JPH03161490A

JPH03161490A - メイタンシノイドを含む細胞障害剤及び該細胞障害剤を有効成分とする医薬

Info

Publication number: JPH03161490A
Application number: JP2290625A
Authority: JP
Inventors: Ravi J Chari; ラビ　ジェイ．チャリ; Victor S Goldmacher; ビクター　エス．ゴールドマッチャー; John M Lambert; ジョン　エム．ランバート; Walter A Blattler; ウォルター　エイ．ブラットラー
Original assignee: Immunogen Inc
Current assignee: Immunogen Inc
Priority date: 1989-10-25
Filing date: 1990-10-25
Publication date: 1991-07-11
Anticipated expiration: 2016-04-16
Also published as: CA2026147C; DE69028678T2; EP0425235B1; EP0425235A2; JP3155998B2; EP0425235A3; DK0425235T3; ES2091226T3; CA2026147A1; ATE143268T1; DE69028678D1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分り！ｆ本発明は、新規な細胞障害剤（ｃｙｌｏｔｏｘｉｃａｇ
ｅｎｌｓ）及び該障害剤を有効成分とする医薬に関し、
より詳しくは本発明メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓ
ｉｎｏｉｄｓ）を含有する新規な細胞障害剤及びそれを
用いた医薬に関する。これらの新規な細胞障害剤は、細
胞桔合剤にメイタンシノイドを化学的に連結させること
により標的様式で特異的な細胞集印にメイタンシノイド
を送達する結果として治療効果が得られる。

従来の技術近年、モノクローナル抗体一薬物桔合体によるＩ１重瘍
細胞の特異的標的化の試みに関し、無数の報告がなされ
ている。〔セラ（Ｓｅｌａ）ら、イムノコンジュゲーツ
（　Ｉ　ｍｍｕｎｏｃｏｎｉｕｇａｌｅｓ）　１　８　
９　−　２　１６（シー．ボーゲル（Ｃ，　Ｖｏｇｅｌ
）編１９８７）；ゴース（Ｇｈｏｓｅ）ら、ターゲッテ
ィッド・ドラッグズ（Ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｄｒｕｇｓ）
　、１−２２　（イー．ゴールドバーグ（Ｅ，　Ｇｏｌ
ｄｂｅｒｇ）ｔｉｌ９８Ｂ）　；ダイエナ−（Ｄｉｅｎ
ｅｒ）ら、アンチボディ・メディエイティッド・デリバ
リー・システムズ（Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｄｅｌｉｖｅ
ｒｙ　ｓｙｓｔｅｍｓ）　１　−　２３（ジエイ．ロツ
ドウエル（Ｊ．　　Ｒｏｄｗｅｌｌ）　ｉｌ９８８）；
ビエテルツ（　Ｐ　ｉｅｆｅｒｓｘ）ら、アンチボディ
・メディエイティッド・デリバリー・システムズ（Ａｎ
ｔｉｂｏｄｙ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　
ｓｙｓｔｅｍｓ）２５−５３（：ジエイ．ロッドウエル
（　Ｊ　，　　Ｒｏｄｗｅｌｌ）編１　９　８　８　）
　　；ブモール（Ｂｕｍｏｌ）ら、アンチボディ・メデ
ィエイティッド・デリバリー・システムズ（Ａｎｔｉｂ
ｏｄｙ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｄｅｌｉｖｅＩｙｓｙｓｔ
ｅｍｓ）　５５−７９　（ジエイ．ロツドウエル（　Ｊ
　，　　Ｒｏｄｗｅｌｌ）編１９８８））　。

メトトレキセート（ｍｅｌｈｏｔｒｅｘａｌｃ）　、ダ
ウノルビシン（ｄａｕｎｏ＋ｕｂｉｃｉｎ）　、ドキソ
ルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ピンクリスチン
（ｙｉｎｃｒｉｓｌｉｎｅ）、ビンブラスチン（ｙｉｎ
ｂｌａｓｌｉｎｅ）、メルファラン（ｍｅ　Ｉｐｈａ　
ｌａｎ）、マイトマイシンＣ　（ｍｉｌｏｍｙｃｉｎ　
Ｃ）及びクロラムブシル（ｃｈｌｏ＋ａｍｂｕｃｉｌ）
のような細胞障害剤が、種々のネズミ（ｍｕｒｉｎｅ）
のモノクローナル抗体と結合されてきた。ある場合には
、薬物分子は以下のような中間担体分子を介して抗体分
子と結合された。その担体分子とは、血清アルブミン〔
ガルネッＩ・（Ｇａ＋ｎｓｌｌ）ら、４６　キャンサー
・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．）２４　０　７　
−　２４１２　（１９８６）；オーカワ（Ｏ　ｈｋ　ａ
ｗａ）ら、２３、Ｃ　ａｎｃｅｒ　　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ
，　　Ｉ　ｍｍｕｎｏｔｈｅ＋．　８　１　−　８　６
（１９８６）；エンド−（Ｅｎｄｏ）ら、４７、キャン
サー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，）、１０７６
−１０８０　（１９８０））　、デキストラン〔フルビ
ッツ（ＨｕｒｗｉｌｘＪ　　ら、２、Ａｐｐｌ，　Ｂ　
ｉｏｃｈｅｍ，，　２　５−３５　（１９８０）；７ナ
ビ（Ｍａｎａｂｉ）ら、３４、ハイオケミカル・ファー
マコロジー（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐ　ｈａｒｍａｃｏｌ．
　）、２８９−２９１　（１９８５）；ディルマン（　
Ｄ　ｉ　ｌ　ｌｍａｎ）ら、４６、キャンサー・リサー
チ（　Ｃ　ａｎｃｅｒ　Ｒ　ｅＳ，　）、４８８６−４
８９１（１９８６）；ショーバル（　Ｓ　ｈｏｙａ　ｌ
）ら、８５、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンス（Ｐ　ｒｏｃ，　Ｎ
ａｉｌ．　Ａｃａｄ．Ｓｃｉ）　、８２７６−８２８０
　（１９８８）　）又はポリグルタミン酸（ツカダ（Ｔ
ｓｕｋａｄａ）ら、７３、Ｊ．　　Ｎａｉｌ．　Ｃａｎ
ｅ，　Ｉｎｓｌ，、７２１−７２９（１９８４）；カト
ー（Ｋａｔｏ）ら、２７、ジャーナル・オブ・メディシ
ナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）　、１
６０２−１６０７　（１９８４）ンカダ（ＴＳｕｋａｄ
ａ）ら、５２、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キ
ャンサー（Ｂｒ．ＪＣａｎｃｅｒ）、１１１−１１６　
（１９８５））のようなものである。

広範なリンカーについての技術がそのような免疫桔合体
（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｉｕｇａｔｅ）の調製に利用され
、開裂可能な又は開裂不能なリンカーが詳細に調べられ
た。大部分の場合では、標的部位で結合体（ｃｏｎｊｕ
ｇａｔｅ）から未修飾の形態で薬物分子が放出されれば
、薬物の最大の細胞障害作用が観察されるであろう。

抗体一薬物結合体の調製に使用された開裂可能なリンカ
ー（Ｉｉｎｋｅｒｓ）の一つは、レセブターが介在する
エンドサイトーシス中に出会うエンドソームやリソソー
ム（　ｌｙｓｏｓｏｍｅｓ）のような異なる細胞区画内
の酸性環境を利用するシスーアコニチン酸に基づく、酸
に不安定なリンカーである。シエンとライサー（　Ｓ　
ｈｅｎ　ａｎｄ　Ｒ　ｙｓｃ＋）は、高分子担体とダウ
ノルビシンとの結合体の調製にこの方法を導入した（１
０２、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リ
サーチ・コミュニケーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ，　　Ｒｅｓ，　　Ｃｏｍｍｕｎ．）　、１０
４８−１０５４　（１９８１））。ヤングとライスフエ
ルド（Ｙａｎｇ　ａｎｄ　Ｒｅｉｓｆｅｌｄ）らは、抗
メラノーマ抗体にダウノルビシンを粘合するのに同技術
を使用した（８０、Ｊ　．Ｎａｌｌ．　Ｃａｎｃ，　Ｉ
　ｎｓｆ，、１１５４−１１５９　（１９８８）　）。

最近、ディルマン（　Ｄ　ｉ　ｌ　ｌｍａｎ）らも、同
様の方法で抗Ｔ一細胞抗体とダウノルビシンとの結合体
を調製するのに酸に不安定なリンカーを用いた（４８、
キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，）６０
９７−６１０２　（１９８８））。

ｌ・ロウト（Ｔ＋ｏｕｅｌ）らによって開発された他の
方法は、ベブチドスペーサーの腕を介してダウノルビシ
ンを抗体に結合させるものである（７つ、プロシーディ
ングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンス（Ｐｒｏｃ．ＮａｉｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ）　　
、６２６−６２９　　（１　９８２））　　。

これは、遊離薬物が、リソソームのべブチダーゼの作用
によりそのような粘合体から放出されるという前提の下
になされた。

しかしながら、インビト口における細胞障書性試験から
は、抗体一薬物結合体が遊離の未結合薬物と同等の細胞
障害性効果を達成することはまれであることが示された
。このことは、薬物分子が抗体から放出される機構はあ
まり効率的ではないことを示唆している。免疫毒の領域
においては、モノクローナル抗体と触媒的に働く蛋白毒
の間でジスルフィド架橋錆が形成された粘合体は、他の
リンカーを含む結合体よりも細胞障害性がより強いこと
が示されている（ランバート（Ｌａｍｂｅｎｔ）ら、２
６０、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー（Ｊ，　　Ｂｉｏｌ，Ｃｈｅｍ．）　、１２０３５−
１２０４１　（１９８５）；ランバート（　Ｌ　ａｍｂ
ｅｒｌ）ら、イムノ｝・キシンズ（　ｒ　ｍｍｕｎｏ１
ｏｘｉｎｓ）、１７５−２０９（エイ．フランケル（Ａ
，　　Ｆ　ｒａｎｋｅｌ）編（１９８８））：ゲティ（
Ｇｈｅｔｉ＊）ら、４８、キャンサー・リサーチ（Ｃａ
ｎｃｅｔ　Ｒｅ（）、２６１０−２６１７　（１９８８
）参照〕。このことは、抗体分子と毒物間のジスルフィ
ド結合の効率的な開裂に寄与するグルタチオンの細胞内
濃度が高いことによるためである。

これにもかかわらず、薬物と高分子間の結合体の調製に
ジスルフィド架橋１゜ｊを利用した例はほんのわずかし
か報告されていない。シエン（Ｓｈｅｎ）らは、メトト
レキセート（ｍｅｔｈｏｌｒｅｘａｌｅ）をメルカブト
エチルアミド誘導体に変換し、次いでジスルフィド桔合
を介してポリーＤ−リジンと桔合させることについて記
載した（２６０、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・
ケミストリ−（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）　、１０９
０５−１０９０８　（１９８５））。最近の報告では、
トリスルフィドを含む毒５　（ｔｏｘｉｃ　ｄｔｕｇ）
カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｙｃｉｎ）と抗
体との結合体の調製が記載されている〔メネンデツ（Ｍ
ｃｎｅｎｄｃｘｌら、フォース・インタナショナル・カ
ンファレンス・オン●モノクローナル・アンチボディ・
イムノコンジュケーツ・フォー・キャンサー、サンディ
エゴ（Ｆｏｕｒｔｈ　　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　
　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ　
Ａｎｔｉｂｏｄｙ　　Ｉ　ｍｍｕｎｏｃｏｎｉｕｇａｌ
ｅｓ　ｆｏｒＣａｎｃｅｒ　，　Ｓａｎ　　Ｄｉｅｇｏ
）　、アブストラクト（Ａｂｓｔｒａｃｔ）８１　（１
９８９）　）。

ジスルフィドで粘合した抗体一薬物粘合体が少なかった
１つの理山は、ジスルフィド架橋饋を介して薬物と抗体
を結合させるのに容易に利用できる硫黄原子を含む部分
（ｍｏｉｅｔｙ）を有する細胞障害剤が入手できなかっ
たからである。その上、現存する薬物の化学修飾を、薬
物の細胞障害性を減弱することなしに行うのは困難であ
る。

現存する抗体一薬物桔合体のもう一つの主要な欠点は、
メトトレキセ−１・、ダウノルビシン及びピンク、リス
チンのようなガンの進行を抑える薬物の比較的穏和な細
胞障害性のため及び標的抗原の数が限られていることの
ために、標的部位に十分な濃度の楽物を送達することが
できないことである。十分な細胞障害性を達成するため
には、抗体に対し直接に又はポリマー性担体分子を介し
て多数の薬物を結合させることが必要となる。しかしな
がら、そのように高度に修飾された抗体は、しばしば標
的抗原に対する結合性が減少し、又、インビボにおいて
血液中から急速に除去されることが観察されている。

メイタンシノイドは細胞障害性の強い薬物である。メイ
タンシン（ｍａｙｆａｎｓｉｎｅ）は、東アフリカの潅
木のメイテヌス　セラタ（　Ｍ　ａ　ｙ　ｔ　ｅ　ｎ　
ｕ　ｓｓｅ＋＋ａＨ）からクブチャン（Ｋｕｐｃｈａｎ
）らにより初めて単離され、メトトレキセート、ダウノ
ルビシン及びピンクリスチンのような通常のガン化学療
法剤よりも１００〜１０００倍細胞障害性が強いことが
示された（米国特許ＴＳ３，８９６．１１１号）。その
後に、ある柿の微生物ちまたメイタンシノール（ｍａｙ
ｔａｎｓｉｎｏｌ）やメイタンシノール　Ｃ一３エステ
ルのようなメイタンシノイドを生産することが発見され
た（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成されたメ
イタンシノールのＣ−３エステルやメイタンシノールの
アナログちまた報告されている〔クプチャン（　Ｋ　ｕ
ｐｃｈａｎ）ら、２１、ジャーナル・オブ・メディシナ
ル・ケミストリ−（Ｊ．Ｍｅｄ，　　Ｃｈｅｍ）、３１
−３７　（１９７８）；ヒガシデ（Ｈ　ｉｇａｓｈｉｄ
ｅ）ら、２７０、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、７２１
−７２２　（１９７７）；カワイ（Ｋａｗａｉ）ら、３
２、Ｃｈｅｍ，Ｐｈａｒｍ，　　Ｂｕｌｌ．３４４１−
３４５１　（１９８４））。Ｃ−３エステルを調製する
ためのメイタンシノールのアナログの例としては、芳香
族環（　ｆ！／ｌｌえば脱クロロ化）又はＣ−９、Ｃ−
１４　（ヒドロキシル化メチル基の導入）、Ｃ−１５、
Ｃ−１８、Ｃ−２０及びＣー４．５が修飾されたメイタ
ンシノールが含まれる。

天然に存在するもの又は合成されたＣ−３エステルは、
２つのグループに分類することができる。

（ａ）単純なカルボン酸とのＣ−３エステル（米国特許
第４，２４８，８７０号；第４，２６５，８１４号；第
４，３０８．２６８号；第４，３０８，２６９号；第４
，　３０９．　４２８号；第４，３１７，８２１号；第
４，３２２，３４８号；及び第４．３３１，５９８号）
、及び（ｂ）　Ｎ−メチルーＬ−アラニン誘導体とのＣ一３エ
ステル（米国特許第４，１３７．２３０号；第４，２６
０，６０８号；及び１２、Ｃｈｅｍ，Ｐｈａｒｍ．　　
Ｂｕｌｌ　．　　　３４４１　（１９８４））。

グループ（ｂ）のエステルは、グループ（ａ）のエステ
ルよりかなり細胞障害性が強いことが見出された。

メイタンシンは、有系分裂阻害剤である。Ｌ１２１０細
胞をインビトロにおいてメイタンシンで処理すると、６
７％の細胞が有系分裂状態に集積することが報告されて
いる。

未処理のコントロール細胞は、有系分裂指数（ｍｉｔｏ
ｔｉｃ　ｉｎｄｅｘ）が３．　　２−５．　８％の範囲
内の値を示すことが報告されている〔ジーベル（　Ｓ　
ｉｅｂｅｔｌら、４３、コンパラティブ　口イケミア　
リサーチ（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　　Ｌｅｕｋｅｍｉ
ａＲｅｓｅａｒｃｈ）、１９７５、Ｂ　ｉｂｌ．　Ｈａ
ｅｍａ＋．　４　９　５−５００（１９７６））。ウニ
の卵及びはまぐり（　ｃ　Ｉ　ａｍ）の卵を用いた実験
から、メイタンシンは、微小管蛋白であるチュブリンの
重合阻害を通して微小管形成を妨げ、それにより有系分
裂を阻害することが示唆されている〔レミラード（Ｒｅｍｉｌｌａｒｄ）　　ら、１８９、サイエンス（
Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、１００２〜１００５　（１９７５
）］。

インビト口では、ネズミの白血病細胞であるＰ３８８、
Ｌ１２１０及びＬＹ５１７８の懸濁液は、１０１〜１０
−７μｇ／一の薬物量のメイタンシンにより阻害され、
Ｐ３８８系の細胞は最も感受性が強いことが見出された
。メイタンシンはまた、インビトロにおいてヒト鼻咽腔
のガン細胞の成長の活性阻害剤であることが示され、又
、ヒト急性リンパ芽球白血病系のシー．イー，エム（Ｃ
．　　Ｅ．Ｍ，　）は、１０−７ｘｚｇ／一の濃度で阻
害されたと報告されている〔ウォルパ−１・−デフィリ
ップス（Ｗｏｌｐｅｒｔ−Ｄ　ｅＦｉｌｌｉｐｐｅｓ）
ら、２４、バイオケミカル●ファーマコロジー（　Ｂ　
ｉｏｃｈｅｍ，Ｐ　ｈａｒｍａｃｏｌ，　）、１７３５
−１７３８　（１９７５）］。

インビボにおいても、メイタンシンは活性であることが
示されている。Ｐ３８８リンパ球白血病システムにおけ
る肺瘍の成長は、５０〜１００倍の薬物量の範囲にわた
って阻害され、このことにより高い治療係数が示唆され
る。又、Ｌ１２１０マウス白血病システム、ヒ１・ルイ
ス（　Ｌ　ｅｗｉｓ）　Ｉ沖癌システム及びヒトＢ−１
６黒色癌システムにおいても十分な活性が示されている
〔クブチャン（Ｋｕｐｃｈａｎ）　、３　３、Ｐｅｄ．
Ｐｔｏｃ　２２８８−２２９５　（１．９７４））。

発明が解決しようとする課匙メイタンシノイドは、高度の細胞障害性を有するので、
ガンのような多くの病気の処置に使用されることが期待
されている。この期待は、未だ実現されていない。メイ
タンシンの臨床試験は、多くの副作用のために有望なも
のではない〔イゼル（　Ｉ　ｓｓｅｌ）ら、５、Ｃａｎ
．　　Ｔｒｔｍｎｌ，　Ｒｅｖ．　　１　９　９−２０
７　（１９７８））。中枢神経系及び胃腸症状に対する
有害な効果は、一部の患者がそれ以上の治療を拒否する
原因となっている（イゼル（　Ｉ　ｓｓｅｌ）ら、２０
４頁）。メイタンシンは、累積的な末梢神経障害にも関
与しているようである（イゼル（　Ｉ　ｓｓｅｌ）ら、
２０７頁）。

桔果として、メイタンシノイドにより病気を処置するに
は、その細胞障害性を低下させることなく副作用を減少
させることが非常に望まれている。

本発四の１つの目的は、高い細胞毒性作用を有すると共
に多くの病気の処置に効果的に使用し得る形態でメイタ
ンシノイドを提供することにある。

本発明のもう１つの目的は、新規なメイタンシノイドエ
ステルを提供することである。

課題を解決するための手段上記目的と他の目的は、細胞結合剤に連結した１又は２
以上のメイタンシノイドを含む細胞障害剤を提供するこ
とにより達成される。

第２の実施態様において本発門は、以下の０及びｂ）即
ち、ａ）細胞結合剤に結合した細胞障害性量の１又は２以上
のメイタンシノイド、及びｂ）稟学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を含む
ことを特徴とする選択された細胞集団を殺すための治療
薬を提供する。

第３の実施態様において本発明は、細胞結合剤と結合し
た１又は２以上のメイタンシノイドを含む細胞障害性を
示す量の細胞障害剤と選択された細胞集団からの細胞群
を含むと思われる組織又は細胞集団とを接触させること
を特徴とする選択された細胞集団を殺す方法を提供する
。

第４の実施態様において零発叩は、メイタンシノール又
はメイタンシノールのアナログのＮ−メチルアラニン含
有エステルを提供する。前記Ｎ−メチルアラニン含有エ
ステルは、化学作用部分（ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｏｉｅ
ｔｙ）にＮ−メチルアラニンを含有するメイタンシノイ
ドエステルを連結させ得る桔合基を含んでいる。

第５の実施態様において本発明は、メイタンシノール又
はメイタンシノールのアナログのＮ−メチルシステイン
念有エステルを提供する。

前記メイタンシン及びメイタンシノールは、第１図に示
す化学構造を゛庁するものである。

本発明は、高い細胞障害性を保持すると共に細胞結合剤
と効果的に結合し得る新規なメイタンシノイド誘導体の
合成に基づくものである。従来、既存の薬物を、その細
胞障害作用を減弱することなく修飾するのは極めて困難
であった。本発明は、適当な細胞結合剤が結合し得る化
学作用部分（ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｏｉｅｔｙ）、特に
チオール又はジスルフィド基を含む化学作用部分でここ
に開示されたメイタンシノイド誘導体を修飾することに
よりこの問題を解決するものである。その結果として、
本発門の新規なメイタンシノイド誘導体は、天然から見
出されるメイタンシノイドの細胞障害能力を保持し、あ
る場合には高めさえする。細胞結合剤とメイタンシノイ
ド誘導体との結合体により、望ましくない細胞に対して
のみ標的様式でメイタンシノイド誘導体の最大の細胞障
害活性を適用することが可能となる。それゆえ、非標的
の健常細胞に障害を与えることによる副作用を避けるこ
とができる。本発明は、メイタンシノイド誘導体の辰大
限の可能外を引き出し、フ１｝（差別の細胞障害効果は
、あらかじめ不可能なものとした。このように、本発明
は、溶解され又は殺されるべき病気の又は不正常な細胞
、例えばガン細胞（特に固型ガン細胞）、ウイルス感染
細胞、微生物感染細胞、寄生虫感染細胞、自己免疫細胞
（自家抗体産生細胞）、活性化細胞（移植組織の拒絶又
は移植片対宿主病を含む）又は他のあらゆるタイプの病
気又は異常細胞の除去に有用であり、一方最小限の副作
用しか示さない薬物を提供するものである。

このように本発明は、細胞桔合剤に化学的に桔合できる
と共に高度の細胞障害性を結合型、遊離型又はその両方
の状態で保持するメイタンシノイド誘導体の合戊法を教
える。高度の細胞障害性とは、インビトロでＫ　Ｂ細胞
を薬物に対し２４時間さらしたときにＩＣｓｏ（障害性
物質が全体の半分を生きた状態に保つときの濃度）が約
１０−８Ｍ以下であるものとして定義される。

細胞障害剤本発明による細胞障害剤は、細胞結合剤に連結された１
又は２以上のメイタンシノイドを含む。

細胞桔合剤にメイタンシノイドを結合するために、メイ
タンシノイドは、まず修飾されなければならない。

細胞桔合剤に結合することができる修飾されたメイタン
シノイドを調製するのに本発明において使用されるメイ
タンシノイドは従来からよく知られており、公知の方法
により天然の原料から単離され又は公知の合成法により
調製される。

適切なメイタンシノイドの例としては、メイタンシノー
ル及びメイタンシノールアナログが含まれる。適レノな
メイタンシノールアナログの例としては、芳香族環が修
飾されたもの又は他の部位において修飾されたものが含
まれる。

修飾された芳香族環を−６するメイタンシノールの適切
なアナログの具体的な例としては、以下のものが含まれ
る。

（＋）Ｃ−１９脱クロル体（米国特許第４，２５６，７
４６号）（アンサマイｌ・シン（ａｎｓａｍｙｌｏｃｉ
ｎ）Ｐ２のリチウムアルミニウムヒドリド（Ｌ　Ａ　Ｈ
）還元により調製される）。

■Ｃ−２０水酸基（又はＣ−２０脱メチル）又はＣ−２
０水酸基（又はＣ−２０脱メチル）かつＣ−１９脱クロ
ル体（米国特許第４，３６１，６５０号及び第４，３０
７，０１６号）（ス１・レブトマイセス（　Ｓ　ｌｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ）又はアクチノマイセス（Ａ　ｃｌｉ
ｎｏｍｙｃｅｓ）を用いた脱メチル化、又はリチウムア
ルミニウムヒドリド（ＬＡＨ）を用いた脱クロル化によ
り調製される）。

■Ｃ−２０脱メ１・キシ、Ｃ−２０アシルオキシ（−　
０　Ｃ　Ｏ　Ｒ）体又はＣ−２０脱メトキン、Ｃ一２０
アシルオキシ（−０ＣＯＲ）かつＣ−１９脱クロル体（
米国特許第４，２９４，７５７号）（アシルクロリドを
用いたアシル化により調製される）。

池の位置が修飾されたメイタンシノールの適切なアナロ
グの具体的なσ１１として、以下のものを含む。

０）Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４，４２４，２１９号）
（メイタンシノールとＨ２Ｓ又はＰ　２　Ｓ　ｓとの反
応により調製される）。

■Ｃ−１４アルコキシメチル体（脱メトキシ／ＣＨ２０
Ｒ）（米国特許第４．３３１，５９８号） ■Ｃ−１４ヒドロキシメチル又はアシルオキシメチル（
ｃ｝｛２０Ｈ又はＣＨ２　０ＡＣ）体（米国特許第４．
４５０．２５４号）（ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）
から調製される）。

（４）　Ｃ　−　１　５ヒドロキシ／アシルオキシ体（
米国特許第４，３６４，８６６号（ストレブトマイセス
（　Ｓ　Ｈｅｐｌｏｍｙｃｅｓ）によるメイタンシノー
ルの変換により調製される）。

（！Ｉｓ）Ｃ−１５メトキシ体（米国特許第４，３１３
，９４６号及び第４，３１５，９２９号（トレウィア　
ヌディフロラ（Ｔｒｅｗ：ｚ　ｎｕｄ：ＩＩｏｒａ）か
ら単離された）。

（６）　Ｃ　−　１　’８　−　Ｎ一脱メチル体（米国
特許第４，３６２，６６３号及び第４，３２２，３４８
号）（ストレプトマイセス（　Ｓ　ｔｒｅｐｌｏｍｙｃ
ｅｓ）によるメイタンシノールの脱メチル化により調製
される）。

（７）４．５−脱オキシ体（米国特許第４，３７１．５
３３号）（メイタンシノールの三塩化チタン又はリチウ
ムアルミニウムヒドリドの還元により調製される）。

細胞結合剤にメイタンシノイドを結合するため、桔合基
（ｌｉｎｋｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ）が利用される。

適切な結合基は従来からよく知られており、例えばジス
ルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、光に不
安定な基、ベブチダーゼに不安定な基及びエステラーゼ
に不安定な基が含まれるが、ジスルフィド基及びチオエ
ーテル基が好ましい。

本発明による結合基は、通常の方法でメイタンシノイド
に共有結合する化学作用部分（ｃｈｅｍｉｃａｌｍｏｉ
ｅｌｙ）の一部である。好ましい実施態様においてその
化学作用部分は、エステル結合を介してメイタンシノイ
ドに共有結合することができる。

メイタンシノイドの多くの位置が、結合型にもよるが桔
合位置としてＧ用であることが期待される。例えば、エ
ステル結合の形成のため、水酸基を有するＣ−３位、ヒ
ドロキシメチル基で修飾されたＣ−１４位、水酸基で修
飾されたＣ−１５位及び水酸基を有するＣ−２０位は全
て有用であることが期待される。しかしながら、Ｃ−３
位が好ましく、メイタンシノールのＣ−３位は特に好ま
しい。

又、メイタンシノール又はそのアナログのＮ−メチルア
ラニンａ’ｆＷｃ−３エステル及びＮ−メチルシステイ
ン含有Ｃ−３エステルも好ましい。

桔合基を有するメイタンシノールのエステルの合成を、
結合基がチオール及びジスルフィドのものに関して以下
に記載するが、特有の代表的な実施列が実施例４に示さ
れるように、本発叩では他の結合基も、また、他のメイ
タンシノイドと同様に使用できることは、当業者にとっ
ては理解できるであろう。

メイタンシノイド誘導体の合成を、第１図、第２図、第
３図、第４ａ及び４ｂ図を参照することにより記載する
。これら図面では、ジスルフィド含有メイタンシノイド
エステルは、メイタンシノール１ｂをジスルフィド基を
含む新しく調製したＮ−メチルーＬ−アラニン又はＮ−
メチルーＬ一システイン誘導体と縮合することにより調
製される。

種々の梢長のω−メルカブトカルボン酸は、各々、メチ
ルメタンチオールスルホン酸又はアリルスルフィド、例
えばジフエニルジスルフィド、環置換ジフエニルジスル
フィド及び２，２′−ジチオビリジンのような複素環ジ
スルフィドと反応させることにより、ト１１えば３ａ〜
３ｄ（ｎは１〜１０で、枝分れ又は環状の脂肪族を含む
）のようにメチルージチオ誘導体に変換され、又は、４
　ａ　ｓ４ｂのようにアリールージチオ誘導体に変扱さ
れる。そのカルボン酸は活性化され、その後Ｎ−メチル
ーＬ−アラニンと反応させ、σりえば５ａ〜５ｆのよう
にメイタンシノール１ｂとの縮合用に適したカルボン酸
を形成する。

メイタンシノール１ｂ又はそのアナログをカルボン酸５
ａ〜５ｆでエステル化すると、ジスルフィド基を含むメ
イタンシノイド６ａ〜６ｆが得られる。ジチオスレイト
ールにより化合物６ａ〜６ｆ中のジスルフィド基を開裂
すると、チオール基を含むメイタンシノイド７ａ〜７ｃ
が得られる。

この化合物７ａ〜ヱ！は、細胞結合剤とジスルフィド又
はチオエーテル結合により容易に結合される。

Ｎ−メチルーＬ−アラニンは、文献記載の方法により調
製でき（フ、エス．ジエイ．　　（Ｆｕ，ｓ，Ｊ．）ア
ンド　ビルンバオム．エス．エム．（Ｂ：ｒｎｂａｕｔ
ｎ　Ｓ．　Ｍ．　）　、７５、ジャーナル・オブ・アメ
リカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｂｅｍ
．Ｓｏｃ．）９１８　（１９５３））又は市販品が入手
可能である（シグマ　ケミカル　カンパニー　（Ｓｉｇ
ｍａ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎ７）　）。

もう一つの実施態様では、Ｎ−メチルーシステイン又は
Ｎ−メチルーホモシスティンが、各々、ジスルフィド誘
導体８（各々、ｎ＝１及び２）の変換され、次にアシル
化されて望ましいカルボン酸旦（各々ｎ＝ｌ及び２）が
得られる。メイタンシノールは、化合物９（ｎ＝１）に
よりエステル化され、ジスルフィド含有エステル１ｏが
得られる。Ｌ互について記載〔た方法と同様にして、ジ
チオスレイトールにより１０ａを還元すると、細胞結合
剤に結合し得るチオール基を含有するメイタンシノイド
１１が得られる。

Ｎ−メチルシステインは、ウントハイム（Ｕｎｄｈｅｉ
ｍ）及びエイデム（Ｅｉｄｓｍ）　、２３、Ａｃｌａ　
Ｃｈｅｍ．　Ｓｃａｎｄ．，　３　１　２９−３　１　
３３　（１　９７０）に記載の方法で調製できる。

以上についてより具体的に述べると、メイタンシノール
ヨ互は、メイタンシン１ａ又は他のメイタンシノールの
エステルをリチウムアルミニウムヒドリド等により還元
して得られる〔クブチャン、エス．エム，　　（Ｋｕｐ
ｃｈａｎ，　　Ｓ．　　Ｍ．　）ら、２１、ジャーナル
・オブ・メディシナル・ケミストリ−（Ｊ，　Ｍｅｄ．
Ｃｈｅｍ．）　、３１−３７　（１９７８）　　；米国
特許第４，３６０．４６２号〕。微生物ノヵルジア（Ｎ
ｏｃａｒｄｉａ）からメイタンシノールを単離すること
も可能である〔ヒガシデ（Ｈ　ｉｇａｓｈｉｄｅ）ら、
米国特許第４，１５１．０４２号（１９７９）参照〕。

メイタンシノールは、次にジシクロへキシル力ルポジイ
ミド（Ｄ　Ｃ　Ｃ）及び触媒量の塩化亜鉛のような適切
な試薬を用いて異なるエステル誘導体６ａ〜６ｆ及び１
０に変換される〔米国特許第４．１３７，２３０号、カ
ワイ（Ｋａｗａｉ）ら、３２、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ，
　　Ｂｕｌｌ．，　　３４４１〜３９５１　（１９８４
）；米国特許第４．２６０．６０９号参照〕。Ｄ及びＬ
−アミノアシル側鎖を含む２つのジアステレオマー生成
物が得られる。そのジアステレオマーのメイタンシノイ
ドエステルは、シリカゲルのプレパラティブＴＬＣによ
り容易に分離できる。σりえば、アナルテック　ジーエ
フ（Ａｎａｌｆｅｃｈ　ＧＦ）プレー１−（１０００ミ
クロン）を使用してメタノール６％を含むクロロホルム
中で）ｔｄ　１３Ｈさせることで、異なるバンドとして
得られる。望むバンドはプレートからかき取られ、生成
物は酢酸エチルで抽出される〔クブチャン、エス．エム
．　　（Ｋｕｐｃｈａｎ，　　Ｓ，　　Ｍ，　）　、２
１、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）　、３１−３７　（１９７８
）；及びヒガシデ（Ｈ　ｉｇａｓｈｉｄｅ）ら、米国特
許第４，３６０．４６２号（１９８２）参照〕。

ジスルフィドを含有するメイタンシノイドの対応するメ
ルカブトーメイタンシノイド７ａ，７ｂ、７Ｃ及び１１
への還元は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理する
ことにより達成され、精製は、ウォーターズ（　Ｗ　ａ
　ｌ　ｅ　ｒ　ｓ　）のラジアルバック（ｒａｄｉａｌ
ｐａｋ）　Ｃ　−　１　８カラムを使用し、アセトニト
リルの５５％〜８０％の直線濃度勾配（ｌｉｎｅａｒＨ
ａｄｉｅｎｌ）水溶液を流速１．　　５ｍ６／ｍｉｎで
１０分間溶出する条件下ＨＰＬＣにより行われる。

メイタンシノールのアナログが、ジスルフィドを含有す
るメイタンシノイドエステルを得るための出允物質とし
て使用されるときには、そのアナログは、Ｎ−メチルー
Ｌ−アラニン又はＮ−メチルーＬ−システイン誘導体と
の反応の前に調製される。

本発川で有用なＮ−メチル−アラニンを含有するメイタ
ンシノイド誘導体の具体『１１は、式（Ｉ）（ＩＩ）　
　（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）により表わされる。

〔式中、Ｚｏは、水素原子又はＳＲを示し、Ｒは、直鎖
アルキル基、分技アルキル括、環状アルキル基、非置換
の又は置換基を有するアリール基又は複素環基を示す。

ｇは、１〜１０の整数を示す。ｍＢは、メイタンシノイ
ドを示す。〕〔式中、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なって
、水素原子、メチル基又はエチル基を示す。ｚ１は、水
素原子又はＳＲ３を示し、Ｒ，は、直鎖アルキル基、分
枝アルキル基、環状アルキル県、非置換の又は置換基を
有するアリール基又は複素環基を示す。ｍは、０、１、
２又は３を示す。ｍ！ｙは、メイタンシノイドを示す。

〕〔式中、Ｚ２は、水素原子又はＳＲ４を示し、Ｒ４は、
直錆アルキル栽、分枝アルキル基、環状アルキル基、非
置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環基を示
す。ｎは、３〜８の整数を示す。ｍａｄは、メイタンシ
ノイドを示す。〕〔式中、Ｚｏは水素原子又はＳＲを示
し、Ｒは直鎖アルキル基、分技アルキル県、環状アルキ
ノレ基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複
素断基を示す。Ｄは、１、２又は３を示す。

Ｙ．は塩素原子又は水素原子を示す。Ｘ３は水素原子又
はメチル基を示す〕。

本発叩において有用なＮ−メチルシステインを含ｆ了す
るメイタンシノイド誘導体の具体例は式（Ｖ）及び式（
Ｖｌ）で示される。

ＳＺ３〔式中、Ｚ，は、水素原子又はＳＲ，を示し、Ｒ，は、
直鎖アルキル基、分技アルキル基、環状アルキル基、非
置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環基を示
す。０は、１、２又は３を示す。ｐは、０又は１〜１０
の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示す。〕〔式中、Ｚ，は、水素原子又はＳＲｓを示し、Ｒ５は、
直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基、非
置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環基を示
す。０は、１、２又は３を示す。ｑは、０又は１〜１０
の整数を示す。Ｙ０は、塩素原子又は水素原子を示す。

Ｘ３は、水素原子又はメチル基を示す〕。

直消アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、
プロビル基、ブチル基、ペンチル基及びヘキシル基が含
まれる。

分枝アルキル基としては、例えばイソブロビル基、イソ
ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、Ｉｅｒｔ−ブチル基、イ
ンペンチル基及び１−エチルブロピル基が含まれる。

環状アルキル基としては、例えばシクロプ口ピル基、シ
クロブチル基、シクロベンチル基及びシクロヘキシル基
が含まれる。

非置換のアリール基としては、例えばフエニル基及びナ
フチル基が含まれる。

置換基を有するアリール基としては、例えば上記アルキ
ル基、塩素原子、臭素原子又はフッ素原子のようなハロ
ゲン原子、ニトロ基、アミノ基、スルホン酸基、カルボ
ン酸基、水酸基及びアルコキシ基で置換された上記アリ
ール基が含まれる。

複素環基としては、例えば、酸素原子、窒素原子又は硫
黄原子から選択されたヘテロ原子を有する化合物であっ
て、例えばピロリル基、ピリジル基、フリル基及びチオ
フエン基等を例示できる。

