JPH03144366A - 免疫測定法 - Google Patents
免疫測定法Info
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- JPH03144366A JPH03144366A JP28189689A JP28189689A JPH03144366A JP H03144366 A JPH03144366 A JP H03144366A JP 28189689 A JP28189689 A JP 28189689A JP 28189689 A JP28189689 A JP 28189689A JP H03144366 A JPH03144366 A JP H03144366A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、固相を用いる免疫測定法において、免疫測定
用試薬中の抗体と同一の未結合抗体及びこの抗体と同一
の認識部位をもつ未結合抗体の中から少なくとも１つを
加える免疫測定法に関する。
用試薬中の抗体と同一の未結合抗体及びこの抗体と同一
の認識部位をもつ未結合抗体の中から少なくとも１つを
加える免疫測定法に関する。
（従来の技術）
免疫測定法において、特に酵素免疫測定法（以下ＥＩＡ
法と記す）及び放射免疫測定法（以下ＲＩＡ法と記す）
は、高感度な測定法として広（臨床検査の分野で使用さ
れている。しかしながら、例えば、ＥＩＡ法の中の化学
発光測定法では、高感度にもかかわらず、測定対象物が
多量に存在するとき、見掛は上少量しか認められない現
象（以下遅滞現象という）が起こることが知られている
。
法と記す）及び放射免疫測定法（以下ＲＩＡ法と記す）
は、高感度な測定法として広（臨床検査の分野で使用さ
れている。しかしながら、例えば、ＥＩＡ法の中の化学
発光測定法では、高感度にもかかわらず、測定対象物が
多量に存在するとき、見掛は上少量しか認められない現
象（以下遅滞現象という）が起こることが知られている
。
そこで、解決法として、途中に洗浄操作の入った２ステ
ップサンドインチ法や測定対象物の入った検体を希釈し
測定することが採用されている。測定対象物が低濃度か
ら高濃度まで存在する検体のとき、前処理操作がなくそ
のまま測定に用い、結果を得ることは困難であった。
ップサンドインチ法や測定対象物の入った検体を希釈し
測定することが採用されている。測定対象物が低濃度か
ら高濃度まで存在する検体のとき、前処理操作がなくそ
のまま測定に用い、結果を得ることは困難であった。
（発明が解決しようとする問題点）
遅滞現象による誤測定を回避する手段として固相抗体を
増すことは、固相の抗体を結合させる能力の点で限界が
あり、また標識抗体を増すことは固相への非特異的の吸
着を増すことにつながり、測定のブランク値を上げるこ
ととなる。また、検体と希釈した検体との２点において
測定を行なう方法や、途中に洗浄操作の入った２ステッ
プサンドインチ法等が採用されているものの、測定時間
がかかること、洗浄等の手間がかかることなど操作が煩
雑になることが避けられない。そこで簡便な処理操作で
短時間で正確な測定結果の得られる方法が求められてき
た。
増すことは、固相の抗体を結合させる能力の点で限界が
あり、また標識抗体を増すことは固相への非特異的の吸
着を増すことにつながり、測定のブランク値を上げるこ
ととなる。また、検体と希釈した検体との２点において
測定を行なう方法や、途中に洗浄操作の入った２ステッ
プサンドインチ法等が採用されているものの、測定時間
がかかること、洗浄等の手間がかかることなど操作が煩
