JPH03155793A - 新規物質ｄｃ１１４―ｃ - Google Patents
新規物質ｄｃ１１４―ｃInfo
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- JPH03155793A JPH03155793A JP1294290A JP29429089A JPH03155793A JP H03155793 A JPH03155793 A JP H03155793A JP 1294290 A JP1294290 A JP 1294290A JP 29429089 A JP29429089 A JP 29429089A JP H03155793 A JPH03155793 A JP H03155793A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、新規物質ＤＣ１１４−Ｃに関する。
ｏｃ ｌＩ ４−Ｃは抗菌および抗腫瘍作用を有し、抗
菌剤、抗腫瘍列として有用である。
菌剤、抗腫瘍列として有用である。
従来の技術
キノン骨格を持つ抗腫瘍抗生物質として、’ｆ ：／ス
ラサイタリン系化合物、マイトマイシン系化１）物など
多くの化合物が報告されている。〔シーアールシー ハ
ンドブック オブ アンタイ バイオチック コンパウ
ンダ、シーアールシー ブレス （ＣＲＣ１ｌａｎｄｂ
ｏｏｋ ｏｆ 八ｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｃｏｍｐ
ｏｕｎｄｓ。
ラサイタリン系化合物、マイトマイシン系化１）物など
多くの化合物が報告されている。〔シーアールシー ハ
ンドブック オブ アンタイ バイオチック コンパウ
ンダ、シーアールシー ブレス （ＣＲＣ１ｌａｎｄｂ
ｏｏｋ ｏｆ 八ｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｃｏｍｐ
ｏｕｎｄｓ。
ＣＲＣＰｒｅｓｓ） Ｕ、Ｓ、＾、１９８Ｎ。
本発明に関連した骨格を有する化合物は知られていない
。
。
発明が解決しようとする課題
本発明の目的は、優れた抗菌物質、抗腫瘍性化合物を提
供することにある。
供することにある。
５題を解決するための手段
本発明者らは、茨城県阿見町の土壌から分離した微生物
（以下、ＤＯ−１１４株という。）を培地に培養して得
られる培養物中に抗菌および抗腫瘍作用を有する物質が
生産されることを見出した。この物質をＣ＾離、精製し
、理化学的性質を調べた結果、新規物質であることがわ
かり、ＤＣ１１４−Ｃと命名した。
（以下、ＤＯ−１１４株という。）を培地に培養して得
られる培養物中に抗菌および抗腫瘍作用を有する物質が
生産されることを見出した。この物質をＣ＾離、精製し
、理化学的性質を調べた結果、新規物質であることがわ
かり、ＤＣ１１４−Ｃと命名した。
本発明によれば、下記式
で表わされる抗菌および抗肺瘍作用を有する新規物質Ｄ
Ｃ１１４−Ｃが提供される。
Ｃ１１４−Ｃが提供される。
この化合物はストレプトマイセス属に嘱する微生物を培
養することによって得られる。
養することによって得られる。
以下に本発明の詳細な説明する。
ＤＣ１１４−Ｃの理化学的性質
■分子量：５５０
■分子式： Ｃ２，Ｈ、、Ｏ目
■質噴分析：Ｓ［ＭＳ
■比旋光度： 〔α〕ｔ“ ＝
［Ｆ］紫外線吸収スペクトル：
λ−ロ ： ２１８ｎｍ （ε
２７４ｎｍ （ε
５５１（Ｍ−１−１） ″
６６’ （ｃｍ０．１１ 、 ７セトン）（メタノ
ール中で測定） ３５．０００１ ４０．０００ ） ３７０ｎｍ （ｓｈ、 Ｅ ＝９．３００）３８１ｎ
ｍ （ε＝１２．ＯＯＯ） ■赤外線吸収スペクトル：（ＫＢｒｌ剤法ｌ側法）（ｃ
ｍ −’） ３４１７．１？２６．１６８９．１６４５
．１６１４．１４１１゜１３？３．１２８２．１１１２ ■ＰＭＲスペクトル： （ＤＭＳＯ−ｄ、で測定。
ール中で測定） ３５．０００１ ４０．０００ ） ３７０ｎｍ （ｓｈ、 Ｅ ＝９．３００）３８１ｎ
ｍ （ε＝１２．ＯＯＯ） ■赤外線吸収スペクトル：（ＫＢｒｌ剤法ｌ側法）（ｃ
ｍ −’） ３４１７．１？２６．１６８９．１６４５
．１６１４．１４１１゜１３？３．１２８２．１１１２ ■ＰＭＲスペクトル： （ＤＭＳＯ−ｄ、で測定。
内部標準ＴＭＳ）
トＮＭＲ（ＤＯＯＭＨｚ） ：δ（ｐｐｍ）１０．４０
（ＩＩＩ、ｂｒ、ｓ）、 ８．１６（ｉｌｌ、 ｓ）、
７．７０（ＬＨ，ｂｒ。
（ＩＩＩ、ｂｒ、ｓ）、 ８．１６（ｉｌｌ、 ｓ）、
７．７０（ＬＨ，ｂｒ。
ｓ）、 ７．６８ （Ｉｆｆ、 ｓ）、 ６．４０（Ｉ
Ｉｌ、 ｓ）、 ５．７４（ＩＨ。
Ｉｌ、 ｓ）、 ５．７４（ＩＨ。
ｓ）、 ５．４７（Ｉｆｔ、 ｄ、 Ｊ＝７．．１Ｈｚ
）、 ４．５８ （ＩＨ，ｄｄ。
）、 ４．５８ （ＩＨ，ｄｄ。
Ｊ４１．８．２．９１１ｚ）、 ４．５１ （ｌＨ，ｄ
ｑ、、Ｉ＝６．６，６．５１１ｚ）。
ｑ、、Ｉ＝６．６，６．５１１ｚ）。
４．５０ （Ｉｆｆ、 ｍ、＞、 ３．９７（ｌ）１．
ｓ＞、 ３．２７（１）１．ｄｄｄ。
ｓ＞、 ３．２７（１）１．ｄｄｄ。
Ｊ＝６．６．４．４．２．６ Ｈｚ）、 ３．１９（ｉ