ジスルフィド基を含有する又はメルカブト基を含有する
本発明のメイタンシノイド薬は、インビトロにおける種
々の望ましくない細胞系（ｕｎｗａｎｌｓｄ　ｃｅｌｌ
　ｌｉｎｅｓ）の増殖抑制活性により評価できる。例え
ば、ヒト類表皮ガン系のＫＢ，ヒト１１市ガン系のＳＫ
ＢＲ３及びパーキット（　Ｂ　ｕ＋ｋｉＮ’　ｓ）リン
パ腫系のナマルワ（Ｎａｍａｌｗｘ）のような細胞系は
、これら化合物の細胞障害性の評価のために容易に使用
することができる。評価されるべき細胞は、２４時間化
合物にさらされ、公知の方法により生存細胞部分を直接
試験により測定した。ＩＣ，，値がその試験の結果から
計算される。

細胞結合剤の調製治療薬としての本発明化合物の効果は、適当な細胞紀合
剤を注意深く選択することにかかっている。細胞結合剤
は、現在知られているもの又は将来知られるようになる
もののいずれでもよく、ベブチド及び非ペブチドの両方
を含む。一般的にはこれらは、抗体（特にモノクローナ
ル抗体）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、栄養素
輸送分子（例えばｌ・ランスフエリン）又は他のいかな
る細胞結合物質又は分子であってもよい。

使用され得る細胞結合剤のより具体的な例としては、以
下のものを含む：モノクローナル抗体；Ｆ　ａｂ．　Ｆ　ｉｂ’及びＦ　（ａｂ’　）　２のよ
うな抗体のフラグメント〔パーハム（Ｐａｒｈａｍ）、
１３１、ジャーナル・オブ・イムノロジー（　Ｊ　，　
　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ．　）、２８９５−２９０２　（１
９８３）；スプリング（Ｓｐｒｉｎｇ）ら、１１３、ジ
ャーナル・オブ・イムノロジ−（　Ｊ　，　　Ｉ　ｍｍ
ｕｎｏｌ，　）、４７０−４７８　（１９７４）；ニゾ
ノフ（ＮｉｓｏｎｏＨ）ら、８９、Ａ『ｃｈ，Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．　　Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２３０−２４４　（１
９６０））；インターフェロン（例えばα、β、γ）；ＩＬ−２、Ｉ
Ｌ−３、ＩＬ−４及びＩＬ−６のようなリンホカイン；インシュリン、チロトロビン放出ホルモン（ＴＲＨ）　
、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、アンドロジエ
ン及びエストロジエンのようなステロイドホルモン、等
のホルモン；表皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーム成長囚子一
アルファ（ＴＧＦ一α）、コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳ
Ｆ，Ｍ−ＣＳＦ及びＧＭ−ＣＳＦ）のような成長因子及
びコロニー刺激因子（バーゲス（Ｂｕｒｇｅｓｓ）　、
５、イムノロジー　トウデ−（　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
　Ｔｏｄａｙ）　、１　５　５−　１　５８　（１　９
８４））；及びトランスフエリン〔オケフ（０’　Ｋｅｅｆｅ）ら、２
６０、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
−（Ｊ，　　Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）　、９３２−９３
７　　（１９８５））　　。

モノクローナル抗体の技術により、モノクローナル抗体
の形態での極めて特異的な細胞結合剤の製造が可能にな
る。無傷標的細胞（ｉｎｔａｃｔｔａｒｇｅｔ　ｃｅｌ
ｌ）のような興味のある抗原でマウス、ラット、ハムス
ター又は他の補乳動物を免疫化することにより製造され
るモノクローナル抗体の調製技術は、当該技術分舒にお
いて極めてよく知られたものであり、抗原としては、標
的細胞、完全ウイルス（ｗｈｏｌｅ　ｖｉｔｕｓ）、弱
毒化完全ウイルス及びウイルスコート蛋白のようなウイ
ルス蛋白から単離されるものでもよい。感作されたヒト
の細胞もまた使用され得る。

適当な細胞結合剤の選択は、標的とされる特別な細胞集
印による選択の問題ではあるが、一般には適当なものが
利用されるならばモノクローナル抗体が好ましい。

例えば、モノクローナル抗体Ｊ５は、コモン・アキュー
ト・リンホプラスチック・ロイケミア・アンチゲン（Ｃ
ｏｍｍｏｎ　Ａｃｕｔｅ　　Ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｆｉ
ｃＬｅｕｋｅｍｉａ　Ａｎｔｉｇｅｎ　（ＣＡＬＬＡ）
　）に特異的なネズミ（ｍｕｒｉｎｅ）のＩｇＧ２，抗
体であり〔リッッ（Ｒｉｌｘｌら、２８３、ネイチャ−
　（Ｎａｔｕｒｅ）５８３−５８５　（１９８０））　
、もしも標的細胞が急性リンパ芽球白血病のようにＣＡ
ＬＬＡを発現するちのであれば使用可能である。同様に
モノクローナル抗体　抗一８４　（ａｎｔｉ−８４）は
、Ｂ一細胞上のＣＤ１９抗原に結合するネズミのＩｇＧ
，であり　〔ナドラー（Ｎａｄｌｓｒ）ら、１３１、ジ
ャーナル・オブ・イムノロジー（　Ｊ　，　　Ｉ　ｍｍ
ｕｎｏｌ，　）、２４４−２５０　（１９８Ｂ））　、
標的細胞がＢ一細胞又は非ホジキン（ｎｏｎ−Ｈ　ｏｄ
ｇｋｉｎ’　ｓ）リンパ腫又は慢↑／Ｐ　ＩＪンパ芽球
白血病のように前記抗原を表現型とする（ｅｘｐｒｅｓ
ｓ）病態細胞の場合には使用され得る。

加えて、骨髄細胞に桔合するＧＭ−ＣＳＦ（コ口二一刺
激囚子）は、急性骨髄性白血病出来の病態細胞に対する
細胞結合剤として使用できる。活性化されたＴ一細胞に
結合するＩＬ−２は、移植細胞の拒絶反応の附止、移植
片対宿主病の防止及び治療及び急性Ｔ一細胞白血病の処
置のために使用できる。メラニン細胞に桔合するＭＳＨ
（メラニン細胞刺激ホルモン）は、黒色肺の治療に使用
できる。

乳房及び精果のガンは、細胞話合剤として各々エスｌ・
ロジエン（又はエストロジエンアナログ）又はアンドロ
ジエン（又はアンドロジエンアナログ）により好適に標
的化される。

細胞障害剤乃至結合体の調製本発叩のメイタンシノイド誘導体と細胞桔合剤との桔合
体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）は、現在用いられ又は後に開
発されるいかなる技術を用いても形成され得る。メイタ
ンシノイドエステルは、遊離のアミノ基を形成するよう
に修飾され、次に酸に不安定な又は光に不安定なリンカ
ー（ｔｉｎｋｅｒ）を介して抗体又は他の細胞結合剤と
連結される。メイタンシノイドエステルは、ペブチドと
縮合され、次に細胞桔合剤と連桔することにより、ペブ
チダーゼに不安定なリンカーを製造することができる。

該メイタンシノイドエステルは、１級水酸基（ｐｒｉｍ
ａｒ７ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｇｒｏｕｐ）を生成するよう
に処理し、次に細胞内のエステラーセにより開裂され、
遊離の薬物を放出する結合体を製造するために、コハク
酸エステルにし（ｓｕｃｃｉｎｙｌａｆｅｄ）　、細胞
結合剤と連拮することもできる。最も好ましくは、メイ
タンシノイドエステルは、遊離又は保護チオール基を導
入するように処理し、次に１又は２以上のジスルフィド
基又はチオール基を含有するメイタンシノイド誘導体が
、ジスルフィド結合を介して細胞桔合剤と；ＩＩ／’ｑ
−桔合的に連結する。

本発明の代表的な結合体は、抗体／メイタンシノイド誘
導体、抗体フラグメン１・／メイタンシノイド誘導体、
表皮成長因子（：ＥＧＦ）／メイタンシノイド誘導体、
メラニン細胞刺激ポルモン（ＭＳＨ）／メイタンシノイ
ド誘導体、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）／メイタンシ
ノイド誘導体、エス１・ロジエン／メイタンシノイド誘
導体、エストロジエンアナログ／メイタンシノイド誘導
体、アンドロジエン／メイタンシノイド誘導体、アンド
ロジエンアナログ／メイタンシノイド誘導体である。

抗体、抗体フラグメント、蛋白ホルモン、蛋白成長因子
（ｐｒｏｌｅｉｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｌａｃｌｏ＋）及び
他の蛋白質のメイタンシノイド桔合体は同様の方法で調
製できる。クリえば、ペプチドと抗体は、公知の方法に
よりＮ−スクシンイミジル　３−（２−ビリジルジチオ
）プロピオネート、４−スクシンイミジルーオキシカル
ボニルーα−メチルーα一（２一ピリジルジチオ）一ト
ルエン（ＳＭＰＴ）　、Ｎ−スクシンイミジル−３−（
２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＤＰＢ）、２−イ
ミノチオラン又はＳ−アセチルスクンニックアンハイド
ライドのような架橋形戊試薬により修飾できる。〔カー
ルソン（　Ｃ　ａｒｌｓｓｏｎ）ら、１７３、Ｂ　ｉｏ
ｃｈｅｍ，　　Ｊ　，　　７２３−７３７　（１９７８
）；ブラットラー（Ｂ　Ｉａｌｔｌｅ＋）ら、２４、バ
イオケミス！・り一（　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ．　）、１５
１７−１５２４　（１９８５）；ランバー｝　（　Ｌ　
ａｍｂｅｒｌ）ら、２２、バイオケミストリー（　Ｂ　
ｉｏｃｈｅｍ．　）、３９１３−３９２０　　（１９８
３）；クロッツＣ，Ｋ　ｌｏｇ）ら、９６、Ａ　ｒｃｈ
Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ．　Ｂ　ｉｏｐｈｙｓ．　，　６　０
　５、（１９６２）　；リウ（Ｌｉｕ）ら、ｌ８、バイ
オケミストリー（　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ．　）、６９０　
（１９７９）；ブラッキー及びソルペ（Ｂ！ａｋｅｙ　
ａｎｄ　Ｔｈｏｒｐｅ）、１、アンチボディ・イムノコ
ンジュゲーツ・アンド・ラジオファーマシューティカル
ズ（ＡｎｔｉｂｏｄｙＩｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｌｅ
ｓ　＆Ｒａｄｉｏｐｈａ＋ｍａｃｅｕｌｉｃａｌｓ）、
１−１６　（１９８８）；ウオレル（Ｗｏ＋＋ｅｌｌ）
　　ら、１、アンチーキャンサー・ドラッグ・デザイン
（Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ）
　１　７　９−１　８４（１９８６）！照〕。このよう
にして得た遊離又は保護チオール基を有する細胞拮合剤
は、次に桔合体を調製するために、ジスルフィド基又は
チオール基を含むメイタンシノイドと反応させる。その
桔合体は、ＨＰＬＣ又はゲル炉過により精製できる。

同様に、例えば、エストラジオール及びアンド口ステン
ジオールのようなエス１・ロジエン及びアンドロジエン
細胞桔合剤は、縮合剤として、例えばジシクロへキシル
カルボジイミドを使用して適当なジスルフィド基を含一
何するカルボン酸によりＣ−１７位の水酸基をエステル
化できる。使用できるそのようなカルボン酸の例として
は、３（２−ビリジルジチオ）ブロビオン酸、３−メチ
ルジチオブロピオン酸及び３−フエニルジチオブロピオ
ン酸が挙げられる。Ｃ−１７水酸基のエステル化はまた
、３−Ｓ−アセチルブロバノイルクロリドのような適当
に保謹されたチオール基を含むカルボン酸クロリドとの
反応によっても得られる。エステル化の他の方法として
は、文献記載の方法も使用できるＣハスラム（Ｈａｓｌ
ａｍ）、３６、テ１・ラヘドロン（　Ｔｅｌｒａｈｅｄ
ｒｏｎ）　、２　４　０　９　−　２４３３　（１　９
８０））。保護又は遊離のチオール基を含有するアンド
ロジエン又はエストロジエンは、次に粘合体を製造する
ためにジスルフィド基又はチオール基を含むメイタンシ
ノイドと反応させることができる。その結合体はＨＰＬ
Ｃ又はシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
できる。

モノクローナル抗体又は細胞結合剤／メイタンンノイド
結合体は、上記のようにメイタンシノイド分子を送達し
得るジスルフィド結合を介して連桔したものが好ましい
。そのような細胞桔合性の桔合体は、スクシンイミジル
　ビリジルージチオブロビオネ−ｈ　（ＳＰＤＰ）でモ
ノクローナル抗体を修飾するような公知の方法により調
製される（カールソン（　Ｃ　ａｒｌｓｓｏｎ）ら、１
７３、Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ，Ｊ．，７２３−７３７　（１
９７８））。得られたチオピリジル基は、次にジスルフ
ィド基で連桔された桔合体を調製するために、チオール
基を含有するメイタンシノイドで処理することにより置
換される。別法として、アリールジチオメイタンシノイ
ドの場合には、細胞結合性の粘合体の形成は、あらかじ
め抗体分子に導入されたスルフヒドリル是によりメイタ
ンシノイドのアリールチオールを直接的に置扱するのが
効率的である。ジスルフィド架橋釘”１を介して連桔さ
れた１〜１０個のメイタンシノイド薬を含有する結合体
は、いずれのフゴ法によっても容易に調製される。

より詳しくは、ｐＨ７．０でｌｍｌ＋１のエチレンジア
ミン４八１二酸ＣＥＤＴＡ）を含む０．１Ｍのリン酸カ
リウムバッファ一中で、ｌ　ｍｇ　／　ｍｆＪの濃度の
ジチオピリジル基で修飾された抗体のＧ　’ｒ＆を、チ
オール基を含有するメイタンシノイド（ジチオピリジル
基に対して１．２５モル当量）で処理する。

修飾された抗体からのピリジン−２−チオンの放出が、
３４３ｎｍにおいて光学的にモニターされ、反応は３０
分で完結する。抗体一メイタンシノイド粘合体は、セフ
ァデックスＧ−２５のカラムを通すゲル炉過（ｇｅｌ　
ｌｉｌＨａｔｉｏｎ）により未反応の薬物及び他の低分
子量物質を除去して精製する。

抗（’ｔ；　１　分子当たりのメイタンシノイドの桔合
数は、２５２ｎｍと２　８　０　ｎｍの吸光度の比率を
測定することにより決定される。この方法によるとジス
ルフィド結合を介して抗体１分子当たり平均１〜１０個
のメイタンシノイドが結合できる。

非開裂性の桔合による抗体一メイタンシノイド桔合体も
また調製できる。抗体は、１〜１０の反応性官能基を導
入するために、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミド
メチル）一シクロへキサンー１−カルボキシレーｒ−　
（ｓＭｃｃ）　、スルフォ−ＳＭＣＣ，ｍ−マレイミド
ベンゾイルーＮヒドロキシスクシンイミド　エステル（
ＭＢＳ）、スルフォ−ＭＢＳ又はスクシンイミジルーイ
オドアセテートのような架橋試共により、文献記載の方
法で修飾することがてきる〔ヨシタケ（Ｙｏｓｈｉｔａ
ｋｅ）ら、１０１、ユーロピアン・ジャーナル・オブ・
バイオケミストリー（Ｅｕ＋，　　ＪＢ　ｉｏｃｈｅｍ
．　）、３９５−３９９　（１９７９）；ハシダ（１−
Ｉａｓｈｉｄａ）　ら、Ｊ　，　　Ａｐｐｌｉｅｄ　　
Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ．，　５６−６３　（１９８４）；リ
ウ（Ｌｉｕ）ら、１８、バイオケミス１・リー（　Ｂ　
ｉｏｃｈｅｍ．）、６９０−６９７　（１９７９）参照
〕。修飾された抗体は、次に拮合体を製造するために、
チオール基を含−（−ｒするメイタンシノイ１・゜誘導
体と反応させる。得られた桔合体は、セファデックスＧ
−２５カラムを通すゲルが過により精製できる。

修飾された抗体は、チオール基を含Ｇするメイタンンノ
イド（マレイミド基に対して１．２５モル当量）と処理
される。その混合物は、４゜Ｃで一夜インキユベートさ
れる。抗体一メイタンシノイド結合体は、セファデック
スＧ−２５カラムを通すゲル炉過により精製される。典
型的には、抗体１分子当たり平均１〜１０個のメイタン
シノイドが連結される。

マレイミド基を導入するために、スクシンイミジル　４
−（Ｎ−マレイミドメチル）一シクロヘキサン−１−カ
ルボキシレー１−（ＳＭＣＣ）により抗体を修飾し、次
にチオエーテル基が連結された桔合体を得るために、修
飾された抗体をチオール基を含何するメイタンシノイド
と反応させるのが好ましい方法である。再び抗体１分子
当たり１〜１０個の薬物分子を有する結合体が得られる
。

細胞障害性試験ナマルワ（　Ｎ　ａｍａ　ｌｗａ）及びＨＬ−６０のよ
うな非付着釧胞系に対するメイタンシノイド及びメイタ
ンシノイドー抗体結合体の細胞障害性は、ゴールドマッ
チ＋　一（Ｇｏｉｄｍａｃｈｅｒ）ら、１３５、ジャー
ナル・オブ・イムノロジー（Ｊ，　　Ｉｍｍｕｎｏｌ．
　）３６４８−３６５１　（１９８５）に記載されたよ
うに細胞増殖一線の逆外挿（ｂａｃｋ−ｅｘｆｒａｐｏ
ｌａｔｉｏｎ）により測定できるＳ　Ｋ　Ｂ　Ｒ　３及
びＫＢのような付着細胞系に対するこれら化合物の細胞
障害性は、ゴールドマッチャ−　（Ｇ　ｏｌｄｍａｃｈ
ｅｒ）ら、１０２、Ｊ，　　Ｃｅｌｌ，Ｂｉｏｌ、，１
３１２−１３１９　（１９８６）に記載されたようにク
ロノジエニック（ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ）試験により測
定される。

治療剤及び選択された細胞果団を殺す方法本発明はまた
、以下の（ａ）及び（ｂ）即ち、（ａ）細胞障害量の、
細胞結合剤に結合した１又は２以」二のメイタンシノイ
ド、及び（ｂ）薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含
６することを特徴とする選択された細胞ｉｂを没すため
の治療剤を提供するものである。

同様に本発明は、細胞結合剤に連結された１又は２以上
のメイタンシノイドを含む細胞障害量の細胞障害剤を、
選択された細胞集団からの細胞を含むと思われる組織又
は細胞集団に接触することを特徴とする選択された細胞
集団を殺す方法を提供するものである。

細胞障害剤は上記に記載したようにして調製される。

適当な薬学的に許容される担体、希釈剤及び賦形剤はよ
く知られており、臨床状態に応じて当業者により決定さ
れ得る。

適当な担体、希釈剤及び／又は賦形剤の例としては、以
下の（１）〜（３）を含む：　（１）　ｐ　Ｈ約７．４
で、ｌｍｇ／一〜２５ｍｇ／一のヒト血清アルブミンを
含むドゥルベコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’　ｓ）のリン酸緩
衝食塩水、（７）０．　　９％生理食塩水（０．９％ｗ
／ｙＮａＣρ）及び０５％（Ｗ／Ｖ）　デキストロース
。

選択された細胞集団を殺す方法は、インビトロ、インビ
ボ又はイクスビボ＜ｅｘ　　ｖｉｖｏ）で行うことがで
きる。

インビト口での使用例は、病気の又は悪性の細胞を殺す
ために、同じ患者への移植前に自己の骨髄を処置するこ
とを含む。骨髄の処置は、コンビテン｝Ｔ一細胞を殺し
、移植片対宿主病（ｇｒａｆｌ−ｖｅｒｓｕｓ−ｈｏｓ
ｔ−ｄｉｓｅａｓｅ　（Ｇ　Ｖ　Ｈ　Ｄ））を防止する
ために移植の前に行われる。標的抗原を表現しない望ま
しい変種を除いて全ての細胞を殺すためか又は望ましく
ない抗原を表現する変種を殺すため細胞培養を処置する
こともできる。

インビト口での非臨床的な使用条件は、熟練技術者によ
り容易に決定される。

ガンを処置するか又は自己免疫疾患を処置するための自
家移植に先立って骨髄から腫瘍細胞又はリンパ系細胞を
除去するための、又は、移植片対宿主病を防止するため
移植に先立ち自家又は同挿（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ）の
骨髄又は組織からＴ−１ｆｆ胞又は池のリンパ系細胞を
除去するためのイクスビボ（ｅｘ　　ｙｉｖｏ）での臨
床的な使用のために、処置は以下のように行われる。骨
髄が患者又は他人から採取され、次に血清を含む培地中
に本発明の細胞障害剤を１０μＭから１ｐＭの濃度範囲
で加え、３０分から４８時間、３７℃でインキユベート
する。濃度及びインキュベーション（薬物量）の正確な
条件は熟練技術者により容易に決定される。

インキュベーション後に、骨髄細胞は血清を含む培地で
洗浄され、公知の方法により静脈内注入により患者に戻
される。患者が、除去的（ａｂｌａｌｉｖｅ）化学療法
又は身体全体の照射のコースのような他の処置を骨髄の
採取と処置された細胞の再注入との間の時期に受けると
いう状況下では、処置された骨髄細胞は、標準的な医療
用機器を用いて液体窒素により冷凍状態で貯えられる。

インビボにおける臨床的な使用のためには、本発明の細
胞障書剤は滅閑性（ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ）及びエンドト
キシンレベルを試験される溶液として供給される。結合
体投与の適切なプロトコールの例は、以下の通りである
。結合体は、５日間毎日静脈内ボーラス（ｉ，　Ｖ，　
ｂｏｌｕｓ）として、又は５日間の持続的注入として投
与される。ボーラス（ｂｏｌｕｓ）の投与量は、通常生
理食塩水５０〜１００ｎｔｌｌにヒト血清アルブミンを
５〜１〇一加えることにより与えられる。持続的な注入
は、２４時間当り、通常生理食塩水２５０〜５００−に
対し２５〜５０ｎＩ１のヒｌ・血清アルブミンを加えた
ものを投与することにより行われる。投Ｍｆｉｌは、１
コースの処置につき体重１　ｋｇ当り１０μｇ〜ＩＣｌ
Ｏｍｇを静注する（１日当たり１　ｎｇ〜１　０　ｍｇ
／　ｋｇの範囲）。処置の４週間後の患者は、第２のコ
ースの処置を受けてもよい。投与経路、賦形剤、希釈剤
、薬物量、時間等に関する特別な臨床的プロトコールが
、臨床状態に応じて熟練技術者により決定される。

インビボ又はイクス　ビボ（ｅｘ　　ｖｉｖｏ）での選
択された細胞集囲を殺す方法により処置される医療症状
の例として、例えば肺、乳房、大腸、前立腺、腎臓、膵
臓、卵果及びリンパ組織のガンを含むあらゆるタイプの
悪性肺瘍；全身性狼瘉、リウマチ様関節炎、多発性硬化
症のような自己免疫疾患；腎移植組織の拒絶、肝移植組
織の拒絶、１１市移植組織の拒絶、心臓の移植組織の拒
絶及び骨髄移植組織の拒絶等の組織移植の拒絶反応；移
植片対宿主病；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の感染
、ヒ１・免疫不全ウイルス（Ｈ　Ｌ　Ｖ）の感染、エイ
ズ（ＡＩＤＳ）等のウイルス感染症；バクテリア感染症
；及びラムブル鞭毛虫症、アメーバ症、住血吸虫症及び
当業者により決定される他の寄生虫感染等を挙げること
ができる。

実施例本允■を、下記の限定的でない実施例を参照して説四す
る。特に断らない限り、全てのパーセン１・、比、部（
ｐａ＋ｌｓ１等は重量による。

実施例ｌメイタンシノイド誘導体の合戊融点は電熱融点装置（Ｅ　Ｉｅｃｔｒｏｌｈｅｒｍａｌ
ｍｅｌｌｉｎｇｐｏｉｎｌ　ａｐｐａｒａｔｕｓ）によ
り決定された。ブロ１・ン磁気共鳴（　’Ｈ　　ＮＭＲ
）スペクｌ・ルは、６０ＭＨｚのバリアン（Ｖａｒｉａ
ｎ）　ＥＭ３　６　０スペクト口メータ又は３００ＭＨ
ｚのブルーカー（ＢｒｕｋｅｒｌＡＭ３００マシンによ
り得られた。ケミカルシフトは内部標準のテトラメチル
シラン（ＴＭＳ）に対する相対値をδ値で報告した。Ｕ
Ｖスペクトルは、パーキン　エルマ−（　Ｐ　ｅ＋ｋｉ
ｎＥ　ｌｍｅ＋）λ４Ａ　スペクｌ・ロフォトメーター
で記録した。旋光度は、パーキン　エルマー（　Ｐ　ｅ
ｒｋｉｎ　Ｅ　ｌｍｅｔ）モデル２４１ポーラリメー夕
を用いて／Ｉｌ１定した。ギルソン（Ｇｉｌｓｏｎ）可
変波長のＵＶ検出器及びウォーターズ（Ｗａｆｅｒｓ）
のラジアルパック（Ｒａｄｉａｌｐａｋ）　Ｃ　−　１
　８ｈラムヲ装（ａしたレイニン（ＲａｉｎｉｎｌＨＰ
Ｘ機器を用いてＨＰＬＣ分析を行なった。元素分析は、
アトランティック　マイクロラブズ（Ａｔｌａｎｔｉｃ
　Ｍｉｃ＋ｏｌａｂｓ）アトランタ（Ａ　ｔｌａｎｔａ
）　、ジーエイ（Ｇａ）により行われた。

３−メチルジチオーブロピオン酸（３ｂ）３−メルカブ
トプロビオン酸（２ｂ）（５．００ｇ，０．０４７ｍｏｆｆ）の水１５〇一溶液
に、撹押下水浴で冷却しながらメチルメタンチオスルホ
ネート（６．５４ｇ，０．０５２ｍｏ，Ｑ）の無水エタ
ノール（７　５ｍｊ）溶液を加えた。反応泥合物を室混
で一夜撹押した。その混合物を、次に飽和食塩水４００
−により希釈し、エーテル（３Ｘ１５０ａ！ｌ）で抽出
した。エーテル抽出戚を合わせて飽和食塩水で洗浄し、
硫酸ナ１・リウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥し、濃縮した
。残渣を蒸留して、表題化合物の無色液体６．４７ｇ（
収率９０％）を得た。沸点（１．　　０ｍｍｌｇ）　１
５０６Ｃｏ ’Ｈ　　ＮＭＲ　　（ＣＤＣＮ　３　）　　δ２．　　
３　　（３Ｈ，　　ｓ）　　、２．　　８　　（４Ｈ，
ｍ）　　、１１．　　２　　（ＩＨ，　　ｓ）。

４−メチルジチオー酪酸（３ｃ）ビス−（３−カルポキシブ口ピル）一ジスルフィド（１
．００ｇ、４．２０ｍｍｏ１）のメタノール２〇一溶液
に、撹押下ジチオスレイトール（０．　　６４　７　ｇ
、４．２０ｍｍｏ夏）の水（２０＋ｄ）溶液を加えた。

次に、１０モルの水酸化ナトリウム溶液０．８４２ｍｆ
ｆｌ　（８．４２ｍｍｏＵ）を加え、混合物を還元を完
粘させるため室温下一夜撹押した。メチルメタンチオー
ルスルホネート（１．１７ｇ，９．２４ｍｍｏＯ　）を
加え、反応混合物を更に３時間撹押した。その混合物を
次に飽和食塩水（１５０ｍ４１）で希釈し、塩酸で酸性
とし、エチルエーテル（３Ｘ１００ｍＮ）で抽出した。

６機ｊ口を合わせ飽和食塩水で洗汗し、硫酸ナトリウム
で乾燥、濃縮後、残渣を塩化メチレン／酢酸エチルをＩ
容出演とじてンリカゲ゛ルクロマトグラフ。・一を行な
って表題化合物の透（７）溶液０．　　８６７ｇ（収率
５６％）を得た。

’Ｈ　　ＮＭＲ　ＣＣＤＣＩ　３　）δ２．　　１　（
２Ｈ，　ｍ）　、２．　　４　（３Ｈ，　　ｓ）、２．
４　（２Ｈ，ｍ）　、２．７　（２Ｈ，ｍ）、１１．１
　（ＩＨ，ｓ）。

５−メルカブ１・吉草酸（２ｄ）化合物２ｄは文献の方注を改変することにより調製した
〔キム（Ｋｈｉｍｌら、３７、ジャーナル・オブ・オル
ガニック・ケミストリー（Ｊ．　　Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．
）　、２７１４−２７２０　（１９７２））。

５−ブロム吉草酸（１．８０ｇ、○．○ｌｍｏρ）のｊ
Ｑ（水エタノール（２　５ｍ＋４１）溶戚に撹押下チオ
ウレア１．７６１ｇ、０．０１ｍｏ，Ｑ）を加え、反応
１昆合物を６時間還流した、次に、５０％水酸化ナ１・
リウム水／８液２０−を加え、反応ｌ昆合物を更に２時
間還志した。混合物は水１００−で希釈し、塩酸で酸性
にして酢酸エチル（４Ｘ５０ｍ４）で抽出した。有機層
を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去
した。残渣は塩化メチレン／酢酸エチルを后出液として
シリカゲルクロマ｝・グラフィーを行い表題化合物のフ
（１（色液体０．８８５ｇ　（収率６６％）を得た。

’Ｈ　　Ｎ？ｖｌＲ（ＣＤＣρ３）δ １．３　（ＬＨ，ｔ）、１．６　Ｃ４Ｈ，ｍ）、２．４
　（４Ｈ，ｍ）　、１１．５　（ＬＨ，ｓ）。

５−メチルジチオ吉草酸（３ｄ）５−メルカブ１・吉草酸（２ｄ）（０．５００ｇ、３．
７３ｍｍｏｇ）の水（２０ｍｊ）溶液に、４ｊ”ヨ｛′
１！下メチルメタンチオスルホネート（０．　　５　１
　７　ｇ、４．１０ｍｍｏ，Ｑ）の無水エタノール（５
ＭＪ）溶戚を加え、′混合物を室温で３時間撹押した。

次に、ｌ昆合物を飽和食塩水（ＩＯＭ）で希釈し、エチ
ルエーテル（３Ｘ１００ｍｆｆｌ）で抽出した。有機１
；’４ｉを合，１つせて胞和食塩水で洗浄し、硫酸ナ１
・リウムで乾燥して減圧下溶媒を留去した。残渣は塩化
メチレン／酢酸エチルを溶出液としてシリカゲルクロマ
トグラフィーを行い表題化合物の白色結晶０．６０２ｇ
　（収率９０％）を得た。融点４２４４゜Ｃ０Ｈ　　ＮＭＲ　（ＣＤｉ　３　）δ １．７　Ｃ４Ｈ，ｍ）　、２．４　＜３Ｈ，ｓ）、２．
４　（２Ｈ，ｍ）　、２．７　（２Ｈ，ｍ）、１１．１
　（ＩＨ，ｓ）。

３−フエニルジチオーブロピオン酸（４ａ）ジフエニル
ジスルフィド（３．０ｇ，１３．８ｍｍｏ，Ｑ）をエー
テル（１０ｍｆｆｌ）及びメタノール（２０ｍｆｆ）の
混合溶媒に溶かし、窒素気流下その后戚に撹押下室温で
３−メルカブトブロビオン酸Ｃ２ｂ）（０．４９ｇ、４
．６ｍｍｏ，１７）のエーテル（５−）溶ｔ＆を加え、
次に１０モルの水酸化ナ１・リウム水溶液（０．４６ｍ
Ｊ、４．６ｍｍｏｆｆ）を加えた。反応ｌ昆合物を室７
ＡＡで２０１ｊｂ間撹ｒ１！シ、次に減圧下てＩ容媒を
留去した。生戊物はΔ′１：酸エチル／ヘキザンを溶出
液としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した
。表題化合物を白色固体として０．５６ｇ（収率５６．
６％）得た。融点５７−５９゜Ｃ０ＮＭＲ　（ＣＤＣρ３、ＴＭＳ）δ ２．　　６−３．　　０　（４Ｈ，　ｍ）、７．１−７
．６　（５Ｈ，ｍ）、１０．６　（ＩＨ，ｓ）。

ビスー（４−ニトロフエニル）一ジスルフィｌ・（３．
ｏｏｇ、９．７３ｍｍｏ，Ｑ　）をテトラヒト口フラン
（ＴＨＦ）（２００ｍｆｌ）及びメタノール（　５　０
　ｍｎ　）の混合溶媒に后かした溶液に、撹押下３−メ
ルカブトブロピオン酸（２ｂ）（０．　　６　８　８　ｇ・、６．４９ｍｍｏρ）を加
えた。

次に、その混合物にＩＯＮ水酸化ナトリウム水溶液をｌ
′ｔｊ加え、１時間撹押した。反応混合物を次に飽和食
塩水（１０（Ｍ）で希釈し、酢酸エチル（３Ｘ７５ｄ）
で抽出した。有機層を合わせて硫酸ナ｝　ＩＪウムで乾
燥し、減圧下で溶媒を留去した。

残渣は、塩化メチレン／酢酸エチルを溶出液とじてシリ
カゲルクロマトグラフィーを行い、表題化合物の淡黄色
（ｌｉｇｈｔ　ｙｅｌｌｏｗ）の固体を０．８８５ｇ・
（収率５３％）を得た。融点９８−１００゜Ｃ０’Ｈ　
　ＮＭＲ　（Ｃ　Ｄ３　Ｃ　Ｏ　Ｃ　Ｄ３　）δ２．８
　（２Ｈ，ｍ）　、３．１　（２Ｈ，ｍ）、７．８　（
２Ｈ，ｄ）　、８．２　（２Ｈ，ｄ）。

乾燥塩化メチレン（４０ａｔｆｌ）中に１−（３−ジメ
チルアミノブロピル）−３−エチルカルボジイミド樵酸
塩（２．９９ｇ、１５．６ｍｍｏ，Ｑ）及びトリエチル
アミン（１．５８ｇ、１５，６１１１１１１１１１　０
　（Ｊ　）を后かした后液に、撹ｒ１！下Ｏ′Ｃでメチ
ルジチオ酢酸〔ンング（Ｓｉｎｇｈ）ら、１０４、Ａｎ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，　　５１　　５８　（１９８０
）　）（３ａ）（１．６６ｇ，１２．０ｍｍｏ．Ｑ）の
乾燥塩化メチレン（２０一）溶液を加えた。次に、４−
ジメチルアミノビリジン（０．　　０　７　３　ｇ，０
．６０ｍｍｏｌＪ）の乾燥塩化メチレン（２−）后液を
加え、その混合物をＯ℃で４５分間撹律した。次に、Ｎ
−メチルーＬ−アラニン（０．６１９ｇ、６．００ｍｍｏρ）及びトリエチルア
ミン（０．６０７ｇ、６．００ｍｍｏρ）のｌ昆合物の
乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３０一）溶液を
加え、混合物をＯ℃で２時間撹１１！　Ｌた。反応脛合
物を水（１００ｍｕ）で希釈し、更に３０分撹押し、次
に塩酸で酸性にして酢酸エチル（４Ｘ７５ｍｊ）で抽出
した。有機層を合わせて水で数回洗浄し、硫酸ナ１・リ
ウムで乾燥し、減圧下店媒を留去した。残渣は、塩化メ
チレン／酢酸エチルを溶出液としてシリカゲルクロマｌ
・グラフィーを行い、表題化合物の談黄色（ｐａｌｅＹ
ｅｌｌｏｗ）のオイル０．２５ｇ（収率１９％）を得ｔこ。

’Ｈ　　　ＮＭＲ　　（ＣＤＣｆｌ　　３　　）　　δ
１．４　　（３Ｈ，　　ｄ）　　、２．４　　（３Ｈ，
　　ｓ）２，９、３．０（合わせて３Ｈ，２ｓ）３．　
　６　　（２Ｈ，　　ｓ）　　、４．７、５．２（合わ
せてＩＨ，２ｑ）、９．　　８　　（ＩＨ，　　ｓ）．３−メチルジチオブロピオン酸（３ｂ）（．１．００ｇ
，６．５７ｍｍｏＵ　）の乾燥テトラヒ１・ロフラン（
ＴＨＦ）（２０ｍｆｆｌ）溶液に、アルゴン気流下−１
０゜Ｃで撹拌しながらイソブチルクロロホルメート（０
．８９７ｇ、６．５７ｍｍｏ，ｐ）及びトリエチルアミ
ン（０．　　６　６　５　ｇ、６．５７ｍｍｏＪ７）を
加え、反応混合物を１５分＋ｒ１１撹律した。Ｎ−メチ
ルーＬ−アラニン（０．６７７ｇ、６．５７ｍｍｏＵ）
及びトリエチルアミン（１．３３ｇ、１３．１４ｍｍｏ
ρ）を水（１０ｍｆｌ）に溶かしたｌ昆合水溶液を加え
、室温で一夜撹＋’ｌ′．Ｌた。その混合物を、次に水
（５〇一）で届釈し、塩酸で酸性にして酢酸エチル（４
ｘ５０ｍ４１）で抽出した。有機層を合わせて硫酸ナ１
・リウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣を、塩
化メチレン／６１：酸エチルを后出液としてシリカゲル
クロマ１・グラフィーを行い、表題化合物の白包結晶０
．５５６ｇ　（収率３４％）を得た。

融点９８−１００℃。

’Ｈ　　ＮＭＲ　（ＣＤＣｆｆ　３　）δ：１．　　３
　（３Ｈ，　　ｄ）　、２．　　２　（３Ｈ，　　ｓ）
、２．７　（４Ｈ，ｒｎ）　、４．５　（ＬＨ，　　ｑ
）、１０．７　ＣＩＨ，ｓ）。

元累分析、分子式一Ｃ　８Ｈ　＋ｓＮ　Ｏ　３　Ｓ　２
、分子ｆｉｌ：２３７．３３Ｃ　　　　　　　　Ｈ　　　　　　　Ｎ計算値　４０．
４９　　６，３７　　５．９０実７ｌｔり（直　　４０
．　　４２　　　６．　　４１　　　５．　　９３４−
メチルジチオ酪酸（３ｃ）（０．２００ｇ、１．２０ｍ
ｍｏρ）の乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１０ｍ
ｌｌ）溶液に、アルゴン気流下＝２０℃で撹押しながら
イソブチルクロロホルメート（０．１　６４　ｇ、１．
２０ｍｍｏｆｆ）及びトノエヂルアミン（０．　　１　
２　１　ｇ：、１．２０ｍｍｏ，Ｑ）を加え、その混合
物を２０分間撹拌した。次に、Ｎ−メチルーＬ−アラニ
ンＣ０．１２４ｇ、１．２０ｍｍｏｎ）及びトリエチルア
ミン（０．２４３ｇ、２．４０ｍｍｏρ）を水（５−）
に溶かした混合水后液を加え、反応ｌ昆合物を室温で５
時間撹押した。反応脛合物を、次に．４二記５ｂについ
て記載したのと同様に処理し、白色桔品として表題化合
物０．１３５ｇ４％）を得た。融点９２−９３゜Ｃ０ ’Ｈ　　ＮＭＲ　（ＣＤ（Ｊｌ３　）δ１．　４　（３
Ｈ，　　ｄ＞　、２．　　０　（２Ｈ，２．　　３　（
３Ｈ，　　ｓ）　、２、７（４Ｈ，２．９　（３Ｈ，ｓ
）　、５．１　（ＩＨ，１０．５　（ＩＨ，ｓ）。

（収率４ｍ）ｍ）ｑ）５−メチルジチオ吉草酸（３ｄ）（０．２０２ｇ、１．
　　１　２ｍｍｏ．Ｑ　）の乾燥テ１・ラヒドロフラン
（ＴＨＦ）（１５ｍ４１）溶液にアルゴン気流下−　４
　０　’Ｃで撹押しながら、イソブチルクロロホルメー
ト（０．１５３ｇ、１．　　１　２ｍｍｏｆｆ　）及び
）・リエチルアミン（０．ｌｌ３ｇ，１．１２ｍｍｏ，
Ｑ）を加え、反応混合物を−１０’Ｃで２０分間撹押し
た。次に、Ｎ−メチルーＬ−アラニン（０．１１６ｇ、
１．１　２ｍｍｏ．Ｑ　）及びトリエチルアミン（０．
２２７ｇ，２．２４ｍｍｏｆｆ　）を水（５−）に溶か
した溶液を加え、ｌ昆合物を０゜Ｃで５時間撹拌した。

反応混合物を上記５ｂと同様に処理し、白色粘晶として
表題化合物０．１９６ｇ　（収率６６％）を得た。融点
８４゜Ｃ０’Ｈ　　ＮＭＲ　（ＣＤ（１１１３　）δ１
．４　（３Ｈ，ｄ）　、１．８　（４Ｈ，ｍ）、２．４
　＜：３Ｈ，ｓ）　、２．７　（４Ｈ，ｍ）、３．　　
０　（３Ｈ，　　ｓ）　、５．　　２　（ＩＨ，　　Ｑ
）、１０．７　（ＬＨ，ｓ）。

３−フエニルジチオープロピオン酸（４ａ）（１．８ｇ
、８．４ｍｍｏｆｆ）の乾燥テトラヒド口フラン（ＴＨ
Ｆ）溶液に、窒素気流下−１５℃で激しく撹押しながら
イソブチルクロロボルメート（１．　　２ｍｌｌ、９．
２５ｍｍｏＤ）及びトリエチルアミン（１．２９−、９
．２５ｍｍｏ．，Ｑ）を加え、反応混合物をこの温度で
１０分間撹押した。

次に、Ｎ−メチルーＬ−アラニン（０．８７ｇ，８．４
ｍｍｏ，Ｑ）及びトリエチルアミン（１．２Ｍ、９．２
５ｍｍｏ，Ｑ）を水（１０ｍｆｌ）に溶かした溶液を加
え、反応混合物を〜１５゜Ｃて１５分間撹押した。次に
、室温に戻して、更に２．５時間撹押した。ＩＭ塩酸（
１０ｍｆｌ）を加え、反応混合物を酢酸エチル（４　Ｘ
　５　０ｍｆｌ）で抽出した。’ｌ層を合わせて硫酸ナ
トリウムで乾燥・枦過し、減圧下溶媒を留去した。粗生
成物を酢酸エチル／酢酸２％を含むヘキサンを溶出戚と
してンリカゲルクロマトグラフィーにより精製して表匙
化合物の白已固体１．　　５ｇ　（収率６０％）を得た
。

融点９６−９７゜Ｃ０ＮＭＲ．（ＣＤｉ　３　／ＴＭＳ）δ １．４　（２Ｈ，ｄ）、２．７−３．０　（７Ｈ，ｍ）、５．２　（ＩＨ，ｑ）、７．　　２−７．　　６　　（５Ｈ，ｍ）　　。

３−（４−ニトロフエニルジチオ）一ブロピオン酸（４
ｂ）　　（０．１００ｇＳ　０．３８６ｍｍｏ，Ｑ）の
乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１０ｍ４１）溶液
に、アルゴン気流下−４０℃で撹押しながらイソブチル
クロロホルメート（０．　　０　５　３　ｇ、０．３８
６ｍｍｏＮ）及びトリエチルアミン（０．０３９ｇ，０
、３８ｍｍＯＤ）を加え、０゜Ｃで６０分間撹ＦＰ　Ｌ
て反応を行った。

次に、Ｎ−メチルーＬ−アラニン（０．０４０ｇ，０．
３８６ｍｍｏ，Ｑ）及びｌ・リエチルアミン（０．０３
９ｇ，０．３８６ｍｍｏρ）を水（５ｍｆＪ）に溶かし
た溶液を加え、ａ合物を０℃で５時間撹押した。その混
合物を水（５０ｍｆｌ）で希釈し、塩酸で酸性にして酢
酸エチル（３　Ｘ　２　５ｍｄ）で抽出した。有機層を
合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去
した。残渣は、塩化メチレン／酢酸エチルを溶出液とし
てシリカゲルクロマ１・グラフィーを行い、表題化合物
の黄色結晶０．　０４８ｓｒ　（収率３６％）を得た。

融点７４−７７°Ｃ０ＮＭＲ　（ＣＤＣＤ，）δ １．４　（３Ｈ．ｄ）、２．　　６−３．　４　（４Ｈ，　ｍ）、２．９　（３
Ｈ，ｓ）、５．１　（ＩＨ，ｑ）、７．６−８．３　（４Ｈ，２ｄ）。

メイタノシールのエステル化代表的な実施例では、カルボン酸５（１３３Ｉｔｍｏｌ
）の乾燥塩化メチレン（０．　　３ｍｆｆ）溶液をアル
ゴン気流下撹押し、次にジシクロへキシル力ルポジイミ
ド（１６０ｚｚｍｏ，Ｑ）の塩化メチレン（０．　２ｆ
ｆＬｌｌ）溶液、１Ｍ塩化亜Ｊｆ）（ＺｎＣ．Ｑｚ）（
２６．２ｔｌｍｏｆｆ）のエーテル７８液及びメイタン
シノール（１　５ｍｇ．　　２６．　　６ｌｚｍｏ．Ｑ
　）の塩化メチレン（０．　　３ｍｆｆ）溶液と処理し
た。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次に炉過し、炉
液を減圧下留去した。粗混合物を６％のメタノールを含
む夕ロロポルム溶液で２回展開してシリカゲルのプレパ
ラティブＴＬＣを行い、２つのＵＶ吸収が主要なバンド
を得た。２つのバンドを酢酸エチルで抽出して単離し、
ＮＭＲ分光法により特定した。

カルボン酸５ｂ　（３１．５ｍｇ，１３３μｍｏｊ２）
の乾燥塩化メチレン（０．　　Ｍ）溶液をアルゴン気流
下撹律し、次に、ジシクロへキシルカルボジイミド（３
３ｍｇ，　１　６０ｔｚｍｏ，Ｑ　）の塩化メチレン溶
液、ＩＭ塩化亜鉛（ＺｎＣ．Ｑ２）（２６．６１ｔｍｏ
Ｑ　）のエーテル＋８液及びメイタンシノール（１　５
ｍｇ，　−２６．　　６μｍｏｌ　）の塩化メチレン（
０．　　Ｍ）溶液と処理した。反応混合物を室温で３時
間撹拌し、炉過し、減圧下溶媒を留去した。６％のメタ
ノールを含むクロロホルム溶液で２回展開してシリカゲ
ルのプレバラティブＴＬＣを行い、Ｒ１値が各々０．６
及び０．７の強いＵＶ唆収を有する２つのバンドを得た
。両バンドは酢酸エチルで抽出して単離した。ＮＭＲス
ペクトル及び細胞障害性の分析からからＲ１の高いバン
ドがＤ−アミノアシルエステル（４５％）であり、一方
Ｒ１の低いバンドが目的とするＬ−アミノアシルエステ
ル６ｂ　（５５％）であることが確認された。両バンド
は、ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）のラジアルパック（
Ｒａｄｉａｌｐａｋ）　Ｃ　−１８カラムを用い、流速
１．５ｍｆｆ／ｍｉｎ、アセｌ・ニトリルー水の直線濃
度勾配（ｌｉｎｅａｒ　　ｇｒａｄｉｅｎｌ）（１０分
間で５５％アセ１・ニトリル水溶液から８０％アセ１・
二１・リル水溶液とする）の条件で溶出するＨＰＬＣで
更に精製した。これらの条件下で両異性体は同一の保持
時間（７．３分）を示した。

ＮＭＲ　（ＣＤＣρ，）Ｌ−アミノアシル異性体：δ ０．　８４　（３Ｈ，　　ｓ）、１．　　１１−１．　２３　（ＩＨ，　ｍ）、１．３１
　（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）、１．　　３５　（３Ｈ，
　　ｄ，　　Ｊ　＝７Ｈｚ）、１．４６−１．５２　（
ＬＨ，ｍ）、１．　６８　（３Ｈ，　　ｓ）、１．　　９７　（ＩＨ，　　ｄ，　　Ｊ　＝９Ｈｚ）、
２．２４　（ＩＨ，ｄｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１５Ｈｚ）、２．　　３０　（３Ｈ，　　ｓ）、２．６５　（ＩＨ．ｄｄ，Ｊ＝．１２Ｈｚ，１５Ｈｚ）
、２．　　７３−２．　８６　（２Ｈ，　ｍ）、２．　　
９０　（３Ｈ，　　ｓ）、２．９２−３．０３　　（２Ｈ，ｍ）、３．０８　　Ｃ
ＩＨ，ｄ．Ｊ−９Ｈｚ）、３．１４　　（ＩＨ，ｄ，Ｊ
＝１２Ｈｚ）、３．２８　（３Ｈ，ｓ）　、３．３９　
　（３Ｈ，ｓ）、３．５４　　（ＬＨ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ
）、３．７２　　（ＬＨ，ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ）、４．０
２　　（３Ｈ，　　ｓ）　、４．３１　　（ＩＨ，　　ｔ，Ｊ＝１１Ｈｚ）、４．８
２　　（ＬＨ，ｄｄ，Ｊ　＝３Ｈｚ，１２Ｈｚ）５．４
５　　（ＬＨ，ｑ，Ｊ−７Ｈｚ）、５、６９　　（ＩＨ
，ｄｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１５Ｈｚ）６．　　２５　　（Ｉ
Ｈ，　　ｓ）、６．４７　　（ＩＨ，ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１５Ｈｚ）
　　、６．６７　　（ＬＨ，ｄ．Ｊ＝１．５Ｈｚ）、６．７７
　　（ＩＨ，ｄ，Ｊ　＝１　１Ｈｚ）、６．８５　　（
ＩＨ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）。

チルジチオブタノイル）−Ｌ−アラニンカルボン酸５ｃ
　（８．９ｍｇ，３５．　　５μｍｏ（Ｊ　）の塩化メ
チレン（０．１Ｍ）溶液をアルゴン気流下撹拌し、次に
、ジシクロへキシル力ルボジイミド（８．　８ｍｇ、４
２．６μｍｏ，Ｑ）の塩化メチレン溶液、ＩＭ塩化亜鉛
（７．１μｍｏρ）のエーテル溶液及びメイタンシノー
ル（４．　　０ｍｇ，７．１μｍｏβ）の塩化メチレン
溶液で処理した。

反応混合物を室温で３時間撹押し、炉過し、炉岐を減圧
下で留去した。残渣は、７％のメタノールを含むクロロ
ホルム溶液で２回展開してシリカケルのプレパラティブ
ＴＬＣを行うことで精製した。

２つの新しいＵＶ吸収バンド（Ｒ，＝０．６５及び０．
７５）を得た。生成物を酢酸エチルで抽出することによ
り単離した。より上のＲ，バンドがＤ−アミノアシルエ
ステル６ｄ　（４１％）であると決定し、一方、低いＲ
　バンドが目的とするＬｆ −アミノアシルエステル６ｃ　（５９％）であった。

両５％性体は、ウォーターズ（Ｗａｌｔｒｓ）のラジア
ルバック（Ｒａｄｉａｌｐａｋ）　Ｃ　−　１　８カラ
ムを謂い、流速２ｍｊ２／ｍｉｎ、アセトニトリルー水
の直線濃度勾配（１０分間で、アセトニトリルの割合を
５０％から８０％に変化させる。）で溶出させるＨＰＬ
Ｃで更に精製した。これら条件下では、Ｄ−アミノアシ
ルエステルの保持時間は７．４分であり、方Ｌ−アミノ
アシルエステルの保持時間は７．６分であった。

カルボン酸５ｅ　（３１．５ｍｇ．１０５ｌｌｍｏ，Ｑ
　）の塩化メチレン（０．　４ｍｆＪ）溶液をアルゴン
気流下撹１”ｌ、次に、ジンクロヘキシルヵルボジイミ
ド（２６＋１１１？、１２６μｍｏρ）の塩化メチレン
熔液、ＩＭ塩化亜鉛（　Ｚ　ｎ　Ｃρ２）　　（１７．
　　７ｌｚｒｎｏ１）のエーテル／８肢及びメイタンシ
ノール（１０ｍｇ，　１　７．　　７　μｍｏｐ　）の
塩化メチレン（０．　　２ｍｆｆｌ）溶液で処理した。

反応混合物を室温で３時間撹拌した。沈殿を炉過で除去
し、炉液を減圧下で留去した。残渣をメタノールを５％
含むクロロホルム７８液で２回展開してシリカゲルのプ
レバラティブＴＬＣを行い、Ｒ１値が０．５及び０．６
の２つのＵＶ唄収の強いバンドを得た。２つの生戊物は
、酢酸エチルで抽出することにより単離し、ＮＭＲスペ
クトルにより特定した。より亮いＲ　バンドがメイタン
シノールのＤ−アミノｆアシルエステル６ｆ（４５％）であり、より低いバンド
はＬ−アミノアシルエステル６ｅ（５５％）であること
が見出された。メイタンシノールからのエステルの総収
率は４４％であった。生成物は、ウォーターズ（　Ｗ　
ａ　ｌ　ｅ　ｒ　ｓ　）のラジアルパック（Ｒａｄａｌ
ｐａｋ）　Ｃ　−　１　８カラムを用い、流速１．５ｍ
ｌ２／ｍｎ、アセトニトリルー水の直線濃度勾配（１０
分；１１で、アセｌ・ニトリルの書リ合を７０％から９
０％に変化させる）の条件で后出するＨＰＬＣにより更
に精製した。これら条件下で両異性体は、同一の保持時
間（６．０分）を有していた。

ＮＭＲ　（ＣＤＣρ３）Ｌ−アミノアシル異性体６ｅ：δ ０．８２　（３Ｈ，ｓ）、１．１１−１．２５　（ＩＨ，ｍ）、１．３３　（３Ｈ，ｄ，Ｊ−３Ｈｚ）、１．６１　（３
Ｈ，ｓ）、１．６３　（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ）、２．１９　（
ＩＨ，ｄｄ，Ｊ−１３Ｈｚ，１５Ｈｚ）、２．６１　（ＬＨ，ｄｄ．Ｊ＝１２Ｈｚ，１５Ｈｚ）、２．７８　（３Ｈ，ｓ）、２．６８−３．０３　（２Ｈ，ｍ）、３．０７　（ＩＨ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）、３．２０　（３
Ｈ，ｓ）　、３．３８　Ｃ３Ｈ，ｓ）、３．　　５３　
　（ＩＨ，　　ｄ，　　Ｊ＝９Ｈｚ）　　、３．　　６
３　　（ＩＨ，　　ｄ，　　Ｊ＝１３Ｈｚ）　　、３．
　　６８　　（３Ｈ，　　ｓ）　　、４．　　０１　　
（３Ｈ，　　ｓ）　　、４．　　３０　　（ＩＨ，　　
ｔ，　　Ｊ＝１１Ｈｚ）　　、４．　　７９　　（ＩＨ
，　　ｄｄ，　　Ｊ＝３Ｈｚ，８Ｈｚ）　　、５．４３
　　（ＩＨ，　　Ｑ，　　Ｊ−７Ｈｚ）　　、５．６８
　　（ＬＨ，　　ｄｄ，　　Ｊ＝９Ｈｚ，　　１５Ｈｚ
）６．　　２３　　（ＩＨ，　　ｓ）　　、６．４５　
　（ＩＨ，　　ｄｄ，　　Ｊ−１２Ｈｚ，１５Ｈｚ）　
　、６．６０　　（ＩＨ，　　ｄ，　　Ｊ＝１．　　５Ｈｚ
）　　、６．　　７５　　（ＬＨ，　　ｄ，　　Ｊ＝１
２Ｈｚ）　　、６．　　７７　　（ＩＨ，　　ｄ，　　
Ｊ＝１．　　５Ｈｚ）　　、７．　　２２−７．　　４
０　　（５Ｈ，ｍ）。

メイタンシノイドの還元ジスルフィド基を含有するメイタンンノールのエステル
６は、以下にＩ既説する方法によりジチオスレイトール
でチオール基を含’ｈ−するメイタンシノイド７に還元
された。全ての場合において反応は４゜Ｃで行われ、生
成物はＨＰＬＣで精製した。

メイタンシノイド（６ｂ）の還元メチルジスルフィドエステル６ｂ　（０．　　８９１ｔ
ｍｏＤ）のエタノール（０．　　２３ｍ４１）溶液及び
１ｍＭのエチレンジアミンテトラアセテ−１−（ＥＤＴ
Ａ）を含む０，１Ｍのリン酸カリウムバッファ一（ｐＨ
７．５）（０．１６ｍＮ）をアルゴン気流下水で冷却し
、１００ｍＭのジチオスレイトール溶液Ｃ１．３３μｍ
ｏ（１　）と処理した。反応の進行はＨＰＬＣにより追
跡し、１０時間後に完粘したと判断した。チオール基を
含有するメイタンシノイド７ｂは、ウォーターズ（Ｗａ
ｆｅｒｓ）のラジアルパック（Ｒａｄｉａｌｐａｋ）　
Ｃ　−　１　８カラムを用い、流速１．　　５ｍ４１／
ｍｉｎ，アセ１・ニトリルー水の直線濃度勾配（ｌｉｎ
ｅａｒ　　ｇｒａｄｉｅｎｌ）　　（　１　０分間で、
アセトニ１・リルのＨｊＨ．１１合を５５％から８０に
する）で溶出するＨＰＬＣにより精ツ９した。これらの
条件下で生成物は、保持時間５．４分の単一ピークとし
て溶出された。エルマン（　Ｅ　Ｉ　Ｉｎｔｏ’　ｓ）
試験を用いて、生成物１モル当たりスリフヒドリル基が
１モル存在することが確認された。生成物は、更にＮＭ
Ｒスペクトルにより特定された。

”Ｈ　　ＮＭＲ　（ＣＤＣ．Ｑ　３　）　　：δ０．８
４　（３Ｈ，ｓ）、１．３３　（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ）、１．３５　（３
Ｈ，ｄ．Ｊ−５Ｈｚ）、１．６０　（３Ｈ，ｓ）、１．６８　（３Ｈ，ｓ）、２．２２　（ＩＨ，ｄｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１４Ｈｚ）２．
６０−２．８２　（２Ｈ，ｍ）、２．８８　（３Ｈ，ｓ）、３．０８−３．２０　（２Ｈ，ｍ）、３．２５　（３Ｈ，ｓ）、３．３９　（３Ｈ，ｓ）、３．５５　（ＩＨ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）、３．７１　　（
ＩＨ，　　ｄ，　　Ｊ＝１２Ｈｚ）　、４．０２　　（
３Ｈ，　　ｓ）　　、４．３２　　（ＩＨ，　　ｔ，　　Ｊ＝１０Ｈｚ）、４
．８１　　（ＩＨ，ｄｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，　　１２Ｈｚ）
５．４５　　（ＩＨ，ｑ．　　Ｊ＝７Ｈｚ）　、５．６
７　　（ＩＨ，ｄｄ，Ｊ　＝９Ｈｚ，１５Ｈｚ）６．２
５　　（ＩＨ，　　ｓ）　、６．４７　　（ＬＨ，ｄｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１５Ｈｚ）
　　、６．７０　　（ＩＨ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）、６．７５
　　（ＩＨ，　　ｄ，　　Ｊ＝１１Ｈｚ）　、６．８６
’（ＬＨ，　　ｄ，　　Ｊ＝１．　　５Ｈｚ）。

メイタンシノイド（６ｅ）の還元フエニルジスルフィドエステル６ｅ（０．４６３μｍｏ，ｐ）のエタノール（０．２２ｍｆ
Ｊ）溶液及び２ｍＭのエチレンジアミンテトラアセテー
ト（ＥＤＴＡ）を含む０．１１ＶＩリン酸カリウムバッ
ファ一（ｐＨ７．５）（０．１８ｍｕ）を氷冷し、２０
−のジチオスレイトール＜０．６９μｍｏｌ　，　０．
　　０３５ｍｊ２）溶液と処理した。反応の進行をＨＰ
ＬＣでモニターし、４０分で反応は完結すると判断した
。この方法で生成したチオール基を含有するメイタンシ
ノイドは、上記と同様にして精製され、７ｂと一致する
ことが確認された。

実施例２インビト口での細胞障害性試験ジスルフィド基を含有する本発川のメイタンシノイド薬
を、インビトロでの挿々の腫瘍細胞系の増殖を抑制する
活性により評価した。２つの付着細胞系であるＫＢ（ヒ
ト類表皮ガン）及びＳ　Ｋ　ＢＲ３（ヒト乳ガン）及び
非付着性細胞系であるナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）　　
（バーキッ１・リンパ腫）が、これら化合物の細胞障害
性を評価するために使用された。細胞は、化合物に２４
時間さらされ、細胞の生存部分（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ　
ｌｒａｃｌｉｏｎ）を直接試験により測定した。ＫＢ及
びＳ　Ｋ　Ｂ　Ｒ　３は、プレーティングエフィシエン
シ−（ｐｌａｔｉｎｇ　ｅｌｆｉｃｉｅｎｃｙ）により
試験を行った〔ゴールドマッチャー（Ｇｏｌｄｍａｃｈ
ｅｒ）ら、１０２、Ｊ，　　Ｃｅｌｌ，Ｂｉｏｌ１３１
２−１３１９　（１９８６）。又、ナマルワ（Ｎａｍａ
ｌｗａ）は成長逆外挿（Ｈｏｗｌｈ　ｂａｃｋ−ｅｘｔ
ｒａｐｏｌａｔｉｏｎ）により試験を行った〔ゴールド
マッチャ−　（Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｔｊら、１３５、ジ
ャーナル・オブ・イムノロジ−（Ｊ．Ｉｍ＋ｎｕｎｏｌ
．）３６４８−３６５１　（１９８５））ｏ次に、ＩＣ
，。値をこれらのデータから計算した。これら試験の結
果は第１表に示す。

Ｌ−アミノアシル異性体６ｂ及び６Ｃは、Ｋ　Ｂ及びＳ
ＫＢＲ３に対するＩＣ，ｏ値がＩＸＩＯ−”Ｍ以下であ
り高度に障害性である一方、対応するフエニルジチオア
ナログ６ｅはＫＢ細胞に対し１ｘ　ｌ　Ｑ　　１０　Ｍ
のＩＣ，。値を有している。メチルジチオアナログ６ｂ
及び６Ｃは、Ｋ　Ｂ及びＳ　Ｋ　Ｂ　Ｒ３細胞に対し各
々３Ｘ１０−”Ｍ、及び１×１０−１０ＭのＩＣ，。値
を有するメイタンシンよりも３〜１０倍障害性が強い。

しかしながらこれら２つの化合物は、ナマルワ（Ｎａｍ
ａｌｗａ）　細胞へのＩＣ，。が３Ｘ１０−９Ｍ以上で
あり、ＩＣ，。か４×１０−”Ｍであるメイタンシンよ
りも幾分障害性か少ない。一方、フエニルジチオ化合物
６ｅは、ＩＣ，。が６Ｘ１０−１０Ｍであり、メイタン
シンとほぼ同様の障害性を白゜する。Ｄ−アミノアンル
異性体６ｄ及び６ｆは、対応するＬ体である６Ｃ及び６
ｅよりも３つ全ての細胞系に対し少くとも２０倍障害性
が弱い。遊離のチオール基を念“＾″するメイタンシノ
イドもまたＫＢ及びＳ　Ｋ　Ｂ　Ｒ　３細胞に対し非常
に障害性であり、７ｂのこれら細胞に対するＩＣ，。値
は各々６Ｘ１０−１０Ｍ及び１０−”Ｍ未満であった。

メチルジチオーメイタンシノイドは、ＫＢ及びＳＫＢＲ
３のような固型ガン細胞系に対してメイタンシンよりも
障害性がより強いので、これが一般的な現象かどうか見
るために固型ガン細胞系の広い集１３　（ｐａｎｅｌ）
について上記と同様の方法により試験を行った。

桔果は第２表に示す。

メチルシチオ化合物６ｂは、ＳＷ６２０（桔腸腺ガン）
及びＡ４９８細胞（腎臓ガン）に対するＩＣ，。値が各
々４Ｘ１０−”Ｍ及びＩＸＩＯ−ｌＯＭであり非常に細
胞障害性である一方、メイタンンンは、これら細胞系に
対しＩＸＩＯ−１０Ｍの濃度でさえも非障害性（生存部
分が１００％である）であった。化合物６ｂは、卵果ガ
ン細胞系の○ＶＣＡＲ３に対してＩＣ５０が５Ｘ１０−
”Ｍであり、メイタンシンよりも２倍細胞障害性が強い
。付着細胞系に刻するメチルジチオメイタンンノイドの
烏度の細胞障害性は、これら化合物の予期しない優れた
仕質であり、固型の腫瘍により起こされたガンは、これ
ら化合物と適当な細胞標的化剤との結合体を用いる治療
の良い標的となることを示している。

実施例３抗体の本１１１合メイクンシノイド７ｂのジスルフィド桔合を介しての抗体への結合チオール基を含有するメイタンシノイド７ｂのジスルフ
ィド桔合を介しての抗体への結合は、２つの段階により
なされる。第１段階において、ジチオビリジル基をカー
ルソン（　Ｃ　ａｒｌｓｓｏｎ）らにより記載されたよ
うに、スクシンイミジルビリジルジチオブ口ピオネート
（ＳＰＤＰ）を用いて抗体に導入した。次に、チオピリ
ジル基は、桔合体を製造するためにメイタンシノイド７
ｂとの反応により置換された。

抗体一ＳＳ−メイタンシノイド結合体の調製抗体（抗−
Ｂ４、抗一Ｔ９及びＡ７）は、文献記載に従ってＳＰＤ
Ｐにより修飾される。抗体１分子当たり平均１〜１０個
のジチオピリジル括か導入された。

ｌｍＭのＥＤＴＡをａ−ｈし、２５℃でｐＨ７．０の０
．１Ｍリン酸カリウムバッフγ一中に、ｌｍｇ／ｍｉｌ
の濃度のジチオビリジル．）ｉ（で修飾された抗（，ト
を后解させた溶液を、チオール基を含有するメイタンシ
ノイド７ｂ　（１．２５モル当量／ジチオピリジル基）
で処理した。修飾された抗体からのビリジン−２−チオ
ンの放出を３４３ｎｍにおいて分光光度計でモニターし
、３０分で完結したことを確認した。抗体−メイタンシ
ノイド結合体は、セファデックスＧ−２５のカラムを通
すゲル炉過により、未反応の薬物及び他の低分子量の物
質を除去して精製した。抗体１分子当たりに桔合したメ
イタンシノイド分子の数は、２５２ｎｍの吸光度と２　
８　０　ｎｍでの吸光度との比率を／Ｉｌリ定すること
により決定した。この方法では、ジスルフィド桔合を介
して抗体１分子当たり平均１〜１０個のメイタンンノイ
ド分子を連結できる。

チオール基を含有するメイタンンノイド７ｂの拮合は、
２つの段階によりなされた。抗体を、最初にスクシンイ
ミジルマレイミドメチルシクロヘキサン力ルポキシレー
ト（　Ｓ　Ｍ　Ｃ　Ｃ　）と反応させてマレイミド基を
導入した。次に、修飾された抗体をチオエーテル結合を
形成するメイタンシノイド７ｂと反応させた。

抗体（抗−８４、抗一Ｔ９及びＡ７）は文献の記戦に従
ってＳＭＣＣで修飾した。

修飾された抗体を、メイタンシノイド７ｂ（１．２５モ
ル当量／マレイミド基）で処理した。

ｌ昆合物を４℃で一夜インキュベ−１・シ、抗体−メイ
タンシノイド結合体を上記記載と同様にして稍製した。

典型的には、抗体１分子当たり平均１〜１０個のメイタ
ンシノイド分子が連結された。

実施例４メイタンシノイドを連結する他の方法酸に不安定なリンカー（Ｌ　ｉｎｋｅ＋）メイタンシノ
ーノレは、６ｂｌこついて！ｉ２ａしｌ二ように、Ｎ−
メチルーＮ　−　（３　−　ｔ−ｂ　ｏ　ｃ−アミノブ
口パノイル）−Ｌ−アラニンによりジンクロヘキシルカ
ルボジイミド及び塩化亜鉛の存在下でエステル化できる
。トリフルオ口酢酸によりｔ−Ｂｏａ基を脱保護するこ
とにより末端アミノ基を有するメイタンシノールのＣ−
３エステルを得た。

このアミノ基を含有するメイタンシノイド誘導体は、既
述のように酸に不安定なリンカー（ｔｉｎｋｅｒ）を介
して抗体及び他の細胞桔合剤と連結できる〔ブラットラ
ー（Ｂｌａｔｔｌ’ｅｒ）ら、２４、バイオケミストリ
−　１５１７−１５２４　　（１９８５）、米国特許第
４，５４２，２２５号、第４，５６９，７８９号及び第
４，７６４，３６８号〕。

光に不安定なリンカー（ｌｉｎｋｅｒ）」一連のアミノ
基を含有するメイタンシノイド誘導体は、既述のように
して、光に不安定なリンヵ−　（ｌｉｎｋｅｒ）を介し
て細胞拮合剤に連桔できる〔センター（　Ｓ　ｅｎｔｅ
ｒ）ら、４２、フォトケミス１・リー・アンド・フォｌ
・バイオロジー（Ｐｈｏｌｏｃｈｅｍｉｓｌｒｙ　ａｎｄ　Ｐｈｏ１ｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ）、２３１−２３７　（１９８５）　、
米国特許第４，６２５，０１４号〕。

ペブチダーゼに不安定なリンカー（ｔｉｎｋｅ『）アミ
ノ基を含有する上述のメイタンシノイドはまた、ペブチ
ドスペーサーリンカーを介して細胞桔合剤に連桔できる
。蘂物と高分子蛋白の担体との間の短いペブチドスベー
サーは、血請中では安定であるが、細胞内のりソソーム
のべブチダーゼにより容易に加水分解されることか既に
示されている〔１・ロウ）−　（Ｔｒｏｕｅｆ）ら、７
９、Ｐ　ｔｏｃＮａ＋’ｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，６２
６−６２９　（１９８２））。アミノ基を含有するメイ
タンシノイドと、Ａａ−Ｌｅｕ　ＳＬｅｕ−Ａｌａ−Ｌ
ｅｕ及びＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕのようなペブ
チドとの縮合は、１−エチル−３−（３一ジメチルアミ
ノブロピル）カルボジーｒミド稿酸塩のような縮合剤を
用いて行うことができ、こうしてメイタンシノイドのべ
ブチド誘導体を得、このメイタンシノイドのべブチドＸ
ｉ体は、次いで細胞結合剤に連粘できる。

エスタラーゼに不安定なリンカーメイタンシノールは、６ｂについて既に述べたように、
ジシクロへキシルカルボジイミド及び塩化亜鉛の存在下
でＮ−メチルーＮ（３−ｔｅｒｔ−ブトキシブ口パノイ
ル）−Ｌ−アラニンでエステル化できる。｛ｅ『１−ブ
チル保護基は、１・リフルオ口酢酸により脱保護され、
末端１級水酸基を含むメイタンシノールのＣ−３エステ
ルが得られる。

このメイタンシノイド誘導体は、無水コハク酸でスクン
ニル化し、次に細胞結合剤に連結することができ、これ
により、細胞内エステラーゼにより開裂されて遊離の楽
物を放出する粘合体を製造することができる。（：　Ｉ
ＦＩＪえば、アバウドーピラク（Ａ　ｂｏｕｄ　−　Ｐ
　ｉ＋ａｋ）ら、３８、バイオケミカル・ファーマコロ
ジー（　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ．　　Ｐ　ｈａ＋ｍａｃｏｌ
，　）、６４１−６４８　（１９８９）　、ラグザ（　
Ｌ　ａｇｕｕａ）ら、３２、ジャーナル・オブ・メディ
シナル・ケミストリー（Ｊ．　　Ｍｅｄ，　　Ｃｈｅｍ
．）　、５４９−５５５　（１９８９）参照〕。

メイタンシノールのジスルフィド基を含Ｇするエステル
１０は、既述のように、ジスルフィド又はチオエーテル
結合を介して細胞結合剤に連結し得るチオール基含有メ
イタンシノイド１１を製造するために、７ｂについて記
載したのと同様にしてジチオスレイトールにより還元さ
れる。（実施例３参照）メチルチオーＮ−メチルシステイン（８）Ｎ−メチルシ
ステイン〔ウントハイン、ケイ（Ｕｎｄｈｅｉｎ，　Ｋ
，）アンド（＆）アイデム、エイ．（Ｅｉｄｅｍ，　　
Ａ．）、２３、Ａ　ｅｔａ　　Ｃ　ｈｅｍＳｃａｎｄｉ
ｎａｖｉｃａ　　，３１２９　　　３１３Ｂ　　（１９
７０）〕　（１．５ｇ、１　１．１ｍｍｏｊ７　）の水
（２０ｍｇ）后液をアルゴン気流下室温で撹拌し、メチ
ルメタンチオールスルホネート（３．　　（Ｍ、２９．
２ｍｍｏρ）のエタノール（１０一）溶液で処理した。

反応混合物を同温度で２時間撹拌し、次に水（１００ｍ
Ｍ）で希釈し、エーテル（４×４０−）で洗浄した。水
層をｐＨ２まで酸性にし、アンバーライ１・ＩＲＡ９３
　（一〇Ｈ型）のカラムを通した。カラムを水で溶出し
、溶出液を集め減圧下乾燥するまで溶媒を留去し、表題
化合物の白色固体１．２ｇ（収率６０％）を得た。融点
１９４−１９５℃。

ＩＨ−ＮＭＲ　（Ｄ．，Ｏ，ＴＭＳ外部標準）：６２．
２　（３１｛，ｓ）　、２．５　（３Ｈ，ｓ）、３．２
　（２Ｈ，ｄ），３．７　（ＩＨ．ｑ）。

Ｎ−アセチルーＮ−メチルーメチルジチオシステイン（
９）氷酢酸（０．２Ｍ、４．４ｍｍｏ，Ｑ　）の乾燥ＴＨＦ
　（４ｍＮ）溶液を窒素気流下−２０゜Ｃで撹押しなが
ら、イソブチルク口口ホルメート（０．５７ｍ４１、４
．４ｍｍｏＪ７）及びトリエチルアミン（０．６１ｍｌ
）、４．４ｍｍｏρ）を加えた。

反応混合物をこの温度で２０分間撹ＰＩ’　Ｌ、次にメ
ヂルジチオーＮ−メチルシスティン（０．４ｇ，２．　
　２ｍｍｏ，Ｑ　）及びトリエチルアミン（０．４５ｍ
ｆｌ、３．３ｍｍｏｆｆ）の水／８液で処理し、次いで
一夜撹押した。

混合物を次に水２５−で希釈し、塩酸でｐ　Ｈ　２まで
酸性化し、酢酸エチル（４　Ｘ　５　０ＭＪ）で抽出し
た。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を
減圧下留去して表題化合物を淡黄色固体として０．２ｇ
（収率５５％）得た。融点１３７一１３８℃。

’Ｈ−ＮＭＲ　（ＣＤＣρ３）δ：２．　　１　　（３Ｈ，　　ｓ）　、２．３　　（３Ｈ
，　　ｓ）　、３．０　　（３Ｈ，　　ｓ）　　、３．
２　　（２Ｈ，ｄ）　　、４．８　　（ＩＨ，　　ｑ）
。

化合物９　（１　５．６ｍｇ，０．０７ｍｍｏｇ）の乾
燥塩化メチレン（０．４Ｍ）溶液をアルゴン気流下室温
で撹拌し、次にＩＭ塩化亜鉛（Ｚｎ（１７２）のエチル
エーテル溶液（０．０２８ｍｍｏＮ　）　、ジシクロへ
キシルカルボジイミド（１７．３ｍｇ、０．０８４ｍｍ
ｏ，Ｑ）の塩化メチレン（０．　　２ｍＪ））溶液及び
メイタンシノール（４．Ｏｎ＋ｇ，０．００７ｍｍｏＮ
）の塩化メチレン（０．　　ｕｎｔｉｌ）溶液で処理し
た。反応混合物を３時間撹押し、次に炉過し、が液を減
圧下留去した。残渣を６％メタノールを含むクロロホル
ム溶バｋで展開するシリカゲルのプレパラテイブＴＬＣ
で精製した。生成物を酢酸エチル抽出により単離し、ウ
ォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）のラジアルパック（Ｒａｄ
ｉａｌｐａｋ）　Ｃ　−　１　８カラムを用い、流速１
．　　５ｍｆｆ／ｍｉｎ、アセトニｌ・リルー水の直線
濃度勾配（ｌｉｎｅａ＋　　ｇｒａｄｉｅｎｔ）　　（
５　５〜８　０％アセトニトリル／１０分）で溶出する
ＨＰＬＣにより更に精製した。この方法で得られたメイ
タンシノールのＬ−アミノアシルエステル１０ａ及びＤ
−アミノアシルエステル１０ｂは、各々の保持時間が５
．　　０分及び５．８分で容易に分離できる。

実施例５細胞培養及びインビト口での細胞障害性試験ヒ１・の前
骨髄細胞白血病細胞系の細胞であるＨＬ−６０　（ＡＴ
ＣＣ　　ＣＣＬ　　２４０）及びパーキット　リンパ腫
細胞系のナマルワ（　Ｎ　ａｍａ　ｌｗａ）（ＡＴＣＣ
　　ＣＲＬ　　１４３２）は、１０％ウシ胎児血活及び
２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０
培地中で懸濁培′ｉ％として成長させた。以下に記載す
る全ての他の細胞系は、｛’Ｉ青培養として成長させた
。ヒト類表皮ガン細胞系であるＫＢ　（ＡＴＣＣ　　Ｃ
ＣＬ　　１７）　、ヒト腎臓ガン細胞系のＡ４９８　（
ＡＴＣＣ　　ＨＴＢ　　４４）ヒト結腸腺ガン細胞系の
ＳＷ６２０　（ＡＴＣＣＣＣＬ　　２２７）及びＨＴ−
２９　（ＡＴＣＣＨＴＢ　　３８）は、１０％ウシ胎児
血清及び２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−
１６４０培地＋４ｊで戊長させた。ヒｌ・乳ガンＳＫＢ
Ｒ３細胞（ＡＴＣＣ　　ＨＴＢ　　３０）は、２ｍＬＩ
のグルタミンを含む１５％ウシ胎児血清を添加したＤＭ
ＥＭ中で成長させ、又、ヒト卵巣ガン細胞系の○ＶＣＡ
Ｒ３　　（ＡＴＣＣ　　ＨＴＢ　　１６１）は、２ｎ＋
ｋｌのＬ−グルタミン及び１０μｇ／一のインシュリン
を含む１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ−１６４
０培地中で成長させた。

チオール基を含有するメイタンシノイドをジスルフィド
結合を介して桔合させるべく、３つの異なる抗体を使用
した。これら全ての実施例において、メイタンンノイド
誘導体７ｂが桔合川に使用された。結合体は、Ｂ一細胞
抗原であるＣＤ１９に対する抗−Ｂ４抗体、抗ヒトトラ
ンスフエリンレセブター抗体である抗−Ｔ９　（５Ｅ９
）及び抗ヒト桔腸ガン抗体であるＡ７を用いて調製した
。

細胞障害性試験は、各々既述の培地中で行われた。メイ
タンシノイド及びそれらの抗体結合体のＨＬ−６０及び
ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞に対する細胞障害性は
、細胞増殖■線の逆外ｊｉＩｉ（　ｂ　ａ　ｃ　ｋｅｘ
Ｈａｐｏ１ａｌｉｏｎ）により４１１ｊ定した。細胞系
群の残りものに対するこれら化合物のＩｌｌ＋胞障害性
は、既述のクローン原性（ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ）試験
を用いて決定した。

結合体は、ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）　、ＫＢ，　Ｈ
Ｔ一２９及びＳＷ６２０の細胞系の・ｒンビ１・口での
ＩＣｓｏ値及び細胞障書性について評価された。桔果を
第３表に示す。

ジスルフィド基で連結した抗−８４−メイタンシノイド
桔合体（抗−Ｂ４　　ＳＳ−１’ｖｉａｙ）及び抗一Ｔ
９　　’ｊｂ物結合体（抗−Ｔ９−ＳＳ−Ｍａｙ）は、
両方ともナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞に対して細胞
障害性がある（各々、’　Ｃｓｏ＝７Ｘ　１　０−９Ｍ
及び２Ｘ１０−９Ｍ）。ジスルフィド基で連結した抗Ｔ
９結合体は、Ｋ　Ｂ細胞に対するＩＣｓｏ値が２ＸＩＯ
−”Ｍであり、ＫＢ細胞に対して障害性かより強い。抗
体一薬物間の細胞内開裂性ジスルフィド桔合の重要性を
証門するため、メイタンンノイドを非開裂性チオエーテ
ルｆｉ’ｊ合を介して抗体に連結した結合体を調製した
。そのような非開裂性方式で連結された抗−Ｔ９一薬物
結合体（ＩＣｓｏ＝４　Ｘ　１　０−９Ｍ）は、対応ず
るジスルフィド基で連桔した結合体よりち少くとも２０
倍細胞１１亭害性が低かった。

Ａ７−メイタンシノイド桔合体は、桔腸腺ガン細胞系の
ＨＴ−２９及びＳＷ６２０に対し高度に細胞障害性であ
った。紀合体を２４時間さらした後のこれら細胞系に対
するＩＣ，。は、各々１．５ｘ　ｌ　Ｑ　−ＩＱ　Ｍ及
び１、６Ｘ１０−】ＯＭであった。

７２時間さらした後の細胞障害性は、より劇的でさえあ
った（ＨＴ−２９細胞に対しＩＣ，。＝４×１０−”Ｍ
）。これら免疫結合体のインビト口における特異性を示
すためにいくつかの実験を計画した（データの一部は第
５図において図解的に示される）。第１に、過剰の未連
桔のＡ７抗体の添加は、２４時間及び７２時間さらした
時のＨＴ−２９及びＳＷ６２０ぶ｛ｌ胞に対するＡ７−
メイタンシノイド桔合体の細胞障害性を完全に喪失させ
る，この観察は、結合体における遊離薬物の欠如をも示
している。第２に、ＨＴ−２９及びＳＷ６２０と桔合し
ない抗一Ｂ４抗体とで調製された桔合体は、Ａ７桔合体
よりもこれら細胞に対し障害性はかなり低かった。特異
性を確立するための他の独自の実験によれば、抗原のな
いＫＢ細胞に対するＡ７〜メイタンシノイド結合体の細
胞障害性は１００倍低いというものであった（７２時間
さらした状態で、ｌＣｊ；Ｒは８Ｘ１０−９Ｍであるの
に対し、ＩＣ閥３−２９は４Ｘ１０−”Ｍであった。）
。

実施例６Ａ７−メイタンシノイド結合体の特異的親和性の７Ｉｌ
り定ジスルフィド基で連結されたＡ７−メイタンシノイド拮
合体の特異的親和性は、競合結合試験により分析された
。ラベルされていないＡ７及びそのメイタンシノイド粘
合体によるＨＴ−２９及びＳＷ６２０細胞に対するＦＩ
ＴＣでラベルされたＡ７抗体の結合の競合が、ベクトン
ーディキンソン（Ｂ　ｅｃｔｏｎ−Ｄ　ｉｃｋｉｎｓｏ
ｎ）　Ｆ　Ａ　Ｃ　Ｓの蛍光抗（ド直接法によりａ＋＋
＋定された。２つの細胞系が１５％ウシ胎児血清を含む
ドゥルベコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’　ｔ）（７）（４ｆｆ
Ｉ１ｉされた這小必項培地を含む組織培養グレー１・の
フラスコ中で付着細胞として成長させた。￥州胞は次に
トリブンン処理し、プラスチックに対する細胞の付着を
防止するため非組織培養のグレードのフラスコ中で同じ
培地を用いて３０分間３７°Ｃで懸濁下インキユベート
した。細胞は次に、９６のくほみ（ｗｅｌｌ）を有する
プレートのくぼみに移され、２５％ヒ１・血清を含む最
小必頷培地中で再懸濁された。細胞懸濁液（１くぼみ（
ｗｅｌｌ）あたり１００，０００個の細胞を含む０．２
−の懸濁液）は、０゜Ｃで１時間メイタンシノイド結合
体又はラベルされていない抗体の指示された濃度下で、
６ｎｋｌのＦＩＴＣでラベルされたＡ７とインキユベー
トした。細胞は、次に一度バッフγ一で洗浄し、１％ホ
ルムアルデヒドを含むリン酸塩バッファ一中で固定され
た。平均細胞蛍光はＦＡＣＳでｉ４１１定された。

結果を第６ａ及び６ｂ図に示す。第６ａ及び６ｂ図は、
抗体分子あたり３〜６個の楽物分子を含ｔ１−するＡ７
−メイタンシノイド拮合体が、ＨＴ−２９及びＳＷ６２
０細胞に対し未桔合の抗体と同程度に拮合することを示
している。このことは、抗体にメイタンシノイドを桔合
させる本発明の方法が、標的細胞との結合能を何ら阻害
するものではないことを示している。

実施例７インビボにおけるクリアランスの研究及び薬物動力学１２５Ｉでラベルした典型的なネズミのＩｇＧ，抗体及
び１２５■でラベルした対応する、抗体１分子あたり平
均４個の薬物分子を含有するメイタンシノイド結合体の
血中クリアランスが雌性ＣＤ−１マウスについてＡ１１
１定された。上記抗体及びメイタンシノイド桔合体は、
ボルトン（Ｂｏｌｔｏｎ）及びハンター（｝｛ｕｎｌｅ
＋）の方法によりラベル（ｒａｄｉｏｄｉｎａｔｅ）さ
れた（１３３、Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ，　　Ｊ５２９−５３
９　（１９７Ｂ））。サンプルの放１・１活性の９９％
を越えたちのが蛋白と桔合した。抗体及び桔合体（各々
２．　　７　Ｘ　１　０−’ｃｐｍ）が尾部静脈に別々
に静注された。ヘパリン処理された血液サンプルがレト
ロオービタル（ｒｅｌｒｏｏｒｂｉｔａｌ）静脈這から
指示された時間に集められ、放射活性含滑か測定された
。結果を第７図に示す。抗体及びそのメイタンンノイド
桔合体は、非常に近似した二１「！クリアランス　プロ
ファイルを示す。

本発明は、その特別な実施例を谷考にして詳細に記載さ
れたが、抽々の変形及び修飾が本発明の精神及び範囲か
ら離れることなくなされ得ることは当業者にとっては明
らかであろう。

ｌＡ面の節単な説（７）第１図は、先行技術であるメイタンシン（１ａ）及びメ
イタンシノール（１ｂ）を示す。

第２図は、Ｎ−メチルーＬ−アラニンのジスルフィド基
を含有する話導体の合成を示す。

第３図は、ジスルフィド又は他の硫苛含−１’Ｔ　１７
１合、［シリえばチオエーテルやチオエステル拮合を介
して細胞￥（’ｉ合剤に桔合され得るジスルフイド又は
チオール含有メイタンシノイドの合成を示す。その合成
は、第２図の中間体から始まる。

第４ａ図は、Ｎ−メチルーＬ−システインのジスルフィ
ド又はチオール含有誘導体の合成を示す。

第４ｂ図は、ジスルフィド又は他の硫黄含有結合、例え
ばチオエーテル又はチオエステル拮合を介して細胞拮合
剤に結合させ得る第４ａ図の中間体からのジスルフィド
又はチオール含有メイタンシノイドの合戊を示す。

第５図は、７２時間さらしたときのＡ７−メイタンンノ
イド結合体の細胞障害性を示すグラフである。

第６ａ図及び第６ｂ図は、各々ＨＴ−２９細胞及びｓｗ
６２０細胞に対する抗体−メイタンシノイド桔合体の競
合的桔合試］験の桔果を示す図である。

第７図は、マウスにおけるＩ　ｇＧ，及びＩ　ｇＧ，一メイタンシノイドの血中クリアランスを示す図である
。

（以上）ＦＩＧ．　３ＦＩＧ１ＦＩＧ２

Claims

【特許請求の範囲】

（１）細胞結合剤に連結した１又は２以上のメイタンシ
ノイドを含む細胞障害剤。
（２）前記メイタンシノイドが、メイタンシノイドエス
テルである請求項（１）に記載の細胞障害剤。
（３）前記メイタンシノイドエステルが、メイタンシノ
イドＣ−３エステルである請求項（２）に記載の細胞障
害剤。
（４）前記メイタンシノイドエステルが、Ｎ−メチル−
アラニンを含有するメイタンシノイドエステルである請
求項（３）に記載の細胞障害剤。
（５）Ｎ−メチル−アラニンを含有する前記メイタンシ
ノイドエステルが、式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、Ｚ＿０は、水素原子又はＳＲを示し、Ｒは、直
鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基、非置
換の又は置換したアリール基又は複素環基を示す。ｌは
、１〜１０の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシノイド
を示す。〕で示される請求項（４）に記載の細胞障害剤
。
（６）Ｎ−メチル−アラニンを含有する前記メイタンシ
ノイドエステルが、式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II）〔式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は同一又は異なって、水素原
子、メチル基又はエチル基を示す。Ｚ＿１は、水素原子
又はＳＲ＿３を示し、Ｒ＿３は、直鎖アルキル基、分枝
アルキル基、環状アルキル基、非置換の又は置換基を有
するアリール基又は複素環基を示す。ｍは、０、１、２
又は３を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示す。〕で示される請求項（４）に記載の細胞障害剤。
（７）Ｎ−メチル−アラニンを含有するメイタンシノイ
ドエステルが、式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III）〔式中、Ｚ＿２は、水素原子又はＳＲ＿４を示し、Ｒ＿
４は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｎは、３〜８の整数を示す。ｍａｙは、メイ
タンシノイドを示す。〕で示される請求項（４）に記載の細胞障害剤。
（８）Ｎ−メチルアラニンを含有する前記メイタンシノ
イドエステルが、メイタンシノールのＣ−３エステルで
ある請求項（４）に記載の細胞障害剤。
（９）前記メイタンシノイドエステルが、Ｃ−１９位又
はＣ−２０位が修飾されたメイタンシノールのアナログ
のエステルである請求項（８）に記載の細胞障害剤。
（１０）前記メイタンシノイドエステルが、脱クロロメ
イタンシノールのエステルである請求項（８）に記載の
細胞障害剤。
（１１）前記メイタンシノールのＣ−３エステルが、式
（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV）〔式中、Ｚ＿０は水素原子又はＳＲを示し、Ｒは直鎖ア
ルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基、非置換の
又は置換したアリール基又は複素環基を示す。ｌは、１
、２又は３を示す。Ｙ＿０は塩素原子又は水素原子を示す。Ｘ＿３は水素原
子又はメチル基を示す。〕で示される請求項（８）に記載の細胞障害剤。
（１２）Ｒがメチル基を示す請求項（１１）に記載の細
胞障害剤。
（１３）Ｎ−メチル−Ｎ−（３−メチルジチオプロパノ
イル）−Ｌ−アラニンを含む請求項（８）に記載の細胞
障害剤。
（１４）前記メイタンシノイドエステルが、Ｎ−メチル
−システインを含有するメイタンシノイドエステルであ
る請求項（３）に記載の細胞障害剤。
（１５）Ｎ−メチル−システインを含有する前記メイタ
ンシノイドエステルが、式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿５を示し、Ｒ＿
５は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｏは、１、２又は３を示す。ｐは、０又は１
〜１０の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示
す。〕で示される請求項（１４）に記載の細胞障害剤。
（１６）Ｎ−メチル−システインを含有する前記エステ
ルが、メイタンシノールのＣ−３エステルである請求項
（１４）に記載の細胞障害剤。
（１７）前記メイタンシノイドエステルが、Ｃ−１９位
又はＣ−２０位が修飾されたメイタンシノールのアナロ
グのエステルである請求項（１６）に記載の細胞障害剤
。
（１８）前記メイタンシノイドエステルが、脱クロロメ
イタンシノールのエステルである請求項（１６）に記載
の細胞障害剤。
（１９）Ｎ−メチルシステインを含有する前記メイタン
シノイドエステルが、式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼（VI）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿５を示し、Ｒ＿
５は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｏは、１、２又は３を示す。ｑは、０又は１
〜１０の整数を示す。Ｙ＿０は、塩素原子又は水素原子
を示す。Ｘ＿３は、水素原子又はメチル基を示す。〕で示される
請求項（１４）に記載の細胞障害剤。
（２０）Ｒ＿５がメチル基を示す請求項（１９）に記載
の細胞障害剤。
（２１）Ｎ−アセチル−Ｎ−メチル−メチルジチオシス
テインを含有する請求項（１６）に記載の細胞障害剤。
（２２）前記メイタンシノイドが、ジスルフィド基又は
チオエーテル基を含む結合基を介して細胞結合剤に連結
されている請求項（１）に記載の細胞障害剤。
（２３）前記メイタンシノイドが、酸に不安定な基、光
に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基又はエステラ
ーゼに不安定な基を含む結合基を介して細胞結合剤に対
して連結されている請求項（１）に記載の細胞障害剤。
（２４）前記細胞結合剤が、ペプチド又は非ペプチドで
ある請求項（１）に記載の細胞障害剤。
（２５）前記細胞結合剤が、ポリクローナル又はモノク
ローナル抗体である請求項（１）に記載の細胞障害剤。
（２６）前記細胞結合剤が、モノクローナル抗体である
請求項（２５）に記載の細胞障害剤。
（２７）前記細胞結合剤が、前記抗体の少なくとも１つ
の結合部位を含む請求項（２５）又は（２６）に記載の
細胞障害剤。
（２８）前記細胞結合剤がホルモンである請求項（１）
に記載の細胞障害剤。
（２９）前記ホルモンが、メラニン細胞刺激ホルモン（
ＭＳＨ）又はそのアナログである請求項（２８）に記載
の細胞障害剤。
（３０）前記ホルモンが、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ
）又はそのアナログである請求項（２８）に記載の細胞
障害剤。
（３１）前記細胞結合剤が、成長因子である請求項（１
）に記載の細胞障害剤。
（３２）前記成長因子が、表皮成長因子（ＥＧＦ）であ
る請求項（３１）に記載の細胞障害剤。
（３３）前記成長因子が、トランスフォーム成長因子ア
ルファ（ＴＧＦ−α）である請求項（３１）に記載の細
胞障害剤。
（３４）（ａ）細胞障害量の、細胞結合剤に結合した１
又は２以上のメイタンシノイド、及び（ｂ）薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含有することを特徴とする選択された細胞集団を殺す
治療薬。
（３５）前記メイタンシノイドが、メイタンシノイドエ
ステルである請求項（３４）に記載の治療薬。
（３６）前記メイタンシノイドエステルが、メイタンシ
ノイドＣ−３エステルである請求項（３５）に記載の治
療薬。
（３７）前記メイタンシノイドエステルが、Ｎ−メチル
−アラニンを含有するメイタンシノイドエステルである
請求項（３６）に記載の治療薬。
（３８）Ｎ−メチル−アラニンを含有するメイタンシノ
イドエステルが、式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、Ｚ＿０は、水素原子又はＳＲを示し、Ｒは、直
鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基、非置
換の又は置換基を有するアリール基又は複素環基を示す
。ｌは、１〜１０の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシ
ノイドを示す。〕で示される請求項（３７）に記載の治
療薬。
（３９）Ｎ−メチル−アラニンを含有する前記メイタン
シノイドエステルが、式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II）〔式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は同一又は異なって、水素原
子、メチル基又はエチル基を示す。Ｚ＿１は、水素原子
又はＳＲ＿３を示し、Ｒ＿３は、直鎖アルキル基、分枝
アルキル基、環状アルキル基、非置換の又は置換基を有
するアリール基又は複素環基を示す。ｍは、０、１、２
又は３を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示す。〕で示される請求項（３７）に記載の治療薬。
（４０）Ｎ−メチル−アラニンを含有するメイタンシノ
イドエステルが、式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III）〔式中、Ｚ＿２は、水素原子又はＳＲ＿４を示し、Ｒ＿
４は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｎは、３〜８の整数を示す。ｍａｙは、メイ
タンシノイドを示す。〕で示される請求項（３７）に記載の治療薬。
（４１）Ｎ−メチルアラニンを含有する前記メイタンシ
ノイドエステルが、メイタンシノールのＣ−３エステル
である請求項（３７）に記載の治療薬。
（４２）前記メイタンシノイドエステルが、Ｃ−１９位
又はＣ−２０位が修飾されたメイタンシノールのアナロ
グのエステルである請求項（４１）に記載の治療薬。
（４３）前記メイタンシノイドエステルが、脱クロロメ
イタンシノールのエステルである請求項（４１）に記載
の治療薬。
（４４）前記メイタンシノールのＣ−３エステルが、式
（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV）〔式中、Ｚ＿０は水素原子又はＳＲを示し、Ｒは直鎖ア
ルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基、非置換の
又は置換したアリール基又は複素環基を示す。ｌは、１
、２又は３を示す。Ｙ＿０は塩素原子又は水素原子を示す。Ｘ＿３は水素原
子又はメチル基を示す。〕で示される請求項（４１）に記載の治療薬。
（４５）Ｒがメチル基を示す請求項（４４）に記載の治
療薬。
（４６）Ｎ−メチル−Ｎ−（３−メチルジチオプロパノ
イル）−Ｌ−アラニンを含有する請求項（４１）に記載
の治療薬。
（４７）前記メイタンシノイドエステルが、Ｎ−メチル
−システインを含有するメイタンシノイドエステルであ
る請求項（３６）に記載の治療薬。
（４８）Ｎ−メチル−システインを含有する前記メイタ
ンシノイドエステルが、式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿５を示し、Ｒ＿
５は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｏは、１、２又は３を示す。ｐは、０又は１
〜１０の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示
す。〕で示される請求項（４７）に記載の治療薬。
（４９）Ｎ−メチル−システインを含有する前記メイタ
ンシノイドエステルが、メイタンシノールのＣ−３エス
テルである請求項（４７）に記載の治療薬。
（５０）前記メイタンシノイドエステルが、Ｃ−１９位
又はＣ−２０位が修飾されたメイタンシノールのアナロ
グのエステルである請求項（４９）に記載の治療薬。
（５１）前記メイタンシノイドエステルが、脱クロロメ
イタンシノールのエステルである請求項（４９）に記載
の治療薬。
（５２）Ｎ−メチル−システインを含有する前記メイタ
ンシノイドエステルが、式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼（VI）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿５を示し、Ｒ＿
５は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｏは、１、２又は３を示す。ｑは、０又は１
〜１０の整数を示す。Ｙ＿０は、塩素原子又は水素原子
を示す。Ｘ＿３は、水素原子又はメチル基を示す。〕で示される
請求項（４９）に記載の治療薬。
（５３）Ｒ＿５がメチル基を示す請求項（５２）に記載
の治療薬。
（５４）Ｎ−アセチル−Ｎ−メチル−メチルジチオシス
テインを含有する請求項（４９）に記載の治療薬。
（５５）前記メイタンシノイドが、ジスルフィド基又は
チオエーテル基を含む結合基を介して細胞結合剤に連結
されている請求項（３４）に記載の治療薬。
（５６）前記メイタンシノイドが、酸に不安定な基、光
に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基又はエステラ
ーゼに不安定な基を含む結合基を介して細胞結合剤に連
結されている請求項（３４）に記載の治療薬。
（５７）前記細胞結合剤が、ペプチド又は非ペプチドで
ある請求項（３４）に記載の治療薬。
（５８）前記細胞結合剤が、ポリクローナル又はモノク
ローナル抗体である請求項（３４）に記載の治療薬。
（５９）前記細胞結合剤が、モノクローナル抗体である
請求項（５８）に記載の治療薬。
（６０）前記細胞結合剤が、前記抗体の少なくとも１つ
の結合部位を含む請求項（５８）又は（５９）に記載の
治療薬。
（６１）前記細胞結合剤が、ホルモンである請求項（３
４）に記載の治療薬。
（６２）前記ホルモンが、メラニン細胞刺激ホルモン（
ＭＳＨ）又はそのアナログである請求項（６１）に記載
の治療薬。
（６３）前記ホルモンが、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ
）又はそのアナログである請求項（６１）に記載の治療
薬。
（６４）前記細胞結合剤が、成長因子である請求項（３
４）に記載の治療薬。
（６５）前記成長因子が、表皮成長因子（ＥＧＦ）であ
る請求項（６４）に記載の治療薬。
（６６）前記成長因子が、トランスフォーム成長因子ア
ルファ（ＴＧＦ−α）である請求項（６４）に記載の治
療薬。
（６７）細胞結合剤に連結した１又は２以上のメイタン
シノイドを含む細胞障害量の細胞障害剤を、選択された
細胞集団からの細胞を含んでいると考えられる細胞集団
又は組織と接触させることを特徴とする選択された細胞
集団を殺す方法。
（６８）前記メイタンシノイドが、メイタンシノイドエ
ステルである請求項（６７）に記載の選択された細胞集
団を殺す方法。
（６９）前記メイタンシノイドエステルが、メイタンシ
ノイドＣ−３エステルである請求項（６８）に記載の選
択された細胞集団を殺す方法。
（７０）前記メイタンシノイドエステルが、Ｎ−メチル
−アラニンを含有するメイタンシノイドエステルである
請求項（６９）に記載の選択された細胞集団を殺す方法
。
（７１）Ｎ−メチル−アラニンを含有するメイタンシノ
イドエステルが、式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、Ｚ＿０は、水素原子又はＳＲを示し、Ｒは、直
鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基、非置
換の又は置換基を有するアリール基又は複素環基を示す
。ｌは、１〜１０の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシ
ノイドを示す。〕で示される請求項（７０）に記載の選
択された細胞集団を殺す方法。
（７２）Ｎ−メチル−アラニンを含有する前記メイタン
シノイドエステルが、式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II）〔式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は同一又は異なって、水素原
子、メチル基又はエチル基を示す。Ｚ＿１は、水素原子
又はＳＲ＿３を示し、Ｒ＿３は、直鎖アルキル基、分枝
アルキル基、環状アルキル基、非置換の又は置換基を有
するアリール基又は複素環基を示す。ｍは、０、１、２
又は３を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示す。〕で示される請求
項（７０）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（７３）Ｎ−メチル−アラニンを含有する前記メイタン
シノイドエステルが、式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿４を示し、Ｒ＿
４は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｎは、３〜８の整数を示す。ｍａｙは、メイ
タンシノイドを示す。〕で示される請求項（７０）に記載の選択された細胞集団
を殺す方法。
（７４）Ｎ−メチルアラニンを含有する前記メイタンシ
ノイドエステルが、メイタンシノールのＣ−３エステル
である請求項（７０）に記載の選択された細胞集団を殺
す方法。
（７５）前記メイタンシノイドエステルが、Ｃ−１９位
又はＣ−２０位が修飾されたメイタンシノールのアナロ
グのエステルである請求項（７４）に記載の選択された
細胞集団を殺す方法。
（７６）前記メイタンシノイドエステルが、脱クロロメ
イタンシノールのエステルである請求項（７４）に記載
の選択された細胞集団を殺す方法。
（７７）メイタンシノールの前記Ｃ−３エステルが、式
（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV）〔式中、Ｚ＿０は水素原子又はＳＲを示し、Ｒはメチル
基、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基
、非置換の又は置換したアリール基又は複素環基を示す
。ｌは、１、２又は３を示す。Ｙ＿０は塩素原子又は水
素原子を示す。Ｘ＿３は水素原子又はメチル基を示す。〕で示される請求項（７４）に記載の選択された細胞集団
を殺す方法。
（７８）Ｒがメチル基を示す請求項（７７）に記載の選
択された細胞集団を殺す方法。
（７９）前記細胞障害剤がＮ−メチル−Ｎ−（３−メチ
ルジチオプロパノイル）−Ｌ−アラニンを含有する請求
項（７４）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（８０）前記メイタンシノイドエステルが、Ｎ−メチル
−システインを含有するメイタンシノイドエステルであ
る請求項（６９）に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
（８１）Ｎ−メチル−システインを含有する前記メイタ
ンシノイドエステルが、式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿５を示し、Ｒ＿
５は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｏは、１、２又は３を示す。ｐは、０又は１
〜１０の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示
す。〕で示される請求項（８０）に記載の選択された細
胞集団を殺す方法。
（８２）Ｎ−メチル−システインを含有する前記メイタ
ンシノイドエステルが、メイタンシノールのＣ−３エス
テルである請求項（８０）に記載の選択された細胞集団
を殺す方法。
（８３）前記メイタンシノイドエステルが、Ｃ−１９位
又はＣ−２０位が修飾されたメイタンシノールのアナロ
グのエステルである請求項（８２）に記載の選択された
細胞集団を殺す方法。
（８４）前記メイタンシノイドエステルが、脱クロロメ
イタンシノールのエステルである請求項（８２）に記載
の選択された細胞集団を殺す方法。
（８５）Ｎ−メチルシステインを含有する前記メイタン
シノイドエステルが、式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼（VI）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿５を示し、Ｒ＿
５は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｏは、１、２又は３を示す。ｑは、０又は１
〜１０の整数を示す。Ｙ＿０は、塩素原子又は水素原子
を示す。Ｘ＿３は、水素原子又はメチル基を示す。〕で示される
請求項（８２）に記載の選択された細胞集団を殺す方法
。
（８６）Ｒ＿５がメチル基を示す請求項（８５）に記載
の選択された細胞集団を殺す方法。
（８７）前記細胞障害剤が、Ｎ−アセチル−Ｎ−メチル
−メチルジチオシステインを含有する請求項（８２）に
記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（８８）前記メイタンシノイドが、ジスルフィド基又は
チオエーテル基を含む結合基を介して細胞結合剤に連結
されている請求項（６７）に記載の選択された細胞集団
を殺す方法。
（８９）前記メイタンシノイドが、酸に不安定な基、光
に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基又はエステラ
ーゼに不安定な基を含む結合基を介して細胞結合剤に連
結されている請求項（６７）に記載の選択された細胞集
団を殺す方法。
（９０）前記細胞結合剤が、ペプチド又は非ペプチドで
ある請求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す
方法。
（９１）前記細胞結合剤が、ポリクローナル又はモノク
ローナル抗体である請求項（６７）に記載の選択された
細胞集団を殺す方法。
（９２）前記細胞結合剤が、モノクローナル抗体である
請求項（９１）に記載の選択された細胞集団を殺す方法
。
（９３）前記細胞結合剤が、少なくとも１つの前記抗体
の結合部位を含む請求項（９１）又は（９２）に記載の
選択された細胞集団を殺す方法。
（９４）前記細胞結合剤が、ホルモンである請求項（６
７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（９５）前記ホルモンが、メラニン細胞刺激ホルモン（
ＭＳＨ）又はそのアナログである請求項（９４）に記載
の選択された細胞集団を殺す方法。
（９６）前記ホルモンが、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ
）又はそのアナログである請求項（９４）に記載の選択
された細胞集団を殺す方法。
（９７）前記細胞結合剤が、成長因子である請求項（６
７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（９８）前記成長因子が、表皮成長因子（ＥＧＦ）であ
る請求項（９７）に記載の選択された細胞集団を殺す方
法。
（９９）前記成長因子が、トランスフォーム成長因子ア
ルファ（ＴＧＦ−α）である請求項（９７）に記載の選
択された細胞集団を殺す方法。
（１００）前記細胞集団が、ガンを起こす請求項（６７
）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１０１）前記細胞集団が、肺ガンを起こす請求項（６
７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１０２）前記細胞集団が、乳ガンを起こす請求項（６
７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１０３）前記細胞集団が、結腸ガンを起こす請求項（
６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１０４）前記細胞集団が、前立腺ガンを起こす請求項
（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１０５）前記細胞集団が、腎臓ガンを起こす請求項（
６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１０６）前記細胞集団が、膵臓ガンを起こす請求項（
６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１０７）前記細胞集団が、卵巣ガンを起こす請求項（
６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１０８）前記細胞集団が、リンパ器官のガンを起こす
請求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法
。
（１０９）前記細胞集団が、黒色腫を起こす請求項（６
７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１０）前記細胞集団が、移植片対宿主病を起こす請
求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１１）前記細胞集団が、移植器官の拒絶を起こす請
求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１２）前記細胞集団が、移植腎臓の拒絶を起こす請
求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１３）前記細胞集団が、移植肝臓の拒絶を起こす請
求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１４）前記細胞集団が、移植心臓の拒絶を起こす請
求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１５）前記細胞集団が、移植骨髄の拒絶を起こす請
求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１６）前記細胞集団が、自己免疫疾患を起こす請求
項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１７）前記細胞集団が、全身性狼瘡を起こす請求項
（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１１８）前記細胞集団が、リウマチ様関節炎を起こす
請求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法
。
（１１９）前記細胞集団が、多発性硬化症を起こす請求
項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１２０）前記細胞集団が、ウィルスに感染したもので
ある請求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す
方法。
（１２１）前記細胞集団が、サイトメガロウイルスに感
染したものである請求項（６７）に記載の選択された細
胞集団を殺す方法。
（１２２）前記細胞集団が、ヒトの免疫不全ウィルスに
感染したものである請求項（６７）に記載の選択された
細胞集団を殺す方法。
（１２３）前記細胞集団が、バクテリアに感染したもの
である請求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺
す方法。
（１２４）前記細胞集団が、ラムブル鞭毛虫症を起こす
請求項（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法
。
（１２５）前記細胞集団が、アメーバ症を起こす請求項
（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１２６）前記細胞集団が、住血吸虫病を起こす請求項
（６７）に記載の選択された細胞集団を殺す方法。
（１２７）メイタンシノール又はメイタンシノールアナ
ログのＮ−メチル−アラニンを含有するエステルであっ
て、化学作用部分に対してＮ−メチル−アラニンを含有
するメイタンシノイドエステルを連結することができる
結合基を含むことを特徴とするメイタンシノール又はそ
のアナログのＮ−メチル−アラニンを含有するエステル
。
（１２８）前記結合基が、ジスルフィド基又は遊離のチ
オール基を含む請求項（１２７）に記載のＮ−メチル−
アラニンを含有するエステル。
（１２９）前記結合基が、酸に不安定な基、光に不安定
な基、ペプチダーゼに不安定な基又はエステラーゼに不
安定な基である請求項（１２７）に記載のＮ−メチル−
アラニンを含有するエステル。
（１３０）前記エステルが、メイタンシノール又はメイ
タンシノールアナログのＣ−３エステルである請求項（
１２７）に記載のＮ−メチル−アラニンを含有するエス
テル。
（１３１）Ｎ−メチル−アラニンを含有する前記メイタ
ンシノイドエステルが、式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）〔式中、Ｚ＿０は、水素原子又はＳＲを示し、Ｒは、直
鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基、非置
換の又は置換基を有するアリール基又は複素環基を示す
。ｌは、１〜１０の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシ
ノイドを示す。〕で示される請求項（１２７）に記載の
Ｎ−メチル−アラニンを含有するエステル。
（１３２）Ｎ−メチル−アラニンを含有する前記メイタ
ンシノイドエステルが、式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II）〔式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は同一又は異なって、水素原
子、メチル基又はエチル基を示す。Ｚ＿１は、水素原子
又はＳＲ＿３を示し、Ｒ＿３は、直鎖アルキル基、分枝
アルキル基、環状アルキル基、非置換の又は置換基を有
するアリール基又は複素環基を示す。ｍは、０、１、２
又は３を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示す。〕で示される請求項（１２７）に記載のＮ−メチル−アラ
ニンを含有するエステル。
（１３３）Ｎ−メチル−アラニンを含有する前記エステ
ルが、式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III）〔式中、Ｚ＿２は、水素原子又はＳＲ＿４を示し、Ｒ＿
４は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｎは、３〜８の整数を示す。ｍａｙは、メイ
タンシノイドを示す。〕で示される請求項（１２７）に記載のＮ−メチル−アラ
ニンを含有するエステル。
（１３４）前記メイタンシノイドエステルが、Ｃ−１９
位又はＣ−２０位が修飾されたメイタンシノールのアナ
ログのエステルである請求項（１３０）に記載のＮ−メ
チル−アラニンを含有するエステル。
（１３５）前記メイタンシノイドエステルが、脱クロロ
メイタンシノールのエステルである請求項（１３０）に
記載のＮ−メチル−アラニンを含有するエステル。
（１３６）前記メイタンシノイドのＣ−３エステルが、
式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV）〔式中、Ｚ＿０は水素原子又はＳＲを示し、Ｒは直鎖ア
ルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル基、非置換の
又は置換基を有するアリール基又は複素環基を示す。ｌ
は、１、２又は３を示す。Ｙ＿０は塩素原子又は水素原
子を示す。Ｘ＿３は水素原子又はメチル基を示す。〕で示される請求項（１３０）に記載のＮ−メチル−アラ
ニンを含有するエステル。
（１３７）Ｒが、メチル基を示す請求項（１３６）に記
載のＮ−メチル−アラニンを含有するエステル。
（１３８）Ｎ−メチル−Ｎ−（３−メチルジチオプロパ
ノイル）−Ｌ−アラニンを含有する請求項（１２７）に
記載のＮ−メチル−アラニンを含有するエステル。
（１３９）前記化学作用部分が、細胞結合剤である請求
項（１２７）に記載のＮ−メチル−アラニンを含有する
エステル。
（１４０）Ｎ−メチル−システインを含有するメイタン
シノール又はメイタンシノールアナログのエステル。
（１４１）前記Ｎ−メチル−システインが、化学作用部
分に対してＮ−メチル−システインを含有する前記メイ
タンシノイドを連結することができる結合基を含む請求
項（１４０）に記載のＮ−メチル−システインを含有す
るエステル。
（１４２）前記結合基が、ジスルフィド基又は遊離のチ
オール基である請求項（１４１）に記載のＮ−メチル−
システインを含有するエステル。
（１４３）前記結合基が、酸に不安定な基、光に不安定
な基、ペプチダーゼに不安定な基又はエステラーゼに不
安定な基である請求項（１４１）に記載のＮ−メチル−
システインを含有するエステル。
（１４４）前記エステルが、メイタンシノール又はメイ
タンシノールアナログのＣ−３エステルである請求項（
１４０）に記載のＮ−メチル−システインを含有するエ
ステル。
（１４５）前記エステルが、メイタンシノール又はメイ
タンシノールアナログのＣ−３エステルである請求項（
１４１）に記載のＮ−メチル−システインを含有するエ
ステル。
（１４６）Ｎ−メチル−システインを含有する前記メイ
タンシノイドエステルが、式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿５を示し、Ｒ＿
５は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｏは、１、２又は３を示す。ｐは、０又は１
〜１０の整数を示す。ｍａｙは、メイタンシノイドを示
す。〕で示される請求項（１４１）に記載のＮ−メチル
−システインを含有するエステル。
（１４７）前記メイタンシノイドエステルが、Ｃ−１９
位又はＣ−２０位が修飾されたメイタンシノールのアナ
ログのエステルである請求項（１４４）又は（１４５）
に記載のＮ−メチル−システインを含有するエステル。
（１４８）前記メイタンシノイドエステルが、脱クロロ
メイタンシノールのエステルである請求項（１４４）又
は（１４５）に記載のＮ−メチル−システインを含有す
るエステル。
（１４９）Ｎ−メチル−システインを含有する前記エス
テルが、式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼（VI）〔式中、Ｚ＿３は、水素原子又はＳＲ＿５を示し、Ｒ＿
５は、直鎖アルキル基、分枝アルキル基、環状アルキル
基、非置換の又は置換基を有するアリール基又は複素環
基を示す。ｏは、１、２又は３を示す。ｑは、０又は１
〜１０の整数を示す。Ｙ＿０は、塩素原子又は水素原子
を示す。Ｘ＿３は、水素原子又はメチル基を示す。〕示される請
求項（１４５）に記載のＮ−メチル−システインを含有
するエステル。
（１５０）Ｒ＿５が、メチル基を示す請求項（１４９）
に記載のＮ−メチル−システインを含有するエステル。
（１５１）Ｎ−アセチル−Ｎ−メチル−メチルジチオシ
ステインを含む請求項（１４５）に記載のＮ−メチル−
システインを含有するエステル。