雑になることが避けられない。そこで簡便な処理操作で
短時間で正確な測定結果の得られる方法が求められてき
た。
通常、本発明の方法のような抗体の添加は、当然測定感
度の低下を招くが、高感度検出系であるＥＩＡ法及びＲ
ＩＡ法では高感度であるため若干の感度低下を招いても
測定対象物が極微量の測定を求められている以外は、充
分測定に対応できる方法である。この方法により極微量
の測定対象物の測定感度は落ちるものの測定対象物が低
濃度から高濃度に至るまで広いレンジにおいて測定が可
能となり、従来の煩雑な処理操作を回避することができ
る。
度の低下を招くが、高感度検出系であるＥＩＡ法及びＲ
ＩＡ法では高感度であるため若干の感度低下を招いても
測定対象物が極微量の測定を求められている以外は、充
分測定に対応できる方法である。この方法により極微量
の測定対象物の測定感度は落ちるものの測定対象物が低
濃度から高濃度に至るまで広いレンジにおいて測定が可
能となり、従来の煩雑な処理操作を回避することができ
る。
（問題点を解決するだめの手段）
本発明者は、固相を用いる免疫測定法、特にｐ：ＩＡ法
及びＲＩＡ法において、測定対象物が多量に存在する場
合でも、免疫測定用試薬中の抗体と同一の未結合抗体及
びこの抗体と同一の認識部位をもつ未結合抗体の中から
少なくとも１つを加えることにより、遅滞現象を回避し
、容易に測定が可能となることを見い出し、本発明を完
成した。
及びＲＩＡ法において、測定対象物が多量に存在する場
合でも、免疫測定用試薬中の抗体と同一の未結合抗体及
びこの抗体と同一の認識部位をもつ未結合抗体の中から
少なくとも１つを加えることにより、遅滞現象を回避し
、容易に測定が可能となることを見い出し、本発明を完
成した。
ＥＩＡ法及びＲＩＡ法において、１ステツプ法は、例え
ば測定対象物に対する抗体を固相に固定化した固相結合
抗体、抗体と標識物とを結合させた標識抗体及び検体中
の測定対象物とを同時に反応させた後、固相に結合した
抗体結合標識物を測定することにより検体中の測定対象
物の量を求める方法である。
ば測定対象物に対する抗体を固相に固定化した固相結合
抗体、抗体と標識物とを結合させた標識抗体及び検体中
の測定対象物とを同時に反応させた後、固相に結合した
抗体結合標識物を測定することにより検体中の測定対象
物の量を求める方法である。
本発明は、ＥＩＡ法又はＲＩＡ法において、さらに反応
混合液に免疫測定用試薬中の抗体と同一の未結合抗体及
びこの抗体と同一の認識部位をもつ未結合抗体の中から
少なくとも１つを加えることにある。
混合液に免疫測定用試薬中の抗体と同一の未結合抗体及
びこの抗体と同一の認識部位をもつ未結合抗体の中から
少なくとも１つを加えることにある。
本発明において使用する抗体は、公知の方法に従い取得
したものを使用することができる。例えば、兎、山羊、
馬、モルモット、ニワトリなどの温血動物に測定対象物
である抗原又はその誘導体を体重１ ｋｇ当り０．３〜
２■程度１〜数回背中皮下、フットパッド、大腿筋等に
アジュバントとともに注射して当該動物の体内に抗体を
形成させることができる。得られた抗体はペプシン等の
蛋白質分解酵素でＦ （ａｂ’）ｔ、 Ｆａｂ’、 Ｆ
ａｂなどに分解して用いることもできる。
したものを使用することができる。例えば、兎、山羊、
馬、モルモット、ニワトリなどの温血動物に測定対象物
である抗原又はその誘導体を体重１ ｋｇ当り０．３〜
２■程度１〜数回背中皮下、フットパッド、大腿筋等に
アジュバントとともに注射して当該動物の体内に抗体を
形成させることができる。得られた抗体はペプシン等の
蛋白質分解酵素でＦ （ａｂ’）ｔ、 Ｆａｂ’、 Ｆ
