JPH03195953A - 光学的反応測定法 - Google Patents
光学的反応測定法Info
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- JPH03195953A JPH03195953A JP33607089A JP33607089A JPH03195953A JP H03195953 A JPH03195953 A JP H03195953A JP 33607089 A JP33607089 A JP 33607089A JP 33607089 A JP33607089 A JP 33607089A JP H03195953 A JPH03195953 A JP H03195953A
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- Japan
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- reaction
- optical
- measurement
- optical component
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- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［発明の目的］
（産業上の利用分野）
本発明は、免疫測定や生化学分析等で反応によって最終
的に得られた物を光学的に測定する光学的反応測定法に
関する。
的に得られた物を光学的に測定する光学的反応測定法に
関する。
（従来の技術）
最近ＥＩＡ（エンザイムイムノアッセイ）法によって免
疫測定を行う場合や生化学反応を行う場合、反応を促進
するために分離を目的とした抗体又は酵素を担体である
微粒子上に固定化することが行われている。第４図（ａ
）、（ｂ）はこのような各反応を示すもので、第４図（
ａ）は固定化酵素反応、第４図（ｂ）は免疫測定反応を
示すものである。
疫測定を行う場合や生化学反応を行う場合、反応を促進
するために分離を目的とした抗体又は酵素を担体である
微粒子上に固定化することが行われている。第４図（ａ
）、（ｂ）はこのような各反応を示すもので、第４図（
ａ）は固定化酵素反応、第４図（ｂ）は免疫測定反応を
示すものである。
第４図（ａ）では先ず磁性材料等の微粒子担体１上に酵
素２を固定した後、基質３を反応させることにより酵素
反応で生じた分解産物（プロダクト）４を光学的に測定
して抗原、酵素、基質等の定量を行うようにしたもので
ある。また第４図（ｂ）は微粒子担体１上に抗体５を固
定した後、抗原６を反応させさらに酵素標識抗体７を反
応させ、続いて基質３を反応させることにより生じたプ
ロダクト４を光学的に測定して同様な定量を行うように
したものである。この光学的測定は例えば吸光度測定、
蛍光度測定１発光度測定等によって行うことができる。
素２を固定した後、基質３を反応させることにより酵素
反応で生じた分解産物（プロダクト）４を光学的に測定
して抗原、酵素、基質等の定量を行うようにしたもので
ある。また第４図（ｂ）は微粒子担体１上に抗体５を固
定した後、抗原６を反応させさらに酵素標識抗体７を反
応させ、続いて基質３を反応させることにより生じたプ
ロダクト４を光学的に測定して同様な定量を行うように
したものである。この光学的測定は例えば吸光度測定、
蛍光度測定１発光度測定等によって行うことができる。
ここで各反応は微粒子存在下で進行するが、基質３又は
プロダクト４を光学的に測定する場合、微粒子担体１に
よって光の散乱が生じるという問題がある。従って従来
においてはこの散乱の影響を除（ために、遠心分離、濾
過、磁力吸着等の対策を施して微粒子を除いた状態で測
定が行われていた。これによれば微粒子担体が除かれる
ことにより、光学的に反応を測定する場合清澄な状態で
測定を行うことができる。
プロダクト４を光学的に測定する場合、微粒子担体１に
よって光の散乱が生じるという問題がある。従って従来
においてはこの散乱の影響を除（ために、遠心分離、濾
過、磁力吸着等の対策を施して微粒子を除いた状態で測
定が行われていた。これによれば微粒子担体が除かれる
ことにより、光学的に反応を測定する場合清澄な状態で
測定を行うことができる。
（発明が解決しようとする課題）
