JPH03206099A - 抗生物質ｋｓｙ―５およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、新規塩基性ベブチド系抗生物質およびその製
造法に関する。

［従来の技術］ 現在までに、既に各種の抗生物質が創製され、感染症の
治療剤などとして臨床の場で使用されており、ペプチド
系抗生物質も多様な性状をもつ種々の物質が知られてい
る。

［発明が解決しようとする課題］ 細菌によって惹起される疾病は抗生物質投与による治療
法の発達によってかなり克服されている。

しかし、従来の抗生物質を長期あるいは大量に投与する
ことによる起因菌の変化（菌交代現象）および耐性菌の
出現（耐性化現象）等による疾患の増大、あるいは免疫
力低下に起因する日和見菌感染の増加などは現在の感染
症治療医学分野で大きな問題となっている。この問題を
克服するために、常に新しい活性を示す抗生物質が求め
られている。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
の微生物を土壌より分離し、それらが生産する物質を分
離探索したところ、ある種の微生物が新規な抗生物質を
生産すること、この微生物がバチルス属に属する菌種で
あること、この微生物を適宜の培地に培養することによ
って、主としてダラム陽性菌に対して坑菌力を示す物質
を培地中に蓄積させることなどを知り、この物質を単離
し、その物理化学的および生物学的諸性質から、当該物
質が新規な物質であることを確認し、これをＫＳＹ−５
と称するとにした。

本発明は、このような知見に基づいて、なされたもので
あり、本発明は、構成アミノ酸として、モル比でバリン
　４、ロイシン　３、リジン　３、インロイシン　１、
チロシン　１、オルニチン１を有し、後述する物理化学
的性質を有する塩基性ペプチド系抗生物質ＫＳＹ−５お
よびその塩ならびにバチルス属に属し抗生物質ＫＳＹ−
５生産能を有する微生物を培養し、その培養物から抗生
物質ＫＳＹ−５を採取する工程を含むことを特徴とする
抗生物質ＫＳＹ−５およびその塩の製造法を要旨とする
ものである。

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明で使用されるＫＳＹ−５の生産菌としてはバチル
ス属に属し、抗生物質ＫＳＹ−５を生産する能力を有す
るものであれば如何なる微生物でも良い。

ＫＳＹ−５の生産菌の例としては、たとえば本発明者ら
によって福岡県福岡市で採取された土壌より分離したバ
チルス属ｓｐ，ＫＳＹ−５株があげられる。

その菌学的性質を述べると以下の通りである。

Ｉ．菌学的特徴 （１）形態学的特徴 形態学的特徴は肉汁寒天培地及び肉汁液体培地において
３７℃で４８時間培養した細胞についての観察に基づい
た。下表にその結果を示す。

肉汁寒天培地 細胞の形、　　　桿菌状 大きさ　　　　　０．５〜１．０μｍ Ｘｉ．　’ｒ３．　０ｇｍ 多形成　　　　　観察されず 運動性　　　　　有り 鞭毛の着生状態　周毛 胞子の存在　　　有り 胞子の形、　　　球〜楕円形 大きさ　　　　　０．５〜０．７μｍ ×０、５〜１．３μｍ 胞子嚢の膨らみ　有り 肉汁培地 桿菌状 ０．５〜１．０μｍ Ｘ３．　０４０．　Ｏμｍ 観察されず 有り 観察されず 普通栄養寒天上で３７℃、２２時間培養した細胞はダラ
ム染色において僅かに陽性であった。

（２）各培地に置ける生育状態（３７℃、４８時間）肉
汁寒天平板培地、肉汁液体培地、肉汁ゼラチン穿刺培地
およびリトマスミルク培地における生育状態は次の通り
であった。

肉汁寒天平板培地　　　生育は良好、クリーム色のコロ
ニーを形成、コロ ニーはほぼ円形で周辺は 波状、光沢有り、水溶性 色素は認められない 肉汁液体培地　　　　　全体的に濁り、表面発育は見ら
れない 肉汁ゼラチン穿刺培地　生育するが液化しないリトマス
ミルク培地　　リトマスを還元する、７日目ではややペ
ブトン化 （３）生理生化学的性状 通常細菌の同定に使用されている試験項目の結果を以下
に示す。なお、特に示さない限り３７゜Ｃ、４８時間後
の結果を表す。

硝酸塩の還元　　　　　　　　　　　　：陽性メチルレ
ッド反応　　　　　　　　　　：陰性Ｖ　−　Ｐ　（Ｖ
ｏｇｕｅｓ−Ｐｒｏｓｋａｕｅｒ）反応　　　　：陰性
インドール反応　　　　　　　　　　　：陰性硫化水素
の生戊　　　　　　　　　　　：陰性デンプンの分解　
　　　　　　　　　　：陰性脂肪の分解　　　　　　　
　　　　　　：陽性カゼインの分解　　　　　　　　　
　　：陽性クエン酸の利用 コーザー（Ｋｏｓｅｒ）の培地　　　　　　：陰性クリ
ステンセン（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ）の培地：陰性シ
モンズ（Ｓ１ｍｍｏｎｓ）の培地　　　　　：陰性無機
窒素源の利用 硝酸塩（硝酸ナトリウム）　　　　　　：陰性アンモニ
ウム塩（硫酸アンモニウム）：陰性色素の生戊　　　　
　　　　　　　　　：陰性ウレアーゼ　　　　　　　　
　　　　　：陰性オキシダーゼ　　　　　　　　　　　
　：陽性力タラーゼ　　　　　　　　　　：陽性（弓５
０）生育の範囲 ｐＨ５（２８℃）　　　　　：生育しないｐＨ６（２８
℃）　　　　　　　　　：生育ｐＨ８（２８℃）　　　
　　　　　　：生育ｐＨ９（２８℃）　　　　　　　　
　：生育１０℃　　　　　　　　　　　：生育しない１
５°Ｃ　　　　　　　　　　　：生育しない（但し７日
では生育） ２００Ｃ　　　　　　　　　　　　　　　：生育２８゜
Ｃ　　　　　　　　　　　　　　：生育３３℃　　　　
　　　　　　　　　　：生育３７℃　　　　　　　　　
　　　　　：生育４５℃　　　　　　　　　　　：生育
しない５０℃　　　　　　　　　　　：生育しない酸素
に対する反応　　　　　　　：通性嫌気性０−Ｆテスト
（Ｈｕｇｈ−Ｌｅｉｆｓｏｎ法）　　　：発酵糖からの
酸およびガスの生成 Ｌ−アラビノース　　　　　　　　　：疑陽性Ｄ−キシ
ロース　　　　　　　　　　：疑陽性Ｄ−グルコース　
　：陽性、ガスを生産しないＤ−マンノース　　：陽性
、ガスを生産しないＤ−フラクトース　：陽性、ガスを
生産しないＤ−ガラクトース　　　　　　　　　：陰性
麦芽糖　　　　　　：陽性、ガスを生産しないショ糖　
　　　　　　　　　　　　　：陰性乳糖　　　　　　　
　　　　　　　　：陰性トレハロース　　　：陽性、ガ
スを生産しない？−ソルビット　　　　　　　　　　：
疑陽性Ｄ−マンニット　　：陽性、ガスを生産しないイ
ノッシト　　　　　　　　　　　　■陰性グリセリン　
　　　：陽性、ガスを生産しないデンプン　　　　　：
陽性、ガスを生産しない（４）化学分類学的性状 主要メナキノン或分　　　　　　　：ＭＫ−７細胞壁の
ジアミノ酸：メソージアミノビメリン酸Ｉ　Ｉ，ＫＳＹ
−５株の同定 ＫＳＹ−５株は、ダラム染色において新鮮な菌体を用い
てもほとんどアルコールにより脱色され僅かにしか染色
されない。しかしながら内生胞子が存在すること、また
キノン系としてメナキノンを持つことから、むしろダラ
ム染色性の悪いグラム陽性菌てあると考えられる。さら
に周毛を有する桿菌で、好気的に生育すること、カタラ
ーゼ陽性であること、また細胞壁にメソージアミノビメ
リン酸を有することから、ＫＳＹ−５株はバチルス（Ｂ
ａｃｉ　ｌ　Ｉｕｓ）属に属するものと考えられる。

本株の内生胞子は楕円形で胞子嚢の中央側部に存在し、
また内生胞子による胞子嚢の膨らみが観察される。この
ためウィルッ（Ｗ１ｒｔｚ）法で芽胞染色を行ない顕微
鏡で観察すると胞子嚢内の胞子は緑色に、栄養細胞は胞
子の片側にカヌー状に赤く染色されている。この様な胞
子形戊の特徴はバチルス属内においてはバチルス　ラテ
ロスポーラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｉａｔｅｒｏｓｐｏ
ｒｕｓ）の特徴ともされている。

バージェーズ　マニュアル　オブ　システマティク　バ
クテリオロジー　第２巻（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕ
ａｌｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ，　Ｖｏｌｕｍｅ　２）に記載されているバチル
ス　ラテ口スポーラスの生理生化学的性状を上に述べた
様な本菌株の性状と比較すると、比較可能な性状の結果
はほぼ一致した。

したがって以上述べたような形態学的特徴及び生理生化
学的特徴より本菌株はバチルス　ラテ口スポーラス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ　ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）に帰属す
るとするのが妥当である。

ＫＳＹ−５の生産菌の培養に際しては、炭素源としては
、例えはグルコース、シュクロース、マルトース、廃糖
蜜、グリセロール、油脂類（例えば大豆油、オリーブ油
など）、有機酸類（『リえばクエン酸、コハク酸、クル
コン酸など）などが適宜用いられる。窒素源としては、
たとえば大豆粉、綿実粉、コーン　スティーブ　リカー
、乾燥酵母、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、尿素、
硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、リン酸アンモニウムなどの有機窒素化合物や無機窒
素化合物が利用できる。また無機塩としては、たとえば
塩化ナトリウム、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、硫
酸マグネシウム、リン酸１カリウム、リン酸２ナトリウ
ム等の通常細菌の培養に必要な無機塩類が単独もしくは
適宜組合わせて使用される。また硫酸第１鉄、硫酸銅な
どの重金属類、ビタミンＢ１、ビオチンなどのビタミン
類なども必要に応じて添加される。さらにシリコンオイ
ルやポリアルキレングリコールエーテルなどの消泡剤や
界面活性剤を培地に添加してもよい。

その他、菌の生育を助けＫＳＹ−５の生産を促進するよ
うな有機物や無機物を適宜に添加してもよい。

培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法を同様に
行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培
養の場合は静置培養、撹拌培養、振とう培養、通気培養
などいずれを使用してもよいが、とくに通気撹拌培養が
好ましい。又、培養温度はおよそ１０〜４０℃の範囲が
好ましく、培地のｐＨは約５〜９の範囲である。培養時
間はおよそ１８〜１４４時間、好ましくは４８〜９６時
間である。

培養物から目的とする抗生物質ＫＳＹ−５を採取するに
は微生物の生産する代謝物をその微生物の培養物から採
取するのに通常使用される分離手段が適宜利用される。

抗生物質ＫＳＹ−５は水溶性と脂溶性の中間の性質を示
し塩基性物質であるので、この性質を利用して精製され
る。またＫＳＹ−５は主として培養濾液中に含まれてい
るので、まず培養ｉ＆に濾過助剤を加えて濾過あるいは
遠心分離して、固体を除去する。得られた培養濾演を適
宜の溶媒で有効物質を溶離させ、分別採取する手段が有
利に利用される。

担体としてはイオン交換樹脂、吸着性樹脂、シリカゲル
、活性炭、セルロースなどの吸着剤または分子ふるいの
ような、化合物の分子量の差を利用した担体などが用い
られる。溶出溶媒は担体の種類、性質によって異なるが
、たとえば有機溶媒あるいは水溶性有機溶媒の含水溶液
たとえば含水アセトン、含水メタノール、含水ブタノー
ルあるいは酸、アルカリ、無機塩、有機塩などの水溶液
が単独あるいはこれらと水混和性有機溶媒との混合液な
どが有利に用いられる。

また、ＫＳＹ−５は中性ないし弱アルカリ性水溶液中か
ら水と分離し得るアルコール性有機溶媒によって抽出さ
れる。さらに詳しく述べるならば、担体として陽イオン
交換樹脂たとえばアンバーライトＩＲＣ−５０あるいは
ＣＧ−５０　（米国、ローム　アンド　ハース社製）な
どを用いると、濾液中の抗生物質は樹脂に吸着され、酸
あるいは塩を含む水溶液で溶出される。また吸着性樹脂
、たとえばアンバーライトＸＡＤ−ＩＩ　（米国、ロー
ムアンド　ハース社製）、ダイヤイオンＨＰ−１０また
はＨＰ−２０　（三菱化戊工業株式会社製）などを用い
ると濾液中の活性物質は吸着され、有機溶媒と水溶液の
混合波すなわちアセトン、メタノールなどを適宜含有さ
せた水または塩類あるいは酸含有の水溶液もしくは緩衝
液などとの混合液で溶出される。またシリカゲルたとえ
ばキーゼルゲル６０（西独、メルク社製）あるいは分子
ふるい性担体たとえばセファデックスＬＨ−２０　（ス
ウェーデン、ファルマシア社製）などを用いると活性物
質は吸着され、適当な溶媒たとえば酢酸エチル、クロロ
ホルム、アセトン、メタノールあるいはこれらの混合液
によって溶出される。

また、ＫＳＹ−５は中性ないしアルカリ性水溶液（ＰＨ
６〜９）中から水と分離し得る有機溶媒たとえばｎ−ブ
タノール、ｉｓｏ−ブタノール、ｉｓｏ−アミルアルコ
ール、ｎ−アミルアルコールなどによって抽出される。

さらに逆層系分取用高速液体クロマトグラフィーに用い
られる担体としては、たとえばＭＭＣゲル（山村化学研
究所製）、ＴＳＫゲル（東ソー株式会社製）などが挙げ
られ、移動層としてはメタノールあるいはアセトニトリ
ルなどと緩衝液との混合液が用いられる。

ＫＳＹ−”５は弱塩基性物質であるので、酸とともに薬
理学的に許容され得る塩が形戊される。この塩を形戊さ
せる場合の酸としては、たとえば鉱酸として塩酸、硫酸
、リン酸など、有機酸として蟻酸、酢酸、蓚酸などが挙
げられる。塩の形戊は公知の方法によって行われる。

後述の実施例で得られたＫＳＹ−５の塩酸塩の物理化学
的性質はつぎの通りである。

（ａ）無色板状結晶、塩基性ペプチド系坑生物質（ｂ）
融点；１９６〜１９９℃ （ｃ）構戊元素：　Ｃ，　Ｈ，　Ｎ，　０，　　（１（
ｄ）元素分析値（実測値％）： Ｃ５１．５４％、Ｈ８．１１％、 Ｎ　　１１。８９％、Ｃｉ　　５．８６％（ｅ）分子量
：１５００〜２５００　＜ゲル濾過法による） （ｆ）紫外線吸収スペクトル； ？ＩＯ λｍａｔ．　　　（Ｅｌｅ■） ２００ｎｍ　　　（３７０．６７） ２　２　５ｎｍ　　　（ｓｈ．　　） ２７５〜２８０ｎｍ　（１　１．７３）吸収スペクトル
を第１図に示す。

（ｇ）赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム錠で測定）
における特性吸収（ｃｍ−１）：３２８０，３０２０，
２９４５．１６Ｂ５，１５２０，１４６０，１３９０，
’１３６５，１２３０．１１６０ 吸収スペクトルを第２図に示す。

（ｈ）構成アミノ酸： ６Ｎ塩酸中１１０℃、１６時間分解後、アミノ酸分析に
より、モル比として、バリン　４、ロイシン　３、リジ
ン　３、イソロイシン　１、チロシン　１、オルニチン
　１の存在を確認。

