JPH03224485A - フルクトース‐１，６‐ビスホスフアート‐アルドラーゼ、その製造方法及びその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明の対象は、フルクトース−１，６−ビスホスフア
ート−アルドラーゼ（Ｆ−１，６−ＢＰ−アルドラーゼ
）であり、かつこれはその製造方法及びその使用方法を
包含する。

〔従来の技術〕

目的とされたアルドール反応への及び化学的に入手困難
な又は自然界に存在しないモノサンカライドの合成への
実際の関心は、これに関連するアルドラーゼにますます
多くの注意を払うことにあった。医学にとっても有益で
ありうるこの生物学的に重要な物質の有機合成に関して
、生物触媒の使用が、有効な代替手段である。イエウサ
ギ筋肉のＦ−１，６−ＢＰ−アルドラーゼは、従来その
合成で使用される唯一の酵素である（Ａ、Ｉ！、セリア
ニ（Ｓｅｒｉａｎｉ）等々Ｍｅｔｈ、　ｔ！ｎｚｙｍｏ
１．８９（１９８２）８３−９２）。

イエウサギ筋肉から単離されたこのアルドラーゼは、高
価でかつ比較的不安定である。他方、すでにクラスＩ　
Ｆ−１，６−ＢＰ−アルドラーゼが、スタフィロッコス
　アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒ
ｅｕｓ）から単離されている。これはイエウサギ筋肉か
ら単離されたアルドラーゼと同様な酵素学的性質を有す
るが、著しく熱安定性である（Ｆ、ゲエーツ（ＧｏＬｚ
等々、Ｂｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、１０８　（１
９８０）　２９３−３０１）。しかしその病原性性質の
ゆえに、スタフィロコッカス　アウレウスが、酵素産出
物として僅かにしか適さないのが明らかである。

〔発明が解決しようとする課題〕

したがって本発明の目的は、酵素触媒法に良好な安定性
を有する、イエウサギ筋肉又はスタフィロコッカス　ア
ウレウスから得られる従来公知のＦ−１，６−ＢＰに比
して改良された入手可能性を有するアルドラーゼにある
。

〔課題を解決するための手段〕

この目的は、スタフィロコッカス　カルノススから得ら
れる、本発明によるフルクトース−１，６ビスホスフア
ートーアルドラーゼ（Ｆ−１，６−ＢＰ−アルドラーゼ
）によって達成される。

このアルドラーゼは、１イエウサギ筋肉−アルドラーゼ
”に比して著しく改良された安定性の点で優れ、それは
Ｔ＝２５℃；ｐＨ６，５；酵素活性２．９Ｕ／−又は２
５０／ｍｇで、合成条件下で不活性化率〈１％／ｄ　（
たとえば測定値：　０．７７％／ｄ）に相当する又は３
０分後の残存活性７０〜８０％又は２０〜３０％、特に
７６％又は２６％に相当する、エッペンドルフ容器中０
．０６Ｍ　　）リスー〇ＣＩ−緩衝溶液中でｐＨ７，５
で精製仕上げされた形で（Ｓ；　２５０　／ｒａ　ｇ　
）で６０℃−又は１００℃安定性に相当する。したがっ
てこのアルドラーゼは、スタフィロコッカス　アウレウ
スから得られるアルドラーゼに比してほんの僅かの熱安
定性しか有さず（後者は、１００℃で９０分後著しい活
性損失を示さない）、あらゆる条件下に適合して病原性
起源のその著しい欠点で汚染されない。

酵素産出物として使用されるスタフィロコッカス　カル
ノススは、天然起源から、特に乾燥生ソーセージから直
ちに入手でき（Ｋ、Ｈ，シュライファー　（Ｓｃｈｌｅ
ｉｆｅｒ）等々、Ｉｎｔｅｒｎａｔ、　Ｊ、　Ｓｙｓｔ
ｅｍ。

Ｂａｃｔｅｒｉａｌ、３２　（１９８２）１５３−１５
６）及びスターター培養物の形で市場で得られる０本発
明の範囲内で、特に口ＳＭ　Ｎｏ、２０５０１でドイツ
微生物コレクション（ゲチンゲン）に寄託されたスタフ
ィロコソカスカルノススー株を使用する。

