよ、グルコースアナライザー
ＧＬ−１０１（三菱化成社製）を用いて行う。
ジー（’ＪｅＬｈｏｄｓ ＋ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
） １８１．６０５（＋９７１）記載の方法に従って行
う。グルーコースの定Ｉｔよ、グルコースアナライザー
ＧＬ−１０１（三菱化成社製）を用いて行う。
生成したテトラヒドロ葉酸は、不安定なため、ジャーナ
ル・才ブ・タロマドグラフィー（Ｊｏｕｒｎａ １ｏｆ
（：ｈｒｎｍａＬｏｇｒａｐｈｙ） １４０ 、 Ｉ
目（＋９７７）記載の方法によりメテニル体に変換して
定量する。
ル・才ブ・タロマドグラフィー（Ｊｏｕｒｎａ １ｏｆ
（：ｈｒｎｍａＬｏｇｒａｐｈｙ） １４０ 、 Ｉ
目（＋９７７）記載の方法によりメテニル体に変換して
定量する。
また・−り成したテトラヒドロ葉酸は、ジャーナル・Ａ
″ブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｏｒ
！Ｊｅｄ＋ｃ＋ｎａｌ Ｃ１＋ｅｍ＋５ｔｒｙ
） ２２ ．７３１＜１９７９） 記載の方法
により回収し、ｌ、−ロイツボリンに変換することがで
きる。
″ブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｏｒ
！Ｊｅｄ＋ｃ＋ｎａｌ Ｃ１＋ｅｍ＋５ｔｒｙ
） ２２ ．７３１＜１９７９） 記載の方法
により回収し、ｌ、−ロイツボリンに変換することがで
きる。
以下に実施例を示す。
実施例１
ジヒド”Ｊ酸５２ｍＭ、グルコース６１ｍＭ、ＮＡＤ
Ｐ ｔ−（１，０ｍＭを含６゛する水溶液１００ｍ（Ｎ
ａｉｌでｐＨを６．８５に調整）にジヒドロ葉酸還元酵
素を５．７１／ｍｌ、グルコース脱水素酵素５．６
Ｕ／ｍｌにプＪるように添加し、３０℃で、窒素ガスを
吹き込みながら攪拌し、反応を行−１た。
Ｐ ｔ−（１，０ｍＭを含６゛する水溶液１００ｍ（Ｎ
ａｉｌでｐＨを６．８５に調整）にジヒドロ葉酸還元酵
素を５．７１／ｍｌ、グルコース脱水素酵素５．６
Ｕ／ｍｌにプＪるように添加し、３０℃で、窒素ガスを
吹き込みながら攪拌し、反応を行−１た。
経時的に反応溶液中のジヒドロ葉酸とグルコースの濃度
を測定した。反応中、反応液のｐＨは、３Ｎ ＮａＯ
Ｈを添加し、ｐ Ｉ−１６，８〜？、０に維持した。反
応液中のジヒドロ葉酸がテトラヒドロ葉酸に還元されて
消失した２時間４０分後、アスコルビン酸ナトリウＡ
１．９ ｇを加え、さらに２０分間攪拌した。反応液に
塩酸を加えてｒ＋ Ｈを３．５５に下げ水冷しながらさ
らに２時間攪拌後、テトラヒドロ葉酸の沈殿を戸数した
。沈殿を水で沈ｔ′ｆＩ後、ギ酸４０ｍ１、トリフルオ
ロ酢酸８ｍｌを加え、窒素気流下室温に１７時間放置し
た。反応液を減圧濃縮後、０．５Ｎ塩酸を６０ｍ１加え
、攪拌しながら１夜放置した。沈殿を戸数して０．５
Ｎ塩酸で洗浄後乾板させるとテトラヒドロ葉酸のメテニ
ル体を２．４３ｇ得た。
を測定した。反応中、反応液のｐＨは、３Ｎ ＮａＯ
Ｈを添加し、ｐ Ｉ−１６，８〜？、０に維持した。反
応液中のジヒドロ葉酸がテトラヒドロ葉酸に還元されて
消失した２時間４０分後、アスコルビン酸ナトリウＡ
１．９ ｇを加え、さらに２０分間攪拌した。反応液に
塩酸を加えてｒ＋ Ｈを３．５５に下げ水冷しながらさ
らに２時間攪拌後、テトラヒドロ葉酸の沈殿を戸数した
。沈殿を水で沈ｔ′ｆＩ後、ギ酸４０ｍ１、トリフルオ
ロ酢酸８ｍｌを加え、窒素気流下室温に１７時間放置し
た。反応液を減圧濃縮後、０．５Ｎ塩酸を６０ｍ１加え
、攪拌しながら１夜放置した。沈殿を戸数して０．５
Ｎ塩酸で洗浄後乾板させるとテトラヒドロ葉酸のメテニ
ル体を２．４３ｇ得た。
実施例２゜
熱水５８ｍ１に実施例１で得たテトラヒドロ葉酸のメテ
ニル体２．４３ｇを加え、１２０℃のオイルバス中で５
．５時間反応を行った。反応液中のｐｌ（はＮａ０１１
で５．６〜６．９に推持した。反応＆（γ後、ｍｔ 水
塩化カルンウτ″）！、１．２ ｇ 、エタノールｌｌ
ｌＴｌをＩＪＯえて、さらに１時間攪拌した。
ニル体２．４３ｇを加え、１２０℃のオイルバス中で５
．５時間反応を行った。反応液中のｐｌ（はＮａ０１１
で５．６〜６．９に推持した。反応＆（γ後、ｍｔ 水
塩化カルンウτ″）！、１．２ ｇ 、エタノールｌｌ
ｌＴｌをＩＪＯえて、さらに１時間攪拌した。
′Ｌじた沈殿を戸別し、ｐ液を冷却しながらエタノール
・１００ｒｎ１を１時間かけて滴下した。生じた沈ｉよ
を戸数し、乾板すると、Ｌ、 （−） −ｏイコボリニ
ノが ２．２１ｇ 得 ら れＩこ。
・１００ｒｎ１を１時間かけて滴下した。生じた沈ｉよ
を戸数し、乾板すると、Ｌ、 （−） −ｏイコボリニ
ノが ２．２１ｇ 得 ら れＩこ。
ｌ−７（−）−ｒｙイコボリンの純度は、）（ＰＬＣを
用゛−で検定したところ、純度８３％であった。ジヒド
τ１ｇ！、酸からの収イシは６５％であり、光学純度は
９４％であった３、また、ＮＭＲ，ＴＬＣによっても最
終生成物がＬ （−） −４）イコボリンであることを
確認した。
用゛−で検定したところ、純度８３％であった。ジヒド
τ１ｇ！、酸からの収イシは６５％であり、光学純度は
９４％であった３、また、ＮＭＲ，ＴＬＣによっても最
終生成物がＬ （−） −４）イコボリンであることを
確認した。
発明の効果
本発明により工業的に安価でかつ効率よく、テトラヒド
ロ葉酸を（）ることかできる。
ロ葉酸を（）ることかできる。
Claims (1)
- （１）ＮＡＤＰまたはＮＡＤＰＨ及び（２）グルコース
とグルコース脱水素酵素の存在下で、ジヒドロ葉酸にジ
ヒドロ葉酸還元酵素を作用させてＬ（−）−テトラヒド
ロ葉酸を生成させることを特徴とするＬ（−）−テトラ
