JPH03118471A - インスリン定量方法及び定量試薬 - Google Patents
インスリン定量方法及び定量試薬Info
- Publication number
- JPH03118471A JPH03118471A JP25675789A JP25675789A JPH03118471A JP H03118471 A JPH03118471 A JP H03118471A JP 25675789 A JP25675789 A JP 25675789A JP 25675789 A JP25675789 A JP 25675789A JP H03118471 A JPH03118471 A JP H03118471A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- insulin
- reagent
- antibody
- insoluble carrier
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、免疫反応を利用したインスリンの定量方法及
び定量試薬に関し、より特定的には、不溶性担体を用い
、免疫反応に基づく凝集の程度を検出する形式のインス
リン定量方法及びそれに用いる試薬に関する。
び定量試薬に関し、より特定的には、不溶性担体を用い
、免疫反応に基づく凝集の程度を検出する形式のインス
リン定量方法及びそれに用いる試薬に関する。
インスリンは、ヒト血中にはごく微量しか存在しないた
め、その正確な測定は非常に困難である。
め、その正確な測定は非常に困難である。
従来より、微量のインスリンを測定する方法として、ラ
ジオイムノアッセイ法（以下、ＲＩＡ法）及び酵素免疫
測定法（以下、ＥＩＡ法）が公知である（例えば、石川
栄治、河井忠、宮井潔：酵素免疫測定法 第２版：医学
書院、第２１１頁〜第２２６頁（１９Ｂ２））。
ジオイムノアッセイ法（以下、ＲＩＡ法）及び酵素免疫
測定法（以下、ＥＩＡ法）が公知である（例えば、石川
栄治、河井忠、宮井潔：酵素免疫測定法 第２版：医学
書院、第２１１頁〜第２２６頁（１９Ｂ２））。
ＲＩＡ法では、放射性同位元素でラベリングされたＩｇ
’Ｇを試料中のインスリンと反応させて、インスリン濃
度を測定するものであり、感度が優れているため、微量
のインスリンを検出することができ、血中インスリンの
測定に広く用いられている。
’Ｇを試料中のインスリンと反応させて、インスリン濃
度を測定するものであり、感度が優れているため、微量
のインスリンを検出することができ、血中インスリンの
測定に広く用いられている。
他方、ＥＩＡ法は、検出感度に優れた酵素が結合された
ＩｇＧを、試料中のインスリンと反応させ、反応したＩ
ｇＧに結合された酵素の活性を測定することにより、イ
ンスリン濃度を測定するものである。
ＩｇＧを、試料中のインスリンと反応させ、反応したＩ
ｇＧに結合された酵素の活性を測定することにより、イ
ンスリン濃度を測定するものである。
ＲＩＡ法は、感度こそ優れているものの、安全を期する
ために特殊な器具・装置を必要とし、さらにアイソトー
プを含む廃物処理や汚染に注意を払わなければならない
等、取扱上の制約が多い。
ために特殊な器具・装置を必要とし、さらにアイソトー
プを含む廃物処理や汚染に注意を払わなければならない
等、取扱上の制約が多い。
他方、ＥＩＡ法による測定では、酵素が結合されたｒｇ
Ｇと試料中のインスリンとの免疫反応だけでなく、酵素
活性を測定するために酵素と基質を反応させる必要があ
る。従って、測定に長時間（少なくとも３時間）要し、
その上、手技も煩雑であった。
Ｇと試料中のインスリンとの免疫反応だけでなく、酵素
活性を測定するために酵素と基質を反応させる必要があ
る。従って、測定に長時間（少なくとも３時間）要し、
その上、手技も煩雑であった。
よって、本発明の目的は、試料中のインスリンを迅速に
かつ簡便に測定することを可能とする新規なインスリン
定量方法及び定量試薬を提供することにある。
かつ簡便に測定することを可能とする新規なインスリン
定量方法及び定量試薬を提供することにある。
〔課題を解決するための手段及び作用〕本発明のインス
リン定量方法は、不溶性担体に担持されたインスリン及
び試料中のインスリンを、抗インスリン抗体と液体媒体
中で反応させ、不溶性担体に担持されたインスリンと抗
