JPH03251765A - 生物学的分析試薬組成物及び多層分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は生物学的試料の分析に関する。

（従来の技術） 従来から、生物学的試料、例えば、組織、血球。

血液（血漿、血清）、尿等に含まれる成分は化学的、生
化学的、免疫学的に分析されている。

特に、その結果検出において、発色反応を用いれば、操
作上の制約が少なく簡便となる。

従って、組織染色、特に免疫組織染色プロッティング法
、臨床化学特に、多層分析素子を用いるドライケミスト
リイ等はその結果検出に発色反応が多用されている。

これらに求められる特性としては、生成した色素の溶媒
に対する溶解性が小さいことが必要となる。

免疫組織染色においては、西洋ワサビペルオキシダーゼ
（ＨＲＰ）を、標識酵素として、ジアミノベンジジンを
色原体として、染色する方法が多用されている。

（発明が解決しようとする問題点） 前記した、免疫組織染色は、組織切片上で、抗原抗体反
応を行なった後、直接抗体法では用いた抗体に標識され
た酵素を用いて発色反応を行なう。

また間接抗体法においては、酵素を標識した二次抗体と
反応した後、酵素反応を行い色素を形成させる。

色素は抗原存在部位に染色し、他の部位へは溶出せず、
かつ有機溶媒で脱水、透徹工程で溶解しないことが必要
である。更にこの目的で多用されているＤＡＢのように
発癌性を有することは大きな危険を伴う。又ブロッティ
ング法においても、メンブレン上に生成した色素の溶媒
による溶解は分析精度を損う。

又、これらに共通して、色素自体の保存性も重要である
。上記目的で使用されるジアミノベンジジンやテトラゾ
リウム塩は前者は発癌性、後者は溶解性及び保存性の面
で問題となる。

一方多層分析素子においては、生成した色素が検出層に
とどまることなく溶出し多孔性展開層へ移動すると移動
した分の色素は展開層で隠蔽され、本来得るべき反射濃
度が得られず、従って感度が低下する。これは溶液法で
多層分析素子に難溶性のホルマザン色素を用いた場合で
も、同様に問題になる処である。

（発明の目的） 本発明の目的は前記したような欠点を解消し、すぐれた
生物学的試薬組成物の提供にあり、別の目的として感度
低下を起さない、優れた多層分析素子の提供にある。

（問題点を解決するための手段） 上記目的に沿い鋭意検討を重ねた結果、前記本発明の目
的は、下記一般式〔Ｉ〕で示される化合物及び／又は一
般式［１１）で示される化合物更に特定の陰イオン種か
らなる生物学的分析試薬組成物及び前記試薬組成物を含
有する多層分析素子によって達成される。

一般式〔Ｉ〕 一般式ＣＩ［） 式中、Ｙは炭素数２〜４の直鎖式アルキレン基であり、
置換基を有してもよく、置換基として１個の水酸基があ
ってもよい。

Ｒ１は炭素数１〜４のアルキル基、またはヒドロキシエ
チル基％Ｒ”は炭素数１〜４のアルキル基であり、１〜
２個の水酸基又は１個のフェニル基を有してもよい。

Ｗは水素原子またはニトロ基である。

ＺはＷが水素原子の時は４．５−ジメチル−２−チアゾ
リル基、Ｗがニトロ基の時は４−ヨードフェニル基であ
る。

またＲ３はメトキシ基であるが、Ｗが水素原子のときは
水素原子でもよい。

Ｘｅは化合物中の電荷を相殺する陰イオンであり、塩素
系イオンまたは臭素イオンである。

１ また−０Ｙ−Ｎ−Ｒ’のベンゼン環における置換位２ 置は３位または４位である。

尚、本発明の多層分析素子は、光透過性支持体上に少な
くとも親水性ポリマーを含有する層、多孔性展開層を順
次積層して構成される多層分析素子である。

前記、本発明に係る化合物は、特公昭５９−３９４３０
号及び同６０−３３９６号に開示されており、テトラゾ
リウム塩に第四級アンモニウム塩を導入したものであり
、上記明細書中に記載があるように、本来、水に対する
溶解性の小さいテトラゾリウム塩及びホルマザン色素に
対して水溶性基である第四級アンモニウム塩を導入し、
水溶性を付与し、溶液反応で、反応容器の汚染を起こさ
ないようにすることを目的としｔこものである。

本発明は、本発明の目的に沿って検討の途次上記化合物
が反応しホルマザン色素に変化した場合、特定の陰イオ
ン種が存在すると水だけでなく有機溶媒にも溶解性が消
失するという新たにえた知見によるものであり、特に免
疫組織染色における脱水工程で用いられるエタノール（
含水エタノールを含む）、及び透徹工程におけるキシレ
ンに対して、全く溶解しないという特性を有することを
見い出した。

本発明において特定する陰イオン種として好ましいもの
は、例えば、燐酸、炭酸、酢酸、グツドの緩衝剤として
、知られる一連の化合物、例えば、Ｎ−（２−アセトア
ミド）＝２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ−（２−アセ
トアミド）イミノデ酢酸、Ｎ、Ｎ−ビス（２ヒドロキシ
エチル）−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ、Ｎ−ビス
（２−ヒドロキシエチル）グリシン、３−シクロへキシ
ルアミノプロパンスルホン酸、３−Ｎ−シクロへキシル
チミン−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸、２−（シ
クロへキシルアミノ）エタンスルホン酸、３−（Ｎ、Ｎ
−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノコ−２ヒドロキ
シプロパンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペ
ラジン−Ｎ′−３−プロパンスルホン酸、Ｎ−２−ｅド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ／−２−エタンスルホン酸
、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′２−ヒド
ロキシプロパン−３−スルホンａ、２−（Ｎ−モルホリ
ノ）エタンスルホン酸、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパ
ンスルホン酸、３−（Ｎ−モルホリノ）−２−ヒドロキ
シ７°ロバンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ、Ｎノーヒス
（２−エタンスルホン酸）、ピペラジン−Ｎ、Ｎ’−ビ
ス（２−ヒドロキシプロパンスルホンｆｉ）、Ｎ−）リ
ス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンス
ルホン酸、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２
−ヒドロキシ−３−アミノプロパンスルホン酸、Ｎ−）
リス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンス
ルホン酸、トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン
等が挙げられる。更にカルボン酸、スルホン酸を含む化
合物も、用いることができる。

これらは塩の形で用いられるが、例えば、緩衝剤として
用いることも可能であるが、緩衝剤としてではなく使用
する場合、本発明のテトラゾリウム塩の添加モル数に対
し、約ｌθ％及乃至約２５０％添加することが好ましい
。

免疫組織染色の場合、抗体に直接、酵素を結合する直接
抗体法又は二次抗体に酵素を標識する間接抗体法が用い
られる。この際の標識酵素はペルオキシダーゼ、アルカ
リ性７オスフアターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ等が
好ましい。酵素の抗体への標識は公知の方法、例えば石
川栄治ら編「酵素免疫測定法Ｊ　　（１９７８年、医学
書院列）に記載の方法で行うことが可能である。

ペルオキシダーゼを用いる場合、Ｋａｚｕｈｉｓａ　Ｔ
ａｋｅｔａａ著ｒＪ、１ｍｔｒｕｎｏ１．Ｍｅｔｈｏｄ
ｓＪ　１９８６．９５巻、７１頁〜７７頁に記載の方法
に準じて、またアルカリ性フォスファターゼ、β−Ｄ−
ガラクタトシダーゼに関しては電子伝達剤放出性基質を
用いることで本発明のテトラゾリウム塩を発色させるこ
とが可能である。

電子伝達剤放出性基質とは、アルカリ性７オスフアター
ゼ又はβ−〇−ガラクタトシダーゼの基質であって、上
記酵素で加水分解され、テトラゾリウム塩を還元するた
めの電子伝達剤を放出するものを言う。上記電子伝達剤
放出性基質として、５−ブロム−４−クロル−３−イン
ドリル−燐酸及び５−ブロム−４−クロル−３−インド
リル−β−Ｄ−ガラクトシド等イフィンドリル誘導体げ
られる。

これらの試薬は免疫組織染色法、ウェスタンプロット法
、サザンプロット法、ドツトプロット法等組織に直接、
又はメンブレン上での染色に好ましく用いることが出来
る。

一方、本発明の試薬組成物は、前述の如く、多層分析素
子においても、有用に用いられる。

本発明に係るテトラゾリウム塩は、多層分析素子におけ
る試薬層（即ち、検知層）へ含有され、本発明に係る特
定の陰イオン種は、同−層及び／又は他の層に含有する
ことが出来る。

本発明の多層分析素子の一つの使用態様として電子伝達
剤の共存下還元型補酵素の測定が挙げられる。これらは
特開昭５９−４４６５８号、同５９−９１８９６号、同
６３−５２８９７号、同６３−７１１９９号、特開平１
−３２０９９９号等にも用いることができる。この際、
電子伝達剤は１−メトキシ７エナジンメトサルフエート
、フェナジンメトサルフェート、メルトラブル−ジアホ
ラーゼ等が挙げられるが好ましくはジアホラーゼである
。本態様においては脱水素酵素、例えば、乳酸脱水素酵
素等の測定や、更に脱水素酵素を多層分析素子内に含有
し、グリセリン、トリグリセライド、ＧＯＴ、　ＧＰＴ
、クレアチニンキナーゼ等の酵素活性を測定することが
出来る。

更に別の態様として、電子伝達剤放出性基質との組合せ
がある。この基質は、前述の如くインドリル誘導体を用
いるもので、該誘導体の燐酸エステル及びβ−Ｄ−ガラ
クトースとの縮合物が挙げられる。これらは、例えば特
開昭５９−８８０９７号、同５９９１８９６号及び同６
１−２６２６６０号、同６４−７１４９９号記載の方法
に準じて容易に作成される。

又、他の態様として、前述のＫａｚｕｈｉｓａ　Ｔａｋ
ｅｔａ他著ｒＪ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、ＭｅｔｈｏｄＪ　１
９８６．９５巻　７１頁〜７７頁に記載の方法に準じ、
多層分析素子に組込むことで、ペルオキシダーゼ系での
分析反応に適用することが可能である。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。

実施例１（免疫組織染色） スライドグラスに膵臓切片を伸延し、無水アセトンで５
〜ｌＯ分間固定したのち５％正常ヤギ血清を用い、１０
〜２０分間、非特異的免疫反応抑制の為のマスキング操
作を行なった。

この試料を常法に従い調製したアルカリ性７オスフアセ
ーゼ標識抗グルカゴン抗体で反応後、燐酸緩衝液（０，
１Ｍ−ＰＢＳ）で洗浄し、サンプルとした。

次に反応液の調製を以下の如く行なった。

基質液 ５−ブロム−４−クロル−３−０，２４■鉦インドリル
燐酸 （トルイジニウム塩） 塩化マグネシウム　　　　　　　　　　　５■Ｎ本発明
の陰イオン種　　（表−１に示す）１００ｍＭ−トリス
塩酸緩衝液　　　　　　１００ｍｆｆ溶解後ｐＨ−９，
５に調整した。

発色液 テトラゾリウム塩　　　（表−２に示す）本発明の陰イ
オン種　　（表−１に示す）塩化マグネシウム １００ｍＭ−トリス塩酸緩衝液　　　　　　　１００ｍ
ｆｆ溶解後ｐＨ−９，５とする。

表−２ Ｃ！Ｈ。

コ ＯＨＣ＊Ｈｓ 尚、試料は前記表−２の化合物乞Ａ−Ｄ及び表−１のＮ
Ｏｌを組合せてＡ−１，・・・Ｄ−６等と表示する。

前記基質液及び発色液を等量分数し、混合しサンプルを
おいたスライドグラス上に滴下し、室温で３０分間反応
した後、ＰＢｓで数回洗浄した。

更に、常法に従かい２０％ホルマリン溶液で固定後メチ
ルグリーンを用い対照染色を行なった。

これを、エタノール列で脱水し、キシレンで透徹を行な
った後、エポキシ樹脂で封入した。

エポキシ樹脂のキシレンが完全に蒸発した後に、光学顕
微鏡観察を行なった。結果はＣ−１〜６及びＤ−１〜６
は、脱水工程又は透徹工程で発色したホルマザン色素が
溶出し、十分な濃度が得られなかった。

一方、Ａ−１〜５及びＢ−１〜５はグルカゴン局在部位
に各々十分な濃度で赤色、青黒色に染色され、かつメチ
ルグリーンの被染色とのコントラストも良好であった。

又Ａ−６，Ｂ−５についても、多少色素の溶出が認めら
れた。

実施例−２ 純水にて洗浄後、風乾したニトロセルロース膜（バイオ
ラッド社製；厚み０．４５μ園）に燐酸緩衝液（以下Ｐ
ＢＳと称す）にて、段階希釈したヤギＩｇＧのｌμＱを
スポットした。

風乾後１％ウシ血清アルゴミン（ＢＳＡ）−ＰＢＳ溶液
により４℃にて一晩プロッキングを行ない次いでアルカ
リ性７オスフアターゼ標識ウサギ抗ヤギＩｇＧ抗体（カ
ッペル社製；１％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液により１５００倍
希釈したもの）と４℃、２時間反応させた。０．０５％
Ｔｗｅｅｎ−２０（ポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレート：和光紬薬製）−ＰＢＳ溶液にて５回洗浄し
、発色用基質液中に浸漬した。発色用基質液は以下の２
種類である。

（１） ５−ブロム−４−クロル−３−インドリル燐酸　　　　
　０．１２ｍＭ塩化マグネシウム　　　　　　　　　　
　　　　　５−二トローＴＢ−ＯＡ（本発明の化合物）
　　　　　　　　　０．５＋ｍＭＮ−２−ヒドロキシエ
チルピペラジン−Ｎ’−２１，０−Ｍ−エタンスルホン
酸ナトリウム 塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　２０　
　ｍＭトリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　
５　　ｍＭを純水に溶解しｐＨ＝８．５に調整、最終容
量を１００ｍ１２とした。

（２） 上記、本発明の化合物にかえてニトロ−ＴＢ　０．５−
Ｍをジメチルホルムアミド０．５ｍｆｆ１に溶解し混合
した以外は同じものを調製した。

１５分間反応後、充分水洗し、風乾した。発色用基質液
（１）を用いた場合、０．０５ｎｇヤギＩｇＧを検出用
きたが、比較の基質液（２）ではｌ　ｎｇのヤギｔｇｃ
のスポットまでしか検出されなかった。

実施例−３ 実施例−２と同様に、ニトロセルロース膜にヤギＩｇＧ
の段階希釈したものをプロッティングしたものを用意し
た。同様に１％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液で４℃。

１晩ブロツキングを行なった後、パーオキシダーゼ標識
ウサギ抗ヤギ１ｇｃ抗体（カッペル社製；１％ＢＳＡ−
ＰＢＳ溶液で１５００倍希釈またもの）と４℃。

２時間反応させた。次いで０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０
（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート：和光
紬薬製）−ＰＢＳ溶液にて、５回洗浄し発色用基質溶液
中に浸漬した。

（１） フェノール　　　　　　　　０．５園關ニドｏ　−ＴＢ
−ＯＡ　　　　　　　　０．５ｍＭＮＡＤＨ０，７ｍＭ ３０％Ｈ！０．　　　　　　　　　　　　　　　　　２
０　　　ｎｇト　リ　ト　ンＸ−１００５１ｇ を５０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ−７，５）で１００膳Ｑと
した。

相補的なλフアージＤＮＡ　（Ｈｉｎｄ　ｍで切片）に
対してビオチニル化ＤＮＡを常法に従い用意し、（１）
で作成したニトロセルロースフィルタをヒートシールバ
ックに入れ、４２℃で２時間、プレハイブリタイゼーシ
３ンを行ない、ビオチニル化ＤＮＡを加え１６時間ハイ
ブリダイゼーションを行なった。

更に、ニトロセルロースフィルタを蒸留水で３回洗浄し
た後、ストレプトアビジン化アルカリ７オスターゼ溶液
に室温、２時間反応させた後、蒸留水で３回洗浄した。

発色用基質溶液として、実施例−２で示した（１）及び
（２）に室温で１２時間浸漬し反応させた。

結果は（１）の場合０．５ｐｇのスポットまで、発色が
確認されたが（２）の場合の５ｐｇまでであった。

（２）前記（１）のニトロ−ＴＢ　−ＯＡをニトロ−Ｔ
Ｈにかえた以外は同一のものとした。

１５分間室温で反応させた後十分水洗し風乾した。

発色周基室液（１）は、０．ｌｏｇのヤギＩｇＧまでス
ポットが確認できたが、同（２）では５ｎｇのヤギＩｇ
Ｇまでしか確認できなかった。

実施例４ （１）ニトロセルロースフィルタ上でのドツトブロッテ
ィング ２Ｘ３ｃ■のニトロセルロースフィルタ上に熱魁理し一
本鎖にしたλフアージＤＮＡ　（Ｈｉｎｄ　ｍで切断）
を０．ｉｐｇｓ　Ｏ，５ｐｇｓ　　１　ｐｇｓ　　５　
ＰｇＮ　７．５ｐｇ％１０ｆ’ｇ１１００ｐｇｓｌｎｇ
及びｌＯｎｇを直径４＋＋＋園の大きさになるようにス
ポットし、減圧下８０℃で２時間焼付けをした。

（２）　ＤＮＡグローブの作成 ７オトビオチン　ラベリングエンド　ディテエクシミン
　キット（Ｐｈｏｔｏｂｉｏｔｉｎ　Ｌａｂｅｌｌｉｎ
ｇ　ａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｋｉｔ）　（ＢＲＥＳ
Ａ　Ｐｔｙ、Ｌｔｄ製；（株）ニラポンジーンより入手
）及び前記λファージＤＮＡ　（Ｈｉｎｄ■で切断）を
等量用い、常法に従かいビオチン標識ＤＮＡプローブを
作成した。

（３）ハイブリダイゼーシヨン （１）で作成したニトロセルロースフィルタをヒートシ
ールバッグに入れ４２℃で２時間プレハイブリダイゼー
ションし、ついで（２）のＤＮＡプローブを加え、１６
時間ハイブリダイゼーションを行なった。尚ハイブリダ
イゼーシヨンはＴ、Ｍａｊｙａｔｉｓｅｔ　ａｌ　ｒＭ
ｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ａ　Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ　ＭａｎｕａｌＪＣｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈ
ａｒｂｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ１９８２に従かった
。

このフィルタを３回水洗を行なった。

（４）発色反応 フィルタをヒートシールバックに入れ、３％ウシ血清ア
ルブミン溶液（ＮａＣＱ、２ｍＭ　ＭｇＣＱ、　０．０
５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含む１−０Ｍ　１００ｍ
Ｍ　　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７　、５）にウシ血
清アルブミンを溶解したもの）を加え４２℃、２０分間
インキュベートした後ＢＳＡ溶液をすて、上記緩衝液に
アルカリホオスファタ−ゼ標識ビオチンを加え、室温で
１０分間インキュベーションを行なう。バックからフィ
ルタをとりだし、上記緩衝液で２回洗浄した後、１００
ｍＭ　トリス塩酸緩衝液（ｐＨ＝９．５１００ｍＭＮａ
ｃｆｆｉ　５ｍＭ　ＭｇＣＱ、’に含む）で２回洗浄し
、実施例−２の基質液（１）及び（２）を用い５時間、
室温で発色反応を行なっｔこ。

結果は、本発明の基質である基質液（１）の場合０．ｌ
ｐｇまでスポットを観察できたが（２）の場合５ｐｇま
でであった。

実施例−５（ＧＯＴ用分析素子） 膜厚１８０μｍの透明な下引法ポリエチレンテレフタレ
ート支持体上に下記の第１の試薬層（Ｒ−１）を設けた
。

第１の試薬層（Ｒ−１） ゼラチン グルタミン酸脱水素酵素 ジアホラーゼ アデノシン−５′−二燐酸−カリウム塩ニトロ−ＴＢ−
ＯＡ トリトンＸ−１００ １，２−ビス（ビニルスルホニル）エタンＮ−２−ヒド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−二タンスルホン酸
ナトリウム第２の試薬層（Ｒ−２） トリスビトロキシメチルアミノメタン 塩酸トリスヒドロキシメチルアミノメタングルタミン酸
脱水素酸素 アデノシン−５′−二燐酸−カリウム塩ノビスコールＶ
Ａ−２８＊ トリトンＸ−１００ ｔ　ＢＡＳＦ社の商品名 Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体（モル比２
０　：　８０） ５．７０　　（ｇ／■す １．２２　　　（ｇ／膳り （■／■す （ｇ／ｌつ ２．０　　（ｇ／懲り ０．０５　　（ｇ／一つ ２１．０　　（ｇ／ｓつ ４２．０００　（ＩＪ／■す ２．１００　　（■／■９ １．８　　　　　（ｇ／腸り １．９　　　（ｇ／謙り ２．１　　　（ｇ／■す ０．１５　　（ｇ／ｍす ０．７８　　（ｇ／■り 展開層（Ｓ） 粉末濾紙〔東洋濾紙（株）４０〜１００メツシユ）　　
　　９１　　　（ｇ／−〇Ｌ−アスパラギン酸−ナトリ
ウム　　　　　　　　　０．３９　　（ｇ／＋＊リケト
グルタル　　　　　　　　　　　　　　　　０．５０　
　（ｇ／ｍつ酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チド　５．５　　（ｇ／ｍ”）グルタミン酸脱水素酵素
　　　　　　　　　　　−（Ｕ／ｍリアデノシン−５′
−二燐酸−カリウム塩　　　　　　２．３　　（ｇ／ｍ
”）スチレン−グリシジルメタクリレート ２３　　　（ｇ／ｍり 共重合体（重量比９：ｌ） トリトンＸ−１００９（ｇ／■り さらに比較として、第１の試薬層のニトロ−ＴＢ・ＯＡ
の代りにニトロ−ＴＢを１．２ｇ／ｍ”で置換したもの
を作成した。

前者を本発明の分析素子、後者を比較分析素子とした。

上記本発明の分析素子及び比較分析素子に対して、コニ
カドライラボ”８０Ｍ　（コニカ（株）製）を用い、２
８に−Ｕ、１２５に−Ｕ及び２３３に−Ｕ（７）　ＧＯ
Ｔ活性を有するヒト血清を１０μα点着した後、３７％
でインキュベージＨンし、点着後、３．５分後及び７分
後の反射濃度を５４６ｎｍのフィルタを用いて測定し、
この反射濃度の差を求めた。

ＧＯＴ活性 ２８　　　１２５　　　２３３ 本発明の分析素子　０．０４５　０．１８９　０．２９
３比較分析素子　　　０．０１１　０．０９３　０．１
３８以上の結果の如く、本発明の分析素子は比較分析素
子に比べて良好な感度を有している事が判る。

又、測定終了後の分析素子の展開層を観察すると、比較
分析素子は青色に染り、生成色素が展開層に移行しかつ
透明ベース側ではむらの大きい発色が認められたが、本
発明の分析素子では、これらは全く観察されなかった。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式〔 I 〕で示される化合物及び／又は
   一般式〔II〕で示される化合物更に特定の陰イオン種か
   らなる生物学的分析試薬組成物。 一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼ 一般式〔II〕 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｙは炭素数２〜４の直鎖式アルキレン基であり
   、置換基を有してもよく、置換基として１個の水酸基が
   あってもよい。 Ｒ＾１は炭素数１〜４のアルキル基、またはヒドロキシ
   エチル基、Ｒ＾２は炭素数１〜４のアルキル基であり、
   １〜２個の水酸基又は１個のフェニル基を有してもよい
   。 Ｗは水素原子またはニトロ基である。 ＺはＷが水素原子の時は４，５−ジメチル−２−チアゾ
   リル基、Ｗがニトロ基の時は４−ヨードフェニル基であ
   る。 Ｒ＾３はメトキシ基であるが、Ｗが水素原子のときは水
   素原子でもよい。 Ｘ＾■は化合物中の電荷を相殺する対抗イオンであり、
   塩素原イオンまたは臭素イオンである。 また▲数式、化学式、表等があります▼のベンゼン環に
   おける置換位 置は３位または４位である。〕
2. （２）光透過性支持体上に少くとも親水性ポリマーを含
   有する層、多孔性展開層を順次積層して構成される多層
   分析素子に前記一般式〔 I 〕で示される化合物及び／
   又は一般式〔II〕で示される化合物更に特定の陰イオン
   種を含有することを特徴とする多層分析素子。