JPH03180762A - 一体型多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、生物体液中１例えば血液成分の生化学分析ｌ
去又は免疫分析法により定量分析するための乾式の一体
形多層分析要素に間するものである。

［従来技術とその欠点コ 体イα、特に血液の中に存在する各種の代謝成分。

例えばグルコース、ヒリルヒン、ＢＵＮ（尿素窒素）。

尿酸、コレステロール、ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）。

クレアチンキナーゼ、ＡＬＴ（アラニンアミノトランス
フェラーゼ）、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランス
フェラーセ）等の定量分析は、臨床医学上重要で、疾患
の診断と確定、治療経過の追跡、予後の判定などに不可
欠である。血液等の体液を試料とする臨床化学検査では
、微量の液体試料で、精度の高い検査を行うことができ
ろことが望ましい。

従来、溶液状の分析試薬を用いる湿式分析法が広く用い
られているが、迅速性ここ欠ける傾向がある。

乾式分析、すなわち実質的に乾燥状態の生化学分析試薬
又は免疫分析試薬を含む試験片、非一体型の多層分析要
素、一体形多層分析要素（これらを総称して乾式分析要
素ということがある）等を用いる臨床分析法が提案され
実用に供されている。

乾式分析は温式法による分析法より、倒えは分析操作の
簡易さ０分析の迅速さ、総合コストの安さ等の点で優れ
ている。

乾式の一体形多層分析要素は、？ｉｊｔ量の液体試料で
、ｍ度の高い検査を迅速に行うことができる分析手段と
して開発された。一体形多層分析要素は特開昭４９−５
３８８８（特公昭５３−２１６７７）、特開昭５５−１
６４３５６、特開昭６０−２２２７６９等で知られてい
る。−体型多層分析要素の１例をあげれば、透明支持体
の上に試薬層、光反射層、展開層がこの順に積層−体１
ヒされた構造である。透明支持体は０例えば薄い透明有
機ポリマーシートである。透明支持体の上に塗布された
試薬層には、液体試料中に含まれる被検成分（アナライ
ト；　ａｎａｌｙｔｅ）と反応し、その量に対応した光
学濃度に発色又は変色する試薬組成物が含まれる。光反
射層は試薬層の発色光学濃度を測定する際に展開層に点
着した液体試料の色（例、全血に含まれる赤血球の赤色
）の影響を受けないようにする役割を主として持つ。展
開層は。

点着された液体試料を一擾に、液の容量にほぼ比例する
面積に広げて試薬層に供給する。このような多層分析要
素を用いて定量分析するには、液体試料９例えば約５μ
Ｌ〜約２０μしの全血を展開層表面に点着する。展開層
で展開された血液は光反射層を通過して試薬層に達し、
ここで試薬と反応し１発色又は変色を生しる。液体試料
の点着後、多層分析要素を適当な時間一定濃度＜（ｆｓ
ＩＩ、３７°Ｃ，６分）に保って発色反応又は変色反応
を充分に進行させた後の発色又は変色の光学４度（終点
法）を、あるいは発色反応又は変色反応の進行にともな
い生じろ発色又は変色の光学濃度変１ヒの速度（速度法
）を透明支持体側から光を試薬層ζこ照射し、特定波長
域で反射光量を測定して反射光学濃度又は、その変化速
度を求め、予め求めておいた検量線に基づいて被検成分
の液体試料中の含有量に換算して、被検成分の含有量が
求められる。

最近、一体形多層分析要素に工夫がなされ血液試料とし
て稀釈しない全血を用いることが可能になった。例えは
、特開昭５７−６６３５９には全血試料の−様な展開が
可能な展開層として９表面が物理的活性化処理された織
物が記載されており、また、特開昭６０−１１１９６０
号には多層分析要素に設けられた濾過層により全血から
血球成分を除去する方法が記載されている。また濾過に
より効率よく血＃成分を除去するために、全血試料中に
、赤血球表面の極性を変化させ、かつそれにより赤血球
を凝固させるために、スペーサーとして役立つ連結基で
連結された強極性基からなる赤血球保留基質を含有させ
る方法が特開昭６０−３６９６１に記載されている。

しかし、この方法は、血球を濾別するために保留基Ｍを
担持させた建材中を比較的長い距離にわたって全血試料
を通過させなければならない。しかも例示された保留基
質の多くは溶血を生じさせる傾向を有する。さらに効率
よくかつ正確に血球成分を分離できる一体形多層分析要
素が特開昭６２−１３８７５６で提案された。この多層
分析要素は、支持体の上に、支持体から遠い側から繊Ｉ
Ｉ　Ｍ微多孔性層。

非繊維質微多孔性層、第２の繊維質又は非繊維質微多孔
性層がこの噸に一体に積層されており、前記３層の微多
孔性層がそれぞれ隣接する界面の間で。

液体の一様通過が実質的に妨げられないような微少貫通
部を形成するように部分的に配置された接着剤により実
質的に密着して接着されて一体化されている多層分析要
素であり９発色又は変色を生ずる試薬組成物は前記３層
の微多孔性層の何れかに含まれ、非繊維微多孔性層の平
均有効孔径を０．８μｍから３０μｍとしたものである
。しかし、この多層分析要素を用いて全血の分析を行う
とき、血球成分の分ス１除去がまだ不充分で、血液のへ
マドクリット値（血液中に占める血球の容積百分率）の
大小により血漿の反応層への透過性が異なったり。

また全血試料の状態によっては赤血球の溶血が起こり、
血漿中の被検成分の含有量が同し血液でも分析結果に差
異が生しることが判明した。

臨床１ヒ学分析を１テう場合、従来より湿式分析法。

乾式分析法いずれの方法によって分析する場合において
も、検出の反応を再現よく安定に起こさせるために、検
体試料にｐＨ緩衝剤を加えてｐＨ値の変Ｉヒを実質的に
なくシ、ｐＨｌ直を一定に保つよう工夫がなされてきた
。一体形多層分析要素を用いて乾式分析法によって分析
する場合、　ｐＨ緩衝剤は展開層又は被検成分と反応す
る試薬組成物を含む反応層に含有され１点着された全血
試料に溶解して、検出反応の場の周囲ｐ）Ｉの安定化を
実現している。従来のように赤血球を除去した血漿又は
血清を試料として分析が行われる場合には用いられるｐ
Ｈ緩衝剤に特に制限はなかっかたが、全血試料の場合、
ｐＨ緩衝剤のｆ！類によっては赤血球の溶血が起こるこ
とが判明し、　ｐＨ緩衝剤の選択の重要性が認識される
ようになった。

全血試料を用いた場合、血液のへマドクリット値：こよ
る分析結果の変動を改良する試みは特願平１−３０４０
８に提案されている。この分析要素は支持体上に、支持
体から遣い側から繊維質微多孔性層。

非繊維質微多孔性層、第２の繊維質がこの順に一体に積
層されており、前記３層の微多孔性層がそれぞれ隣接す
る面の間で液体の一様通過が実質的に妨げられないよう
な微少貫通部を形成するように部分的に配置された接着
剤により実質的に密着して接着されて一体化されている
多層分析要素である。

しかしこの多層分析要素を用いて全血分析を１テうとき
、血液のへマドクリット値が約５５％を超え６０％にな
ると、血漿中の被検成分の定量分析値が（被検成分の含
量が同し血液でも６０％へマドクリット値の血液の方が
）低下することが見出された。ざらに′＠２の微多孔性
層は繊維質であるため、非ｗｋ碓貢の場合に比べて検出
層の発色光学濃度が低い（低感度である）ことも見出さ
れた。

本発明は１点着されろ血液試料が他の液体９例えば生理
食塩水３等で稀釈されていてもぐ未稀釈全血の）血漿や
血清に相当する液体成分のｐ）Ｉ値が約６．５〜約９．
５の範囲の水素イオン濃度値を持っていれは。

稀釈された血ン夜試料が多層分析要素の微多孔性層中を
通過する際に赤血球の溶血は起こらない、という新しい
知見に基づいてなされたものである。

［発明が解決しようとする問題点］ 本発明はの目的は、一体形多層分析要素中で全血中の赤
血球を溶血を起こす二となく血漿から分離除去して赤血
球による発色光学濃度の測定時の光学的妨害及び化学的
妨害を回避し、かつ血漿中の被検成分の試薬層への拡散
が速やかに行なわれ。

全血試料中の測定対象である被検成分を、血液のへマド
クリット値に拘わらず、高感度・高精度で定量分析する
ことができる一体形多層分析要素を提供することである
。

本発明の他の目的は、特開昭６３−１３８７５６及び特
願平１−３０４０８に記載の、ｌＪ接する３層の微多孔
性層の間に、液体の一様通過が妨げられない程度に微小
貫通部が形成されるように部分的に配置された接着剤に
より実質的に密着して接着され一体化（この接着を部分
接着又は多孔性接着という）された一体形多層分析要素
をさらに改良することである。

［問題点を解決するための手段］ 上記の問題点は、下記の２つのｇ様いずれによっても解
決された。

２つの態様において、一体形多層分析要素は、いずれも
、支持体の土に呈色試薬組成物を含む少なくとも１層の
試薬層、非繊維質微多孔性層、最上層をなす！！維Ｒ微
多孔性層がこの順に積層されている一体形多層分析要素
、又は、支持体の上に呈色試薬組成物を含む少なくとも
１層の試薬層、ｌａ維質又は非繊維質漱多孔性層、非繊
維質微多孔性層、最上層をなす繊維質微多孔性層がこの
順に積層されている一体形多層分析要素であって、前記
２層又は３層の微多孔性層は隣接し、その界面が部分接
着されている一体形多層分析要素である。試薬層は、親
水性ポリマーバインダーと呈色試薬組成物を含む少なく
とも１層の実質的に無孔性の試薬層又は呈色試薬組成物
を含む少なくとも１層の繊維質又は非繊維ＮＲ多孔性層
からなる試薬層のいずれかを含む。

第１の態様は、少なくとも前記最上層をなす繊維質微多
孔性層に水に溶解したとき水がｐＨ値６６５〜９．５の
範囲の水素イオン濃度頃を示すｐＨ緩衝剤か含有されて
いることを特級とする一体形多層分析要素で、５る〈第
１の発明）。

第２の態様は、少なくとも前記最上層をなす繊維質微多
孔性層；こ、第３アミン又；よ／及び′＠４７ンモニウ
ム塩、及び水に溶解したとき水がｐＨ値６．５の範囲の
水素イオン濃度唾を示すｐｉ（緩衝剤が含有されている
ことを特級とする一体形多層分析要素である（第２の発
明）。

［問題点を解決するための手段の詳細な説明］本発明の
一体形多層分析要素の特級は、相互ミニ隣接する少なく
とも２層の微多孔性層〈２層の微多孔性層；！縁！Ｉｔ
！又；よ非繊維背向れてもよいが、好まし・い配置は支
持体側か・）非繊＆ｉｔ質、繊維質の順）が隣接する界
面の開で、液体の一様通過が実質的ここ妨けられない程
度；こ微少貫通部が形成されるようここ部分的ごこ配置
された接着剤；こより、実質的：こ密着して接着され一
体化された複合微多孔性層な含み、その最上層（支持］
４：から最も遠い最外側の１）の繊維Ｎ微多孔性層に、
「点着された全血試料にｊ容解して、その全血（又；よ
分離された血漿）がｐＨ（Ｉ！約６．５〜約９．５の水
素イオン、＃度１直を持っｊようなｐｉ（緩衝剤を含有
する二とく第１の発明）、及び前記のｐＨ緩衝剤と１３
７ミン又は／及び第４級アンモニウム塩を含有する二と
く第２の発明）である。

本発明の一体形多層分析要素は、少なくとも相隣接する
２層の微多孔性層を有していて０例えは。

支持体の上ここ、順二こ。

（１〉呈色試薬層、非繊碓漱多孔性層、最上層をなす繊
維質微多孔性層。

（２）吸水層、呈色試薬層、非繊維微多孔性層、最上層
をなす繊維質微多孔性層。

（３）検出層、呈色試薬層、非繊維漱多孔性曹、最上層
をなす繊維質微多孔性層。

（４）呈色試薬層、下１ｊ、１１繊維質漱繊維質層多孔
性維微多孔性層、最上層をなす繊維質微多孔性層。

（５）吸水層、呈色試薬層、下則繊碓質嶽多孔性層。

非繊維微多孔性層、最上層をなす繊維質微多孔性層。

（６）検出層、試薬層、下ｆｕｌｌ繊維貢徹多孔性層、
非繊維隊多孔性層、最上層をなす繊維質微多孔性層。

を、それぞれ、有しでいる。

ＰＪＩｊ！されている呈色試薬層、非繊維微多孔性層。

最上層をなす繊維質微多孔性層が自己支持性であろ場合
には支持体は必須ではない、あるいは、支持体がこれＩ
′Ｉの複数の層から剥離しうるものであってもよいが、
支持体の上にこれらの複数の層が接着積層されている態
様が好ましい。支持体を有する態様においては支持体は
光透過性（透明）で水不透過性のものが好ましい。水不
透過性光透過性支持体の材料として好ましいものは、ポ
リエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ヒスフェノ
ールＡのポリカルボネートである。セルローストリアセ
セテート等のセルロースエステル類でもよい。親水性層
を強固に接着させろために支持体には通常。

下塗層を設けるか表面に親水（ヒ処理を施す。検出層は
、一般に、ｍ構成分の存在下で生成した色素が拡散し、
光透過性支持体を通して光学的に検出される層で、１！
水性ポリマーを主成分としで構成することができる。媒
染剤（例、アニオン性色素に対してカチオン性ポリマー
）を含んでもよい。吸水層は、一般に、被検成分の存在
下で生成する色素が実質的にその層の内部ここ拡散しな
いような層を言い、膨潤しやすい親水性ポリマーを主成
分として構成することができろ。試薬組成物には、被検
成分の存在下に、光学的に険出し得る物質２例えば色素
を生成し得る組成物を含む。酸化によって色素を生成す
るロイコ色素を含む組成物（例、米国特許４０８９７４
７等に記載のトリアリールイミダゾールロイコ色素、特
開昭５９−１９３３５２等に記載のジアリールイミダゾ
ールロイコ色素）ニジアゾニウム塩；酸化されたときに
特定の色原体化合物とカプリングにより色素を生成する
カプラー化合物を含む組成物（例、４−７ミノアンチピ
リン類（色原体１ヒ合物〉とフェノール類又はナフトー
ル類くカプラー化合物）の組合せ〉二還元型補酵素と電
子伝達剤の存在下で色素を生成することのできる化合物
からなる組成物等を用いることができる。また、ｉＩ素
素性性測定する分析要素の場合には１例えばｐ−ニトロ
フェノール、ｐ−ニトロフェニルホスフェートのような
有色物質を遊離しうる自己顕色性基質を、呈色試薬とし
て試薬層又は非繊維微多孔性層に含ませることができる
。

被検成分の存在下に色素を生じて発色する試薬組成物又
は変色する試薬組成物を微多孔性層の少なくとも１つに
含有させるには、試薬組成物の適当な溶液又は分散液を
予め含浸又は塗布した微多孔性展間層を、ｆｌｌ！の水
浸透性層９例えば検出層や吸水層の上に特開昭５５−１
６４３５６に記載の方法で接着させる方法も有用である
。

微多孔性層を池の水浸透性層（例えば下塗り層。

接着層、吸水層）の上に前記特開昭５５−１６４３５６
に記載の方法で接着させた後、試薬組成物の溶液又は分
散液を微多孔性層に塗布することもできる。微多孔性層
への含浸又は塗布には公知の方法を利用できる。塗布は
９例えば、デイツプ塗布、押し出し塗布、ドクター塗布
、カーテン塗布等の公知の塗布ｌ去から適宜選択して用
いる。試ＭＭｉ成物は総てを一つの微多？Ｅ性層に含ま
せてもよく、複数の微多孔性層に成分ごとに分けて含有
させてもよい。総ての試薬組成物を複数の微多孔性層に
含有させてもよい。試薬組成物の一部又は全部を、微多
孔性層より支持体に近く設けられた親水性ポリマーをバ
インダーとする実質的に−様な層（試薬層）に含ませて
もよい。親水性ポリマーとして例えば、ゼラチン、ゼラ
チン誘導体（例、フタル化ゼラチン）。

セルロース誘導体（例、ヒドロキシプロピルセルロース
）、アカロース、ポリアクリルアミド、ポリメタアクリ
ルアミド、アクリルアミド又はメタアクリルアミドと各
種ビニル性モノマーとのコポリマー等を用いることがで
きる。親水性ポリマーをバインダーとする試薬組成物を
含む一様層を塗布した後。

試薬組成物を含まない繊維Ｎｖ＆多孔性層を特開昭５５
−１６４３５６に記載の方（去で接着させることによっ
ても、試薬組成物を微多孔性層に実質的に含有させるこ
とができる。試薬組成物には必要に応じ。

酵素活性化剤、架橋剤、界面活性剤等を含有させること
ができる。試薬層に含有させろことができるｐＨ緩衝剤
は最上層に含有させるｐＨ緩衝剤と同じでなくてもよく
、むしろ試薬層での化学的、又は生化学的反応に適した
ｐＨ値に調整されるようにｐＨ値又は成分を選択するこ
とができる。

非繊維微多孔性層として、特公昭５３−２１６７７、米
国特許１４２１３４１等に記載のセルロースエステル類
（例、セルロースアセテート、セルロースアセテートブ
チレート、硝酸セルロース）からなる微多孔性膜（メン
ブランフィルタ、プラッシュポリマーの層）が好ましい
。６−ナイロン、６．６−ナイロン等のポリアミド、ポ
リエチレン、ポリプロピレン、特開昭６２−２７００６
に記載のポリスルホン等の微多孔性膜も用いることがで
きる。その他、特公昭５３−２１６７７、特開昭５５−
９０８５９等に記載のポリマー微粒子、ガラス微粒子、
珪藻上等が親水性又は非吸水性ポリマーで結合された連
続空隙をもつ微多孔性層も用いる二とができる。非繊維
微多孔性層の有効孔径は約０．８μ信から約３０μ讃の
範囲が好ましい、非繊維微多孔性層の有効孔径はＡＳＴ
Ｍ　Ｆ３１６−７０に準拠した限界泡圧法（バブルポイ
ント法）により測定した孔径で示されろ、非繊維微多孔
性層が層分離法により作られた　いわゆるプラッシュ・
ポリマーからなるメンブランフィルタ−である場合、厚
さ方向のｉα体通過経路は、膜の製造時の自由表面側（
光沢面）で最も狭くなっているのが普通で、液体通過経
路の断面を円に近似したときの孔径は、自由表面の近く
で最も小さくなっている。単位の通過経路における膜の
厚さ方向に間する最小孔径の最大値が粒子に対する濾過
性能を決定する０通常、それは限界泡圧法で測定される
。本発明の分析要素の非繊維微多孔性層としてこの種の
膜を用いる場合には、支持体側にメンブランフィルタ−
の光沢面を向けることが好ましい。

繊維質微多孔性層を構成する材料としては、濾紙、不織
布９ｗａ物布地（例、平織布地〉１編物布ｊｔ＋（例。

トリコット編布地）、ガラス繊維濾紙等を用いることが
できる、これらのうちＩｌ物布地９編物布地が好ましい
、布地は特開昭５７−６６３５９に記載のグロー放電処
理などの物理化学的活性化処理を施すことができる。

非繊維微多孔性層を繊維質微多孔性層の上に液体の一様
通過が実質的に妨げられないようにして接着固定するに
は、接着剤を部分的に配置し、接着剤が存在しない部分
に微小貫通部が形成されるようにする。その方法として
特開昭６２−１３８７５６に記載の方法が有用である。

最上層をなす繊維質微多孔性層は全血試料の血球類を濾
過する層として機能するほかに全血試料を展開する展開
層としてもＩｌ能するので、成体計量（メータリング）
作用を有する層であることが好ましい。液体計量作用と
は１層の表面に点着供給された液体試料を、その中に含
有している成分を実質的に偏在させることなく９面方向
に単位面積当りほぼ一定量の割合で広げる作用である。

最上層をなす繊維質微多孔性層には、展開面積、展開速
度等を調節するため、特開昭６０−２２２７７０．特開
昭６３−２１９３９７、特開昭６３−１１２９９９．特
開昭６２−１８２６５２に記載の親水性ポリマー又は界
面活性剤を含浸させることができる。

全血中にに溶解させた時に、その全血（又は分離された
血漿）がｐＨ値約６．５〜約９．５の範囲内の水素イオ
ン濃度値を持つｐＨ緩衝剤として、水に溶解したときに
水がｐＨ値約６．５〜約９．５範囲内の実質的に一定の
水素イオン濃度値を維持できる諸種の公知のｐＨ緩衝剤
組成物を用いることができる。用いられるｐＨ緩衝剤と
して 井村沖正（イムラノフ７０等線ｒ生化学ハンドブックｊ
く丸善、１９８４年発行）　４７４−４８４頁。

堀尾武−０１７４９ケカス）等線「蛋白質・酵素の基礎
実験法ｊ（南注堂、１９８１年発行）。

ｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　５（２）、４６７−４
７７（１９６６）。

ＩｒＡｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
Ｊ　１０４．３００−３１０（１９８０）等に記載のｐ
Ｈ緩衝剤組成物が例示できる。

これらの公知のｐＨ緩衝剤のうちで、無機化合物を主体
とする。すなわち重量分率で約８０％以上の無機化合物
よりなるｐＨ緩衝剤の多くが一体形多層分析要素の最上
層をなす繊維質微多孔性層に含有させて赤血球の溶血を
実質的に防止する点で好ましい。ｐＨ緩衝剤の例として
、炭酸塩、硼酸酸塩、メタｌｊＩ酸塩、燐酸塩、ピロ燐
酸塩等の無機塩類を主成分とするｐＨ緩衝剤組成物があ
る。ｐＨ緩衝剤組成物のうちで９重量分率で約８０％以
上の無機化合物よりなり、構成陰イオン種のうち少なく
とも約５モル％が８４０７２−であるか、又は少なくと
も約２０モル％がＨＰＯ４２−であるか、又は前記の割
合で両者を含むｐＨ緩衝剤組成物が特に好ましい。陰イ
オン種の対イオンとしては通常例えば、Ｎａ”、に’″
、ＮＨａ’″があげられるがこれらに限定されるもので
はない。

好ましいｐ）１ｍ衝剤組成物の具体例として。

Ｎ　ａＨ２ｐ　Ｏ４−Ｎ　ａ２ＨＰ　Ｏ４：）１３ＥＩ
　Ｏ３−Ｎ　ａＢ　４ｏ？がある。

第２の発明に用いられる第３アミン及び第４級アンモニ
ウム塩について説明する。第３アミンの例としては、ト
リエチル７ミン：ｍ−（ジメチルアミノ）ベンゼンスル
ホン酸ナトリウム：メチルオレンジ：Ｎ、Ｎ−ジメチル
グリシンナトリウム塩：Ｎ、Ｎ−ジエチルエタノールア
ミン；トリエタノールアミン；メチルピペリジン：ニコ
チン酸ナトリウム塩等のモノアミン；　Ｎ、Ｎ、Ｎ’、
Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン；Ｎ、Ｎ、Ｎ’、
Ｎ’−テトラメチル−ｐ−フェニレンジアミン；Ｎ、Ｎ
、−ジメチルエチレンジアミン：　Ｎ、Ｎ−ジメチルピ
ペラジン二！、２−ジメチルイミダゾール；テトラメチ
ル尿素ニトリエチレンジアミン：１，１．３．３−テト
ラメチルグアニジン；硫酸スバルティン；エチレンジ７
ミンテトラ酢酸・３ナトリウム：４．４−ジアミノスチ
ルヘン−２，２′−ジスルホン酸ナトリウム；９−メチ
ル−３，４−ジヒドロ−２０−ピリド（１，２−ａ）ピ
リミジン・２−オン等のジアミン；ヘキサメチレンテト
ラミン；ジメチルアニリンとホルムアルデヒドとの縮合
物；アデニンの置換体の様な３個以上の第３アミンを有
するもの：第３アミン基を有するポリマー中９例えは、
ポリマーの主鎖に第３アミン窒素を有するポリマー（例
、ポリエチレンイミン）；測鎖に第３アミン基を有する
ポリマー（例、モノマーＣＨ２＝　ＣＨ−（ＣＨ２）〜
Ｎ　　Ｈ−Ｎ　　−（ＣＨ３ン。。

ＣＨ２＝：ＣＨ−Ｃｏ−（ＣＨ２）−ＮＨ−Ｎ−（ＣＨ
３）２のホモホリマー、メチルメタアクリレート又はＣ
Ｈ２＝ＣＨ−Ｃｏ−ＮＨ２との共重合物）がある。

第４アンモニウム塩の例としては、前記の第３アミンに
ハロゲン化アルキルを作用させて生成させた第４アンモ
ニウム塩がある。ポリマーの場合モノマーの状態て４級
化し、その後重合させるのが一般的であるが、このよう
にして生成させた第４級アンモニウム基を含むポリマー
に限定されるわけだはない。Ｎ、Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’−テ
トラメチルへキサメチレンヂアミンに１．３−ジクロロ
プロパンを縮合さた４級アンモニウム塩オリゴマーも用
いることができる。また生体系から得られるホスファチ
ジルコリン（レシチン）のような界面活性剤も用いるこ
とができる。上記第３アミン又は４級アンモニウム塩は
低分子化合物も充分に有用であるが、高分子化合物の場
合は最上層をなす繊維質微多孔性層から隣接する非繊維
多孔質層やさらにその下側の試薬層や吸水層や検出層に
第３アミン又は４級アンモニウム塩が移行することが少
ないので全血（又は分離された血漿）に含まれる被検成
分の検出反応等に対する影響が少ないので好ましい。

本発明の一体形多層分析要素においては最上層である１
ａ維質微多孔性層にｐＨ緩衝剤を（第１の発明）。

又は前記のｐＨ緩衝剤と第３アミン又は４級アンモニウ
ム塩（第２の発明）を含有させる。ｐＨ１ｉ街剤は最上
層の他に最上層から２番目の層又はさらに下側の層にも
添加されていてもよい。

本発明の一体形多層分析要素は、全血中のグルコース、
尿素、尿酸、クレアチニン等の低分子成分の定量はもち
ろん、総蛋白、アルブミン、各種酵素等の高分子成分、
ビリルビン等の蛋白質と結合した成分、コレステロール
、トリグリセリド等の疎水性成分の定量に特に有用であ
る。微多孔性層に抗原、抗体の少なくとも一方を含有さ
せて、免疫学的方法による抗原又は抗体の定量にも用い
ることができる。

［発明の効果コ 本発明の一体形多層分析要素においては、全血を試料と
しても、血漿・血清試料の場合と同様に。

諸種の被検成分の測定値に溶血による影響（誤差）が極
めて少なく、実質的にない。ざら、に、全血試料のへマ
ドクリット値が約２５％から約６０％の広い範囲にわた
り、血漿・血清試料の場合と同様に、諸種の被検成分の
測定値にヘマトクリット値の相違による影響（誤差）が
極めて少なく、実質的にない。

第３アミン又は／及び第４アンモニウム塩を含む一体形
多層分析要素においては、測定値にヘマトクリット値の
相違による影響（誤差）が実質的にないという効果が顕
著である。

巨工至目 実施例１（第１の発明） 総コレステロール定量用一体形多層分析要素ｉｔロイコ
色素分散液の調製 ■下記鞘成Ａのロイコ色素溶液−を調製した。

、へ　： ２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル）
−ト［４−（ジメチルアミノ）フェニルコーラ−フェネ
チルイミダゾール酢酸塩　　　　　　　　　　５．７ｇ
２−（４−ヒト和キシー３，５−ジメトキシフェニル）
−４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−５−フェ
ネチルイミダゾール塩酸塩　　　　　　　　　　○、ｇ
ｇＮ、Ｎ−ジエチルラウリルアミド　　１０４ｇ■下記
鞘成りのゼラチン水？ａ液を作成した。

Ｂ　： アルカリ処理ゼラチン　　　　　３００ｇ水　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１９００ｇビス［
（ビニルスルホニルメチルカルボニル）−アミノコメタ
ン　　　　　　　　　　３．０　ｇ■乳化液の調製 ゼラチン水溶ｉＦＩ　Ｂをホモジナイザミキサーで約５
７００回転１分で撹拌しながら　ロイコ邑素溶ンαＡを
少量ずつ添加し、約３０分撹拌を続けて分散し、乳化液
を調製した。

！−２発色試薬層の塗布 工程１−１■で調製した乳化液を、ゼラチン下塗りされ
ている厚さ１８０μｍの透明ポリエチレンテレフタレー
ト（ＰＥＴ）シート（支持体）の上に　ｌｌｍ２当たり
＋　５０ｇの割合で塗布し乾燥させて無孔性の発色試薬
層を形成した。

−３ ■第１非ｊｉｋ維Ｎ微多孔性層の積層と試薬組成物の含
浸処理 前記の工程で形成した発色試薬層の表面を約２５℃の水
で一様に湿らせ（約３０ｇ／ｍ２の割合〉、有効孔径５
μｍ、厚さ１４０μｍ、空隙率約８０％のセルロースア
セテートメンブランフィルタ−の光沢面と無孔性試薬層
の表面とを重ね合わせて積層し接着させて乾燥させた。

次にこのメン７ランフイルターの上から、別に調製した
下記のコレステロール分析試薬組成物を、メンブランフ
ィルタ−１ｍ２当り下記の成分被覆量（Ｄｉｓｔｒｉｌ
＋ｕｔｉｏｎ　Ｐａｒａｍｅｔｅｒ）になるようにして
塗布し含浸し乾燥させて第１非繊維質多孔層（微多孔性
の反応層として機能する）とした。

コレステロール分析試薬組成物の成分被覆量メチルセル
ロース　　　　　　　　　　３．０ｇ／Ｉｎ＋２゜二酸
化チタン微粒子（平均粒径０．３μ−）　２４ｇ／１ｍ
”リボプロティンリパーゼ　　　　　２０００ＩＵ／Ｉ
ｎ＋２コレステロールエステラーゼ　　　２５００１Ｕ
／ｌｌ１１２コレステロールオキシダーゼ　　　２５０
０１Ｕ／１ｍ２ペルオキシダーゼ　　　　　　　　２５
００１Ｕ／１ｍ２燐酸二水素カリウム　　　　　　　　
　７．３ｇ／ｌ＋ｎ２フェロシアン化カリウム　　　　
　　７００ｍｇ／　Ｉｎ＋”（ＩＵは酵素国際単位） １−４最上層をなす繊維質微多孔性層（展開層）の含浸
処理 ５０デニール相当のＰＥＴ紡績糸を３６ゲージ編みした
トリコット編物布地（厚さ約２５０μｍ）を下記の組成
の硼酸−四硼酸ｐＨ緩衝剤組成物の水溶液に浸漬し、空
隙に濠を満たした後、取り出して乾燥させて固形成分を
含浸させた。

硼酸−四硼酸ｐＨ緩衝剤組成物の組成 ポリエチレングリコール（平均分子量５万）　２．０ｇ
硼Ｍ２．Ｏｇ 四硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　＋、ｏｇｍ製
水　　　　　　　　　　　　　　　９５．０ｇ１５展開
層と第２非繊維質微多孔性層の積層工程１−４て含浸処
理した　トリコット編物生地を温度８０°Ｃに予熱し、
その表面に温度１３０℃に加熱溶融したホットメルト型
接着剤を、グラビア印刷法によりグラビアローラーから
転写させてドツト状に付着させた。グラビアローラーの
パターンは。

ドツトは直径０．３ｍｍの円形、ドツトの中心間距離は
０．６ｍｍ、　ｉット面積率は約２０％であった。１寸
着したホットメルト型接着剤の量は約３ｇ／ｍ２であっ
た。

接着剤が転写された直後の高温の布地の表面に。

有効孔径３μｍ、厚さ１４０μＬ空隙率約８０％のセル
ロースアセテートメンブランフィルタ−の非光沢面を向
い合わせてラミネートローラーの間を通し９両者をラミ
ネート（接着一体止）した。

１−６一体形多層分析要素の完成 前記の積層物（展開層として機能する１ａ維質微多孔性
層と第２非繊維質微多孔性層）を前記と同じドツト状接
着１去により　工程１３て一体化させた第１′＃繊維質
微多孔性層の表面に接着し、一体止させた。すなわち、
前記の積層物の第２非繊維質微多孔性層であるメンブラ
ンフィルタ−の表面に。

加熱したホットメルト型接着剤を、グラビア印刷法によ
りグラビアローラーから転写させてドツト状に付着させ
た後、直ちに前記第１非繊維Ｎ嶽多孔性層（支持体及び
試薬層の上にある）の表面と向かい合わせ９両者をラミ
ネートローラーの間を通し。

ラミネート（接着一体止）した。

こうして完成した総コレステロール定量用多層分析要素
は、最上層をなす繊維質微多孔性層（展間層としても機
能する）、第２非繊維質微多孔性層、第１非１ａ維質微
多孔性層（微多孔性の反応層として機能する）９発色試
薬層、透明支持体の噸に一体に積層されていた。最上層
をなす繊維質微多孔性Ｎ（展開層）と第２非繊！Ｉ　ｌ
ｊ　ｉｆｉ多孔多孔上層協同して血球濾過層として作用
する。第１非繊碓質微多孔性層はコレステロールの存在
下に第２鉄イオンを生成する微多孔性反応層として作用
する。発色試薬層はコレステロールの存在下に第１非！
ｌｉ　ｉｆ　Ｍ　Ｒ多孔性層で生成した第２鉄イオンに
より色素を形成し。

色素は透明支持体を通して光学的に検出される。

！−７分析スライドの調製 得られた総コレステロール定量用多層分析要素を１５ｓ
＋ｉ＋Ｘ　１５ｍｍの正方形チップに裁断し、特開昭５
８−３２２５０に記載のスライド枠に収めて総コレステ
ロール定量用生化学分析スライドを完成した。

比較例１ 従来技術による総コレステロール定量用多層分析スライ
ド 実施例１の第２繊維質微多孔性層の含浸処理に用いた硼
酸−四硼酸ｐｉ（緩衝剤系の代わりに　Ｔ　ｒｉｓ緩衝
剤系を用いたほかは実施例１と同様にして分析スライド
を作成した。

ＴｒｉｓｐＨＪｉ！衝剤含浸液の組成 ポリエチレングリコール（平均分子量５万）　２．０３
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン　２．０ｇ２
Ｎ−塩化水素酸　　　　　　　　　　　　　１．０　ｇ
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　９５．０　ｇ
性能評価試験 実施例１と比較例１の総コレステロール定量用スライド
を用いた場合の赤血球の溶血状態両スライドの最上層を
なす繊維質微多孔性にそれぞれ２０μＬのへマドクリッ
ト値４０％の全血を点着し、全血が展開された時に透明
支持体側から観察したところ１本発明の一体形多層分析
要素では溶血に起因する着色は認められなかったが、従
来技術による一体形多層分析要素では溶血に起因する着
色が明らかにみられた。

実施例２（第２の発明） 総コレステロール定量用一体形多層分析要素ｉｔロイコ
色素分散液のＩＷ製 ■下記組成へ〇ロイコ色素溶液を調製した。

Ａ： ２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル”
）　−４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−５−
フェネチルイミダゾール酢酸塩　　　　　　　　　　５
．７ｇ２−（４−ヒドロキシ・３．５−ジメトキシフェ
ニル）−４−［４−（ジメチルアミノ）フェニルコー５
−フェネチルイミダゾール塩酸塩　　　　　　　　　　
０．８ｇＮ、Ｎ−ジエチルラウリルアミド　　１０４８
■下記絹成りのゼラチン水溶液を作成した。

Ｂ： アルカリ処理ゼラチン　　　　　３００ｇ水　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１９００ｇビス
［（ビニルスルホニルメチルカルボニル）−アミノコメ
タン　　　　　　　　　　３．０　ｇ■乳化濯の調製 ゼラチン水溶ａＢをホモジナイザミキサーで約５７００
回転／分て撹拌しながら　ロイコ色素溶ｆ＆Ａを少量ず
つ添加し、約３０分撹拌を続けて分散して、乳化液をＸ
ＰＩ製した。

１２発色試薬層の塗布 上記乳化液を、ゼラチン下塗りされている厚さ１８０μ
ｍの透明ポリエチレンテレフタレー）（ＰＥＴ〉シート
（支持体）の上にｌ１１２当たり１５０ｇの割合で塗布
し乾燥させて発色試薬層とした。

３ ■下側繊維質微多孔性層の積層と処理［実施例２−１］
上記発色試薬層の表面を約２５℃の水で一様に湿ら１１
（約３０ｇ／ｍ２の割合）、５０デニール相当のＰＥＴ
紡績糸を３６ケージ編みしたトリコット編物布地（厚さ
約２５０μＩＩ＋）を重ね合わせ乾燥させて、１発色試
薬層に布地を接着一体止させた０次にこのトリコット編
物布地の上から、下記のコレステロール分析試薬組成物
を、メンブランフィルタ−１ｍ１２当り下記の成分被覆
量になるようにして塗布し含浸し乾燥させて（微多孔性
の反応層として機能する）下ｍ＊維維手多孔層した。

■下側非繊維質微多孔層の積層と処理［実施例２−２］
トリコツ）ＩＩ物布地の代わりに有効孔径５．０μｍ。

厚さ１４００ｍ空隙率約８２％のセルロースアセテート
メンブランフィルタ−の光沢面を発色試薬層に向けて発
色試薬層に接着させ９次にメンブランフィルタ−の上か
ら下記のコレステロール分析試薬組成物を、メンブラン
フィルタ−１ｍ２当り下記の成分被覆量になるようにし
て塗布し含浸し乾燥させて下側非繊維質多孔Ｎ（微多孔
性の反応層として機能する）とした。

コレステロール分析試薬組成物の成分被覆量メチルセル
ロース　　　　　　　　　　３．０ｇ／Ｉｎ１２二酸化
チタン二酸化チタン粒径０．３μｍ）　２４ｇ／Ｉｎ＋
２リボプロティンリパーゼ　　　　　２０００１ｔＪ／
１ｍ２コレステロールエステラーゼ　　　２５００１ｕ
／１請２コレステロールオキシダーゼ　　　２５００１
１Ｊ／Ｉｓ２ペルオキシダーゼ　　　　　　　　２５０
０ＩＩＪ／１＋ｎ２燐酸二水素カリウム　　　　　　　
　　７．３ｇ／ＩＩＷ”フェロシアン化カリウム　　　
　　　７００ｍｇ／１ｍ２１４最上層をなす繊維Ｎ微多
孔性層（展間層）の含浸処理 ５０デニール相当のＰＥＴ紡績糸を３６ゲージ編みした
トリコット編物布地（厚さ約２５０μｍ）を、下記組成
のアミン系ｐＨ緩衝剤水溶液に浸漬し、空隙に液を満た
した後、取り出して乾燥させて固形成分を含浸させた。

［実施例２−１　：２−２］アミン系ｐＨ緩衝剤含浸漬
の組成ポリエチレングリコール（平均分子量５万）　２
．ＯｇＴＭ酸　　　　　　　　　　　　　　　　　２．
０８四硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　１．０
ｇ第３アミン含有ポリマ一水溶液本　　　　２５０ｍｇ
精製水　　　　　　　　　　　　　　　９４．７５ｇ木
　ＣＨ２＝ＣＨＣＯＮＨ２とＣＨ２＝ＣＨＣ０（ＣＨ２
）２Ｎ　（ＣＨ３）２とのｌ：１（モル比）コポリマー
の２０％水溶液（粘度４００ｃｐｓ） １５展間層と非繊維質微多孔性層の積層工程１−４で含
浸処理した　トリコット編物生地を温度８０℃に予熱し
、その表面に温度１３０℃に加熱溶融したホットメルト
型接着剤を、グラビア印刷７去によりグラビアローラー
から転写させてドツト状に付着させた。グラビアローラ
ーのパターンは。

ドツトは直径０．３ｍｏ＋の円形、ドツトの中心間距離
はｏ、ｅｍｍ、　）ット面積率は約２０％であった。付
着したホットメルト型接着剤の量は約３ｇ／ｆｆ１２で
あった。

接着剤が転写された直後の高温の布地の表面に。

有効孔径３μｍ、厚さ１４０μｍ、空隙率約８０％のセ
ルロースアセテートメンブランフィルタ−の非光沢面を
向い合わせてラミネートローラーの間を通し１両者をラ
ミネート（接着一体化）した。

１−６一体形多層分析要素の完成 前記の積層物（最上層をなす繊維微多孔性層と非繊維質
微多孔性層）を前記と同じドツト状接着法により下側微
多孔性ＩＷ（繊維質又は非繊維質の）の表面にそれぞれ
し接着し、一体化させた。すなわち前の記積層物のメン
ブランフィルタ−面に。

加熱したホットメルト型接着剤をグラビア印刷法を利用
してグラビアローラーからの転写により。

ドツト状に付着させた後、直ちに下側微多孔性層（ａ＆
ＩＩ質又は非繊維質の微多孔性層よりなり、支持体及び
発色試薬層の上にある）の面と向かい合わせ９両者をラ
ミネートローラーの間を通し、ラミネート（接着一体化
）した。

こうして完成した総コレステロール定量用多層分析要素
は、最上層をなす繊維微多孔性層（展開層としても機能
する）、非′ａ維微多孔性層、下ｌｌ１ｔａ多孔性層９
発色試薬層、透明支持体の噸に一体に積層されていた。

最上層をなす繊維微多孔性層と非繊維質微多孔性層とは
協同して血球濾過層として作用する。下１１微多孔性層
はコレステロールの存在下に第２鉄イオンを生成する微
多孔性反応層として作用する。発色試薬層はコレステロ
ールの存在下に下側微多孔性層で生成した第２鉄イオン
により色素を形成し９色素は透明支持体を通して光学的
に検出される。

１−７分析スライドの調製 得られた総コレステロール定量用多層分析要素を１５ｍ
ｍＸ　１５ｍｍの正方形チップに裁断し、特開昭５８−
３２２５０に記載のスライド枠に収めて総コレステロー
ル定量用生化学分析スライドを完成した。

比較例２ 実施例２−ＩＲひ２−２の最上層をなす繊＆！質微多孔
性層の含浸に用いた第３アミンとｌｉｕ酸系ｐｉ（緩衝
剤を含む含浸液の代わりに下記の含浸液を展開層に含浸
させるほかは実施例２−１及び２−２と同様の手順で総
コレステロ−ル定量用生１ヒ学分析スライドを調製した
。