インスリン抗体との抗原抗体反応に基づく凝集が、試料
中のインスリンと抗インスリン抗体との抗原抗体反応に
より阻止される程度を検出することにより、試料中のイ
ンスリン濃度を定量することを特徴とするものである。
リン定量方法は、不溶性担体に担持されたインスリン及
び試料中のインスリンを、抗インスリン抗体と液体媒体
中で反応させ、不溶性担体に担持されたインスリンと抗
インスリン抗体との抗原抗体反応に基づく凝集が、試料
中のインスリンと抗インスリン抗体との抗原抗体反応に
より阻止される程度を検出することにより、試料中のイ
ンスリン濃度を定量することを特徴とするものである。
すなわち、本発明は、不溶性担体に担持されたインスリ
ンと抗インスリン抗体との反応によって凝集が生じる際
に、不溶性担体に担持されたインスリンと競合して、試
料中のインスリンも抗インスリン抗体と免疫反応を生じ
るために、試料中のインスリン濃度により上記凝集が阻
害されることに着目し、この凝集阻止の程度を検出する
ことにより、試料中のインスリン濃度を定量するもので
ある。
ンと抗インスリン抗体との反応によって凝集が生じる際
に、不溶性担体に担持されたインスリンと競合して、試
料中のインスリンも抗インスリン抗体と免疫反応を生じ
るために、試料中のインスリン濃度により上記凝集が阻
害されることに着目し、この凝集阻止の程度を検出する
ことにより、試料中のインスリン濃度を定量するもので
ある。
本発明のインスリン定量試薬は、インスリンが担持され
た不溶性担体を含むインスリン感作不溶性担体試薬と、
抗インスリン抗体を含む抗インスリン抗体試薬とを備え
る。使用に際しては、インスリン感作不溶性担体試薬及
びインスリンを含む試料を、抗インスリン抗体試薬と液
体媒体中で反応させ、上記凝集阻止の程度を検出するこ
とにより、試料中のインスリン濃度が測定される。
た不溶性担体を含むインスリン感作不溶性担体試薬と、
抗インスリン抗体を含む抗インスリン抗体試薬とを備え
る。使用に際しては、インスリン感作不溶性担体試薬及
びインスリンを含む試料を、抗インスリン抗体試薬と液
体媒体中で反応させ、上記凝集阻止の程度を検出するこ
とにより、試料中のインスリン濃度が測定される。
本発明において用いられる不溶性担体としては、本発明
の測定時に用いられる液体媒体に実質的に不溶であり、
かつ粒径が０．０５μｍｘ１．Ｏμｍ程度の種々の有機
物質及び無機物質を用いることができる。
の測定時に用いられる液体媒体に実質的に不溶であり、
かつ粒径が０．０５μｍｘ１．Ｏμｍ程度の種々の有機
物質及び無機物質を用いることができる。
不溶性担体として用いる有機物質の例としては、ポリス
チレンもしくはスチレンブタジェン共重合体のような重
合により得られる有機高分子ラテックス、個々に分散さ
れたブドウ球菌もしくは連鎖球菌のような球菌型の細口
または細胞膜片等が挙げられる。また、無機物質の例と
しては、シリカ、シリカアルミナもしくはアルミナのよ
うな無機酸化物、その他の鉱物粉末または金属等が挙げ
られる。
チレンもしくはスチレンブタジェン共重合体のような重
合により得られる有機高分子ラテックス、個々に分散さ
れたブドウ球菌もしくは連鎖球菌のような球菌型の細口
または細胞膜片等が挙げられる。また、無機物質の例と
しては、シリカ、シリカアルミナもしくはアルミナのよ
うな無機酸化物、その他の鉱物粉末または金属等が挙げ
られる。
本発明では、上記のような不溶性担体にインスリンが担
持（感作）されている、この担持方法については、不溶
性担体に対してインスリンを物理的に吸着させて行って
もよく、また化学的に吸着させて行ってもよい。
持（感作）されている、この担持方法については、不溶
性担体に対してインスリンを物理的に吸着させて行って
もよく、また化学的に吸着させて行ってもよい。
本発明において用いる抗インスリン抗体としては、例え
ば免疫グロブリンを用いることができ、免疫グロブリン
全体が使用できるだけでなく、「改定新版免疫化学」山
村雄−他３名編集：第４５７〜５４４頁（昭和４８年）
に記載されているように、免疫グロブリンから誘導され
るＦａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）、等も用い得る。
ば免疫グロブリンを用いることができ、免疫グロブリン
全体が使用できるだけでなく、「改定新版免疫化学」山
村雄−他３名編集：第４５７〜５４４頁（昭和４８年）
