JPH0343080A - ストレプトベルチシリウム属由来の新規トランスグルタミナーゼの製造法 - Google Patents
ストレプトベルチシリウム属由来の新規トランスグルタミナーゼの製造法Info
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- JPH0343080A JPH0343080A JP2147881A JP14788190A JPH0343080A JP H0343080 A JPH0343080 A JP H0343080A JP 2147881 A JP2147881 A JP 2147881A JP 14788190 A JP14788190 A JP 14788190A JP H0343080 A JPH0343080 A JP H0343080A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［利用９腎１
本発明は、ストレプトベルチシリウム属由来の新規トラ
ンスグルタミナーゼの製造法に関する。
ンスグルタミナーゼの製造法に関する。
更に詳しくは、新規トランスグルタミナーゼ生産能を有
するストレプトベルチシリウム属に属する菌株を栄養培
地に培養し、該培養物より新規トランスグルタミナーゼ
を採取することを特徴とするストレプトベルチシリウム
属由来の新規トランスグルタミナーゼの製造法に関する
。
するストレプトベルチシリウム属に属する菌株を栄養培
地に培養し、該培養物より新規トランスグルタミナーゼ
を採取することを特徴とするストレプトベルチシリウム
属由来の新規トランスグルタミナーゼの製造法に関する
。
トランスグルタミナーゼは、ペプチド鎖内にあるグルタ
ミン残基のγ−カルボキシアミド基のアシル転移反応を
触媒する酵素である。
ミン残基のγ−カルボキシアミド基のアシル転移反応を
触媒する酵素である。
このトランスグルタミナーゼは、アシル受容体としてタ
ンパク質中のりジン残基のε−アミノ基が作用すると、
分子内及び分子間にε−（γ−Ｇｌｕ）−Ｌｙｓ架橋結
合が形成される。また水がアシル受容体として機能する
ときは、グルタミン残基が脱アミド化されグルタミン酸
残基になる反応を進行させる酵素である。
ンパク質中のりジン残基のε−アミノ基が作用すると、
分子内及び分子間にε−（γ−Ｇｌｕ）−Ｌｙｓ架橋結
合が形成される。また水がアシル受容体として機能する
ときは、グルタミン残基が脱アミド化されグルタミン酸
残基になる反応を進行させる酵素である。
また、本発明の新規トランスグルタミナーゼを利用して
製造されるタンパク質のゲル化物は、従来のゲル状食品
、ゲル状化粧料をはじめとしてヨーグルト、ゼリー、チ
ーズなどとして用いられる。
製造されるタンパク質のゲル化物は、従来のゲル状食品
、ゲル状化粧料をはじめとしてヨーグルト、ゼリー、チ
ーズなどとして用いられる。
［従来の技術］
トランスグルタくナーゼはこれまで動物由来のものが知
、られている。例えばモルモ゛ットの肝臓（Ｃｏｎｎｅ
ｌｌａｎ ｅｔ ａｌ、、ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏ
ｌＯｇｉｃａｌＣｈｅ１ｉＳｔｒ’／）２４６巻 ４号
１０９３〜１０９８頁（１９７１））及び哺乳動物の
臓器、血液に広く分布しくＦｏｌｋ ｅｔａｌ、、アト
パンセス・イン・エンザイモロジ−（Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ ＥｎｚｙＩｌｏｌｏｇｙ）３８巻 １０９〜１
９１ 頁（１９７３）、Ｆｏｌｋ ｅｔ ａｌ、、アト
パンセス・イン・プロティン・ケミストリー（ＡｄＶａ
ｎＣｅＳ ｉｎ ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｅＩＩｉｓｔｒｙ
） ３１巻１〜１３３頁（１９７７）） 、その酵素の
特徴も研究されている。
、られている。例えばモルモ゛ットの肝臓（Ｃｏｎｎｅ
ｌｌａｎ ｅｔ ａｌ、、ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏ
ｌＯｇｉｃａｌＣｈｅ１ｉＳｔｒ’／）２４６巻 ４号
１０９３〜１０９８頁（１９７１））及び哺乳動物の
臓器、血液に広く分布しくＦｏｌｋ ｅｔａｌ、、アト
パンセス・イン・エンザイモロジ−（Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ ＥｎｚｙＩｌｏｌｏｇｙ）３８巻 １０９〜１
９１ 頁（１９７３）、Ｆｏｌｋ ｅｔ ａｌ、、アト
パンセス・イン・プロティン・ケミストリー（ＡｄＶａ
ｎＣｅＳ ｉｎ ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｅＩＩｉｓｔｒｙ
） ３１巻１〜１３３頁（１９７７）） 、その酵素の
特徴も研究されている。
しかし、現時点ではストレプトベルチシリウム属由来の
トランスグルタミナーゼについては報告されていない。
トランスグルタミナーゼについては報告されていない。
