JPH0322400B2 - - Google Patents

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JPH0322400B2
JPH0322400B2 JP55125262A JP12526280A JPH0322400B2 JP H0322400 B2 JPH0322400 B2 JP H0322400B2 JP 55125262 A JP55125262 A JP 55125262A JP 12526280 A JP12526280 A JP 12526280A JP H0322400 B2 JPH0322400 B2 JP H0322400B2
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leu
arg
tos
ser
gln
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Takashi Sato
Hiroshi Yoshino
Yutaka Tsucha
Jusuke Konishi
Masahiko Tsujii
Yoshihiko Hisatake
Atsushi Koiwa
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Eisai Co Ltd
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Publication of JPH0322400B2 publication Critical patent/JPH0322400B2/ja
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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    • C07K14/575—Hormones
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    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規なヘプタコサペプチドに関す
る。更に詳しく述べればセクレチンを工業的に有
利に合成する際に有用な新規な中間体としてのペ
プチドに関する。
消化管ホルモンの一つであるセクレチンは次の
式で示す如く27個のアミノ酸から構成されるペプ
チドで膵外分泌促進作用、ガストリン刺激胃酸分
泌抑制作用、インスリン遊離作用、ペプシン分泌
刺激作用脂肪分解作用など医薬として極めて有用
な作用を有し、膵機能検査剤、十二指腸潰瘍治療
剤などとして用いられている。
Ｈ・His−Ser−Asp−Gly−Thr−Phe−Thr −Ser−Glu−Leu−Ser−Arg−Leu−Arg− Asp−Ser−Ala−Arg−Leu−Gln−Arg− Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2 〔〕 セクレチンは従来は豚の十二指腸などより抽出
して得られている〔例えばH.Penau et al；Bull.
Soc.Chimie Bicel.７，17（1925）参照〕が、抽出
法は工程上の煩雑さ、資源的問題などの欠点があ
り、更にコレシストキニン・パンクレオザイミン
などの分離困難な物質の夾雑は免れないという問
題もある。
そこでセクレチンを合成法により製造しようと
する試みが種々なされている。
合成法としては、M.Bodanszkyら〔J.Am.
Chem.Soc.Vol.90，4711，（1968）〕、E.wｕ¨nsch
ら〔Naturwissenschaften，Vol.59，239
（1972）〕、G.Vａ¨gerら〔Chem.Ber，Vol.107，
215（1974）〕，H.C.Beyermanら〔Helv.Chim.
Acta，Vol.59，1112（1976）〕、B.Hemmasi〔Int.
J.Peptide Protein Rec.Vol.9，63（1977）〕、およ
び矢内原ら〔J.Med.Chem，Vol.20，654（1977）〕
などの報告がなされている。しかしながら、これ
らの既知方法は多量のセクレチンを能率よく製造
することについては、あまり検討されてはおら
ず、セクレチンを工業的に有利に合成する方法と
はいいがたい。すなわち、上記の如くセクレチン
は構造的に27個のアミノ酸を構成成分とするペプ
チドであるので、工業的にセクレチンを高純度
に、高収率に得ようとする場合には、例えば保護
基として何を選択するか、脱離の条件をいかにす
るかなど解決しなければならない困難な問題が多
い。
上記の既知方法も、原料保護アミノ酸の製造の
困難さおよび側鎖官能基の保護基の不完全さなど
に起因する簡単に分離しがたい種々の不純物の生
成があり、そのため精製が極めて困難である。更
に数十工程を要して合成される保護基を有する高
価な保護セクレチンより最終物質であるセクレチ
ンとする工程での収率および得られたものの純度
が必ずしもよくなく、工業的な方法としては適さ
ない。
これらの問題点を解決する一つの方法として特
許出願公開昭52−125165号の方法が提案されてい
る。
この方法は、縮合溶媒の改良による縮合時間の
短縮をおこない、保護されたセクレチンとして、
下記に示す式 Boc−His−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly−
Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−Glu
（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg−Leu−Arg−
Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg−Leu−Gln
−Arg−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−
NH2 〔〕 で表わされるペプチドを合成し、これらの保護基
を除去したのち得られる粗セクレチンを、アルキ
ル化デキストランゲル（LH−20）を用い、溶出
には、0.005N−システイン塩酸塩または0.001N
−塩酸水溶液を用い、保護されたセクレチンより
22％の収率で精製セクレチンを得ている。
しかしながら、この方法も最終物質であるセク
レチンの収率純度の点で必ずしも十分とはいえな
い。すなわち、得られたセクレチンは、前者の場
合（0.005N−システイン塩酸塩を用いた場合）
のセクレチン活性は2600cu／mg、ペプチド含量
65％で、なお５％のシステイン塩酸塩を含有して
いる。また後者（0.001N−塩酸水溶液を用いた
場合）のセクレチン活性は、2600〜2700cu／mg、
ペプチド含量70％であり、これはドライフリーベ
ースすなわちペプチドあたりの活性は前者が
4000cu／mgであるのに対し、後者は3714〜
3857cu／mgであり、これらの値は純粋天然セク
レチンが酢酸塩で4000cu／mg、ドライフリーベ
ースとして5000cu／mg〔Cut，19，355（1978）〕
と比較していずれも全体的に低い。
そこで本発明者等は、更に有利で、活性の高
い、しかも工業的なセクレチンの合成方法および
精製方法について長年鋭意研究を重ねた結果、保
護セクレチンより66％の収率でセクレチン活性
4600cu／mg、アミノ酸分析でペプチド含量87％、
すなわちドライフリーベースとして5.287cu／mg
の高活性、高純度の合成セクレチンの取得方法を
見い出した。
すなわち、本発明において用いられる保護され
たセクレチンは、次の構造を有する新規なヘプタ
コサペプチドである。
Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−
Glu（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu
−Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−
Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu
−Gln−Gly−Leu−Val−NH2 〔〕 上述の構造式で明らかな如く、本発明の特徴は
ヒスチジンのイミダゾール基はBoc、アスパラギ
ン酸およびグルタミン酸の側鎖官能基は、OBut、
セリンおよびスレオニンの側鎖官能基は、But、
アルギニンの側鎖官能基はTosで保護し、結局セ
クレチンのＮ端アミノ基、およびすべての構成ア
ミノ酸の側鎖官能基を保護した点にある。これら
の保護基の選択において特に特徴的な点は、プロ
トネーシヨンの不十分な型でのアルギニン側鎖保
護をトシル基で保護し、保護基を用いないとセラ
ミ化等の望ましくない副反応を生じやすいといわ
れている〔Rrc，Trav.Chim.pays−Bas.93，256
（1974）およびBull.Chem，Soc，Japan，51，
3409（1978）〕ヒスチジンのイミダゾール基を第三
ブチルオキシカルボニル基（Boc）で保護したこ
とである。前者（アルギニン）については、前述
のM.Bodanszky，矢内原およびH.C.Beyerman
らは、ニトロ基を用いており、前記の特開昭52−
125165号の方法では、保護基を用いていない。
従来セクレチンの合成において、本発明の如き
保護基の選択の組み合わせは全くなく、本発明は
このような特定の保護基の組み合わせを選択した
ことにより、保護基を脱離する際、低温で、短時
間で簡単な操作により脱離でき、しかも簡単な精
製法により高活性、高純度セクレチンを得ること
ができるという大きなメリツトを有する。
本発明においては、フツ化水素を用いることに
より、上記の保護されたセクレチン〔〕を一挙
に全保護基を低温、短時間で容易に脱離すること
が可能である。
したがつて、本発明の目的物質であるヘプタコ
サペプチドである保護されたセクレチン〔〕は
極めて価値の高いものである。
本発明においては、上述の方法により保護基を
脱離して、得られた粗セクレチンを精製すること
により高活性、高純度セクレチンを収率よく得る
ことができる。
本発明によれば、上述の如く高活性、高純度セ
クレチンを収率よく製造することが可能である
が、その最も大きな原因とするところは、保護セ
クレチンとして〔〕を選択した点にある。すな
わち、副反応を生じる可能性のある側鎖官能基を
すべて保護し、容易に分離できない不純物の生成
を極力抑えた保護セクレチンを合成した結果、保
護基を脱離した後簡単な精製法により、失活によ
る損失もなく、高純度、高活性合成セクレチンを
高収率で得ることに成功したものである。
本発明におけるセクレチンの精製は、次に述べ
る如く、極めて簡単な方法で精製することができ
工業的にも大変有利な方法である。
すなわち上述した保護セクレチンをフツ化水素
（HF）で一挙に除去し、イオン交換樹脂を用い
て酢酸塩に変えた後、常法によりカルボキシメチ
ルセルロースを用い、濃度の異なる酢酸アンモニ
ウム溶液のグラジエント溶出によるカラムクロマ
トグラフイーにより、高活性、高純度セクレチン
を収率よく得ることができる。この際カラムクロ
マトグラフイーの操作は１回の操作で十分であ
る。
このような精製方法によつて得られたセクレチ
ンは、保護セクレチンより66％の収率でセクレチ
ン活性4600cu／mg、アミノ酸分析でペプチド含
量87％、ドライフリーベースとして約5200cu／
mg程度であり、前述の特開昭52−125165号の方法
と比較して極めて高活性、高純度のセクレチンで
ある。
セクレチンの如く、合成工程数が数十工程にお
よぶもので、かつ微量でその薬理効果が期待され
（１回投与で10〜15cu／人）、しかも非常に高価
な物質の場合、合成の最終工程での純度、活性、
および収率が従来法に比較して大幅に改良された
ことは、工業的に大きな意味をもつものであり、
したがつて、本発明は極めて価値の高いものであ
る。
本発明の保護セクレチンの製造方法としては
種々考えられるが、本発明者等が合成した方法は
次のとおりである。
すなわち、上述のセクレチンの構造式〔〕に
おいて構成アミノ酸に左のＮ端より番号を付した
が、基本的には次の３つのフラグメント、フラグ
メントＡとして１〜10の保護されたペプチド、具
体的には、Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp
（OBut）−Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−
Ser（But）−Glu（OBut）−Leu−OH、フラグメン
トＢとして11〜17の保護されたペプチド、具体的
には、Ｚ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg
（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−OH、フ
ラグメントＣとして18〜27の保護されたペプチ
ド、具体的には、Ｚ−Arg（Tos）−Leu−Gln−
Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−
NH2をそれぞれ合成し、次いで上記のＢ，Ｃを
縮合し、新たに11〜27の保護されたペプチドと
し、これにＡを縮合させて本発明の保護されたセ
クレチン〔〕を合成した。これらの各フラグメ
ント、Ａ，Ｂ，Ｃ、およびＤはいずれも新規なペ
プチドである。
これらの合成は、各構成アミノ酸側鎖を全部保
護しているため望ましくない副反応が少なく、ペ
プチド合成で通常おこなわれている縮合法、精製
法により合成される。
本発明書においては、ペプチド化学の分野で通
常用いられている略記号を用いるが、列記すれば
次のとおりである。
His：ヒスチジン Ser：セリン Asp：アスパラギン酸 Gly：グリシン Thr：スレオニン Phe：フエニルアラニン Glu：グルタミン酸 Leu：ロイシン Arg：アルギニン Ala：アラニン Gln：グルタミン Val：バリン Boc：第三ブチルオキシカルボニル But：第三ブチル OBut：第三ブチルエステル Tos：トシル Ｚ：ベンジルオキシカルボニル DMF：ジメチルホルムアミド ONP：４−ニトロフエニルエステル OSu：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル OBzl：ベンジルエステル 次に本発明を更に詳細に説明するため、以下に
具体的な実施例および参考例を掲げるが、本発明
がけつしてそれのみに限定されることがないこと
はいうまでもない。
実施例 １ Ｚ−Gln−Arg（Tos）−Leu−OHの合成 Ｚ−Gln−OH11.4ｇ（40.7ミリモル）をジメチ
ルホルムアミド100mlにとかし、−５℃に冷却し、
クロル蟻酸エチル3.87mlを加える。撹拌下、Ｎ−
メチルモルホリン4.46mlを加え、15分後Ｈ−Arg
（Tos）−Leu−OH16.3ｇ（37ミリモル）とＮ−メ
チルモルモリン4.06mlを溶解したジメチルホルム
アミド溶液100mlを滴下する。同温度で３時間後、
1M−クエン酸20mlを含む氷水1.8に加え、生成
する沈澱する取する。これをメタノール−酢酸
エチルの混液にとかし、エーテルにて再沈殿す
る。この操作を更に２回繰り返して白色の粉末を
18.7ｇ（収率71.9％）を得る。
融点：127.5〜130℃（分解） TLC：Rf値 0.62 （ブタノール：酢酸：水、４：１：１） 旋光度：〔α〕25 D＝−19.5゜（Ｃ＝２、メタノール
） 元素分析値：C32H46N7O9Sとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 54.53 6.57 13.91 実測値(%) 54.13 6.47 13.65 実施例 ２ Boc−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−OHの
合成 実施例１の方法により得られたＺ−Gln−Arg
（Tos）−Leu−OH16.9ｇ（24ミリモル）および
Boc−Leu−OSu8.7ｇ（26.4ミリモル）をＮ−メ
チルピロリドン235mlに溶解し、Ｎ−メチルモル
ホリン2.64mlを加える。10％Pd−C3ｇを加え、
H2気流中で５時間撹拌する。Ｎ−（２−アミノエ
チル）ピペラジンを加え、更に１時間撹拌後メタ
ノール100mlを加えたのち、10％Pd−Ｃを別す
る。次いで減圧、濃縮してしたＮ−メチルピロリ
ドンを留去したのち、残渣は酢酸エチル100ml、
稀クエン酸水溶液200mlの混液に加え十分撹拌し
た後、酢酸エチル層を分取し、水洗、乾燥、減圧
濃縮する。エーテルを加えて析出せる沈殿を取
し、標題のBoc−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−
OHを15.6ｇ（収率83.2％）を得る。
融点：138〜141℃（分解） TLC：Rf値 0.38 （クロロホルム：メタノール、７：３） 旋光度：〔α〕25Ｄ＝−30.6（Ｃ＝２、メタノー
ル） 元素分析値：C35H59N8O10S・H2Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 52.41 7.67 13.97 実測値(%) 52.49 7.45 13.43 実施例 ３ Ｚ−Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−
Leu−OHの合成 Ｚ−Arg（Tos）−OH8.3ｇ（18ミリモル）をジ
メチルホルムアミド100mlに溶解し、Ｎ−メチル
モルホリン1.98mlを加える。−10℃で冷却撹拌下
クロル蟻酸エチル1.72mlを加え５分後、実施例２
の方法によつて得られたBoc−Leu−Gln−Arg
（Tos）−Leu−OH14.1ｇ（18ミリモル）をメチレ
ンクロライド50ml、トリフルオロ酢酸50mlの混液
処理により得たＨ−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu
−OH・CF3COOH塩14.6ｇ（18ミリモル）、Ｎ−
メチルモルホリン４mlのジメチルホルムアミド溶
液100mlを冷却後滴下する。−10℃で4.5時間撹拌
し、低温室に一夜放置後、Ｎ−（２−アミノエチ
ル）ピペラジン0.5mlを加え、室温で１時間撹拌
後、１％クエン酸1.2の溶液に加え、十分撹拌
し、生成せる沈殿を取し、水洗し、乾燥し、標
題のＺ−Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−
Leu−OH19.4ｇ（94％）を得る。
融点：169〜173℃（分解） TLC：Rf値 0.23 （クロロホルム：メタノール：酢酸、85：
10：５） 旋光度：〔α〕25 D＝−26.0゜（Ｃ＝２、メタノール
） 元素分析値：C51H76N12O13S・H2Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 53.39 6.85 14.65 実惰値(%) 53.56 6.75 14.72 実施例 ４ Ｚ−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−
Leu−Val−NH2の合成 Ｚ−Arg（Tos）−OH37.8ｇ（81.7ミリモル）を
ジメチルホルムアミド300mlに溶解し、Ｎ−メチ
ルモルホリン8.25ｇを加える。冷却し、−５℃で
クロル蟻酸イソブチル10.8ｇを５分間滴下する。
次いで15分撹拌後、HCl・Ｈ−Leu−Leu−Gln−
Gly−Leu−Val−NH2（Ｚ体融点261〜265℃、
〔α〕25 D43.9（Ｃ＝２、酢酸）46ｇを10％Pb−Ｃ存
在下当量HCl、トリフルオロエタノール中で還元
して製造する）39.5ｇ（58.4ミリモル）をジメチ
ルホルムアミド400mlにとかし、Ｎ−メチルモル
ホリン5.9ｇを加えた混液を加える。−５℃で2.5
時間撹拌後、これを３の水に加え、生成せる沈
殿を取し、メタノール洗滌し、更に酢酸に溶解
し、これを水に加え沈殿を得、水洗、乾燥して標
題のＺ−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−
Leu−Val−NH252.5ｇ（収率83％）を得る。
融点：248〜254℃（分解） TLC：Rf値 0.38 （クロロホルム：エタノール：酢酸、80：
15：５） 旋光度：〔α〕25 D＝−35.2゜（Ｃ＝２、酢酸） 元素分析値：C51H80N2O12S・11／２H2Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 55.08 7.47 15.12 実測値(%) 55.13 7.43 14.79 実施例 ５ Ｚ−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−
Gly−Leu−Val−NH2の合成 実施例４によつて得られたＺ−Arg（Tos）−
Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH233.5ｇ
（30.9ミリモル）を酢酸100ml、25％HBr−酢酸
100ml、アニソール3.4ｇの混液に溶解し、室温で
1.5時間撹拌し、反応液をエーテル2.5に加え
る。析出する沈殿をデカント法で得る。これをエ
タノール300mlに溶解し、更にエーテルで再沈殿
させデカントの方法で、脱Ｚ体のHBr塩を得る。
この34.5ｇ（30.9ミリモル）をジメチルホルムア
ミド400mlに溶解し、冷却下Ｎ−メチルモルホリ
ン6.8ｇを加える。これにＺ−Gln−OSu14ｇ（37
ミリモル）を結晶のまま加え−５℃、２時間撹拌
し、更に室温で２日放置する。Ｎ−（２−アミノ
エチル）ピペラジン２ｇを加え30分撹拌し、1N
−HCl2.5に加える。析出した沈殿を取し、
水洗し、更にメタノール400mlに懸濁し、撹拌後
取し、標題化合物Ｚ−Gln−Arg（Tos）−Leu
−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2を31.5ｇ
（収率84.2％）を得る。
融点：265〜269℃（分解） TLC：Rf値 0.35 （クロロホルム：メタノール：４：１） 旋光度：〔α〕26 D＝−39.9゜（Ｃ＝２、酢酸） 元素分析値：C56H88N14O14S・H2Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 54.63 7.31 15.93 実測値(%) 54.43 7.22 15.74 実施例 ６ Boc−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−
Gln−Gly−Leu−Val−NH2の合成 実施例５によつて得られたＺ−Gln−Arg
（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−
NH228ｇ（23ミリモル）をＮ−メチルピロリド
ン400mlに溶解し、10％Pd−Ｃ、３ｇ、Boc−
Leu−OSu8.32ｇ（25.4ミリモル）を加え、H2気
流中撹拌する。８時間後、H2の通気を止め密栓
し一晩室温に放置する。触媒を別し、減圧濃縮
し、約80mlになつたらメタノール100ml、水200ml
を加える。析出する油状物をデカント法で分離
し、油状物に更に水500mlを加え固化、取、水
洗、乾燥し、標題化合物Boc−Leu−Gln−Arg
（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−
NH2を27.2ｇ（収率92.2％）を得る。
融点：255〜256℃（分解） TLC：Rf値 0.48 （クロロホルム：メタノール：酢酸、80：
15：５） 旋光度：〔α〕26 D＝−42.3゜（Ｃ＝２、酢酸） 元素分析値：C59H101N15O15S・2H2Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 54.00 8.00 16.01 実測値(%) 53.69 7.83 15.69 実施例 ７ Ｚ−Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−
Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2の合
成 製法 (1) 実施例６により得られたBoc−Leu−Gln−
Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−
NH227.1ｇにトリフルオロ酢酸を加え１時間反応
させ減圧濃縮し、残渣にエーテルを加えて得られ
る上記物質の脱Boc体のトリフルオロ酢酸28ｇ
（21.7ミリモル）をジメチルホルムアミド350mlに
溶解し、冷却Ｎ−メチルモルホリン2.86mlを加え
る。一方Ｎ−Arg（Tos）−OH14ｇ（30.4ミリモ
ル）をジメチルホルムアミド150mlに溶解し、Ｎ
−メチルモルホリン3.44mlを加えた後、−10℃に
冷却し、クロル蟻酸イソブチル3.84mlをいつきに
加える。10分後上記溶液を混合し、2.5時間、同
温度で撹拌する。次いで室温にもどし、2M−
KHCO3水15mlを加え30分間撹拌したのちこれを
氷水1.5に加え、析出する沈殿を取し、熱メ
タノール300mlに溶解し、不溶物を別する。
液は減圧濃縮し、残渣に酢酸エチルエステルを加
える。析出した沈殿を取し、標題化合物Ｚ−
Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu
−Gln−Gly−Leu−Val−NH227.5ｇ（収率80
％）を得る。
融点：235〜250℃（分解） TLC：Rf値 0.41 （クロロホルム：メタノール：酢酸、80：
15：５） 旋光度：〔α〕28 D＝−31.8゜（Ｃ＝２、酢酸） 元素分析値：C75H117N19O18S2・2H2Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 53.90 7.05 15.47 実測値(%) 53.84 7.29 15.90 製法 (2) 実施例３で得られたＺ−Arg（Tos）−Leu−
Gln−Arg（Tos）−Leu−OH〔融点169〜173℃、
〔α〕25 D＝−26.0（Ｃ＝２、メタノール）〕5.35ｇ
（4.75ミリモル）およびＮ−ハイドロキシサクシ
ンイミド0.55ｇをジメチルホルムアミド100mlに
溶解する。０℃に冷却しジシクロヘキシルカルボ
ジイミド0.98ｇを加え３時間撹拌をおこない、更
に低温室（２〜３℃）で1.5日続ける。これにあ
らかじめ調製したCF3COOH・Ｈ−Leu−Gln−
Gly−Leu−Val−NH2〔融点236〜238℃、〔α〕20 D
＝−18.9゜（Ｃ＝２、DMF）のBoc−Leu−Gln−
Gly−Leu−Val−NH2をCF3COOHで処理する〕
3.05ｇ（4.75ミリモル）をDMF50mlに溶解し、Ｎ
−メチルモルホリン0.52mlを加え、０℃に冷却し
た溶液を加える。低温室で１日、室温で２日間撹
拌する。析出する沈殿を去後、減圧濃縮し、残
渣を２％重炭酸ソーダ水溶液300mlに加え、生成
した沈殿を取し、標題化合物Ｚ−Arg（Tos）−
Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−
Leu−Val−NH27.7ｇを得る。性状は、前述の製
法(1)によつて得られたものと全く一致した。
実施例 ８ Ｈ−Arg（Tos）−Leu−OHの合成 Ｚ−Arg（Tos）−Leu−OBzlの合成 Ｚ−Arg（Tos）−OH46.2ｇ（100ミリモル）を
テトラヒドロフラン500mlに溶かし、Ｎ−メチル
モルホリン11mlを加えて、−５℃にて撹拌下５分
後にクロル蟻酸エチル9.6mlを加える。15分後あ
らかじめ調製したTosOH・Ｈ−LeuOBzl39.4ｇ
（100ミリモル）、Ｎ−メチルモルホリン11mlを溶
かしたジメチルホルムアミドの冷却溶液を加え、
−5゜〜０℃で４時間撹拌する。減圧濃縮し、残渣
を酢酸エチル700mlに溶解する。0.1N−塩酸水、
1N−NaHCO3、水の順序で洗い、乾燥し、減圧
濃縮エーテルを加え、析出する沈殿を取し、標
題のＺ−Arg（Tos）−Leu−OBzl58ｇ（収率87
％）を得る。
融点：142〜143.5℃（分解） TLC：Rf値 0.59 （クロロホルム：メタノール、９：１） 元素分析値：C34H43N5O7S Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 61.34 6.51 10.52 実測値(%) 61.58 6.58 10.45 Ｈ−Arg（Tos）−Leu−OHの合成 ）の方法によつて得られたＺ−Arg（Tos）−
Leu−OBzl55ｇをメタノール800ml、水100ml混
液に懸濁し、10％Pd−C3ｇ存在下H2気流中７時
間撹拌する。次いで触媒を別した後、液を減
圧濃縮し、残渣にエーテルを加え、標題化合物Ｈ
−Arg（Tos）−Leu−OH37.5ｇを得る。
融点：137〜145℃（分解） TLC：Rf値 0.73 （ブタノール：酢酸：水、４：１：５） 旋光度〔α〕25 D＝＋9.4゜（Ｃ＝２、メタノール） 元素分析値：C19H31N5O5S・H2O Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 49.66 7.23 15.24 実測値(%) 50.00 7.04 15.20 実施例 ９ Ｚ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−OHの合
成 Ｚ−Ser（But）−OH23.7ｇ（80.4ミリモル）と
Ｎ−ハイドロキシサクシンイミド10.2ｇを、テト
ラヒドロフラン250mlに溶解し、０℃に冷却し、
ジシクロヘキシルカルボジイミド16.6ｇを加え３
時間撹拌した後、低温室にて一晩撹拌する。析出
した沈殿を去し、減圧濃縮し得られた油状物を
ジメチルホルムアミド100mlに溶解する。この液
を実施例８）の方法で得られたＨ−Arg（Tos）
−Leu−OH35.5ｇ（80.4ミリモル）をジメチルホ
ルムアミド200mlに溶解し、次いでトリエチルア
ミン11.2mlを加えた溶液と混合し、０℃で６時
間、低温室で一晩、室温で５時間撹拌する。不溶
物を別し、減圧濃縮し残渣を酢酸エチルエステ
ル700mlで抽出し、２％クエン酸及び水で洗滌す
る。硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮し、エ
ーテルを加えて固化させる。クロロホルム−メタ
ノール混液に溶解し、減圧濃縮した後、酢酸エチ
ルエステルにより固化させ、標題化合物Ｚ−Ser
（But）−Arg（Tos）−Leu−OH41.9ｇ（収率73％）
を得る。
融点：175〜177.5℃（分解） TLC：Rf値 0.61 （クロロホルム：メタノール、３：１） 旋光度：〔α〕27 D＝−10.9゜（Ｃ＝２、メタノール
） 元素分析値：C34H50N6O8S・H2Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 56.65 7.27 11.66 実測値(%) 56.62 7.09 11.62 実施例 10 Ｚ−Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−
Ala−OHの合成 Ｚ−Arg（Tos）−OH16.2ｇ（35ミリモル）を
ジメチルホルムアミド290mlに溶解し、これにＮ
−メチルモルホリン3.85mlを加え、−５℃に冷却
し、撹拌下クロル蟻酸エチル3.35mlを滴下する。
15分後Ｈ−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−OH
（融点122〜133℃）15.5ｇ（38.5ミリモル）をジ