ｌｌ、 ｄ、 Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
ｌｌ、 ｄ、 Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
３．００（１Ｎ、 ｄｄ、 Ｊ＝１３．４．１１．８Ｈ
ｚ）、 ２．９６（ＬＨ，ｄｄ。
ｚ）、 ２．９６（ＬＨ，ｄｄ。
Ｊ＝４．８．４．４Ｈｚ）、 ２．８９（ＩＨ，ｄｄ、
Ｊ＝４．８．２．６Ｈｚ）。
Ｊ＝４．８．２．６Ｈｚ）。
２．７８３＜３Ｈ，ｓ）、 ２．７８０（ＩＨ，ｄｄ、
Ｊ＝１３．４，２．９Ｈｚ）。
Ｊ＝１３．４，２．９Ｈｚ）。
１．８９（３ｆｌ 、 ｓ＞、 １．１Ｊ（３Ｈ，ｄ
、 Ｊ＝６．５Ｈｚ）■ＣＭＲスペクトル： （Ｄ Ｍ
Ｓ ＯＪｓで測定、内部標章ＴＭＳ） ３Ｃ−Ｎ！ＪＲ（１２５ＭＨｚ） ：δ （ｐｐｍ＞２
０６．２． １９２．２． １７８．２． １６
３．１３゜１５４．６． １５２．２． １３６．
３．、 １２Ｂ、０゜１２７．３． １２２．０．
１１９．６． １１９．５゜１１９．３．．１１
２．ｌ、 １１０．６． ７５．３゜７４．４
、 ６６．５ 、 ６５．７ 、 ６４
．５ 。
、 Ｊ＝６．５Ｈｚ）■ＣＭＲスペクトル： （Ｄ Ｍ
Ｓ ＯＪｓで測定、内部標章ＴＭＳ） ３Ｃ−Ｎ！ＪＲ（１２５ＭＨｚ） ：δ （ｐｐｍ＞２
０６．２． １９２．２． １７８．２． １６
３．１３゜１５４．６． １５２．２． １３６．
３．、 １２Ｂ、０゜１２７．３． １２２．０．
１１９．６． １１９．５゜１１９．３．．１１
２．ｌ、 １１０．６． ７５．３゜７４．４
、 ６６．５ 、 ６５．７ 、 ６４
．５ 。
６４．１ 、 ５７．２ 、 ５６．７ 、
４８．６ 。
４８．６ 。
４３．７． ｌ１３．０． ２３．１．
１４．３゜１２．６ ■溶解性：クロロホルム、ジメチルスルホキシド（ＤＭ
ＳＯ）、メタノーノ呟酢酸エチルおよびアセトンに可、
容、水およびｎ−ヘキサンには難溶。
１４．３゜１２．６ ■溶解性：クロロホルム、ジメチルスルホキシド（ＤＭ
ＳＯ）、メタノーノ呟酢酸エチルおよびアセトンに可、
容、水およびｎ−ヘキサンには難溶。
９呈色反応：ヨード試薬に陽性。
■物質の色、性質：茶褐色の酸性物質
■薄層クロマトグラフィー：シリカゲル薄層（ＨＰＴＬ
Ｃｐｌａｔｅ Ａ已、 １５６４７． Ｍｅｒｃｋ社
製）トルエン：アセトン（２：１ν／Ｖ）の展開溶媒で
Ｒｆ値は０．２０゜ クロロホルム：メタノール：酢Ｍ （２０： １ ：ｌ
ｖ／ｖ／Ｖ ）の展開溶媒でＲｒ値は０，３０゜展開
後ＤＣ１１４−Ｃのスポットは、バチルス ズブチリス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）を用いるバイ
オアッセイ、熱硫酸、および紫外部吸収により検８でき
る。
Ｃｐｌａｔｅ Ａ已、 １５６４７． Ｍｅｒｃｋ社
製）トルエン：アセトン（２：１ν／Ｖ）の展開溶媒で
Ｒｆ値は０．２０゜ クロロホルム：メタノール：酢Ｍ （２０： １ ：ｌ
ｖ／ｖ／Ｖ ）の展開溶媒でＲｒ値は０，３０゜展開
後ＤＣ１１４−Ｃのスポットは、バチルス ズブチリス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）を用いるバイ
オアッセイ、熱硫酸、および紫外部吸収により検８でき
る。
次にＤＣ１１４−Ｃの生物活性について説明する。
（Ａ＞抗菌作用
各種、細菌に対する最小生育阻止濃度（！ＩＩｃ）を寒
天希釈法（ρ１１７．０＞により測定した。
天希釈法（ρ１１７．０＞により測定した。
その結果を第１表に示す。
第［表
ＡＴＣＣ１０５４１
Ｎｕ１０７０７
（Ｂ） Ｂａ ｌ ｂ ３Ｔ３／Ｈ−ｒａｓ細胞に対す
る生育阻害 ＦＩＯ培地（ＧＩＢＣＯ社！り 、０．Ｉｇ／ｍｌ牛脂
児、１００（Ｉｎ ｉ ｔ／ｍ Ｉペニシリンおよび１
００μｇ／１Ｔ１１ストレプトマイシンの組成からなる
培地（以下培地へという。）にＢａ ｌ ｂ３Ｔ３／Ｈ
−ｒａｓ細胞を懸濁したＢａ ｌ ｂ３Ｔ３／Ｈ−ｒａ
ｓ細胞懸濁液（２Ｘ１０’個／ｍ１）を０．１ｍｌずつ
９６穴マイクロタイタープレートの芸大に分注した。該
プレートを炭酸ガス細菌培養器で３７℃、２０時間培養
後、これに培地Ａにより適宜希釈した検体０．０５ｍ１
ずつを芸大に加え炭酸ガス細菌培養器で３７℃、７２時
間培養した。培養上清を除去後、培地へに０．０２％と
なるようにニュートラルレッドを含ませた培地０，１ｍ
ｌずつを芸大に加え３７℃、１時間炭酸ガス細菌培養器
内で培養し、細胞を染色した。培養上清を除去後、残渣
を生理食塩水で１回洗浄した。ついで０．００１Ｎ塩酸
／３０％エタノールで色素を抽出後、マイクロプレート
リーダーにより５５０ｎｍの吸光度を測定し、二。無処
理細胞と既知濃度の検体で処理した細胞の吸光度を比較
することにより細胞の増殖を５０％阻害する検体濃度（
Ｉ Ｃｓ。）を算出した。その結果を第２表に示す。
る生育阻害 ＦＩＯ培地（ＧＩＢＣＯ社！り 、０．Ｉｇ／ｍｌ牛脂
児、１００（Ｉｎ ｉ ｔ／ｍ Ｉペニシリンおよび１