菌株の培養は、振とう培養器で培地２００　ｍを有する
５００−エルシンマイヤーフラスコ中で、１１０ｒｐａ
＋で又は５及び１０１の処理容量を有する発酵器中で行
われる。培養培地（Ｍｌ）は、たとえば次の組成を有す
る： ＬＯ％　トリプトン ０．５％　酵母抽出物 ０５％　ＮａＣ１ ０，１％　Ｎａ、）ｌＰＯ４ １，０％　グルコース ｐＨ７，２ ｐＨ−値の修正のために、３Ｍ　ＮａＯＨ及び３Ｍ　１
１３ＰＯ。

を使用する。他に明記しない限り、発酵の開成のパラメ
ーターを保つ： 回転数　　１０Ｏｒｐｍ 温度　　　３７℃ 通気　　　５％ｐａｔ 栄養液　　？１ｌ ＰＩ（７，２ 培養時間　８−１３　時間 細胞を、対数段階の最後に８０００ｒｐ＋ｍで１０分間
遠心分離して得る。細胞破壊は、ガラス小球を用いる湿
潤粉砕によって行われる。

発酵容量９１から成るバイオマス（Ｂｉｏｍａｓｓ）の
水含有量は、１２１ｇである。次に記載する精製工程を
、１〜６℃、０．０６Ｍ　　トリス−ＨＣｌ−緩衝液中
でｐＨ７，５で実施する。

酵素の精製仕上げのために、硫酸アンモニウム分別沈殿
、ｐ［］−分別及びイオン交換クロマトグラフィーを実
施する： Ｐ　アンモニウム　１゛ 細胞不含粗抽出物１９５−に、固形硫酸アンモニウムを
４０％の溶液が飽和するまで加える。　ｐＨ−値を、３
Ｍアンモニアで７．５に調製し、沈殿を２時間水浴中で
行う。沈殿した成分を、２００００ｒｐｍで２０分遠心
分離して分離する。次いで順次に（ＮＨａ）　ｚＳＯａ
−濃度を６０％又は８０％飽和に増加し、再び水浴中で
沈殿させ、遠心分離する。アルドラーゼの沈殿のために
、上澄みを１００％（ＮＨａ）ｚＳＯａ−飽和にし、ｐ
Ｈを７Ｍ　　酢酸で５．０に下げる。沈殿を、破壊緩衝
液５０ｄ（６ｍＭ２−メルカプトエタノールを有する０
、０６Ｍトリス−ＨＣｌ　ｐＨ７，５）中に再懸濁する
。

飢ユ分■ １００％（ＮＨ４）　ｔｓＯ４−画分５０−のｐト値を
、激しい攪拌下に少しづつ岨　酢酸で先ず４．０に、次
いで６Ｍ　ＨＣＩで３．５に、最後に３．０に下げる。

形成された沈殿を、夫々２０００Ｏｒｐ■で２０分間遠
心分離する。

アルドラーゼは、上澄み中にあり、この上澄みを透析濾
過によって限外濾過膜アミコン　ＹＭＩＯを用いて脱塩
する。

イオン　　クロマトグラフィー 脱塩された酵素溶液３０１Ｉｄを、ＤＥＡＥ−セファデ
ックス　Ａ２５力ラム１６０Ｍ１上に付与する。これは
前もって０．１　ｎ　ＮａＣ１を含有する０、０６Ｍ　
　）リスー〇ＣＩ−緩衝液（ｐＨ７，５）で洗浄されて
いる。酵素を、０．０６片　トリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐ
Ｈ７，５）中で０．１−０．５Ｍ　ＮａＣ１の直線状塩
勾配によって溶離する。流動速度は、３０ｄ／ｈである
。活性画分を一緒にし、凍結乾燥する。

添付された図表（第１図）は、発酵器（５％ｐＯ８）中
での培養時間に基づく増殖及び酵素産出に関する曲線を
示す。

次表１は、精製仕上げの結果に関する一覧表を示す。

表 １ 本たんばく質はブラッドホード（Ｌｉｔ）に従って測定
する。

これとは別に、アルドラーゼから、特に好ましくは細胞
分離及び−破壊の後、水性２−相関抽出によってバイオ
マス夾雑物を分離することができる。

これには、特にポリマー／塩混合物及び特別にポリエチ
レングリコール／リン酸カリウム混合物を使用する。他
の塩、たとえば硫酸塩を、同様にして使用することがで
きる。低分子量、特に１５００ダルトン以下のＰＥＧの
高含量が特に有利である。

酵素は上相中に集まり、別の工程でこれ゛から再抽出す
ることができる。しかし上相をアニオン交換体カラムを
介する後続の分離に直接使用するのが、技術的に簡単で
ある。この様な、直接の順次処理は、著しい欠点もなく
可能である。