ところで従来の光学的反応測定法では、微粒子を除くた
めの手段及び時間を余分に必要とすると共に、連続的な
反応経過を追求することができないので測定効率が低下
するという問題がある。
めの手段及び時間を余分に必要とすると共に、連続的な
反応経過を追求することができないので測定効率が低下
するという問題がある。
例えばエンド法のように反応経過の一点を測定する場合
は可能であるが、レイト法のように連続的な反応経過を
測定する場合には微粒子が残ってないため適用できない
ので用途が制約されることになる。
は可能であるが、レイト法のように連続的な反応経過を
測定する場合には微粒子が残ってないため適用できない
ので用途が制約されることになる。
本発明は以上のような問題に対処してなされたもので、
余分な手段及び時間を不要にすると共に測定用途を拡大
することができる光学的反応測定法を提供することを目
的とするものである。
余分な手段及び時間を不要にすると共に測定用途を拡大
することができる光学的反応測定法を提供することを目
的とするものである。
［発明の構成コ
（課題を解決するための手段）
上記目的を達成するために本発明は、微粒子上又は微粒
子共存下での反応を光学的に追跡する光学的反応測定法
において、反応由来の光学的成分と微粒子散乱由来の光
学的成分を同時に測定し、前者の光学的成分から後者の
光学的成分を差引くことにより微粒子共存下で反応を光
学的に測定することを特徴とするものである。
子共存下での反応を光学的に追跡する光学的反応測定法
において、反応由来の光学的成分と微粒子散乱由来の光
学的成分を同時に測定し、前者の光学的成分から後者の
光学的成分を差引くことにより微粒子共存下で反応を光
学的に測定することを特徴とするものである。
（作 用）
反応由来の光学的成分と微粒子散乱由来の光学的成分を
例えば異なる波長によって同時に測定し、前者の光学的
成分から後者の光学的成分を差引くことにより反応を測
定する。これによって微粒子の影響を除去して反応に関
係する物質由来の光学的変化を追跡することができる。
例えば異なる波長によって同時に測定し、前者の光学的
成分から後者の光学的成分を差引くことにより反応を測
定する。これによって微粒子の影響を除去して反応に関
係する物質由来の光学的変化を追跡することができる。
（実施例）
以下本発明の光学的反応測定法の実施例について説明す
る。
る。
１、材料
先ず酵素としてＰＯＤ （パーオキシダーゼ）を０．１
■／ｍｌ用い、これを０．ＩＭＰＢ （リン酸バッファ
、ＰＨ７，０）で４．５Ｘ１０−５倍に希釈した基準液
Ａを用意する。またこのＡ液を各々０、ＩＭＰＢ （Ｐ
Ｈ７，０）で３倍に希釈したＢ液。
■／ｍｌ用い、これを０．ＩＭＰＢ （リン酸バッファ
、ＰＨ７，０）で４．５Ｘ１０−５倍に希釈した基準液
Ａを用意する。またこのＡ液を各々０、ＩＭＰＢ （Ｐ
Ｈ７，０）で３倍に希釈したＢ液。
１０倍に希釈したＣ液、３０倍に希釈したＤ液。
５５倍に希釈したＥ液、１００倍に希釈したＦ液を用意
する。
する。
次に基質としてＴＮＢＺ（トリニトロペンゼニン）をＨ
２Ｏ２（過酸化水素）で２：１で混合したものを用意し
、また０、ＩＭＰＢ（ＰＨ７，０）で置換した磁性微粒
子（マグネチックパーティクル）を２．２■／ｍｌ用意
する。
２Ｏ２（過酸化水素）で２：１で混合したものを用意し
、また０、ＩＭＰＢ（ＰＨ７，０）で置換した磁性微粒
子（マグネチックパーティクル）を２．２■／ｍｌ用意
する。
さらに分光光度計を用意し前記混合液を３７℃に恒温し
た状態で、６５０ｎｍ及び７５ ［１ｎｍの波長で追跡
するようにする。
た状態で、６５０ｎｍ及び７５ ［１ｎｍの波長で追跡
するようにする。
２、実験例
前記ＰＯＤ液を４５０μｌ用い、５分間インキュベート
した後、基質１３５０μ！＋磁性微粒子４５０ｇの計１
８００μｌを前記ＰＯＤ液に加える。
した後、基質１３５０μ！＋磁性微粒子４５０ｇの計１
８００μｌを前記ＰＯＤ液に加える。
続いてこの混合液を３０℃に保存し攪拌した状態で、５
分間タイムコースに移して異なる２波長例えば６５０ｎ
ｍ及び７５０ｎｍで吸光度を測定する。
分間タイムコースに移して異なる２波長例えば６５０ｎ
ｍ及び７５０ｎｍで吸光度を測定する。
第１図はこのような測定における吸光度の波長依存性を
示しており、波形の異なる波長におけるピーク値とベー
ス値との各吸光度を測定し両者の差を求めることにより