００μｇ／１Ｔ１１ストレプトマイシンの組成からなる
培地（以下培地へという。）にＢａ ｌ ｂ３Ｔ３／Ｈ
−ｒａｓ細胞を懸濁したＢａ ｌ ｂ３Ｔ３／Ｈ−ｒａ
ｓ細胞懸濁液（２Ｘ１０’個／ｍ１）を０．１ｍｌずつ
９６穴マイクロタイタープレートの芸大に分注した。該
プレートを炭酸ガス細菌培養器で３７℃、２０時間培養
後、これに培地Ａにより適宜希釈した検体０．０５ｍ１
ずつを芸大に加え炭酸ガス細菌培養器で３７℃、７２時
間培養した。培養上清を除去後、培地へに０．０２％と
なるようにニュートラルレッドを含ませた培地０，１ｍ
ｌずつを芸大に加え３７℃、１時間炭酸ガス細菌培養器
内で培養し、細胞を染色した。培養上清を除去後、残渣
を生理食塩水で１回洗浄した。ついで０．００１Ｎ塩酸
／３０％エタノールで色素を抽出後、マイクロプレート
リーダーにより５５０ｎｍの吸光度を測定し、二。無処
理細胞と既知濃度の検体で処理した細胞の吸光度を比較
することにより細胞の増殖を５０％阻害する検体濃度（
Ｉ Ｃｓ。）を算出した。その結果を第２表に示す。
第２表
（Ｃ）急性毒性 （ＬＤ、。〉
マウスへの静脈内投与では１７．６ ｍｇ／ｋｇであっ
た。
た。
（Ｄ＞サルコーマ１８０＠瘍に対する治療効果体瑣約２
０ｇのｄｄｙ雄マウマウス１群６匹ルコーマ＋８０１１
１瘍５Ｘ１０’個を腋窩部皮下に移植した。移植後１日
目から５日目まで２４時間毎に５回、第３表に示す濃度
のＤＣ１１４−Ｃを含むリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）溶液０．２ｍｌを静脈内に投与した。比較例として
腫瘍細胞移植後２４時間目にマイトマイシンＣを含むＰ
ＢＳ溶液０．２ｍｌを静脈内に投与した群を設けた。
０ｇのｄｄｙ雄マウマウス１群６匹ルコーマ＋８０１１
１瘍５Ｘ１０’個を腋窩部皮下に移植した。移植後１日
目から５日目まで２４時間毎に５回、第３表に示す濃度
のＤＣ１１４−Ｃを含むリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）溶液０．２ｍｌを静脈内に投与した。比較例として
腫瘍細胞移植後２４時間目にマイトマイシンＣを含むＰ
ＢＳ溶液０．２ｍｌを静脈内に投与した群を設けた。
移植１０日後のＴ／ＣＣＴ：試験例の平均腫瘍体１ （
ｍｍ’）、Ｃ：対照（ＰＢＳ溶液０，２ｄを静脈内投与
したもの）の平均腫瘍体積（ｍｍ″）ｉを測定した。
ｍｍ’）、Ｃ：対照（ＰＢＳ溶液０，２ｄを静脈内投与
したもの）の平均腫瘍体積（ｍｍ″）ｉを測定した。
その結果を第３表に示す。
第３表
次にｏｃ ｔ ｌ ４−Ｃの製造法について説明する。
ＤＣ１１４−Ｃはストレプトマイセス属に属し、ＤＣｌ
１４−Ｃを生産する能力を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にＤＣ１１４−Ｃを生成蓄積させ、該培養
物からＤＣ１１４−Ｃを採取することによって得ること
ができる。
１４−Ｃを生産する能力を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にＤＣ１１４−Ｃを生成蓄積させ、該培養
物からＤＣ１１４−Ｃを採取することによって得ること
ができる。
［）Ｃ１１４−Ｃ生産菌株としてはストレプトマイセス
属に属し、ＤＣ１１４−Ｃ生産能を有する菌株であれば
いずれの菌株でも用いることができる。またこれらの菌
株の人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ線照射、
変異誘起剤処理などによって変異させた変異株あるいは
自然的に変異した変異株でもＤＣ１１４−Ｃを生産する
ものであれば本発明に用いることができる。代表的菌株
としてＤｏ−１１４株があげられる。
属に属し、ＤＣ１１４−Ｃ生産能を有する菌株であれば
いずれの菌株でも用いることができる。またこれらの菌
株の人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ線照射、
変異誘起剤処理などによって変異させた変異株あるいは
自然的に変異した変異株でもＤＣ１１４−Ｃを生産する
ものであれば本発明に用いることができる。代表的菌株
としてＤｏ−１１４株があげられる。
Ｄｏ−１１４株の菌学的性質について以下に述べる。該
性質の決定は、国際ストレプトマイセス（ＳＬｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ）プロジェクト （［ＳＰ＞がストレプト
マイセス種の特性決定のために推奨する方？上二［Ｅ、
Ｂ、シエリング（Ｅ、Ｂ、 Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）および
り、：］−ットリープ（Ｄ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）、イン
ターナショナル・ジャーナル・システマティック・バク
テリ才ロジ−（Ｉｎｔ、 Ｊ、 ５ｙｓｔ、Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ、） １６． ３１３＝３４０（１９６