カラム材料として、アミノエチル−、ジエチルアミノエ
チル−（ＤＥＡＥ−）及び第四級アミノエチル基を有す
るアニオン交換体が適当である。これらを常法でｐト値
≧５に及び特にｐＨ７，５に平衡化する。

特に商品名ＤＥＡＥセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ
）、モノＱ及びＱ−セファデックスを使用する。

特に分別されるたん白質通過液に対して調整された塩含
有率で、たとえば０．２５Ｍ塩溶液を用いて通過速度３
−５　ｄ／分で溶離する。

酵素を含有する、集められた正の両分を、そのまま又は
凍結乾燥された形で使用することができる。

水性２−相間抽出で、この様な後処理を実施する例を、
次に示す。

Ｓ、カルノスス　フルクトース−１，６−ピスホスフア
ートアルドラーゼに関する後処理 ■）■及 ５０％　粗抽出物（４０％−／−） ２７％　ＰＥＧ　　４００ ７％　にＰｉ　　ｐＨ７．５ 上相は、０．８０／ｍｇたん白質で９５％酵素活性を有
する。

１１）０−セファロース−アニオン ２０ｍＭ　）リスー〇ＣＩ緩衝液ｐＨ７，５，０，１５
Ｍ　ＮａＣ１及び０．１％メルカプトエタノールで平衡
化されたカラム５０−を使用する。上相Ｉを、４；１に
希釈し、交換体に加える。

２９ｍＭ　　トリス−１（ＣＩ　ｐＨ７，５，０，２５
Ｍ　ＮａＣ１，０，１％メルカプトエタノールで溶離す
る。８０％収率；７、ＩＵ／ｍｇたん白質。

ＩＩＩ）　Ｏ−セファロース−アニオン■）と同様に平
衡化する。流出Ｉからの正の両分を２＝１に希釈して、
交換体に加える。たん白質を、０．１５−０．２５Ｍ　
ＮａＣ１のＮａＣ１−勾配によって溶離する。アルドラ
ーゼは０．２Ｍ　ＮａＣ１濃度で溶離する。

７０％収率、１３．ＩＵ／ｍｇたん白質。

＃１！、臣 酵素の確認のために、夫々精製仕上げされたアルドラー
ゼ４０μｇ／−を、分子量測定のために１２０μｇ／Ｍ
ｉを使用する。

クラス■　アルドラーゼの７ 次の特性に基づいて、Ｓ、カルノススから得られるＦ−
１，６−ＢＰ−アルドラーゼは、アルドラーゼのクラス
■タイプに属する。

−Ｆ−１．６−ＢＰに対する活性は、種々の濃度ＥＤＴ
＾の存在で妨害されない。

−Ｓ、カルノススアルドラーゼは、ＤＨＡＰ及びＮａＢ
Ｈ。

の存在で完全に阻害される。

−１−及び２価のカチオンは、アルドラーゼ−活性に影
響を与えない。

更にＳ、カルノススアルドラーゼは、天然基質に対して
極めて特異的に作用する。

アルドラーゼの分子量を、５Ｏ５−ＰＡＧＥによって測
定し、〜３３０００ダルトン（構成単位）が決定される
。

基質Ｆ−１，６−ＢＰ及びＦ−１−Ｐに対するにＦ値を
、酵素活性に関して種々の基質濃度で調べる。第２図は
、ミバエリス−メンテン−プロットを、Ｆ−１，６−Ｂ
Ｐのに！ｌ＋−値の測定に関して示す。

これは０．０２２ｍＭが測定され、Ｆ−１−Ｐのそれは
１８．８ｓＭである。これから、アルドラーゼは、天然
の基質に比して極めて特異的に作用することが明らかで
ある。Ｆ−１−Ｐに関するＫ１１−値は、Ｆ−１，６−
ＢＰに関する値よりもファクター１０００はど大きい。

姐二員１条庄 ｐＨ−最適条件の決定のために（第３図）、酵素活性を
３７℃でｐＨ３〜ｐＨ１０で下記の緩衝液中で測定する
： ０．０６　Ｍ　　クエン酸塩緩衝液　ｐＨ３，０−６，
００，０６ＭＫＰ−緩衝液　　　　ｐｔｌ　６．０−７
．５０．０６Ｍ　　トリス−）ＩＣＩ緩衝液　ｐＨ７，
５−９，００，０６Ｍ　　グリシン緩衝液　　ＰＨ９，
０−１０，０第３図から、二通り認められるニ ーアルドラーゼのｐＨ−最適条件は、ｐＨ７，５で最高
となるｐＨ−範囲６．５−９．０を含む。

