JPH0344331A - コラゲナーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、カカオ植物の所定の部分から抽出して得られ
るコラゲナーゼ阻害剤に関し、更に詳しくは、これを用
いて歯周病の病原菌として知られているＢａｃｔｅｒｏ
ｉｄｅｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（バクテロイデス・ジ
ンジバリス）の産生ずるコラゲナーゼを阻害することに
より歯周病の予防および治療を図るコラゲナーゼ阻害剤
に関する。

［従来の技術］ 歯周病は細菌性由来の炎症性疾患である。

歯周病の中では成人性歯周炎が最も多いが、この病因と
して、歯周組織のコラーゲン線維がコラゲナーゼによっ
て破壊されるとする説が有力であり、このコラゲナーゼ
は、患者の歯周ポケットから多数分離されるバクテロイ
デス・ジンジバリスが生産するものと考えられている。

バクテロイデス・ジンジバリスは、血液平板上で黒色の
コロニーを形成する非運動性のダラム陰性個性嫌気性桿
菌であり、その病原性因子についての解明が進展しつつ
ある。

歯周病の病原菌として最も有力視されているバクテロイ
デス・ジンジバリスは様々な蛋白質分解酵素を産生ずる
が、その中でも歯周組織の破壊を導く直接的な因子とさ
れるコラゲナーゼを特異的に阻害することができれば、
歯周病の予防および治療を有効に達成し得ると考えられ
る。

歯周病の予防および治療に用いることを意図するコラゲ
ナーゼ阻害剤は、口腔内で使用するものであるため、安
全性の観点から合成物よりも天然抽出物、理想的には、
古くから人類が食用とし人体に無害であると認められて
いる食用素材から抽出されたものであることが望ましい
、更に、口腔用として使用するためには、呈味性良好で
あるか、またはそれ自体無味無臭であることも必要であ
る。また、天然物から抽出したものであっても、原料と
する天然物が希少で入手困難なものや、複雑な抽出ｖｉ
製工程を要するものはコスト的に問題があり、工業的に
利用するには不適切である。

コラゲナーゼに対する阻害剤として、例えばテトラサイ
クリンのような合成薬剤が幾つか報告されているが、天
然物に関する報告は殆どなく、僅かに大豆抽出物（特開
昭６１−２７５２２４号および特開昭６２−２８６９２
６号）があるのみである。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明は、安全性、良好な呈味性または無味無臭性、入
手容易性並びに抽出容易性を備え、かつ安価な原料から
抽出した抽出物からなる有効なコラゲナーゼ阻害剤を提
供することを目的とする。

［課題を解決するための手段］ 本発明によれば、カカオ豆の豆皮であるカカオハスクよ
り抽出した抽出物からなることを特徴とするコラゲナー
ゼ阻害剤が提供される。

このコラゲナーゼ阻害剤は、カカオ豆の豆皮であるカカ
オハスクより抽出して製造するが、好ましくはカカオハ
スクの疎水性物質を有機溶媒で除去後、水で抽出するこ
とにより製造することができ、これにより抽出効率を上
げることができる。

コラゲナーゼ阻害剤が、カカオ豆の豆皮であるカカオハ
スクより有機溶媒で抽出される疎水性物質を含有せず、
水で抽出されない抽出残渣を含有しないものであれば好
適である。

有機溶媒が、ヘキサン、アセトン並びにアルコールより
なる群から選択されれば好適である。

カカオ豆の豆皮であるカカオハスクが、カカオ豆焙煎後
に分離される豆皮であれば好適である。

本発明によるコラゲナーゼ阻害剤は、例えば、カカオハ
スク１００ｇを粉砕した後、１０００〜５０００旧のヘ
キサンを加え、室温で１０〜３０時間抽出してカカオハ
スクの脱脂を行い、必要に応じて抽出残渣に更に１００
０〜５０００ＩＩＩのエタノールを加え、室温で１０〜
３０時間抽出してヘキサンによっては除去しきれない疎
水性物質を抽出除去し、その後抽出残渣に１０００〜５
０００１１の水を加え、室温で１０〜３０時間抽出して
抽出液を得、この水抽出液を乾固または凍結乾燥するこ
とにより製造することができ、これにより１０〜１５ｇ
の本発明によるコラゲナーゼ阻害剤を得ることができる
。

カカオハスクは、カカオ（ＴｈｅｏｂｒｏＩｌａｃａｃ
ａｏ、Ｌ、　）の種皮（豆殻）であり、ココアパウダー
やチョコレート製造過程で得られるものや、通常のカカ
オ豆から得られるものを使用することができる。カカオ
ハスクはＭＩ維質であり、リグニン類、タンニン類、多
糖類等を成分とすると考えられるが、詳細は明らかでは
ない、しかしながら、本発明が開示した所定の方法によ
ってカカオハスクを水抽出することにより、コラゲナー
ゼ阻害剤を得ることができる。

また、本発明によるコラゲナーゼ阻害剤は、呈味性が低
く実質的に無味無臭であり、食品中への添加に非常に適
した素材であるため、本発明によるコラゲナーゼ阻害剤
を、チューインガム、キャンデイ、飲料等に配合するこ
とによって、歯周病予防！ｌ！能を有する口腔用組成物
を提供することができる。この場合、本発明によるコラ
ゲナーゼ阻害剤を、好ましくは、０．０１〜１重量５！
≦程度添加する。

［作用］ バクテロイデス・ジンジバリスの産生するコラゲナーゼ
活性阻害物質を開発すべく研究を重ねた結果６．カカオ
ハスクの水抽出物に強いコラゲナーゼ活性阻害効果があ
ることを突き止めた０本発明は、この知見に基づいて完
成されたものである。

カカオハスクは、チョコレート製造過程においてカカオ
豆から分離される豆皮であり、これを用いて従来テオブ
ロミンや色素等が抽出されていたが、現在では特に有用
な用途がなく、その殆どが廃棄処分されているのが実状
である。したがって、カカオハスクのコラゲナーゼ活性
阻害作用という新しい効果を突き止めたことは、廃棄物
の有効利用という観点からも極めて意義深く、歯周病予
防および治療用素材として、十分実用化し得るものと考
えられる。

［発明の効果］ 本発明によれば、安全性、実質的な無味無臭性、入手容
易性並びに抽出容易性を備え、かつ安価な原料から抽出
した抽出物からなる有効なコラゲナーゼ阻害剤が提供さ
れる。

本発明によるコラゲナーゼ阻害剤は、チョコレート製造
過程で廃棄処分されているカカオハスクを原料とするた
め非常に低コストであり、また、ＩＱＯｇのカカオハス
クより１０〜１５ｇ抽出されるため非常に抽出効率が良
く、更に、安全性の高い天然物であると共に呈味性が低
く実質的に無味無臭であるため食品中への添加に非常に
適した素材であり、歯周病予防および治療用素材として
十分実用化し得るものである。

［実施例］ 以下に実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本
発明は以下の実施例にのみ限定されるものではない。

去１ｕ生上 次の工程によりカカオハスクからコラゲナーゼ阻害剤を
抽出した。

カカオハスク１００ｇを粉砕した後、１０００１′Ｉ１
１のヘキサンを加え、室温で２４時間抽出してカカオハ
スクの脱脂を行い、抽出残渣に更に１００Ｑ＋ｕｌのエ
タノールを加え、室温で２４時間抽出してヘキサンによ
っては除去しきれない疎水性物質を抽出除去し、その後
抽出残渣に１０００ｍ　ｌの水を加え、室温で２４時間
抽出して抽出液を得、この水抽出液を乾固または凍結乾
燥することにより、１０〜１５ｇの本発明によるコラゲ
ナーゼ阻害剤を得た。

Ｘ生型ユ 前記したようにして調製した本発明によるコラゲナーゼ
阻害剤のコラゲナーゼ阻害活性を測定した。

コラゲナーゼ活性の測定は、コラゲナーゼ）ＣＬＮ−１
００＜登録商標、コスモバイオ株式会社）を用いて行っ
た６本キットは、螢光標識コラーゲンを基質とし、コラ
ゲナーゼ反応後に生じる分解物を抽出し、その螢光光度
を測定することにより、コラゲナー・セ活性を定量する
ものである。

コラゲナーゼ活性阻害試料として、本発明によるコラゲ
ナーゼ阻害剤およびコラゲナーゼ活性阻害効果が確認さ
れている塩酸テトラサイクリン（例えば、臼歯周誌第３
０巻１号、第１８２〜１９０頁を参照するとよい〉を用
いて、その効果の比較を行った。

本実施例で用いたバクテロイデス・ジンジバリスのコラ
ゲナーゼ溶液は以下の方法により調製した。

血液平板培地を用いて４日間嫌気的に培養を行ったバク
テロイデス・ジンジバリスＦＤＣ３８１株を、トリブチ
カーゼ・ソイ （Ｔｒｙｐｔ　１ｃａｓｅ　ＳＯＶ　）液体培地１５０
０ｎ＋Ｉに接種し、３日間嫌気的に培養した。培養液を
遠心分離（１２，０ＯＯｘ　Ｇ、２０分間、４℃）し、
上澄を８０％硫酸アンモニウム飽和とし、遠心分離（１
２，０ＯＯｘ　Ｇ、２０分間、４°Ｃ）を行って８０％
硫安画分を集めた。この画分を０．０５Ｍ　トリス−Ｈ
Ｃｌ綬８液（ｐＨ７，５）　３００　ｎｌに溶解し、０
６２２μｍのフィルタでろ過し、これをバクテロイデス
・ジンジバリスのコラゲナーゼ溶液とした。

基質コラーゲン溶液は、０．０５％螢光標識コラーゲン
を含有する０、０５Ｍ　トリス−ＨＣｌ　４５５液（ｐ
Ｈ７，５）とし、また、試料溶液は、本発明によるコラ
ゲナーゼ阻害剤および塩酸テトラサイクリンを０．０５
Ｍ　トリス−ＨＣｌ　１１街液（ｐＨ７，５）を用いて
所定の濃度に調整したものとした。

実験系は、バクテロイデス・ジンジバリスのコラゲナー
ゼ溶液２００μｍ、基質コラーゲン溶液２００　ｐｉ並
びに試料溶液１００　Ｅｌからなる計５００μｍとし、
３５℃で２時間反応を行い、分解物の螢光強度によりコ
ラゲナーゼ活性の測定を行った。結果を以下に示す、な
お、活性の単位ｔＵは、１分間に１μｇのコラーゲンを
分解する酵素量とした。

波目　ｌえ±Ｘ±　活性　　　止−ａ豆−〔２」−（ｎ
ｕ／ｎ＋Ｉ） と全量 ５２１ 主五旦亙よ玉コラゲナーゼ匪豊田 ０．１　　　　　　　３２４ ０．０５　　　　　　５０３ ０．０１　　　　　　７０６ ０．００５　　　　１１９１ ０．００１　　　　１４９２ 髭艷立五二二エヱユ之 ０．１　　　　　　　３８５ （１，０５５８４ ０，０１１０８８ ００ ５ ８ ２ ０，００５１２２３８０ ０，００１１４９２９８ これらの結果から、本発明によるコラゲナーゼ阻害剤の
阻害活性は、活性阻害物質として知られている塩酸テト
ラサイクリンより強く、その阻害の程度は添加濃度に依
存して増加し、０．０１％の添加により５０％以上の阻
害活性〈コラゲナーゼの比活性は４６％〉を示すことが
分る。

監旌旦ユ 本発明によるコラゲナーゼ阻害剤を使用して、次の処方
によりチューインガムを製造した。

直置 ガムベース 砂糖 グルコース 水飴 香料 本発明による 旦遮（１！！菫上 ２０．０％ ５５．０ １５．０ ９．３ ０．５ コラゲナーゼ阻害剤 合計 ００ ％

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）カカオ豆の豆皮であるカカオハスクより抽出した
   抽出物からなることを特徴とするコラゲナーゼ阻害剤。
2. （２）カカオ豆の豆皮であるカカオハスクより有機溶媒
   で抽出される疎水性物質を含有せず、水で抽出されない
   抽出残渣を含有しない請求項１記載のコラゲナーゼ阻害
   剤。
3. （３）有機溶媒が、ヘキサン、アセトン並びにアルコー
   ルよりなる群から選択される請求項２記載のコラゲナー
   ゼ阻害剤。
4. （４）カカオ豆の豆皮であるカカオハスクが、カカオ豆
   焙煎後に分離される豆皮である請求項１乃至３いずれか
   に記載のコラゲナーゼ阻害剤。