JPH0347070A - アミダーゼ酵素の生産方法 - Google Patents
アミダーゼ酵素の生産方法Info
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- JPH0347070A JPH0347070A JP2104363A JP10436390A JPH0347070A JP H0347070 A JPH0347070 A JP H0347070A JP 2104363 A JP2104363 A JP 2104363A JP 10436390 A JP10436390 A JP 10436390A JP H0347070 A JPH0347070 A JP H0347070A
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- acrylamide
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F6/00—Post-polymerisation treatments
- C08F6/006—Removal of residual monomers by chemical reaction, e.g. scavenging
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
- C12N9/80—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアミダーゼ酵素（アシルアミド・アミドヒドラ
ーゼＥ、Ｃ，Ａ３−５−１−４）、及びアクリルアミド
の分解における、ならびにアクリルアミドの分解による
アクリル酸またはその塩もしくはエステルの製造におけ
るその酵素の使用に関する。
ーゼＥ、Ｃ，Ａ３−５−１−４）、及びアクリルアミド
の分解における、ならびにアクリルアミドの分解による
アクリル酸またはその塩もしくはエステルの製造におけ
るその酵素の使用に関する。
ポリアクリルアミドポリマー、すなわちアクリルアミド
のホモ−及びヘテロ−ポリマーは、飲用木工業下水処理
、製紙及び鉱業において凝集剤として広く使用されてい
る。しかし、一般にそれらは累積性神経毒及び発ガン物
質である未反応のアクリルアミドモノマーで汚染されて
いるので、それらの利用は限定され、また例えば食品と
の関係においては使用できないことがある。現在、米国
において、ポリアクリルアミドは一般に５００ ｐｐｍ
未満の未反応アクリルアミドを含むことが許容されてお
り、この規制値は他の国へも導入されるようである。こ
のような未反応上ツマ−のレベルは、より長い重合時間
の使用により、「熱処理」法により、及びピロ硫酸ナト
リウムの使用により、達成しうる。これらの処理は、製
造コストを増加させ、そしてポリマーでの枝分れ及び鎖
分断により生成ポリマーの効果を低減させる。線状ポリ
マーは、よシ高い凝縮効果を示し、従って好ましい。
のホモ−及びヘテロ−ポリマーは、飲用木工業下水処理
、製紙及び鉱業において凝集剤として広く使用されてい
る。しかし、一般にそれらは累積性神経毒及び発ガン物
質である未反応のアクリルアミドモノマーで汚染されて
いるので、それらの利用は限定され、また例えば食品と
の関係においては使用できないことがある。現在、米国
において、ポリアクリルアミドは一般に５００ ｐｐｍ
未満の未反応アクリルアミドを含むことが許容されてお
り、この規制値は他の国へも導入されるようである。こ
のような未反応上ツマ−のレベルは、より長い重合時間
の使用により、「熱処理」法により、及びピロ硫酸ナト
リウムの使用により、達成しうる。これらの処理は、製
造コストを増加させ、そしてポリマーでの枝分れ及び鎖
分断により生成ポリマーの効果を低減させる。線状ポリ
マーは、よシ高い凝縮効果を示し、従って好ましい。
ポリアクリルアミドポリマーを損傷することなくポリマ
ー中の未反応モノマーのレベルｆ ５００ ｐｐｍ。
ー中の未反応モノマーのレベルｆ ５００ ｐｐｍ。
好ましくはさらに低い（５〜１０ ｐｐｍまたはそれ以
下）にまで低減させる信頼性ある方法が必要とされてい
る。存在する未反応モノマーが高信頼性を以って極めて
低いレベル（１〜５ ｐｐｍまたはそれ以下）にまで低
減されうるならば、ポリアクリルアミドは、それが現在
排除されている用途、例えば食品接触物品の製造での使
用あるいは食品との直接接触状態での使用、のために使
用できると考えられうる。
下）にまで低減させる信頼性ある方法が必要とされてい
る。存在する未反応モノマーが高信頼性を以って極めて
低いレベル（１〜５ ｐｐｍまたはそれ以下）にまで低
減されうるならば、ポリアクリルアミドは、それが現在
排除されている用途、例えば食品接触物品の製造での使
用あるいは食品との直接接触状態での使用、のために使
用できると考えられうる。
特公昭５４−１１３８９号（特開昭５３−８６０７８号
に対応）には、例えば廃水中またはポリアクリルアミド
中のアクリルアミドモノマーを、ブレビバクテリウム会
アンモニオＹ ネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃ ｔｅ−ｒｉｕ
ｍ ａｍｍｏｎｉｏｇｅｎｅｓ ）、好ましくはＡＴＣ
Ｃ１６４１、ＡＴＣＣ６８７１及びＡＴＣＣ６８７２菌
株の菌体内酵素と接触させることにより、分解する方法
が記載されている。しかしながら、長年にわたり公知で
あるにも拘らず、この方法は目立つ程度にまで商業的に
は使用されてきていないようである。さらには、ブレビ
バクテリウム・アンモニオゲネス酵素はポリアクリルア
ミドのラテンクス系では弱く作用するにすぎない。
に対応）には、例えば廃水中またはポリアクリルアミド
中のアクリルアミドモノマーを、ブレビバクテリウム会
アンモニオＹ ネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃ ｔｅ−ｒｉｕ
ｍ ａｍｍｏｎｉｏｇｅｎｅｓ ）、好ましくはＡＴＣ
Ｃ１６４１、ＡＴＣＣ６８７１及びＡＴＣＣ６８７２菌
株の菌体内酵素と接触させることにより、分解する方法
が記載されている。しかしながら、長年にわたり公知で
あるにも拘らず、この方法は目立つ程度にまで商業的に
は使用されてきていないようである。さらには、ブレビ
バクテリウム・アンモニオゲネス酵素はポリアクリルア
ミドのラテンクス系では弱く作用するにすぎない。
我々の公告済の欧州特許明細書第２７２０２５号には、
メチロフイルス・メチロトロフス種に属する細菌を、適
正な栄養及びアミドを含む培地中で、アミダーゼ酵素が
その細菌中に誘発されるような条件下で培養する、アミ
ダーゼ酵素の生産方法が記載されている。
メチロフイルス・メチロトロフス種に属する細菌を、適
正な栄養及びアミドを含む培地中で、アミダーゼ酵素が
その細菌中に誘発されるような条件下で培養する、アミ
ダーゼ酵素の生産方法が記載されている。
高活性を有するアミダーゼ酵素が商業的に容易に入手し
うろことは望ましいことであり、この目的達成手段とし
て、我々の公告済の欧州特許明細書第２７２０２６号に
は、高活性のアミダーゼ酵素の生産方法が記載されてお
り、この方法では、アミダーゼ酵素を含む微生物の細胞
またはエキスを、４０〜８０℃の範囲内の温度に、アミ
ダーゼ活性の顕著な増大が誘発されるに光る時間及びそ
のような条件下で、加熱する。
うろことは望ましいことであり、この目的達成手段とし
て、我々の公告済の欧州特許明細書第２７２０２６号に
は、高活性のアミダーゼ酵素の生産方法が記載されてお
り、この方法では、アミダーゼ酵素を含む微生物の細胞
またはエキスを、４０〜８０℃の範囲内の温度に、アミ
ダーゼ活性の顕著な増大が誘発されるに光る時間及びそ
のような条件下で、加熱する。
アミダーゼは、唯一の窒素源が脂肪族アミドである条件
下で増殖される多くの細胞の窒素資化機構の部分である
。
下で増殖される多くの細胞の窒素資化機構の部分である
。
従って、アミダーゼの同化作用上の役割は、例えは下記
の反応により、そのアミドからアンモニアを放出させる
ことである。
の反応により、そのアミドからアンモニアを放出させる
ことである。
放出されたアンモニアは、次いでタンパク生合成へ資化
さねる。生成される脂肪酸は、微生物のタイプに依存し
て資化されることもあり、資化されないこともある。
さねる。生成される脂肪酸は、微生物のタイプに依存し
て資化されることもあり、資化されないこともある。
アミダーゼは、また、下記の反応によるアクリルアミド
のフクリル酸への転化に触媒として作用しうるっ 適切な塩またはアルコールの存在下で、生成アクリル酸
は、その塩またはエステルに転化されうる。
のフクリル酸への転化に触媒として作用しうるっ 適切な塩またはアルコールの存在下で、生成アクリル酸
は、その塩またはエステルに転化されうる。
欧州特許明細書第２７２０２５号及び第２７２０２６号
の方法を用いると、１〜３．５単位（モル７分／■）の
範囲内、典型的には約２単位の活性を示し、アクリルア
ミドモノマーの分解法において使用するだめのアミダー
ゼ酵素を提供することが可能である。
の方法を用いると、１〜３．５単位（モル７分／■）の
範囲内、典型的には約２単位の活性を示し、アクリルア
ミドモノマーの分解法において使用するだめのアミダー
ゼ酵素を提供することが可能である。
本発明によれば、我々は、指向されたケモスタント選択
を用いて高レベルのアミダーゼ酵素を含む微生物を生産
する方法であって、 アミダーゼ酵素を含む微生物またはその酵素を誘発させ
うる微生物を、窒素源としてのアミドを含む適当な増殖
培地中で窒素制限条件下に、０．１〜１．１５／時の範
囲内の低い希釈速度で、見掛けのアミダーゼ活性レベル
を実質的に増加させるに足る時間にわたり培養する上記
方法を提供する。
を用いて高レベルのアミダーゼ酵素を含む微生物を生産
する方法であって、 アミダーゼ酵素を含む微生物またはその酵素を誘発させ
うる微生物を、窒素源としてのアミドを含む適当な増殖
培地中で窒素制限条件下に、０．１〜１．１５／時の範
囲内の低い希釈速度で、見掛けのアミダーゼ活性レベル
を実質的に増加させるに足る時間にわたり培養する上記
方法を提供する。
さらに本発明によれば、我々は、指向されたケモスタン
ト選択を用いて、改善された動的性質のアミダーゼ酵素
を高レベルで含む微生物を生産する方法であって： アミダーゼ酵素を含む微生物またはその酵素を誘発させ
うる微生物、あるいは前記本発明の第１の方法で生産さ
れた高レベルのアミダーゼ酵素を含む微生物を、低品位
のアミダーゼ基質であるアミドを窒素源として含む適当
な増殖培地中で窒素制限条件下に、０．０１〜０．１５
／時の希釈速度で、見掛けのアミダーゼ活性レベルを実
質的に増加させるに足る時間にわたり培養する上記方法
全提供する。
ト選択を用いて、改善された動的性質のアミダーゼ酵素
を高レベルで含む微生物を生産する方法であって： アミダーゼ酵素を含む微生物またはその酵素を誘発させ
うる微生物、あるいは前記本発明の第１の方法で生産さ
れた高レベルのアミダーゼ酵素を含む微生物を、低品位
のアミダーゼ基質であるアミドを窒素源として含む適当
な増殖培地中で窒素制限条件下に、０．０１〜０．１５
／時の希釈速度で、見掛けのアミダーゼ活性レベルを実
質的に増加させるに足る時間にわたり培養する上記方法
全提供する。
本発明の上記第１及び第２の方法で生産される高し−く
ルのアミダーゼ酵素を含む微生物も本発明の範囲内の一
部をなすものである。
ルのアミダーゼ酵素を含む微生物も本発明の範囲内の一
部をなすものである。
さらに本発明によれば、我々は、アクリルアミド含有媒
質中のアクリルアミドを分解する方法であってニ アクリルアミド含有媒質を、アクリルアミドを分解させ
ることができる酵素と、その酵素にとってアクリルアミ
ドを分解するのに適当な条件下で、接触させることから
なり、かつその酵素が前記本発明の第１または第２の方
法により生産されたアミダーゼ酵素であることを特徴と
する上記アクリルアミド分解方法を提供する。
質中のアクリルアミドを分解する方法であってニ アクリルアミド含有媒質を、アクリルアミドを分解させ
ることができる酵素と、その酵素にとってアクリルアミ
ドを分解するのに適当な条件下で、接触させることから
なり、かつその酵素が前記本発明の第１または第２の方
法により生産されたアミダーゼ酵素であることを特徴と
する上記アクリルアミド分解方法を提供する。
さらに本発明によれば、我々はアクリルアミド含有媒質
を、アクリルアミドをアクリル醪へ分解させることがで
きる酵素と、その酵素にとってアクリルアミドを分解し
てアクリル酸またはその塩もしくはエステルとするのに
適当な条件下で、接触させることからなり、かつその酵
素が前記本発明の第１まだは第２の方法によシ生産され
たアミダーゼ酵素であることを特徴とする、アクリル酸
またはその塩もしくはエステルを製造する方法を提供す
る。
を、アクリルアミドをアクリル醪へ分解させることがで
きる酵素と、その酵素にとってアクリルアミドを分解し
てアクリル酸またはその塩もしくはエステルとするのに
適当な条件下で、接触させることからなり、かつその酵
素が前記本発明の第１まだは第２の方法によシ生産され
たアミダーゼ酵素であることを特徴とする、アクリル酸
またはその塩もしくはエステルを製造する方法を提供す
る。
本発明の第２の方法で用いられる低品位アミダーゼ基質
はアクリルアミドであるのが好ましい。
はアクリルアミドであるのが好ましい。
本発明の分解方法は、アクリルアミドが存在するいずれ
の媒質中のアクリルアミドを分解するのにも使用できる
。この方法は、ポリアクリロアミドポリマー中に存在す
る未反応アクリルアミド、及び廃水、例えばアクリルア
ミドまたはポリアクリルアミドの製造プロセスからの廃
水、中に存在するアクリルアミドを分解するだめに殊に
有用である。
の媒質中のアクリルアミドを分解するのにも使用できる
。この方法は、ポリアクリロアミドポリマー中に存在す
る未反応アクリルアミド、及び廃水、例えばアクリルア
ミドまたはポリアクリルアミドの製造プロセスからの廃
水、中に存在するアクリルアミドを分解するだめに殊に
有用である。
ポリアクリルアミドは三つの化学的タイプのポリマーと
して製造される。これらはカチオン性、アニオン性及び
ノニオン性ポリマーであり、これにはアクリルアミドが
他のモノマー、例えばアクリル酸と共重合されているコ
ポリマーも包含される。これらのポリマーは、下記の三
つの基本的技法の一つによって製造されうる。
して製造される。これらはカチオン性、アニオン性及び
ノニオン性ポリマーであり、これにはアクリルアミドが
他のモノマー、例えばアクリル酸と共重合されているコ
ポリマーも包含される。これらのポリマーは、下記の三
つの基本的技法の一つによって製造されうる。
溶液重合・・・モノマーを水性溶液中で重合させて溶液
状生成物を得る。
状生成物を得る。
乾燥ポリマー・・・上記のようにして製造されるポリマ
ーであるが、次に使用前に加熱脱水されるポリマーであ
る。
ーであるが、次に使用前に加熱脱水されるポリマーであ
る。
ラテックスまたは懸濁重合・・・モノマーの水溶液を界
面活性剤及び非水溶媒（典型的には低臭気、４ラフイン
）と混合して、水性小滴の安定懸濁物を作シ、この系へ
重合開始剤を添加することにより懸濁物中でポリマーの
ビーズを生成させる。
面活性剤及び非水溶媒（典型的には低臭気、４ラフイン
）と混合して、水性小滴の安定懸濁物を作シ、この系へ
重合開始剤を添加することにより懸濁物中でポリマーの
ビーズを生成させる。
ラテックスまたは懸濁ポリマーは、市場占有率に関して
、ポリアクリルアミドの最大のグル−プを形成している
。
、ポリアクリルアミドの最大のグル−プを形成している
。
アニオン性及び中性ポリアクリルアミドポリマーは、本
発明の方法またはその他の方法（例えば我々の欧州特許
第２７２０２６号の方法）を用いてアミダーゼの直接添
加によってすぐに処理される。なんとなればそれらは６
〜９の範囲内のｐＨ値をもつように配合されているから
である。カチオン性ポリアクリルアミドポリマーも、本
発明の方法によりまたはその他の方法によってアミダー
ゼで処理されうるが、このようなポリマーは３〜４の範
囲内の酸性ｐＨ値をもつように配合されており、従って
アミダーゼの直接添加による処理は、上記アニオン性ま
たは中性ポリマーの場合よりも効率が低い。
発明の方法またはその他の方法（例えば我々の欧州特許
第２７２０２６号の方法）を用いてアミダーゼの直接添
加によってすぐに処理される。なんとなればそれらは６
〜９の範囲内のｐＨ値をもつように配合されているから
である。カチオン性ポリアクリルアミドポリマーも、本
発明の方法によりまたはその他の方法によってアミダー
ゼで処理されうるが、このようなポリマーは３〜４の範
囲内の酸性ｐＨ値をもつように配合されており、従って
アミダーゼの直接添加による処理は、上記アニオン性ま
たは中性ポリマーの場合よりも効率が低い。
カチオン性ポリアクリルアミドポリマーは、下記の工程
を経ることにより容易に処理される。
を経ることにより容易に処理される。
囚 処理されるべきポリマーのｐＨを３〜３．５の範囲
内の値から４〜９の範囲内の値まで上昇し。
内の値から４〜９の範囲内の値まで上昇し。
しかる後に
（Ｂ） ；Ｎリマーを、酵素にとってアクリルアミド
を分解するのに適当な条件下で、酵素により処理する。
を分解するのに適当な条件下で、酵素により処理する。
本発明の分解法及びアクリル酸製造方法に用いられるア
ミダーゼ酵素は、糸−ル（完全）微生物細胞中の適宜な
形態で、あるいは粗もしくは精製酵素エキスの形で存在
してよい。酵素はそれらの方法に対して、本発明の培養
法において初期に生産される培養液中のホール（完全）
細胞内に含まれた状態で、あるいはそのような培養液か
ら水及びその他の成分の部分的分離だけをした後に得ら
れる培地中のホール（完全）細胞中に含まれた状態で、
導入することもできる。
ミダーゼ酵素は、糸−ル（完全）微生物細胞中の適宜な
形態で、あるいは粗もしくは精製酵素エキスの形で存在
してよい。酵素はそれらの方法に対して、本発明の培養
法において初期に生産される培養液中のホール（完全）
細胞内に含まれた状態で、あるいはそのような培養液か
ら水及びその他の成分の部分的分離だけをした後に得ら
れる培地中のホール（完全）細胞中に含まれた状態で、
導入することもできる。
しかし、一般的には、細胞を培養液から分離してから、
それらの分解または製造方法において使用するのが好ま
しいう 好ましくは、本発明の酵素製造方法は、本発明の分解方
法及びアクリル酸製造方法に使用しうる、アクリルアミ
ド分解性アミダーゼを高レベルで含む細菌の生産に使用
される。
それらの分解または製造方法において使用するのが好ま
しいう 好ましくは、本発明の酵素製造方法は、本発明の分解方
法及びアクリル酸製造方法に使用しうる、アクリルアミ
ド分解性アミダーゼを高レベルで含む細菌の生産に使用
される。
以下、本発明をかかる酵素の製造及び使用に関して説明
する。
する。
好ましくは、本発明の第１及び第２の方法は、メチロフ
イルス・メチロトロフス種の菌株から、改善された動的
性質、より多い交替数、改善されたミバエリス定数（Ｋ
ｍ ）のアミダーゼ酵素を含む細菌を生産するのに用い
られる。この穆（以前は、シュードモナス−メチロトロ
ファと命名されていた）は、我々の英国特許第１３７０
８９２号明細書に記載されており、この種に属する菌株
が本発明方法の条件下で培養される。本発明方法に使用
するのに適当なこの種に属する菌株は、下記の三つの微
生物寄託機関に寄託されており、これらの機関から培養
物を入手できる。
イルス・メチロトロフス種の菌株から、改善された動的
性質、より多い交替数、改善されたミバエリス定数（Ｋ
ｍ ）のアミダーゼ酵素を含む細菌を生産するのに用い
られる。この穆（以前は、シュードモナス−メチロトロ
ファと命名されていた）は、我々の英国特許第１３７０
８９２号明細書に記載されており、この種に属する菌株
が本発明方法の条件下で培養される。本発明方法に使用
するのに適当なこの種に属する菌株は、下記の三つの微
生物寄託機関に寄託されており、これらの機関から培養
物を入手できる。
１、す・ナショナル−コレクション−オプψインダスト
リアルーアンド・マリン・バクテリアＬｔｄ （ＮＣＩ
ＭＢ ）：英国スコツトランド、アバディーンＡＢ２
ＩＲＹ、２３ Ｓｔマチャー・ドライブ。
リアルーアンド・マリン・バクテリアＬｔｄ （ＮＣＩ
ＭＢ ）：英国スコツトランド、アバディーンＡＢ２
ＩＲＹ、２３ Ｓｔマチャー・ドライブ。
２ ジ・アグリカルチュラル・リサーチ・カルチャー俳
コレクション（ＮＲＲＬ）、米国、６１６０４イリノイ
州ハオリア、１８１５ ノース・ユニパーシティ・スト
リート。
コレクション（ＮＲＲＬ）、米国、６１６０４イリノイ
州ハオリア、１８１５ ノース・ユニパーシティ・スト
リート。
３、通産省工業技術院微生物工業研究所（ＦＢＩ）。
これらの寄託棲関における寄託番号は下記の通りである
っ ＮＣＩＢ １０５０８〜１０５１５及び１０５９２〜
１０５９６ＮＲＲＬ Ｂ５３５２〜Ｂ ５３６４ＦＲ
Ｉ １２１５〜１２２７ 本発明の第１及び第２の方法において使用するのに好ま
しい菌株は、メチロフイルス・メチロトロフス菌株ＡＳ
１ （ＮＣＩＢ １０５１５）ｆあり、このものは
例えば食品と関連して使用が意図されるポリアクリルア
ミドポリマーを、処理するのに安全に使用できる。メチ
ロフイルス・メチロトロフス種及び上記菌株、殊にＡＳ
−１菌株は、周知に至っておシ、我々及びその他の人
々にょシ多くの文献に記述されている。上記の寄託に加
えて、それらの培養物は、英国及びその他の国の多くの
大学及び研究所においても保管維持されている。
っ ＮＣＩＢ １０５０８〜１０５１５及び１０５９２〜
１０５９６ＮＲＲＬ Ｂ５３５２〜Ｂ ５３６４ＦＲ
Ｉ １２１５〜１２２７ 本発明の第１及び第２の方法において使用するのに好ま
しい菌株は、メチロフイルス・メチロトロフス菌株ＡＳ
１ （ＮＣＩＢ １０５１５）ｆあり、このものは
例えば食品と関連して使用が意図されるポリアクリルア
ミドポリマーを、処理するのに安全に使用できる。メチ
ロフイルス・メチロトロフス種及び上記菌株、殊にＡＳ
−１菌株は、周知に至っておシ、我々及びその他の人
々にょシ多くの文献に記述されている。上記の寄託に加
えて、それらの培養物は、英国及びその他の国の多くの
大学及び研究所においても保管維持されている。
また本発明の方法における使用のために非常に適当であ
るものは、ＮＣＩＢから入手しうるＮＣｌＢ１１５８５
菌株であり、ＮＣＩＢ １０５１５菌株の遺伝子修飾
によるその製造は我々の欧州特許筒３５８３１ Ｂ号
明細書及び多くの他の文献に記載されている。
るものは、ＮＣＩＢから入手しうるＮＣｌＢ１１５８５
菌株であり、ＮＣＩＢ １０５１５菌株の遺伝子修飾
によるその製造は我々の欧州特許筒３５８３１ Ｂ号
明細書及び多くの他の文献に記載されている。
本発明の方法において、細菌細胞は、炭素源、窒素源、
リン源及びその他の適宜な栄養を含み、かつアミドを存
在させた培地中で、細胞中でアミダーゼが誘発されるよ
うな条件下で、好気培養される。適当な培養は、２０〜
４０℃、好ましくは３４〜３８℃の温度及び５．０〜８
．０、好ましくは５．８〜７．６のｐｌ（において生じ
る。メタノールは好ましい炭素源である。本発明の第１
の方法中に適宜なアミドを培地中に存在させうるが、ア
セトアミドが好ましい。第１の方法のために適当なその
他のアミドとしては、下記式のカルボン醗のアミドがあ
る。
リン源及びその他の適宜な栄養を含み、かつアミドを存
在させた培地中で、細胞中でアミダーゼが誘発されるよ
うな条件下で、好気培養される。適当な培養は、２０〜
４０℃、好ましくは３４〜３８℃の温度及び５．０〜８
．０、好ましくは５．８〜７．６のｐｌ（において生じ
る。メタノールは好ましい炭素源である。本発明の第１
の方法中に適宜なアミドを培地中に存在させうるが、ア
セトアミドが好ましい。第１の方法のために適当なその
他のアミドとしては、下記式のカルボン醗のアミドがあ
る。
−Ｃ−ＯＨ
１
ここにＲは、短鎖（すなわち１〜５炭素原子）脂肪族基
であって、直鎖でも分岐鎖でもよい。本発明の方法（第
