JPH03112424A - 苗条原基によるリンドウの増殖法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は苗条原基誘導法を利用したリンドウの増殖法に
関する。

［従来の技術］ 苗条原基誘導法とは一般に０．２〜０．５＋ａｍの茎頂
を切り出し、低〜中濃度のオーキシンとサイトカイニン
を加えた液体培地で垂直方向の回転培養（２「ｐ■）を
行ない、得られた多数の生長点原基を持った金平糖状の
組織塊（苗条原基）を誘導・増殖させた後苗条を生長さ
せる方法をいう。

この方法を用いて二倍体スイカ、雑種強勢トウモロコシ
およびイネ、雑種性アサガオなどの有用−学生植物を苗
条原基により多年生化し短時間に大量増殖させる方法が
知られている（特公昭５９−１３２８２３号公報）。

しかしながら、この方法を多年草であるリンドウに適用
した例は知られていない。

〔発明が解決しようとする課題］ リンドウは現在種子繁殖されているが、花色や開花期が
分離することから親と同じ形質を持った個体を維持する
ためには非常な労力を要し、組織培養による優良個体の
大量増殖が望まれている。

さらに茎頂培養による増殖法では増殖率の向上、培養過
程での花芽分化の抑制および順化中における冬至芽の発
生促進、そしてその後の土に定植した形態の維持などが
問題として残されている。

一方、カルス細胞の培養においては植物体の遺伝変異が
出やすく、シかもカルスの継代により再分化率が低下す
るなどの問題がある。

本発明の目的は上記欠点を克服し、リンドウの遺伝子型
および染色体型の多年にわたる維持がはかられると同時
に大量増殖の可能な方法を提供することである。

［課題を解決するための手段］ 上記目的を達成すべく鋭意研究した結果、苗条原基によ
る増殖法を用いた場合優れた増殖効果が得られることを
見い出し本発明を完成したのである。

本発明はリンドウの茎頂部を摘出し、これを植物生長ホ
ルモンを含ませた基本培地に移植し１５〜２５℃の温度
、２．０００〜１０．０００ルクスの照明度および０．
５〜１Ｏｒｐ■の回転数にて回転培養して苗条原基を形
成および増殖させ次いで得られた苗条原基を静置培養し
て苗化することからなるリンドウの大量増殖法を提供す
るものである。

また本発明は苗条原基によってリンドウ（ニジリンドウ
系、ササリンドウ系、オヤマリンドウ系あるいは、これ
らの交配系）の遺伝子型および染色体型を多年にわたっ
て維持し、大量に栄養体繁殖させる方法を提供するもの
である。

本発明の構成を次に詳しく説明する。

本発明の方法において、基本培地としては、従来のムラ
シゲ・スクーグ（以下ＭＳと称する）、ガンボーグの８
５　（以下Ｂ５と称する）などの培地をそのまま、また
はその組成を若干変えて用いることができる。植物生長
ホルモンとしてはナフタレン酢酸、カイネチン、ベンジ
ルアミノプリン、ゼアチンなどを場合によっては組み合
わせて用いる。培養温度は１５〜２５℃が適当であり、
好ましくは２０℃前後である。温度が低すぎると増殖の
進行が遅れ、また温度が高すぎると生長が悪く安定しな
くなる。苗条原基の培養には強い光が必要であり、２．
０００〜１０．０００ルクスの連続的な照明が適当であ
る。苗条原基を作出するためには培養は回転培養を行な
う必要があり、その回転数は０．５〜１０ｒｐＨｌ、好
ましくは２ｒｐｍ付近が適当である。

最後に、苗条原基の苗化は、増殖した苗条原基を適当な
大きさ、例えば３龍角に分割し、これを基本培地に植物
生長ホルモンを含ませた苗化用の培地に移植し、静置培
養することによって行なわれる。

植物生長ホルモンの濃度を変化させることによってニジ
リンドウ系のリンドウの苗条原基が形成される最適培地
の実施例を第１表に示した。

第 ニジリンドウ系のリンドウの 苗条原基が形成される最適培養基 基本培地ニ −ＭＳ培地 ＡＡ ＡＰ ：ナフタレン酢酸 ：ベンジルアミノプリン 表から見てわかるように苗条原基の増殖が最も速く、安
定しているのは、基本培地としてＭＳ培地を２倍に希釈
したものにナフタレン酢酸０〜０．０２ｍｇ／Ｎおよび
ベンジルアミノプリン０．２〜２ｍｇ／ｌを含ませた培
地のときである。

得られたニジリンドウ系のリンドウの苗条原基は緑色の
多角形の塊状体である。

次にこれらの苗条原基を、苗化用の固型培地に移植し、
１５〜２５℃、約２，０００〜３．０００ルクスで静置
培養すると、まず微小な茎葉体を多数生じ、この植物体
をさらに２力月程培養して植物体が得られる。これらの
ものは、遺伝子型、染色体型および表現型が親と同じ植
物体である。

［実　施　例コ 以下実施例により本発明の詳細な説明するがこれらに限
定されるものではない。

実施例　１ （増殖方法） ニジリンドウ系のリンドウ用の培地は基本培地としてＭ
Ｓ培地を２倍に希釈し植物生長ホルモンを含ませたもの
を用いた。組成を第２表に示す。

まず活発に成長しつつあるリンドウの茎葉を１５国程に
切りとり、大きな葉を除いた茎頂部約５ｃｍを水洗した
。これを次亜塩素酸ナトリウム（有効塩素０．５％）液
に１５分間浸漬して滅菌した後、滅菌水で洗浄した。こ
れを実体顕微鏡下でビンセットおよびメスを用いて外側
の葉を除き、２対程の葉原基を含む茎頂部（約０．５１
１ｍ）を摘出した。この茎頂部を前記の培地中で培養し
た。培養は、培地２５ｍ１を分注した３０關（φ）の試
験管内で行ない、これを１５〜２５℃、３．０００〜１
０．０００ルクス、２　ｒｐａで回転培養した。培養開
始後４力月後に緑色の苗条原基集塊が得られた。以後１
力月ごとにこの苗条原基を５〜１０關に分割して、前記
の新鮮な培地に植え継いで増殖をはかった。

第 表 ニコチン酸 ピリドキシン、ＨＣｌ チアミン、ＨＣＮ グリシン ナフタレン酢酸 ベンジルアミノプリン ０．５ ０．５ ０．１ ０〜０．０２ ０．２〜２ １）Ｈ５，５ （苗化方法） 次に、苗化用の培地として、前記培地のうち、ナフタレ
ン酢酸およびベンジルアミノプリン濃度を下げるかまた
は植物生長ホルモンフリーの培地に寒天８ｇ／Ｉを加え
てｐＨ５，５に調整した固型培地を用いた。この培地と
１００ｃｃのコニカルビーカーに４０ｍ１ずつ分注し、
この上に直径３〜５ｍｍの苗条原基を置床した。培養は
２０”Ｃ１３，０００〜４．０００ルクス（１６時間明
所）で行なった。この結果１〜２力月で濃緑色の植物体
が３〜５本得られた。

本方法によれば、リンドウを多年にわたって維持すると
共に、大量増殖がはかれる。ニジリンドウ系の場合、１
力月で約２倍に増殖するので、年２ 間２　−４Ｘ１０３で、１個体の苗条原基より年間約４
．０００本の幼苗が生産できる。

実施ｆｌｊ２ ササリンドウ系の培地として、ベンジルアミノプリン濃
度を１／　１０にする以外は実施例１と同様の培地を用
いた。実施例１と同様にして培養して、約２カ月後に苗
条原基集塊が得られた。以後実施例１と同様にして植え
継いだ。

苗化用の培地としてはホルモンフリーの実施例１と同様
の培地を用いた。

この方法により、増殖の速度は１力月で約３倍となり、
年間３　”Ｆ　Ｓ　Ｘ　１０５で１個体の苗条原基より
年間約５０万本の幼苗が生産できる。

［発明の効果］ 本発明によれば、従来組織培養による優良個体の増殖が
困難とされていたリンドウにおいてその遺伝子型および
染色体型の多年にわたる維持がはかられ、しかも大量増
殖の可能な方法が提供される。

本発明の方法は遺伝的に安定な苗条原基を利用するもの
であるため、従来のように株で保存する必要はなく試験
管内での保存が可能となる。その上苗条原基を苗化する
ことによりいつでも欲しい時に植物体を得ることができ
る。従って従来の技術と比べて省スペースおよび省力化
を図ることができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）リンドウの茎頂部を摘出し、これを植物生長ホルモ
   ンを含ませた基本培地に移植し１５〜２５℃の温度、２
   ，０００〜１０，０００ルクスの照明度および０．５〜
   １０ｒｐｍの回転数にて回転培養して苗条原基を形成お
   よび増殖させ次いで得られた苗条原基を静置培養して苗
   化することからなるリンドウの大量増殖法。 ２）培地がＭＳ基本培地に植物生長ホルモンとしてナフ
   タレン酢酸、２，４−ジクロルフェノキシ酢酸カイネチ
   ンおよびベンジルアミノプリンからなる群より選択され
   る化合物を含ませたものである請求項１記載の方法。