−酵素は、種々の緩衝液の存在下に異なる活性を示す。

クエン酸ナトリウム−緩衝液は、酵素の最も強い阻害を
示す。

酵素のｐＨ−安定性を、室温（ＲＴ）でｐＨ　１〜ｐＨ
１２でアルドラーゼの１０分間培養によって決定する（
第４図）。０．０６Ｍトリス−１（ＣＩ環状液中でのみ
処理し、この際その都度ｐＨ−値を２Ｎ　ＮａＯＨ又は
２Ｎ　ＨＣＩを用いて調整する。培養期間の経過後、サ
ンプル溶液をｐＨ７，５にし、酵素活性を測定する。

第４図に示した様に、Ｓ、カルノススアルドラーゼは、
極めて良好なｐト安定性を有する。別のテストで、アル
ドラーゼ−活性は、ｐｌ（２及び４℃で７２時間貯蔵後
もまだ出発活性１００％であることを確認することがで
きる。

１皮ユ支定性 アルドラーゼの温度−安定性を調べるために、次の測定
を実施する： １）酵素を、５分間０．０６Ｍ　　トリスＨＣＩ緩衝液
（ｐｌ（７，５）中で４０℃〜１００℃の温度で培養し
、それによって酵素活性の温度による依存を測定する（
第５図）。

２）別のテスト系で、精製仕上げされたアルドラーゼの
サンプルを６０℃〜１００℃で種々の長さの時間で培養
し、それによって２つの異なる温度での酵素活性の時間
による依存を測定する（第６図）。

第５図及び第６図は、Ｓ、カルノススから得られるＦ−
１、６−ＢＰアルドラーゼが、比較的に温度安定な酵素
であることを示す。これはＳ、アウレウスから得られる
アルドラーゼに関して記載されている（１００℃で９０
分後活性損失）加熱安定性を示さないが、イエウサギ筋
肉アルドラーゼの温度安定性よりはるかにまさる。

アルドラーゼの　　　　性 貯蔵安定性に関して言及するために、精製されたアルド
ラーゼのサンプルに種々の試薬を加え、５日間ＲＴ又は
−２０℃で貯蔵する。表２は、その結果を示す： 表２ ＲＴ　　　　　　−２０℃ グリセリン１０％　　　　　６６％　　　９０％Ｆ−１
．６−ＢＰ　　５％　　　　　９８％　　　１００％メ
ルカプト エタノール４　ｍＭ　　　　　　５４％　　　９１％ア
ルブミン５％ｉｇ　　　　　８５％　　　９９％凍結乾
燥物　　　　　　１００％　　１００％表２は、５日間
貯蔵後のアルドラーゼの活性を示す。

イエウサギ　　−アルドラーゼを　いた較 本発明によるアルドラーゼの安定性を、イエウサギ筋肉
−アルドラーゼの安定性と比較する。これについて２つ
の酵素を、表３中に記載した活性な実験下でテストする
： 表３ スタンダード条件　　　活性条件 温度　　　　　　２５℃　　　　　　　　　２５℃ｐＨ
６，５６，０ 溶剤　　　二回蒸留されたＨｔＯＤＨＡＰ　　２０ｍＭ
グリオキシ１＆酸　７５　　ＤＩＭ 二回蒸留されたＨｔＯ中で 酵素濃度　　０．２７　ｍｇ／ｓｄ　　　　　　　０．
２７　ｍｇ／ｄ２つの試験に関して、比較できる開始活
性の酵素濃度を調整する。これは、イエウサギ筋肉−ア
ルドラーゼ３．４Ｕ／ｍｆｆ１　（９０／艶ｇ）及びＳ
、カルノススアルドラーゼ２．９０／　ｗｒｌ　（２５
１１／ｍｇ）に関してである。第７図は、３００時間に
わたる２つのアルドラーゼの安定性を示す。不活性化率
の測定のために、−次対数不活性化を採用し、その不活
性化率は、対数因子から明らかである（１　＝　１００
％／時間単位）。

基ｉムさえ上圧 基質スペクトルの決定のために、例示的にアルデヒドの
数をテストする。その際次の混合物を選ぶ： ２０ｎ＋Ｍ　ＤＨＡＰ　２００ｆｆｉＭアルデヒド　１
−４０／ｄアルドラーゼ アルドラーゼの培養後、非連続的ＤＣ−コイトロールが
行われる。次に記載するアルデヒドを有する混合物中に
、５−８時間後もはやＤＨＡＰを認めることができなり
。

