JPH03257365A

JPH03257365A - リンパ球の分離剤および分離装置

Info

Publication number: JPH03257365A
Application number: JP5773190A
Authority: JP
Inventors: Yuichi Yamamoto; 雄一山本; Junichi Ogawara; 順一大河原; Hirofumi Yura; 洋文由良
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 1990-03-08
Filing date: 1990-03-08
Publication date: 1991-11-15

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〈産業上の利用分野〉本発明は、リンパ球の分離剤および分離装置に関するも
のであり、詳しくは、免疫監視機構で重要な役割を果す
リンパ球を選択的に捕捉可能な分離剤およびこれを充填
した容器を有する分離装置に関する。

〈従来の技術〉免疫担当細胞の中心をなすのは、抗原特異的レセプター
を備えて抗原を認識し、体液性、細胞性の特異抗体を産
生ずるエフェクター細胞まで分化する能力を持つリンパ
球であり、免疫適格細胞（ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅ
ｎｔ　ｃｅｌｌ）と呼ばれる細胞である。　しかしなが
ら、生体内での免疫応答をリンパ球のみで行うことは不
可能であり、抗原を処理してリンパ球に提示する免疫反
応の上行脚では、マクロファージ亜群の樹状細胞が必要
である。　また、抗原抗体反応の最終効果である異物処
理や、血管反応を中心とした炎症反応は、免疫応答の平
行脚にあたり、マクロファージの他、顆粒球、肥満細胞
などが関与している。

多様な免疫担当細胞は、複雑な免疫反応の要求に対して
、局所への動員と増殖により速やかに対応することが特
徴であり、刺激に対する増殖と分化は、生体の他の細胞
系における機能調節にあたる役割を持っている。

リンパ球は大別して、胸腺の影響を受けて成熟するＴリ
ンパ球と、ファブリキウス嚢、あるいは哺乳類ではこれ
に相当する器官（肝、骨髄などの造血巣）の影響を受け
て成熟するＢリンパ球とに分別されるが、Ｂリンパ球の
場合、抗原刺激を受けた後は、抗体産生細胞への分化増
殖と抗体の産生といういわば単一方向への変化を示すの
に対し、Ｔリンパ球のそれは単一ではなく、１つの抗原
刺激によって数種類の種々の機能を持つＴリンパ球に変
化が起り、あるものはエフェクター細胞へ、またあるも
のは制御（分化増殖の促進または抑制）細胞として機能
する。　すなわち、Ｔリンパ球には、その機能面におい
てサブセットが存在すると考えられている。　いわゆる
ヘルパー／インデューサーＴリンパ球（Ｔｌｌ／Ｉ）、
サブレッサー／サイトトキシックＴリンパ球（Ｔ　Ｉ／
ｃ）、遅延型アレルギーに関与するＴリンパ球（Ｔｏｒ
ｌｌ）などのサブセットである。　これらサブセットの
存在は、これらサブセットのマーカーとなる表面抗原に
対する抗体（モノクローナル抗体）によるＴリンパ球の
分類とその機能との相関によって示されている。

近年、このように重要な機能を有するリンパ球を分離、
分画し、免疫科学的基礎研究あるいは各種の診断や治療
に利用する試みがなされているが、従来、リンパ球の分
離法としては以下に述べるような種々の方法が知られて
いる。

すなわち、［１］細胞の大きさの差を利用した速度沈降
法などの方法、［２］細胞の比重差を利用した比重遠心
法などの方法、［３］細胞表面電荷量の差を利用した細
胞電気泳動法などの方法、［４コ貧食活性を利用したカ
ルバニル鉄による単球の除去、［５］細胞の非特異的付
着活性の差を利用した、ナイロンウール、ガラスウール
などを充填したカラムを用いる、あるいはガラス、プラ
スチック等のシャーレを用いるなどの方法、［６］細胞
の特異的結合能を利用したアフィニティークロマトグラ
フィー［７］細胞のロゼツト形成を指標とするロゼツト
沈降法、［８］細胞膜表面の特異抗原、免疫グロブリン
と標識抗体との反応を利用したフルオレセインアクチベ
イテツドセルソータ−（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　Ａ
ｃｔｉｖａｔｉｎｇ　Ｃｅ１ｌ　Ｓｏｒｔｉｎｇ。