ａｂなどに分解して用いることもできる。
一方、モノクローナル抗体として取得することもできる
。その場合には、マウスに前記の測定対象物を抗原きし
、アジュバントとともに数回腹腔等に注射する。その際
測定対象物が低分子量である場合、適当な蛋白質等の高
分子物質と結合し抗原とすることもできる。その後、肥
大した肺臓細胞を取り出してポリエチレングリコール等
を用いてマウスミエローマ細胞と融合させ、この融合細
胞の中から当該抗体を産生ずるものをクローニングによ
ってモノクローン細胞として増殖させる。
。その場合には、マウスに前記の測定対象物を抗原きし
、アジュバントとともに数回腹腔等に注射する。その際
測定対象物が低分子量である場合、適当な蛋白質等の高
分子物質と結合し抗原とすることもできる。その後、肥
大した肺臓細胞を取り出してポリエチレングリコール等
を用いてマウスミエローマ細胞と融合させ、この融合細
胞の中から当該抗体を産生ずるものをクローニングによ
ってモノクローン細胞として増殖させる。
こうして得られたモノクローン細胞をマウス腹腔中で増
殖させることによって得たモノクローナル抗体を使用す
ることができる。
殖させることによって得たモノクローナル抗体を使用す
ることができる。
本発明において、加える未結合抗体の量は、予想される
測定対象物の量に応じ適宜定めることができ、未結合抗
体としてＩｇＣ，用いるときには測定検体１ｍｌあたり
０．１ｎｇ〜５ｍｇの範囲とすることができる。例えば
、測定対照物がＡＦＰでは測定検体１ｍｆｆ１あたりｌ
ｎｇ〜２．５ｍｇ、ＣＥＡでは０．１ｎｇ〜２ ＋ｍｇ
、 ＣＡ １９−９ではＱ、 ｌｎｇ〜３００ ｐｇ等
の範囲である。また、ＩｇＧを酵素分解したフラグメン
トを使用する時には、分子量に応じ上記の加える抗体量
を決めることができる。
測定対象物の量に応じ適宜定めることができ、未結合抗
体としてＩｇＣ，用いるときには測定検体１ｍｌあたり
０．１ｎｇ〜５ｍｇの範囲とすることができる。例えば
、測定対照物がＡＦＰでは測定検体１ｍｆｆ１あたりｌ
ｎｇ〜２．５ｍｇ、ＣＥＡでは０．１ｎｇ〜２ ＋ｍｇ
、 ＣＡ １９−９ではＱ、 ｌｎｇ〜３００ ｐｇ等
の範囲である。また、ＩｇＧを酵素分解したフラグメン
トを使用する時には、分子量に応じ上記の加える抗体量
を決めることができる。
本発明で用いる固相としては、ポリスチレンビーズ、ナ
イロンビーズ、マイクロプレート、各種磁性粒子等であ
る。この固相に対して、固相結合抗体は、測定対象物に
対する抗体を公知の方法により物理的にあるいは化学的
に結合し得ることができる（「酵素免疫測定法」第２版
、医学書院、１９８７年参照）。
イロンビーズ、マイクロプレート、各種磁性粒子等であ
る。この固相に対して、固相結合抗体は、測定対象物に
対する抗体を公知の方法により物理的にあるいは化学的
に結合し得ることができる（「酵素免疫測定法」第２版
、医学書院、１９８７年参照）。
ＥＩＡ法において酵素標識抗体は、前記で製造した抗体
と酵素を化学的に結合し製造できる。結合方法は、過ヨ
ウ素酸法、マレイミド法等を用いることができる（蛋白
質 核酸 酵素、別冊Ｎｏ。
と酵素を化学的に結合し製造できる。結合方法は、過ヨ
ウ素酸法、マレイミド法等を用いることができる（蛋白
質 核酸 酵素、別冊Ｎｏ。
３１．３７〜４５ （１９８５）参照）。ここで使用す
る酵素は、基質に対して適宜選択することができ、例え
ば、パーオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β
−ガラクトシダーゼ等を用いることができる。
る酵素は、基質に対して適宜選択することができ、例え
ば、パーオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β
−ガラクトシダーゼ等を用いることができる。
酵素の作用する基質及びこの基質を用いた測定方法につ
いては、「酵素免疫測定法」医学書院（１９８７年版）
に記載の基質及び方法に従い行なうことができる。
いては、「酵素免疫測定法」医学書院（１９８７年版）
に記載の基質及び方法に従い行なうことができる。
ＲｒＡ法においては、ＥＩＡ法の酵素の代りに＋２５１
などの放射性同位元素を標識し行なうことができる。例
えば抗体の標識には市販されているポルトンハンター試
薬を用いることができる。さらに測定にはシンチレーシ
ョンカウンターが用いられる。
などの放射性同位元素を標識し行なうことができる。例
えば抗体の標識には市販されているポルトンハンター試
薬を用いることができる。さらに測定にはシンチレーシ
ョンカウンターが用いられる。
本発明における測定対象物としては、血清あるいは尿な
どに含まれる薬物、ホルモンあるいは各種疾患に由来す
る微量成分などを挙げることができる。
どに含まれる薬物、ホルモンあるいは各種疾患に由来す
る微量成分などを挙げることができる。
（実施例）
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
１ｉ！ｉ、ｌＬ 抗ヒトα−フェトプロティン（ＡＦ
Ｐ）マウス抗体粒子の調製 ０．３μｍの粒径を持つ磁性粒子（日本ペイント■製）
１０ｍｇをチューブにとり、２００μｌのエチレングリ
コールを加え、攪拌後超音波処理を行ない、粒子を分散
させた。この粒子を磁石を使ってチューブの一端に集め
上清のエチレングリコールを除去した。続いて蒸留水を
１ｍｊ２加え、攪拌後再び磁石を用いて上清の蒸留水を
除去した。この操作を７−８回繰り返し、粒子を洗浄し
た。洗浄した粒子にＩＢ／ｍｆとなるように調製した抗
ヒトＡＦＰマウスＩｇＧ溶液（０，１Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ
５，５）２００μｌを加え、４°Ｃ１−晩緩やかに攪拌
した。次にこれを上記方法を用いて蒸留水で洗浄し、２
％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液、０．１５ Ｍ
ＮａＣ１を含む５０ｍＭ１−リス緩衝液ｐ Ｈ７，２に
けん濁して、室温、２時間緩やかに撹拌した。次のこれ
を上記方法を用いて２％ＢＳＡ溶液で４回洗い、２％Ｂ
ＳＡ、 ０．１５Ｍ ＮａＣ１！、、１ ｍＭ ＭｇＣ
１，ｚ 、Ｑ、 １％ＮａＮ、を含む５０ｍｊｌ！のト
リス緩衝液ｐ Ｈ７，２にけん濁し、抗ヒｌ−Ａ Ｆ
））マウス抗体粒子を調製した。
Ｐ）マウス抗体粒子の調製 ０．３μｍの粒径を持つ磁性粒子（日本ペイント■製）
１０ｍｇをチューブにとり、２００μｌのエチレングリ
コールを加え、攪拌後超音波処理を行ない、粒子を分散
させた。この粒子を磁石を使ってチューブの一端に集め
上清のエチレングリコールを除去した。続いて蒸留水を
１ｍｊ２加え、攪拌後再び磁石を用いて上清の蒸留水を
除去した。この操作を７−８回繰り返し、粒子を洗浄し
た。洗浄した粒子にＩＢ／ｍｆとなるように調製した抗
ヒトＡＦＰマウスＩｇＧ溶液（０，１Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ
５，５）２００μｌを加え、４°Ｃ１−晩緩やかに攪拌
した。次にこれを上記方法を用いて蒸留水で洗浄し、２
％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液、０．１５ Ｍ
ＮａＣ１を含む５０ｍＭ１−リス緩衝液ｐ Ｈ７，２に
けん濁して、室温、２時間緩やかに撹拌した。次のこれ
を上記方法を用いて２％ＢＳＡ溶液で４回洗い、２％Ｂ
ＳＡ、 ０．１５Ｍ ＮａＣ１！、、１ ｍＭ ＭｇＣ
１，ｚ 、Ｑ、 １％ＮａＮ、を含む５０ｍｊｌ！のト
リス緩衝液ｐ Ｈ７，２にけん濁し、抗ヒｌ−Ａ Ｆ
））マウス抗体粒子を調製した。
ｉｍ 抗ヒトＡＦＰマウスＦａｂ’−Ａ Ｌ Ｐ結合
体の調製 抗ヒトＡＦＰＩｇＣ，１０ｍｇを３ｍｌの０．１ＭＭリ
ン酸緩衝液ｐＨ５，５ニ溶かし、０．０６７ｍｇ（７）
ヘプシンを加え、３７゛ｃにて１時間撹拌した。０．１
Ｎ ＮａＯＨ水溶液によりｐ Ｈ７，０とした後、Ｉｍ
ＭＥＤＴＡを含む０．１ Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ６，３
で平衡化したスーパーロース１２カラムに加え、上記緩
衝液を用いてゲル濾過により抗ヒトＡＦＰマウスＩ ｇ
Ｇ Ｆ （ａｂ’）ｚを３Ｂ得た。
体の調製 抗ヒトＡＦＰＩｇＣ，１０ｍｇを３ｍｌの０．１ＭＭリ
ン酸緩衝液ｐＨ５，５ニ溶かし、０．０６７ｍｇ（７）
ヘプシンを加え、３７゛ｃにて１時間撹拌した。０．１
Ｎ ＮａＯＨ水溶液によりｐ Ｈ７，０とした後、Ｉｍ
ＭＥＤＴＡを含む０．１ Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ６，３
で平衡化したスーパーロース１２カラムに加え、上記緩
衝液を用いてゲル濾過により抗ヒトＡＦＰマウスＩ ｇ
Ｇ Ｆ （ａｂ’）ｚを３Ｂ得た。
この溶液をＰ Ｅ ０２００００にて１ｍｆまで濃縮し
、１１１μｌの０．１Ｍ２−メルカプトエチルアミン塩
酸塩の水溶液を加え、３７°Ｃで３時間放置した。この
溶液を０．１ Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ６，３で平衡化し
たセファデックスＧ−２５カラムに加え、２−メルカプ
トエチルアミンを脱塩し、Ｆａｂ’ ２■を得た。
、１１１μｌの０．１Ｍ２−メルカプトエチルアミン塩
酸塩の水溶液を加え、３７°Ｃで３時間放置した。この
溶液を０．１ Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ６，３で平衡化し
たセファデックスＧ−２５カラムに加え、２−メルカプ
トエチルアミンを脱塩し、Ｆａｂ’ ２■を得た。
また、アルカリフォスファターゼ（ベーリンガー社製、
ＡＬＰ）５ｍｇを０．１ Ｍリン酸ｐ Ｈ７，０ニ？容
カし、Ｎ−（ｒ−マレイミドフ゛チルオキシ）スクシン
イミド（ＣＭＢＳ）５■をＤＭＦ １００μｌに溶かし
て加え、室温にて２時間放置した。この溶液を０．１
Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０で平衡化したセファデック
スＧ−２５カラムに加え、未反応のＣＭＢＳを除去し、
ＡＬＰ−ＧＭＢを４■得た。
ＡＬＰ）５ｍｇを０．１ Ｍリン酸ｐ Ｈ７，０ニ？容
カし、Ｎ−（ｒ−マレイミドフ゛チルオキシ）スクシン
イミド（ＣＭＢＳ）５■をＤＭＦ １００μｌに溶かし
て加え、室温にて２時間放置した。この溶液を０．１
Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０で平衡化したセファデック
スＧ−２５カラムに加え、未反応のＣＭＢＳを除去し、
ＡＬＰ−ＧＭＢを４■得た。
このＡＬＰ−ＧＭＢ４ｍｇと上記方法によって得られた
Ｆａｂ’１．３■とを混合し、室温、１時間静置した。
Ｆａｂ’１．３■とを混合し、室温、１時間静置した。
得られたＦａｂ’−ＡＬＰ複合体を５０ｍＭ酢酸緩衝液
ｐ Ｈ５，０で平衡化したＭｏｎｏ Ｓカラムに加え、
Ｏ−ＩＭのＮａＣｌの濃度勾配をかけ Ｆ ａｂ’：Ａ
ＬＰ＝１ ： ｌの結合体を溶出し、抗ヒトＡＦＰマウ
スＦａｂ’−ＡＬＰ結合体２■を得た。
ｐ Ｈ５，０で平衡化したＭｏｎｏ Ｓカラムに加え、
Ｏ−ＩＭのＮａＣｌの濃度勾配をかけ Ｆ ａｂ’：Ａ
ＬＰ＝１ ： ｌの結合体を溶出し、抗ヒトＡＦＰマウ
スＦａｂ’−ＡＬＰ結合体２■を得た。
実施■ユ 発光基質の調製
４０■の３− （２’−スピロアダマンクン）４−メト
キシ−４−（３“−ホスホリンオキシ）フェニル−１，
２−ジオキセタン ２ナトリウム（以下ＡＭＰＰＤと記
す）を２００ｍ１の１ｍＭＭｇＣｆ ｔを含む０．１
Ｍ ）リス緩衝液ｐ Ｈ９，８に溶かし、よく撹拌した
。さらに８０■のポリ〔ビニルベンジル（ペンジルメチ
ルーアンモニウムクロライド））（ＢＤＭＱ）を２００
ｙｎｊ！の上記緩衝液に溶かしよく撹拌した。これら２
００ｍｌの０．２ｍｇ／ｍｊ２ＡＭＰＰＤと２００ｍ１
の０．４ｍｇ／ｍｊ２ＢＤＭＱとを混合し、よく撹拌し
た、発光基質溶液とした。
キシ−４−（３“−ホスホリンオキシ）フェニル−１，
２−ジオキセタン ２ナトリウム（以下ＡＭＰＰＤと記
す）を２００ｍ１の１ｍＭＭｇＣｆ ｔを含む０．１
Ｍ ）リス緩衝液ｐ Ｈ９，８に溶かし、よく撹拌した
。さらに８０■のポリ〔ビニルベンジル（ペンジルメチ
ルーアンモニウムクロライド））（ＢＤＭＱ）を２００
ｙｎｊ！の上記緩衝液に溶かしよく撹拌した。これら２
００ｍｌの０．２ｍｇ／ｍｊ２ＡＭＰＰＤと２００ｍ１
の０．４ｍｇ／ｍｊ２ＢＤＭＱとを混合し、よく撹拌し
た、発光基質溶液とした。
尖施炭土 ヒトＡＦＰの測定
各濃度のヒトＡＦＰ検体５０μｌをプラスチックチュー
ブに取り、５０μ１０１■／ ｍ ｌに調製した抗ヒト
ＡＦＰマウスＦａｂ’−ＡＬＰ結合体溶液（実施例２）
を加え、混合後３０分室温で静置した。さらにこの溶液
に粒子感作に使用した抗ヒ）ＡＦＰマウスＩｇＧ２．５
μｇを含む５００μｌの０．０２％抗ヒトＡＦＰマウス
ＩｇＧ感作粒子けん濁液を加え、混合後１５分室温で静
置した。この磁性粒子けん濁液中の粒子を磁石を使って
チューブの一端を集め上清を除去した。続いて１ｍｆの
生理食塩水を加え、再けん濁し再び磁石を用いて上清の
生理食塩水を除去した。この操作をさらに３回繰り返し
粒子を洗浄した。この粒子に３００μｌの気質溶液を加
え撹拌し、５分間室温で静置した後、発光測定機（ｂｅ
ｒｔｈｏｌｄ社製Ｃ１ｉｎＣ１１ｎｉＬｕで発光測定を
行なった。（５秒積算） 結果を第１図に示す。
ブに取り、５０μ１０１■／ ｍ ｌに調製した抗ヒト
ＡＦＰマウスＦａｂ’−ＡＬＰ結合体溶液（実施例２）
を加え、混合後３０分室温で静置した。さらにこの溶液
に粒子感作に使用した抗ヒ）ＡＦＰマウスＩｇＧ２．５
μｇを含む５００μｌの０．０２％抗ヒトＡＦＰマウス
ＩｇＧ感作粒子けん濁液を加え、混合後１５分室温で静
置した。この磁性粒子けん濁液中の粒子を磁石を使って
チューブの一端を集め上清を除去した。続いて１ｍｆの
生理食塩水を加え、再けん濁し再び磁石を用いて上清の
生理食塩水を除去した。この操作をさらに３回繰り返し
粒子を洗浄した。この粒子に３００μｌの気質溶液を加
え撹拌し、５分間室温で静置した後、発光測定機（ｂｅ
ｒｔｈｏｌｄ社製Ｃ１ｉｎＣ１１ｎｉＬｕで発光測定を
行なった。（５秒積算） 結果を第１図に示す。
！ 比色法によるヒ）ＡＦＰの測定
各濃度のヒトＡＦＰ溶液を用い、イムザイン−ＡＦＰ
（富士レビオ社製）試薬により比色法の測定曲線を得た
。結果を第１図に示す。
（富士レビオ社製）試薬により比色法の測定曲線を得た
。結果を第１図に示す。
（発明の効果）
本発明は、固相を用いるＥＩＡ法、ＲＩＡ法等の免疫測
定法において、免疫測定用試薬中の抗体と同一の未結合
抗体及びこの抗体と同一の認識部位をもつ未結合抗体の
中から少なくとも一つを加えることにより、広い測定レ
ンジをもち多量の測定対照物が存在しても遅滞現象を起
こすことなく測定が可能となり、極めて有用な測定方法
である。
定法において、免疫測定用試薬中の抗体と同一の未結合
抗体及びこの抗体と同一の認識部位をもつ未結合抗体の
中から少なくとも一つを加えることにより、広い測定レ
ンジをもち多量の測定対照物が存在しても遅滞現象を起
こすことなく測定が可能となり、極めて有用な測定方法
である。
第１図は、ＥＩＡ法の比色法による各濃度のＡＦＰ測定
曲！１９１（−・−）及び本発明の化学発光ＥＩＡ法に
よる各濃度ＡＦＰ測定曲線（−０−）である。
曲！１９１（−・−）及び本発明の化学発光ＥＩＡ法に
よる各濃度ＡＦＰ測定曲線（−０−）である。
Claims (1)
- （１）固相を用いる免疫測定法において、免疫測定用試
薬中の抗体と同一の未結合抗体及びこの抗体と同一の認
識部位をもつ未結合抗体の中から少なくとも１つを加え
ることを特徴とする該測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28189689A JPH03144366A (ja) | 1989-10-31 | 1989-10-31 | 免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28189689A JPH03144366A (ja) | 1989-10-31 | 1989-10-31 | 免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03144366A true JPH03144366A (ja) | 1991-06-19 |
Family
ID=17645469
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28189689A Pending JPH03144366A (ja) | 1989-10-31 | 1989-10-31 | 免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03144366A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994018566A1 (fr) * | 1993-02-04 | 1994-08-18 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Procede de dosage d'un anticorps specifique |
-
1989
- 1989-10-31 JP JP28189689A patent/JPH03144366A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994018566A1 (fr) * | 1993-02-04 | 1994-08-18 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Procede de dosage d'un anticorps specifique |
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