ヱＲ」う：ヨＬ二１！ アルデヒド　　　　　　　　　　　　生成物のＲｐグリ
セリンアルデヒド−３−ホスフアート　０．３６メチル
グリオキサール　　　　　　　　　０．３７Ｄ（＋）−
グリセリンアルデヒド　　　　　　０．４４Ｌ（−）−
グリセリンアルデヒド　　　　　　　０．４４Ｄ、Ｌ−
グリセリンアルデヒド　　　　　　　　０．４４グリコ
ールアルデヒド　　　　　　　　　０．６６フタルジア
ルデヒド　　　　　　　　　　　０．６９ホルムアルデ
ヒド　　　　　　　　　　　　０・７１アセトアルデヒ
ド　　　　　　　　　　　０．９３クロルアセトアルデ
ヒド　　　　　　　　１．０８プロピオンアルデヒド　
　　　　　　　　　１．２０３−メチルメニカプトプロ
ビオンアルデヒド１．２４イソブチルアルデヒド　　　
　　　　　　　１．３６トリメチルアセトアルデヒド　
　　　　　　１．４１ブチルアルデヒド　　　　　　　
　　　　　１．４０３−ケトブチルアルデヒド　　　　
　　　　　１．４８イソバレルアルデヒド　　　　　　
　　　　１．４９マロンジアルデヒド　　　　　　　　
　　　１．４９ピリジン（２）カルボアルデヒド　　　
　　　１．５０ピリジン（４）カルボアルデヒド　　　
　　　１．５０フエニルアセトアルデヒ）ｊ　　　　　
　　　　１．５３２−メチルアセトアルデヒド　　　　
　　　　１．５４バレルアルデヒド　　　　　　　　　
　　１．６０Ｆ−１，６−ＢＰ−アルドラーゼ触媒反応
に関する例として、次に５．６−ジデオキシへキスロー
スの合成を記載する： ジヒドロキシアセトンホスフアート（ＤＩ（ＡＰ）を、
実験室的規模でプロピオンアルデヒドとＦ−１，６−Ｂ
Ｐ−アルドラーゼの存在下に２５℃で反応させる。

混合物：　５０ｎＭ（５ｎｍｏｌ）ＤＨＡＰ５００ｍＭ
（５０ｍｍｏｌ）プロピオンアルデヒド４００アルドラ
ーゼ プロピオンアルデヒドを、反応の前に新たに蒸留し、ア
ルゴン下に保存する。反応の経過を、波長５９５ｎｍで
旋光分析して及び残存−〇〇ＡＰ−含有量の測定を観察
する。６．５時間後、反応を終了し、生成物をシクロヘ
キシルアンモニウム塩として単離する。

構造の解明のために、物質２５０ｍｇを酸性ホスファタ
ーゼで脱リンする。遊離１ｉ　（Ｒｐ・１．５６）の過
アセチル化は、ピリジン中で無酢酸を用いて行われる。

′Ｈ−又は”Ｃ−ＮＭＲスペクトルによって、単離され
た化合物を、予期された生成物として明確に同定するこ
とができる。

本発明によるアルドラーゼは、炭化水素又は炭化水素誘
導体の合成に非常に有用であり、特にこれは、芳香物質
フラネオール（ウオング（Ｗｏｎｇ）等、Ｚ、　Ｏｒｇ
、　Ｃｈｅ＋＊、　４８　（１９８３）　３９４３−３
４９７）の前駆体の６−ゾスオキスーフルクトースー１
−ホスフアートの製造に便用することができる。更にア
ルドラーゼの使用下に≧６Ｃ−原子、特に０８、Ｃ１等
々を有する高級槽を得ることができる　（ベトナルスキ
（Ｂｅｄｎａｒｓｋｉ）等、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　
Ｌｅｔｔ、＜１９８６）　２７５８０７−５８１０参照
）。混合アミノ糖、たとえば１−デスオキシマンノシリ
ミシン、１−デスオキシノシリミシン及びＬ４−ジアス
オキシ−１，４−イミノ−Ｄ−アラビニトール□これは
有効なβ−グルコシダーゼ−阻害剤として重要である（
チーグラー（Ｚｉｅｇｌｅｒ）等々、＾ｎｇｅｗ、　Ｃ
ｈｅ＋＋ｉｅ　１００　（１９８８）７３７−７３８）
□は、本発明によるアルドラーゼを用いてより一層良好
に得やすくなり、これらは一部ＨＩＶ−ウィルスを抑制
する作用を有する（フリート（Ｆｌｅｅｔ）等、ＦＢＢ
Ｓ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　２７３（１９８８）１２Ｂ−１３
２）。