メチルホルムアミド290mlに懸濁し、Ｎ−メチル
モルホリン4.3mlを加え、冷却した液を混合し、
３時間撹拌する。不溶物を別後減圧濃縮しエー
テルを加え固化させ、ガラス状の標題化合物Ｚ−
Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser−（But）−Ala−
OH26.6ｇ（収率90％）を得る。
TLC：Rf値 0.51 （クロロホルム：メタノール、４：１） 旋光度：〔α〕26 D＝−9.9゜（Ｃ＝２、メタノール） 元素分析値：C39H57N7O12Sとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 55.24 6.78 11.65 実測値(%) 55.08 7.10 11.56 実施例 11 Ｚ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg
（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−OHの
合成 Ｚ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−OH20.3ｇ
（28.2ミリモル）とＮ−ハイドロキシサクシンイ
ミド3.57ｇをジメチルホルムアミド90mlに溶解
し、−５℃に冷却し、撹拌下ジシクロヘキシルカ
ルボジイミド5.8ｇを加え、−５℃で３時間撹拌
後、低温室で反応液を一晩放置する。一方、実施
例10の方法により得られたＺ−Arg（Tos）−Asp
（OBut）−Ser（But）−Ala−OH25ｇを80％トリフ
ルオロエタノール中、10％Pd−ｃ存在下、６時
間H2気流中反応させて得た上記化合物の脱Ｚ体
21ｇ（28ミリモル）をジメチルホルムアミド110
mlに懸濁し、Ｎ−メチルモルホリン3.1mlを加え
撹拌冷却する。
これを上記反応液と混合する。０℃で６時間撹
拌ののち、低温室にて一晩放置後、更に０℃で６
時間撹拌する。析出する沈殿を別し、減圧濃縮
し、残渣を0.05M−クエン酸400mlに加える。析
出した沈殿を取し、水洗する。次いでトリフル
オロエタノール、メタノール、クロロホルムの混
液に溶解し、減圧濃縮した後、酢酸エチルを加
え、析出する沈殿を取し、標題化合物Ｚ−Ser
（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg（Tos）−Asp
（OBut）−Ser（But）−Ala−OH29.1ｇ（収率73
％）を得る。
融点：164℃（分解） TLC：Rf値 0.57 （クロロホルム：メタノール、７：２） 旋光度：〔α〕22 D＝−11.6゜（Ｃ＝２、トリフルオ
ロエタノール） 元素分析値：C65H99N13O18S2として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 55.18 7.05 12.87 実測値(%) 54.96 7.21 12.75 実施例 12 Ｚ−Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−
Ala−Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−
Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2の合
成 Ｚ−Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala
−OH127mg（0.15ミリモル）、およびHCl・Ｈ−
Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu
−Gln−Gly−Leu−Val−NH2231mg（0.15ミリ
モル）を１％Ｎ−メチルモルホリン−ジメチルホ
ルムアミド液1.65mlに溶解し、これに１％Ｎ−ハ
イドロキシベンゾトリアゾール−ジメチルホルム
アミド液2.43mlを加え、食塩−氷で冷却下２％ジ
シクロヘキシルカルボジイミド−ジメチルホルム
アミド液1.63mlを加え、０℃で１時間、次いで低
温度で２日間撹拌する。次にこれを50mlの２％ク
エン酸水に加え、生成した沈殿を取した後、
水、２％NaHCO3水の順に洗滌し、標題化合物
Ｚ−Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−
Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu
−Gln−Gly−Leu−Val−NH2298mgを得る。
融点：222〜226℃（分解） TLC：Rf値 0.60 （クロロホルム：メタノール、４：１） 旋光度：〔α〕25 D＝−20.2（Ｃ＝２、トリフルオ
ロエタノール） 元素分析値：C107H166N26O27S3として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 54.80 7.15 15.53 実測値(%) 54.65 7.14 15.35 実施例 13 Ｚ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg
（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg
（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−
Gln−Gly−Leu−Val−NH2の合成 製法 (1) ジメチルホルムアミド130mlにＮ−ハイドロキ
シサクシンイミド1.15ｇを加え、次いでＺ−Ser
（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg（Tos）−Asp
（OBut）−Ser（But）−Ala−OH10.12ｇ（7.2ミリ
モル）を加え溶解させる。次に、実施例７の方法
で得られたＺ体12.0ｇを80％酢酸中10％Pd−Ｃ存
在下還元し、塩酸塩としたHCl・Ｈ−Arg（Tos）
−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly
−Leu−Val−NH211.0ｇ（7.2ミリモル）を加え
た後、Ｎ−メチルモルホリンのジメチルホルムア
ミド（DMF）溶液（１ミリモル／ml・DMF）
7.2mlを加える。これを−10℃に冷却し、撹拌下、
ジシクロヘキシルカルボジイミド1.62ｇを含有す
るジメチルホルムアミド溶液を加え、３時間反応
させた後、更に低温室（４℃）で2.5日、次いで
室温で１日撹拌する。減圧濃縮し、残渣を２％重
炭酸ソーダ液800mlに加え、析出する沈殿を取
し、稀重炭酸ソーダ液200ml、水200mlで洗滌し、
クロロホルム−メタノール−エーテルで処理し標
題化合物Ｚ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg
（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg
（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln
−Gly−Leu−ValNH213.4ｇ（64.6％）を得る。
融点：236℃（分解） TLC：Rf値 0.65 （クロロホルム：メタノール、３：１） 旋光度：〔α〕27 D＝−10.5゜（Ｃ＝１、トリフルオ
ロエタノール） 元素分析値：C132H208N32O33S4として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 54.67 7.23 15.45 実測値(%) 54.19 7.39 15.30 製法 (2) 実施例12の方法で得られたＺ−Arg（Tos）−
Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg（Tos）−Leu
−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu
−Val−NH2600mg（0.257ミリモル）を80％酢酸
20mlに溶解し、10％Pd−Ｃ触媒存在下H2気流中
撹拌し、脱Ｚ化反応をおこない当量のＮ−
HCl0.257mlを加え、触媒を別した後エーテル
処理し、脱Ｚ体塩酸塩501mg（収率83.5％）を得
る。
上記の方法により得られた塩酸塩460mg（0.205
ミリモル）を実施例９の方法で得られたＺ−Ser
（But）−Arg（Tos）−Leu−OH147mg（10.205ミリ
モル）をジメチルホルムアミド８ml、１％−Ｎ−
メチルモルホリン−ジメチルホルムアミド溶液
2.37mlの混液に溶解させる。次いで２％Ｎ−ハイ
ドロキシベンゾトリアゾール−ジメチルホルムア
ミド溶液1.66mlを加え、冷却撹拌下２％ジシクロ
ヘキシルカルボジイミド−ジメチルホルムアミド
溶液2.32mlを加え、０℃で１時間撹拌下反応さ
せ、更に低温室に２日間放置する。析出する沈殿
を別後、液は減圧濃縮し、残渣２％
NaHCO3水50mlを加え、沈殿を取し、水洗し、
乾燥し、更にクロロホルム−メタノール−エーテ
ルで処理し、標題化合物Ｚ−Ser（But）−Arg
（Tos）−Leu−Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser
（But）−Ala−Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）
−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2317mg
（53.4％）を得る。性状は前述の製法(1)によつて
得られたものと全く一致した。
実施例 14 Ｚ−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly−Thr
（But）−Phe−Thr（But）−Ser（Butｔ）−Glu
（OBut）−Leu−OHの合成 Ｚ−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly−Thr（But）
−Phe−OH18.13ｇ（21.9ミリモル）をジメチル
ホルムアミド120mlに溶解し、０℃にてＮ−ハイ
ドロキシサクシンイミド2.52ｇ、ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド4.51ｇを加える。同温度で３時
間撹拌し、更に低温室に一晩放置後、室温で３時
間撹拌後析出する沈殿を別する。一方Ｚ−Thr
（But）−Ser（But）−Gln（OBut）−Leu−OHをメ
タノール中10％Pd−Ｃ存在下接触還元によりＺ
基を除去して得たＨ−Thr（But）−Ser（But）−
Gln（OBut）−Leu−OH13.5ｇ（21.9ミリモル）を
ジメチルホルムアミド80ml、Ｎ−メチルピロリド
ン20mlの混液に懸濁させ、更にこれにＮ−メチル
モルホリン2.65mlを加え１時間撹拌する。
次にこれと上述の液とを０℃で混合し３時間
撹拌することによつて透明液となつてくる。これ
を低温室で一夜放置後、１／20Ｍ−クエン酸水溶液 に注ぎ、析出する沈殿を取し、エーテル洗滌、
乾燥し、標題化合物Ｚ−Ser（But）−Asp（OBut）
−Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）
−Glu（OBut）−Leu.OH27.0ｇ（収率87％）を得
る。
融点：242℃（分解） TLC：Rf値 0.38 （クロロホルム：メタノール、９：１） 旋光度：〔α〕24 D＝＋7.1゜ （Ｃ＝1.6、クロロホルム：メタノール、
２：１） 元素分析値：C72H115N9O20として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 60.60 8.14 8.84 実測値(%) 60.59 8.39 9.09 実施例 15 Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）
−Glu（OBut）−Leu−OHの合成 実施例14の方法で得られたＺ−Ser（But）−Asp
（OBut）−Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−
Ser（But）−Glu（OBut）−Leu−OH15ｇ（10.5ミ
リモル）を80％トリフロオロエタノール150mlに
溶解し、10％Pd−C2.4ｇ存在下H2気流中で10時
間撹拌する。析出する結晶をクロロホルム200ml
を加え溶解した後、触媒を別し、液は減圧濃
縮しエーテル70mlを加えて析出する結晶を取
し、上記化合物の脱Ｚ体13.4ｇ（収率89.5％）を
得る。得られた脱Ｚ体11.0ｇ（8.51ミリモル）を
Ｎ−メチルピロリドン250mlに溶かし、Ｎ−メチ
ルモルホリン−ジメチルホルムアミド（DMF）
溶液（１ミリモル／ml・DMF）8.51mlを加え、
５分後にBoc−His（Boc）−ONP4.9ｇを加え、40
℃で44時間撹拌する。反応液を酢酸0.515ｇ含有
の冷水700ml、エーテル70mlの混液に加える。析
出する沈殿を取後、水、エーテルで洗滌し、ト
リフルオロエタノール−メタノールにより精製
し、標題化合物Boc−His（Boc）−Ser（But）−
Asp（OBut）−Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）
−Ser（But）−Glu（OBut）−Leu−OH12.1ｇ（収
率87.3％）を得る。
融点：234℃（分解） TLC：Rf値 0.43 （クロロホルム：メタノール、10：１） 旋光度：〔α〕25 D＝−0.78゜ （Ｃ＝２、トリフルオロエタノール） 元素分析値：C80H132N12O23として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 58.95 8.16 10.31 実測値(%) 58.76 8.37 10.18 実施例 16 Ｚ−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly−Thr
（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−Glu
（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−
Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−
Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−
Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2の合成 Ｎ−メチルピロリドン32mlに実施例14の方法に
より得られたＺ−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly−
Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−Glu
（OBut）−Leu−OH509mg（0.36ミリモル）、
HCl・Ｈ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg
（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg
（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln
−Gly−Leu−Vla−NH2（実施例13の方法で得た
Ｚ体を80％酢酸中でPd−Ｃ存在下、H2で脱Ｚ化
してHCl塩とする）1000mg（10.36ミリモル）、Ｎ
−ハイドロキシベンゾトリアゾール58mgを順次加
え、Ｎ−メチルモルホリン（NMM）−ジメチル
ホルムアミド（DMF）溶液（0.1ミリモル
NMM／ml・DMF）3.57mlを更に加えて溶解さ
せる。０℃にてジシクロヘキシルカルボジイミド
88.3mgを加え、５時間更に室温で二晩撹拌し、減
圧濃縮する。半量になつたら200mlの氷水にあけ
析出する沈殿を取し、メタノールで処理し標題
化合物Ｚ−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly−Thr
（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−Glu（OBut）
−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg（Tos）
−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg（Tos）−
Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−
Leu−Val−NH2990mg（収率66％）を得る。
融点：238℃（分解） TLC：Rf値 0.59 （クロロホルム：メタノール、３：１） 旋光度：〔α〕24 D＝−7.75゜ （Ｃ＝２、トリフルオロエタノール） 元素分析値：C196H315N41O50S4・ 3CR3・CH2OH Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 54.21 7.31 12.82 実測値(%) 54.36 7.40 13.10 実施例 17 保護セクレチンの合成 Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）
−Glu（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−
Leu−Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−
Ala−Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−
Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2 製法 (1) ジメチルホルムアミド85ml、Ｎ−メチルピロリ
ドン85mlの混液に実施例15の方法で得られたBoc
−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly−
Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−Glu
（OBut）−Leu−OH3.49ｇ（2.14ミリモル）、
HCl・Ｈ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg
（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg
（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln
−Gly−Leu−Val−NH25ｇ（1.78ミリモル）〔実
施例13の方法で得られたＺ体を80％酢酸中10％
Pd−Ｃ存在下H2で脱Ｚ化し、HCl塩とした〕、Ｎ
−ハイドロキシサクシンイミド0.345ｇを溶解さ
せる。。冷却してＮ−メチルモルホリンのジメチ
ルホルムアミド溶液（１ミリモル／ml・DMF）
1.87mlを加えた後、ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド0.529ｇを加え、氷室で１日撹拌後室温で３
日反応させる。これを水、エーテルの混液に加え
析出する沈殿を取し、標題の保護セクレチン
Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly
−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−Glu
（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−
Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg
（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln
−Gly−Leu−Val−NH2の粗成物８ｇを得る。
更にシリカゲルカラムクロマトグラフイー（ワコ
ーゲル−C200、5.5cmφ×20cm、クロロホルム−
メタノール混液溶出）で精製し、目的物質4.0ｇ
（収率52.5％）を得た。
融点：251℃（分解） TLC：モノスポツト、Rf値 0.57 （クロロホルム：メタノール、４：１） 旋光度：〔α〕23 D＝−7.36゜ （Ｃ＝１、トリフルオロエタノール） 元素分析値：C204H332N44O53S4・5H2O Ｃ Ｈ Ｎ 理論値(%) 54.83 7.71 13.79 実測値(%) 54.90 7.73 13.74 製法 (2) 実施例16の方法で得られたＺ−Ser（But）−Asp
（OBut）−Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−
Ser（But）−Glu（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg
（Tos）−Leu−Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser
（But）−Ala−Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）
−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2250mg
（0.06ミリモル）をトリフルオロエタノール20ml、
80％酢酸10mlに溶解し、10％Pd−C150mgを加え、
H2気流中６時間撹拌する。触媒を別し、液
は減圧濃縮し、エーテル60mlを加え、析出する沈
殿を取し乾燥して標題化合物の脱Ｚ体231mg
（93％）を得た。
この204mg（0.05ミリモル）をジメチルホルム
アミド５mlに可及的に溶かし、Boc−His
（Boc）・ONP71mg（0.15ミリモル）を加え、次い
でＮ−メチルモルホリンのジメチルホルムアミド
（DMF）溶液0.5ml（0.1ミリモル／ml・DMF）を
加え、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリ
ドン１mlを追加する。室温で３日間撹拌反応させ
る。反応液を減圧濃縮したのち、エーテルを加
え、析出した沈殿を取し、エーテルで洗滌し、
標題化合物200mgを得た。性状は、製法(1)で得ら
れた標題化合物のそれと一致した。
参考例 １ 粗セクレチンの合成 実施例17で得られた保護セクレチン2.32ｇをア
ニソール4.5ml存在下、密閉系のフツ化水素
（HF）反応装置内で−５℃にて、HF50mlにとか
し、１時間撹拌後HFを反応系より溜去する。残
渣をエーテルで洗滌した後、冷水に溶解し、アン
バーライト（Amberlite）IRA−93（酢酸型）で
処理し酢酸塩とした後、凍結乾燥をおこない白色
粉末の粗セクレチン1.53ｇ（収率88％）を得る。
参考例 ２ 粗セクレチンの精製 実施例18により得られた粗セクレチン587mgを
水50mlに溶解し、カルボキシメチルセルローズ
（Whatman CM−52）のカラム（3.2φ×32cm）
にチヤージした後、0.05M−酢酸アンモニウム、
および0.13M−酢酸アンモニウムで溶出する。各
フラクシヨンは210滴とした。良好なセクレチン
フラクシヨンは122〜178本目に溶出されてくる。
セクレチン含有の前記のフラクシヨンの各画分を
あわせて凍結乾燥をおこない、収量441mg（収率
75％）の精製セクレチンを得る。この精製セクレ
チンの生物活性は約4600cu／mgを示し、アミノ
酸分析により含有率は約87％であつた。更にデイ
スク電気泳動、薄層クロマトグラフイー、高速液
体クロマトグラフイーで単一であることが確認さ
れた。
本方法によつて精製されたセクレチンは、ドラ
イフリーベースとして、5287cu／mgであり、極
めて高活性である。
TLC：Rf値 0.54 （ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝15：
５：５：８） 旋光度：〔α〕16 D＝−57.2゜（Ｃ＝0.402、0.01N−
HCl） 〔α〕25 D＝−49.03゜（Ｃ＝1.04、Ｎ−酢酸） アミノ酸分析：His1.02(1)、Arg4.03(4)、
Asp1.97(2)、Thr1.87(2)、Ser4.30(4)、
Glu2.88(3)、Gly1.97(2)、Ala1.02(1)、
Val0.93(1)、Leu6.04(6)、Phe1.00(1) （ペプチド含量87％）

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 次の構造式を有するヘプタコサペプチド Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
    Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−
    Glu（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu
    −Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−
    Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu
    −Gln−Gly−Leu−Val−NH2 ２ 次の構造式を有するデカペプチド Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
    Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−
    Glu（OBut）−Leu−OH を次の構造式を有するヘプタデカペプチド Ｈ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg（Tos）
    −Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg（Tos）−
    Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−
    Leu−Val−NH2 と縮合させることを特徴とする次の構造式 Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
    Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−
    Glu（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu
    −Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−
    Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu
    −Gln−Gly−Leu−Val−NH2 で示されるヘプタコサペプチドの製造方法 ３ 次の構造式 Ｈ−Ser（But）−Asp（OBut）−Gly−Thr（But）
    −Phe−Thr（But）−Ser（But）−Glu（OBut）−Leu
    −Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg（Tos）−Asp
    （OBut）−Ser（But）−Ala−Arg（Tos）−Leu−
    Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−Leu−
    Val−NH2 で示されるヘキサコサペプチドを、Boc−His
    （Boc）・ONPと縮合させることを特徴とする次
    の構造式 Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
    Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−
    Glu（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu
    −Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−
    Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu
    −Gln−Gly−Leu−Val−NH2 で示されるヘプタコサペプチドの製造方法 ４ 次の構造式 Ｚ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg（Tos）
    −Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−OH で示されるヘプタペプチドを次の構造式 Ｈ−Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu
    −Leu−Gln−Gly−Leu−Val−NH2 で示されるデカペプチドと縮合させ、次の構造式 Ｚ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg（Tos）
    −Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg（Tos）−
    Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−
    Leu−Val−NH2 で示されるヘプタデカペプチドを製造し、次いで
    このヘプタデカペプチドを接触還元により次の構
    造式 Ｈ−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu−Arg（Tos）
    −Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−Arg（Tos）−
    Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu−Gln−Gly−
    Leu−Val−NH2 で示される脱Ｚ体とし、次にこの脱Ｚ体と次の構
    造式 Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
    Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−
    Glu（OBut）−Leu−OH で示されるデカペプチドと縮合させることを特徴
    とする次の構造式 Boc−His（Boc）−Ser（But）−Asp（OBut）−
    Gly−Thr（But）−Phe−Thr（But）−Ser（But）−
    Glu（OBut）−Leu−Ser（But）−Arg（Tos）−Leu
    −Arg（Tos）−Asp（OBut）−Ser（But）−Ala−
    Arg（Tos）−Leu−Gln−Arg（Tos）−Leu−Leu
    −Gln−Gly−Leu−Val−NH2 で示されるヘプタコサペプチドの製造方法。
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US4407745A (en) 1983-10-04
DE3163650D1 (en) 1984-06-20
EP0047997A3 (en) 1982-05-19
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