６） 〕に従った。全細胞の加水分解物中のジアミノ
ピメリン酸の異性体はピー・ベラカー（Ｂ、８ｅｃｋｅ
ｒ）らの方式〔アプライド・ミクロバイオロジー（Ａｐ
ｐｌ。
性質の決定は、国際ストレプトマイセス（ＳＬｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ）プロジェクト （［ＳＰ＞がストレプト
マイセス種の特性決定のために推奨する方？上二［Ｅ、
Ｂ、シエリング（Ｅ、Ｂ、 Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）および
り、：］−ットリープ（Ｄ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）、イン
ターナショナル・ジャーナル・システマティック・バク
テリ才ロジ−（Ｉｎｔ、 Ｊ、 ５ｙｓｔ、Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ、） １６． ３１３＝３４０（１９６
６） 〕に従った。全細胞の加水分解物中のジアミノ
ピメリン酸の異性体はピー・ベラカー（Ｂ、８ｅｃｋｅ
ｒ）らの方式〔アプライド・ミクロバイオロジー（Ａｐ
ｐｌ。
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、） １２．４２１＝４２３（１９
６４） 〕によって確認した。形態学的検討は、光学顕
微鏡を用いておこない、とくに胞子表面の形態について
は走査型電子顕微鏡を用いておこなった。色の名称の割
当てニハ、カラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏｌｏ
ｒｌｌａｒｍｏｎｙ ！Ｊａｎｕａｌ） Ｃコンテイ
ナー・コーポレーション６オブ６アメリカ（Ｃｏｎｔａ
ｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｒ Ａｍｅｒｉｃ
ａ） 、第４版（１９５８） ］を使用した。
６４） 〕によって確認した。形態学的検討は、光学顕
微鏡を用いておこない、とくに胞子表面の形態について
は走査型電子顕微鏡を用いておこなった。色の名称の割
当てニハ、カラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏｌｏ
ｒｌｌａｒｍｏｎｙ ！Ｊａｎｕａｌ） Ｃコンテイ
ナー・コーポレーション６オブ６アメリカ（Ｃｏｎｔａ
ｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｒ Ａｍｅｒｉｃ
ａ） 、第４版（１９５８） ］を使用した。
Ｄｏ−１１４株の菌学的性質は次の通りである。
（１）形態
気菌糸二分技する。
基土菌糸：分枝するが、分断はない。
杓子：気菌糸上に分節１子（１０個から３０個もしくは
さらに多数）の長い連鎖として着生する。連鎖の形態は
屈曲状もしくはループ状。
さらに多数）の長い連鎖として着生する。連鎖の形態は
屈曲状もしくはループ状。
胞子の表面：平滑（Ｓｍｏｏｔｈ）
胞子の運動性：なし
胞子の形・大きさ：楕円形（０，５Ｘ０．７μｍ）なお
、菌核、胞子のうは観察されない。
、菌核、胞子のうは観察されない。
（２）色調
気菌糸：灰色〜白色
基土菌糸：灰色
可溶性色素：淡黄色
メラニン色素：あり、茶色
（３）細抱壁の化学組成
ジアミノピメリン酸の立体型：ＬＬ型
（４）生理的性質
炭素源の同化性：
同化するニゲルコース、キシロース、
マンニトール、アラビノース、
ラムノース、ラフィノース、
ラクトース、シュークロース、
ガラクトース
同化しない：イノシトール、サリシン
ゼラチンの液化：陰性
スターチの加水分解：陽性
脱脂牛乳の凝固：陰性
脱脂牛乳のペプトン化：陽性
礒維素の分解：陽性
生育温度範囲：１６〜３７℃（至適２８〜３２℃）なお
、生育温度範囲については２日後、ゼラチン、脱脂牛乳
および礒維素に対する作用については、２８℃、１ケ月
後の結果を、その：王かの性質は２８℃、２週間後の結
果を示した。
、生育温度範囲については２日後、ゼラチン、脱脂牛乳
および礒維素に対する作用については、２８℃、１ケ月
後の結果を、その：王かの性質は２８℃、２週間後の結
果を示した。
（５）各種寒天培地における生育状態
各種寒天培地で２８℃、２８日間、ＤＯ−１１４株を培
養した結果を第４表に示す。
養した結果を第４表に示す。
なお、略号は次のとおり、
Ｇ：生育の程度
ＡＭ：気菌糸の着生度および色調、
ＳＩＪ：基土菌糸の色調、
Ｐ：可溶性色素の色調。
（６）Ｄｏ−１１４株の同定
Ｄｏ−１１４株はＬＬ型のジアミノピメリン酸が検出さ
れることから、エム・ピー・レチェバリエとエイチ・ニ
ー・レチェバリエ（Ｍ、 Ｐ。
れることから、エム・ピー・レチェバリエとエイチ・ニ
ー・レチェバリエ（Ｍ、 Ｐ。
Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ ａｎｄ Ｈ，Ａ、Ｌｅｃｈｅ
ｖａｌｉｅｒ）による放線菌の分類〔インターナショナ
