JPH03227971A - カルバゾール化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は抗酸化作用を有するカルバゾール化合物に関す
る。

従来の技術 本発明の化合物と同様の作用をもつ類縁の化合物は知ら
れていない。

発明が解決しようとする課題 本発明の目的は、抗酸化作用を有する新しい構造の化合
物を提供することにある。

課題を解決するための手段 本発明者らは前記目的を達成するために多数の菌株を土
壌より分離し、その菌株の培養物について種々検討した
結果、ある種の菌株が生産する化合物が強い抗酸化作用
を有することを見いだし、本発明を完成した。

（式中、Ｒ１はアセチル基又はＮ゛−イソブチル−ウレ
イド−カルボニル基を示し、Ｒ２はｎ−ペンチル基、ｎ
−ヘキシル基、ｎ−へブチル基又はイソへブチル基を示
す。）で表される化合物である。

本発明の化合物を生産する菌株は、本発明者らが群馬県
高崎布の土壌より新たに分離した菌株であり、微生物の
名称Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｙａｎｅｕｓ　２０
０７ＳＶＩ　、及び微生物寄託番号「微工研菌寄第１１
２３４号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１１２３４）として工業技術
院微生物工業技術研究所に寄託されている。

この菌株の菌学的性状を以下に示す。

［１］形態的性状 本菌株の基土菌糸は分断しない。気菌糸は主軸又は分枝
上に螺旋状、１０〜５０又はそれ以上の数からなる胞子
鎖を形成する。胞子は非運動性、長円形又は円筒形で、
０．５〜０４μｍＸ０．７〜１．０μｍ、無機塩・スタ
ーチ寒天上では典型的とげ状表面、イースト・麦芽寒天
上では平滑表面又は不完全なとげ状から典型的とげ状ま
で多様な表面を示す。

菌核、胞子のう、その他の特殊形態は観察されない。細
胞壁化学型は■型である。

［２］培養性状 各種培地上で２７°Ｃ１２週間培養したときの肉眼によ
る観察結果を第１表に示す。

第 ］ 表 アメリカ １９５０年）の色標コード ［３コ生理的性状 （１）生育温度範囲 １０〜４５°Ｃの範囲で生育する。

０Ｃである。

（２）好気性、嫌気性の区別； （３）ゼラチンの液化； （４）脱脂乳の凝固； （ω脱脂乳のペプトン化； （６）スターチの加水分解： （７）メラニン様色素生成； ａ）チロシン寒天 ｂ）ペプトン・イースト鉄寒天 （８）炭素源の同化； Ｄ−グルコース し−アラビノース Ｄ−キシロース Ｄ−フラクトース シュクロース Ｌ−ラムノース ラノイノース 最適温度は２５〜３０ 陽性 陰性 陽性 陽性 陰性 陽性 陽性 陽性 陽性 陽性 陽性 陽性 陽性 イノシトール　　　　　　　陽性 Ｄ−マンニトール　　　　　陽性 以」二の形態的性状から、本菌株はストレプトマイセス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）属に置かれる。上記の
諸性状を基に「細菌名承認リストＪ（１９８０年）、「
有効基リストヨ及び「バージエイ氏細菌系統分類学便覧
第４巻（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）　Ｊに報
告されている多くの既知菌株と比較した結果、本菌株は
ストレプトマイセス・シアネウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ　ｃｙａｎｅｕｓ）に最も近い性状を示していた
。

以上の結果より本菌株はストレプトマイセス・シアネウ
スと種を同じくするものと判断し、本菌株をストレプト
マイセス　シアネウス２００７ＳＶＴ、と命名した。

本発明化合物の生産は、大略一般の発酵生産物を生産す
る場合に準じ、各種の栄養物質を含む培地で本菌株を好
気的条件下で培養することにより行なう。

培地は主として液体培地を用い、次素源としてはグルコ
ース、シュクロース、廃ｍ蜜、スターチなどを単独又は
混合して用いる。窒素源としては肉エキス、オートミー
ル、酵母エキス、大豆粉、ポリペプトンなどを単独また
は混合して用いる。

