JPH03139293A - ヒトインタ―ロイキン―６レセプターに対する抗体 - Google Patents
ヒトインタ―ロイキン―６レセプターに対する抗体Info
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- JPH03139293A JPH03139293A JP2189420A JP18942090A JPH03139293A JP H03139293 A JPH03139293 A JP H03139293A JP 2189420 A JP2189420 A JP 2189420A JP 18942090 A JP18942090 A JP 18942090A JP H03139293 A JPH03139293 A JP H03139293A
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- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
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- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はヒ）ＩＬ−６レセプターと特異的に結合する抗
体、及びその製造方法に関するものである。
体、及びその製造方法に関するものである。
インターロイキン−６（以下ＩＬ−６と略す）は、種々
の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖分化に関与し
ているタンパク質である。さらにＩ Ｌ−６の異常産生
が種々の自己免疫疾患の宿因因子である可能性が報告さ
れている（洋本、平野、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｔｍｍｕｎｏ
ｌ、＋ ６＋ ｐ４８５．１９８８年参照）。
の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖分化に関与し
ているタンパク質である。さらにＩ Ｌ−６の異常産生
が種々の自己免疫疾患の宿因因子である可能性が報告さ
れている（洋本、平野、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｔｍｍｕｎｏ
ｌ、＋ ６＋ ｐ４８５．１９８８年参照）。
ＩＬ−６と特異的に結合する細胞膜上のＩＬ−６レセプ
ターは、円買らにより解析され、各細胞上の数、Ｉ Ｌ
−６との結合定数が報告されている（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅ
ｄ、、 １９６． ｐ９６７＋ １９８７年参照）。さ
らにヒトＩ Ｌ−６レセプターのｃＤＮＡが山崎らによ
り単離され、１次構造が報告されている（Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ、 ２４Ｌｐ８２５．１９８８年参照）。これらの成
果をもとに遺伝子工学的に作製された、細胞表層より離
脱したＩ Ｌ−６レセプターは、各種免疫疾患の治療薬
、診断薬として期待されている。
ターは、円買らにより解析され、各細胞上の数、Ｉ Ｌ
−６との結合定数が報告されている（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅ
ｄ、、 １９６． ｐ９６７＋ １９８７年参照）。さ
らにヒトＩ Ｌ−６レセプターのｃＤＮＡが山崎らによ
り単離され、１次構造が報告されている（Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ、 ２４Ｌｐ８２５．１９８８年参照）。これらの成
果をもとに遺伝子工学的に作製された、細胞表層より離
脱したＩ Ｌ−６レセプターは、各種免疫疾患の治療薬
、診断薬として期待されている。
この様なＩＬ−６レセプターを大量に生産し、均一に精
製するためには、ＩＬ−６レセプターを迅速に同定する
手段として、あるいは精製する手段として、ＩＬ−６レ
セプターの抗体の開発が望まれる。
製するためには、ＩＬ−６レセプターを迅速に同定する
手段として、あるいは精製する手段として、ＩＬ−６レ
セプターの抗体の開発が望まれる。
しかしながら、これまでにＩＬ−６レセプターをＵ！、
識するモノクローナル抗体は公に知られていない。
識するモノクローナル抗体は公に知られていない。
従って、本発明はＩＬ−６レセプターに対する種々のタ
イプの抗体を提供しようとするものである。
イプの抗体を提供しようとするものである。
上記の目的を達成するため、本発明は、ヒトインターロ
イキン−６レセプターと特異的に結合し得る抗ヒトイン
ターロイキン−６レセプター抗体；前記の性質を有する
モノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマ；ヒトイ
ンターロイキン−６レセプター抗原により哺乳類を感作
し、該哺乳類から免疫細胞を採取し、該免疫細胞をミエ
ローマ細胞株と融合せしめ、そして該融合株からヒトイ
ンターロイキン−６レセプターをｉＷ２する株をクロー
ニングすることを特徴とするハイブリドーマの製造方法
；前記のパイブリドーマを培養し、該培養物からヒトイ
ンターロイキン−６レセプターを認識するモノクローナ
ル抗体を採取することを特徴とする抗−ヒトインターロ
イキン−６レセプター抗体の製造方法；並びにヒトイン
ターロイキン−６レセプター抗原により哺乳類動物を免
疫感作し、該動物からヒトインターロイキン−６レセプ
ターを認識するポリクローナル抗体を採取することを特
徴とする抗−ヒトインターロイキン−６レセプターボリ
クローナル抗体の製造方法を提供する。
イキン−６レセプターと特異的に結合し得る抗ヒトイン
ターロイキン−６レセプター抗体；前記の性質を有する
モノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマ；ヒトイ
ンターロイキン−６レセプター抗原により哺乳類を感作
し、該哺乳類から免疫細胞を採取し、該免疫細胞をミエ
ローマ細胞株と融合せしめ、そして該融合株からヒトイ
ンターロイキン−６レセプターをｉＷ２する株をクロー
ニングすることを特徴とするハイブリドーマの製造方法
；前記のパイブリドーマを培養し、該培養物からヒトイ
ンターロイキン−６レセプターを認識するモノクローナ
ル抗体を採取することを特徴とする抗−ヒトインターロ
イキン−６レセプター抗体の製造方法；並びにヒトイン
ターロイキン−６レセプター抗原により哺乳類動物を免
疫感作し、該動物からヒトインターロイキン−６レセプ
ターを認識するポリクローナル抗体を採取することを特
徴とする抗−ヒトインターロイキン−６レセプターボリ
クローナル抗体の製造方法を提供する。
本発明の抗体は、ヒ）ＩＬ−６レセプターを特異的に認
識するものであり、これにはモノクローナル抗体及びポ
リクローナル抗体が含まれる。モノクローナル抗体には
、ヒトＩＬ−６とヒトＩＬ−６レセプターとの結合を競
合的に阻害するものと、これを競合的に阻害しないもの
とが含まれる。
識するものであり、これにはモノクローナル抗体及びポ
リクローナル抗体が含まれる。モノクローナル抗体には
、ヒトＩＬ−６とヒトＩＬ−６レセプターとの結合を競
合的に阻害するものと、これを競合的に阻害しないもの
とが含まれる。
前者の例としては、本発明のハイブリドーマＰＭ１によ
り産生されるＰＭＩモノクローナル抗体が挙げられ、後
者の側としてはハイブリドーマＭＴ１Ｂにより産生され
るＭＴ１８モノクローナル抗体が挙げられる。
り産生されるＰＭＩモノクローナル抗体が挙げられ、後
者の側としてはハイブリドーマＭＴ１Ｂにより産生され
るＭＴ１８モノクローナル抗体が挙げられる。
本発明の抗体・の製造のために用いられる免疫原として
は、ヒトＩＬ−６レセプターを細胞表面に発現している
動物細胞を用いることができる。この様な細胞としては
ヒトＩＬ−６レセプターを産生ずるヒト由来細胞株、例
えばヒトミエローマ細胞株Ｕ２６６、又はヒトＩＬ−６
レセプターをコードするＤＮＡにより形質転換された宿
主細胞、例えばそのような動物細胞株が挙げられ、その
例としてヒトｒＬ−６レセプターをコードするｃＤＮＡ
を含有するプラスミドにより形質転換されたマウスＴ細
胞が挙げられる。しかしながら、この様な細胞株は、細
胞表面に発現しているＩ Ｌ−６レセプターの量が少な
い等のため効率的な免疫原とは言い難い。
は、ヒトＩＬ−６レセプターを細胞表面に発現している
動物細胞を用いることができる。この様な細胞としては
ヒトＩＬ−６レセプターを産生ずるヒト由来細胞株、例
えばヒトミエローマ細胞株Ｕ２６６、又はヒトＩＬ−６
レセプターをコードするＤＮＡにより形質転換された宿
主細胞、例えばそのような動物細胞株が挙げられ、その
例としてヒトｒＬ−６レセプターをコードするｃＤＮＡ
を含有するプラスミドにより形質転換されたマウスＴ細
胞が挙げられる。しかしながら、この様な細胞株は、細
胞表面に発現しているＩ Ｌ−６レセプターの量が少な
い等のため効率的な免疫原とは言い難い。
しかしながら、この様な免疫原を使用してであっても、
−旦ヒトＩ Ｌ−６レセプターに対する抗体を手にすれ
ば、これを用いてより効率的な免疫原をｔＩｌ製し、こ
れを用いてさらに多様な抗体を製造することができる０
例えば、ヒトＩＬ−６レセプクーに対する抗体を適当な
固体担体に結合させ、他方、ヒトＩＬ−６レセプターを
産生ずる細胞、例えば前記の細胞を培養して細胞溶解し
、こと細胞溶解物を、前記の抗−ヒ） Ｉ Ｌ−６レセ
プター抗体を結合した固体担体と接触せしめることによ
り細胞溶解物中のヒ１−ＩＬ−６レセプターを担体上に
吸着・濃縮して、これを免疫原として使用することがで
きる。固体担体については抗体を結合できるもので、免
疫する動物の生育に重大な影響を及ぼさないものであれ
ば特別の制限はない。例えば、本発明の詳細な説明され
る様なセファロース等を基材とした固体担体は、勘弁な
操作で抗体を結合でき、かつ、動物の生育に影響を与え
ない、等、本発明における固体担体として好適である。
−旦ヒトＩ Ｌ−６レセプターに対する抗体を手にすれ
ば、これを用いてより効率的な免疫原をｔＩｌ製し、こ
れを用いてさらに多様な抗体を製造することができる０
例えば、ヒトＩＬ−６レセプクーに対する抗体を適当な
固体担体に結合させ、他方、ヒトＩＬ−６レセプターを
産生ずる細胞、例えば前記の細胞を培養して細胞溶解し
、こと細胞溶解物を、前記の抗−ヒ） Ｉ Ｌ−６レセ
プター抗体を結合した固体担体と接触せしめることによ
り細胞溶解物中のヒ１−ＩＬ−６レセプターを担体上に
吸着・濃縮して、これを免疫原として使用することがで
きる。固体担体については抗体を結合できるもので、免
疫する動物の生育に重大な影響を及ぼさないものであれ
ば特別の制限はない。例えば、本発明の詳細な説明され
る様なセファロース等を基材とした固体担体は、勘弁な
操作で抗体を結合でき、かつ、動物の生育に影響を与え
ない、等、本発明における固体担体として好適である。
さらには、遺伝子工学的方法により、例えば特願平１−
９７７４号明細書に記載されている方法によりヒトＩＬ
−６レセプターを調製し、これを免疫原上して使用する
こともできる。また、ヒトＩＬ−６レセプターの一部分
を構成するペプチドを調製し、これを適当な高分子キャ
リヤー、例えばオバルプミンに結合して免疫原として使
用することもできる。さらには、怒染後にヒトＩＬ−６
レセプターが発現するようにされたワクチニアウィルス
を使用することもできる。これらの免疫原はいずれも、
ポリクローナル抗体を製造するための免疫原として、及
びハイブリドーマを調製するための免疫原として使用す
ることができる。
９７７４号明細書に記載されている方法によりヒトＩＬ
−６レセプターを調製し、これを免疫原上して使用する
こともできる。また、ヒトＩＬ−６レセプターの一部分
を構成するペプチドを調製し、これを適当な高分子キャ
リヤー、例えばオバルプミンに結合して免疫原として使
用することもできる。さらには、怒染後にヒトＩＬ−６
レセプターが発現するようにされたワクチニアウィルス
を使用することもできる。これらの免疫原はいずれも、
ポリクローナル抗体を製造するための免疫原として、及
びハイブリドーマを調製するための免疫原として使用す
ることができる。
ポリクローナル抗体の製造は、常法に従って、例えば上
記のいずれかの免疫原によりマウス、ウサギ、ヒツジ、
ヤギ等を免疫怒作することによって行うことができる。
記のいずれかの免疫原によりマウス、ウサギ、ヒツジ、
ヤギ等を免疫怒作することによって行うことができる。
ハイブリドーマの作製も常法に従って行うことができる
０例えば前記の免疫原のいずれかによりマウス等の哺乳
類を免疫し、この動物から肺臓細胞を得、これを樹立さ
れたミエローマ細胞と融合せしめる０次に、目的とする
反応性を有するモノクローナル抗体を産生ずるハイブリ
ドーマをクローニングする。
０例えば前記の免疫原のいずれかによりマウス等の哺乳
類を免疫し、この動物から肺臓細胞を得、これを樹立さ
れたミエローマ細胞と融合せしめる０次に、目的とする
反応性を有するモノクローナル抗体を産生ずるハイブリ
ドーマをクローニングする。
モノクローナル抗体を製造するには、前記のようにして
クローニングされたハイブリドーマを培養し、培養上清
からモノクローナル抗体を採取する。あるいは、前記ハ
イブリドーマを動物の腹腔内に接種し、腹水を得、これ
からモノクローナル抗体を単離するこζもできる。ハイ
ブリドーマ細胞上清中の抗体又は腹水中の抗体は、常法
に従って、例えば硫酸アンモニウム塩析により濃縮する
ことができ、さらにアフィニティークロマトグラフィー
、例えばＩ Ｌ−６レセプターを固定化した担体を用い
るアフィニティーク口マトグラフィーにより精製するこ
とができる。
クローニングされたハイブリドーマを培養し、培養上清
からモノクローナル抗体を採取する。あるいは、前記ハ
イブリドーマを動物の腹腔内に接種し、腹水を得、これ
からモノクローナル抗体を単離するこζもできる。ハイ
ブリドーマ細胞上清中の抗体又は腹水中の抗体は、常法
に従って、例えば硫酸アンモニウム塩析により濃縮する
ことができ、さらにアフィニティークロマトグラフィー
、例えばＩ Ｌ−６レセプターを固定化した担体を用い
るアフィニティーク口マトグラフィーにより精製するこ
とができる。
上記のポリクローナル抗体の製造方法、ハイブリドーマ
の作製方法、モノクローナル抗体の調製方法、抗体の回
収・精製方法は、いずれもそれ自体当業界によりよく知
られている方法により行うことができる。
の作製方法、モノクローナル抗体の調製方法、抗体の回
収・精製方法は、いずれもそれ自体当業界によりよく知
られている方法により行うことができる。
以下本発明をさらに詳細に説明するために実施例を示す
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
ヒトＩ Ｌ−６レセプターに対するマウスモノクローナ
ル抗体を作製する目的で、免疫原として、ヒ１−ｒＬ−
６レセプターを膜面に発現しているマウスＴ細胞株を以
下の方法で作製した。すなわち、特願平１−９７７４号
明細書に記載されているｐＢＳＦ２Ｒ。
ル抗体を作製する目的で、免疫原として、ヒ１−ｒＬ−
６レセプターを膜面に発現しているマウスＴ細胞株を以
下の方法で作製した。すなわち、特願平１−９７７４号
明細書に記載されているｐＢＳＦ２Ｒ。
２３６及びｐＳＶ２ｎｅｏをマウスＴ細胞株ＣＴＬＬ−
２（ＡＴＣＣＴＩＢ２１４）に常法で導入し、Ｇ−４１
８を用いる通常の方法でスクリーニングをし、最終的に
Ｉ Ｌ−６レセブクーを細胞あたり約３０，０００個発
現している株を樹立し、これをＣＴＢＣ３と名づけだ。
２（ＡＴＣＣＴＩＢ２１４）に常法で導入し、Ｇ−４１
８を用いる通常の方法でスクリーニングをし、最終的に
Ｉ Ｌ−６レセブクーを細胞あたり約３０，０００個発
現している株を樹立し、これをＣＴＢＣ３と名づけだ。
免疫は以下の様に行った。ＲＰ［１６４０を用いる通常
の方法で培養後、ＰＢＳバッファーで４回洗浄しりＣＴ
ＢＣ３を、Ｃ５７ＢＬ６７ ウス１匹あたりＩ ＸＩＯ
’細胞個、１週間に１回で計６回、腹腔内に免疫した。
の方法で培養後、ＰＢＳバッファーで４回洗浄しりＣＴ
ＢＣ３を、Ｃ５７ＢＬ６７ ウス１匹あたりＩ ＸＩＯ
’細胞個、１週間に１回で計６回、腹腔内に免疫した。
前記免疫されたマウスからの肺細胞を、親株としてのミ
エローマ細胞系Ｐ３１Ｊ１と、ポリエチレングリコール
を用いる通常の方法に従って融合せしめた。
エローマ細胞系Ｐ３１Ｊ１と、ポリエチレングリコール
を用いる通常の方法に従って融合せしめた。
スクリーニングは以下の様に行った。ＩＬ−６レセプタ
ー陰性のヒトＴ細胞株ＪｔｌＲＫＡＴ（ＡＴＣＣＣＲＬ
８１６３）に、ｐＢｓＦ２Ｒ，２３６とｐＳＶ２ｎｅｏ
を常法で導入し、スクリーニングの結果、ＩＬ−６レセ
プクーを細胞あたり約１００．０００個発現している株
を樹立し、これをＮＪＢＣ８と名づけた。ＮＰ４０で可
溶化したＮＪＢＣ８をｔＵ識し、ＮＰ４０で可）８化し
たＪＵＲＫＡＴを認識しない抗体を産生しているハイブ
リドーマが１クローン単離され、これを？１Ｔ１Ｂと名
づけた。また、このハイブリドーマによって生産される
モノクローナル抗体をＭＴ１８抗体と称する。前記のハ
イブリドーマＭＴ１８は、工業技術院微生物工業技術研
究所に微工研条寄第ど９９号（ＦＥＲＭ ９Ｐ−２’？
’／イ）として寄託されている。第６図のデータはＭＴ
１８抗体がＩＬ−６レセプターを特異的に認識すること
を示している。
ー陰性のヒトＴ細胞株ＪｔｌＲＫＡＴ（ＡＴＣＣＣＲＬ
８１６３）に、ｐＢｓＦ２Ｒ，２３６とｐＳＶ２ｎｅｏ
を常法で導入し、スクリーニングの結果、ＩＬ−６レセ
プクーを細胞あたり約１００．０００個発現している株
を樹立し、これをＮＪＢＣ８と名づけた。ＮＰ４０で可
溶化したＮＪＢＣ８をｔＵ識し、ＮＰ４０で可）８化し
たＪＵＲＫＡＴを認識しない抗体を産生しているハイブ
リドーマが１クローン単離され、これを？１Ｔ１Ｂと名
づけた。また、このハイブリドーマによって生産される
モノクローナル抗体をＭＴ１８抗体と称する。前記のハ
イブリドーマＭＴ１８は、工業技術院微生物工業技術研
究所に微工研条寄第ど９９号（ＦＥＲＭ ９Ｐ−２’？
’／イ）として寄託されている。第６図のデータはＭＴ
１８抗体がＩＬ−６レセプターを特異的に認識すること
を示している。
この図中Ａは、フルオレッセインイソシアネートで標識
されたＭＴ１８抗体によりＪ ［Ｉ ＲＫ Ａ Ｔ細胞
を染色した場合に螢光染色された細胞の分布を示し、Ｂ
は前記ＮＪＢＣ８細胞を同様に処理した場合の結果を示
す。
されたＭＴ１８抗体によりＪ ［Ｉ ＲＫ Ａ Ｔ細胞
を染色した場合に螢光染色された細胞の分布を示し、Ｂ
は前記ＮＪＢＣ８細胞を同様に処理した場合の結果を示
す。
ＩＬ−６レセプターに対するマウスモノクローナル抗体
を作製する目的で、免疫原として、ヒトＩ Ｌ−６レセ
プターを以下の方法で抽出した。
を作製する目的で、免疫原として、ヒトＩ Ｌ−６レセ
プターを以下の方法で抽出した。
ヒトミエローマ細胞株Ｕ２６６ （Ｉ Ｌ −６レセブ
クー産生細胞）３Ｘ１０９を１ ｍｌｌの１％ジギトニ
ン（和光純薬） 、１０ｍＭ ）−リエタノールアミン
バッフｙ （ｐＨ７，４）、 ０．１５Ｍ ＮａＣ
１、１ｍＭ ｐＡＰＭＳＦ（和光純薬）で可溶化した。
クー産生細胞）３Ｘ１０９を１ ｍｌｌの１％ジギトニ
ン（和光純薬） 、１０ｍＭ ）−リエタノールアミン
バッフｙ （ｐＨ７，４）、 ０．１５Ｍ ＮａＣ
１、１ｍＭ ｐＡＰＭＳＦ（和光純薬）で可溶化した。
一方、ブロムシアンで活性化したセファロース４Ｂ（フ
ァルマシア社）に、抗Ｔ Ｌ−６レセプター抗体である
ＭＴ１Ｂ抗体（実施例１）を常法どおり結合させた。こ
れと前述の可溶化した細胞の上清を混合し、樹脂上のＭ
Ｔ１８抗体に可溶化したＩＬ−６レセプターを結合させ
た。
ァルマシア社）に、抗Ｔ Ｌ−６レセプター抗体である
ＭＴ１Ｂ抗体（実施例１）を常法どおり結合させた。こ
れと前述の可溶化した細胞の上清を混合し、樹脂上のＭ
Ｔ１８抗体に可溶化したＩＬ−６レセプターを結合させ
た。
非特異的結合物を前述の１％ジギトニン溶液で洗い流し
た後、ＭＴ１Ｂ抗体を介してセファロース４Ｂに結合し
たＩＬ−６レセプターを１回の免疫原として用いた。
た後、ＭＴ１Ｂ抗体を介してセファロース４Ｂに結合し
たＩＬ−６レセプターを１回の免疫原として用いた。
免疫およびハイブリドーマの作製は以下のように行った
。前述の免疫原を１週間に１回計４回、Ｂａ１ｂ／ｃマ
ウスの腹部に免役した。次にマウスからの肺細胞を、親
株としてのミエローマ細胞株Ｐ３０１と、ポリエチレン
グリコールを用いる通常の方法に従って融合せしめた。
。前述の免疫原を１週間に１回計４回、Ｂａ１ｂ／ｃマ
ウスの腹部に免役した。次にマウスからの肺細胞を、親
株としてのミエローマ細胞株Ｐ３０１と、ポリエチレン
グリコールを用いる通常の方法に従って融合せしめた。
スクリーニングは以下のように行った。まず、ハイブリ
ドーマの培養上清と０．０１ｄのプロティンＧセファ０
−ス（ファルマシア）を混合し、上請中のイムノグロブ
リンを樹脂に吸着せしめた。−方、３５Ｓメチオニンで
内部標識したＵ２６６細胞１０７個を可溶化後、前述の
）ｉＴ１Ｂ抗体結合セファロース４ＢでＩ Ｉ、−６レ
セプターをアフィニティー精製した。これを前述のプロ
ティンＧセファロースで通常の方法で免疫沈降させ、Ｓ
ＯＳ／ＰＡＧＥで解析した。この結果、Ｉ Ｌ−６レセ
プターと特異的に結合する抗体を産生じているハイブリ
ドーマが１クローン単離され、これをＰＭＩと命名した
。又、このバイプリドーマによって生産されるモノクロ
ーナル抗体をＰＭＩ抗体と称する。
ドーマの培養上清と０．０１ｄのプロティンＧセファ０
−ス（ファルマシア）を混合し、上請中のイムノグロブ
リンを樹脂に吸着せしめた。−方、３５Ｓメチオニンで
内部標識したＵ２６６細胞１０７個を可溶化後、前述の
）ｉＴ１Ｂ抗体結合セファロース４ＢでＩ Ｉ、−６レ
セプターをアフィニティー精製した。これを前述のプロ
ティンＧセファロースで通常の方法で免疫沈降させ、Ｓ
ＯＳ／ＰＡＧＥで解析した。この結果、Ｉ Ｌ−６レセ
プターと特異的に結合する抗体を産生じているハイブリ
ドーマが１クローン単離され、これをＰＭＩと命名した
。又、このバイプリドーマによって生産されるモノクロ
ーナル抗体をＰＭＩ抗体と称する。
ハイブリドーマＰＭＩは工業技術院微生物工業技術研究
所に微・工研漁舒第２９９８号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２’
？’？８ ）として寄託されている。
所に微・工研漁舒第２９９８号（ＦＥＲＭ ＢＰ−２’
？’？８ ）として寄託されている。
第１図に、モノクローナル抗体ＰＭＩとモノクローナル
抗体ＭＴ１８のｒＬ−６レセプターに対する反応性を示
す、ＩＬ−６レセプターを発現していないＴｌ胞株Ｊｕ
ｒｋａＬ （第１図中、ａ及びＣ）及びＩ Ｌ−６レセ
プターｃＤＮＡが導入されており持続的にＩＬ−６レセ
プターを発現しているＪｕｒｋａｔ （第１図中、ｂ及
びｄ）のそれぞれと、ＭＴｌＢの培養上清（第１図中、
ａ及びｂの実線）及びＰＭＩの培養上清（第１図中、Ｃ
及びｄの実線）のそれぞれとを反応せしめ、これらを螢
光色素を結合したヤギ由来抗マウスイムノグロブリン抗
体と反応せしめた後螢光強度に対する螢光染色された細
胞の分布を調べた、比較のため対応する細胞をＭＴｌＢ
の培養上清及びＰＭＩ培養上清のいずれかによっても処
理しなかった場合の結果を第１図中ａ、ｂ、ｃ及びｄに
点線で示した。
抗体ＭＴ１８のｒＬ−６レセプターに対する反応性を示
す、ＩＬ−６レセプターを発現していないＴｌ胞株Ｊｕ
ｒｋａＬ （第１図中、ａ及びＣ）及びＩ Ｌ−６レセ
プターｃＤＮＡが導入されており持続的にＩＬ−６レセ
プターを発現しているＪｕｒｋａｔ （第１図中、ｂ及
びｄ）のそれぞれと、ＭＴｌＢの培養上清（第１図中、
ａ及びｂの実線）及びＰＭＩの培養上清（第１図中、Ｃ
及びｄの実線）のそれぞれとを反応せしめ、これらを螢
光色素を結合したヤギ由来抗マウスイムノグロブリン抗
体と反応せしめた後螢光強度に対する螢光染色された細
胞の分布を調べた、比較のため対応する細胞をＭＴｌＢ
の培養上清及びＰＭＩ培養上清のいずれかによっても処
理しなかった場合の結果を第１図中ａ、ｂ、ｃ及びｄに
点線で示した。
この結果、ＰＭＩ抗体及びＭＴ１Ｂ抗体のいずれもＩ
Ｌ−６レセプターに結合することがＶ１認された。
Ｌ−６レセプターに結合することがＶ１認された。
ＩＬ−６レセプターに対するポリクローナル抗体を作製
する目的で、免疫原として、Ｉ Ｌ−６レセプターの細
胞内領域の一部に相当するペプチドにシスティン残基を
付加したもの（ＫＴＳＭＨＰＰＹＳＬＧＱＬＶＰＣ）を
常法により合成した（Ｋはリジン、Ｔはトレニオン、Ｓ
はセリン、Ｍはメチオニン、Ｈはヒスチジン、Ｆはフェ
ニルアラニン、Ｐはプロリン、Ｙはチロシン、Ｌはロイ
シン、Ｇはグリシン、Ｑはグルタミン、■はバリン、Ｃ
はシスティン残基を示す）。
する目的で、免疫原として、Ｉ Ｌ−６レセプターの細
胞内領域の一部に相当するペプチドにシスティン残基を
付加したもの（ＫＴＳＭＨＰＰＹＳＬＧＱＬＶＰＣ）を
常法により合成した（Ｋはリジン、Ｔはトレニオン、Ｓ
はセリン、Ｍはメチオニン、Ｈはヒスチジン、Ｆはフェ
ニルアラニン、Ｐはプロリン、Ｙはチロシン、Ｌはロイ
シン、Ｇはグリシン、Ｑはグルタミン、■はバリン、Ｃ
はシスティン残基を示す）。
これをＴ、Ｈｉｒａｎｏらの示す方法（Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ、Ａｃａｄ。
ｔｌ、Ａｃａｄ。
Ｓｃｉ、υＳＡ、 ８４． ｐ２２Ｂ、 １９８７年参
照）により、オバルプミンと結合させた。これをウサギ
に１週間に１回０．２ ｍｇ計５回免疫したのち全血清
を採取した。
照）により、オバルプミンと結合させた。これをウサギ
に１週間に１回０．２ ｍｇ計５回免疫したのち全血清
を採取した。
さらに、免疫した合成ペプチドを結合させたセファロー
ス４Ｂでアフィニティー精製した。
ス４Ｂでアフィニティー精製した。
第２図のデータは、このようにして作製されたポリクロ
ーナル抗体が、Ｉ Ｌ −６レセプターを特異的に認識
することを示す。すなわち、内部標識されたＵ２６６細
胞（ＩＬ−６レセプター産住細胞）をディタージェント
で可溶化し、この細胞溶解物を、ＭＴ１８抗体（レーン
１）、ＰＭＩ抗体（レーン２）、ウサギのイムノグロブ
リン（レーン３）、又は実施例により調製した抗ペプチ
ドポリクローナル抗体により免疫沈降し、５ＰＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動にかけた後、オートラジオ
グラフィーを行った。この結果、Ｍ７１８モノクローナ
ル抗体、ＰＭＩモノクローナル抗体及び実施例２により
調製した抗ペプチドポリクローナル抗体はいずれもＩＬ
−６レセプターを特異的に認識することが確認された。
ーナル抗体が、Ｉ Ｌ −６レセプターを特異的に認識
することを示す。すなわち、内部標識されたＵ２６６細
胞（ＩＬ−６レセプター産住細胞）をディタージェント
で可溶化し、この細胞溶解物を、ＭＴ１８抗体（レーン
１）、ＰＭＩ抗体（レーン２）、ウサギのイムノグロブ
リン（レーン３）、又は実施例により調製した抗ペプチ
ドポリクローナル抗体により免疫沈降し、５ＰＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動にかけた後、オートラジオ
グラフィーを行った。この結果、Ｍ７１８モノクローナ
ル抗体、ＰＭＩモノクローナル抗体及び実施例２により
調製した抗ペプチドポリクローナル抗体はいずれもＩＬ
−６レセプターを特異的に認識することが確認された。
ＩＬ−６の標識、及び細胞上のＩＬ−６レセプターへの
ＩＬ−６の結合の同定はＴ、Ｔａｇａらの方法（Ｊ、ｆ
！ｘｐ、Ｍｅｄ、、 １６６、 ｐ９６７、１９８７年
参照）に従った。
ＩＬ−６の結合の同定はＴ、Ｔａｇａらの方法（Ｊ、ｆ
！ｘｐ、Ｍｅｄ、、 １６６、 ｐ９６７、１９８７年
参照）に従った。
”’ Ｉ −Ｉ Ｌ −６（１４，０００ｃｐｍ）と、
４Ｘ１０’個のり２６６細胞（ＩＬ−６レセプター産生
細胞）とを室温で６０分間反応させた。このとき、分子
数で１００倍過剰の非標識ＩＬ−６、ＭＴｌＢの培養上
清（７０％容量）、又はＰＭＩの培養上清（７０％容量
）をそれぞれ存在せしめた。ＦＣ３上に重層し、遠心後
、細胞の放射能を測定した。比較のため細胞を接種して
いない培地も同様に処理した。
４Ｘ１０’個のり２６６細胞（ＩＬ−６レセプター産生
細胞）とを室温で６０分間反応させた。このとき、分子
数で１００倍過剰の非標識ＩＬ−６、ＭＴｌＢの培養上
清（７０％容量）、又はＰＭＩの培養上清（７０％容量
）をそれぞれ存在せしめた。ＦＣ３上に重層し、遠心後
、細胞の放射能を測定した。比較のため細胞を接種して
いない培地も同様に処理した。
第３図のデータは、ＭＴ１８抗体がＩ Ｌ−６とＩＬ−
６レセプターの結合を競合阻害しないのに対し、ＰＭＩ
抗体が競合阻害することを示している。
６レセプターの結合を競合阻害しないのに対し、ＰＭＩ
抗体が競合阻害することを示している。
さらに、第４図でも同様の結果が示された。第４図中、
ａはＵ２６６細胞をＩ Ｌ−６の存在下（破線）又は非
存在下（実線）でＭＴ１８の培養上清と反応せしめた後
螢光標識された抗マウスイムノグロブリンで染色した場
合の螢光染色強度に対する細胞数の分布を示しており、
ｂはυ２６６細胞をＩ Ｌ−６の存在した（破線）又は
非存在下（実線）でＰＭＩの培養液と反応せしめ、その
後ａの場合と同様に処理した場合の結果であり、ａ及び
ｂにおける点線はＵ２６６細胞にＩ Ｌ−６のみを結合
せしめた後同様に処理した場合の結果である。 ＭＴ１
８抗体はＩＬ−６の在非に拘らずＵ２６６細胞と結合す
るのに対して、ＰＭＩ抗体はＩ Ｌ−６の非存在下では
Ｕ２６６細胞と結合するが過剰のＩＬ−６の存在下では
υ２６６細胞と結合せず、従ってＰＭＩ抗体がＩＬ−６
と競合することが確認された。
ａはＵ２６６細胞をＩ Ｌ−６の存在下（破線）又は非
存在下（実線）でＭＴ１８の培養上清と反応せしめた後
螢光標識された抗マウスイムノグロブリンで染色した場
合の螢光染色強度に対する細胞数の分布を示しており、
ｂはυ２６６細胞をＩ Ｌ−６の存在した（破線）又は
非存在下（実線）でＰＭＩの培養液と反応せしめ、その
後ａの場合と同様に処理した場合の結果であり、ａ及び
ｂにおける点線はＵ２６６細胞にＩ Ｌ−６のみを結合
せしめた後同様に処理した場合の結果である。 ＭＴ１
８抗体はＩＬ−６の在非に拘らずＵ２６６細胞と結合す
るのに対して、ＰＭＩ抗体はＩ Ｌ−６の非存在下では
Ｕ２６６細胞と結合するが過剰のＩＬ−６の存在下では
υ２６６細胞と結合せず、従ってＰＭＩ抗体がＩＬ−６
と競合することが確認された。
ｒＬ−６依存性のヒ）Ｔ細胞白血病株ＫＴ３をＳ、５１
ｍ１ｚｕらの方法（Ｂｌｏｏｄ、 ７２． ｐｌＢ２６
．１９８８年参照）に従って培養した後、種々の濃度の
ＩＬ−６を、２５％容量のハイブリドーマの培養上清の
存在下又は非存在下で加え、市販の９６穴プレートに１
ウエルあたり５Ｘ１０’細胞／ １００ｍで培養した。
ｍ１ｚｕらの方法（Ｂｌｏｏｄ、 ７２． ｐｌＢ２６
．１９８８年参照）に従って培養した後、種々の濃度の
ＩＬ−６を、２５％容量のハイブリドーマの培養上清の
存在下又は非存在下で加え、市販の９６穴プレートに１
ウエルあたり５Ｘ１０’細胞／ １００ｍで培養した。
６０時間後、ｌウェルあたり０．７５μＣｉのトリチウ
ム標識されたチミヂンを加え、６時間後細胞を集め、そ
して取り込まれた放射能を測定した。
ム標識されたチミヂンを加え、６時間後細胞を集め、そ
して取り込まれた放射能を測定した。
第５図のデータは、ＭＴ１８抗体がＩＬ−６の生物活性
を阻害しないのに対し、ＰＭＩ抗体がＩＬ−６の生物作
用を阻害することを示している。
を阻害しないのに対し、ＰＭＩ抗体がＩＬ−６の生物作
用を阻害することを示している。
実施例３．で使用したＩ Ｌ−６の細胞内領域の−Ｂａ
ｉｂ／ｃマウスの腹部に免疫した。次にマウスがらの肺
細胞をポリエチレングリコールを用いる通常の方法に従
い、ミエローマ細胞Ｐ３Ｕ１と融合せしめた。
ｉｂ／ｃマウスの腹部に免疫した。次にマウスがらの肺
細胞をポリエチレングリコールを用いる通常の方法に従
い、ミエローマ細胞Ｐ３Ｕ１と融合せしめた。
スクリーニングは以下のように行なった。まず、ハイブ
リドーマの培養上清と０．０１ｄのプロティンＧセファ
ロース（ファルマシア）を混合し、上清中のイムノグロ
ブリンを樹脂に吸着せしめた。−方、３１Ｓメチオニン
で内部標識した０２６６！ｉｔ胞１０″個を可溶化後、
前述のプロティンＧセファロースを用いる通常の方法で
免疫沈降させ、ＳＤＳ／ＰＡＧＥで解析してＩＬ−６レ
セプターのバンドが検出され、更にこのバンドが免疫沈
降の際にマウスに免疫したベプチ）’ （ＫＴＳＭＨＰ
ＰＹＳＬＧＱＬＶＰＣ）を添加することにより消失する
ことを確認した。その結果、Ｉ Ｌ−６レセプターの細
胞内領域の一部を特異的に認識する抗体を産生じている
ハイブリドーマが１クローン単離された。
リドーマの培養上清と０．０１ｄのプロティンＧセファ
ロース（ファルマシア）を混合し、上清中のイムノグロ
ブリンを樹脂に吸着せしめた。−方、３１Ｓメチオニン
で内部標識した０２６６！ｉｔ胞１０″個を可溶化後、
前述のプロティンＧセファロースを用いる通常の方法で
免疫沈降させ、ＳＤＳ／ＰＡＧＥで解析してＩＬ−６レ
セプターのバンドが検出され、更にこのバンドが免疫沈
降の際にマウスに免疫したベプチ）’ （ＫＴＳＭＨＰ
ＰＹＳＬＧＱＬＶＰＣ）を添加することにより消失する
ことを確認した。その結果、Ｉ Ｌ−６レセプターの細
胞内領域の一部を特異的に認識する抗体を産生じている
ハイブリドーマが１クローン単離された。
本発明で提供されるＩＬ−６レセプターを特異的に認識
するポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体は、診
断薬及び治療薬として期待されるＩＬ−６レセプター活
性を有する種々のタンパク質を大量に生産し、そして精
製するために有益である。
するポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体は、診
断薬及び治療薬として期待されるＩＬ−６レセプター活
性を有する種々のタンパク質を大量に生産し、そして精
製するために有益である。
また、本発明で提供される抗体を用いることにより、自
然状態では極めて微量にしか生産されないＩＬ−６レセ
プターの諸性質を解析することが可能になる。このこと
は個体発生及び免疫機構の研究、さらにはそれらの成果
に基づく治療薬診断薬等の開発等に大きな意義をもつ。
然状態では極めて微量にしか生産されないＩＬ−６レセ
プターの諸性質を解析することが可能になる。このこと
は個体発生及び免疫機構の研究、さらにはそれらの成果
に基づく治療薬診断薬等の開発等に大きな意義をもつ。
さらに、本発明で提供されるＩ Ｌ−６の生物作用を阻
害する抗体は、Ｉ Ｌ−６の異常産生が病因因子である
と考えられている種々の自己免疫疾患の治療薬としての
応用開発も考えられる。
害する抗体は、Ｉ Ｌ−６の異常産生が病因因子である
と考えられている種々の自己免疫疾患の治療薬としての
応用開発も考えられる。
第１図は、Ｉ Ｌ−６レセプターを発現していないＴ細
胞株Ｊｕｒｋａｔ （ａ 、 ｃ ）又はＩ Ｌ−６レ
セプターｃＤＮＡ含有ベクターが導入されており持続的
にＩ Ｌ−６レセプターを発現しているＪｕｒｋａｔ
（ｂ 。 ｄ）と、？ＩＴ１Ｂの培養上清（ａ 、 ｂの実線）又
はＰＭＩの培養上清（Ｃ及びｄの実線）との反応性を示
す。点線は培養上清で処理しなかった細胞についての結
果を示す。 第２図は、内部標識された０２６６細胞を可溶化した後
、ＭＴ１８モノクローナル抗体（レーンｌ）、ＰＭＩモ
ノクローナル抗体（レーン２）、ウサギのイムノグロブ
リン（レーン３）又は実施例２の抗ペプチドポリクロー
ナル抗体（レーン４）により免疫沈降せしめ、５ｏＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びオートラジオグラ
フィーを行った結果を示す。 第３図は、実施例３に記載の方法でＩＬ−６レセプター
へのＩ Ｌ−６の結合に対するＰＭＩ抗体及びＭＴ１Ｂ
抗体の阻害効果を示すグラフである。 第４図は、Ｉ Ｌ−６の存在下（破線）又は非存在下（
実線）での、Ｕ２６６細胞へのＭ７１Ｂ抗体（ａ）又は
ＰＭＩ抗体（ｂ）の結合を比較した結果であり、破線は
ＩＬ−６のみで処理した０２６６細胞についての結果を
示す。 第５図は、ＭＴ１８の培養上清存在下、ＰＭＩの培養上
清存在下あるいは非存在下で、種々の濃度のＩＬ−６を
添加して培養した時の、ＫＴ３細胞によるトリチウム標
識チミヂンの取り込みを示す。 第６図は、ＭＴ１Ｂ抗体がＩ Ｌ−６レセプター産生細
胞のみに結合することを示す細胞分布図である。
胞株Ｊｕｒｋａｔ （ａ 、 ｃ ）又はＩ Ｌ−６レ
セプターｃＤＮＡ含有ベクターが導入されており持続的
にＩ Ｌ−６レセプターを発現しているＪｕｒｋａｔ
（ｂ 。 ｄ）と、？ＩＴ１Ｂの培養上清（ａ 、 ｂの実線）又
はＰＭＩの培養上清（Ｃ及びｄの実線）との反応性を示
す。点線は培養上清で処理しなかった細胞についての結
果を示す。 第２図は、内部標識された０２６６細胞を可溶化した後
、ＭＴ１８モノクローナル抗体（レーンｌ）、ＰＭＩモ
ノクローナル抗体（レーン２）、ウサギのイムノグロブ
リン（レーン３）又は実施例２の抗ペプチドポリクロー
ナル抗体（レーン４）により免疫沈降せしめ、５ｏＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びオートラジオグラ
フィーを行った結果を示す。 第３図は、実施例３に記載の方法でＩＬ−６レセプター
へのＩ Ｌ−６の結合に対するＰＭＩ抗体及びＭＴ１Ｂ
抗体の阻害効果を示すグラフである。 第４図は、Ｉ Ｌ−６の存在下（破線）又は非存在下（
実線）での、Ｕ２６６細胞へのＭ７１Ｂ抗体（ａ）又は
ＰＭＩ抗体（ｂ）の結合を比較した結果であり、破線は
ＩＬ−６のみで処理した０２６６細胞についての結果を
示す。 第５図は、ＭＴ１８の培養上清存在下、ＰＭＩの培養上
清存在下あるいは非存在下で、種々の濃度のＩＬ−６を
添加して培養した時の、ＫＴ３細胞によるトリチウム標
識チミヂンの取り込みを示す。 第６図は、ＭＴ１Ｂ抗体がＩ Ｌ−６レセプター産生細
胞のみに結合することを示す細胞分布図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒトインターロイキン−６レセプターと特異的に結
合し得る抗−ヒトインターロイキン−６レセプター抗体
。 ２、モノクローナル抗体である請求項１に記載の抗体。 ３、ヒトインターロイキン−６レセプターとの結合につ
いてヒトインターロイキン−６と競合する、請求項２０
に記載の抗体。 ４、ＰＭ１抗体である請求項３に記載の抗体５、ヒトイ
ンターロイキン−６レセプターとの結合についてヒトイ
ンターロイキン−６と競合しない、請求項２に記載の抗
体。 ６、ＭＴ１８抗体である請求項５に記載の抗体。 ７、ポリクローナル抗体である、請求項１に記載の抗体
。 ８、次の配列： （Ｎ末端）ＫＴＳＭＨＰＰＹＳＬＧＱＬＶＰ（Ｃ末端）
（ただし配列中のアルファベットはアミノ酸の一文字表
示法に従ったアミノ酸を示す。） で現されるヒトインターロイキン−６レセプター部分を
認識する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。 ９、請求項２に記載のモノクローナル抗体を生産するハ
イブリドーマ。 １０、ヒトインターロイキン−６レセプター抗原により
哺乳類を感作し、該哺乳類から免疫細胞を採取し、該免
疫細胞をミエローマ細胞株と融合せしめ、そして該融合
株からヒトインターロイキン−６レセプターを認識する
株をクローニングすることを特徴とするハイブリドーマ
の製造方法。 １１、前記ヒトインターロイキン−６レセプター抗原が
、固体キャリヤーに結合されたヒトインターロイキン−
６レセプター、又は高分子キャリヤーに結合したペプチ
ド（ＫＴＳＭＨＰＰＹＳＬＧＱＬＶＰＣ）である、請求
項１０に記載の方法。 １２、請求項９に記載のハイブリドーマ、又は請求項１
０もしくは１１に記載の方法により製造されたハイブリ
ドーマを培養し、該培養物からヒトインターロイキン−
６レセプターを認識するモノクローナル抗体を採取する
ことを特徴とする抗−ヒトインターロイキン−６レセプ
ター抗体の製造方法。 １３、ヒトインターロイキン−６レセプター抗原により
哺乳類動物を免疫感作し、該動物からヒトインターロイ
キン−６レセプターを認識するポリクローナル抗体を採
取することを特徴とする抗−ヒトインターロイキン−６
レセプターポリクローナル抗体の製造方法。１４、前記
ヒトインターロイキン−６レセプター抗原が次の配列： （Ｎ末端）ＫＴＳＭＨＰＰＹＳＬＧＱＬＶＰＣ（Ｃ末端
）（ただし配列中のアルファベットはアミノ酸の一文字
表示法に従ったアミノ酸を示す。） を有するペプチドを高分子キャリヤーに結合した複合体
である、請求項１３に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1-186016 | 1989-07-20 | ||
| JP18601689 | 1989-07-20 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03139293A true JPH03139293A (ja) | 1991-06-13 |
| JP2998976B2 JP2998976B2 (ja) | 2000-01-17 |
Family
ID=16180912
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18942090A Expired - Lifetime JP2998976B2 (ja) | 1989-07-20 | 1990-07-19 | ヒトインタ―ロイキン―６レセプターに対する抗体 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0409607B1 (ja) |
| JP (1) | JP2998976B2 (ja) |
| KR (1) | KR100214759B1 (ja) |
| AT (1) | ATE144713T1 (ja) |
| CA (1) | CA2021594C (ja) |
| DE (2) | DE69029015T2 (ja) |
| ES (1) | ES2093017T3 (ja) |
| HK (1) | HK49497A (ja) |
| NL (1) | NL300387I1 (ja) |
| SG (1) | SG42954A1 (ja) |
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| WO2007058194A1 (ja) | 2005-11-15 | 2007-05-24 | National Hospital Organization | 細胞傷害性t細胞の誘導抑制剤 |
| WO2007061029A1 (ja) | 2005-11-25 | 2007-05-31 | Keio University | 前立腺癌治療剤 |
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| WO2011149051A1 (ja) | 2010-05-28 | 2011-12-01 | 中外製薬株式会社 | 抗腫瘍t細胞応答増強剤 |
| US8632778B2 (en) | 2000-08-11 | 2014-01-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Stabilized anti-interleukin-6 antibody-containing preparations |
| WO2014200018A1 (ja) | 2013-06-11 | 2014-12-18 | 独立行政法人 国立精神・神経医療研究センター | 再発寛解型多発性硬化症（ｒｒｍｓ）患者の治療予後予測方法、及び新規治療適応判断方法 |
| WO2018203545A1 (ja) | 2017-05-02 | 2018-11-08 | 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター | Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法 |
| WO2019151418A1 (ja) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | 元一 加藤 | Ｉｌ－６阻害剤を含有する喘息の治療剤 |
| WO2025198912A1 (en) | 2024-03-21 | 2025-09-25 | Hoffmann-La Roche Inc. | Methods of treating myasthenia gravis |
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