に記載されているように、免疫グロブリンから誘導され
るＦａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）、等も用い得る。
本発明において、上記の不溶性担体に担持されたインス
リン及び試料中のインスリンと、上記抗インスリン抗体
とを反応させるために用いる液体媒体としては、リン酸
緩衝液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液またはアンモニ
ア緩衝液等の種々の緩衝液を用い得る。凝集反応に際し
てのｐＨは通常５〜１０の範囲に保たれ、特にｐＨ６〜
８とすることが好ましい。また、反応温度は０〜５０°
Ｃ１好ましくは２０〜４０°Ｃとすることが好ましい。
リン及び試料中のインスリンと、上記抗インスリン抗体
とを反応させるために用いる液体媒体としては、リン酸
緩衝液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液またはアンモニ
ア緩衝液等の種々の緩衝液を用い得る。凝集反応に際し
てのｐＨは通常５〜１０の範囲に保たれ、特にｐＨ６〜
８とすることが好ましい。また、反応温度は０〜５０°
Ｃ１好ましくは２０〜４０°Ｃとすることが好ましい。
さらに、液体媒体中に増悪剤を加えてもよい。
増感剤としては、例えば分子量３万以上のポリエチレン
グリコールを挙げることができる。
グリコールを挙げることができる。
また、本発明の定量試薬では、インスリン感作不溶性担
体試薬としては、インスリンが担持された不溶性担体の
濃度が０．０１重量％以上の懸濁液が用いられ、好まし
くは、０．０５〜１重量％の濃度の懸濁液が用いられる
。他方、抗インスリン抗体は前述のような液体媒体に含
有された抗インスリン抗体試薬として用意される。
体試薬としては、インスリンが担持された不溶性担体の
濃度が０．０１重量％以上の懸濁液が用いられ、好まし
くは、０．０５〜１重量％の濃度の懸濁液が用いられる
。他方、抗インスリン抗体は前述のような液体媒体に含
有された抗インスリン抗体試薬として用意される。
本発明を、より具体的に説明すると、例えばポリスチレ
ンラテックスを不溶性担体として用い、インスリンを該
ポリスチレンラテックスに物理吸着させる場合、ｐＨ５
，０〜１０．０の緩衝液中に、好適にはｐＨ６，０〜９
．０の緩衝液中に、濃度０，０５重量％〜２，０重景％
、より好適には濃度０．１〜１．０重量％となるように
、ポリスチレンラテックスを力■える。
ンラテックスを不溶性担体として用い、インスリンを該
ポリスチレンラテックスに物理吸着させる場合、ｐＨ５
，０〜１０．０の緩衝液中に、好適にはｐＨ６，０〜９
．０の緩衝液中に、濃度０，０５重量％〜２，０重景％
、より好適には濃度０．１〜１．０重量％となるように
、ポリスチレンラテックスを力■える。
さらに、１〜５０°Ｃの温度において、好適には、２０
〜３５°Ｃの温度で撹拌しつつ、インスリンを０．００
１重景重景１．０重景％、好ましくは０゜０１〜０．５
重量％となるように添加する。しかる後、ＩＯ分〜４８
時間、好ましくは３０分〜２時間の間、撹拌し続け、イ
ンスリンをポリスチレンラテックスに感作する。
〜３５°Ｃの温度で撹拌しつつ、インスリンを０．００
１重景重景１．０重景％、好ましくは０゜０１〜０．５
重量％となるように添加する。しかる後、ＩＯ分〜４８
時間、好ましくは３０分〜２時間の間、撹拌し続け、イ
ンスリンをポリスチレンラテックスに感作する。
次に、冷却下で遠心分離を行い、沈澱を傾潟し、分離し
たインスリン感作ポリスチレンラテックス粒子を牛血清
アルブミン溶液に懸濁させ、該感作ラテックス粒子が１
重量％のインスリン感作ラテツクス試薬を調製する。
たインスリン感作ポリスチレンラテックス粒子を牛血清
アルブミン溶液に懸濁させ、該感作ラテックス粒子が１
重量％のインスリン感作ラテツクス試薬を調製する。
以上のようにして調製されたインスリン感作ラテツクス
試薬に、抗インスリン抗体試薬（後述）及びインスリン
含有試料を加える。
試薬に、抗インスリン抗体試薬（後述）及びインスリン
含有試料を加える。
不溶性担体の凝集の程度を検出する方法としては、通常
、光学的検出方法が用いられる。光学的検出方法を用い
る場合には、通常、ｐＨ５，０〜１０．０の適当な緩衝
液を含む溶液に前述した抗インスリン抗体を０．１μｇ