その他、本菌株の生育を助は本発明化合物の生産を促進
する有機物及び無機塩を必要により添加することができ
る。消泡剤としては、アデカノール、シリコンなどを用
いることができる。

培養方法は振とう培養、通気撹拌培養などの好気培養が
適しており、ｐＨ４〜８．２４〜３０°Ｃで３〜６日間
、望ましくはｐＨ６〜７．２４〜２７℃で４日間培養す
る。

この培養により生産された本発明化合物を単離するには
発酵生産物を採取する一般的な方法に準じて行えばよい
。

すなわち、培養終了後、遠心分離又は濾過により菌体と
上清に分け、菌体に蓄積された本発明化合物を低級アル
コール、アセトンなどの有機溶媒で抽出する。減圧下有
機溶媒を留去し、残渣をベンゼン、酢酸エチル、クロロ
ホルムなどの非水溶性溶媒で抽出し、これを濃縮、乾固
する。

この操作で得られたシロップを再度ベンゼン、クロロホ
ルム、アセトン、メタノールなどの有機溶媒に溶解し、
シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ゲル濾過カラム
クロマトグラフィー及び高速液体カラムクロマトグラフ
ィーに付すことにより、本発明化合物を精製、単離する
ことができる。

発明の効果 本発明の化合物は抗酸化作用を有するので、脳疾患、心
疾患、肝疾患及び動脈硬化などに有用である。

実施例 次に、実施例及び試験例を挙げて本発明を具体的に説明
する。

（実施例） （１）可溶性デンプン２，５％、大豆粉１．５％、乾燥
酵母０．２％及び炭酸カルシウム０．４％からなるｐＨ
７の液体培地１００ｉを５００−の三角フラスコに入れ
、１２０℃、２気圧で２０分間殺菌した。次いで、スト
シブ１〜マイセス　シアネウス２００７ＳＶＩ＋株を接
種し、２７℃で４８時間回転培養した。

培養終了後、得られた６０Ｉ！、の培養液を遠心分離し
菌体を得た。菌体を１ｏＩｌのアセトンで抽出した後、
減圧下アセトンを留去し、残渣を２ｆ！、の酢酸エチル
で２回抽出した。得られた酢酸エチル層を合わせ、濃縮
乾固し８ｇの褐色シロップを得た。

このシロップをｎ−ヘキサン−酢酸エチル（３：１）の
混合溶媒１０ｄに溶解し、同一の組成の混合溶媒でシリ
カゲルを充填したカラム（容量６００ｄ）に吸着させた
。同一の組成の溶媒で溶出を行い１フラクション２０ｍ
ｅずつ分画し、６０〜８０番までの両分を集め濃縮乾固
し粗粉末１３８ｍｇを得た。

（２）　（１）で得られた粗粉末をクロロホルム−メタ
ノール（１：１）の混合溶媒５ｄに溶解し、同一の組成
の混合溶媒で調製した七ブアデックスＬＨ２０（商品名
、ファルマシア社製、容量４２Ｍ）にてゲル濾過を行っ
た。１８０〜２１０ｄに溶出される活性画分を集め濃縮
乾固し５８ｍｇの粗粉末を得た。

（３）　（２）で得られた粗粉末を５−のメタノールに
溶解し、メタノールで調製したトヨバールＨＷ４ＯＦ（
商品名、東洋ソーダ製、容量８０ｄ）にてゲル濾過を行
った。