、第２図のように吸光度の時間依存性を求めることがで
きる。例えばピーク値を６５０ｎｍの波長で測定し、ベ
ース値を７５０ｎｍの波長で測定する。第３図は各波長
の差に対応した吸光度とＰＯＤ （酵素）の濃度との関
係を示しており、ＰＯＤの濃度を１／１００程度（前記
Ｆ液に相当し実際にはさらにこれを４．５Ｘ１０−５倍
に希釈した濃度）までとっても測定が可能であることを
示している。
示しており、波形の異なる波長におけるピーク値とベー
ス値との各吸光度を測定し両者の差を求めることにより
、第２図のように吸光度の時間依存性を求めることがで
きる。例えばピーク値を６５０ｎｍの波長で測定し、ベ
ース値を７５０ｎｍの波長で測定する。第３図は各波長
の差に対応した吸光度とＰＯＤ （酵素）の濃度との関
係を示しており、ＰＯＤの濃度を１／１００程度（前記
Ｆ液に相当し実際にはさらにこれを４．５Ｘ１０−５倍
に希釈した濃度）までとっても測定が可能であることを
示している。
このような反応測定法によれば、従来のように微粒子を
除去しなくとも測定が可能なので、微粒子を除くための
手段及び時間が不要となる。またこれと共に微粒子の存
在下で測定ができるので、エンド法に限らずレイト法の
ように連続的な反応経過を測定する場合にも適用するこ
とができるようになる。
除去しなくとも測定が可能なので、微粒子を除くための
手段及び時間が不要となる。またこれと共に微粒子の存
在下で測定ができるので、エンド法に限らずレイト法の
ように連続的な反応経過を測定する場合にも適用するこ
とができるようになる。
このような本発明方法によって、反応を促進できるとい
う微粒子担体を用いた場合の利点を損ねることなく反応
の測定を行うことができるようになり、微粒子共存反応
液の比色測定の効率を向上することができる。
う微粒子担体を用いた場合の利点を損ねることなく反応
の測定を行うことができるようになり、微粒子共存反応
液の比色測定の効率を向上することができる。
微粒子は磁性材料に限らずラテックス、各種ビーズ、ガ
ラスビーズ等の他の材料を用いることができる。
ラスビーズ等の他の材料を用いることができる。
［発明の効果コ
以上述べたように本発明によれば、反応由来の光学的成
分から微粒子散乱由来の光学的成分を差引いて微粒子共
存下で反応を光学的に測定するようにしたので、余分な
手段及び時間を不要にすると共に、連続的な反応経過も
測定できるようになる。
分から微粒子散乱由来の光学的成分を差引いて微粒子共
存下で反応を光学的に測定するようにしたので、余分な
手段及び時間を不要にすると共に、連続的な反応経過も
測定できるようになる。
第１図は本発明の光学的反応測定法の実施例によって得
られた波長と吸光度の関係を示す特性図、第２図は本実
施例によって得られた時間と吸光度の関係を示す特性図
、第３図は本実施例によって得られた酵素濃度と吸光度
の関係を示す特性図、第４図（ａ）、 （ｂ）は固定
化酵素反応及び免疫測定反応における反応経過を示す説
明図である。 １・・・微粒子担体、２・・・酵素、４・・・プロダク
ト、５・・・抗体、 ６・・・抗原、７・・・酵素
標識抗体。 ＬＯＧ（Ａ６５０−Ａ７５０１／ＭＩＮ（０）百口１こ
イヒニ畔濁〔ｇ乙沁３ 埼繕（分］−
られた波長と吸光度の関係を示す特性図、第２図は本実
施例によって得られた時間と吸光度の関係を示す特性図
、第３図は本実施例によって得られた酵素濃度と吸光度
の関係を示す特性図、第４図（ａ）、 （ｂ）は固定
化酵素反応及び免疫測定反応における反応経過を示す説
明図である。 １・・・微粒子担体、２・・・酵素、４・・・プロダク
ト、５・・・抗体、 ６・・・抗原、７・・・酵素
標識抗体。 ＬＯＧ（Ａ６５０−Ａ７５０１／ＭＩＮ（０）百口１こ
イヒニ畔濁〔ｇ乙沁３ 埼繕（分］−
Claims (3)
- （１）微粒子上又は微粒子共存下での反応を光学的に追
跡する光学的反応測定法において、反応由来の光学的成
分と微粒子散乱由来の光学的成分を同時に測定し、前者
の光学的成分から後者の光学的成分を差引くことにより
微粒子共存下で反応を光学的に測定することを特徴とす
る光学的反応測定法。 - （２）光学的測定が吸光度測定、蛍光度測定、発光度測
定のいずれかから成る請求項１記載の光学的反応測定法
。 - （３）反応由来の光学的成分を第１の波長によってピー
ク値を検出し、微粒子散乱由来の光学的成分を第２の波
