JPH03238004A - 分離方法および分離剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、ホスホポリオール化合物を選択的に吸着す
る機能を有する分離剤に関するものであり、例えば、注
射薬、透析液、輸液など生体内に直接穴る水溶液及びそ
れらに関係する希釈用水、洗浄用水などから、有害な発
熱物質を選択的に除去するパイロジエン吸着体として利
用できる。また、有機溶媒及びその溶液中のパイロジエ
ン除去にも利用できる。更に、遺伝子組み換え技術など
で利用されるＤＮＡやＲＮＡ“等の吸着体としても利用
できる。また、溶液中に存在する細菌や動物細胞の吸着
体としても利用できる。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕リン酸
と糖などのポリオール化合物を構成成分とする物質は自
然界に広く存在しており、人工的なものも含めて生理作
用を持つものが多く、極めて微量なものの分離が産業上
大きな意味を持つ場合がある。この明細書では、ＬＰＳ
　、リピドＡ、核酸、グリセロールリン酸誘導体などで
代表されるリン酸とポリオール化合物を構ＩｆｃＴｌｉ
。

分とする化合物をホスホポリオール化合物と呼ぶことに
する。

パイロジエン（発熱物質）は、ごく微量で恒温動物の体
温を異常に上昇させる物質であり、静脈注射液などに混
入して血液中に侵入すると、薬剤の作用とは別個に強い
発熱をひきおこし、過度にこの作用が起こると、悪寒戦
慄を伴う発熱や、時にはショック死に至ると言われてい
る。

発熱物質には細菌性物質、炎症性物質、植物多糖体又は
血液型物質などが知られているが、これらの中で最も発
熱に関与する物質は、細菌性のものであり、細菌毒素と
称されており、一般に外毒素（Ｅｘｏｔｏｘｉｎ）及び
内毒素（Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ）に大別されている。これ
らの毒素のうち、ダラム陰性菌の細胞壁リン脂質多糖体
（Ｌｔｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　：　ＬＰＳ
）を主とするいわゆるＯ抗原としての内毒素が最も発熱
性が強力であり、加熱処理によっても失活させることが
できず、液体中に一度混入すると除去するのが非常に困
難である。

これまでにパイロジエンの除去方法として、化学分解法
、膜分離法、ゲル濾過法及び吸着法などが知られている
。

化学分解法は、分解剤に対する被処理物の安定性、分解
剤及び分解生成物の混入による問題などから、その適用
範囲は限られている。

膜分離法及びゲル濾過法は、パイロジエンと被処理物と
の大きさの相違を利用した分離法であると言えるが、パ
イロジエンの大きさについては、その多様性、会合性や
リピドＡの存在をも考慮する必要がある。即ち、パイロ
ジエンの中で特に問題になるＬＰＳに限ってみても、発
熱作用に関与する部分リピドＡの脂肪鎖、それに結合し
ている多Ｉｉ類が、ＬＰＳの由来する菌の種類に応じて
それぞれ特有のものであり、多様である。また、分子量
５０００程度のＬＰＳが会合して、分子量数百万にも達
する大きなくセル構造を作る一方、分子量２０００程度
のリピドＡ自体も発熱物質である。

膜によるパイロジエン除去法には、限外濾過膜（ＩＰ膜
）や逆浸透膜（ＲＯ膜）が用いられる。

パイロジエン除去技術にとっては、低い到達濃度を達成
するために複数の膜を組み合わせた装置も提案されてい
る。特開昭５７−２０７５１７号公報や米国特許第４２
６１１３３４号明細書（ｄｅＷｉｎｔｅｒ）はその−例
である。水や低分子量の薬剤だけを含んだ水溶液ならば
、被処理物を透過し、パイロジエンやパイロジエンを含
む菌体を濾過しない分離膜を選ぶことができる。しかし
、被処理薬剤の分子量が大きい場合は、薬剤を良好な回
収率をもって透過し、パイロジエン、特にその中の分子
量の比較的小さいものまでを阻止して、目標とする低濃
度を達成する分離膜を選ぶことは容易でない。

例えばうさぎへの投与量１０ｍ１／ｋｇ、発熱量５ＥＵ
（Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　Ｕｎｉｔ）／ｋｇ、力価１０Ｅ
Ｕ／ｎｇの場合について計算すると目標濃度は０．５　
ＥＵ／ｍｌまたは５０ｐｇ／ｍｌ以下となる。

車白質などの高分子物質を含む液体からのパイロジエン
除去となるといっそう困難であり、薬剤の高回収率を維
持しながら、満足すべき低い水準にまでパイロジエンを
除去することはほとんど不可能である。一般に、膜によ
る濾過法は、同程度の分子量をもつ物質を分離すること
ができないので、パイロジエンのように分子量分布の広
い物質を、複雑な構造の薬剤から除去する目的には適し
ていない。

一方、活性炭がパイロジエンを吸着除去するはたらきを
持つことは知られている。また多孔体分離膜の材質、例
えばポリオレフィンも疎水結合力によるパイロジエン吸
着能力を備えている。イオン交換樹脂にもパイロジエン
を吸着除去するはたらきが存在することが知られている
。

例えばある種の強酸性カチオン交換樹脂と強塩基性アニ
オン交換樹脂とを併用した場合にパイロジエン除去効果
が認められている。しかし、単純な水中からのパイロジ
エン除去と異なる、薬剤を含む液体の場合には、これら
の吸着剤は、パイロジエンを選択的かつ極低濃度まで吸
着することはできず、パイロジエンを十分に除去した薬
剤液を得る目的の吸着剤として満足できるものは知られ
ていない。

パイロジエン吸着能力のある物質は、その他にも知られ
ている。例えば特開昭５Ｌ−１１２８８８号公報は、ア
柔ノ基含有繊維によるグラム陰性菌及び該細胞壁成分の
除去方法を開示している。

この公報にはポリプロピレン−ポリスチレンよりなる複
合繊維を溶液に浸して、幹ポリマーのベンゼン核にアミ
ノ基を含む化合物を結合させた実施例が開示されている
。表面積は直径２０μｍ程度の繊維の細さで確保してい
るが、ボアを通じて液を透過させるゲ／Ｌ／、状構造で
はない。この公報に記された実施例の中で最も低い到達
パイロジエン濃度は、リボ多糖体０．１ｍｇ／ｍｌの水
溶液を処理して得た８６％除去率の時のｏ、０１４ｍｇ
／ｍ１、即ち１４０００　ｎｇ　（ナノグラム）／ｍｌ
であると理解される。

米国特許第４６３９５１３号明細書（Ｈｏｕ　ｅｔ　ａ
ｌ）においては、血漿成分１ｇＧの精製手段として巨大
分子蛋白質の除去にイオン交換クロマトグラフィーが、
酵素の除去にアフィニティクロマトグラフィーが用いら
れている。この特許明細書はパイロジエンの除去につい
ても言及しており、ＬＰＳは、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　
ｃｈａｒｇｅｄ　ｔｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｍａｔｒ
ｉｘにより除去されると記している。Ｔｈｅ　ｐｏｓｉ
ｔｉｖｅｌｙｃｈａｒｇｅｄ　ｔｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇ
ｅ　ｍａｔｒｉｘ（正電荷を持つイオン交換体）の構造
は、パイロジエン除去の個所には記されていないが、そ
れに先立つイオン交換クロマトグラフィーの記述から、
セルロース−ＧＭＡ−ＤＥＡＥＭＡ（Ｄｉｅｔｈｙｌａ
ｍｉｎｏｅｔｈｙｌ　Ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ）を好
適例とするグラフトコポリマーであろうと理解される。

なお、ＬＰＳ除去についての記載ではないが、類似の構
造を持つクロマトグラフィー固定床物質として、この特
許明細書のアフィニティクロマトグラフィーの項目中に
セルロース−ＧＭＡマトリックス（同特許のＦｉｇ９）
をエチレンシアミンでアミノ化した物質も開示されてい
る。

米国特許第４６６３１６３号明細書（ｌｏｕ　ｅｔ　ａ
ｌ）には、エポキシ基とビニル基をもつモノマーと不飽
和酸アミノアルキルエステルとのラジカル共重合による
合成ポリマーを多糖類に共有結合させた物質が記されて
いる。この物質はクロマトグラフィー担体として用いら
れ、米国特許第４６３９５１３号明細書に記されたセル
ロース−ＧＭＡＤＥＡＥＭＡグラフトコポリマーと本質
的に同じ物質と考えられる。

米国特許第４４９１６６０号明細書（Ｇｅｎｄｒｉｃｈ
　ｅｔ　ａｌ）には、不溶性ポリマー、アルキル基、ヘ
ンゼン系環式化合物がイソウレアやア旦ド結合を介して
連なったマトリックスが記載され、エンドトキシンと結
合する能力が示されている。このマトリックスは、パイ
ロジエンに対する疎水結合性が卓越しているものと考え
られるが、その構造の中にはアミノ基、アミジノ基等の
窒素官能基で置換されたベンゼン系環式化合物を含んで
いる。

近年、パイロジエンを特異的に吸着し、それゆえ、薬剤
を含む液体に混入しているパイロジエンの除去に有用な
アフィニティ吸着体が市販されるようになった。この種
の吸着体の代表的なものは特開昭５７−１８３７１２号
公報に開示されている含窒素環式化合物を結合した多ｍ
ｌゲルであり、多種多様で広範囲の分子量を持つパイロ
ジエンを、蛋白質などの高分子量の薬剤を含む水溶液中
から選択的に吸着除去する性能を備え、高い評価を得て
いる。この公報に記された到達濃度は０．１ｎｇ（ナノ
グラム）７ｍ１以下に及んでいる。

パイロジエン吸着体において更に求められる能力として
、高いイオン強度の溶液処理がある。

イオン交換クロマトにおいて、溶離液のイオン強度を高
くすると溶出力が増大することからもわかるように、イ
オン結合の関与する吸着現象においては、−船釣に溶液
のイオン強度が増加すると、吸着力が弱まる傾向がある
。上記の含窒素環式化合物を結合したパイロジエン吸着
体も、イオン強度が高い薬剤溶液になるとパイロジエン
除去能力が低下する（Ｂｉｏｔｅｃｈ、　Ａｐｐｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｌｌｌ、＋　Ｖｏｌ、１０．　ｐ、１４７
）。イオン強度が高い溶液から、パイロジエンを高度に
除去する能力は、高濃度の薬剤溶液処理の可能性を開く
。

パイロジエンを不活性化させる物質としである種の抗生
物質ポリミキシンが知られているが、強い副作用（腎毒
性）をもつ故に生体内での使用には問題がある。この点
を解決するために、これを不溶性担体上に固定化したパ
イロジエン吸着剤も知られている（特公平１−１６３８
９号公報）。

本願発明は、イオン強度の高い溶液からパイ１ ２ ０ジエンに代表されるホスホポリオール化合物を除去す
る能力に優れ、かつ高流速における圧力に耐え、安全性
の高い吸着分離剤を提供することを課題とする。このよ
うな目的に関して、十分満足できる技術は知られていな
かった。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意研究の結果、本
発明を完成するに到った。

即ち、本発明は、ホスホポリオール化合物を含む溶液を
多孔質吸着剤と接触せしめてホスホポリオール化合物を
溶液中から選択的に吸着保持する分離方法において、吸
着剤が基材と結合した鎖長が２〜５０の脂肪族アミン型
官能鎖をもち、吸着剤のポアサイズが１ｎｍから２０μ
ｍの範囲のものであることを特徴とする分離方法を提供
するものである。特に１級ア果ン型又は２級ア逅ン型の
脂肪族官能鎖をもつ吸着剤を用いることが好ましい。

また、本発明は、多孔質基材とそれに結合した官能鎖を
もち、ポアサイズが１ｎｍから２０μｍの範囲のもので
ある多孔質吸着分離剤において、官能鎖が鎖長２〜５０
の１級アミン型又は２級アもン型の脂肪族官能鎖である
ことを特徴とするホスホポリオール化合物吸着分離剤を
も提供するものである。

本発明の適用されるホスホポリオール化合物を含む溶液
として代表的なものは、パイロジエンを含み、０．０３
〜０．５のイオン強度をもつ薬剤水溶液、特に生理食塩
水程度のものであるが、必要なら、より広範囲のイオン
強度、例えばμ−〇〜５の溶液に適用できる。非イオン
性薬剤溶液等の低イオン強度域では、先行する含窒素環
式化合物を含む吸着剤も高性能を発揮するが、本発明も
また適用可能である。

本発明の吸着剤は、鎖長２〜５０の脂肪族ア５ン型官能
鎖と多孔質基材との結合で構成される。

脂肪族アミン型官能鎖は、複素環型官能鎖、芳香族ア逅
ン型官能鎖、ペプチド型官能鎖等と区別できる。また多
孔質基材はポアサイズにより多孔質でない通常の繊維や
ビーズと区別できる。

この官能鎖は、高重合物でない限定された鎖長をもち、
それに含まれる窒素塩基性官能基は脂肪族の炭素原子の
みに結合している。官能鎖は、実質的に鎖式化合物であ
り、含窒素複素環式化合物や芳香族アミン等、官能窒素
にとり本質的な意味を持つ部分に環式構造を持つ化合物
は排除される。

多孔質基材ψ好ましい例は、ポリヒドロキシル系高分子
である。水酸基のような反応性の部分は基材に官能鎖を
結合させる際に有用である。

例えば基材の水酸基にエピクロルヒドリンを反応させ、
更にアルキレンジアミンを反応させれば、基材の酸素原
子に直結したヒドロキシル置換プロピレン中間鎖とシア
くノアルキレン部分構造をもつ官能鎖が得られる。官能
鎖の脂肪族窒素原子には、更にアミノ酸残基を結合させ
ることもできる。

例えばμｍ０．０７〜０．３のイオン強度の溶液中から
、ホスホポリオール化合物を選択的に吸着する機能を有
することは、本願発明の代表的な特徴である。選択的と
いう語は、例えば蛋白質など酸性の基を持つ薬剤との共
存下において、実質的にパイロジエンを除去し、薬剤を
高得率で回収できるという意味で用いられている。選択
的吸着機能を発揮するｐ）ｌ範囲も広い。例えばμｍ０
．１においてｐｎ＝ａ〜１１の範囲で使用可能である。

本願発明の代表的な分離対象はパイロジエンであり、説
明もこれを主体とする。

本願発明は、通常、吸着保持分離剤として用いられ、一
部の引用先行技術の技術分野であるクロマトグラフィー
とは異なるところがある。

代表的な多孔質吸着剤はポアサイズが１０ｎｍから５μ
ｍ、好ましくは５０ｒ＋ｍから１μｍの範囲のハードゲ
ルビーズである。ハードゲルはその充填層が耐圧縮性（
例えば１ｋｇ／ｃｍ２Ｇ以上）をもち、高速の処理液を
流すことができる。また、多孔質吸着剤は精密濾過膜（
ＭＰ膜）または限外濾過膜（ＵＰ膜）の形状をとること
もできる。

（物理的形状および基材） ５ ６ 多孔質吸着剤の形状は多数のボアを有する網目構造であ
って、液流によって圧潰されない耐圧縮性をもつもので
ある。好適例として、ハードゲルおよび精密濾過膜があ
る。

本発明の分離剤は、物理的骨格を権威する多孔質の基材
に鎖長２〜５０の脂肪族ア逅ン型官能鎖が結合した物質
で構成されており、分離剤の物理的形状は、基材の形状
としばしば事実上同様である。

多孔質の基材は、溶液中のパイロジエンを受は入れてこ
れを吸着することができる程度の大きさのボアを多数持
つ多孔体である。具体例としては、カラムに充填された
ビーズ状ゲルや通過する液と充分接触するに足る厚さを
持つ膜が挙げられる。ビーズ状ゲルの粒子径は通常２〜
２００μｍ程度である。例えば粒子径５０〜２００μｍ
の多孔質多糖類基材や更に微細な粒子を持つ高流速クロ
マトグラフィー用無機担体を例示することができる。異
方性の限外濾過膜の形状を取るものも例示できる。これ
らの膜の構造は、分離膜の分野で従来から知られている
。１枚の膜の厚さは通常１０〜１０００μｍ、特に５０
〜３００μｍであるが、必要に応じ、更に厚い膜を用い
たり、複数枚を重ねて用いることもできる。

多孔質基材や吸着剤はポアサイズにより多孔質でない通
常の繊維やビーズと区別できる。先に挙げたアもノ基含
有繊維や、比較例として示したＤＥＡＥは、多孔質でな
い吸着剤の例として、本発明のものと対比することがで
きる。

親水性ゲルのポアサイズは、例えば次のような方法で測
定できる。即ち、ゲル充填カラムにストークス半径や分
子量の判明している蛋白質、多糖類等の標品溶液を流し
、分子量と保持容量との関係を示す校正曲線を作威し、
その両端から分画分子量を求める。ポアサイズは分子量
に対応するストークス半径を用いる。市販のゲル濾過分
子量測定用標品キットを利用することができる。標品が
吸着剤の官能基と反応する場合は、基材についての測定
値で代用しても良い。

また、疎水性基材の場合は、ヘリウム法や水銀法等の乾
燥状態で測定したポアサイズで代用しても良い場合が多
い。

多孔質膜状吸着体のポアサイズは、膜分離の技術分野で
通常限外濾過ないし精密濾過といわれる範囲、例えば１
ｎｍから２０μｍ１好ましくは１０ｎｍから５μｍ、特
によく用いられるものは５０ｎｍから１μｍ程度である
。分子量の大きい薬剤、例えば蛋白質や多糖類を含む溶
液からパイロジエンを除去する場合は、薬剤の分子径に
応じ、その透過を阻止しないポアサイズの膜を選定すべ
きことは当然である。膜のポアサイズは、例えば膜に吸
着されない粒子の大きさと阻止率の関係から、阻止率９
０％の粒子径をもって表すのが一般的である。ビーズ状
ゲルのポアサイズも膜状分離剤の場合と同様１ｎｍから
２０μｍ、好ましくは１０ｎｍから５μｍ、特によく用
いられるものは５０ｎ１１から１μｍ程度である。

エンドトキシンショック等の場合に、最終手段として血
液中のパイロジエン除去治療が行われる場合もある。こ
のような場合は赤血球等の通過に適した大きなポアサイ
ズが適当である。

多孔質ハードゲル基材の例としては、セルロース、デキ
ストラン、ポリアクリルア案ド、ポリビニルアルコール
等の親水性合成高分子ビーズ及び多孔質シリカゲル等が
挙げられる。アガロースやその誘導体（例：セファロー
ス）は、通常ソフトゲルであり、液流によりもたらされ
る圧力によりボアが押し潰されるので、高速通液処理に
は適していない。例えば、直径１ｃｍ、長さ５０ｃｍの
カラムに下記の本発明実施例に示すＡ−１型のハードゲ
ルを充填し、通液圧力損失を実測すると流速（流速単位
ｍｌ／ｃｍ”時、以下同じ、空塔基準＞　１５００以上
まで直線的であり、流速２００のとき０．１２ｋｇ／ｃ
ｍ”以下であった。この内約３分の１は、空塔の圧力損
失である。一方、セファロースを基材とするソフトゲル
を同様に充填し通液すると、遥かに低流速で急激な圧力
上昇が見られ、流速２００のとき０．８ｋｇ／ｃｍ２Ｇ
程度の圧力損失になる。効率の良い吸着保持処理を行う
ためには、例えば流速２００のときの圧力損工９ ０ 失は、０．５　ｋｇ／ｃｍ”Ｇ以下、好ましくは０．２
５ｋｇ／ｃｍ”Ｇ以下であることが望ましい。

多孔質精密濾過膜型基材の例としては、セルロース膜、
ポリビニルアルコール膜、ポリスルホン膜等、種々の材
質の膜が挙げられる。膜の形状は、平膜、中空糸膜、管
状膜、その他特に限定されることはない。

基材は一般的には不溶性、即ち、取り扱われる液体に溶
解しないものである。溶媒は、通常の場合水であるが、
特別な場合は、アルコール、アセトン、アセトニトリル
、ＤＭＳＯ、クロロホルムなど非水溶媒またはそれらの
水溶液であることを妨げない。窒素原子をもつ官能鎖が
結合した最終的な吸着体において不溶性になればよく、
途中の段階での不溶性は問わない。水に不溶性の多糖類
系の基材の多くは、同時に有機溶媒にも不溶性である。

基材は、一般に高分子物質であり、多くは線状の有機高
分子であるが、分子間力により３次元的に集合している
、３次元的な構造の高分子、無機高分子物質の場合もあ
る（例：多孔質シリカゲル）。多孔質ゲルのビーズの場
合はもちろん、膜・状の場合も厚さがあるので、本質的
には３次元的である。基材は、直接又は間接に窒素原子
をもつ官能鎖を固定できる構造をもつ。例えば水酸基、
ア逅ノ基などの官能基ないし他の物質と反応できる活性
位置（例えば活性水素）を備えている。

具体的には、多糖類（アミノアルキル化多糖類、カルボ
キシアルキル化多糖類などその誘導体を含む。例：セル
ロース及びその誘導体、架橋デキストラン及びその誘導
体、キトサンなど、特開昭５７−１８３７１２号公報の
例示を参照できる）、合成有機高分子（例：ポリアクリ
ロニトリル系、ポリスルホン系、ボリアミド系、ポリビ
ニルアルコール系、ポリスチレン系、ポリアクリル酸系
なと、ヒドロキシアルキル化、アミノアルキル化又はハ
ロゲノアルキル化されたポリスチレン系樹脂、ポリアク
リルアミド樹脂など同じ時開公報に例示あり）、無機高
分子（例：シリヵゲル、アルミナ、ガラス例えばアミノ
プロピル多孔性ガラス、各種セラミック）などが挙げら
れる。また、特開昭５７−１８３７１２号公報記載の水
不溶性担体の中から選ぶことができる。これらの基材に
は、共重合、メチロール化、還元など種々の方法により
官能鎖との結合を作るのに役立つ水酸基、ア藁ノ基など
の官能基を導入することができる。

このような基材は、３次元的な構造を構成し、窒素原子
をもつ官能鎖と結合する。必要に応じスペーサーにより
官能鎖を延長し、窒素原子の自由度を増すこともできる
。多孔質の基材と窒素原子をもつ官能鎖により構成され
る分子構造は、更に上位の構造である分子の会合、ボア
の形成と共に液体と吸着剤との接触に重要な影響を及ぼ
す。本発明の実施に当たっては、適切な基材の選定は極
めて重要である。

（基材と官能鎖との結合） 基材に直接又は間接に窒素原子を持つ官能鎖を結合させ
る固定化方法としては、共有結合、イオン結合、疎水結
合、配位結合などが挙げられる。これらの中で、望まし
いのは窒素原子をもつ官能鎖の離脱のおそれの少ない共
有結合による固定化である。共有結合の例としてアミド
結合、エステル結合、エーテル結合、アミノ結合、イミ
ノ結合、スルフィド結合、ジスルフィド結合、スルホン
結合などが挙げられる。

基材に官能鎖又はスペーサーを結合させる方法は、例え
ば次のようである。ハロゲン化シアン（例ニブロムシア
ン）、エポキシ化合物（例：エピクロルヒドリン、ビス
オキシラン）、ハロゲノ有機酸ハライド（例：クロルア
セチルクロライド、トレシルクロライド）、ジアルデヒ
ド（例ニゲルタルアルデヒド）、ベンゾキノン等を用い
て基材を活性化した後、７５ノ基、水酸基、チオール基
、カルボキシル基などを持つ官能鎖を結合させる。

スペーサー基材を用いる官能鎖の間接的固定化法の例と
して、エポキシ化法（例：エピクロルヒドリン、ビスオ
キシラン）、脱水縮合法３ ４ （ＷＳＣ，ＥＥＤＯ）、還元アくノ化法（ＮａＣＮ＋ボ
ラン、ジメチルアミン＋ボラン）、チオール活性化法（
ＰｙＳＳＰ３１）などがある。これらは、エポキシ、カ
ルボキシル、アミノ、ヒドラジノ、ホルミル、チオール
などの基をもつ基材スペーサー誘導体を、縮合剤、活性
化剤（それぞれの方法の後の括弧内に例示した）を用い
活性中間体となし、ア逅ノ、カルボキシル、アルデヒド
、チオールなどの基をもつ官能鎖と結合させる。

エポキシ法で調製した吸着体は、従来量も多く用いられ
ているブロムシアン法に比べ、官能鎖が安定に固定して
おり、非特異的吸着性が低い点で優れており、本発明に
おいて好ましい結合法である。

窒素原子をもつ官能鎖をイオン結合により基材につける
例としては、イオン交換樹脂の基材に、強塩基性又は強
酸性の置換基をもつ官能鎖を結合する場合を挙げること
ができる。

オクタデシル、オクチル、フェニルなどの基により表面
を疎水性にした基材や、ポリスチレンビーズ等の疎水性
合成樹脂基材等と長鎖アルキル基やフェニル基を結合さ
せた官能鎖とを疎水結合により保持すること（ダイナ逅
ツクコーティング法）も可能である。

基材、スペーサー、窒素原子をもつ官能鎖を結合する固
定化方法については前記公報にも詳しく説明されており
、本発明においてもこのような既に開示された技術を応
用して官能鎖の固定化を実施することができる。

（官能鎖） 多孔質吸着剤において基材に結合した官能鎖は、脂肪族
の炭素原子のみに結合した窒素塩基性官能基をもち、鎖
長が２〜５０、好ましくは３〜３５、特に４〜２５であ
る。鎖長（官能鎖の鎖構成原子数）とは最長の原子鎖に
おいて連続する鎖のメンバーを構成する構成原子数であ
る。例えは官能鎖ＣＨｚＣＨ（ＯＨ）ＣＨＪＨ（ＣＨｚ
）　６ＮＨＫの場合、中間鎖（置換プロピレン）の３と
シア果ノへキシレンの８との合計１１である。

窒素塩基性官能基は、脂肪族炭素原子のみに結合してい
ることが必要である。脂肪族炭素原子の代表例はメチレ
ン基の炭素原子であり、分枝アルキル基の２級炭素、３
級炭素であっても良い。原則として飽和炭素原子である
。窒素塩基性官能基として、１級ア逅ノ、２級ア果ノ、
３級アξノ、４級アンモニウム、イミノ（＝　ＮＨ）等
を挙げることができる。アミジノ基、グアニジノ基は脂
肪族炭素原子のみに結合している限り一体の窒素官能基
として考えることができるが、イソウレア結合のように
酸素原子に結合しているものは除外される。窒素官能基
の中で、１級ア逅ノ基（−ＮＨｚ）、２級ア旦ノ基（−
ＮＨ−）を持つものが特に好ましい。これは、適当な塩
基性を備え、立体的な障害による問題が少ないためと考
えられる。ア逅ド、ニトリル等、塩基性の小さすぎる窒
素原子のみを持つものは、−船釣に吸着性能が劣り、ペ
プチド構造は、本発明における窒素塩基性官能基には含
まない。

このように本発明を特徴づける吸着剤の官能鎖は、脂肪
族アミンを代表とする官能基をもつので脂肪族ア逅ン型
官能鎖と呼ぶ。この官能鎖は、通常アルキル、アルキレ
ン等の炭素原子と−ＮＨ−を主体として構成され、アル
カリ水溶液等に対して安定である。炭素、窒素のほか酸
素（エーテル）、硫黄を含んでいても良い。実用的な安
定性を害しない範囲で、エステル結合、ア逅ド結合等が
存在することも許容される。この官能鎖は、従来の吸着
体の官能鎖である複素環型官能鎖、芳香族ア稟ン型官能
鎖、ペプチド型官能鎖等と区別できる。

脂肪族の炭素原子のみに結合している窒素官能基中の窒
素原子を脂肪族窒素原子と呼ぶことにする。脂肪族窒素
原子は官能鎖の末端構成原子、鎖の中間構成原子のいず
れであってもよい。

また鎖の中間原子に直接または他の脂肪族炭素原子を介
して結合したペンダント窒素原子であってもよい。

官能鎖は、１級または２級アミノ脂肪族窒素原子とそれ
に隣接した３個以上の炭素原子鎖を含むものがよい。先
に例示した官能鎖の場合は、７ ８ ２個の脂肪族窒素原子にヘキシレン基（およびヒドロキ
シル置換プロピレン基）が隣接している。既に記したよ
うに、官能鎖は比較的短い鎖長の実質的に鎖式の化合物
であり、含窒素複素環式化合物や芳香族アミン等、官能
窒素にとり本質的な意味を持つ部分に環式構造を持つ官
能鎖は排除される。しかし、窒素官能基に隣接しない部
分に環式部分構造が存在することは許容される（例：ベ
ンジルアミン型部分構造）。

官能鎖の代表的な例は基材に直結した中間鎖と窒素原子
を含む部分とからなる。脂肪族窒素原子を含む部分は、
アルキレンシアミンや鎖式の塩基性アミノ酸に由来する
ものが代表的なものであるが、単独のアミノ基の場合も
有り得る。

中間鎖と脂肪族窒素原子を含む部分とのモル比は、１：
１に限らない。

中間鎖を持つ吸着剤の化学構造を模式的に表せば、次の
各種の型が例示できる。

基材−中間鎖一含窒素部分 基材一中間鎖一含窒素部分一中間鎖一基材基材一中間鎖
一含窒素部分へ一含窒素部分Ｂ例えばヘキサメチレンジ
アミンがエポキシメチル化された基材と反応する場合を
考えると、第１のタイプ（１：１反応生成物）は１級ア
ミノ基と２級アミノ基とをｌ：１で持つが、第２のタイ
プ（１：２反応生成物）はすべて２級アミノ基となる。

実際にはこの再反応が同時に起り混合物が得られる場合
もある。その程度はアミノ基の分析から知ることができ
る。両者の性能は大差ない場合もあるが、第２のタイプ
を多く含むものが優れている場合もある。

中間鎖の鎖長は通常２〜１０程度であるが必要に応じて
スペーサー等により長くすることができる。エピクロル
ヒドリンを用いた場合、中間鎖の鎖長３のものを主とす
るが、副生または意図的に作った複数モル付加物を有り
得る。

ポリヒドロキシル系高分子を基材とする場合を例として
官能鎖を結合させる方法を例示する。

基材は、本来多数のヒドロキシル基を持つもの（例：多
糖類、ポリビニルアルコール系高分子、シリカゲル）で
も、他の高分子化合物を加工して多数のヒドロキシル基
をつけたものでもよい。

脂肪族窒素原子を含む部分は基材に直接結合させてもよ
い。例えばセルロースを塩化アミノアルキルと反応させ
ればア果ノアルキルセルロースが得られる。しかし、し
ばしば結合剤を用いて窒素原子を含む部分を結合させる
。結合剤の例はエピクロルヒドリン、グルタルアルデヒ
ド、ブロムシアン等であり、それぞれ３個、５個、１個
の炭素鎖をもつ中間鎖ができる。これらについては別の
項目で既に説明した。

窒素原子を含む部分を構成するためにはアルキレンジア
ミン、塩基性の鎖式ア果ノ酸等の複数のアミノ基をもつ
化合物、塩化アミノアルキル等の１個のアミノ基を持つ
化合物が用いられるが、最も単純にアンモニアを用いて
目的を達する場合もある。

これらの反応の結果、アミノ基と、それに隣接した炭素
鎖をもつ官能鎖が基材に結合される。

炭素鎖は窒素原子と基材との間にあってもよいし、反応
側にあってもよい。官能鎖が基材を架橋する形になって
もよいことは先に記した。

以下、官能鎖を例示する。

官能鎖例Ａ： ＣＨｇＣＨ（ＯＨ）ＣＨＪＨＲ＋ Ｒ＋の例として水素原子及び下記の基を挙げることがで
きる（角括弧内はＲ＋に対応する化合物ＲＩＮＨ，又は
ＲＩＯＩ＋である）。

Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨｚ　　（グアニジン）　、　（ＣＨｚ
）、Ｎ）ｔｚ　（ｎ＝１〜１２、例えば６）〔アルキレ
ンシアくン〕。

ＧＯＣＩ（ＮＨ２）（ＣＨ２）　４ＮＨ２（リジン〕Ｃ
０ＣＨ（ＮＨ２）　（ＣＨｇ）　３ＮＨ２（オルニチン
〕ＧＯＣＩ（ＮＨ２）（ＣＩ（ｇ）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）
ＮＨ２Ｃアルギニン〕〔生体ポリアミン（スペルミジン
、スペル果ン等両端のＮＨ２と中間のＣＨｚ、　ＮＨと
で構成された鎖長１７までの直鎖ポリアミンが知られて
いる。）〕官能鎖例Ｂ： ＣＨ２Ｃｌ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ（Ｃ１ｈ）５ＮＨＩｈ１ ２ Ｒ２の例；（ＣＨ２）ｌｌＮＨ２（ｎ＝１〜１２）。

（ＣＨ２）ＩＩＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２（ｎ＝１〜１２
）官能鎖例Ｃ： ＣＨ２Ｃｌ　（ＯＨ）　ＣＨ２ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２Ｃ
ＯＮＨＲ３Ｒ３の例：　（ＣＨ２）−ＮＨ２（ｎ＝１〜
１２）。

（ＣＩｌｚ）ＩＩＮＩＣ（＝ＮＨ）ＮＨｚ　（ｎ＝１”
’１２）官能鎖例Ｄニ ー　ＣＨ２Ｃｌ　（ＯＨ）　Ｃ１ｌ□Ｎｔｌ（ＣＩｌｚ
）　６ＮＨＲ４Ｒ４ノ例：　Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２，Ｃ０
ＣＨ（ＮＨ２）　（ＣＨ２）　４ＮＨｚ（ＣＨｚ）　、
ｌＮＬ　（ｎ＝１〜１２）更に次のタイプのアミン型官
能鎖を例示することができる。Ｒは水素、アルキル基、
脂肪族窒素塩基性官能基で置換されたアルキル基である
。八は水素又はメチル基である。

（ＣＩ２）ｎＮＦＩＲ ＲがＨ，ｎ＝１の場合に鎖長は最小の２となるが、鎖長
３以上のものの方が安定性に優れ、好ましい。ＲがＨｌ
　例えばｒ＋−６の官能鎖が多孔質セルロースと結合し
たものは多孔質アミノヘキシルセルロースである。

（ＣＨｚＣｔ（ＪＨ）、ｌ　Ｒ （Ｃ）ｌｚｃＨｏ）　１ｌＣＨｚＣｔｌＮＨＲ１八八 （ＣＨ２Ｃｌ（ＯＨ）ＣＨ２０（ＣＨ２）ｌＩ　Ｃ６Ｈ
４（ＣＨ２）ｌＩＮＨＲＣ（＝ＮＨ）ＮＨ（ＣＨ２）、
１ＮＨＲこれらのアミン型官能鎖が多孔質基材に結合し
た物質の中には、アフィニティー吸着剤を製造するため
のベースゲルとして知られているものもあるが、それ自
身が吸着剤として用いられているものではない。

（代表的な分離剤） 代表的な分離剤は、セルロースを基材として、前記−Ｃ
Ｈ２Ｃｌ（ＯＨ）ＣＨｇＮＨＲＩ型の脂肪族鎖を備えた
構造をもつものである。基材にエピクロルヒドリンを縮
合させ、次いでアンモニアで開環させれば、Ｒ１１のも
のが得られる。実施例においてＢ−１型として示される
分離剤は、セルロースを基材とするこのような構造の分
離剤で、粒径５０〜２００μｍ程度のビーズ状のゲルで
あり、ボアの大きさは約１００〜５００ｎｍ程度である
。

Ｂ−１型又はそれを製造する際に得られる中間体と、先
の例Ａの説明で角括弧内に示したような種々の化合物と
を反応させることにより、例Ａの構造（ＲＩ＝Ｈ以外）
を得ることができる。

Ａ−１型として示される分離剤は、セルロースエピクロ
ルヒドリン縮合物をヘキサメチレンシア逅ンで開環させ
て得られる、官能鎖 ＣＨｚＣＨ（ＯＨ）ＣＨｔＮＨ（ＣＨｚ）　ｂＮＨｚを
持つセルロース誘導体である。＾−１型に、更にリジン
を反応させればＡ−２型が、０−メチルイソ尿素を反応
させればＡ−３型が、アルギニンを反応させればへ４型
が得られる。また、Ｂ−１型にリジンを反応させればＢ
−２型が、０−メチルイソ尿素を反応させればＢ−３型
が、アルギニンを反応させればＢ−４型が得られる。

セルロースに代えてアガロース又はその誘導体を基材と
したものも分離剤として用いることができるが、これら
はソフトゲルであり、高い流速で用いるには適していな
い。

合成樹脂糸の基材を用いた分離剤を例示することもでき
る。

ポリスチレン系：スチレン・ジビニルベンゼン共重合体
のベンゼン核のｐ−位をクロロメチル化し、トリエチル
アミンと反応後、更にヘキサメチレンシア旦ンと反応さ
せて、官能鎖ＣＨＪＨ（ＣＴｏ）　６ＮＨ２が、ポリス
チレン系樹脂の基材に結合した分離剤を得る。

親水性ビニルポリマー系：前記Ａ−１型の製法において
、セルロースエピクロルヒドリン縮合物の代りに、エポ
キシトヨパール６５０Ｍ（東ソー製）をベースゲルとし
て用いる。

粒子サイズ４４〜８８μｍのものをカラム（内径１６ｍ
ｍ、高さ１５０１１ｍ）に充填した場合、圧力０．２　
ｋｇ／ｃｎ”Ｇで０．５１．／時（ＳＶ＝１７）の液を
処理することができる。

ＰＶＡ系：膜状のものを実施例３に示した。分離剤の形
状はビーズ状でも良い。

ポリスルホン系：例えば酵素固定化膜の材料として市販
されているアミノ基のついたポリスルホン系ＭＰ膜等の
材料を用いれば、官能５ ６ 基をつけやすい。グルタルアルデヒドを用いて活性化処
理を行い、脂肪族窒素原子をもつ化合物を反応させる。

ヘキサメチレンシア逅ンを用いた場合、窒素原子に隣接
した５個および６個の炭素鎖を持った官能基が形成され
る。

（処理方法） 本発明の適用される代表的な液を、４種類に分類して処
理方法と分離機能を説明する。

ケース１：酸性高分子を含む試料 酸性蛋白質（例：　ＨＳＡ）溶液がその代表である。パ
イロジエンも薬剤も共に負に帯電しているが、パイロジ
エンの方がより強力に分離剤と結合することで選択的吸
着が実現する。

これを実現するためにはイオン強度はやや高い範囲とす
ることが好ましい。μ＝Ｏ，（１２〜０．２、パイロジ
エン除去率が悪い場合はイオン強度μを０．０２〜０．
０７に設定し、更に必要に応じて薬剤の等電点付近で処
理を行う。また、試料の回収率が悪い場合は、吸着体の
使用量を許容できる範囲で減少させ、薬剤の等電点以下
で処理を行う。

ケース２：塩基性高分子を含む試料 薬剤または夾雑物が正に帯電し、パイロジエンとアフィ
ニティーをもつので最も難しいケースである。パイロジ
エン吸着はイオン強度０．１以下で処理することが望ま
しい。但し塩基性物質とパイロジエンの親和性が高いと
きはイオン強度を高くする必要のあることもある。除去
率が悪い場合は、ｐＨを８以上から試料の等電点迄の条
件で処理するが、等電点付近では試料の溶解性が悪くな
るので注意を要する。

ケース３：ガンマグロプリン製剤等 中性の高分子量蛋白質はｐＨ７付近、イオン強度０．１
以上で処理することが望ましい。ｐＨ５付近まで下げた
場合は、グロブリンにパイロジエンが吸着して除去率が
低下する場合がある。

ケース４：透析液、糖、アミノ酸輸液等ｐＨ３〜１０が
望ましい。イオン強度はパイロジエン除去率に影響がな
い。但し、塩基性の低分子有機物が混入する場合には、
イオン強度０．０２以上の設定が望ましい。

（分離機能） この発明の分離剤は、例えば下記のような生理活性物質
の溶液と接触して、溶液中からパイロジエンに代表され
るホスホポリオール化合物を選択的に吸着分離する機能
を持つ。

生理活性物質ニ ア逅ノ酸（例えばヒスチジン、アラニン、プロリン）、
核酸塩基（例えばアデニン、シトシン）、抗生物質（例
えばペニシリンＧ）、ホルモン（例えばインスリン）、
ビタミン（例えばフラビン・アデニン・ジヌクレオチド
）、血清蛋白質（例えばアルダごン、γグロブリン）、
酵素（例えばウロキナーゼ、アスパラキナーゼ、リゾチ
ーム）、抗体（例えばイムノグロブリン）、ワクチン（
例えばインフルエンザワクチン）。

また、デキストラン注射液、果糖注射液、ブドウ糖注射
液、輸液用クエン酸ナトリウム液など、注射液や点滴液
及び濾過型人工腎臓用の補液等も対象となる。

これらの薬剤溶液の濃度、イオン強度はさまざまである
が、生体中に直接投与する場合、そのイオン強度は、生
理食塩水（μｍ０．１５）程度である。

処理される液に混入しているパイロジエン濃度もさまざ
まであるが、数十μｇ／ｍ１以下であることが好ましく
、特に１００　ｎｇ／ｍ＋以下の微量なパイロジエンを
吸着除去することもできる。

薬剤中のパイロジエン濃度が極度に高い場合は、ＵＰ膜
等の前処理を行ってから本発明の分離剤を使用するのが
、しばしば効果的である。

本発明の分離剤を用いる液処理法としては、基材がゲル
状であれば、バッチ法、カラム法が用いられる。基材が
精密濾過膜等の場合は平膜やモジュールにして使用され
、本発明者らの出願に係わる特願平１−２０６３３６号
明細書に記載さ９ ０ れた膜状の分離剤を用いる技術を本発明と組み合わせて
用いることができる。膜状の分離剤は、処理すべき原液
中のパイロジエン濃度に応じた使い方ができる。比較的
低濃度、例えは５００ＥＩＩ／ｍｌ以下の原液は、普通
の膜厚のものを用いても微量のパイロジエンを吸着除去
できる。原液中のパイロジエン濃度が極度に高い場合に
も厚い膜（重ねて用いてもよい）を使用すれば、入日付
近の高濃度に対してはボアの大きさによる分離作用が、
出口付近の低濃度に対しては吸着作用が発揮され、ワン
バスで高度の分離が実現する。

本発明は、通常、高いイオン強度の溶液からパイロジエ
ンを吸着保持することにより薬剤と分離する。このよう
な吸着保持分離法は、吸着と溶離を平行して行なうクロ
マト分離法と区別できる。吸着剤との親和性の特に大き
い薬剤の場合、回収率が低くなる場合がある。このよう
な場合、パイロジエンと共に薬剤を吸着した吸着剤を、
より高いイオン強度の溶液で処理すると、薬剤を選択的
に溶出させ、回収することができる。

（耐アルカリ性と再生性能） パイロジエンを吸着した分離剤はしばしばアルカリ性の
条件で処理再生される。本発明の分離剤は０．２ＮのＮ
ａＯＨ（２０％エタノール水溶液）に１か月装置しても
性能変化がなく、アルカリに対して安定である。例えば
実施例１５の測定方法で１０回の再生を繰り返して性能
変化を見れば、本発明の分離剤がペプチドを主体とする
官能鎖をもつ従来品に比較して、優れた耐アルカリ性と
再生性能を持つことわかる。

〔発明の効果〕

この発明は特定の構造をもつ吸着剤を用いることにより
、イオン強度の高い溶液からのホスホポリオール化合物
除去に効果のある分離法を提供する。この方法は除去率
、到達濃度、薬剤回収率などに優れ、かつ安全性が高い
。この方法に用いられる分離剤の一部には、物質自体が
公知のものもあり、合成中間体として示唆されていたも
のもある。また、分析用クロマトグラフィー担体等の異
なる使用法をする分離剤として知られていたものもある
。しかし、代表的な分離剤については、分離剤として知
られていなかったものもある。即ち、本発明は、新規な
吸着分離剤をも提供することができる。

本発明の分離剤を用いると、比較的高いイオン強度の溶
液からパイロジエンを除去できる。

また、蛋白質のような薬剤を含む溶液から１回のバッチ
処理により９９％除去率でパイロジエンを分離すること
ができる。パイロジエン１００ｎｇ／ｍｌを含む原液を
処理すればｌｎｇ／ｍｌになるし、ｌｎｇ／ｍｌの原液
を処理した場合、１０ｐｇ／ｍｌに到達できる。蛋白質
のような薬剤を含まない場合は、パイロジエン１１００
ｎ／ｍｌを含む原液から１回のバッチ処理により検出限
界のｌｐｇ／ｍｔ以下となる。これを除去率にすれば９
９．９９９％以上である。

また、従来のパイロジエン吸着体に比べて広いｐＨ範囲
で使用できる。使用可能なｐｎ範囲はイオン強度μによ
り異なるが、μｍ０．１の場合、ｐＦ１３〜１１で使用
可能である。

本発明における分離剤の作用機構は必ずしも明らかでな
いが、本発明の詳細な説明すると次の通りである。

即ち、この分離剤は多孔質の基材と官能鎖を備え、ボア
を通じて透過する液と密接に接触し、パイロジエンを選
択的に吸着保持する。基材は巨大分子であって、分離剤
全体としては不溶性を保っているが、多孔質であり、ま
た脂肪族鎖も立体構造の自由度をもつため、パイロジエ
ンや核酸のような大きな分子を受は入れ、官能基を適切
な位置にもってきて吸着作用を発揮するのに適切な構造
になるものと考えられる。従来からある吸着剤、例えば
塩基性イオン交換樹脂には、ポリスチレンよりなるマク
ロポーラスな基材にア逅ノ基が結合されたものがある。

このような吸着剤であっても水中のパイロジエンを除去
する能力は認められるが、自由度のない構造の吸着剤で
は、蛋白質などの薬剤の入った液３ ４ から９９％に達する高い除去率でパイロジエンを選択的
に吸着する能力はない。

この発明における官能鎖は、鎖構成原子数３ないし５０
個の脂肪族鎖であり、含窒素環式化合物を官能基とする
先行技術のパイロジエン分離剤に比べて高いイオン強度
の溶液に用いた場合、特に優れた性能を発揮する。３以
上の鎖構成原子は、基材のポリスチレン芳香核にアミノ
基が直結した（鎖構成原子数−０）イオン交換樹脂の場
合には期待できない官能基の自由度を与える。一方、本
発明の鎖構成原子数は、抗生物質ポリ逅キシンのそれよ
りはずっと小さく、比較的単純な分子を官能鎖として使
えるので、万一官能鎖が、基材から外れて液中に混入し
た場合も深刻な生理的副作用を引き起こす危険は少ない
。

本発明においては、基材と結合させるものは鎖長が短い
比較的単純な構造の脂肪族窒素原子を含む鎖であり、薬
剤とパイロジエンの種々の組み合わせに対処する等、必
要に応じて官能鎖の構造を変えることによって所望の吸
着性能の分離剤を得ることが容易である。先行技術のあ
るものに見られる分子量の大きく、しかもクロスリンク
されたグラフトコポリマーは、複雑な構造の混合物であ
り、性能に影響する要因が多いだけに、多様なニーズに
応じてバラエティのある製品品種群を開発するのは、本
発明による場合のように容易ではないと思われる。

以上のような権威をもつ本願発明の分離剤は、例えばイ
オン強度μｍ０．１６のヒト血清アルブミン溶液（市販
１（ＳＡ濃度５％にＥ、ｃｏｌｉ　０１１１：Ｂ４（フ
ェノール抽出法）を１１００ｎ／ｍｌと食塩を添加した
試料）をバッチ処理して、パイロジエンの９０〜９９％
を除去できる性能を持つことができる。

〔実施例〕

以下、実施例により本発明の詳細な説明するが、本発明
はこれらの実施例に限定されるものではない。

尚、以下の実施例において吸着剤重量は原則としてｗｅ
ｔ　ｗｅｉｇｈｔで表す。但し、分析値はｄｒｙｗｅｉ
ｇｈｔについての値である。

実施例１ 下記分離剤を用い、下記に示す被処理液について、パイ
ロジエン除去試験を行った。

〈分離剤〉 Ａ−１型： 水洗後吸引濾過（２分）により脱水したビーズ状の多孔
質セルロースゲル担体（ａ）　５０ｇｗｅｔを、０．６
Ｎ苛性ソーダ１１０　ｍｌに分散し、エピクロルヒドリ
ン１６ｍ１を加え、６０°Ｃで３０分反応させる。濾過
水洗したエポキシ活性化中間体（ｂ）にリガンド溶液を
添加し７０°Ｃ１１時間反応する。リガンド溶液は、６
５％へキサメチレンシア果ン４ｍｌを水１００ｍ１に溶
解した。濾過、水洗し、塩酸でｐＨ１０，４に調整し、
水洗、脱水して、ｗｅｔ　Ａ　−１型吸着剤（ｃ）約５
５ｇを得る。

（ｂ）　　　１５．８．　　エポキシ含量（μｍｏｌ　
７ｇ　ｄｒｙ）　　１７４ （ｃ）　　　　１８．２　　、　　１．４５ｍ１／ｇ　
ｗｅｔヘキサメチレンシア藁ン含量（μｍｏｌ／ｇ　ｄ
ｒｙ）　１３３　（元素分析） この分離剤は、おもな官能鎖として ＣＩｌ□Ｃ１（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨ２（
鎖長１１）を持つ。

同様な製法で、反応条件を変化させて、ヘキサメチレン
シアミン含量５０〜６００の分離剤を得ることができる
。反応条件を変化させて得た分離剤は、おもな官能鎖と
して ＣＨ２Ｃｌ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２）６ＮＨＣＨｇ
Ｃ）ｌ（ＯＨ）Ｃ）１２　（鎖長１４）とＣＨｚＣＨ（
ＯＨ）ＣＨＪＨ（ＣＨｚ）６ＮＨｚ（鎖長１１）とを併
せ持つものもあると考えられる。

Ａ−２型： Ａ−１型とリジンの縮合反応で得られる。

官能鎖 ＣＨｚＣＨ（ＯＨ）ＣＨＪＨ（ＣＴｏ）　６ＮＨＣＯＣ
Ｈ（ＮＨｇ）　（ＣＨ２）　４ＮＨ２を持つ。

＾−３型： Ａ−１型と０−メチルイソ尿素を縮合反応させグアニジ
ン末端とする。

７ ８ 官能鎖ＣＨ２ＣＩ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＩＩ（ＣＨ２）　６
ＮＨＣ（＝ＮＩＩ）Ｎｌ＋□を持つ。

Ｂ−１型： 多孔質セルロースゲルを基材とし、エピクロルヒドリン
とアンモニアを付加させて得られる。官能鎖ＣＨｚＣＨ
（（ＩＨ）ＣＨＪＨｚ。

ＣＨ２Ｃｌ（ＯＨ）Ｃｌ１□Ｎ１１ＧＨｚＣＨ（ＯＨ）
ＣＨｚを持つ。粒径５０〜２００μｍ程度のビーズ状、
ボアの大きさは約１００〜５００ｎｍ程度。

Ｂ−２型： Ｂ−１型とリジンの縮合反応で得られる。

官能鎖ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨＣＯＣＨ（Ｎ１１
２）　（ＣＨ２）　４ＮＨＫを持つ。

Ｂ−３型： Ｂ−１型とＯ−メチルイソ尿素の縮合反応で得られる。

官能鎖ＣＨｚＣ）ｌ（ＯＨ）ＣＨｚＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｎ
Ｈｇを持つ。

く被処理液〉 ・原液１：市販１（ＳＡ　（、ヒト血清アルブミン、濃
度５％、イオン強度μ＝０．０２）に標準エンドトキシ
ンＥ、　ｃｏｌｉｏｌｌｌ：Ｂ４１００ｎｇ／ｍｌ添加
原液２：市販Ｎ３八（濃度２０％、イオン強度μ＝０．
０７）にＥ、　ｃｏｌｉｏｌｌｌ：Ｂ４１００ｎｇ／ｍ
ｌ添加原液３：原液１に食塩を添加してμ＝０．１６に
調製 原液４：市販ＩＳＡ　（濃度５％）に食塩を添加してμ
＝０．１６に調製し、更にＥ、　ｃｏｌｉｏｌｌｌ：Ｎ
４１　ｎｇ／ｌｌ１ｌ添加 原液５　：　Ｅ、　ｃｏｌｉｏｌｌｌ：Ｂ４１００ｎｇ
／ｍｌをパイロジエンフリー水に添加 〈パイロジエン除去（バッチ法）〉 試験方法：原液１ｍｌと分離剤（ｗｅｔ）　１００ｍｇ
を、パイロジエンフリーのガラス製試験管の中で室温、
５０ｒｐｍで１時間撹拌、溶液中の残存パイロジエン濃
度をリムルスＥＳテスト、ワコー（商標）を用い、トキ
シンメーターＥＴＩＯＩ（和光施薬製）で比濁時間法に
て測定し、これからパイロジエン除去率を計算する。ｌ
ｌ５Ａ回収率は、ＧＰＣ分析法にて測定する 結果： 本発明の分離剤により各種原液を処理した結果を第１表
に示す。

本発明の分離法は、イオン強度の高い領域で優れたパイ
ロジエン除去性能を示す。

第　　　１　　　表 比較例１ 下記に示す比較のための吸着体（市販のイオン交換体）
を用いて、実施例１と同様な方法で原液１及び２を処理
した。結果を第２表に示す。

これらの比較の吸着体はいずれも水中のパイロジエン除
去については良好な除去率を示す。

〈比較の吸着体〉 ＩＲＡ： 弱塩基性のカチオン交換樹脂アンバーライト（商標）Ｉ
ＲＡ−９３、基材はポリスチレン系のマクロポーラスビ
ーズ、リガンドは芳香核に直接結合したジメチルアミノ
基。

ＴＥＡｆ！及びＤＥＡＥ： 共に５ｅｒｖａ社製セルロース系イオン交換体、基材は
微繊維性セルロース（微顆粒状）、ＴＦｔＡＢのリガン
ドはセルロースの０１（を置換した０ＣＨ２Ｇ）１２Ｎ
′″（ＣＪｓ）ｓ、ＤＥＡＥのリガンドはＯＣＨｇＧＨ
ｚＮ　（ＣＪｓ）　ｚで、それぞれ強塩基性及び中塩基
性を呈する。

ＢＣＷ　： キトサンビーズＢＣＷシリーズ２５０３　（富士紡績〉
、キトサンビーズに４級アミンを化学結合した強塩基性
アニオン交換樹脂 １ ２ 第　　　２　　　表 第　　３　　表 第２表から明らかなように、比較の吸着体はある程度の
パイロジエン除去効果を示すものもあるが、９０％以上
に達する除去性能はないことが確認された。

実施例２ Ａ−１型の分離剤０．１ｇｗｅｔを用いて、バッチ吸着
法により、薬剤水溶液２ｍｌに含まれる天然のパイロジ
エン除去性能を確認した。

試料、処理条件および結果は第３表の通りである。

國 ）ぞ１ 実施例３　（ＡＩ−ＰＶＡ膜の調製） ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）中空糸膜（クラ−５Ｆ
−４０１，ポアサイズ約０．１　μｍの均質膜、内径３
３０　ｐ　ｍ−１膜厚１２５，１／１１１．有効長５．
５ｃｍ）　３本を、ガラス管にエポキシ樹脂で固定した
ミニモジュールを作成した。以下このモジュールを用い
、下記■〜■の順番で中空糸膜を液と接触させて膜に素
材の化学反応を含む処理を施し、ＡＨ−ＰＶＡ膜吸膜体
着体た。膜と液との接触方法としでは、液を流速２０〜
５０ｍ１／分で中空糸膜の内外に循環させた。温度は、
モジュール全体を水浴に浸して調節した。

■　洗浄（ＩＭ　ＮａＣ１，純水） ■　エポキシ化（６０″Ｃ，ＩＮ　ＮａＯＨ，９０ｍ１
．さらにエピクロルヒドリン１０ｍ１を添加して２時間
）■　洗浄（純水） ■　スペーサー結合（０，６２５％へキサメチレンシア
〔ン水溶液４０ｍ１．６０°Ｃ，２時間）■　洗浄（純
水） ■　膜自体のパイロジエンフリー化（２０％エタノール
を溶媒とする０、２Ｎ　Ｎａ０Ｈ）このようにして、ヘ
キサメチレンジアミンを含む官能鎖を固定したＰＶＡ膜
（ＡＨ−ＰＶＡ膜）を得た。

ＡＨ−ＰＶＡ膜の元素分析値（％）を、原料ＰＶＡ膜の
元素分析値と比較して以下に示す。

試料名　　　炭素　　水素　　窒素 原料ＰＶＡ膜　５５．１４　　７．９２　　０．０２Ａ
Ｈ−ＰＶＡ膜　５４．９２　８．００　０．１７実施例
４　パイロジエン除去 ミニモジュールに組み込まれたへ〇−ＰＶＡ膜（膜面積
１．７ｃｍ”の実施例３の膜）に、パイロジエン（Ｅ、
　ｃｏｌｔ　０１１１　　：　Ｂ４由来）濃度３３００
ＥＵ／ｍｌの原水５０ｍ１を１３ｍ１／分の速度で循環
し、膜透過速度を０．２　ｍ１７分（７０ｆｆｉ／ｍ２
時）になるよう圧力コックを調整した。供給圧力約０．
２ｋｇ／ｃｍ２Ｇ０透過液のパイロジエン濃度は、リム
ルスＢＳテスト、ワコー（商標）を用い、トキシノメー
ターＥＴ−２０１（いずれも和光施薬工業製）で測定し
た。透過液量２５ｍ１の場合の濃度は０．３３ＥＵ／Ｈ
１，パイロジエン除去率は９９．９９％であった。

比較例２ 比較のため、実施例３で吸着体製造に用いた出発物と同
じＰＶＡ中空中空糸膜旦夕モジュールいて、同様のテス
トを行った。通常の膜分離により得られる透過水のパイ
ロジエン濃度は６２７ＥＵ／ｍｌ、パイロジエン除去率
は８１％であった。

実施例５　生理食塩水中のパイロジエン除去パイロジエ
ン４６３０ＥＵ／ｍｌを含む０．９％食塩水５ ６ （ｕ−０，１５）を用い、実施例４と同じ１．７ｃｍ２
Ａｌｌ−ＰＶＡ膜により同様に処理した。

処理後のパイロジエン濃度と０．０８ＥＬｌ／ｍｌ、除
去率９９．９９８％であった。

実施例６　チトクロームの処理 実施例３と同様の方法で調製したＡＨ−ＰＶＡ膜を用い
、実施例４と同様の方法で処理した。

試料：チトクロームＣ（分子量約１２５００）　１０％
、パイロジエン１１３０ＥＵ／ｍｌ、　ｐＨ９，０、μ
＝０．０２、液量２００ｍ１ 膜モジュール：＾Ｈ−ＰＶＡ、　　有効膜面積５０ｃｍ
２、循環速度１００ｍ１７分、透過速度 ４．５　ｍ１７分 結果：透過液のパイロシュン濃度０．２３ＥＵ／ｍ！、
除去率９９．９８％ 透過液のチトクローム濃度１０％、うさぎの発熱性物質
試験は陰性 また比較のためにＰＶＡ膜を用いて同様に処理したとこ
ろパイロジエン濃度は６２２ＥＵ／ｍｌ、除去率は４５
％であった。

実施例７　１１３Ａの処理 実施例６と同し５０ｃｍ２ＡＩ　−ＰＶ＾膜モジュール
を用いて同様に処理した。

試料：ヒト血清アルブミン（ＩＳＡ）　２０％、パイロ
ジエン８５ＥＵ／ｍ１．．ｐＨ６，５、μ＝０．０７、
液量１００ｍ１ 結果：透過液のパイロジエン濃度０．８４ＥＩＪ／ｍｌ
、除去率９９％ また比較のためにＰＶＡ膜を用いて同様に処理したとこ
ろパイロジエン濃度は７５ＥＵ／ｍｌ、除去率は１２％
であった。

実施例８（イオン強度の影響、ｐｔ＋はいずれも７）パ
イロジエン１１０００ｎ／ｍｌを含む種々の食塩水１ｍ
ｌにＡ−１型の分離剤０．１ｇを加え、２５゛Ｃで１時
間撹拌（２５ｒｐｍ）後、上滑のパイロジエン濃度から
吸着率を測定した。イオン強度とパイロジエン吸着率と
の関係は次のようであり、広範囲のイオン強度における
高い吸着率を確認した。

７ 用いたパイロジエンはＥ、Ｃｏ１１０１１１：Ｂ４由来
のものである。

比較例３ 含窒素環式化合物をリガンドとする分離剤を用いて実施
例８と同様に処理した場合、より低いイオン強度で吸着
率の低下が見られた。その限界はパイロジエンの種類に
より異なり、Ｅ、Ｃｏ１ｔＵＫＴ−Ｂ由来のものは、μ
−ｏ、ｉ迄はｉｏｏ％吸着し、μｍ０．２で吸着率８２
％、０．３で５％になった。Ｅ、Ｃｏ１１０１２８：Ｂ
１２由来のもは、μｍ０．１で吸着率４０％、０．２で
は０％であった。

実施例９　（ｐＨの影響） μｍ０．１で種々のｐｎをもつパイロジエン水溶液（１
０００ｎｇ／　ｍｌ）を実施例８と同様の方法で試験し
た。パイロジエンの種類、濃度、分離剤は実施例８と同
じである。ｐｎとパイロジエン吸着率との関係は次のよ
うであり、広範囲にわたる吸着性能を＊認した。

比較例４ 含窒素環式化合物をリガンドとする分離剤を用いて実施
例９と同様に処理した場合、より低いｐＨで吸着率の低
下が見られた。μｍ０．１の場合、ｐＨ７以下では吸着
率１００％であるが、ｐＨ８で約９０％、ｐＨ９で０％
になった。μｍ０．０２ではｐＨ８迄は１００％吸着し
、ｐＨ９で約６５％になった（Ｅ、Ｃｏ１１　ＬＩＫＴ
−Ｂ由来のパイロジエンを使用）。

実施例１０（透析液） 標準パイロジエンを添加して１４４０ｐｇ／ｍｌに調整
した透析液を滅菌したポリスチレン試験管に取り、液の
０．１倍量の吸着体を添加し、ラウンドくキサ−で２０
分撹拌後、濾過し、パイロジエン濃度を測定した。

Ａ−１型体着剤で処理後のパイロジエン濃度は１．５ｐ
ｇ／ｍＬ　　Ｂ　−１型体着剤で処理後のパイロジエン
濃度は１８５ｐｇ／ｍｌであり、Ａ−１型体着剤は、吸
着速度の点で８−１型よりも優れていると考えられる。

実施例１１（カラム法） ９ ０ 実施例１０の試験法で良好な成績を示した２種類の吸着
体を用いて、カラム法で流出液のパイロジエン濃度を測
定した。

結果を第４表に示す。

カラム：内径１０ｍｍ、充填高さ８０ｍｍ（８，３ｍ１
）原液：透析液にＥ、Ｃｏ１１０１１１：Ｂ４を添加し
てパイロジエン濃度１ｎｇ／ｍ＋に調整 第　　　４　　　表 を反応させて多孔質吸着剤ＡＡ−（：を得た。ポリスチ
レンイ逅ン（分子量４〜５万）を用いて同様の方法で多
孔質吸着剤ＰＨＩ−Ｃを得た。また市販のポリアリルア
ミンビーズをＦＡＡ　−Ｂとする。これら３種類のビー
ズを用いて、実施例８と同様のバッチ法で吸着試験を行
なった。

いずれのビーズも生理食塩水中のパイロジエンをよく吸
着したが、５％Ｈ３Ａ溶液中のパイロジエン吸着率は５
０％以下であった。原液のイオン強度、パイロジエン濃
度ｎｇ／ｍｌおよび吸着処理後のパイロジエン濃度ｎｇ
／ｍｌを第５表に示す。

第　　　５　　　表 ＸＡＤ−２は、実施例１０（７）試験法で４ｐｇ／ｍｌ
と八−１型に次いで良好な成績を示したが、この試験で
はＡ−１型と異なり、大きさｓｖにおける吸着性能を発
揮しない。

比較例５ エヒクロルヒドリンを反応させたセルロースビーズにポ
リアリルアくン塩酸塩（分子量６万）実施例１２（カラ
ム法） ＾−１型吸着剤を用いて、カラム法でＩＳＡ溶液中のパ
イロジエンを除去した。

原液：５％Ｈ３＾＋２Ｍ　ＮａＣ１＋Ｅ、Ｃｏ１１０１
１１：Ｂ４（ＤＩＦＣＯ）　、ｐＨ６，４、μ工０．１
５処理法：　）ＩｓＡ溶液を用いて、カラムを平衡化し
た後、流速をＳＶ　＝　３０から２まで変化させ、処理
液のパイロジエン濃度を求め る。

カラムサイズ：内径１０ｍｍ、高さ６０ｍｍ結果：第６
表に示す。

第　　　６　　　表 １時間撹拌濾過しパイロジエン濃度（ｎｇ／ｍｌ）をリ
ムルステストで測定した。

結果を以下に示す。

原液パイロジエン濃度　　１７０００　　１３０００Ａ
−１型体着剤処理後　　　　５　検出せず実施例１４ 第７表に示す各種の菌に由来するパイロジエンを含むリ
ン酸バッファー水溶液（ｐｌ＋７、μｍ０．０２）にＡ
−１型体着剤０．２ｇ　ｗｅｔを加え、２５°ＣＣ２２
５ｒｐ　、　１時間処理後、２２μｍフィルターで濾過
し、パイロジエンをエンドスペシー法（ＭＰ）で測定し
た。また、更に食塩によりμｍ０．１に調整した試料に
ついても試験した。

結果を第７表に示す。

実施例１３ ０．９％ＮａＣ１にＥ、Ｃｏ１１０１１１：Ｂ４（ＤＩ
ＦＣＯ）を添加した原液２ｍｌにＡ−１型体着剤０．２
ｇ　ｗｅｔを加え３ ４ 第　　　７　　　表 実施例１５ Ａ−１型体着剤０．５ｇ　ｗｅｔを用い、高濃度のパイ
ロジエンを含む液と接触させて、残存濃度から下記方法
により吸着容量を測定した。また下記方法により再生し
て繰り返し吸着容量を測定した。

く実験方法〉 １　　　六　Ｓ　　゛ パイロジエン溶液：　Ｅ、Ｃｏ１１０１１１：Ｂ４（１
００μｇ／　ｍ　ｌ　）水溶液５ｍｌ ＊リン酸バッファーｐＦＩ７、μｍ０．０２に溶解 ＰＳ−ＣＡ　：　０．５ｇ　ｗｅｔ 処理時間：１時間 盟−兎生立汰 １、　吸着実験後、ＰＳ　−ＣＡを再生液（アルカリ・
エタノール水溶液）　１５ｍ１に１２時間浸漬する。

２、　マイクロフィルター（０，２２μｍ）で濾過３、
　パイロジエンフリー水で洗浄（３０ｍｌＸ５回） ４、　１．５Ｍ　ＮａＣ１水溶液で洗浄（３０ｍｌ　Ｘ
　５回）５、　パイロジエンフリー水で洗浄（３０ｍｌ
　Ｘ　５回） 〈結　果〉 結果を第８表に示す。

第８表から明らかなように、吸着容量に実質的な変化は
見られなかった。

第 ８ 表

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ホスホポリオール化合物を含む溶液を多孔質吸着剤
   と接触せしめてホスホポリオール化合物を溶液中から選
   択的に吸着保持する分離方法において、吸着剤が基材と
   結合した鎖長が２〜５０の脂肪族アミン型官能鎖をもち
   、吸着剤のポアサイズが１ｎｍから２０μｍの範囲のも
   のであることを特徴とする分離方法。 ２、１級アミン型又は２級アミン型の脂肪族官能鎖をも
   つ吸着剤を用いることを特徴とする請求項１記載の分離
   方法。 ３、多孔質吸着剤がポアサイズ１０ｎｍから５μｍのハ
   ードゲルビーズであることを特徴とする請求項１記載の
   分離方法。 ４、多孔質吸着剤がＭＦ膜またはＵＦ膜の形状をとるこ
   とを特徴とする請求項１記載の分離方法。 ５、ホスホポリオール化合物がパイロジェンであり、溶
   液がイオン強度μ＝０．０３〜０．５のイオン強度をも
   つ薬剤水溶液であることを特徴とする請求項１記載の分
   離方法。 ６、基材がポアサイズ５０ｎｍ〜１μｍのポリヒドロキ
   シル系高分子であることを特徴とする請求項１記載の分
   離方法。 ７、基材と結合した鎖長が２〜５０の脂肪族アミン型官
   能鎖をもち、ポアサイズが１ｎｍから２０μｍの範囲の
   ものである吸着剤に吸着されたホスホポリオール化合物
   と薬剤とをイオン強度の高い水溶液で処理して、薬剤を
   選択的に溶出させることを特徴とする分離方法。 ８、多孔質基材とそれに結合した官能鎖をもち、ポアサ
   イズが１ｎｍから２０μｍの範囲のものである多孔質吸
   着分離剤において、官能鎖が鎖長２〜５０の１級アミン
   型又は２級アミン型の脂肪族官能鎖であることを特徴と
   するホスホポリオール化合物吸着分離剤。 ９、官能鎖に炭素数１〜１２のジアミノアルキレン部分
   構造を持つことを特徴とする請求項８記載の分離剤。 １０、基材が多糖類またはポリビニルアルコール系の高
   分子であり、基材の酸素原子に直結したヒドロキシ置換
   プロピレン中間鎖をもつことを特徴とする請求項８記載
   の分離剤。１１、官能鎖がジアミノアルキレン部分構造
   に結合したアミノ酸残基をもつことを特徴とする請求項
   ８記載の分離剤。