４４０〜５０Ｍに溶出される活性画分を集め、濃縮乾固
し２３ｍｇの粗粉末を得た。

（４＞　（３）で得られた粗粉末をメタノール１ｄに溶
解し、以下の条件で行った高速液体クロマトグラフィー
の試料とした。

カラムザイズ゛：１０φＸ　２５０ｍｍ担体：　　　　
　ＯＤＳシリカゲル（商品名センシューパック、セン シュー科学社製） 溶媒組成：　　メタノール８０％、水２０％流速：　　
　　　３ｍｇ／ｍｉｎ 検出：　　　　Ｕｖ吸収２５４ｎｍ 保持時間９〜１１分の画分を分取し、式（Ｉ）において
Ｒ１がアセチル基でＲ２がｎ−ペンチル基の化合物（以
下、これを化合物１と称する。）３ｍｇを得、保持時間
１８〜２０．５分の画分を分取し、式（Ｉ）においてＲ
１がアセチル基でＲ２がイソへブチル基の化合物（以下
、これを化合物２と称する。）２ｍｇを得、保持時間２
０．８〜２１．５分の画分を分取し、式（Ｉ）において
Ｒ１がアセチル基でＲ２がｎ−へブチル基の化合物（以
下、これを化合物３と称する。）２ｍｇを得、保持時間
２４〜２６分の画分を分取し、式（Ｉ＞においてＲ１が
Ｎ゛−イソブチル−ウレイド−カルボニル基でＲ２がｎ
−ヘキシル基の化合物（以下、これを化合物４と称する
。）２ｍｇを得、保持時間５０〜５１分の画分を分取し
、式（Ｉ）においてＲ′がＮ′−イソブチル−ウレイド
−カルボニル基でＲ２がイソへブチル基の化合物（以下
、これを化合物５と称する。）４ｍｇを得、保持時間５
４〜５６分の画分を分取し、式（Ｉ）においてＲ１がＮ
゛−イソブチル−ウレイド−カルボニルがｎ−へブチル
基の化合物（以下、これを化合物６と称する。）６ｍｇ
を得た。

これら化合物の理化学的性質を第２表に示す。

第２表 〆】 ＦＡＢマススペクトル測定による ス２ メタノール中で測定 １ また、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合
物５及び化合物６の’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（重クロロ
ホルム中、４００ＭＨｚで測定）をそれぞれ第１図、第
２図、第３図、第４図、第５図及び第６図に示した。

（試験例）　抗酸化作用試験 （１）ミクロソームの調製 １０週令のウィスター系雄性ラットの肝臓をとり、ホモ
ジナイズ後、４°Ｃ　、　３０００ｒｐｍで１０分間遠
心分離し、その上清をとった。この上清を４°Ｃ、１０
０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清をとった。こ
れを更に４°Ｃ　、　３００００ｒｐｍで６０分間遠心
分離し、沈殿画分をとり、緩衝液（　０．　０２５ｍｏ
ｌ／　Ｒ．　ｌ−リス−塩酸，　０．　１７４ｍｏｌ／
　Ｒ．塩化カリウムよりなる。ｐＨ７、４）７０ｄを加
え、ミクロソーム液とした。

（２〉抗酸化作用測定 ミクロソーム液０．５ｄ、上記の緩衝液０．７５ｒｎｅ
及びサンプル（本発明化合物の１％メタノール溶液）０
．０５−を混和した後、Ｌ−アスコルビン酸２　− （　０．００１５ｍｏｌ／　Ｉｔ　）を０．　５ｍＩｌ
加え、３０°Ｃにて１時間反応させた。２０％トリクロ
ロ酢酸０．５−を添加し反応を止め、３０００ｒｐｍで
１０分間遠心分離し、その上清をとった。これに０．６
７％チオバルビッール酸０、５−を加えた。

１００°Ｃで２０分間反応させた後、５３０ｎｍでの吸
光度を測定し、抗酸化作用の指標とした。

結果はＩＣｓｏ値で第会表に示した。

第含表

【図面の簡単な説明】

第１図は重クロロホルム中、４００ＭＨ２で測定した化
合物１の’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、第２図は重クロロ
ホルム中、４００ＭＨｚで測定した化合物２の’Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを、第３図は重クロロホルム中、４００
ＭＨｚで測定した化合物３の’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを
、第４図は重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定した
化合物４の’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、第５図は重クロ
ロホルム中、４００Ｍ）ｌｚで測定した化合物５の’Ｈ
−ＮＭＲスペクトルを、第６図は重クロロポルム中、４
００ＭＨｚで測定した化合物６の’Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルを示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１はアセチル基又はＮ′−イソブチル−ウ
   レイド−カルボニル基を示し、Ｒ＾２はｎ−ペンチル基
   、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基又はイソヘプチル基
   を示す。）で表される化合物。