長によってベース値を検出する請求項１記載の光学的反
応測定法。（４）微粒子がラテックス、磁性微粒子、多
種ビーズ、ガラスビーズのいずれかから成る請求項１記
載の光学的反応測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33607089A JP2938485B2 (ja) | 1989-12-25 | 1989-12-25 | 光学的反応測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33607089A JP2938485B2 (ja) | 1989-12-25 | 1989-12-25 | 光学的反応測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03195953A true JPH03195953A (ja) | 1991-08-27 |
| JP2938485B2 JP2938485B2 (ja) | 1999-08-23 |
Family
ID=18295384
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33607089A Expired - Fee Related JP2938485B2 (ja) | 1989-12-25 | 1989-12-25 | 光学的反応測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2938485B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994029722A1 (en) * | 1993-06-08 | 1994-12-22 | Chronomed, Inc. | Two-phase optical assay method and apparatus |
| WO2008090645A1 (ja) * | 2007-01-23 | 2008-07-31 | Olympus Corporation | 分析方法および分析装置 |
| WO2010041736A1 (ja) * | 2008-10-10 | 2010-04-15 | コニカミノルタホールディングス株式会社 | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 |
| JP2010181323A (ja) * | 2009-02-06 | 2010-08-19 | Konica Minolta Holdings Inc | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 |
-
1989
- 1989-12-25 JP JP33607089A patent/JP2938485B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994029722A1 (en) * | 1993-06-08 | 1994-12-22 | Chronomed, Inc. | Two-phase optical assay method and apparatus |
| WO2008090645A1 (ja) * | 2007-01-23 | 2008-07-31 | Olympus Corporation | 分析方法および分析装置 |
| JP2008180537A (ja) * | 2007-01-23 | 2008-08-07 | Olympus Corp | 分析方法および分析装置 |
| WO2010041736A1 (ja) * | 2008-10-10 | 2010-04-15 | コニカミノルタホールディングス株式会社 | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 |
| JP2010181323A (ja) * | 2009-02-06 | 2010-08-19 | Konica Minolta Holdings Inc | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2938485B2 (ja) | 1999-08-23 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |