JPH03216198A - アンスラサイクリン系物質，その製造法および産生菌 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は医薬殊に抗腫瘍薬として有用な化合物であるア
ンスラサイクリン系物質，発酵法による該物質の製造法
および該物質産生菌に関する。

（発明が解決しようとする課題） 本発明者らは天然に存在する多くの微生物が生産する物
質について研究を行っていた所，ノカルディア属に属し
，アンスラサイクリン系物質を生産する能力を有する微
生物を培地に培養することによって，同培地中に強い抗
腫瘍作用を有する新規アンスラサイクリン系化合物が生
産されており，この物質を単離することにより本発明を
完成した。

従来，微生物が生産する種々のアンスラサイクリン系化
合物には，例えばダウンマイシン，アドリアマイシン．
アクラシノマイシン等が知られており，これらの化合物
は臨床上非常に有効な薬剤でづｈることもよく知られて
いる。しかしこれらの薬剤は投与の過程で必ずと言って
良いほど標的の腫瘍細胞がこれらの薬剤に対して耐性を
獲得する。本発明の新規なアンスラサイクリン系化合物
は後記のごとく，この様なアンスラサイクリン系化合物
に耐性を有する動物腫瘍細胞にも有効であることを発見
した。従って，本発明は優れた抗腫瘍作用を有するアン
スラサイクリン系物質を提供するものであり，また，本
発明は抗腫瘍物質を得るための新規な製造法を提供する
ものであり，更に本発明は上記アンスラサイクリｙ系物
質を産生ずる新菌株を提供するものである。

本発明で提供されるアンスラサイクリン系物質（Ｉ）は
下記平面化学構造式で表わされる。

（式中，　Ｒ＋は水素原子又は水酸基をＩ　Ｒ２は水素
原子又は低級アルキル基を，Ｒ３は水素原子又は低級ア
ルカノイル基を意味する。）本発明の化合物（Ｉ）の構
造上の特徴は，アンスラサイクリン系骨格の７位および
１０位に糖鎖な有しており，殊に１０位の糖鎖がアンス
ラサイクリン系抗生物質には従来見出されなかった４位
にジメチルアミノ基を有する糖鎖である点である。

また，本発明の製造法は，ノカルディア属に属し，上記
アンスラサイクリン系物質を生産する能力を有する微生
物を培地に培養し，培養物中に該物質を生産させ，次い
で該物質を採取することからなるアンスラサイクリン系
物質の製造法である。

さらに，本発明の微生物は，上記アンスラサイクリン系
物質（Ｉ）を産生ずる能力を有するノカルディア属に属
する微生物である。以下，順次本発明の微生物，製造法
および該製造法で得られた本発明の化合物（Ｉ）につい
て詳述する。

本発明の新規な抗腫瘍作用を有する化合物を生産する菌
株はインドネシアで採取された土壌より分離された微生
物で，次のような菌学的性状を有する。

１形態 各種有機及び無機培地で基生菌糸は良く発達，分岐し，
菌糸の幅はほぼ０４μｍであり，培養後期に菌糸どうし
の癒合が見られ，−！た培地によりわずかに菌糸の断裂
が観察される。気菌糸は長い直線状または曲線状で，不
規則に分岐し，比較的短い胞子柄を形成する。培養５〜
７週以降より胞子柄の先端部付近に５〜１０個の胞子連
鎖を形成する。その先端部はゆるいコイル状２ である。一方，気菌糸主軸にも分断による長い胞子連鎖
が認められる事があり，その際菌糸は束状，ループ状を
呈し疑似胞子嚢様の構造が認められる事がある。胞子の
形状は円筒形，大きさは１．８〜１２μｍ×０５〜０．
８μｍで，その表面は平滑である。胞子嚢胞子，菌核，
運動性のエレメント，輸生糸などの特殊な器官は観察さ
れない。

各種寒天培地上の性状 各種寒天培地上の性状は，以下に示すとおりである。特
に記載しないかぎり，２８℃で２１日間培養し，常法に
従って観察したものである。

色調の記載については色の標準（日本色彩研究所）によ
った。

（注）Ｇ；生育程度 Ａ；気菌糸の着生及びその色相 Ｒ；裏面の色相 Ｓ；可溶性色素 生埋的性質 １） 生育温度範囲 至適生育温度 ２０〜４０℃ ２７〜３２℃ ２） ゼラチンの液化 単純ゼラチン（２０゜Ｃ） グルコース・ペブトンゼラチン（２８℃）陰性 陰性 ３） 脱脂牛乳の凝固 脱脂牛乳のペプトン化 陽性 陽性 ４） 硝酸還元作用 陽 性 ５） スターチの加水分解作用 陰 性 ６） メラニン様色素の生成 トリブトン・イーストエキス液体培地 チロシン寒天培地 ペブトン・イースト・鉄寒天培地 陰性 陰性 陰性 （注） 生育温度は各温度（　５，　１０，　１５，　２０，　
２５，２８，　３０，　３７，　４０．　４５．　５０
’Ｃ）で，７−２１日までの観察結果を，ミルクに対す
る作用は３７℃で３−２１日までの観察結果を，それ以
外は，特に指摘のないかぎり２８℃で２週間後の観察結
果を夫々示す。

４ 炭素源の資化性（プリド・・ム・ゴドリーフ寒天培地，
２８゜Ｃ培養） Ｌ−アラビノース　ー　マンノース Ｄ−キンロース　　ー　メリビオース Ｄ−グルコース　　＋　ラクトース Ｄ−フラクトース　　＋　Ｄ−ガラクトースシュクロー
ス　　　＋　マルトース イノシトール　　　＋　サリンン ラムノース　　　　　ー　　トレハロースラフィノース
　　　　ー　グリセリン Ｄ−マンニトール　＋　デキストリン スターチ　　　　　＋　キサンチン ＋ ＋ ＋ （注）＋：生育する　　　十一：生育が疑わしい：生育
しない ５ 菌体成分の化学分析 ＬＥＣＨＶＡＬＩＥＲらの方法（　ＬＥＣＨＶＡＬＩＥ
Ｒ，　ＭＰ．　ｅｔ　ａｌ　；ＰＰ　２７７−２３８　
ｉｎ　ＤＩＥＴＺ，　Ａ．　ｅｔ　ｅｄ．＋　Ａｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｔｅＴａｘｏｎｏｍｙ，　ＳＩＭ　Ｓｐｅ
ｃｉａｌ　ｐｕｂ１ｉｃａｔｉｏｎＡ６＋１９８０）に
従い本菌株の酸加水分解物および細胞壁成分の分析を行
った結果，表４の様に細胞壁タイプｒＶ−Ａであった。

表４ 全菌体還元糖 アラビノース， ガラクトース 主たるメナキノン種 ＭＫ−８ ミコール酸の存在　　陽性 ＧＣ含量　　　　６６％ 上記諸性状を要約すると，　ＹＬ−０１６４１Ｐ株は気
菌糸上に生じた短い胞子柄上に胞子の連鎖を作る。気菌
糸主軸の一部に培養後期に分断による胞子連鎖が認めら
れる。また，気菌糸の一部が束状を呈し，コイル状の構
造を形成する。疑似胞子嚢様の構造も観察される。基生
菌糸にも培養後期に断裂が生じることがある。細胞壁タ
イプはＴＶ−Ａで，主メナキノンはＭＫ−８（Ｈ４，Ｈ
２）である。

以上の性質を有する菌種を各種の文献等により検索する
と，本菌株はいわゆるＳｐｏｒｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｅ
ｓ（胞子連鎖を形成する放線菌属）の範ｌに入る。

これらのうち表４の如き化学分類結果と形態的特性に合
致する既知菌属としては，　Ｎｏｃａｒｄｉａ属が挙げ
られる。従来，　Ｎｏｃａｒｄｉａ属は，培養初期の形
態や気菌糸の着生の有無などによって３型に分けられて
Ｉ＋′た（　Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　
ｄｅｔａｒｍｉｎａｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅ−ｒｉｏ１ｏ
ｇｙ，第８版（１９７４））が，特に■および■型にに
属する菌の多くがＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓに移され全く
新しい観点からの分類基準が求められている。又Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ｓ　ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉ
ｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　　（第２巻，１９８６
年）には９種のＮｏｃａｒｄｉａが記載されているがＹ
Ｌ−０１６４１　Ｐ株はそれらのいずれとも一致しなか
った。

この様な観点から本菌株をＮｏｃａｒｄｉａ属に属する
一新菌種と判断し，ノカルディア　エス・ピー（Ｎｏｃ
ａｒｄｉａ　ｓｐ．）ＹＬ　　Ｏ１６４１Ｐと命名した
。

本菌株は，工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条
寄第２７３７号として寄託されている。

本発明のアノスラサイクリン系物質の製造法を実施する
に当たり，該物質の生産菌株ノカルディア　エス・ピー
ＹＬ−０１６４１Ｐ株を栄養源含有培地に接種して好気
的に発育させることにより本発明のアンスラサイクリン
物質を含む培養物が得られる。栄養物としては放線菌の
栄養源として公知のものが使用できる。たとえば市販さ
れているペプトン，肉エキス，コーン・スチープリカー
，綿実粉，落花生粉，大豆粉，酵母エキス，　　ＮＺ−
アミン，カゼインの氷解物，魚粉，硝酸ソーダー，硝酸
アンモニウム等の窒素源，市販されているグリセリン，
Ｈ＃澱粉フ　グルコース，マルトース，糖密等の炭水化
物あるいは脂肪等の炭素源および食塩，リン酸塩，炭酸
カルシウム，硫酸マグネシウム等の無機塩を使用できる
。これらのもの以外でも，該生産菌が利用し，本発明の
アンスラサイクリン系物質の生産に役立つものであれば
いずれでも使用することができる。

培養法としては，一般の抗生物質の生産方法と同様に行
えばよく，その培養方法は固体培養でも液体培養でもよ
い。液体培養の場合は静置培養，攪拌培養，振盪培養，
通気培養などのいずれを実施してもよいが，特に通気攪
拌培養が好ましい。また，培養温度は生産菌が発育し，
本発明の物質を生産する温度，すなわち１５℃〜４０°
Ｃの範囲で適宜変更できるがおよそ２５°Ｃ〜３２℃の
範囲が好まし《，培地のｐＨは約４〜９の範囲で適宜変
更できるがｐＨ６〜８が好ましい。培養時間は種々条件
によって異なり，ｌｏ時間〜１６８時間であるが，通常
２４時間〜１２０時間程度で培養物中に蓄積される目的
物質が最高力価に達する。

培養物から目的とする化合物を採取するには微生物の生
産する代謝物の培養物から通常用いられる抽出，分離，
精製の手段が適宜利用される。培賽物中の目的物質は培
賽物そのままが，又は遠心分離あるいは培養物に炉過助
剤を加えて戸過して得られた培養液に酢酸エチル，クロ
ロホルム，ベンゼン，トルエン等ノ水ト混和シない有機
溶媒を加えて抽出する。又培養Ｆ液を滴宜の担体に接触
させ，Ｐ液中の目的有効成分を吸着させ，ついで適当な
溶媒で溶出する事により目的物質を抽出することが出来
る。更に詳しく述べるならば，例えばアンバーライ｝　
ＸＡＤ一２，ダイヤイオンＨＰ−２０，ダイヤイオンｓ
ｐ−９００またはダイヤイオンＣＨＰ−２０Ｐのごとき
多孔性吸着樹脂，もしくは例えばダウエクス５０Ｗ，ア
ンバーライトＩＲＣ−５０というようなイオン交換樹脂
に接触させて目的物質を吸着させる。

ついで該吸着樹脂の場合にはメタノール，エタノール，
アセトン，アセトニトリル等の有機溶媒と水の混合溶媒
で，該イオン交換樹脂の場合には塩酸，硫酸等の水溶液
で溶出させることにより目的物質含有画分を得ることが
できる。酢酸エチル，酢酸プチル等の有機溶媒で抽出す
る場合には培養戸液にこれらの溶媒を加え，良く振盪し
，目的物質を抽出後，得られた抽出液を酸性水で再抽出
し，目的物質を水に転溶する。

次いで該酸性水抽出液を中和した後に，該有機溶媒で再
び抽出するという操作を繰り返すことにより，目的物質
のより比率の高い両分を得ることができる。つぎに上記
の各操作法を用いて得られた目的物質含有画分は常用の
吸着処理，例えば活性炭，アルミナ，シリカゲル，セル
ロース等を担体に用いたカラムクロマトグラフィー薄層
クロマトグラフィーや，シリカゲル系ＯＤＳ逆相担体の
カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等のような
常法により，更に純粋に分離することができる。更にこ
れらの方法で得られた目的物質はメタノール，酢酸エチ
ル等の溶媒で結晶化する事により，一層純粋な物質とし
て得ることができる。このように培養物中に生産された
新規アンスラサイクリン系物質は遊離塩基の形で分離す
ることができる。又この遊離塩基は酸，すなわち例えば
塩酸，硫酸，燐酸等の無機酸，又は例えば蟻酸，酢酸，
クエン酸，酒石酸，ｐ一トルエンスルホン酸等の有機酸
と常法により反応させるとそれぞれの酸に対応する塩類
にも変化させうる。

実施例　１． （ａ）　　（ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質ノ製造法）
デキストリン２．０％，コーンスチープリカ−０．５％
，ポリペプトン０．５％，酵母エキス０．５％，肉エキ
ス０．３％，プレインハートインフユージョンブイヨン
０．５２％，炭酸カルシウム０．５％を含む培地（　ｐ
Ｈ　８．０　）を作製し，これを５００ｍ７三角フラス
コに各６０ｍｌずつ分注し，１２０℃で２０分間滅菌し
たものに，　ベネット寒天培地上に良《生育させたノカ
ルディアエス・ピー　ＹＬ−０１６４１ｐ株の菌糸をか
き取って接種し，２７゜Ｃで４８時間振盪培養を行ない
種培養液とする。つぎにポテトスターチ３．０％，小麦
胚芽１．０％，コプラミール１。０％，フェザーミール
０．２％，炭酸カルシウム０．５％を含む培地（ｐ｝１
７．０）を作成し，これを５００＋ｎｔ三角フラスコに
各６０ｍｌずつ分注し，１２０″Ｃで２０分間滅菌した
ものに，上記培養液を３．０％の割合で植菌し，２８℃
で９６時間培養した。このようにして得られた培養液１
ｔにラジオライ｝　＃６００　（昭和化学工業社製）を
加えて撹拌した後にＦ過し，　　６５０ｍ７の培養ＰＨ
を得た。このｒ液をｐＨ７．０とし，酢酸エチルを５０
０ｍ４ずつ２回に分けて撹拌し，抽出した。この抽出液
を１００ｍｌまで滅菌濃縮し，　　１００ｍｔの水を加
え，１規定塩酸で水層をｐＨ　２．５に調整し，よく撹
拌して目的物を溶媒層から水に転溶させた。この酸性抽
出液に５０ｍ４の酢酸エチルを加え，１規定の苛性ソー
ダで水層をｐｉ｛７．５に調整し，よ《撹拌して再抽出
した。この操作を２回繰り返して合計２００ｍＺのＹＬ
−０６１４ＩＰ−Ａ，物質の酢酸エチル抽出液を得た。

この抽出液に芒硝を加えてよく脱水した後に芒硝を沢過
して除去し，Ｐ液を３　ｍｌまで減圧濃縮して粗ＹＬ−
０１６４１Ｐ−Ａ，物質の濃縮溶液を得た。物質の確認
にはシリカゲルプレート（キーゼルゲル６０Ｆ２５４−
２０ｃｍＸ２０ｃｍ，　　メルク社製）を用い，クロロ
ホルム：メタノール（９０：１０）の溶媒で展開する薄
層クロマトグラ７イーで目的のＹＬ−０１６４１Ｐ　Ａ
＋物質（　Ｒｆ　＝　０．３８　＞を確認した。このよ
うにして得られた濃縮溶媒中の粗ＹＬ−０１６４１Ｐ−
Ａ，物質をさらに純粋にするためにシリカゲルプレート
（キーゼルゲル６０　Ｆ２５４，　２０　ｃｍ　ｘ　２
Ｑ　Ｃｍ　，　　メルク社製）の３枚に下から２ｃｍの
所に帯状にチャージし，クロロホルム：メタノール（９
０：１０）で１５ｃｍ展開し，風乾した後にＵＶランプ
と可視光線下でＹＬ−０１６４１ＰＡ１物質の赤橙色帯
（　Ｒｒ　＝　０．３８　）を確認し，この部分をかき
取り，これをクロロホルム：メタノール（９０：１０）
の溶媒を用いて溶出し，その溶出液を減圧濃縮乾固した
後，少量のメタノールを加え加温溶解し，これを冷蔵庫
中に放置すると針状の結晶が析出したので溶媒を取り除
いた後に，デシケーター中減圧下で一夜乾燥し，純粋な
ＹＬ−０１６４１Ｐ一Ａ１物質を２．１５ｆｌｌｇ得た
。

上記抽出，分離，精製されたＹＬ−０１６　４Ｉ　Ｐ−
Ａ１物質の遊離塩基は下記の物理化学的性質を有する。

（１）　　色および形状：赤色の針状結晶。

（２）酸性，中性，塩基性の区別：塩基性。

（３）　　溶解性：メタノール，エタノール，アセトン
，酢酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルムには
溶けるが水には溶けに＜＜，ヘキサンにはほとんど溶け
ない。

（４）紫外部吸収スペクトル：　ＹＬ　０１６４１Ｐ　
Ａ＋物質のメタノール中で測定した紫外部吸収スペクト
ルは第１図に示すごとくである。

（５）　　マススペクトル（ＦＡＢ）　：　７９０　（
　Ｍ＋　１　）（６）分子量：　７８９．８３１ （力　分子式：Ｃ３。Ｈ５１ＮＯｌｌ！（８）元素分析
値：　Ｃ３ｏ　Ｈｓ＋　ＮＯ＋。・ｏ，７Ｈ２０として
Ｃ（％）　　Ｈ（％）　　Ｎ（％） 実測値　５８，３０　　６．５７　　　１．６８計算値
　５８，３８　　　６．５８　　　１．７５（９）　　
’Ｈ　−　ＮＭＲスペクトル：　ＹＬ−０１６４１Ｐ　
Ａ＋物質の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（　５００　ＭＨｚ
，　ＣＤＣＩ３）は第２図に示すごとくである。

ＧＯ）　　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：　ＹＬ−０１６
４１Ｐ−Ａ，物質の３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５　
ＭＨｚ，　ＣＤＣＩ，）は第３図に示すごとくである。

上記の物理化学的性質からＹＬ−０１６４１Ｐ　Ａ＋物
質は下記構造式で示される。

（ｂ）　　塩酸塩の調製法 上記（ａ）で得られた純粋に精製されたＹＬ−０１６４
１Ｐ一Ａ，　２５．６　ｍｇに少量の水を加え，これに
０．５規定の塩酸を注意深く，極く少量ずつ加えながら
良く撹拌しＹＬ−０１６４１Ｐ　Ａ＋物質を溶解した。

この操作はＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質が完全に溶解
するまで続けた。

この様にして得られたＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，塩酸塩
の水溶液は凍結乾燥し，水に易溶なＹＬ−０１６４１Ｐ
　Ａ１の赤色粉末２６．７６１！Ｉｇを得た。この物質
の水に対する溶解性は原料のＹＬ−０　１６４Ｉ　Ｐ−
Ａ，塩基に比較し格段に高い。

実施例　２ 実施例１に示した方法と同様の培養法で培養したＹＬ−
０１６４１Ｐ株の培養液４ｔに硫酸を加えｐＨ　２．０
に調整した後によ《撹拌した。次いでラジオライ｝＃６
００（昭和化学工業社製）を加えて再び撹拌した後にＦ
過した。このＦ液をｐＨ５．０２に調整すると不浴物が
析出して来たのでこれを沢過して２．９８ｔの澄明な培
養ｒ液を得た。このＦ液をターイヤイオンＨＰ−２０（
三菱化成株式会社製）のカラム（６０ｍ４・外径２．３
　ｃｍ，長さ１９ｃｍ）に通過させ目的物であるＹＬ−
０１６４１Ｐ　Ａ＋物質を吸着させた後，カラムを１乙
の蒸留水で良《水洗した。次いで，　０．０１Ｍのリン
酸緩衝液を用いて調製した３０％，　４０％，５０％，
６０％および７０％のアセトン水溶液の各１２０ｍｌず
つを用いてアセトン濃度の低い順に段階的に溶出した。

その結果，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質はアセトン
濃度４０％および５０％の両分に溶出されていた。この
溶出液のＹＬ−０１６４１Ｐ　Ａ＋物質の確認にはシリ
カゲルプレート（キーゼルゲル６０　Ｆ’２５４ｊ　２
０　ａｍＸ２０ｃｍ，　　メルク社製）を用い，クロロ
ホルム：メタノール（９０：１０）の溶媒で展開する薄
層クロマトグラフィーで目的のＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ
，物質（Ｒｆ−０．３８）を確認した。次いで，このよ
うにして得られたＹＬ−０１６４１Ｐ−ＡＩ物質の溶出
画分を減圧下で濃縮してＹＬ−０１６４１Ｐ−ＡＩ物質
（純度３４．１％）の赤色粗粉末を１　０　７．　２■
得た。このＹＬ−０１６４１Ｐ　Ａ＋物質の粗粉末を１
００ｍＺの酢酸エチルに溶解した後，Ｐ過して不溶物を
取り除き，そのｆ液に１００ｍｌの水を加えてから，振
盪しながら水層を塩酸でｐＨ２．０に調整してＹＬ−０
１６４１Ｐ　Ａ＋物質を酸性水に逆転抽出した。次いで
，この水溶液を分液して酢酸エチルを除去した後，新た
に１０Ｏｎ＋７の酢酸エチルを加え，振盪しながら苛性
ソーダーで水層がｐＨ７．０になるように調整し，酢酸
エチル層にＹＬ−０１６４１　Ｐ　Ａ＋物質を転溶せし
めた。次いで，この酢酸エチルの抽出液は分液して水層
を除去し，芒硝を加えてよ《脱水した後，この芒硝をｆ
過して取り除き，減圧濃縮後乾固して粗ＹＬ−０１　６
４ＩＰ−Ａ，物質（純度４１，９％）の赤色粉末を６２
．６９＋１１ｇ得た。このようにして得られた粉末に５
ｍ７の水を加え，ＩＮの塩酸を少量ずつ加えながら粉末
を完全に溶解した後に，苛性ソーダでｐＨを５．０に調
整し，粗ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ１物質の水石液を調製
した。一方，別に外径１．２　ｃｍ×長さ４５ｃｍのク
ロマト管に水で充填した３０ｍｌのダイヤイオンＣＨＰ
−２０Ｐ　（三菱化成株式会社製）のカラムを用意して
おき，これに該粗ＹＬ−０１６４１ＰＡ，物質の水浴液
を通過させ目的物である−ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物
質を吸着させた。次いで，このカラムを５０ｍｌの水で
洗浄した後，全量が６００ｍｔ００〜８０％アセトン水
を用いた濃度勾配溶出法により溶出を行った。溶出液は
フラクションコレクターで１０ｍｌずつに分画した。こ
のように溶出した各フラクションの中で，赤橙色物質が
溶出されている７ラクションは全て，シリカゲルプレー
ト（キーゼルゲル６０　Ｆ２５４，　２０　ｃｍ　ｘ　
２０　ｃｍ，　　メルク社製）ヲ用イ，クロロホルム：
メタノール（９０：１０）の溶媒で展開する薄層クロマ
トグラフィーで目的のＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質（
　Ｒｆ　＝　０．３８　）を確認した。その結果，目的
物であるＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質はフラクション
４６〜５２までの間に溶出されていた。この中で，最も
純粋であったフラクション４８〜５０までを集め，減圧
濃縮した後，過飽和の炭酸水素ナトリウム水浴液を過剰
に加えｐＨを７以上にした後，２５ｍｌの酢酸エチルで
二回抽出した。この抽出液に芒硝を加えてよく脱水した
後，Ｐ過して芒硝を除去し，このｒ液を濃縮乾固し，真
空デシケーター中で一夜乾燥してＹＬ−０１６４１　Ｐ
−Ａ１物質の赤色粉末（純度８６．２％）を２５．３［
１１ｇ得た。

実施例　３． グルコース１．０％，ポテトスターチ２．０％，ポリベ
プトン０．５％，酵母エキス０．５％，炭酸カルシウム
０．４％を含む培地ａ（ｐａ７）を製作し，これを５０
０ｒｎｌの三角フラスコに１００ｍＺずつ分注し，１２
０℃で２０分間滅菌した。このように作製した培地にペ
ネット寒天上に生育させたノルカディア　エス・ヒ−　
ＹＬ−０１６４１Ｐ株の菌糸をかき取って接種し，２７
゜Ｃで９６時間振盪培養を行ない種培養液（１）とする
。つぎに培地Ａ８００ｍｔを作製し，これを５００ｒｎ
ｌ三角フラスコに１００ｍｔずつ分注し，１２０℃で２
０分間滅菌したものに種培養液（１）を２％の割合で植
菌した。これを２７゜Ｃで９６時間振盪培養を行ない種
培養ｉ　（２）とする。本培養は二基の３０ｔ培養槽中
にコブラミール５％，小麦胚芽２．５％，炭酸カルシウ
ム０．１５％，消泡剤ＮＫＬ−５４３０　（日本油脂社
製）　０．０９％を含む生産培地をそれぞれ２０ｔ（ｐ
Ｈ７０）ずつ作製し，予め１２０゜Ｃ，３０分間滅菌し
ておき，これにさきに培養しておいた種培養液（２）を
それぞれ４００ｍｔずつ接種し，毎分３０Ｌの通気量で
，回転数２０Ｏｒｐｍで３日間培養すると，　ＹＬ−０
１６４１　Ｐ−Ａｌ！Ｉ質のバチルス　ズプチリスＡＴ
ＣＣ６６３３株に対する抗菌活性は最大となった。この
ようにして得られた培養液を塩酸でｐＨ　３．５に調整
した後，ラジオライ｝　＃６００　（昭和化学工業社製
）を加えて撹拌した後，Ｐ過した。このＦ液を苛性ソー
ダーでｐＨ７．０に調整し，析出してきた不溶物をｆ過
して除去し，２７ｔの培養液を得た。このようにして得
たＰ液よりＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質を抽出するた
め，１８１の酢酸エチルを加え，振盪しながら苛性ソー
タ゜一で培養Ｐ液層がｐＨ７．０になるように調整した
。

この抽出操作を二回繰り返して行った。ＹＬ−０１６４
１Ｐ−Ａ，物質を含む酢酸エチルの抽出液は培養ｒ液層
を分液して除去し，芒硝を加えてよく脱水した後，この
芒硝をＦ過して取り除き，２ｌまで減圧濃縮した。これ
にＩ乙の水を加えてからよく振盪しながら水層を塩酸で
ｐＨ　２．０に調整してＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ１物質
を酸性水に転溶抽出した。次いで，この水溶液を分液し
て酢酸エチル層を除去した。この操作を二回繰り返して
約２乙のＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質の酸性溶液を得
た。新たに１乙の酢酸エチルを加え，振盪しながら苛性
ソーダーで水層がｐＩ｛７．０になるように調整し，酢
酸エチル層にＹＬ−０１６４１Ｐ　−Ａ１物質を抽出せ
しめた後，分液して水層を除去した。この操作を二回繰
り返して約２６のＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質を含む
酢酸エチルの抽出液を得た。次いで，この酢酸エチルの
抽出液に芒硝を加えてよく脱水した後，芒硝をＦ過して
取り除き，減圧濃縮後乾固して粗ＹＬ−０１６４１Ｐ　
Ａ＋物質の赤色粉末を４３６１１＠得た。この粗ＹＬ−
０１６４１Ｐ　Ａｔ物質の赤色粉末の１５３■を取り，
これに２　ｍｌのメタノールな加えて溶解した。このメ
タノール浴液を０．４ｍｌずつに分け，液体クロマトグ
ラフィーにがげＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質を汁取；
た。液体クロマトグラフィーの条件はＹＭＣ−Ｐａｃｋ
　Ｒ−ＯＤＳ−５　（山村化学研究所社製）の２ｃｍＸ
２５ｃｍカラムに，溶Ｎｉ液として０．０５Ｍリン酸緩
衝液（　ｐＩ｛４．３５　）　：アセトニトリル：テト
ラヒド口フラン（７５　：　１０　：　１５）を毎分９
１＋１７の流．量割合で流して用い，４８０ｎｍのＵＶ
吸収を検出に用いた。その結果，　　ＹＬ−０１６４１
Ｐ−ＡＩ物質は保持時間１５分４８秒に溶出されたので
，この画分を集めた。