ＦＡＣＳＪ法などである（例えば、矢田純−１藤原道夫
編著、新リンパ球機能探索法、１９８７年、中外医学社
などを参照）。　また、支持体や固定相を使用しない多
段分離の手段として、［９］フイールドフローフラクシ
ヨネーシヨン（Ｆｉｅｌｄ−Ｆｌｏｗ　Ｆｒａｃｔｉｏ
ｎａｔｉｏｎ、　ＦＦＦｌ法が検討されている。

しかしながら、［１］〜［３］におけるように物理的な
細胞分離法は、Ｔリンパ球とＢリンパ球との間に比重、
密度等の物理的諸物性に際だった差がないため、分離回
収された細胞の収率あるいは純度に高い精度が要求でき
ないものであり、さらに［２コの比重遠心法においては
、媒体の価格が高価になってしまうか、あるいは安い場
合でも操作に熟練を要し、また［３］の細胞電気泳動法
においては、細胞の成熟度によって移動度が異なること
、細胞機能に与える電場の影響が解明されていないこと
、大量処理が困難であるといった欠点も有するものであ
った。

また、［６］〜［８］におけるような細胞膜表面の特異
抗原、レセプター、免疫グロブリンなどを指標とする細
胞分離法は、いずれも処理細胞が生物学的に特異性の高
い強固な結合や刺激を受けるため、インタクトな状態で
目的細胞を回収するのが難しく、かつ大量処理に適さな
いものであり、さらに［６］のアフィニティークロマト
グラフィーは、高価な抗体を必要とし、また［８］のＦ
ＡＣ８法は、細胞を標識する等の前処理が煩雑であり、
高価な抗体と装置を必要とするといった欠点を有するも
のであった。

また、［９］のＦＦＦ法は、回転軸を介して溶離液を連
続的に流入、流出する装置的な困難さと共に、ローター
状分離セルと流路の材質が細胞の接着を招くために、細
胞の相互分離を実用化するところまでには至っていない
。

これに対し、［５］の細胞の非特異的付着特性を利用し
た方法は、処理細胞の機能を損傷するおそれが少なく、
また価格、操作性、および大量処理性の面でも適当なも
のであるが、目的細胞に対する選択性および回収率の面
では不十分なものであり、さらに前記したカラム法など
においては、分離操作を行う場合の経験的技術的習熟が
必須であるという大きな課題も存在しているものであっ
た。

このような非特異的付着特性を利用する分離剤および分
離方法としては、疎水性材料（特公昭５９−１７３８７
号、同５９−３６９６３号、同６２−４５２０６号、特
開昭５７−２０４４５４号）、酸性官能基を有する材料
（特公昭５９−３６９６１号、特開昭５６−４４０８８
６号、同５６−１５２７４０号）、塩基性官能基を含有
する重合体（特開昭５９−２１６５８４号、同６０−１
０５４９０号）、ヒドロキシアパタイト繊維（特開昭６
３−２８４号）、特定の高分子体（特開昭６１−２２１
１２３号、同６４−３４２８５号）を用いることも提唱
されているが、これらのものにおいても目的細胞に対す
る選択性および回収率の面では未だ十分なものではなか
った。

〈発明が解決しようとする課題〉従って、本発明は免疫担当細胞のリンパ球を効率よく分
離でき、かつ細胞機能を損なうことなく目的細胞を回収
できるリンパ球の分離剤および分離装置を提供すること
を目的とするものである。

本発明は、さらに、操作が簡便でかつ特殊な装置を必要
とせず、効率よくリンパ球を分離できるリンパ球の分離
剤および分離装置を提供することを目的とするものであ
る。

本発明は、さらに、臨床検査だけでなく、免疫疾患治療
、細胞培養などにも適用できる広い応用性を有するリン
パ球の分離剤および分離装置を提供することを目的とす
るものである。

〈課題を解決するための手段〉このような目的は、下記（１）〜（８）の本発明により
達成される。

（１）特定のリンパ球に対し親和性を有する配糖体を水
不溶性固体物質に固定化したことを特徴とするリンパ球
の分離剤。

（２）前記配糖体が、フラボノイド配糖体である上記（
１）に記載のリンパ球の分離剤。

（３）前記フラボノイド配糖体が、フラボノール配糖体
またはフラバノン配糖体である上記（２）に記載のリン
パ球の分離剤。

（４）前記特定のリンパ球がサブレッサー／サイトトキ
シックＴリンパ球である上記（１）〜（３）のいずれか
に記載のリンパ球の分離剤。

（５）前記水不溶性固体物質は、粒子状をなすものであ
る上記（１）〜（４）のいずれかに記載のリンパ球の分
離剤。

（６）水不溶性固体物質の粒径が、０．０５〜５ｍｍで
ある上記（５）に記載のリンパ球の分離剤。

（７）上記（１）〜（６）のいずれかに記載の分離剤を
充填した容器を有することを特徴とするリンパ球の分離
装置。

（８）前記容器の内部が滅菌処理されたものである上記
（７）に記載のリンパ球の分離装置。

〈作用〉本発明に係わるリンパ球の分離剤は、特定のリンパ球サ
ブクラスまたはその特定のサブセット（以下、単に特定
のリンパ球という）に対し親和性を有する配糖体を水不
溶性固体物質に固定化したものであるから、特定のリン
パ球膜表面抗原レセプターに対する配糖体の高い親和力
を利用して、血液などの体液、あるいは組織中の特定の
リンパ球を高い選択性を持ってかつ収率良く他の細胞か
ら分離できるものである。

この作用をより詳しく説明すると、細胞膜表面抗原レセ
プターは、糖タンパク質、糖脂質、タンパク質、脂質で
構成されているので、特定の配糖体は特定のリンパ球の
細胞膜表面に対し強い親和性を有していると考えられる
。　これらの特異的相互作用力を物理化学的に解析する
と、特定のリンパ球に親和性を有する配糖体と特定のリ
ンパ球の細胞膜表面とは、ファン・デル・ワールスカ（
この力の中身として、配向効果、誘電効果および分散効
果の三つの効果が考えられている）を基本にして、水素
結合、イオン結合（クーロン力）、イオン−双極手間力
、配位結合および疎水結合の分子間力が組み合わさって
相互作用し、さらに表面分子が形成する空間的構造が鍵
と鍵穴のごとく、立体的に適合しているものと推測され
るものである。

さらに、リンパ球は前述したように、免疫担当細胞とし
て、種々の免疫疾患に密接な係わりを有している。　し
たがって、上述のごとく特定のリンパ球を選択的かつ効
率よく分離できれば、各種の診断や治療に役立つものと
考えられる。

１２〈発明の構成〉以下、本発明のリンパ球の分離剤および分離装置を添付
図面に基づいて詳細に説明する。

本発明のリンパ球分離剤は、特定のリンパ球に対し親和
性を有する配糖体（以下、単に配糖体ともいう）を水不
溶性固体物質に固定化したことを特徴とするものである
。

本発明のリンパ球分離剤において用いられる配糖体とは
、糖と非糖成分であるアグリコンとが結合した化合物で
、０−グリコシド、Ｓ−グリコシド、Ｃ−グリコシドお
よびＮ−グリコシドに大別される。　これらの内、Ｏ−
グリコシドは狭義の配糖体で、環状アルドースまたはケ
トースのへミアセクール性水酸基とアグリコンの水酸基
との間で縮合し、酸素を介して結合したものである。　
植物界に多く見い出され、植物の花、葉、種子、樹皮な
どに含まれ、結晶性の固体として得られる。

Ｏ−グリコシドには、フェノール配糖体、クマリン配糖
体、フラボノイド配糖体、カルコン配糖体、アントシア
ニジン配糖体、アントラキノン配糖体、インドール配糖
体、青酸配糖体、ステロイド系配糖体、アルカロイド配
糖体などがある。

０−グリコシドの内でも、特にフラボノイド配糖体を用
いるのが好ましい。　このフラボノイド配糖体には、フ
ラボン配糖体、イソフラボン配糖体、フラボノール配糖
体、フラバノン配糖体、フラバノノール配糖体、カテキ
ン配糖体、オーロン配糖体、アントシアニジン配糖体、
カルコン配糖体、ジヒドロカルコン配糖体、などが含ま
れるが、そのなかでもフラボノール配糖体またはフラバ
ノン配糖体が好ましく、さらには、これらのうち糖成分
がルチノースである配糖体、すなわち、ルチン、ヘスベ
リジン、ナリンギン、エリオシドリンなどが特に好適で
ある。　特に、ルチン、ヘスベリジンを用いることによ
り、Ｔリンパ球のサブセットであるサブレッサー／サイ
トトキシックＴリンパ球とヘルパー／インデューサーＴ
リンパ球とをより効果的に分離することができる。

なお、このような配糖体の担体への担持量は、５〜５０
０　ｕｍｏ看／ｇであるのが好ましく、さらに好ましく
は５”Ｏ〜３００　ｕｍｏＲ／ｇである。

本発明のリンパ球の分離剤において、このような配糖体
を固定化する担体である水不溶性固体物質としては、親
水性のものであっても、あるいは疎水性のものであって
もよく、具体的には例えば、アガロース系、デキストラ
ン系、キトサン系、セルロース系等の多糖類、ポリアク
ノルアミド系、ポリビニルアルコール系、ポリビニルピ
ロリドン系、ポリアクリロニトリル系、スチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体、ポリスチレン系、アクリル酸エ
ステル系、メタクリル酸エステル系、ポリエチレン系、
ポリプロピレン系、ポリ４−フッ化エチレン系、エチレ
ン−酢酸ビニル共重合体系、ポリアミド系、ポリカーボ
ネート系、ポリフッ化ビニリデン系、ポリビニルポルマ
ール系、ボリアリレート系、ポリエーテルスルフォン系
などの有機合成高分子、ガラス系、チタン系、活性炭系
、あるいはアルミナ、シリカ、ヒドロキシアパタイト等
の各種セラミックス系などの無機物などが挙げられるが
、通常、固定化酵素法、アフィニティークロマトグラフ
ィーなどにおいて用いられる公知の担体は特別の限定な
く使用することができる。

このような水不溶性固体物質の形態としては、特に限定
されず、粒子状、繊維状、中空糸状、膜状、あるいは平
板状等の公知のいずれの形状のものも用いることができ
るが、体液や細胞懸濁液の通液性、分離剤調製時の取り
扱い簡便性などの点から、粒子状のものが好ましく、特
に粒径が０．０５〜５ｍｍの粒子状のものが有効表面積
および通液性などの面から好ましい。

即ち、粒径が０．０５ｍｍ未満では通液性が低下し、ま
た、５ｍｍを超えると十分な有効表面積を確保し難くな
る。

さらに、粒子形状（特に球形の粒子）は、細　５６胞に物理的な損傷を与えにくいこと、クダケ、カケなど
が生じにくいこと、均一な粒子を得易い等の点から好ま
しい。

また、このような担体は、多孔質あるいは緻密質のいず
れであってもよい。

多孔質の粒子としては、例えば、ジビニルベンゼンモノ
マー、グリシジルメタクリレートモノマーおよび２−ヒ
ドロキシエチルアクリレートオリゴマーの三元共重合体
による粒状物が好適に使用される。

本発明のリンパ球の分離剤において水不溶性固体物質の
表面に前記配糖体を固定化する方法としては、共有結合
、イオン結合、物理的吸着、疎水結合、生化学的特異結
合などの担体結合法、あるいは架橋法、包括法、複合法
などあらゆる公知の方法を用いることができるが、体液
ないしは細胞懸濁液中での安定性の点から、共有結合ま
たは疎水結合により固定することが好適である。

配糖体を水不溶性固体物質の表面に共有結合するために
は、両者の官能基に応じて、種々の方法が用いられる。

　例えば、臭化シアン活性化法、カルボジイミド試薬な
どを用いる縮合試薬法、酸アジド誘導体法、ジアゾ法、
アルキル化法、ジアルデヒドやビスエポキシド、ジイソ
シアネートなどを用いる担体架橋法、γ−グリシドキシ
プロビルトリメトキシシランやβ−（３，４−エポキシ
シクロヘキシル）エチルトリメトキシシランなどを用い
るシランカップリング剤活性化法などが使用される。

また、必要に応じて、配糖体と水不溶性固体物質表面と
の間に任意の長さのスペーサー分子を導入して使用する
ことも可能である。　このスペーサー分子としては、ヘ
キサメチレンジアミンなどのジアミン類、ヘキサメチレ
ングリコールなどのジオール類などが好ましいものとし
て挙げることができる。

また、配糖体を水不溶性固体物質表面に疎水結合する方
法としては、例えばポリスチレン、ポリプロピレンなど
の疎水性重合体へ直接結合させる方法、また上述の共有
結合法により担体へ分子内に疎水基を有するカップリン
グ剤を結合させた後に疎水結合させる方法などがある。

分子内に疎水基を有するカップリング剤としては、オク
タデシルジメチル［３−（トリメトキシシリル〉プロピ
ル］アンモニウムクロライド、オククデシルトリクロロ
シラン、フェニルトリクロロシランなどがある。

前記配糖体を水不溶性固体物質に固定化してなる本発明
のリンパ球の分離剤を用いて、リンパ球分離操作を行う
には、これらの分離剤を体液または細胞懸濁液に浸漬す
るなどにより接触させて、リンパ球を回分式に吸着採取
することも可能であるが、より好ましくは、前記リンパ
球の分離剤の表面上に存在して細胞吸着に作用する配糖
体の絶対量や十分な細胞吸着スペースを獲得するという
点から、リンパ球の分離剤を充填してなる容器（カラム
）を有する分離装置を用いて接触せさることが好ましい
。

すなわち、本発明のリンパ球の分離装置は、前記配糖体
を前記水不溶性固体物質へ固定化した分離剤を充填した
容器を有することを特徴とするものである。

このリンパ球の分離装置において、容器を構成する材質
としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボ
ネート、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート等の
合成樹脂、ガラス、ステンレス等の金属、各種セラミッ
クスなどが使用できるが、オートクレーブ滅菌が可能で
、取り扱いやすい材料であるポリプロピレンやポリカー
ボネート等が特に好ましい。

また、このリンパ球の分離装置の容器であるカラムの出
入口とリンパ球の分離剤を充填した分離剤層との間には
、血球浮遊液中の細胞成分は通過するが分離剤は通過で
きない網目や細孔を有するフィルタ一部材を備えている
ことが好ましい。　このフィルタ一部材としては、例え
ばメツシュ、不織布等が好適に使用され、その構成材料
は、生理学的に不活性で強度の高いものであればよく、
特にポリエステルやポリアミ　９０ドを用いるのが好ましい。

第１図は、本′発明のリンパ球の分離装置の構成例を模
式的に示す断面図である。　同図に示すリンパ球の分離
装置ｌにおいては、流体導入口２および流体導出口３を
備えるカラム容器４に、好ましくは粒子状の不溶性固体
物質よりなる前記リンパ球の分離剤５が充填されており
、この分離剤５は、流体導入口２および流体導出口３の
近傍に設けられたフィルター６ａ、６ｂによってカラム
容器４内に保持されている。

このリンパ球の分離装置１を用いて、免疫疾患の患者に
対して体外循環療法を行うには、例えば第２図に示すよ
うな回路中にこのリンパ球の分離装置１を組み入れれば
よい。

この第２図に示す体外循環回路を用いて体外の循環療法
を簡単に説明すると、患者から脱血された血液は、該回
路の血液導入ロアより回路内に導入され、血液ポンプ８
、および圧力ゲージ１０ａを備えるチャンバー９８を通
って、定流速にてリンパ球の分離装置１内へ流体導入口
２より導入され、カラム容器４内に収納されたリンパ球
の分離剤５と接触する。

リンパ球の分離剤５が、例えば、サプレッサー／サイト
トキシックＴリンパ球を選択的に吸着しつるものであれ
ば、ここで血液中のサブレッサー／サイトトキシックＴ
リンパ球が分離剤５に選択的に吸着され、所定の収率で
分離され、サブレッサー／サイトトキシックＴリンパ球
以外の分画が濃縮された血液を得ることができる。

このような処理がなされた血液は、流体導出口３よりリ
ンパ球の分離装置１外へ導出され、圧力ゲージ１０ｂを
備えるチャンバー９ｂを通って、恒温槽１１で加温され
た後、気泡検知器１２を通って、回路の血液導出口１３
より患者の体内へ戻される。

なお、このような構成のリンパ球の分離装置は、カラム
容器４の内部（血液と接触する部分）が、その使用前に
温熱滅菌（オートクレーブ滅菌）、ガス滅菌（例えば、
ＥＯＧ滅菌）または放射線滅菌などの滅菌法により滅菌
処理がなされているのが好ましい。

本発明のリンパ球分離装置の容器としては、図示のごと
きカラム容器に限らず１例えばシリンジ外筒等でもよい
。

〈実施例〉以下、本発明の具体的実施例について説明する。

（実施例１）担体（水不溶性固体物質）としてジビニルベンゼンモノ
マーとグリシジルメタクリレ−１−モノマーと２−ヒド
ロキシエチルアクリレートオリゴマー（分子量２３０）
との原料組成が重量比で２２．８：４６．２：３１．Ｏ
である三元共重合体の粒状物（藤倉化成■社製、平均粒
径０．１５ｍｍ（以下、多孔性粒子Ａと称する））１０
ｇに配糖体であるＯ、１Ｍヘスベリジン（ビタミンＰ）
を含む０．２Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ１０）　２　Ｏｎ＋ｊ
を加えて脱気した。　そして、これを８０℃の水浴中で
３時間加温した後、ブラッドミキサーを用い室温にて一
晩撹拌した。

次に、蒸留水１００ｍｊで洗浄した後、酢酸でｐＨ８に
調整した１Ｍモノエタノールアミン水溶？Ｆｉ２０ｍｊ
を加えた。　そして、ブラッドミキサーを用い室温下で
一晩撹拌し、未反応のエポキシ基をブロッキングした。

このようにして調製した分離剤を、蒸留水、０．２Ｍ炭
酸緩衝液（ｐＨ１０）　、　０．　１　Ｍ酢酸緩衝液（
ｐＨ４）、Ｏ，１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）の各１
００ｍ１で洗浄した。

この分離剤をｐＨ７，２のリン酸緩衝化塩溶液（ＰＢＳ
）に懸濁させ、先端内部にポリエステル不織布を入れた
容量２．５＋ｎｊのディスポーザブルシリンジ（テルモ
■社製）へ、１．Ｏｍｊ充填した。　そして、このシリ
ンジ先端に２５Ｇ針および細胞回収容器を取り付け、リ
ンパ球の分離装置とした。

この分離装置を使用して、以下の細胞分離実３４験を行った。

すなわち、分離装置を構成するシリンジの上端開口部よ
り、高比重液（ファルマシア社製、商品名：フィコール
−バック）を用いた比重遠心法により得られたヒト末梢
血単核球懸濁液（ＰＢＭＣ）１ｍｊを添加しく白血球数
１８００×１０４個）、その後ＰＢ８２ｍ氾でリンスし
、流出して来た細胞を回収した。　そして、この回収液
中の細胞数を自動血球算定装置（ＥＬＴ８、オルソーイ
ンスツルメント社製）で測定した後、ＦＩＴＣ標識抗Ｌ
　ｅ　ｕ　−２ａ抗体およびＰＥ標識抗Ｌｅｕ−３ａ抗
体（いずれもベクトン・ディッキンソン社製）で染色し
、フローサイトメーター（Ｃｙｔｏ　Ａｃｅ−１５０、
日本分光■社製）によって、サブレッサー／サイトトキ
シックＴ細胞、ヘルパー／インデューサー子細胞および
リンパ球の割合をそれぞれ求めた。　そして、分離剤と
接触する前の細胞数およびリンパ球、Ｔリンパ球サブセ
ットの割合と比較することにより、各細胞の接着率を算
出した。

その結果を表１に示す。

（実施例２）分離剤の担体に固定化する配糖体を、ヘスベリジンに代
り、フラボノール配糖体であるルチンとした以外は、実
施例１と同様にして細胞分離実験を行った。

その結果を表１に示す。

（実施例３）担体としてシリカゲル（富士デヴイソン化学社製、粒径
７４〜１４９−）をシランカップリング剤のγ−グリシ
ドキシプロビルトリメトキシシラン（ＧＯＰＴＳ）で表
面処理したものを使用した以外は、実施例１と同様にし
て、細胞分離実験を行った。

その結果を表１に示す。

なお、ＧＯＰＴＳでのシリカゲルの表面処理は次のよう
に行った。

水酸化カリウムでｐＨ９に調整した５％ＧＯＰＴＳ水溶
液にシリカゲルを浸した後、液層を傾斜法により捨てた
。　次いで、湿潤状態のシリカゲルをステンレス製バッ
トに移した後、オーブンで１５０℃、１時間加熱反応さ
せた。

（比較例）前記多孔性粒子Ａをそのままリンパ球の分離剤として使
用した以外は、実施例１と同様にして細胞分離実験を行
った。

その結果を表１に示す。

　７８上記表１に示す結果から明らかなように、実施例１〜３
による本発明のリンパ球の分離剤は、いずれも、配糖体
を有していない比較例のリンパ球の分離剤に比べ、サブ
レッサー／サイトトキシックＴリンパ球を選択的に捕捉
するものであり、その他のリンパ球を濃縮することかで
きた。

〈発明の効果〉以上述べたように、本発明のリンパ球の分離剤によれば
、特定リンパ球に対し親和性を有する配糖体を水不溶性
固体物質へ固定化したことにより、リンパ球を選択的に
かつ大量に効率良く簡便に分離することが可能であり、
免疫機能に関連したリンパ球の機能解析などの基礎研究
、さらには各種免疫疾患の診断や治療にとって有効であ
る。

さらに、本発明のリンパ球の分離剤において、特定リン
パ球に対し親和性を有する配糖体がフラボノイド配糖体
であり、さらにはこのフラボノイド配糖体がフラボノー
ル配糖体またはフラバノン配糖体であると、分離剤がリ
ンパ球膜表面抗原レセプターに対してより高い親和性を
示し、−層優れた効果が得られるものとなる。

また、本発明のリンパ球の分離装置によれば、上記のご
とき優れた特性を有するリンパ球の分離剤と、体液や細
胞懸濁液との接触をより効率よく行うことができ、例え
ば免疫疾患の体外循環療法に応用した場合、患者の血液
から特定のリンパ球またはリンパ球のサブセットを短時
間でかつ効率よく除去することが可能となり、より効率
的な治療、あるいは処理操作が期待できるものとなる。

さらに、上記のごとく本発明のリンパ球の分離装置を体
外循環療法に適用した場合において、特定のリンパ球を
捕捉した分離剤に、リンホカイン、モノ力イン、サイト
力イン、細胞分化因子あるいは免疫調節剤を作用させな
がら細胞培養した後、リンパ球が産生じたリンホカイン
を回収したり、リンパ球を吸着拮抗剤で離脱させて患者
の体内へ戻すことも可能であり、より多彩な治療が期待
できるものである。

さらに、本発明のリンパ球の分離装置は、温熱滅菌、ガ
ス滅菌または放射線滅菌等の滅菌処理をしても性能の低
下はみられず、安定したリンパ球の分離能を示すゆえに
、正確な診断、安全な治療を行うことのできるものであ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明のリンパ球の分離装置の構成例を模式
的に示す縦断面図である。第２図は、本発明のリンパ球の分離装置を組み込んだ体
外循環療法回路の一例を示す構成図である。符号の説明１・・・リンパ球の分離装置２・・・流体導入口３・・・流体導出口４・・・カラム容器５・・・リンパ球の分離剤６ａ、６ｂ・・・フィルター７・・・血液導入口８・・・血液ポンプ９ａ、９ｂ・・・チャンバー１０ａ、１０　ｂ−・・圧力ゲージ１１・・・恒温槽１２・・・気泡検知器１３・・・血？夜導出口出　　願　　人　　テ　　ル　　モ　　株　式　会　社
代　　理　　人　　弁理士　　　石　　井　　隔間　　
　　　弁理士　　　増　　１）　達　　哉１２（〕

Claims

【特許請求の範囲】

（１）特定のリンパ球に対し親和性を有する配糖体を水
不溶性固体物質に固定化したことを特徴とするリンパ球
の分離剤。
（２）前記配糖体が、フラボノイド配糖体である請求項
１に記載のリンパ球の分離剤。
（３）前記フラボノイド配糖体が、フラボノール配糖体
またはフラバノン配糖体である請求項２に記載のリンパ
球の分離剤。
（４）前記特定のリンパ球がサブレッサー／サイトトキ
シックＴリンパ球である請求項１〜３のいずれかに記載
のリンパ球の分離剤。
（５）前記水不溶性固体物質は、粒子状をなすものであ
る請求項１〜４のいずれかに記載のリンパ球の分離剤。
（６）水不溶性固体物質の粒径が、０．０５〜５ｍｍで
ある請求項５に記載のリンパ球の分離剤。
（７）請求項１〜６のいずれかに記載の分離剤を充填し
た容器を有することを特徴とするリンパ球の分離装置。
（８）前記容器の内部が滅菌処理されたものである請求
項７に記載のリンパ球の分離装置。