ｐＨ緩衝剤含浸液の紹戊 ポリエチレングリコール（平均分子量５万）２．０ｇ四
硼酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　２．０ｇ精製
水　　　　　　　　　　　　　　　　９６．０ｇ性能評
価試験ｌ 各分析スライドの全血中総コレステロールによる発色を
下記のようにして評価した。

総コレステロール１４５ａ＋ｇ／ｄＬを含むヒト血漿と
。

同じ総コレステロール含有量でヘマトクリット値が２５
％＝４０％：５５％二６０％のヒト全血試料を用意し。

各２０μしを実施例２−１．２−２．比較例２の各分析
スライドに収められた一体形多層分析要素の最上層であ
るｗｋ維質微多孔性層にそれぞれ点着し、３７℃で３分
及び６分インクヘーション後、中心波長６４０ｎｍの可
視光で透明支持体側から反射測光により９分析要素の発
色光学濃度を測定したところ、第１表に示す結果が得ら
れた。

第１表 第１表から明らかなように、実施例２−１及び２−２で
はヘマトクリッＮｌｌ０％（血漿）から６０％にわたり
。

ヘマトクリット値にかかわらずほぼ同し発色（光学濃度
）が得られたが、比較例２ては、ヘマトクリット値が高
くなるにつれて発色が著しく低下した。

性能評価試験２ 全血中総コレステロール含有量と一体形多層分析要素の
発色濃度のコレステロール濃度依存性を次のようにして
評価した。

全血試料として、総コレステロール濃度検定値６３ｍｇ
／ｄＬから３１０ｍｇ／旧の範囲、ヘマトクリット値２
９％から４４％の範囲にあるヒト全血８検体を用いた。

総コレステロール濃度Ｏの試料としては、ヒトアルアミ
ン７．０ｇ／ｄＬ含有生理食塩水を用いた。全血試料と
生理食塩水の各２０μＬを実施例２の分析スライドの多
層分析要素の最上層をなすｗＡ維質微多孔性層にそれぞ
れ点着し、３７°Ｃで６分間インクヘーションし、中心
波長６４０ｎｍの可視光で透明支持体側から反射測光に
より分析要素の発色光学濃度を測定した。結果を第２表
及び第１図に示す。

巨工至口 第 ２ 表 コＬ２テ０−」＋濃度　　ヘマトクリット１直　：　　
　反射光学濃度１直（ｎｇ／ｒＪＬ）　　　’　　　　
　（％）　　・実施Ｐ２す２−１　・実［す２−２０．
１４３ ０．２３５ １ ９ ０．３７５ ０．５１２ ４５ ６ ０．５８０ ０．８３０ 第２表のデータ及び第１図のグラフから１本発明の多層
分析要素においては、全血試料のへマドクリット（ｊの
広い範囲にわたり発色濃度が検体中の総コレステロール
濃度と良好な相間関係を持つので、広い範囲のＪ＼マド
クリットｉＣの全血試料について、血漿・血清試料の場
合と同様に、・＼マドクリット値に蚊存せずに総コレス
テロール濃度を高い精度で定量できろ二とが明らかであ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図；ま本発明の実施例２−１及び２−２０全血試料
用の総コレステロール定量用一体形多層分析要素におけ
る全血中の総コレステロール含有量とＷ素の発色の反射
光学濃度値がヘマトクリット値に依存しないことを示す
グラフである。 グラフの横軸は全血中の総コレステロール濃度。 縦軸は反射測光による一体形多層分析要素の発色光学濃
度値である。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）支持体の上に呈色試薬組成物を含む少なくとも１
   層の試薬層、非繊維質微多孔性層、最上層をなす繊維質
   微多孔性層がこの順に積層されており、前記２層の微多
   孔性層は隣接し、その界面が部分接着されており、かつ
   少なくとも前記最上層をなす繊維質微多孔性層に水に溶
   解したとき水がｐＨ値６．５〜９．５の範囲の水素イオ
   ン濃度値を示すｐＨ緩衝剤が含有されていることを特徴
   とする一体型多層分析要素。
2. （２）前記試薬層と前記非繊維質微多孔性層との間に、
   繊維質又は非繊維質微多孔性層が隣接する前記非繊維質
   微多孔性層との界面で部分接着により積層されている請
   求項１に記載の一体型多層分析要素。
3. （３）前記試薬層が親水性ポリマーバインダーと呈色試
   薬組成物を含む少なくとも１層の実質的に無孔性の試薬
   層である請求項１又は２に記載の一体型多層分析要素。
4. （４）前記ｐＨ緩衝剤が、重量分率で８０％以上の無機
   化合物を含み、かつ構成陰イオン種のうち少なくとも５
   モル％がＢ＿４Ｏ＿７＾２＾−又は／及び少なくとも２
   ０モル％がＨＰＯ＿４＾２＾−である請求項１ないし３
   いずれかに記載の一体形多層分析要素。
5. （５）支持体の上に呈色試薬組成物を含む少なくとも１
   層の試薬層、非繊維質微多孔性層、最上層をなす繊維質
   微多孔性層がこの順に積層されており、前記２層の微多
   孔性層は隣接し、その界面が部分接着されており、かつ
   少なくとも前記最上層をなす繊維質微多孔性層に第３ア
   ミン又は／及び第４アンモニウム塩、及び水に溶解した
   とき水がｐＨ値６．５〜９．５の範囲の水素イオン濃度
   値を示すｐＨ緩衝剤が含有されていることを特徴とする
   一体型多層分析要素。
6. （６）前記試薬層と前記非繊維質微多孔性層との間に、
   繊維質又は非繊維質微多孔性層が隣接する前記非繊維質
   微多孔性層との界面で部分接着により積層されている請
   求項５に記載の一体型多層分析要素。
7. （７）前記試薬層が親水性ポリマーバインダーと呈色試
   薬組成物を含む少なくとも１層の実質的に無孔性の試薬
   層である請求項５又は６に記載の一体型多層分析要素。
8. （８）前記ｐＨ緩衝剤が、重量分率で８０％以上の無機
   化合物を含み、かつ構成陰イオン種のうち少なくとも５
   モル％がＢ＿４Ｏ＿７＾２＾−又は／及び少なくとも２
   ０モル％がＨＰＯ＿４＾２＾−である請求項５ないし７
   いずれかに記載の一体形多層分析要素。