この画分は液体クロマトグラフィー（カラム：ＹＭＣ−
ＰａｃｋＡ　３１２　（　Ｓ−５１２０−ＯＤＳ　）　
（山村化学研究所社製）　６ｍｍ　ｘ　１５０ｍｍ，溶
離液：０．０５Ｍリン酸緩衝液（　ｐＨ４．３５　）　
：アセトニトリル：テトラヒド口フラン（７０：　１５
：　１５），　＠出量：毎分当たり１ｍｌ，保持時間＝
５分５１秒）で純粋であることを確認１−だ後，減圧濃
縮して溶出液中の有機溶媒をよく蒸発させて取り除いた
。このように処理した溶出液（約１２０ｍ７）に過剰の
炭酸水素ナトリウム溶液を加えｐＨ　７．０以上に調製
し，１００ｍｌの酢酸エチルを加えて抽出を行った。こ
の抽出操作を二回繰り返して約２００ｍｔのＹＬ−０１
６４１Ｐ−Ａ，物質の酢敢エチル溶液を得た。この溶液
に芒硝を加えてよく脱水した後，この芒硝をＦ過じて取
り除き，減圧濃縮乾固し，更に真空デシケーター中で一
夜乾燥して純粋なＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質の赤色
粉末を８３■得た。この粉末の４０．０１１１ｇを取り
，１＋＋＋７の水を加えた後，赤色粉末が完全に溶解す
るまで０．５％の酒石酸水浴液を少量ずつ滴下しながら
よく撹拌した。

この時ＹＬ−０１６４１Ｐ　Ａ＋物質が完全に溶解した
時点のｐＨは４．５３であった。このように調製して得
られたＹＬ−０１６４　ＩＰ−Ａ，物質の酒石酸水溶液
を凍結乾燥して純粋なＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，物質の
酒石酸塩の結晶性粉末を４２．６１Ｉ１ｇ得た。本酒石
酸塩は水に対する溶解度が原料であるＹＬ−０１６４１
Ｐ−Ａ，物質の遊離塩基に比べて格段に高い。

実施例４．　（ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ２，Ｂ２および
Ｂ，の製造法）［Ａ］　　グルコース１．０％，ポテト
スターチ２．０％，ポリペプトン０５％，酵母エキス０
．５％，炭酸カルシウム０．４％を含む培地Ａ（ｐＨ７
）を作製し，これを５００ｍｌの三角フラスコに１００
ｍＺずつ分注し，１２０゜Ｃで２０分間滅菌した。この
ように作製した培地にベネ，ト寒天上に生育させたノカ
ルディア　エス・ピーＹＬ−０１６４１Ｐ株の菌糸をか
き取って接種し，２７℃で９６時間振盪培養を行い種培
養液（１）とする。

次に培地Ａ８００ｍｌを作製し，これを５００　ｒｎｌ
三角フラスコに１００Ｉｎｔずつ分注し，１２０℃で２
０分間滅菌したものに種培養液（１）を２％の割合で植
菌した。これを２７℃で９６時間振盪培養を行い種培養
液（２）とする。本培養は３０ｔ培養槽中にコプラミー
ル５％，小麦胚芽２．５％，炭酸カルシウム０．１５％
，消泡剤ＮＫＬ−５４３０　（　日本油脂社製）０．０
９％を含む生産培地２１（ｐＨ７．０）を作製し，予メ
ｌ２０’ｃ，　３０分間滅菌しておき，これに先に培養
しておいた種培養液［Ｂ］ （２）　４００　ｒｎｌを接種し，通気量毎分３０ｔ，
回転数２０Ｏ　ｒｐｍで２日間培養し，培養物１９Ｌを
得た。

上記培養物１９ｔを塩酸でｐＨ３．５に調整した後，ラ
ジオライト＃６００　（昭和化学工業社製）を加えて攪
拌した後，ｆ′１過し１５ｔの培養ｆ液を得た。このｆ
液から該目的物質を抽出するため１０７の酢酸エチルを
加え振盪しながら苛性ンーダーで培養ｆ液層がｐＨ７．
０になるように調整し，酢酸エチル層に該目的物質を抽
出せしめ，その抽出操作を二回繰り返して行った。この
該目的物質を含む酢酸エチルの抽出液から培養ｆ液層を
分液して除去し，芒硝を加えてよく脱水した後，芒硝を
沢過して取り除き２ｔまで減圧濃縮した。これに１ｔの
水を加え振盪しながら水層を塩酸でＰＨ２．０に調整し
て該目的物質を酸性水に転溶抽出した。次いでこの水溶
液を分液して酢酸エチル層を除去した。この操作を二回
繰り返して約２ｔの該目的物質の酸性水溶液を得た。

新たに１ｔの酢酸エチルを加え，振盪しなが［Ｃ］ ら苛性ソーダーで水層がｐＨ７．０になるように調整し
，酢酸エチル層に該目的物質を抽出せしめた後，分液し
て水層を除去した。この操作を二回繰り返して約２６の
該目的物質を含む酢酸エチルの抽出液を得た。次いで，
この酢酸エチルの抽出液に芒硝を加えてよく脱水した後
，芒硝を沢過して取り除き減圧濃縮後，乾固して粗目的
物質を含む粗製品３０２１１ｇを得た。

上記粗製品３０２■を５　ｍｌのメタノールに溶解し，
このメタノール溶液０．５ｍｌずつを液体クロマトグラ
フィーにかけ保持時間の相違により３種の目的物質を分
取した。分取液体クロマトグラフィーの条件はＳＴＲ−
ＰＲＥＰ　ＯＤＳＨ（島津テクノリサーチ社製）の２ｃ
ｍＸ２Ｓｃｍカラム，溶離液として０．０２Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ４．２）　：アセトニトリル：テト２ヒドロ
フラン：メタノール（６７：１５：８：１０）を毎分７
　ｍｌの流量割合で流して用い，　　２５４ｎｍのＵＶ
吸収を検出に用いた。

分取画分中の該目的物質の確認にはシリカゲルプレート
（キーゼルゲル６０Ｆ２５４＋　２０ｃｍＸ２０ｃｍ，
メルク社製）を用い，クロロホルム：酢酸エチル：メタ
ノール：アンモニア水（７０：３０：１０：０．１）の
溶媒で展開する薄層クロマトグラフイーな用いた。更に
，各分取画分は分析用カラムを用いた液体クロマトグラ
フィー（条件：分析用カラムＳＴＲ　−ＯＤＳ　−Ｈ　
４．６　ｍｍ　Ｘ２５０ｍｍ（島津テクノリサーチ社製
），溶離液０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ４．２）：ア
セトニトリル：テトラヒドロフラン：メタノール（６５
：１５：１０：１０），溶出量毎分当たり０．８ｍｌ）
で分析を行い該目的物質が純粋であることを確認した。

■　分取液体クロマトグラフィーで保持時間１４分４８
秒に溶出された画分から得られた目的物質：この物質は
，上記薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値が０．１
７，また上記分析用力ラムを用いた液体クロマトグラフ
ィーの保持時間が５分３１秒を示す単一物である。この
画分の溶出液中の有機溶媒を減圧濃縮して取り除いた後
，炭酸水素ナトリウム溶液を加えｐＨを７０以上に調整
後酢酸エチルで抽出し，抽出液に芒硝を加えてよく脱水
した後，芒硝を沢過して取り除き減圧濃縮乾固し，更に
真空デシケーター中で一夜乾燥した。得られた赤色粉末
（８．０［Ｉ１ｇ）は，つぎの物理化学的性質を示す。

（１）色および形状：赤色の針状結晶。

（２）酸性，中性，塩基性の区別：塩基性。

（３）溶解性：メタノール，エタノール，アセトン，酢
酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルムには溶け
るが水には溶けに＜＜，ヘキサンにはほとんど溶けない
。

（４）紫外部吸収スペクトル：　ＹＬ−０１６４１Ｐ−
Ａ２化合物のメタノール中で測定した紫外部吸収スペク
トルは第４図で示すごとくである。

（５）　　マススペクトル（ＦＡＢ）：７４８（Ｍ＋１
）（６）　　分子量：７４７．７９２ （力　分子式：　Ｃ３７Ｈ４１１ＮＯ＋５（８）　　’
Ｈ−ＮＭＲスペクトル：　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ２化
合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣ
Ｉ，）は第５図に示すごとくである。

上記物理化学的性質から，本物質は，下記構造式で示さ
れるＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ２物質である。

■　分取液体クロマトグラフィーで保持時間３１分３０
秒に溶出された画分から得られた目的物質： この物質は薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値が０
．１５，また上記分析用カラムを用いた液体クロマトグ
ラフィーの保持時間が１０分１４秒を示す単一物である
。この画分を上記の？法と同様に抽出，濃縮，乾燥して
得られた暗赤色粉末（６７１′ｒｌｇ）は，つぎの物理
化学的性質を示す。

（１）　　色および形状：暗赤色の針状結晶。

（２）酸性，中性，塩基性の区別：塩基性。

（３）溶解性：メタノール，エタノール，アセトン，酢
酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルムには溶け
るが水には溶けに＜＜，ヘキサンにはほとんど溶けない
。

（４）紫外部吸収スペクトル：　ＹＬ−０１６４１Ｐ　
一Ｂ２化合物のメタノール中で測定した紫外部吸収スペ
クトルは第６図に示すごとくである。

（５）　　マススペクトル（ＦＡＢ）：７３４（Ｍ＋１
）（６）分子量：７３３．７６５ （７）分子式：　Ｃ３６Ｈ，■ＮＯ　，，（８１　　’
Ｈ−ＮＭＲスペクトル：　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｂ２化
合物の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣ
Ｉ，）は第７図に示すごとくである。

上記の物理化学的性質から，本物質は，下記構造式で示
されるＹＬ ０１６４１Ｐ−Ｂ２物質である。

■　分取液体クロマトグラフイーで保持時間４７分４５
秒に溶出された画分から得られた目的物質： この物質は，上記薄層クロマトグラフイーにおけるＲｆ
値が０．２８，また，上記分析用カラムを用いた液体ク
ロマトグラフイーの保持時間が１６分０８秒を示す単一
物である。この画分を上記の方法と同様に抽出，濃縮，
乾燥して得られた暗赤色粉末（６９．８０１ｇ）は，つ
ぎの性質を示す。

（ｌ）色および形状：暗赤色の針状結晶。

（２）酸性，中性，塩基性の区別：塩基性。

（３）溶解性：メタノール，エタノール，アセトン，酢
酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルムには溶け
るが水には溶けに＜＜，ヘキサンにはほとんど溶けない
。

（４）紫外部吸収スペクトル：　ＹＬ−０１６４１Ｐ−
Ｂ，化合物のメタノール中で測定した紫外部吸収スペク
トルは第８図に示すごとくである。

（５）　　マススペクトル（ＦＡＢ）：７７６（Ｍ＋１
）（６）分子量：７７５．８０２ （力　分子式二Ｃ３８　Ｈ４９　Ｎｏ　ｌｅ（８）　　
用一ＮＭＲスペクトルニＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｂ，化合
物の用−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，Ｃ　Ｄ　Ｃ
　１　３）は第９図に示すごとくである。

（９）　　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：　ＹＬ−０１６
４１Ｐ−Ｂ，化合物の１３Ｃ　−　ＮＭ　Ｒスペクトル
（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣＩ３）は第１０図に示すごとく
である。

上記物埋化学的性質から，本物質は，下記構造式で示さ
れるＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｂ，物質である。

［Ｄ］ ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ２　３［ｆｌｇ，ＹＬ−０１６
４１Ｐ−Ｂ２３１Ｉ１ｇ，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｂ，
　３０■を取り，適宜，水を加えた後，粉末が完全に溶
解するまで０．５％の酒石酸水溶液を少量ずつ滴下しな
がら加えた。この時，該化合物が完全に溶解した時点の
ｐＨは，　ｐＨ４．５からｐＨ４．６であった。

このように調整して得られた該化合物の酒石酸水溶液を
凍結乾燥して純粋なＹＬ−０１６４ＬＰ−Ａ２酒石酸塩
３．１７１１１ｇ，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−８２酒石酸
塩３．１７■，ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｂ，酒石酸塩３１
．６８■を得た。本酒石酸塩は水に対する溶解度が原料
である該化合物の遊離塩基に比べて格段に高い。

実施例　５　　（ＹＬ−０１６４１Ｐ　　Ｃ＋物質の製
造）実施例３と同様の方法で種培養液（１１に続き種培
養液（２）を作製する。別に３０６培養槽に同様の種培
地を作製し，滅菌しておき，これに種培養液（２）を４
００ｍｌ接種した後，毎分３０　ｔの通気量で回転数２
００　ｒｐｍで７２時間培養し種培養液（３）とする。

本培養は，実施例３における本培養と同じ培地を２３０
ｔ作成し，１２０°Ｃ，４５分間滅菌しておき，これに
先の種培養液（３）を４ｔ接種した。この後，毎分１５
０Ｌの通気量で回転数７５ｒｐｍで３日間培養するとＹ
Ｌ−０１６４１１−Ｃ，物質のバチルスズブチリスＡＴ
ＣＣ６６３３株に対する抗菌活性は最大となった。

この様にして得られた培養液を塩酸でｐＨ　２．０に調
整した後，ラジオライト＃６００（昭和化学工業社製）
を加えて攪拌した。１時間後に，この培養液を戸過して
固形物を除去し，得られた培養液に１規定の苛性ソーダ
ー溶液を加え，　　ｐＨを７．０に調整した。この際不
溶物が析出してくるので，このＰ液を再度戸過し，不溶
物を除いて澄明な戸液を２０５ｔ得た。この様にして得
られた培養液からＹＬ−１６４１Ｐ　　Ｃ１を抽出する
ため，あらかじめ３０ｃｍＸ１５０ｃｍのガラス塔に用
意しておいた２０ｔのダイアイオンＨＰ−２０　（三菱
化成株式会社製）のカラムＳＶ　＝　２．５の割合で通
過せしめ，　ＹＬ０１６４１Ｐ−Ｃ，物質を吸着させた
。次いでこのカラムを良く水洗した後，３０％アセトン
水４１．６０％アセトン水６０１．６０％アセトン−０
．０５Ｍ緩衝溶液６０ｔを段階的に流し，目的物である
ＹＬ−０１６４１Ｐの溶出を行った。目的物の検出は薄
層クロマトグラフィー（キーゼルゲル６０Ｆ２！，４２
０の×２０の（メルク社製），展開溶媒；クロロホルム
：酢酸エチル：メタノール＝２８％アンモニア水（７０
：３０：１０：０．１），目的物ＹＬ−０１６４１Ｐ　
Ｃ＋ＯＲｆ値：０．３）を用いて行った。その結果，目
的物のＹＬ−　０１６４１　Ｐ−Ｃ，は６０％アセトン
水溶出以降の溶出画分の８０ｔ中に含まれていた。この
溶出液は約３ＯＬまで濃縮し，アセトンを除去した後，
２０ｔの酢酸エチルを加え，振盪しながら苛性ソーダで
水層のｐＨが７．０　　になる様に調整し，酢酸エチル
層に目的物であるＹＬ−０１６４１ｐ−ｃ，を抽出した
。この酢酸エチルによる抽出操作を２回操り返して行っ
た。この様にして得られた酢酸エチル溶液は約３ｔまで
減圧濃縮した後，２ｔの水を加えよく振盪しながら水層
のｐＨが２．０になるまで塩酸を加え，目的物のＹＬ−
０１６４１Ｐ　Ｃ宜　を酸性水に転溶抽出した。この操
作を２回繰り返して４乙の目的物を含む酸性水溶液を得
た。この水溶液に新たに２６の酢酸エチルを加え，振盪
しながら苛性ノーダーでｐＨを７，２に調整し，酢酸エ
チル層に目的物のＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｃを再抽出せし
めた。

この操作を２度繰り返し約４ｔの目的物を含む酢酸エチ
ル抽出液を得た。目的物の検出には上記薄層クロマトグ
ラフィーを各抽出段階において用い認した。この様にし
て抽出した目的物であるＹＬ０１６４１Ｐ−Ｃ，を含む
酢酸エチル溶液は芒硝で脱水し，減圧下４０℃で濃縮し
た後，乾固し，デシケーター中で一夜良く乾燥し，８８
ｇのＹＬ−０１６４１Ｐ　Ｃ＋を含む粗粉末を得た。こ
の粗粉末に５０ｍｌの水を加え，粉末が完全に溶解する
まで塩酸を加え，目的物ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｃ，を含
む水溶液を調製した。この溶液を予め４ｃｒｎ×１１５
ＣｒｒＬのガラス管にダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化
成株式会社製）の１６を詰め，良《水洗し，用意してお
いた力ラムにＳｖ＝ｏ２の割合でチャージし，吸着させ
た。吸着後よく水洗した後，　　３０〜６０％アセトン
水（合計８６）の濃度勾配溶出法で溶出し，溶出液は１
６ｇを１分画としてフラクションコレクターで分画した
。溶出液中の目的物は上記薄層クロマトグラフィーによ
り確認した。その結果，フラクションナンバー３４１〜
３８５の中に目的物が含まれていたので，この両分を集
め減圧下４０゜Ｃで濃縮してアセトンを除去した後，こ
の濃縮液と同量の酢酸エチルを加え，水層をｐＨ７．２
に調整しながら目的物を抽出した。この操作を２回繰り
返した。この抽出液を芒硝で脱水し，減圧下４０℃で濃
縮乾固し，真空デシケーター中で一夜乾燥し，目的物Ｙ
Ｌ−０１６４１Ｐ−Ｃ，の粗粉末を３．０　ｇ得た。こ
の粗粉末の１．０　ｇに２ｍｌの水を加え，ｌ規定の塩
酸を少しずつ加えて完全に溶解した。この溶解液の１０
０μｔつづを液体クロマトグラフィーにかげ分取した。

この時の液体クロマトグラフィーの条件は，　ＳＴＲ−
ＰＦ！ＥＰ　ＯＤＳ−Ｈ　（島津テクノリサーチ社製）
の２α×２５カラムを用い，溶離液は０．０２ＭＩＪン
酸緩衝液（ｐＨ４．２）　：アセトニトリル：メタノー
ル（７５：１５：１０）を毎分８ｍｌの割合で溶出し，
　　２５４ｎｍのＵＶ検出を用いた。この様にして保持
時間２１分６秒に溶出されてきた目的物ＹＬ−０１６４
１Ｐ　Ｃ＋　ノ画分を集め，減圧下４０’Ｃで濃縮し，
有機溶媒を除去した後，この濃縮液と同量の酢酸エチル
を加え，水層のｐＨが７．５以上になる様に炭酸水素ナ
トリウム溶液を加えて良く振盪し，目的化合物ＹＬ−　
０１６４１Ｐ−Ｃ，物質を酢酸エチル層に抽出せしめた
。この抽出操作は２回繰り返した。

この抽出液を芒硝で脱水し，減圧下４０’Ｃで濃縮乾固
し，一夜真空デシケーター中で乾燥して目的物ＹＬ−０
１６４１Ｐ−Ｃ，の粗粉末を７８■を得ｔムこの粉末は
目的物以外の成分を少量含んでいたので更に純度を高め
るため，Ｉｇの水を加えて上記と同様の方法を用いて塩
酸塩の水溶液とした。この水溶液を５０ｔずつ液体クロ
マトグラフィーにかげ目的物ＹＬ−０１６４１Ｐ　Ｃ＋
のピークを分取した。その時の条件はＳＴ−ＰＲＥＰ　
ＯＤＳ−Ｈ　　（島津テクノリサーチ社製）の２ｃｒｒ
Ｌ×２５ｃｍカラムを用い，溶離液として００２Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ４．２）：アセトニトリル：メタノール
（５５：１５：３０）を毎分７ｍｌの割合で溶出し＋　
　２５４ｎｍのＵＶ検出を用いた。この条件で保持時間
４７分３４秒に溶出されてきた目的化合物ＹＬ−０１６
４１　Ｐ−Ｃ＋の純粋な両分を集めた。分取画分中の該
目的物の確認には上記薄層クロマトグラフィー及び分析
用カラムを用いた液体クロマトグラフイーな用いた。分
析に用いた液体クロマトグラフィーの条件は，分析用Ｓ
ＴＲ−ＯＤＳ　−Ｈ　４．６ｒ＋ｖｎ　Ｘ２５０ｍｍ　
　（島津テクノリサーチ社製）カラムを用い，溶離とし
て００２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ４．２）：アセトニトリ
ル：メタノール（５５：１５：３０）を毎分０．８　ｍ
ｌの割合で溶出し，　２５４ｎｍのＵＶ検出を用いた。

この様にして分取した画分は減圧下４０℃で濃縮し，有
機溶媒を除去した後，この濃縮液と同量の酢酸エチルを
加え，水層のｐＨが７５以上になる様に，炭酸水素ナト
リウム溶液を加えて調整し，良《振盪して目的化合物Ｙ
Ｌ　Ｏ１６４１Ｐ　　Ｃ＋　物質を酢酸エチル層に抽出
せしめた。この抽出操作は２回繰り返した。次いでこの
酢酸エチルの抽出液を芒硝で脱水し，減圧下４０゜Ｃで
濃縮乾固し，一夜真空デシケーター中で乾燥して目的化
合物ＹＬ０１６４１　Ｐ−Ｃの純粋な粉末を２７．５１
７ｌｇを得た。

分取液体クロマトグラフィーで保持時間４７分３４秒に
溶出された両分から得られた目的物質：この物質は上記
薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値が０２８，また
上記分析用力ラムを用いた液体クロマトグラフィーの保
持時間が２３分３３秒を示す単一物である。

（１）色および形状：橙黄色結晶性粉末。

（２）酸性，中性，塩基性の区別：塩基性。

（３）溶解性：メタノール，エタノール，アセトン，酢
酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルムには溶け
るが，水には溶けに《＜，ヘキサンにはほとんど溶けな
い。

（４）紫外部吸収スペクトル：　ＹＬ−０１６４１Ｐ−
Ｂ，化合物のメタノール中で測定した紫外部吸収スペク
トルは，第１１図に示すごとくである。

（５）　　マススペクトル（ＦＡＢ）　７７４（Ｍ＋１
）（６）分子式：　Ｃ３９Ｈ５１　ＮＯ＋ｓ　，分子量
：　７７３．８３０（力　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：　
ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｃ，化合物の’Ｈ−ＮＭＲスペク
トル（　５　０　０ＭＨｚ，　ＣＤＣ　１３）　　は第
１２図に示すごとくである。

上記物埋化学的性状から本物質は下記構造式で示される
ＹＬ−０１６４１　Ｐ−Ｃ，物質である。

（発明の効果） 本発明は，新規且つ有用な微生物を提供すると同時に，
本発明の新規アンスラサイクリン抗腫瘍抗生物質は，各
種腫瘍細胞に対し，細胞障害作用を有している。これら
の作用を以下に示す。

（１）腫瘍細胞を用いる試験管内細胞障害作用試験方法
： ］　Ｘ　１　０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整したＬ　Ｌ　
２　１　０　”，Ｐ３８８”の各細胞液１ｍｌに，生埋
食塩水で溶解した各濃度の新規アンスラサイクリン系化
合物酒石酸塩の溶液４μｔを加え，３７℃炭酸ガス培養
器中で３日間培養した後，トリパンプール染色法にまり
生残細胞を計数した。細胞障害活性は，薬剤無添加の細
胞数を対照として各濃度での細胞増殖抑制率を算出し，
グラフ上にプロノ卜して求めた。

使用したｍｅｄｉｕｍ　： ＊　ＲＰＭＩ　−　１６４０＋　１０％新生子牛血清．
＊”　ＲＰＭＩ　−　１６４０＋　　５％牛胎児血清＋
５μＭ２−ヒドロキシエチル　ジスルフィド 結　　　果： （２）　　Ｐ　３　８　８を用いた動物での抗腫瘍活性
試験法： Ｐ３８８腫瘍細胞５　Ｘ　１０５セルをＢＤＦＩ／ＳＬ
Ｃ　　５週令オスマウスに腹腔内接種し，接種翌日より
ＹＬ−０１６４１Ｐ　Ａ＋物質の酒石酸塩を腹腔内投与
で５日間連投した効果は対照群の中間生存日数に対する
ＹＬ−０１６４１　Ｐ−Ａ，物質投与群の中間生存日数
の比より延命率を算出して求めた。

結果： 本発明化合物を実際に投与する場合には，一般的に注射
剤等で非経口的に投与する方法が用いられるが，本発明
の化合物を，医学製剤の分野で用いられる通常の製薬学
的に許容できる個体又は液体状の担体と混合し，散剤，
顆粒剤，錠剤またはシロップ等の剤型に製剤して，経口
的に投与することもできる。

一般的な投与法としては，動物の場合，腹腔内注射，静
脈又は動脈への血管内注射及び局所投与等の注射剤とし
て投与され，その投与量は動物試験の結果及び種々状況
を勘案して総投与量が一定量を越えない範囲で，連続的
又は間欠的に投与することが出来る。しかし，その投与
量は投与方法，患者，又は被処理動物の状況，例えば年
令，体重，性別，感受性，食餌，投与時間，投与方法，
併用する薬剤，患者又はその病気の程度に応じて適宜に
変えて投与し得ることはもちろんである。本発明化合物
の通常の投与量は，抗腫瘍剤として用いる場合，１日１
回当り０．３０］ｇ／／ｋｇ乃至１　５　ｍｇ／ｋｇ　
ノ範囲であることが出来る。一定の条件の下における適
量と投与回数は，上記の指針を基として専門医の適量決
定試験によって決定されなければいけない。

これらの投与方法は，経口投与においても同様に考慮さ
れる。

【図面の簡単な説明】

第１図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，化合物の紫外外
吸収スペクトノレを示す。 第２図は，　　ＹＬ−０１６４１Ｐ−ＡＩ化合物の’Ｈ
−ＮＭＲスペクトルを示す。 第３図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ，化合物の１３Ｃ
−ＮＭＲスペクトルを示す。 第４図は，　　ＹＬ−０１６４１Ｐ−へ化合物の紫外部
吸収スペクトルを示す。 第５図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ａ２化合物のＩＨ−
ＮＭＲスペクトルを示す。 第６図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｂ２化合物の紫外部
吸収スペクトルを示す。 第７図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｂ２化合物の’Ｈ−
ＮＭＲスペクトルを示す。 第８図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ　Ｂ＋化合物の紫外部
吸収スペクトルを示す。 第９図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｂ，化合物の’Ｈ−
ＮＭＲスペクトルを示す。 第１０図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ　Ｂ＋化合物の’３
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。 第１１図は．　　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｃ，化合物の紫
外部吸収スベクトノレを示す。 第１２図は，　ＹＬ−０１６４１Ｐ−Ｃ，化合物の’Ｈ
−ＮＭＲスペクトルを示す。 （ノ ０

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記平面化学構造式で表わされるアンスラサイク
   リン系物質又はその酸付加塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１は水素原子又は水酸基を、Ｒ＾２は水素
   原子又は低級アルキル基を、Ｒ＾３は水素原子又は低級
   アルカノイル基を意味する。）
2. （２）Ｒ＾１が水素原子又は水酸基、Ｒ＾２が水素原子
   又はメチル基、Ｒ＾３が水素原子又はアセチル基である
   請求項（１）に記載のアンスラサイクリン系物質又はそ
   の酸付加塩。
3. （３）Ｒ＾１が水酸基、Ｒ＾２がメチル基及びＲ＾３が
   アセチル基である請求項（２）記載のアンスラサイクリ
   ン系物質またはその酸付加塩。
4. （４）ノカルディア属に属し、請求項（２）記載のアン
   スラサイクリン系物質を生産する能力を有する微生物を
   培地に培養し、培養物中に該アンスラサイクリン系物質
   を生産し、蓄積させ、該培養物から生成蓄積したアンス
   ラサイクリン系物質を採取することを特徴とするアンス
   ラサイクリン系物質の製造法。
5. （５）ノカルディア属に属する菌株が、ノカルディアエ
   ス・ピーＹＬ−０１６４１Ｐ（微工研条寄第２７３７号
   ）である請求項（４）記載の製造法。
6. （６）ノカルディア属に属し、請求項（１）に記載のア
   ンスラサイクリン系物質を産生し得る微生物。
7. （７）ノカルディア属に属する菌株がノカルディアエス
   ・ピーＹＬ−０１６４１Ｐ（微工研条寄第２７３７号）
   である請求項（６）に記載の微生物。