JPH03168084A - 固定化リパーゼおよび固定化リパーゼによる油脂の加水分解方法 - Google Patents
固定化リパーゼおよび固定化リパーゼによる油脂の加水分解方法Info
- Publication number
- JPH03168084A JPH03168084A JP1308167A JP30816789A JPH03168084A JP H03168084 A JPH03168084 A JP H03168084A JP 1308167 A JP1308167 A JP 1308167A JP 30816789 A JP30816789 A JP 30816789A JP H03168084 A JPH03168084 A JP H03168084A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oils
- lipase
- fats
- immobilized lipase
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims abstract description 48
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims abstract description 48
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims abstract description 48
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 title description 6
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title description 6
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims abstract description 34
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims abstract description 31
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 244000144992 flock Species 0.000 abstract 5
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、固定化リパー ゼ、および固定化リパーゼを
用いた油脂の加水分解方法に関する。
用いた油脂の加水分解方法に関する。
従来のリパーゼによる油脂の加水分解は、リパーゼ水溶
液と油脂とを混合撹拌するか、または両者を混合乳化し
たスラリー状態で反応させる方法により行われている。
液と油脂とを混合撹拌するか、または両者を混合乳化し
たスラリー状態で反応させる方法により行われている。
また酵素の再利用によるコスト低減を目的として酵素を
固定化することが試みられ、イソメラーゼ等においては
既に実用化されて，いる。
固定化することが試みられ、イソメラーゼ等においては
既に実用化されて，いる。
しかしながら、前記イソメラーゼの場合の反応は水溶系
であって、これに対し、リパーゼの場合には基質となる
油脂が水不溶性であるため、固定化リパーゼを基質中に
充分に分散することができず、このため充分な加水分解
率が得られずにリパーゼによる油脂の工業的製造の難点
となっている。
であって、これに対し、リパーゼの場合には基質となる
油脂が水不溶性であるため、固定化リパーゼを基質中に
充分に分散することができず、このため充分な加水分解
率が得られずにリパーゼによる油脂の工業的製造の難点
となっている。
本発明者は、かかる欠点を改良すべく鋭意研究を重ねた
結果、塩基性多糖類であるキトサンのアミノ基、水酸基
の一部にアルキル基、ベンジル基などの疎水基を導入し
てキトサンの疎水性をある程度高め、マクロポーラスな
担体とともにこれを用いてフロックを形或させ、さらに
リパーゼを吸着させることにより、油脂の加水分解を良
好に達威できる固定化リパーゼの作或に成功した。
結果、塩基性多糖類であるキトサンのアミノ基、水酸基
の一部にアルキル基、ベンジル基などの疎水基を導入し
てキトサンの疎水性をある程度高め、マクロポーラスな
担体とともにこれを用いてフロックを形或させ、さらに
リパーゼを吸着させることにより、油脂の加水分解を良
好に達威できる固定化リパーゼの作或に成功した。
すなわち、本発明の固定化リパーゼは、キトサンのアミ
ン基、水酸基の一部にアルキル基、ベンジル基などの疎
水基を導入し、これにフロックを形成させた後リパーゼ
を吸着させたことを特徴とし、また本発明は併せて、前
記固定化リパーゼを用いて油脂を加水分解することを特
徴とする固定リパーゼによる油脂の加水分解方法を提供
する。
ン基、水酸基の一部にアルキル基、ベンジル基などの疎
水基を導入し、これにフロックを形成させた後リパーゼ
を吸着させたことを特徴とし、また本発明は併せて、前
記固定化リパーゼを用いて油脂を加水分解することを特
徴とする固定リパーゼによる油脂の加水分解方法を提供
する。
第３請求項は、固定化リパーゼを油脂中に分散させて油
脂を加水分解すること、第４請求項は、固定化リパーゼ
を充填したカラム中に油脂を通液して油脂７を加水分解
することを特徴とする。
脂を加水分解すること、第４請求項は、固定化リパーゼ
を充填したカラム中に油脂を通液して油脂７を加水分解
することを特徴とする。
リパーゼの固定化については種々の方法が提案されてい
る。すなわち、寒天由来のアガロースをアルキル化、フ
ェニル化またはトリチル化した多種類ゲルにリパーゼを
固定化した例（特開昭５８−１４６２８４号）もあるが
、本発明の固定化リパーゼは、ゲルとは異り、親水性お
よび疎水性の両基を有するフロックを用いて構成されて
いるため、油脂、水の両方とも簡単に固定化リパーゼ中
に浸潤することが可能である。また油脂の加水分解に際
して油脂を乳化する必要がなく、この固定化リパーゼを
油脂と緩衝液を含む反応液中に加えて撹拌するか、また
は固定化リパーゼを充填したカラム中に油脂と緩衝液と
の混合液を通液するなどの方法により容易に油脂の加水
分解を実施することができる。
る。すなわち、寒天由来のアガロースをアルキル化、フ
ェニル化またはトリチル化した多種類ゲルにリパーゼを
固定化した例（特開昭５８−１４６２８４号）もあるが
、本発明の固定化リパーゼは、ゲルとは異り、親水性お
よび疎水性の両基を有するフロックを用いて構成されて
いるため、油脂、水の両方とも簡単に固定化リパーゼ中
に浸潤することが可能である。また油脂の加水分解に際
して油脂を乳化する必要がなく、この固定化リパーゼを
油脂と緩衝液を含む反応液中に加えて撹拌するか、また
は固定化リパーゼを充填したカラム中に油脂と緩衝液と
の混合液を通液するなどの方法により容易に油脂の加水
分解を実施することができる。
本発明の特徴とするところは上述したようにフロックの
形成とキトサンへの疎水基の導入である。すなわち塩基
性多糖類であるキトサンは酢酸、蟻酸などの稀有機酸に
溶解するが、アルカリ性にすることにより糸状の塊であ
るフロックを形戊する。このフロックはリパーゼを良く
吸着し、リパーゼを固定化することができるが、この固
定化リパーゼでは充分な酵素活性を発揮させることは困
難である。そこで上述したようにキトサンに疎水基を導
入することによって酵素活性を高めることができた。
形成とキトサンへの疎水基の導入である。すなわち塩基
性多糖類であるキトサンは酢酸、蟻酸などの稀有機酸に
溶解するが、アルカリ性にすることにより糸状の塊であ
るフロックを形戊する。このフロックはリパーゼを良く
吸着し、リパーゼを固定化することができるが、この固
定化リパーゼでは充分な酵素活性を発揮させることは困
難である。そこで上述したようにキトサンに疎水基を導
入することによって酵素活性を高めることができた。
本発明で用いるリパーゼはその起源を問わず、微生物、
動物臓器または植物種子を起源とする何れのリパーゼを
も固定化し得るものである。
動物臓器または植物種子を起源とする何れのリパーゼを
も固定化し得るものである。
キトサンへのベンジル基の導入を常法通リピリジン中で
塩化ベンジルを用いて行なった。
塩化ベンジルを用いて行なった。
上記物質１．５ｇを稀酢酸に溶解し、セライトとともに
アルρり溶液中に投入しフロックを形威せしめ、水洗し
担体を調整した。これにリパーゼ２ｇを吸着させ固定化
リパーゼを作成した。第ｌ図はキトサンおよびベンジル
化キトサンを用いて調整した固定化リパーゼをカラムに
充填しオリーブオイルを基質として酵素活性を比較した
ものである。ベンジル基を導入したものはキトサンに比
べ高い活性を示し、また流速２ｍｌ／ｍｉｎにおける酵
素活性はキトサンの場合の０．５ ｍｌ／ ｍｉｎにお
ける酵素活性と同程度を示し、加水分解効率としては約
４倍の活性が示された。図上、黒丸がペンジル化キトサ
ン、白丸がキトサンである。
アルρり溶液中に投入しフロックを形威せしめ、水洗し
担体を調整した。これにリパーゼ２ｇを吸着させ固定化
リパーゼを作成した。第ｌ図はキトサンおよびベンジル
化キトサンを用いて調整した固定化リパーゼをカラムに
充填しオリーブオイルを基質として酵素活性を比較した
ものである。ベンジル基を導入したものはキトサンに比
べ高い活性を示し、また流速２ｍｌ／ｍｉｎにおける酵
素活性はキトサンの場合の０．５ ｍｌ／ ｍｉｎにお
ける酵素活性と同程度を示し、加水分解効率としては約
４倍の活性が示された。図上、黒丸がペンジル化キトサ
ン、白丸がキトサンである。
〔実施例２〕
上記と同様に調整したカラムを用い、３０〜６０°Ｃま
での各温度で酵素活性を測定した結果を第２図に示した
。５０°Ｃにおいて最大活性を示したが、６０°Ｃまで
急激な酵素の失活は見られなかった。また、第３図はオ
リーブオイルと緩衝液との比を種々変化させ酵素活性を
比較したものである。流速２ ｍｌ／ ｍｉｎ ， ４
５℃で反応を行わせた。緩衝液の多いものほど高い分解
率を示したが、流速一定であるため緩衝液の量が少なく
なるにつれ油脂の量が増加するため加水分解量は、緩衝
液が少なくなるにつれて増加した。
での各温度で酵素活性を測定した結果を第２図に示した
。５０°Ｃにおいて最大活性を示したが、６０°Ｃまで
急激な酵素の失活は見られなかった。また、第３図はオ
リーブオイルと緩衝液との比を種々変化させ酵素活性を
比較したものである。流速２ ｍｌ／ ｍｉｎ ， ４
５℃で反応を行わせた。緩衝液の多いものほど高い分解
率を示したが、流速一定であるため緩衝液の量が少なく
なるにつれ油脂の量が増加するため加水分解量は、緩衝
液が少なくなるにつれて増加した。
第ｌ図ないし第３図はそれぞれ固定化リバーゼの活性特
性を示すグラフである。 ｍｌ／ｍｉｎ
性を示すグラフである。 ｍｌ／ｍｉｎ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、キトサンのアミノ基、水酸基の一部にアルキル基、
ベンジル基などの疎水基を導入し、これにフロックを形
成させた後リパーゼを吸着させたことを特徴とする固定
化リパーゼ。 ２、請求項１の固定化リパーゼを用いて油脂を加水分解
することを特徴とする固定化リパーゼによる油脂の加水
分解方法。 ３、固定化リパーゼを油脂中に分散させて油脂を加水分
解することを特徴とする第２項記載の固定化リパーゼに
よる油脂の加水分解方法。 ４、固定化リパーゼを充填したカラム中に油脂を通液し
て油脂を加水分解することを特徴とする第２項記載の固
定化リパーゼによる油脂の加水分解方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1308167A JPH03168084A (ja) | 1989-11-28 | 1989-11-28 | 固定化リパーゼおよび固定化リパーゼによる油脂の加水分解方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1308167A JPH03168084A (ja) | 1989-11-28 | 1989-11-28 | 固定化リパーゼおよび固定化リパーゼによる油脂の加水分解方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03168084A true JPH03168084A (ja) | 1991-07-19 |
| JPH0523746B2 JPH0523746B2 (ja) | 1993-04-05 |
Family
ID=17977707
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1308167A Granted JPH03168084A (ja) | 1989-11-28 | 1989-11-28 | 固定化リパーゼおよび固定化リパーゼによる油脂の加水分解方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03168084A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59213390A (ja) * | 1983-05-19 | 1984-12-03 | Asahi Denka Kogyo Kk | 固定化酵素及びその製造方法 |
-
1989
- 1989-11-28 JP JP1308167A patent/JPH03168084A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59213390A (ja) * | 1983-05-19 | 1984-12-03 | Asahi Denka Kogyo Kk | 固定化酵素及びその製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0523746B2 (ja) | 1993-04-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3802997A (en) | Method of stabilizing enzymes | |
| JPH0320234B2 (ja) | ||
| Vorlop et al. | [22] Entrapment of microbial cells in chitosan | |
| US4089746A (en) | Method for insolubilizing enzymes on chitosan | |
| Sahukhan et al. | Immobilization of α-amylase from Myceliophthora thermophila D-14 (ATCC 48104) | |
| CA1215336A (en) | Immobilization of catalytically active microorganisms in agar gel fibers | |
| US3736231A (en) | Preparation of insolubilized enzymes | |
| JPS63177788A (ja) | アミダーゼ酵素活性化方法及びアクリルアミド分解方法 | |
| Ohmiya et al. | Preparation and properties of proteases immobilized on anion exchange resin with glutaraldehyde | |
| JPH0523746B2 (ja) | ||
| US3935068A (en) | Continuous isomerization process utilizing immobilized flocculate enzyme | |
| Chen et al. | Improvement of cell lysis activity of immobilized lysozyme with reversibly soluble-insoluble polymer as carrier | |
| JP3062893B2 (ja) | キチン含有材料の酵素的分解法 | |
| JP2873865B2 (ja) | 澱粉含有材料の酵素分解方法によるオリゴ糖の製造方法 | |
| Kanwar et al. | Enhancement of ethyl propionate synthesis by poly (AAc-co-HPMA-cl-MBAm)-immobilized pseudomonas aeruginosa MTCC-4713, exposed to Hg 2+ and NH 4+ ions | |
| JP3218794B2 (ja) | 新規界面活性剤被覆酵素とその製法 | |
| JPH0583236B2 (ja) | ||
| IE57588B1 (en) | Penicillinamidase | |
| JPH0327198B2 (ja) | ||
| JPS6156076A (ja) | 固定化酵素及びその製造方法 | |
| SU1472505A1 (ru) | Способ иммобилизации ферментов | |
| Salleh et al. | Protein-alginate gel for enzyme immobilisation | |
| CN109136212B (zh) | 利用交联酶聚集体固定化方法制备马拉硫磷水解酶 | |
| JPS6258708B2 (ja) | ||
| RU686377C (ru) | Способ получени препарата иммобилизованной протеазы BACILLUS SUBTILIS |