／ｍｊ！〜５０ｍｇ／ｍＩ！を含む抗インスリン抗体試
薬を用意する。なお、抗インスリン抗体試薬は反応用希
釈液としても機能するため、以下においては抗インスリ
ン抗体含有反応用希釈液あるいは単に反応用希釈液と表
現する。すなわち、試料を、反応用希釈液で希釈した後
、前述したインスリン感作ラテツクス試薬を混合する。
、光学的検出方法が用いられる。光学的検出方法を用い
る場合には、通常、ｐＨ５，０〜１０．０の適当な緩衝
液を含む溶液に前述した抗インスリン抗体を０．１μｇ
／ｍｊ！〜５０ｍｇ／ｍＩ！を含む抗インスリン抗体試
薬を用意する。なお、抗インスリン抗体試薬は反応用希
釈液としても機能するため、以下においては抗インスリ
ン抗体含有反応用希釈液あるいは単に反応用希釈液と表
現する。すなわち、試料を、反応用希釈液で希釈した後
、前述したインスリン感作ラテツクス試薬を混合する。
凝集阻止の程度の検出は、通常、光学的検出方法により
行う、光学的検出方法としては、散乱光強度または吸光
度を測定する方法を用いる。測定波長としては、３００
〜２４００ｎｍを使用することができる。
行う、光学的検出方法としては、散乱光強度または吸光
度を測定する方法を用いる。測定波長としては、３００
〜２４００ｎｍを使用することができる。
測光方法については、公知の方法に従って、用いる不溶
性担体粒子の大きさもしくは濃度または反応時間の選択
により、散乱光強度または吸光度の減少を測定する。ま
た、公知の方法により、吸光度の増加または増加速度を
測定することによって定量することも可能である。さら
に、光音響法を利用して凝集程度を検出してもよい。な
お、上記の検出に際し、本発明の定量方法では、反応時
間を適宜選択することができる。
性担体粒子の大きさもしくは濃度または反応時間の選択
により、散乱光強度または吸光度の減少を測定する。ま
た、公知の方法により、吸光度の増加または増加速度を
測定することによって定量することも可能である。さら
に、光音響法を利用して凝集程度を検出してもよい。な
お、上記の検出に際し、本発明の定量方法では、反応時
間を適宜選択することができる。
以下、実施例を示すことにより、本発明をより具体的に
説明する。
説明する。
〔実施例１〕
インスリン ラテックス の
直径０．３μｍのポリスチレンラテックス（積水化学株
式会社製）を用意し、５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ＝
９．０）により、その濃度が１重量％となるように希釈
する。希釈液を１ｍ２とり、３０″Ｃの温度で撹拌する
。撹拌溶液中に、ヒトインスリン１００μｇを添加し、
しかる後３０°Ｃの温度で２時間撹拌して、ポリスチレ
ンラテックスにインスリンを感作する。
式会社製）を用意し、５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ＝
９．０）により、その濃度が１重量％となるように希釈
する。希釈液を１ｍ２とり、３０″Ｃの温度で撹拌する
。撹拌溶液中に、ヒトインスリン１００μｇを添加し、
しかる後３０°Ｃの温度で２時間撹拌して、ポリスチレ
ンラテックスにインスリンを感作する。
感作後、４°Ｃで１８．００Ｏｒｐｍ、１時間の条件で
遠心分離し、沈澱物を集める。他方、５０ｍＭグリシン
緩衝液（ｐＨ＝９．０）に、牛血清アルブミン（以下、
ＢＳＡ）を加え、１重量％ＢＳＡ溶液としたものを用意
し、上記沈澱物に１ｍ！加え、さらに３０°Ｃの温度で
１時間撹拌する。
遠心分離し、沈澱物を集める。他方、５０ｍＭグリシン
緩衝液（ｐＨ＝９．０）に、牛血清アルブミン（以下、
ＢＳＡ）を加え、１重量％ＢＳＡ溶液としたものを用意
し、上記沈澱物に１ｍ！加え、さらに３０°Ｃの温度で
１時間撹拌する。
１時間後、上記と同様の条件で遠心分離し、沈澱を集め
た後、該沈澱を５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝８
．０）２ｍｊ！で懸濁し、インスリン感作ラテツクス試
薬を調製する。
た後、該沈澱を５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝８
．０）２ｍｊ！で懸濁し、インスリン感作ラテツクス試
薬を調製する。
ゞ の量 １
モルモット産生抗ブタインスリン抗血清５ｍｌを撹拌し