フェロモンの製造に関する他の使用は、搏、シェルフ（
Ｓｃｈｕｌｚ）等によってテトラヒドロンレタース第３
１巻（１９９０）第８６７−８真中に記載されている。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第７図は、本発明によるアルドラーゼの特性を
示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）スタフィロコッカスカルノスス （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｃａｒｒｏｓｕｓ）か
   ら得られるフルクトース−１，６−ビスホスフアート−
   アルドラーゼ（Ｆ−１，６−ＢＰ−アルドラーゼ）。 ２）３０分後の残存活性７０〜８０％又は２０〜３０％
   、特に７６％又は２６％に相当する、エッペンドルフ容
   器中精製仕上げされた形で（≒２５Ｕ／ｍｇ）ｐＨ７．
   ５で０．０６Ｍトリス−ＨＣｌ−緩衝溶液中の６０℃−
   又は１００℃−安定性並びにＴ＝２５℃；ｐＨ６．５；
   ２０ｍＭＤＨＡＰ；７５ｍＭグリオキシル酸；酵素活性
   ２．９Ｕ／ｍｌ又は２５Ｕ／ｍｇでの合成条件下の不活
   性率≦１％ｄ．によって特徴づけられるアルドラーゼ。 ３）スタフィロコッカスカルノススＤＳＭ２０５０１か
   ら単離される、請求項１記載のアルドラーゼ。 ４）次のパラメーター −クラスＩアルドラーゼに属する（プロトン化されたシ
   ッフ塩基をジヒドロキシアセト ンホスフアート、ＤＨＡＰで形成；ＥＤＴＡによってＦ
   −１，６−ＢＰに対する活性は妨害されない；ＤＨＡＰ
   及びＮａＢＨ＿４による完全な抑制）；−３７℃で及び
   ｐＨ７．５でＦ−１，６−ＢＰをＤＨＡＰ及びグリセリ
   ンアルデヒド−３−ホスフアートへの又はＦ−１−Ｐを
   ＤＨＡＰ及びグリセリンアルデヒドへの分解に関するＫ
   ＿Ｍ−値０．０２２ｍＭ又は１８．８ｍＭ； −比活性（精製仕上げされた）≒２５Ｕ／ｍｇたん白質 （ブラドホードによるたん白質測定）； −分子量≒３３．０００ダルトン（構成単位で分解せず
   ）； −ｐＨ６．５〜ｐＨ９の範囲にわたるｐＨ−最適条件；
   −ｐＨ−安定性：ｐＨ１−１２（２５℃）で１０分後及
   びｐＨ２（４℃）で７２時間後の残存活性度１００％； −Ｔ−安定性：１００℃（ｐＨ７．５）で５分後及び６
   ０℃（ｐＨ７．５）で９０分後の残存活性度７０％； −貯蔵安定性：ａ）ＲＴ：１００％ ｂ）−２０℃：１００％で５日後の精製仕上げされた凍
   結乾燥物の残存活性度； −基質スペクトル：短鎖脂肪族アルデヒドを、−Ｉ−効
   果と共に官能基を 有する分子に於て、変換速度の付加的な増加につれて特
   に良好に変換する； によって特徴づけられる、請求項１又は２記載のアルド
   ラーゼ。 ５）発酵器中で培養された、スタフィロコッカスカルノ
   ススの細胞物質から培養液体を分離し、調製し、酵素を
   細胞破壊後に収得する、請求項１ないし４のいずれかに
   記載したＦ−１，６−ＢＰ−アルドラーゼの収得方法。 ６）酵素を細胞破壊の後に、分別された硫酸アンモニウ
   ム沈殿、ｐＨ−分別及びイオン交換体クロマトグラフィ
   ー分離によって単離する、請求項５記載の方法。 ７）酵素含有液体に、細胞破壊後に水性２−相間抽出を
   行い、酵素を上相からアニオン交換体−クロマトグラフ
   ィーによって収得する請求項５記載の方法。 ８）請求項１記載のＦ−１，６−ＢＰ−アルドラーゼを
   、アルデヒドとＤＨＡＰとの酵素反応による炭化水素又
   はその誘導体の合成に使用する方法。