（１）溶解性： 水、メタノール、ジメチルスルホキシドに可酢酸エチル
、クロロホルム、エーテル、ベンゼン等に難溶 （ｊ）呈色反応： ニンヒドリン反応、リンモリブデン酸反応陽性 （ｋ）薄層クロマトグラフィー（メルク社製、キーゼル
ゲルＧＦ２５４使用） （７）　　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル： ＴＭＳを内部標準として重メタノール中で５００ＭＨ，
で測定した結果を第３図に示す。

（ｍ）”Ｃ−ＮＭＲスペクトル： 重タノール中で測定したｌ３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを第
４図に示す。

以上の結果と既知化合物の物理化学的性質との結果から
、本抗生物質ＫＳＹ−５は新規化合物であることが確認
された。

次にＫＳＹ−５の生物学的性質について述べる。

ＫＳＹ−５の各種細菌に対する抗菌性は下表に示すとお
りである。

表中の記号ａは栄養寒天培地、ｂは馬鈴薯一庶糖寒天培
地を示す。

ＫＳＹ−５は、以上の理化学的及び生物学的性質からペ
プチド系抗生物質に属する。既知のペプチド系抗生物質
のうち、分子中にチロシンを含有する物質、例えばブレ
ボリン（Ｂｒｅｖｏｌｉｎ、ザ　ジャーナル　オブ　ア
ンティバイオティクス７巻　シリーズＡ　　２５頁　１
９５４年）、マイコサブチリン（Ｍｙｃｏｓｕｂｔ　ｉ
　１　ｉｎ，ザジャーナル　オブ　クリニカルインヴエ
スティゲーション　２８巻　９２４頁　１９４９年）、
サブスポリン（Ｓｕｂｓｐｏｒｉｎ，ザ　ジャーナル　
オブ　アンティバイオティクス　２２巻４６７頁　１９
６９年）、チロシジン（Ｔｙｒｏｃ　ｉ　ｄ　ｉ　ｎ，
ザ　ジャーナル　オブ　アメリカンケミカル　ソサイエ
ティ　７４巻　４０１９頁１９５２年）、抗生物質ＴＡ
−２５９０　（Ａｎ　ｔｉｂｉｏｔｉｃ　　ＴＡ−２５
９０、特公昭４５−１７５９４号公報　１９７０年）、
マクロモマイシン（Ｍａ　ｃ　ｒ　ｏｒｎｏｍｙ　ｃ　
ｉ　ｎ，ザ　ジャーナル　オブ　アンティバイオティク
ス　２１巻４４頁　１９６８年）等があるが、これらの
いずれとも一致せず、新規物質である。

抗生物質ＫＳＹ−５はダラム陽性菌、特にメチシリン耐
性ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）に対して強力な抗菌作用を有
することから、抗菌剤として有用である。

［実施例］ 以下、実施例により本発明を更に説明するが、本発明は
これらの実施例に限定されるものではない。

なお、実施例中の「％」は特記しない限りｒ重量％」を
意味する。

実施例１ グリセリン５，０％、大豆粉２．５％、ビール酵母０．
　　５％、炭酸カルシウム０．２％の組成を有する液体
培地（ＰＨ７．２）７０−にＫＳＹ−５号菌株（受託番
号：微工研菌寄第１１１７５号）を接種、３０℃で４８
時間培養した。この培養液を前記と同じ組成の培地１６
１に接種し、３０Ｉｌ容発酵槽中で３０℃、９０時間、
通気撹拌培養した。通気量は１６１／分、回転数は４５
０ｒｐｍである。