つつ、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝７゜４）を飽和硫
安としたものを、３０％飽和となるまでゆっ（り滴下す
る。室温で３時間放置した後、４℃で１８．００Ｏｒｐ
ｍ、１時間の条件で遠心分離し、上澄みを取り除き沈澱
物を集める。
つつ、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝７゜４）を飽和硫
安としたものを、３０％飽和となるまでゆっ（り滴下す
る。室温で３時間放置した後、４℃で１８．００Ｏｒｐ
ｍ、１時間の条件で遠心分離し、上澄みを取り除き沈澱
物を集める。
得られた沈澱物を５ｍｌのＯ，１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
＝７．４）に熔解する０次に、再度、上記の硫安塩析を
行って、上記と同様の条件で遠心分離した後の沈澱物に
１ｍｆの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｌ（＝７．４）を加
える。得られた溶液を、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．１）で透析して、脱塩する。
＝７．４）に熔解する０次に、再度、上記の硫安塩析を
行って、上記と同様の条件で遠心分離した後の沈澱物に
１ｍｆの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｌ（＝７．４）を加
える。得られた溶液を、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．１）で透析して、脱塩する。
以上のようにして精製した抗インスリン抗体を０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）で、濃度２ ｍ ｇ ／
ｍ ｊ２となるように濃度調整する。
リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）で、濃度２ ｍ ｇ ／
ｍ ｊ２となるように濃度調整する。
上記抗インスリン抗体溶液を、５０ｍＭグリシン緩衝液
（ｐＨ＝９．０）１００ｍｊ！に対し、１ｍｌとなるよ
うに溶解して、反応用希釈液とする。
（ｐＨ＝９．０）１００ｍｊ！に対し、１ｍｌとなるよ
うに溶解して、反応用希釈液とする。
皿定
５重量％ＢＳＡ含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ−７，
０）を用いて、標準ヒトインスリンを希釈し、濃度０．
１０．２０．４０．８０．１６０、及び３２０μＵ ／
ｍ ｌの各検体を作製する。
０）を用いて、標準ヒトインスリンを希釈し、濃度０．
１０．２０．４０．８０．１６０、及び３２０μＵ ／
ｍ ｌの各検体を作製する。
上記検体２０μ！、前述したインスリン感作ラテツクス
５０μ！及び反応用希釈液３５０μｌをセルに計り込み
、波長５５０ ｎ’ｍにおける吸光度により、１０分間
の反応性を測定した。結果を、下記の第１表及び第１図
に示す、なお、この結果では、吸光度の値を１０４倍し
たものを反応性として表しである。
５０μ！及び反応用希釈液３５０μｌをセルに計り込み
、波長５５０ ｎ’ｍにおける吸光度により、１０分間
の反応性を測定した。結果を、下記の第１表及び第１図
に示す、なお、この結果では、吸光度の値を１０４倍し
たものを反応性として表しである。
（以下、余白）
第
表
〔実施例２〕
インスリン −テックス の
直径０．３μｍのポリスチレンラテックス（積水化学株
式会社製）を用意し、その濃度が１重量％となるように
、５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ＝９．０）で希釈する
。
式会社製）を用意し、その濃度が１重量％となるように
、５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ＝９．０）で希釈する
。
希釈液１ｍｌをとり、３０°Ｃの温度で撹拌し、撹拌溶
液中にヒトインスリン１００μｇを添加し、しかる後３
０°Ｃの温度で２時間撹拌して感作する。
液中にヒトインスリン１００μｇを添加し、しかる後３
０°Ｃの温度で２時間撹拌して感作する。
感作後、４°Ｃで１８．ＯＯＯｒｐｍ、１時間の条件で