ヒドロ葉酸の製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63216045A JPH0265787A (ja) | 1988-08-30 | 1988-08-30 | Ｌ（‐）‐テトラヒドロ葉酸の製造法 |
| US07/393,795 US4929551A (en) | 1988-08-30 | 1989-08-15 | Process for producing L(-)-tetrahydrofolic acid |
| EP19890115716 EP0356934A3 (en) | 1988-08-30 | 1989-08-25 | Process for producing l(-)tetrahydrofolic acid |
| KR1019890012335A KR920007403B1 (ko) | 1988-08-30 | 1989-08-29 | L(-)-테트라히드로폴산의 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63216045A JPH0265787A (ja) | 1988-08-30 | 1988-08-30 | Ｌ（‐）‐テトラヒドロ葉酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0265787A true JPH0265787A (ja) | 1990-03-06 |
Family
ID=16682415
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63216045A Pending JPH0265787A (ja) | 1988-08-30 | 1988-08-30 | Ｌ（‐）‐テトラヒドロ葉酸の製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4929551A (ja) |
| EP (1) | EP0356934A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0265787A (ja) |
| KR (1) | KR920007403B1 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2850515B2 (ja) * | 1990-09-25 | 1999-01-27 | 東洋紡績株式会社 | グルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造法 |
| CH681303A5 (ja) * | 1991-01-16 | 1993-02-26 | Eprova Ag | |
| CH683262A5 (it) * | 1992-01-22 | 1994-02-15 | Applied Pharma Res | Procedimento per la separazione dei diastereomeri del sale di calcio dell'acido (6(R,S)-N-formiltetraidrofolico). |
| IT1254635B (it) * | 1992-02-20 | 1995-09-28 | Bracco Spa | Processo per la separazione degli stereoisomeri dell'acido folinico |
| CH686672A5 (de) * | 1992-12-01 | 1996-05-31 | Cerbios Pharma Sa | Verfahren zur Herstellung von (6S)-5,6,7,8-Tetrahydrofolsaeure. |
| US20070190596A1 (en) * | 2006-01-20 | 2007-08-16 | Jones Gerald S Jr | Synthesis of (6S)-5-methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61128895A (ja) * | 1984-11-26 | 1986-06-16 | Takara Shuzo Co Ltd | 補酵素再生反応を利用した有用物質の製造方法 |
| GB8621268D0 (en) * | 1986-09-03 | 1986-10-08 | Univ Strathclyde | Separation of substances |
-
1988
- 1988-08-30 JP JP63216045A patent/JPH0265787A/ja active Pending
-
1989
- 1989-08-15 US US07/393,795 patent/US4929551A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-08-25 EP EP19890115716 patent/EP0356934A3/en not_active Withdrawn
- 1989-08-29 KR KR1019890012335A patent/KR920007403B1/ko not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR920007403B1 (ko) | 1992-08-31 |
| EP0356934A3 (en) | 1991-09-11 |
| EP0356934A2 (en) | 1990-03-07 |
| US4929551A (en) | 1990-05-29 |
| KR900003375A (ko) | 1990-03-26 |
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