ル・ジャーナル・システマティック・バクテリオロジ−
（Ｉ ｎｔ。
ｖａｌｉｅｒ）による放線菌の分類〔インターナショナ
ル・ジャーナル・システマティック・バクテリオロジ−
（Ｉ ｎｔ。
Ｊ、５ｙｓＬ、Ｂｃｔｅｒｉｏｌ、＞ ２０．４３５〜
４４３（１９７０） ］によると細胞壁夏型と分類され
る。
４４３（１９７０） ］によると細胞壁夏型と分類され
る。
さらに該菌株の形態学的特徴を組み合わせると、この菌
株を、ストレプトマイセス属に帰属させるのが適当であ
る。
株を、ストレプトマイセス属に帰属させるのが適当であ
る。
木屑における種の同定においては、灰色〜白色の気菌糸
、屈曲状もしくは、ループ状の胞子連鎖、平滑な胞子表
面、メラニン様色素産生、可溶性色素の産生および炭素
源の資化パターンなどの本菌株の特徴をもとに、細菌学
名承認リスト〔ヴイー・ビー・デイ−・スカーマン（Ｖ
、Ｂ。
、屈曲状もしくは、ループ状の胞子連鎖、平滑な胞子表
面、メラニン様色素産生、可溶性色素の産生および炭素
源の資化パターンなどの本菌株の特徴をもとに、細菌学
名承認リスト〔ヴイー・ビー・デイ−・スカーマン（Ｖ
、Ｂ。
口、 Ｓｋｅｒｍａｎ）らの、Ｉｎｔ、Ｊ、 ５ｙｓｔ
、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 、 ３０゜２２５〜４２０
（１９８０）］で承認されている種名より、分類的特徴
が類似している種をＩＳＰの記載［Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓ
ｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 １８ 、６９６９−１８９
（１９６、同誌、１８．２７９〜３９２． ＜１９６８
）、同誌、１９．３９１〜５１２（１９６９）、同誌、
２２．２６５〜３９４ （１９７２）およびアール・イ
ー・ブカナン（Ｒ，Ｅ、Ｂｕｃｈａｎａｎ）とエヌ・イ
ー・ギボンズ（Ｎ、ε、 Ｇｉｂｂｏｎｓ） ｍ、バー
シーズ・マニュアル・才ブ・デターミネイティブ８バク
テリオロジイ（Ｂｅｒｇｅｙ ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｒ
［ｌｅｔｅｒ−ｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ）第８版］をもとに検索した。
、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 、 ３０゜２２５〜４２０
（１９８０）］で承認されている種名より、分類的特徴
が類似している種をＩＳＰの記載［Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓ
ｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 １８ 、６９６９−１８９
（１９６、同誌、１８．２７９〜３９２． ＜１９６８
）、同誌、１９．３９１〜５１２（１９６９）、同誌、
２２．２６５〜３９４ （１９７２）およびアール・イ
ー・ブカナン（Ｒ，Ｅ、Ｂｕｃｈａｎａｎ）とエヌ・イ
ー・ギボンズ（Ｎ、ε、 Ｇｉｂｂｏｎｓ） ｍ、バー
シーズ・マニュアル・才ブ・デターミネイティブ８バク
テリオロジイ（Ｂｅｒｇｅｙ ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｒ
［ｌｅｔｅｒ−ｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ）第８版］をもとに検索した。
検索の結果、ストレプトマイセス・ガリアエウス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌｉａｅｕｓ）がＤｏ−１
１４株の近縁の種として挙げられたが、種を特定するこ
とは、困難でありストレプトマイセス・エスピー＜Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ、）Ｄｏ −１１４と命名
した。
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌｉａｅｕｓ）がＤｏ−１
１４株の近縁の種として挙げられたが、種を特定するこ
とは、困難でありストレプトマイセス・エスピー＜Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ、）Ｄｏ −１１４と命名
した。
該菌株はブダペスト条約に基づき、工業技術院微生物工
業技術研究所に微工研条寄第２６４１号（ＦＥＲＭ
０Ｐ−２６４１）として寄託されている。（原寄託日：
平成元年１１月８日）。
業技術研究所に微工研条寄第２６４１号（ＦＥＲＭ
０Ｐ−２６４１）として寄託されている。（原寄託日：
平成元年１１月８日）。
次にＤＣ１１４−Ｃ生産菌株の培養法について述べる。
本発明のＤＣ１１４−Ｃ生産菌株の培養においては通常
の放線菌の培養法が一般に用いられる。培地としては資