［発明が解決しようとする問題点］
従来トランスグルタミナーゼの供給は動物に由来してい
るため実用性を考慮した場合、供給量、供給費用、保存
費用、ｖＩ製の困難さ等の種々の面から不利でありこの
ままでは産業上の利用への可能性はほとんど考えられな
かった。
るため実用性を考慮した場合、供給量、供給費用、保存
費用、ｖＩ製の困難さ等の種々の面から不利でありこの
ままでは産業上の利用への可能性はほとんど考えられな
かった。
従って、本発明の課題は供給量、コストの面、精製の容
易さ等のいずれの面からも問題はなく、しかも反応にＣ
ａ２＋を必要としなくともよい点等、実用性の高いスト
レプトベルチシリウム属由来の新規トランスグルタミナ
ーゼの製造法の提供である。
易さ等のいずれの面からも問題はなく、しかも反応にＣ
ａ２＋を必要としなくともよい点等、実用性の高いスト
レプトベルチシリウム属由来の新規トランスグルタミナ
ーゼの製造法の提供である。
Ｅ問題点を解決するための手段］
これまで動物由来の酵素が検討されてきたが実用性に欠
けるため、本発明者等は給源を微生物に求め広く検索を
行った結果、ストレプトベルチシリウム属の菌について
Ｃａ２＋非存在下でもペプチド鎖内のグルタミン残基の
γ−カルボキシアミド基のアシル転移反応を触媒する従
来にない新規トランスグルタミナーゼ産生能があること
を見い出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本
発明はＣａ２＋非依存性の、ペプチド鎖内のグルタミン
残基のγ−カルボキシアミド基のアシル転移反応を触媒
する新規トランスグルタミナーゼ生産能を有するストレ
プトベルチシリウム属に属する菌株を栄養培地に培養し
、該培養物より該新規トランスグルタミナーゼを採取す
ることを特徴とするストレプトベルチシリウム属由来の
新規トランスグルタミナーゼの製造法に関する。
けるため、本発明者等は給源を微生物に求め広く検索を
行った結果、ストレプトベルチシリウム属の菌について
Ｃａ２＋非存在下でもペプチド鎖内のグルタミン残基の
γ−カルボキシアミド基のアシル転移反応を触媒する従
来にない新規トランスグルタミナーゼ産生能があること
を見い出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本
発明はＣａ２＋非依存性の、ペプチド鎖内のグルタミン
残基のγ−カルボキシアミド基のアシル転移反応を触媒
する新規トランスグルタミナーゼ生産能を有するストレ
プトベルチシリウム属に属する菌株を栄養培地に培養し
、該培養物より該新規トランスグルタミナーゼを採取す
ることを特徴とするストレプトベルチシリウム属由来の
新規トランスグルタミナーゼの製造法に関する。
ストレプトベルチシリウム属の菌を具体的に示すと、ス
トレプトベルチシリウム、・グリセオカルネウム（Ｓｔ
ｒｅｌ）ｔＯＶｅｒｔｉｃｉｌｌｊｕｌｌ （ｌｒｉｓ
ｅＯｃａｒｒｌｅｕｌｌ）ＩＦＯ１２７７６、ストレプ
トベルチシリウム・シナモネウム・サブ・エスピー・シ
ナモネウム （ＳｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｌＩｃｉｎｎ
ａｍｏｎｅｕｎ ｓｕｂ ｓｐ。
トレプトベルチシリウム、・グリセオカルネウム（Ｓｔ
ｒｅｌ）ｔＯＶｅｒｔｉｃｉｌｌｊｕｌｌ （ｌｒｉｓ
ｅＯｃａｒｒｌｅｕｌｌ）ＩＦＯ１２７７６、ストレプ
トベルチシリウム・シナモネウム・サブ・エスピー・シ
ナモネウム （ＳｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｌＩｃｉｎｎ
ａｍｏｎｅｕｎ ｓｕｂ ｓｐ。
ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ）ＩＦＯ１２８５２，ストレプ
トベルチシリウム・モバラエンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅ
ｒｔｉＣｉｌｌｉｕｌｌｎｏｂａｒａｅｎｓｅ）ＩＦｏ
１３８１９等があげられる。
トベルチシリウム・モバラエンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅ
ｒｔｉＣｉｌｌｉｕｌｌｎｏｂａｒａｅｎｓｅ）ＩＦｏ
１３８１９等があげられる。
これら微生物を培養し、ストレプトベルチシリウム属由
来のトランスグルタミナーゼ（尚、以後ＢＴＧａｓｅと
記す）を取得するための培養法及び精製法等について述
べる。
来のトランスグルタミナーゼ（尚、以後ＢＴＧａｓｅと
記す）を取得するための培養法及び精製法等について述
べる。
本発明を実施するにあたり、その培養形態としては液体
培養、固体培養いずれも可能であるが、工業的には深部
通気撹拌培養を行うのが有利である。
培養、固体培養いずれも可能であるが、工業的には深部
通気撹拌培養を行うのが有利である。
又、使用する栄！！培地の培養源としては一般に微生物
培養に用いられる炭素源、窒素源、無機塩及びその他の
微量栄ｉ源の他、ストレブトベルチシリウム属に属する
微生物の利用出来る栄養源であれば全て使用出来る。培
地の炭素源としてはブドウ糖、シヨ糖、可溶性デンプン
「ラスターゲン」〈商品名９日電化学社製）、グリセリ
ン、デキストリン、Ｒ粉等の他、脂肪酸、油脂、有機酸
などが単独で又は組合せて用いられる。窒素源としては
無機窒素源、有機窒素源のいずれも使用可能であり、無
機栄養源としては硝酸アンモニウム、＠酸アンモニウム
、尿素、硝酸ソーダ、ＦＡ化アンモニウム等が挙げられ
る。又有機窒素源としては大豆、米、トウモロコシ、小
麦などの粉、糠、脱脂粕をはじめコーンステイープリカ
ー、ペプトン。
培養に用いられる炭素源、窒素源、無機塩及びその他の
微量栄ｉ源の他、ストレブトベルチシリウム属に属する
微生物の利用出来る栄養源であれば全て使用出来る。培
地の炭素源としてはブドウ糖、シヨ糖、可溶性デンプン
「ラスターゲン」〈商品名９日電化学社製）、グリセリ
ン、デキストリン、Ｒ粉等の他、脂肪酸、油脂、有機酸
などが単独で又は組合せて用いられる。窒素源としては
無機窒素源、有機窒素源のいずれも使用可能であり、無
機栄養源としては硝酸アンモニウム、＠酸アンモニウム
、尿素、硝酸ソーダ、ＦＡ化アンモニウム等が挙げられ
る。又有機窒素源としては大豆、米、トウモロコシ、小
麦などの粉、糠、脱脂粕をはじめコーンステイープリカ
ー、ペプトン。
肉エキス、カゼイン、アミノ酸、酵母エキス等が挙げら
れる。無機塩及び微量栄養素としてはリン酸、マグネシ
ウム、カリウム、鉄、カルシウム。
れる。無機塩及び微量栄養素としてはリン酸、マグネシ
ウム、カリウム、鉄、カルシウム。
亜鉛等の塩類の他ビタミン、非イオン界面活性剤。
消泡剤等の菌の生育やＢＴＧａｓｅの生産を促進するも
のであれば必要に応じて使用出来る。
のであれば必要に応じて使用出来る。
培養は好気的条件で、培養温度は菌が発育しＢＴＧａｓ
ｅが産生する範囲であれば良く、好ましくは２５〜３５
℃である。培養時間は条件により異なるがＢＴＧａｓｅ
Ｓ最も産生される時間まで培養すれば良く、通常２〜４
日程度である。
ｅが産生する範囲であれば良く、好ましくは２５〜３５
℃である。培養時間は条件により異なるがＢＴＧａｓｅ
Ｓ最も産生される時間まで培養すれば良く、通常２〜４
日程度である。
ＢＴＧａｓｅは液体培養では培養液中に溶解されており
、培養終了後培養液より固形分を除いた培養ろ液より採
取される。培養ろ液より ＢＴＧａｓｅを精製するには
通常酵素精製に用いられるあらゆる方法が使用出来る。
、培養終了後培養液より固形分を除いた培養ろ液より採
取される。培養ろ液より ＢＴＧａｓｅを精製するには
通常酵素精製に用いられるあらゆる方法が使用出来る。
例えばエタノール、アセトン、イソプロピルアルコール
等の有機溶媒による処理、硫安１食塩等による塩析、透
析、限外ろ適法、イオン交換クロマトグラフィー、吸着
クロマトグラフィー、ゲルろ過、吸着剤、等電点分画等
の方法が使用出来る。
等の有機溶媒による処理、硫安１食塩等による塩析、透
析、限外ろ適法、イオン交換クロマトグラフィー、吸着
クロマトグラフィー、ゲルろ過、吸着剤、等電点分画等
の方法が使用出来る。
又これらの方法を適当に組合せることによりＢＴＧａｓ
ｅの精製度が上る場合は適宜組合せて行うことが出来る
。
ｅの精製度が上る場合は適宜組合せて行うことが出来る
。
こうしてこれらの方法によって得られた酵素液に安定化
剤として各種の塩類、糖類、蛋白質、脂質、界面活性剤
等を加えあるいは加えることなく、限外ろ過濃縮、逆浸
透濃縮、減圧乾燥、凍結乾燥。
剤として各種の塩類、糖類、蛋白質、脂質、界面活性剤
等を加えあるいは加えることなく、限外ろ過濃縮、逆浸
透濃縮、減圧乾燥、凍結乾燥。
噴霧乾燥の方法を施すことにより液状又は固形のＩ製Ｂ
ＴＧａｓｅを得ることが出来る。
ＴＧａｓｅを得ることが出来る。
ＢＴＧａｓｅの活性測定はベンジルオキシカルボニル−
し−グルタミニルグリシンとヒトＯキシルアミンを基質
としてＣａ２＋非存在下で反応を行い、生成したヒドロ
キサム酸をトリクロロ酢酸存在下で銖錯体を形成させ５
２５ｎｉの＠収を測定し、ヒドロキサム酸の量を検量線
より求め活性を算出する。
し−グルタミニルグリシンとヒトＯキシルアミンを基質
としてＣａ２＋非存在下で反応を行い、生成したヒドロ
キサム酸をトリクロロ酢酸存在下で銖錯体を形成させ５
２５ｎｉの＠収を測定し、ヒドロキサム酸の量を検量線
より求め活性を算出する。
８ＴＧａｓｅ活性は特に記載しないかぎり以下に記載す
る方法により測定した。
る方法により測定した。
〈活性測定法〉
試薬Ａ ０．２Ｈトリスｊ３ｉｉＭ！緩ｉｌｉ液（ｐＨ
６，０）０．１Ｈヒドロキシルアミン ｏ、ｏｉｓ還元型グルタチオン ０、０３８ベンジルオキシカルボニル−試薬８ ３Ｎ
塩酸 １２％トリクロロ酢酸 ５％ＦｅＣｌ −６目，０ （０．ＩＮＨＣＩに溶解） 上記溶液の１：１：１の混合液を試薬Ｂとする。
６，０）０．１Ｈヒドロキシルアミン ｏ、ｏｉｓ還元型グルタチオン ０、０３８ベンジルオキシカルボニル−試薬８ ３Ｎ
塩酸 １２％トリクロロ酢酸 ５％ＦｅＣｌ −６目，０ （０．ＩＮＨＣＩに溶解） 上記溶液の１：１：１の混合液を試薬Ｂとする。
酵素液の０． ０５ｄに試薬Ａ０．５−を加えて混合し
３７゛Ｃで１０分間反応後、試薬Ｂ０．５−を加えて反
応停止とＦｅ錯体の形成を行った後５２５−ｒ＋ｍの吸
光度を測定する。対照としてあらかじめ熱失活させた酵
素液を用いて同様に反応させたものの吸光度を測定し、
酵素液との吸光度差を求める。別に酵素液のかわりにし
一グルタミン酸γ−モノヒドロキサム酸を用いて検量線
を作成し、前記吸光度差により生成されたヒドロキサム
酸の量を求め、１分間に１μモルのヒドロキサム酸を生
成する酵素活性を１単位とした。
３７゛Ｃで１０分間反応後、試薬Ｂ０．５−を加えて反
応停止とＦｅ錯体の形成を行った後５２５−ｒ＋ｍの吸
光度を測定する。対照としてあらかじめ熱失活させた酵
素液を用いて同様に反応させたものの吸光度を測定し、
酵素液との吸光度差を求める。別に酵素液のかわりにし
一グルタミン酸γ−モノヒドロキサム酸を用いて検量線
を作成し、前記吸光度差により生成されたヒドロキサム
酸の量を求め、１分間に１μモルのヒドロキサム酸を生
成する酵素活性を１単位とした。
このようにして得られる精製ＢＴＧａｓｅの酵素化学的
性質を以下に述べる。尚、ストレプトベルチシリウム馬
肉の菌株の種類により ＢＴＧａＳｅの酵素化学的性質について若干の相違点が
みられるので、それぞれの菌株の生産するＢＴＧａｓｅ
、即ちストレプトベルチシリウム・モバラエンス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｎｏｂａｒａｅ
ｎｓｅ）ＩＦｏ １３８１９のトランスグルタミナーゼ
（ＢＴＧ−１と命名〉、ストレプトベルチシリウム・グ
リセオ力ルネウムｔｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔ ｉｃ ｉ
ｌ Ｉ ｉｕｌｌｏｒｉｓｅｏｃａｒｎｅｕｍ） Ｉ
ＦＯ１２７７６のトランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ−２
と命名）、ストレプトベルチシリウム・シナモネウム・
サブ・エスピー・シナモネウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒ
ｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｎｓｕｂ
ｓｐ、ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ）） ＩＦＯ１２８５２
のトランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ−３と命名）につい
ての酵素化学的性質を記載するとともに、それらを包含
したものをＢＴＧａｓｅの酵素化学的性質とする。
性質を以下に述べる。尚、ストレプトベルチシリウム馬
肉の菌株の種類により ＢＴＧａＳｅの酵素化学的性質について若干の相違点が
みられるので、それぞれの菌株の生産するＢＴＧａｓｅ
、即ちストレプトベルチシリウム・モバラエンス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｎｏｂａｒａｅ
ｎｓｅ）ＩＦｏ １３８１９のトランスグルタミナーゼ
（ＢＴＧ−１と命名〉、ストレプトベルチシリウム・グ
リセオ力ルネウムｔｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔ ｉｃ ｉ
ｌ Ｉ ｉｕｌｌｏｒｉｓｅｏｃａｒｎｅｕｍ） Ｉ
ＦＯ１２７７６のトランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ−２
と命名）、ストレプトベルチシリウム・シナモネウム・
サブ・エスピー・シナモネウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒ
ｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｎｓｕｂ
ｓｐ、ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ）） ＩＦＯ１２８５２
のトランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ−３と命名）につい
ての酵素化学的性質を記載するとともに、それらを包含
したものをＢＴＧａｓｅの酵素化学的性質とする。
ａ）至適ＤＨ：６〜７
基質としてベンジルオキシカルボニル−Ｌ−グルタミニ
ルグリシンとヒドロキシルアくンを使用し、３７℃、１
０分反応で作用至適ｐＨ範囲を求めた。尚、ＢＴＧ−１
の至適１）Ｈは６〜７にあり、ＢＴＧ−２の至適ｐＨは
６〜７付近にあり、ＢＴＧ−３の至適ｐＨは６〜７付近
にある（第１図、第５図及び第９図参照）。
ルグリシンとヒドロキシルアくンを使用し、３７℃、１
０分反応で作用至適ｐＨ範囲を求めた。尚、ＢＴＧ−１
の至適１）Ｈは６〜７にあり、ＢＴＧ−２の至適ｐＨは
６〜７付近にあり、ＢＴＧ−３の至適ｐＨは６〜７付近
にある（第１図、第５図及び第９図参照）。
ｂ）至適温度：４５〜５５℃
基質としてベンジルオキシカルボニル−Ｌ−グルタミニ
ルグリシンとヒドロキシルアミンを使用し、ｐＨ６，１
０分反応での作用至適温度範囲を求めた。尚、ＢＴＧ−
１の至適温度は５５℃付近であり、８ＴＧ−２の至適温
度は４５℃付近であり、ＢＴＧ−３の至適温度は４５℃
付近にある（第２図、第６図及び第１０図参照）。
ルグリシンとヒドロキシルアミンを使用し、ｐＨ６，１
０分反応での作用至適温度範囲を求めた。尚、ＢＴＧ−
１の至適温度は５５℃付近であり、８ＴＧ−２の至適温
度は４５℃付近であり、ＢＴＧ−３の至適温度は４５℃
付近にある（第２図、第６図及び第１０図参照）。
ｃ ） ｐＨ安定性：ｐＨ５〜９
３７℃、１０分間処理でのｐＨ安定性を求めた。尚、Ｂ
ＴＧ−１はｐＨ５〜９で安定であり、ＢＴＧ−２はｐＨ
は５〜９で安定であり、ＢＴＧ−３はＥＩＨ６〜９で安
定である（第３図、第７図及び第１１図参照）。
ＴＧ−１はｐＨ５〜９で安定であり、ＢＴＧ−２はｐＨ
は５〜９で安定であり、ＢＴＧ−３はＥＩＨ６〜９で安
定である（第３図、第７図及び第１１図参照）。
ｄ）温度安定性
ｐＨ７で１０分間処理での温度安定範囲を求めた。
４０℃では８０％以上、５０℃では５０〜８０％の活性
がそれぞれ残存した。尚、ＢＴＧ−１は４０℃では８８
％活性が残存し、５０℃では７４％活性が残存し、ＢＴ
Ｇ−２は４０℃では８６％活性が残存し、５０℃では５
６％活性が残存し、ＢＴＧ＝−，３は４０℃で８０％活
性が残存し、５０℃では５３％活性が残存する〈第４図
、第８図及び第１２図参照〉。
がそれぞれ残存した。尚、ＢＴＧ−１は４０℃では８８
％活性が残存し、５０℃では７４％活性が残存し、ＢＴ
Ｇ−２は４０℃では８６％活性が残存し、５０℃では５
６％活性が残存し、ＢＴＧ＝−，３は４０℃で８０％活
性が残存し、５０℃では５３％活性が残存する〈第４図
、第８図及び第１２図参照〉。
ｅ）基質特異性
ＢＴＧａｓｅの各種合成基質とヒドロキシルアくンとの
反応を調べた。
反応を調べた。
合成基質がベンジルオキシカルボニルアスパラギニルグ
リシン、ベンジルオキシカルボニルグルタミン、グリシ
ルグルタミニルグリシンの場合反応しない。
リシン、ベンジルオキシカルボニルグルタミン、グリシ
ルグルタミニルグリシンの場合反応しない。
しかし、合成基質がペンジルオキシ力ルポニルグルタミ
ニルグリシンの場合反応性は最も高い。この時の各種合
成基質濃度は５１１Ｎとした。
ニルグリシンの場合反応性は最も高い。この時の各種合
成基質濃度は５１１Ｎとした。
結果は表−１に示される。尚、表−１中のＣＢＩはベン
ジルオキシカルボニル基の略であり、ａ＋ｎはグルタミ
ル基の略であり、ＧＩｙはグリシル基の略であり、 Ａｓｎ はアスパラギニル基の略 である。
ジルオキシカルボニル基の略であり、ａ＋ｎはグルタミ
ル基の略であり、ＧＩｙはグリシル基の略であり、 Ａｓｎ はアスパラギニル基の略 である。
表
ｆ）金属イオンの影響
活性測定系に１１Ｎ濃度になるように各種金属イオンを
加えて影響を調べた。
加えて影響を調べた。
結果は表−２に示される。ＢＴ（３ａｓｅはＣｕ、Ｚｎ
”＋により活性が阻害される。
”＋により活性が阻害される。
２十
表
ｈ〉阻害剤の影響
各阻害剤を１ｉＨになるように加え、２５℃、３０分放
置後、活性を測定した。
置後、活性を測定した。
結果は表−３に示される。８ＴＧａｓｅはパラクロロマ
ーキュリ−安息香酸（ＰＣＭ８と略する）、Ｎ−エチル
マレイミド（ＮＥＭと略する）、モノヨード酢酸により
活性が阻害される。
ーキュリ−安息香酸（ＰＣＭ８と略する）、Ｎ−エチル
マレイミド（ＮＥＭと略する）、モノヨード酢酸により
活性が阻害される。
表 −３
表−３中ＰＭＳＦはフェニルメチルスルホニルフロオラ
イドの略である。
イドの略である。
ｉ〉等電点：８．９〜９．９
アンホライン等電点電気泳動により求めた。
尚、ＢＴＧ−１の等電点（ｐＩ）は９付近であり、ＢＴ
Ｇ−２の等電点（ｐｌ）は９．７付近であり、ＢＴＧ−
３の等電点（ｐｌ）は９．８付近である。
Ｇ−２の等電点（ｐｌ）は９．７付近であり、ＢＴＧ−
３の等電点（ｐｌ）は９．８付近である。
ｊ）分子ｍ：約３８，０００〜約４１，０００ＳＯＳデ
イスク電気泳動法より求めた。尚、ＢＴＧ−１の分子量
は約３８．０００であり、ＢＴＧ−２の分子量は約４１
，０００であり、８ＴＧ−３の分子量は約４１，０００
である。
イスク電気泳動法より求めた。尚、ＢＴＧ−１の分子量
は約３８．０００であり、ＢＴＧ−２の分子量は約４１
，０００であり、８ＴＧ−３の分子量は約４１，０００
である。
次に、ＢＴＧａｓｅとモルモット肝由来のトランスグル
タミナーゼ（以後ＭＴＧａｓｅと記す）との性質を比較
する。尚、ＭＴＧａｓ−ｅは特開昭５８−１４９６４５
号に記載された方法で調製した。
タミナーゼ（以後ＭＴＧａｓｅと記す）との性質を比較
する。尚、ＭＴＧａｓ−ｅは特開昭５８−１４９６４５
号に記載された方法で調製した。
表−４には各酵素化学的性質の比較を、表−５にはＣａ
２＋の活性に及ぼす影響を示す。表−４及び表−５より
明らかなように従来上として研究されているＭＴＧａｓ
ｅとストレプトベルチシリウム属由来のＢＴＧａｓｅと
では酵素化学的性質において種々の差が見られ、特に温
度安定性、分子量、等電点、基質特異性に差が見られる
。また、Ｃａ２＋の存在下及び非存在下のいずれにおい
ても本発明のトランスグルタミナーゼは作用する点等で
も明らかな差がみられる。従って、本発明のＢＴＧａｓ
ｅはＭＴＧａｓｅとはその性質を明らかに異にするもの
であり、新規トランスグルタミナーゼである。
２＋の活性に及ぼす影響を示す。表−４及び表−５より
明らかなように従来上として研究されているＭＴＧａｓ
ｅとストレプトベルチシリウム属由来のＢＴＧａｓｅと
では酵素化学的性質において種々の差が見られ、特に温
度安定性、分子量、等電点、基質特異性に差が見られる
。また、Ｃａ２＋の存在下及び非存在下のいずれにおい
ても本発明のトランスグルタミナーゼは作用する点等で
も明らかな差がみられる。従って、本発明のＢＴＧａｓ
ｅはＭＴＧａｓｅとはその性質を明らかに異にするもの
であり、新規トランスグルタミナーゼである。
表
以下に本発明の８ＴＧａｓｅの製造法について実施例に
て具体的に説明する。
て具体的に説明する。
１亙旦ユ
ストレプトベルチシリウム・モバラエンス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｉ １ｏｂａｒａｅｎｓｅ
）ＩＦＯ１３８１９を培地組成ポリペプトン０．２％、
グルコース０．５％。
ｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｉ １ｏｂａｒａｅｎｓｅ
）ＩＦＯ１３８１９を培地組成ポリペプトン０．２％、
グルコース０．５％。
リン酸二カリウム０．２％、硫酸マグネシウム０．１％
からなる水性培地（ｐＨ７）２００ｄ Ｉｃ接種し３０
”Ｃ，４８時間培養し、得られた種培養液をポリペプト
ン２．０％、「ラスターゲン」０．２％、リン酸二カリ
ウム０．２％、硫酸マグネシウム０．１％、酵母エキス
０．２％、消泡剤としてポリオキシアルキレングリコー
ルの「アデカノール」 （商品名、旭電化社製品） Ｏ
，ＯＳ％からなる水性培地２０１ （ｐＨ７）に加え３
０℃で３日間培養後ろ過し、培養液１８．５１’ｌ！ｌ
た。
からなる水性培地（ｐＨ７）２００ｄ Ｉｃ接種し３０
”Ｃ，４８時間培養し、得られた種培養液をポリペプト
ン２．０％、「ラスターゲン」０．２％、リン酸二カリ
ウム０．２％、硫酸マグネシウム０．１％、酵母エキス
０．２％、消泡剤としてポリオキシアルキレングリコー
ルの「アデカノール」 （商品名、旭電化社製品） Ｏ
，ＯＳ％からなる水性培地２０１ （ｐＨ７）に加え３
０℃で３日間培養後ろ過し、培養液１８．５１’ｌ！ｌ
た。
このものの活性は０．３５ユニツト／ｄであった。
培養液を塩酸でｐＨ６，５に調製し、予め０．０５Ｍリ
ン酸緩衡液（ｐＨ６，５）で平衡化しておいたメタアク
リル酸系ポーラス型隣イオン交換樹脂の「アンバーライ
トＣＧ−５０４（商品名、ローム・アンド・ハース社製
品）のカラムに通した。この操作でトランスグルタ４ナ
ーゼは＠着された。さらに同緩衝液で不純蛋白質を洗い
流した後、更に０．０５〜０゜５Ｍの同緩衝液の濃度勾
配をつくり、通液して溶出液を分画回収し、比活性の高
い分画を集めた。
ン酸緩衡液（ｐＨ６，５）で平衡化しておいたメタアク
リル酸系ポーラス型隣イオン交換樹脂の「アンバーライ
トＣＧ−５０４（商品名、ローム・アンド・ハース社製
品）のカラムに通した。この操作でトランスグルタ４ナ
ーゼは＠着された。さらに同緩衝液で不純蛋白質を洗い
流した後、更に０．０５〜０゜５Ｍの同緩衝液の濃度勾
配をつくり、通液して溶出液を分画回収し、比活性の高
い分画を集めた。
電導度を１０ｎｓ以下になるように稀釈′後「ブルーセ
ファロースＣＬ−６ＢＪ （商品名、ファルマシア・
ファインケミカル社製）のカラムに通した。
ファロースＣＬ−６ＢＪ （商品名、ファルマシア・
ファインケミカル社製）のカラムに通した。
この操作でトランスグルタミナーゼは吸着された。
更に０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）で不純蛋白質を
洗い流した後、０〜１Ｍの食塩濃度勾配をつくり通液し
て溶出液を回収し比活性の高い画分を集めた。
洗い流した後、０〜１Ｍの食塩濃度勾配をつくり通液し
て溶出液を回収し比活性の高い画分を集めた。
限外濾過膜のｒＡ Ｉ ＬｌｏｌｏＪ （商品名、旭
化或工業（株）製）を使い濃縮し、０．５Ｍの食塩を含
む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）を用いて平衡化さ
せた。
化或工業（株）製）を使い濃縮し、０．５Ｍの食塩を含
む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）を用いて平衡化さ
せた。
得られたＩＩ縮液を同！ｌ樹液で予め平衡化しておいた
「セファデックスＧ−７５Ｊ （商品名、ファルマシ
ア・ファインケミカル社製）を含むカラムに通し、同緩
衝液を流して溶出液を分画した。
「セファデックスＧ−７５Ｊ （商品名、ファルマシ
ア・ファインケミカル社製）を含むカラムに通し、同緩
衝液を流して溶出液を分画した。
この結果活性画分は単一のピークとして溶出された。こ
のものの比活性は培養ろ液に対し６２５倍であり、回収
率は４７％であった。
のものの比活性は培養ろ液に対し６２５倍であり、回収
率は４７％であった。
大１ｕ生２
実施例１と同様にしてストレプトベルチシリウム・グリ
セオ力ルネウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔ ｉｃ ｉ
ｌ ｌ ｉｕｍａｒｉｓｅｏｃａｒｎｅｕｌ） ＩＦＯ
１２７７６を３０℃で３日間培養後ろ過し培養液１９１
を得た。このものの活性は０゜２８Ｕ／ルであった。
セオ力ルネウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔ ｉｃ ｉ
ｌ ｌ ｉｕｍａｒｉｓｅｏｃａｒｎｅｕｌ） ＩＦＯ
１２７７６を３０℃で３日間培養後ろ過し培養液１９１
を得た。このものの活性は０゜２８Ｕ／ルであった。
実施例１と同様な方法で酵素を精製してＳＯＳディスク
電気泳動で単一の酵素を得た。
電気泳動で単一の酵素を得た。
友簾旦ユ
実施例１と同様にしてストレプトベルチシリウム・シナ
モネウム・サブ・エスピー・シナモネウム（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｎ ｃｉｎｎａｎ＋ｏｎｅ
ｕｎ ｓｕｂ ｓｐ。
モネウム・サブ・エスピー・シナモネウム（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｎ ｃｉｎｎａｎ＋ｏｎｅ
ｕｎ ｓｕｂ ｓｐ。
ｃｉｎｎａｌｏｎｅｕＩ） ＩＦｏ １２８５２を３０
℃で３日間培養後ろ過し、培養液１８．５ｊ！を得た。
℃で３日間培養後ろ過し、培養液１８．５ｊ！を得た。
このものの酵素活性は０．５ｕ／−であった。
実施例１と同様な方法で酵素を精製してＳＤＳディスク
電気泳動で単一の酵素を得た。
電気泳動で単一の酵素を得た。
【発明の効果］
本発明のストレプトベルチシリウム属由来のＢＴＧａｓ
ｅは安価に供給され、かつ精製も容易であるので実用性
が大である。
ｅは安価に供給され、かつ精製も容易であるので実用性
が大である。
また、ＢＴＧａｓｅを用いることにより、カルシウム非
存在下でも酵素（ＢＴＧａｓｅ＞１度及び基質濃度が非
常に低いところで品質の優れたゲル化物を製造できると
いう利点がある。
存在下でも酵素（ＢＴＧａｓｅ＞１度及び基質濃度が非
常に低いところで品質の優れたゲル化物を製造できると
いう利点がある。
第１図、第２図、第３図及び第４図は本願発明のＢＴＧ
−１の至適ｐＨ曲線、至適温度曲線、ｐ１１安定曲線及
び温度安定曲線を示すものであり、第５図、第６図、第
７図及び第８図は本願発明のＢＴＧ−２の至適ｐＨ曲線
、至適温度曲線、 ｐＨ安定曲線及び温度安定曲線を示
すものであり、第９図、第１０図、第１１図及び第１２
図は、本願発明のＢＴＧ３の至適ＯＨ曲線、至適温度曲
線、ｐ１１安定曲線及び温度安定曲線を示すものである
。 第 図 ｐＨ 第 図 ０ ０６０ 温度（°Ｃ） ０ 第 ３ 図 ｐＨ 第 図 温 度 （”Ｃ） 第 図 ｐＨ・ 露 図 ０ ０６０ 温度（”Ｃ） ０ 露 図 ｐＨ 第 図 温 度 （°Ｃ） 第 図 ｐＨ 第 ０ 図 ０ ０ ０ ０ 瀉 度 （”Ｃ）
−１の至適ｐＨ曲線、至適温度曲線、ｐ１１安定曲線及
び温度安定曲線を示すものであり、第５図、第６図、第
７図及び第８図は本願発明のＢＴＧ−２の至適ｐＨ曲線
、至適温度曲線、 ｐＨ安定曲線及び温度安定曲線を示
すものであり、第９図、第１０図、第１１図及び第１２
図は、本願発明のＢＴＧ３の至適ＯＨ曲線、至適温度曲
線、ｐ１１安定曲線及び温度安定曲線を示すものである
。 第 図 ｐＨ 第 図 ０ ０６０ 温度（°Ｃ） ０ 第 ３ 図 ｐＨ 第 図 温 度 （”Ｃ） 第 図 ｐＨ・ 露 図 ０ ０６０ 温度（”Ｃ） ０ 露 図 ｐＨ 第 図 温 度 （°Ｃ） 第 図 ｐＨ 第 ０ 図 ０ ０ ０ ０ 瀉 度 （”Ｃ）
Claims (1)
- （１）Ｃａ＾２＾＋非依存性の、ペプチド鎖内のグルタ
ミン残基のγ−カルボキシアミド基のアシル転移反応を
触媒する新規トランスグルタミナーゼ生産能を有するス
トレプトベルチシリウム属に属する菌株を栄養培地に培
養し、該培養物より該新規トランスグルタミナーゼを採
取することを特徴とするストレプトベルチシリウム属由
来の新規トランスグルタミナーゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2147881A JPH0343080A (ja) | 1987-03-04 | 1990-06-06 | ストレプトベルチシリウム属由来の新規トランスグルタミナーゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62-49157 | 1987-03-04 | ||
| JP4915787 | 1987-03-04 | ||
| JP2147881A JPH0343080A (ja) | 1987-03-04 | 1990-06-06 | ストレプトベルチシリウム属由来の新規トランスグルタミナーゼの製造法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62165067A Division JPH0665280B2 (ja) | 1987-03-04 | 1987-07-01 | タンパクゲル化剤及びそれを用いるタンパクのゲル化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0343080A true JPH0343080A (ja) | 1991-02-25 |
| JPH0523744B2 JPH0523744B2 (ja) | 1993-04-05 |
Family
ID=26389516
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2147881A Granted JPH0343080A (ja) | 1987-03-04 | 1990-06-06 | ストレプトベルチシリウム属由来の新規トランスグルタミナーゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0343080A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993020837A1 (fr) * | 1992-04-21 | 1993-10-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Remede contre les plaies |
| US6039901A (en) * | 1997-01-31 | 2000-03-21 | Givaudan Roure Flavors Corporation | Enzymatically protein encapsulating oil particles by complex coacervation |
| JP2016500266A (ja) * | 2012-12-14 | 2016-01-12 | ヒルズ・ペット・ニュートリシャン・インコーポレーテッド | 食品組成物の調製方法 |
| US11577670B2 (en) | 2018-11-29 | 2023-02-14 | Nishikawa Rubber Co., Ltd. | Weather strip, weather strip attachment structure, and weather strip attachment method |
-
1990
- 1990-06-06 JP JP2147881A patent/JPH0343080A/ja active Granted
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993020837A1 (fr) * | 1992-04-21 | 1993-10-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Remede contre les plaies |
| US6039901A (en) * | 1997-01-31 | 2000-03-21 | Givaudan Roure Flavors Corporation | Enzymatically protein encapsulating oil particles by complex coacervation |
| US6325951B1 (en) | 1997-01-31 | 2001-12-04 | Givaudan Roure Flavors Corporation | Enzymatically protein-encapsulating oil particles by complex coacervation |
| JP2016500266A (ja) * | 2012-12-14 | 2016-01-12 | ヒルズ・ペット・ニュートリシャン・インコーポレーテッド | 食品組成物の調製方法 |
| US11577670B2 (en) | 2018-11-29 | 2023-02-14 | Nishikawa Rubber Co., Ltd. | Weather strip, weather strip attachment structure, and weather strip attachment method |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0523744B2 (ja) | 1993-04-05 |
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