遠心分離し、沈澱物を集める。５０ｍＭグリシン緩衝液
（ｐＨ＝９．０）にＢＳＡを加えて１重量％ＢＳＡ溶液
としたものを用意し、その１ｍ２を上記沈澱物に加えて
、さらに３０℃の温度で１時間撹拌する。撹拌後、上記
と同じ条件で遠心分離により沈澱物を集め、５０ｍＭの
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２ｍｆで懸濁させ
、インスリン感作ラテツクス試薬とする。
遠心分離し、沈澱物を集める。５０ｍＭグリシン緩衝液
（ｐＨ＝９．０）にＢＳＡを加えて１重量％ＢＳＡ溶液
としたものを用意し、その１ｍ２を上記沈澱物に加えて
、さらに３０℃の温度で１時間撹拌する。撹拌後、上記
と同じ条件で遠心分離により沈澱物を集め、５０ｍＭの
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）２ｍｆで懸濁させ
、インスリン感作ラテツクス試薬とする。
反応用希 液の調１
実施例１と同様にして抗インスリン抗体溶液を調製し、
５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ＝９゜０）中に分子量５
０万のポリエチレングリコールを０．１重量％の濃度と
なるように溶解させた溶液１００ｍ１に対し、実施例１
で得た抗インスリン抗体溶液１ｍｌを溶解し、反応用希
釈液とする。
５０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ＝９゜０）中に分子量５
０万のポリエチレングリコールを０．１重量％の濃度と
なるように溶解させた溶液１００ｍ１に対し、実施例１
で得た抗インスリン抗体溶液１ｍｌを溶解し、反応用希
釈液とする。
皿定
実施例１と同様にして、濃度０１１０．２０．４０．８
０．１６０及び３２０ ｔｔ Ｕ ／ ｍ １の検体を
作製する。
０．１６０及び３２０ ｔｔ Ｕ ／ ｍ １の検体を
作製する。
これらの検体２０μ２、インスリン感作ラテツクス試薬
５０μ！及び反応用希釈液３５０μｌをセルに計り込み
、５５０ｎｍの吸光度により、１０分間の反応性を測定
した。結果を、下記の第２表及び第２図に示す。
５０μ！及び反応用希釈液３５０μｌをセルに計り込み
、５５０ｎｍの吸光度により、１０分間の反応性を測定
した。結果を、下記の第２表及び第２図に示す。
なお、これらの結果では、吸光度の値を１０’倍したも
ので反応性が表されている。
ので反応性が表されている。
第２表
〔発明の効果〕
以上のように、本発明のインスリン定量方法では、不溶
性担体に担持されたインスリン及び試料中のインスリン
を、抗インスリン担体と液体媒体中で反応させ、不溶性
担体に担持されたインスリンと抗インスリン抗体との反
応に基づく凝集を試料中のインスリンが阻害する程度を
検出することにより、試料中のインスリンが定量される
ため、極めて簡単にかつ短時間に試料中のインスリンを
定量することができる。すなわち、ＲＩＡ法の場合のよ
うな特殊な器具・装置を必要とせず、またＲＩＡ法やＥ
ＩＡ法のように測定に長時間かかることもない。
性担体に担持されたインスリン及び試料中のインスリン
を、抗インスリン担体と液体媒体中で反応させ、不溶性
担体に担持されたインスリンと抗インスリン抗体との反
応に基づく凝集を試料中のインスリンが阻害する程度を
検出することにより、試料中のインスリンが定量される
ため、極めて簡単にかつ短時間に試料中のインスリンを
定量することができる。すなわち、ＲＩＡ法の場合のよ
うな特殊な器具・装置を必要とせず、またＲＩＡ法やＥ
ＩＡ法のように測定に長時間かかることもない。
また、本発明のインスリン定量試薬は、インスリン感作
不溶性担体試薬と抗インスリン抗体試薬とのみからなり
、ＥＩＡ法による試薬の場合のような基質液や反応停止
液を必要としないため、上記のように極めて簡単に試料
中のインスリン濃度を測定することができ、また手技も
極めて簡便である。
不溶性担体試薬と抗インスリン抗体試薬とのみからなり
、ＥＩＡ法による試薬の場合のような基質液や反応停止
液を必要としないため、上記のように極めて簡単に試料
中のインスリン濃度を測定することができ、また手技も
極めて簡便である。
第１図は実施例１の結果を示し、試料中のインスリン濃
度と吸光度（ＸＩＯ’）の関係を示す図、第２図は実施
例２の結果を示し、試料中のインスリン濃度と吸光度（
ＸＩＯ’）の関係を示す図である。 第１図 イ〉スリン＄ｉｌ （ｐＵ／ｍ１） 第Ｚ図
度と吸光度（ＸＩＯ’）の関係を示す図、第２図は実施
例２の結果を示し、試料中のインスリン濃度と吸光度（
ＸＩＯ’）の関係を示す図である。 第１図 イ〉スリン＄ｉｌ （ｐＵ／ｍ１） 第Ｚ図
Claims (3)
- （１）不溶性担体に担持されたインスリン及び試料中の
インスリンを、抗インスリン抗体と液体媒体中で反応さ
せ、前記不溶性担体に担持されたインスリンと前記抗イ
ンスリン抗体との抗原抗体反応に基づく凝集が、前記試
料中のインスリンと抗インスリン抗体との抗原抗体反応
により阻害される程度を検出することにより、試料中の
インスリンを定量することを特徴とする、インスリン定
量方法。 - （２）増感剤として、分子量３万以上のポリエチレング
リコールを使用する請求項１に記載のインスリン定量方
法。 - （３）インスリンが担持された不溶性担体を含むインス
リン感作不溶性担体試薬と、抗インスリン抗体を含む抗
インスリン抗体試薬とを備えることを特徴とするインス
リン定量試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25675789A JPH03118471A (ja) | 1989-09-29 | 1989-09-29 | インスリン定量方法及び定量試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25675789A JPH03118471A (ja) | 1989-09-29 | 1989-09-29 | インスリン定量方法及び定量試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03118471A true JPH03118471A (ja) | 1991-05-21 |
Family
ID=17297024
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25675789A Pending JPH03118471A (ja) | 1989-09-29 | 1989-09-29 | インスリン定量方法及び定量試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03118471A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106483302A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-03-08 | 浙江达美生物技术有限公司 | 一种胰岛素的测定试剂及其制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5960260A (ja) * | 1982-09-29 | 1984-04-06 | Toyobo Co Ltd | 酵素免疫測定法 |
| JPS59173760A (ja) * | 1983-03-24 | 1984-10-01 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | 免疫化学的測定方法及びその試薬 |
| JPH01104198A (ja) * | 1987-10-16 | 1989-04-21 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 分析の精度を向上させる方法 |
| JPH01148962A (ja) * | 1987-12-07 | 1989-06-12 | Tosoh Corp | インスリン免疫測定法 |
-
1989
- 1989-09-29 JP JP25675789A patent/JPH03118471A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5960260A (ja) * | 1982-09-29 | 1984-04-06 | Toyobo Co Ltd | 酵素免疫測定法 |
| JPS59173760A (ja) * | 1983-03-24 | 1984-10-01 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | 免疫化学的測定方法及びその試薬 |
| JPH01104198A (ja) * | 1987-10-16 | 1989-04-21 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 分析の精度を向上させる方法 |
| JPH01148962A (ja) * | 1987-12-07 | 1989-06-12 | Tosoh Corp | インスリン免疫測定法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106483302A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-03-08 | 浙江达美生物技术有限公司 | 一种胰岛素的测定试剂及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4080264A (en) | Immunoassay by light scattering spectroscopy | |
| US4680274A (en) | Particles for inhibiting non-specific immunoreaction | |
| CA1179940A (en) | Solid phase system for ligand assay | |
| US4469787A (en) | Immunoassay involving soluble complex of second antibody and labeled binding protein | |
| US4332788A (en) | Method of determining an antigen, antibody for antigen-antibody complex including fixing the aggregates thereof | |
| US4427781A (en) | Particle agglutination immunoassay with agglutinator for determining haptens; PACIA | |
| WO2002039114A2 (en) | Improved assay and reagents or immunological determination of analyte concentration | |
| US20130302907A1 (en) | Method of assaying antigen and reagent therefor | |
| JP4033853B2 (ja) | リガンドの検出のための固相アッセイ | |
| JP2006038823A (ja) | 非特異的反応抑制剤、非特異的反応の抑制方法、免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬 | |
| JPS6217188B2 (ja) | ||
| JP3220546B2 (ja) | 免疫複合体存在下の抗原または抗体の測定方法 | |
| JPH0712818A (ja) | 免疫学的検出方法 | |
| JP4657328B2 (ja) | 免疫反応干渉物質の除去方法 | |
| JPH03118472A (ja) | インスリン定量方法及び定量試薬 | |
| JP4278123B2 (ja) | 免疫学的測定方法、免疫反応干渉物質の除去方法および測定試薬 | |
| JP4556605B2 (ja) | 標的物質の測定方法および測定試薬 | |
| JP2745705B2 (ja) | 抗原・抗体の測定法 | |
| Fortunato | Principles of Immunochemistry | |
| JPH01158354A (ja) | 免疫学的多成分測定用試薬と測定方法 | |
| US4631254A (en) | Carcinoembryonic antigen determination | |
| JP3041382B2 (ja) | 免疫学的測定法 | |
| JP3246978B2 (ja) | 抗原または抗体測定用試薬の製造方法 | |
| JPH01148962A (ja) | インスリン免疫測定法 | |
| Evans et al. | Radial partition immunoassay |