得られた培養液（１６ｉ）に濾過助剤（商品名、ラジオ
ライト７００）を加えて濾過し、濾液と菌体とに分離す
る。次いて濾液は約１１の弱酸性イオン交換樹脂　アン
バーライトＩＲＣ−５０　（ローム　アンド　ハース社
製）のＨ型でのカラムクロマトグラフィーに付した。０
，ＩＮ塩酸アセトン（１　：　１）混液で抗菌活性成分
を溶出し、溶出ｌ＆を濃縮後、シリカゲル　Ｃ−２００
　＜和光純薬工業株式会社製）のカラムクロマトグラフ
ィーに付した。クロロホルムーアセトンーメタノール（
２　：　１　：　２）での溶出分画のうち、活性の強い
分画を集め濃縮し、メタノールで充填したセファデック
スＬＨ−２０　（スウェーデン、ファルマシア社製）で
のクロマトグラフィーに付した。得られた活性分画を合
併、濃縮し、次に蒸留水で充填したセファデックスＬＨ
−２０のカラムクロマトグラフィーに付した。得られた
抗菌活性分画を合わせて濃縮し、エタノールー酢酸エチ
ルーｎヘキサンの混合液から再結晶を行なうと、ＫＳＹ
一５の塩酸塩の無色板状結晶（７６０ｍｇ）が得られた
。

こうして得られた抗生物質ＫＳＹ−５の塩酸塩は既述の
理化学的及び生物学的性質を有していた。

［発明の効果］ 本発明の抗生物質ＫＳＹ−５およびその塩は、抗菌作用
を有し感染症予防、治療剤として有用で？る。

【図面の簡単な説明】

第１図は水溶液中で測定したＫＳＹ−５の塩酸塩の紫外
線吸収スペクトル、第２図は臭化カリウム錠で測定した
ＫＳＹ−５の塩酸塩の赤外線吸収スペクトル、第３図は
重メタノール中５００ＭＨ■で測定した’Ｈ−ＮＭＲス
ペクトル、第４図は重メタノール中で測定した１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトルである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有することを特徴とする新
   規抗生物質ＫＳＹ−５及びその塩。 ＫＳＹ−５塩酸塩として以下の性質を示す。 （ａ）無色板状結晶、塩基性ペプチド系坑生物質（ｂ）
   融点：１９６〜１９９℃ （ｃ）構成元素；Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｃｌ （ｄ）元素分析値（実測値％）： Ｃ５１．５４％、Ｈ８．１１％、 Ｎ１１．８９％、Ｃｌ５．８６％ （ｅ）分子量：１５００〜２５００（ゲル濾過法による
   ） （ｆ）紫外線吸収スペクトル： λ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ＿１＿ｃ＿ｍ） ２００ｎＥ（３７０．６７） ２２５ｎｍ（ｓｈ．） ２７５〜２８０ｎｍ（１１．７３） （ｇ）赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム錠で測定）
   における特性吸収（ｃｍ＾−＾１）：３２８０、３０２
   ０、２９４５、１６３５、１５２０、１４６０、１３９
   ０、１３６５、１２３０、１１６０ （ｈ）構成アミノ酸： ６Ｎ塩酸中１１０℃、１６時間分解後、アミノ酸分析に
   より、モル比としてバリン４、 ロイシン３、リジン３、イソロイシン １、チロシン１、オルニチン１の存在を 確認。 （ｉ）溶解性： 水、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶 酢酸エチル、クロロホルム、エーテル、ベンゼン等に難
   溶 （ｊ）呈色反応： ニンヒドリン反応、リンモリブデン酸反応 陽性 （ｋ）薄層クロマトグラフィー（メルク社製、キーゼル
   ゲルＧＦ２５４使用） 溶媒系 Ｒｆ値 ｎ−プロパノール−ピリジン −酢酸−水 ０．８０ （１５：１０：３：１２） ｎ−ブタノール−メタノール −アンモニア水−水 ０．６１ （１０：４：３：３） ｎ−ブタノール−エタノール −クロロホルム−アンモニア水 ０．５７ （４：５：２：５） ０．５２ ｎ−ブタノール−酢酸−水 （４：１：２）
2. （２）抗生物質ＫＳＹ−５を生産する能力を有するバチ
   ルス属菌を培養し、その培養物から抗生物質ＫＳＹ−５
   を採取する工程を含むことを特徴とする、請求項（１）
   記載の抗生物質ＫＳＹ−５およびその塩の製造法。