化可能な炭素源、窒素源、無機物および必要な生育、生
産促進物質を程よく含有する培地であれば合成培地、天
然培地いずれでも使用可能である。
の放線菌の培養法が一般に用いられる。培地としては資
化可能な炭素源、窒素源、無機物および必要な生育、生
産促進物質を程よく含有する培地であれば合成培地、天
然培地いずれでも使用可能である。
炭素源としてはグルコース、ｉ１粉、デキストリン、マ
ンノース、７ラクトース、シュクロース、ラクトース、
キシロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などが
単独または組み合わせて用いられる。さらに、菌の資化
能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸なども用
いられる。窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・
スチーブ・リカー、大豆粉、カザミノ酸などが単独また
は組み合わせて用いられる。そのほか、必要に応じて食
塩、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム
、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸
第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫
酸銅などの無機塩類を加える。さらに使用菌の生育やＤ
Ｃ１１４−Ｃの生産を促進する微量成分を適当に添加す
ることができる。培養法としては、液体培養法、とくに
深部攪拌培養法が適している。培養は温度１６〜３７℃
、好ましくは２５〜３２℃、ｐＨ４〜！０、好ましくは
６〜８でおこなわれ、通常１〜７日で完了し、目的物質
ＤＣｌ ｌ ４−Ｃが培養液中および菌体中に生成Ｍ積
される。
ンノース、７ラクトース、シュクロース、ラクトース、
キシロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などが
単独または組み合わせて用いられる。さらに、菌の資化
能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸なども用
いられる。窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・
スチーブ・リカー、大豆粉、カザミノ酸などが単独また
は組み合わせて用いられる。そのほか、必要に応じて食
塩、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム
、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸
第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫
酸銅などの無機塩類を加える。さらに使用菌の生育やＤ
Ｃ１１４−Ｃの生産を促進する微量成分を適当に添加す
ることができる。培養法としては、液体培養法、とくに
深部攪拌培養法が適している。培養は温度１６〜３７℃
、好ましくは２５〜３２℃、ｐＨ４〜！０、好ましくは
６〜８でおこなわれ、通常１〜７日で完了し、目的物質
ＤＣｌ ｌ ４−Ｃが培養液中および菌体中に生成Ｍ積
される。
培地のｐＨａ整にはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶
液などが用いられる。
液などが用いられる。
培養物中の生成量が最大に達したときに培養を停止する
。
。
培養物からＤＣ１１４−Ｃの単離精製は、微生物代謝生
産物をその培養物から単離精製するために常用される方
法に従っておこなわれる。
産物をその培養物から単離精製するために常用される方
法に従っておこなわれる。
たとえば培養物を濾過により培養ｐ液と菌体に分け、菌
体をクロロホルム、アセトンなどで抽出する。ついで、
抽出液と培養ｐ液とを合わせて、ポリスチレン系吸着剤
た止えばダイヤイオンＨＦ２０（三菱化成社製）などに
通塔して活性成分を吸着させ、ついで酢酸エチル、アセ
トンなどで溶出する。溶出液を濃縮し、シリカゲルによ
るカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフ
ィーなどにより、ＤＣ１１４−Ｃの茶褐色粉末を得る。
体をクロロホルム、アセトンなどで抽出する。ついで、
抽出液と培養ｐ液とを合わせて、ポリスチレン系吸着剤
た止えばダイヤイオンＨＦ２０（三菱化成社製）などに
通塔して活性成分を吸着させ、ついで酢酸エチル、アセ
トンなどで溶出する。溶出液を濃縮し、シリカゲルによ
るカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフ
ィーなどにより、ＤＣ１１４−Ｃの茶褐色粉末を得る。
なお、培養、精ＩＩ作中のＤＣ１１４−Ｃの動向はバチ
ルス・ズブチリスＮ［Ｌ１０７０７を用いるバイオアッ
セイ、または薄層クロマトグラフィーによるＤＣ１１４
−Ｃの紫外線吸収を目安として追跡することができる。
ルス・ズブチリスＮ［Ｌ１０７０７を用いるバイオアッ
セイ、または薄層クロマトグラフィーによるＤＣ１１４
−Ｃの紫外線吸収を目安として追跡することができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１゜
種菌としてストレプトマイセス・エスピーＤｏ−１１４
株を用いる。該菌株を２１容量の三角フラスコ中のバク
ト・トリプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）５ｇ／ｊ！、酵母エ
キス５ ｇ ／ ｊ！ 、肉エキス３ｇ／ｉ、可溶性澱
粉１０ｇ／Ｌグルコース１０ｇ／ｊ！、炭酸カルシウム
５ｇ／ｌの組成からなる種培地（殺菌前ｐＨ７，２）
３００ｍｌに植菌し、３０℃で４８時間振盪（２００ｒ
ｐｍ）培養した。
株を用いる。該菌株を２１容量の三角フラスコ中のバク
ト・トリプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）５ｇ／ｊ！、酵母エ
キス５ ｇ ／ ｊ！ 、肉エキス３ｇ／ｉ、可溶性澱
粉１０ｇ／Ｌグルコース１０ｇ／ｊ！、炭酸カルシウム
５ｇ／ｌの組成からなる種培地（殺菌前ｐＨ７，２）
３００ｍｌに植菌し、３０℃で４８時間振盪（２００ｒ
ｐｍ）培養した。
得られた種培養液を３０！容量の培養槽中の下記組成の
発酵培地１５コに１０％（容量）の割合で移し、２８℃
で通気攪拌（回転数２００ ｒｐｍ。
発酵培地１５コに１０％（容量）の割合で移し、２８℃
で通気攪拌（回転数２００ ｒｐｍ。
通気量１’５ｊ！／ｍ１ｎ）方式により培養をおこなっ
た。
た。
発酵培地組成：グリセロール２５ｇ／ｌ、グルコース２
５ｇ／ｌ、乾燥酵母１５ｇ／ｊ！、に１Ｉ２Ｐｏ＜
０．５ｇ ／ １ 、 ！ＪｇＳＯｓ・７）１２０ ０
．５ｇ ／ ｊ！、炭酸カルシウム５ｇ／ｌ、（殺菌前
ｐＨ７，０、ＮａＱＨで２製） 培養中、培地のｐｉはとくに制御しないで、８０時間培
養した。培養液にｎ−プロパツール１５１を添加し攪拌
した後、培養物から菌体および沈殿物を戸別し、Ｐ液２
８ｆｌを得た。
５ｇ／ｌ、乾燥酵母１５ｇ／ｊ！、に１Ｉ２Ｐｏ＜
０．５ｇ ／ １ 、 ！ＪｇＳＯｓ・７）１２０ ０
．５ｇ ／ ｊ！、炭酸カルシウム５ｇ／ｌ、（殺菌前
ｐＨ７，０、ＮａＱＨで２製） 培養中、培地のｐｉはとくに制御しないで、８０時間培
養した。培養液にｎ−プロパツール１５１を添加し攪拌
した後、培養物から菌体および沈殿物を戸別し、Ｐ液２
８ｆｌを得た。
ｐ液を濃縮後、水で希釈しポリスチレン系吸着剤ダイヤ
イオンＨＰ２０（１０Ｉｌ）のカラムに通塔して活性物
質を吸着させた。
イオンＨＰ２０（１０Ｉｌ）のカラムに通塔して活性物
質を吸着させた。
脱イオン水および５０％メタノールで不純物を溶出機酢
酸エチルで活性物質を溶出した。活性画分を濃縮し、水
を加えた後、酢酸エチルで活性両分を抽出した。抽出液
を硫酸す） ＩＪウムで脱水後ａＷｉした。これをさら
に、シリカゲルカラム（ＢＷ３００ｇ士デヴイソン化学
社製）を用い、トルエン：アセトン溶液（２：ｌｖ／ｖ
）で展開した。溶出された活性をａ縮すると、茶褐色の
ＤＣ１１４−Ｃの粉末３０ｍｇが得られた。
酸エチルで活性物質を溶出した。活性画分を濃縮し、水
を加えた後、酢酸エチルで活性両分を抽出した。抽出液
を硫酸す） ＩＪウムで脱水後ａＷｉした。これをさら
に、シリカゲルカラム（ＢＷ３００ｇ士デヴイソン化学
社製）を用い、トルエン：アセトン溶液（２：ｌｖ／ｖ
）で展開した。溶出された活性をａ縮すると、茶褐色の
ＤＣ１１４−Ｃの粉末３０ｍｇが得られた。
発明の効果
本発明により抗菌および抗腫瘍作用を有する新規発酵生
産物ＤＣ１１４−Ｃが提供される。
産物ＤＣ１１４−Ｃが提供される。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 下記式で示される新規物質ＤＣ１１４−Ｃ ▲数式、化学式、表等があります▼
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1294290A JP2766351B2 (ja) | 1989-11-13 | 1989-11-13 | 新規物質ｄｃ１１４―ｃ |
| EP90312082A EP0429209B1 (en) | 1989-11-13 | 1990-11-05 | New antibiotic chemical compound "DC 114-C" |
| DE69006577T DE69006577T2 (de) | 1989-11-13 | 1990-11-05 | Neue antibiotische chemische Substanz "DC 114-C". |
| CA002029616A CA2029616C (en) | 1989-11-13 | 1990-11-08 | Chemical compound exhibiting anti-bacterial and anti-tumour activity |
| US07/612,317 US5082857A (en) | 1989-11-13 | 1990-11-13 | Chemical compound |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1294290A JP2766351B2 (ja) | 1989-11-13 | 1989-11-13 | 新規物質ｄｃ１１４―ｃ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03155793A true JPH03155793A (ja) | 1991-07-03 |
| JP2766351B2 JP2766351B2 (ja) | 1998-06-18 |
Family
ID=17805786
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1294290A Expired - Fee Related JP2766351B2 (ja) | 1989-11-13 | 1989-11-13 | 新規物質ｄｃ１１４―ｃ |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5082857A (ja) |
| EP (1) | EP0429209B1 (ja) |
| JP (1) | JP2766351B2 (ja) |
| CA (1) | CA2029616C (ja) |
| DE (1) | DE69006577T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995001981A1 (en) * | 1993-07-09 | 1995-01-19 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Novel substance dc114-a1 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE82982T1 (de) * | 1986-07-21 | 1992-12-15 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Neue mittel dc-92b und dc-92d, sowie deren verfahren zur herstellung. |
| JPH01193265A (ja) * | 1988-01-28 | 1989-08-03 | Meiji Seika Kaisha Ltd | 新規抗腫瘍性抗生物質ｓｆ２５８７物質及びその製造法 |
| US4927848A (en) * | 1988-09-19 | 1990-05-22 | Bristol-Myers Company | BU-3839T antibiotic |
-
1989
- 1989-11-13 JP JP1294290A patent/JP2766351B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-11-05 EP EP90312082A patent/EP0429209B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-11-05 DE DE69006577T patent/DE69006577T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-08 CA CA002029616A patent/CA2029616C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-11-13 US US07/612,317 patent/US5082857A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995001981A1 (en) * | 1993-07-09 | 1995-01-19 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Novel substance dc114-a1 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0429209B1 (en) | 1994-02-09 |
| US5082857A (en) | 1992-01-21 |
| DE69006577D1 (de) | 1994-03-24 |
| JP2766351B2 (ja) | 1998-06-18 |
| EP0429209A1 (en) | 1991-05-29 |
| CA2029616C (en) | 1996-07-16 |
| DE69006577T2 (de) | 1994-09-22 |
| CA2029616A1 (en) | 1991-05-14 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |