JPH0282161A - サイロキシン結合グロブリンの免疫学的定量法 - Google Patents
サイロキシン結合グロブリンの免疫学的定量法Info
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- JPH0282161A JPH0282161A JP23462188A JP23462188A JPH0282161A JP H0282161 A JPH0282161 A JP H0282161A JP 23462188 A JP23462188 A JP 23462188A JP 23462188 A JP23462188 A JP 23462188A JP H0282161 A JPH0282161 A JP H0282161A
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Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、・ヒトサイロキシン結合グロブリン（以下、
ＴＢＧという）の免疫学的定量法に関する。
ＴＢＧという）の免疫学的定量法に関する。
［従来の技術］
以前は、ＴＢＧの定量法として、Ｔ３摂取率より間接的
に測定する方法が使われていたが信頼性を欠くことから
近年では、感度・精度の点で優れているラテックス凝集
、ＥＩＡ、ＲＩＡ法などが使用されている（例えば、特
開昭５３−３５１７号公報）。
に測定する方法が使われていたが信頼性を欠くことから
近年では、感度・精度の点で優れているラテックス凝集
、ＥＩＡ、ＲＩＡ法などが使用されている（例えば、特
開昭５３−３５１７号公報）。
［発明が解決しようとする問題点］
しかしながら、ＴＢＧの血中濃度は、通常１０集法で測
定するには濃度的に高めであることと、各測定法には、
測定範囲があることから検体を希釈することまたは、検
体量を減らすことが必要であった。この操作は、誤差を
生じる危険性、また、操作が繁雑であり効率的な方法で
なかった。
定するには濃度的に高めであることと、各測定法には、
測定範囲があることから検体を希釈することまたは、検
体量を減らすことが必要であった。この操作は、誤差を
生じる危険性、また、操作が繁雑であり効率的な方法で
なかった。
［問題を解決するための手段］
本発明者等は、誤差を生じず操作の前便な方法を開発す
べく鋭意研究を行った結果１本発明に到達した。
すなわち、本発明は、抗ＴＢＧ抗体を使用する血液中の
ＴＢＧの測定系に遊離の抗ヒトＴＢＧ抗体を添加するこ
とを特徴とするＴＢＧの免疫学的定量法である。
べく鋭意研究を行った結果１本発明に到達した。
すなわち、本発明は、抗ＴＢＧ抗体を使用する血液中の
ＴＢＧの測定系に遊離の抗ヒトＴＢＧ抗体を添加するこ
とを特徴とするＴＢＧの免疫学的定量法である。
本発明において、抗ヒトＴＢＧ抗体を使用するＴＢＧの
免疫学的測定法としては、■ＥＩＡ法によるサンドイツ
チ法及び酵素を利用した免疫測定法、■ＲＩＡ法による
サンドインチ法及びラジオアイソ１〜−プを利用した免
疫測定法、■ラテックス凝集法におけるラテックスの凝
集度を測定する方法または粒子数を測定する方法があげ
られる。
免疫学的測定法としては、■ＥＩＡ法によるサンドイツ
チ法及び酵素を利用した免疫測定法、■ＲＩＡ法による
サンドインチ法及びラジオアイソ１〜−プを利用した免
疫測定法、■ラテックス凝集法におけるラテックスの凝
集度を測定する方法または粒子数を測定する方法があげ
られる。
上記免疫測定法において使用さ九る酵素。
ラジオアイソトープ、ラテックス担体等の材料及び標識
、固相化方法は何れも公知のものが使用される。例えば
、酵素としては、ペルオキシダーゼ、βガラクトシダー
ゼ、アイソトープとしてはｌ−１２５などラテックス担
体としてはポリスチレン担体などを使用することができ
る。
、固相化方法は何れも公知のものが使用される。例えば
、酵素としては、ペルオキシダーゼ、βガラクトシダー
ゼ、アイソトープとしてはｌ−１２５などラテックス担
体としてはポリスチレン担体などを使用することができ
る。
反応系に添加する遊離のＴＢＧ抗体としてはＴＢＧポリ
クローナルおよびモノクローナル抗体のいずれでもよい
。但し添加する抗体の特異性としては、固相または標識
抗体と異なったエピトープを有した抗体が検出感度を高
める為にも有用である。さらに、抗体をペプシン消化し
てＦｃ部分を除去し、ゲル濾過するこによって得られる
Ｆ （ａｂ・）２がより正確なアッセイ系を組み立てる
うえで有用である。
クローナルおよびモノクローナル抗体のいずれでもよい
。但し添加する抗体の特異性としては、固相または標識
抗体と異なったエピトープを有した抗体が検出感度を高
める為にも有用である。さらに、抗体をペプシン消化し
てＦｃ部分を除去し、ゲル濾過するこによって得られる
Ｆ （ａｂ・）２がより正確なアッセイ系を組み立てる
うえで有用である。
本発明の定量法は１、遊離抗ヒトＴＢＧ抗体を反応系に
添加することにより、検体を希釈することなしに高濃度
（例えば、１〜５０μｇ／ｍ１）のＴＢＧを測定するこ
とができる。また、ＴＢＧの測定範囲は、遊離抗ヒトＴ
ＢＧ抗体の添加量を変えることにより、任意に設定する
ことができる。通常は、↓〜５０μｇ／ｍｌの範囲のＴ
ＢＧが測定できるように遊雛抗ヒトＴＢＧ抗体を添加す
ることが必要である。
添加することにより、検体を希釈することなしに高濃度
（例えば、１〜５０μｇ／ｍ１）のＴＢＧを測定するこ
とができる。また、ＴＢＧの測定範囲は、遊離抗ヒトＴ
ＢＧ抗体の添加量を変えることにより、任意に設定する
ことができる。通常は、↓〜５０μｇ／ｍｌの範囲のＴ
ＢＧが測定できるように遊雛抗ヒトＴＢＧ抗体を添加す
ることが必要である。
サンドインチ系の場合、ポリクローナル抗体では通常、
添加後２０〜７５μｇ／ｍｌ、モノクローナル抗体では
、１０〜５０μｇ／ｍｌの遊離抗ＴＢＧ抗体を添加する
ことによって、良好な測定感度を示すアッセイ系を組む
ことができる。
添加後２０〜７５μｇ／ｍｌ、モノクローナル抗体では
、１０〜５０μｇ／ｍｌの遊離抗ＴＢＧ抗体を添加する
ことによって、良好な測定感度を示すアッセイ系を組む
ことができる。
［作用］
本発明は、反応系に遊離抗ヒトＴＢＧ抗体を添加するこ
とによって、当該遊離抗体が、検体中のＴＢＧと反応し
、標識又は、固相化抗ヒトＴＢＧ抗体との反応を妨げる
結果、検体中の見かけの上のＴＢＧ量が減少するという
原理によるものである。
とによって、当該遊離抗体が、検体中のＴＢＧと反応し
、標識又は、固相化抗ヒトＴＢＧ抗体との反応を妨げる
結果、検体中の見かけの上のＴＢＧ量が減少するという
原理によるものである。
［実施例］
以下に実施例により本発明を説明するが本発明はこれに
限られるものではない。
限られるものではない。
実施例Ｉ ＴＢＧの測定■
■ 酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体の調製
Ｎｉ１． Ｆａｂ・の調製
精製抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体１０ｍｇをｐＨ４
，０の０．１Ｍ酢酸緩衝液２ｍｌに溶解し、０．２ｍｇ
のペプシンを加え３７℃で３時間〜−夜インキユベート
した。１Ｍ炭酸緩衝液液（ｐＨ９，０）を適量加えて中
性にして反応を停止させた後、 ０．２Ｍ塩化ナトリウ
ム含有０．０２ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で平衡
化したウルトラゲルＡｃＡ−４４（ＬＫＢ）カラム（０
２，ＯＸ７０ｃｍ’）でゲル濾過を行いＦ（ａｂ・）２
５ｍｇを得た。次に、０．１Ｍ２−メルカプトエタノー
ル溶液をＦ（ａｂ・）２の１／１０量（ｍｌ）添加し静
置で１２０分間インキュベートしＦ （ａｂ・）２をＦ
ａｂ・に還元した。反応終了後、反応液を５ｍＭ ＥＤ
ＴＡ・２ Ｎａを含有した０、０５Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ６，０）で透析しＺ−メルカプトエタノールアミンを
除去したＦａｂ・を得た。
，０の０．１Ｍ酢酸緩衝液２ｍｌに溶解し、０．２ｍｇ
のペプシンを加え３７℃で３時間〜−夜インキユベート
した。１Ｍ炭酸緩衝液液（ｐＨ９，０）を適量加えて中
性にして反応を停止させた後、 ０．２Ｍ塩化ナトリウ
ム含有０．０２ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で平衡
化したウルトラゲルＡｃＡ−４４（ＬＫＢ）カラム（０
２，ＯＸ７０ｃｍ’）でゲル濾過を行いＦ（ａｂ・）２
５ｍｇを得た。次に、０．１Ｍ２−メルカプトエタノー
ル溶液をＦ（ａｂ・）２の１／１０量（ｍｌ）添加し静
置で１２０分間インキュベートしＦ （ａｂ・）２をＦ
ａｂ・に還元した。反応終了後、反応液を５ｍＭ ＥＤ
ＴＡ・２ Ｎａを含有した０、０５Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ６，０）で透析しＺ−メルカプトエタノールアミンを
除去したＦａｂ・を得た。
１−［２）、ＣＨＭ化ペルオキシダーゼの調製東洋紡社
製ペルオキシダーゼ（以下、ＰＯＤ）１０ｍｇを０．０
２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）２ｍｌに溶解し、１０
ｍｇのＣＨＭＣＮ−ハイドロキシスクシニイミドマレイ
ミドエステル）を添加し、３０℃で１２０間インキュベ
ー１〜しＣＨＭ化ＰＯＤを調製した。反応終了後、反応
液を０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）で透析し遊
離のＣＨＭを除去したＣＨＭ化ＰＯＤを得た。
製ペルオキシダーゼ（以下、ＰＯＤ）１０ｍｇを０．０
２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）２ｍｌに溶解し、１０
ｍｇのＣＨＭＣＮ−ハイドロキシスクシニイミドマレイ
ミドエステル）を添加し、３０℃で１２０間インキュベ
ー１〜しＣＨＭ化ＰＯＤを調製した。反応終了後、反応
液を０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，０）で透析し遊
離のＣＨＭを除去したＣＨＭ化ＰＯＤを得た。
１−（３１，Ｆａｌｙ−ＰＯＤ結合物の調製上記１−（
１） 、（２）で調製したＦａｂ′及びＣＨＭ化ＰＯＤ
を等量（ｍｇ）混合し４℃で１２時間静置反応を行いＰ
ＯＤ−Ｆａｂ・ （ＰＯＤ標識抗ヒトＴＢＧ抗体）を調
製した。これらは、石川等のマレイミド法（Ｓｃａｎｄ
、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ８，５ｕｐｐ１．７二４３、
１９７８）に準じた。
１） 、（２）で調製したＦａｂ′及びＣＨＭ化ＰＯＤ
を等量（ｍｇ）混合し４℃で１２時間静置反応を行いＰ
ＯＤ−Ｆａｂ・ （ＰＯＤ標識抗ヒトＴＢＧ抗体）を調
製した。これらは、石川等のマレイミド法（Ｓｃａｎｄ
、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ８，５ｕｐｐ１．７二４３、
１９７８）に準じた。
■ 抗体結合スリガラスビーズの調製
スリガラスビーズ１００ｇを０．５ｚγアミノプロピル
トリエトキシシランアセトン液に１０時間浸漬しビーズ
をアミノ化後、５ｘゲルタールアルデヒド（以下、ＧＡ
とする）水溶液に浸漬しＧＡ化した。さらに、０．０５
ｍｇ／ｍｌ精製抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体溶液に
浸漬し、抗体をガラスピーズに結合させ、０．１ｚ牛血
清アルブミン、０．２Ｍ塩化ナトリウムを含有する０、
０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２） （以下、０．１
％： ＢＳＡ ＰＢＳトする）に−夜浸漬し、抗ヒトＴ
ＢＧ抗体結合ガラスピーズを得た。
トリエトキシシランアセトン液に１０時間浸漬しビーズ
をアミノ化後、５ｘゲルタールアルデヒド（以下、ＧＡ
とする）水溶液に浸漬しＧＡ化した。さらに、０．０５
ｍｇ／ｍｌ精製抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体溶液に
浸漬し、抗体をガラスピーズに結合させ、０．１ｚ牛血
清アルブミン、０．２Ｍ塩化ナトリウムを含有する０、
０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２） （以下、０．１
％： ＢＳＡ ＰＢＳトする）に−夜浸漬し、抗ヒトＴ
ＢＧ抗体結合ガラスピーズを得た。
■ 血中ＴＢＧの測定
（ａ） 酵素標識抗体液
■で得たＰＯＤ標識抗ヒトＴＢＧ抗体を、０．５％ Ｂ
ＳＡ ＰＢＳで希釈し測定に必要な濃度に調製した。
ＳＡ ＰＢＳで希釈し測定に必要な濃度に調製した。
（ｂ） 標準液
精製ヒトＴＢＧを、０．１％ ＢＳＡ ＰＢＳニよす５
０．２５ｙｌＯｙ５ｔＯμｇ／ｍｌとなるように希釈調
製した。
０．２５ｙｌＯｙ５ｔＯμｇ／ｍｌとなるように希釈調
製した。
（ｃ） 遊旅抗ＴＢＧ抗体
抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体を０．３ｍｇ／ｍ１と
なるように０．５％ ＢＳＡ ＰＢＳで希釈調製した（
ｄ） 測定操作法 試験管に標準液または、検体（血清）を２０μｍサンプ
リングし、０．５％ ＢＳＡ ＰＢＳを５００μｍ（ｃ
）の遊離抗ＴＢＧ抗体を１００μｍ加えた。
なるように０．５％ ＢＳＡ ＰＢＳで希釈調製した（
ｄ） 測定操作法 試験管に標準液または、検体（血清）を２０μｍサンプ
リングし、０．５％ ＢＳＡ ＰＢＳを５００μｍ（ｃ
）の遊離抗ＴＢＧ抗体を１００μｍ加えた。
さらに、抗体結合ガラスピーズを１個加え、よく攪はん
した後、３７℃で１５分間振どう・攪はんした。反応終
了後、反応液を吸引除去し、生理食塩水２ｍｌを加えて
再び吸引除去した・この操作を２回繰り返した後、抗体
結合ガラスピーズを別の新しい試験管に移し、（ａ）の
酵素標識抗体液５００μｌを加え３７℃で、 １５分間
振どう・攪はんした。反応終了後、反応液を吸引除去し
、生理食塩水２ｍｌを加えて再び吸引除去した。この操
作を２回繰り返した後、抗体結合ガラスピーズを別の新
しい試験管に移し３ ｍｇ／ｍｌの０−フェニレンジア
ミンと０．０巴の過酸化水素を基質として含む０．１
Ｍのクエン酸緩衝液（ｐＨ４，８）を５００％ｌ加えた
。
した後、３７℃で１５分間振どう・攪はんした。反応終
了後、反応液を吸引除去し、生理食塩水２ｍｌを加えて
再び吸引除去した・この操作を２回繰り返した後、抗体
結合ガラスピーズを別の新しい試験管に移し、（ａ）の
酵素標識抗体液５００μｌを加え３７℃で、 １５分間
振どう・攪はんした。反応終了後、反応液を吸引除去し
、生理食塩水２ｍｌを加えて再び吸引除去した。この操
作を２回繰り返した後、抗体結合ガラスピーズを別の新
しい試験管に移し３ ｍｇ／ｍｌの０−フェニレンジア
ミンと０．０巴の過酸化水素を基質として含む０．１
Ｍのクエン酸緩衝液（ｐＨ４，８）を５００％ｌ加えた
。
３７℃で、１５分間振どう・振どう・攪はんした。反応
終了後、１．５Ｎ硫酸を３ ｍｌ加え反応停止後、４９
２ ｎｍにおける吸光度を測定した。
終了後、１．５Ｎ硫酸を３ ｍｌ加え反応停止後、４９
２ ｎｍにおける吸光度を測定した。
正規分布のグラフ用紙に測定値をプロットした検量線か
ら（Ｆｉｇ−１）から検体中のＴＢＧ濃度を読みとった
。
ら（Ｆｉｇ−１）から検体中のＴＢＧ濃度を読みとった
。
従来法との比較例
Ｆｉｇ−２に、従来法（ＲＩＡ法）との血清相関を示し
た。
た。
以下に示した実施例２〜８は、抗ヒトＴＢＧ抗体の種類
が実施例１と異なるが、調製・操作法は、実施例１に準
じた。
が実施例１と異なるが、調製・操作法は、実施例１に準
じた。
実施例２ 血中ＴＢＧの測定
■酵素標識抗ヒトＴ、Ｂ Ｇ抗体の調製精製抗ヒトＴＢ
Ｇモノクローナル抗体を用い、実施例１の酵素標識抗ヒ
トＴＥＧ抗体調製法に準じて調製した。
Ｇモノクローナル抗体を用い、実施例１の酵素標識抗ヒ
トＴＥＧ抗体調製法に準じて調製した。
■抗体結合スリガラスビーズの調製法
精製抗ヒトＴＢＧモノクローナル抗体を用い、実施例１
の抗体結合ガラスピーズの調製法に準じて調製した。
の抗体結合ガラスピーズの調製法に準じて調製した。
■血中ＴＢＧの測定 ゛
実施例１の血中ＴＢＧの測定法に準じてＴＢＧを測定す
る。
る。
但し、遊雛抗ＴＢＧ抗体としては、抗ヒトＴＢＧモノク
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最終５０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＥＧ
を測定した。
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最終５０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＥＧ
を測定した。
実施例３ 血中ＴＢＧの測定
■酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体の調製
精製抗ヒトＴＢＧモノクローナル抗体を用い、実施例１
の酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体調製法に準じて調製した。
の酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体調製法に準じて調製した。
■抗体結合スリガラスビーズの調製法
４ｇ製抗ヒト’Ｉ’ＢＧポリクローナル抗体を用い、実
施例１の抗体結合ガラスピーズの調製法に準じて調製゛
した。
施例１の抗体結合ガラスピーズの調製法に準じて調製゛
した。
■血中ＴＢＧの測定
実施例１の血中ＴＢＧの測定法に準じてＴＢＧを測定し
た。
た。
但し、遊離抗ＴＥＧ抗体としては、抗ヒトＴＢＧモノク
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最＃５０μｇ／＋社となるように添加しＴＢＧ
を測定した。
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最＃５０μｇ／＋社となるように添加しＴＢＧ
を測定した。
実施例４ 血中ＴＢＧの測定
■酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体の調製
精製抗ヒトＴＢＧモノクローナル抗体を用い、実施例１
の酵素標識抗ヒトＴｌ３Ｇ抗体調製法に準じて調製した
。
の酵素標識抗ヒトＴｌ３Ｇ抗体調製法に準じて調製した
。
■抗体結合スリガラスビーズの調製法
精製抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体を用い、実施例１
の抗体結合ガラスピーズの調製法に準じて調製した。
の抗体結合ガラスピーズの調製法に準じて調製した。
■血中ＴＢＧの測定
実施例１の血中ＴＢＧの測定法に準じてＴＢＧを測定し
た。
た。
但し、遊離抗ＴＢＧ抗体としては、抗ヒトＴＢＧポリク
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最＃６０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＥＧ
を測定した。
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最＃６０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＥＧ
を測定した。
実施例５ 血中ＴＢＧの測定
■酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体の調製
精製抗ヒトＴＢＧモノクローナル抗体を用い、実施例１
の酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体調製法に準じて調製した。
の酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体調製法に準じて調製した。
■抗体結合スリガラスビーズの調製法
精製抗ヒトＴＢＧモノクローナル抗体を用い、実施例１
の抗体結合ガラスピーズの調装法に準じて調製、した。
の抗体結合ガラスピーズの調装法に準じて調製、した。
■血中Ｔ Ｂ Ｇの測定
実施例１の血中Ｔ’ＢＧの測定法に準じてＴＢＧを測定
した。
した。
但し、遊離抗ＴＢＧ抗体としては、抗ヒトＴＢＧポリク
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最終６０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＢＧ
を測定した。
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最終６０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＢＧ
を測定した。
実施例６ 血中ＴＢＧの測定
■酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体のＷＡ製
ｍＷ抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体を用い、実施例１
の酵素標識抗ヒト’Ｉ’ＢＧ抗体調製法に準じて調製す
る。
の酵素標識抗ヒト’Ｉ’ＢＧ抗体調製法に準じて調製す
る。
■抗体結合スリガラスビーズの調製法
精製抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体を用い、実施例１
の抗体結合ガラスピーズの調製法に準じて調製した。
の抗体結合ガラスピーズの調製法に準じて調製した。
■血中ＴＢＧの測定
実施例１の血中ＴＢＧの測定法に準じてＴＢ、Ｇを測定
した。
した。
但し、゛遊離抗ＴＢＧ抗体としては、抗ヒトＴＢＧモノ
クローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は
、反応系で最終５０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＢ
Ｇを測定した。
クローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は
、反応系で最終５０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＢ
Ｇを測定した。
実施例７ 血中ＴＢＧの測定
■酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体の調装
精製抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体を用い、実施例１
の酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体調製法に準じて調製した。
の酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体調製法に準じて調製した。
■抗体結合スリガラ′スビーズの調裂法精製抗ヒトＴＢ
Ｇモノクローナル抗体を用い、実施例１の抗体結合ガラ
スピーズの調製法に準じて調製する。
Ｇモノクローナル抗体を用い、実施例１の抗体結合ガラ
スピーズの調製法に準じて調製する。
■血中ＴＢＧの測定
実施例１の血中ＴＢＧの測定法に準じてＴＢＧを測定し
た。
た。
但し、遊離抗ＴＢＧ抗体としては、抗ヒトＴＢＧモノク
ローナル抗体を用いた。 また、′ＪＩＬ雌抗ＴＢＧ抗
体は、反応系で最終６０ μｇ／ｒ＋ｔｌとなるように
添加しＴＢＧを測定した。
ローナル抗体を用いた。 また、′ＪＩＬ雌抗ＴＢＧ抗
体は、反応系で最終６０ μｇ／ｒ＋ｔｌとなるように
添加しＴＢＧを測定した。
実施例８ 血中ＴＢＧの測定。
■酵素標識抗ヒトＴＢＧ抗体の調製
精製抗ヒトＴＢＧポリクローナル抗体を用い、実施例１
の酵素標識抗ヒトＴＢＧ’抗体調製法に準じて：Ａ製し
た。
の酵素標識抗ヒトＴＢＧ’抗体調製法に準じて：Ａ製し
た。
■抗体結合スリガラスビーズのｕＭ”Ａ法精製抗ヒトＴ
ＢＧモノクローナル抗体を用い、実施例１の抗体結合ガ
ラスピーズの調製法に準じて調製した。
ＢＧモノクローナル抗体を用い、実施例１の抗体結合ガ
ラスピーズの調製法に準じて調製した。
■血中ＴＢＧの測定
実施例１の血中ＴＢＧの測定法に準じてＴＢＧを測定し
た。
た。
但し、遊離抗ＴＢＧ抗体としては、抗ヒトＴＢＧモノク
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最終５０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＢＧ
を測定した。
ローナル抗体を用いた。 また、遊離抗ＴＢＧ抗体は、
反応系で最終５０μｇ／ｍｌとなるように添加しＴＢＧ
を測定した。
実施例２〜８による検量線・血清相関は、実施例１とほ
ぼ同様な結果を示した。
ぼ同様な結果を示した。
［発明の効果］
本発明の定量法は、反応系に遊離の抗ヒトＴＢＧ抗体を
添加したことによって反応の特異性に影響を与えず、し
かも検体を希釈したことなしにＴＢＧを測定できる免疫
学的定量法である。すなわち検体希釈の不要な簡単でか
つ抗原過剰による誤った判定を防止することができる定
量法である。
添加したことによって反応の特異性に影響を与えず、し
かも検体を希釈したことなしにＴＢＧを測定できる免疫
学的定量法である。すなわち検体希釈の不要な簡単でか
つ抗原過剰による誤った判定を防止することができる定
量法である。
（Ｆｉｇ−１）
図面
実施例１の検量線
（Ｆｉｇ−２）血清測定値の相関
ＴＢＧ 濃度 （μｇ／ｍｌ）
Ｒ工Ａ
μｇ／ｍｌ
手
続
有ｔ１
正
書
手
続
ネ１１
正
書
（方戎）
■
事件の表示
１、事件の表示
昭和６３年特許願第２３４６２１号
昭和６３年特許願第２３４６２１、
発明の名称
２、発明の名称
サイロキシン結合グロブリンの
免疫学的定量法
サイロキシン結合グロブリンの免疫学的定量法補正をす
る者 補正をする者 事件との関係
る者 補正をする者 事件との関係
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、抗ヒトサイロキシン結合グロブリン抗体を使用する
血液中のサイロキシン結合グロブリンの測定系に、遊離
の抗ヒトサイロキシン結合グロブリン抗体を添加するこ
とを特徴とするサイロキシン結合グロブリンの免疫学的
定量法。 ２、反応系に添加する遊離の抗ヒトサイロキシン結合グ
ロブリン抗体が、抗ヒトサイロキシン結合グロブリンポ
リクローナルまたは、モノクローナル抗体である請求項
１記載の定量法。 ３、反応系に添加する遊離の抗ヒトサイロキシン結合グ
ロブリン抗体が（１）固相または標識抗体と異なったエ
ピトープか、または（２）抗体をペプシン消化して得ら
れるＦ（ａｂ′）＿２である請求項１または、２記載の
定量法。 ４、血液中のサイロキシン結合グロブリンの１〜５０μ
ｇ／ｍｌに対し、反応系中の遊離抗ヒトサイロキシン結
合グロブリン抗体の添加量が、２０〜７５μｇ／ｍｌで
ある請求項１〜３いずれか記載の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23462188A JPH0282161A (ja) | 1988-09-19 | 1988-09-19 | サイロキシン結合グロブリンの免疫学的定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23462188A JPH0282161A (ja) | 1988-09-19 | 1988-09-19 | サイロキシン結合グロブリンの免疫学的定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0282161A true JPH0282161A (ja) | 1990-03-22 |
Family
ID=16973912
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23462188A Pending JPH0282161A (ja) | 1988-09-19 | 1988-09-19 | サイロキシン結合グロブリンの免疫学的定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0282161A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5810349A (en) * | 1996-01-11 | 1998-09-22 | Eastman Kodak Company | Apparatus for stacking sheet products at an offset from one another |
-
1988
- 1988-09-19 JP JP23462188A patent/JPH0282161A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5810349A (en) * | 1996-01-11 | 1998-09-22 | Eastman Kodak Company | Apparatus for stacking sheet products at an offset from one another |
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