１及び第２）において、アミドは唯一または主たる窒素
源であるのが好ましい。本発明の方法のために非常に適
当な培地は下記の組成を有する。
であって、直鎖でも分岐鎖でもよい。本発明の方法（第
１及び第２）において、アミドは唯一または主たる窒素
源であるのが好ましい。本発明の方法のために非常に適
当な培地は下記の組成を有する。
す／酸 １．６ ゴＭｇ５ｏ、・
７Ｈ，０１，９１２９ に２ＳＯ，０，９５２９ Ｃ１１ＳＯ４・５ Ｈ，００，８４０■ＺｎＳＯ４’Ｈ
２０Ｚ５６８ｍ９ ＭｎＳＯ４”４Ｈ２０４，０４ｍ９ ＰｅＳＯ４”７ＨｚＯ３７，２０ｍ？ ギ酸カルシウム ０．１７３９ 窒素は、アミド単独から、またはアミド及びアンモニア
から供給される。細胞はある範囲の細胞濃度において窒
素制限下に増殖される。
７Ｈ，０１，９１２９ に２ＳＯ，０，９５２９ Ｃ１１ＳＯ４・５ Ｈ，００，８４０■ＺｎＳＯ４’Ｈ
２０Ｚ５６８ｍ９ ＭｎＳＯ４”４Ｈ２０４，０４ｍ９ ＰｅＳＯ４”７ＨｚＯ３７，２０ｍ？ ギ酸カルシウム ０．１７３９ 窒素は、アミド単独から、またはアミド及びアンモニア
から供給される。細胞はある範囲の細胞濃度において窒
素制限下に増殖される。
生産される細胞は、いずれかの適当な方法で、好ましく
は、限外濾過または遠心分離によって採取され、１０〜
２５重量％の乾燥固形分を有するスラリーが得られる。
は、限外濾過または遠心分離によって採取され、１０〜
２５重量％の乾燥固形分を有するスラリーが得られる。
適当には、このスラリーを、例えば数回の凍結−解凍サ
イクルにより、あるいはビーズ・ミルまたはフレンチ圧
搾装置での機械的破壊により、破壊する。セル破砕片を
次いで遠心分離によって除去し、アミダーゼを含む粗無
細胞エキスを残留させる。熱処理をその遠心分離の前ま
たは後に行ないうるが、好ましくは遠心分離前にする。
イクルにより、あるいはビーズ・ミルまたはフレンチ圧
搾装置での機械的破壊により、破壊する。セル破砕片を
次いで遠心分離によって除去し、アミダーゼを含む粗無
細胞エキスを残留させる。熱処理をその遠心分離の前ま
たは後に行ないうるが、好ましくは遠心分離前にする。
なんとなれば遠心分離前の加熱処理は活性を増強するこ
とに加えて、遠心分離中の生成物の改善された沈降分＃
をもたらすからである。
とに加えて、遠心分離中の生成物の改善された沈降分＃
をもたらすからである。
このエキスは、所望ならば、アニオン系イオン交換クロ
マトグラフィ及びゲル濾過によってさらに精製されうる
。無細胞アミダーゼ製剤は、適当には００〜１０℃での
冷温で、あるいは凍結溶液の形で、または凍結乾燥製剤
の形で（使用前に水利）、貯蔵される。
マトグラフィ及びゲル濾過によってさらに精製されうる
。無細胞アミダーゼ製剤は、適当には００〜１０℃での
冷温で、あるいは凍結溶液の形で、または凍結乾燥製剤
の形で（使用前に水利）、貯蔵される。
本発明の方法で生産されるアミグーゼ含有細胞、または
アミダーゼ含有無細胞エキスが、我々の欧州特許明細書
簡２７２，０２６号に記載されるように、４０〜８０℃
の範囲内の温度に加熱される場合、我々は、最も普通に
は、アミダーゼ活性が、酵素製剤に応じて、１，５倍か
ら３５倍も非可逆的に増大されることを発見した。この
効果は５５〜６５℃の範囲内、特に５８〜６２℃の範囲
内の温度；４〜９の範囲内、特に６〜７の範囲内のｐＨ
；及び０．１〜２００ｍ９／ｌｎｌの範囲内のタンノモ
ク濃度；において最も太きい。このような条件下では、
アミダーゼの著しい変性はほとんど生じない。加熱は、
適当には、若干の例において２０分ないし１０時間、特
に３０分ないし１８０分の時間実施する。増大した活性
を生じさせるには、細胞または無細胞酵素を、それらが
本発明方法によって生産された直後に、まだはそれより
も少し後に加熱することができる。本発明方法（第１及
び第２）は、前述のように、あるいは下記の四工程を有
する同様なプロセスとして実施することができる。
アミダーゼ含有無細胞エキスが、我々の欧州特許明細書
簡２７２，０２６号に記載されるように、４０〜８０℃
の範囲内の温度に加熱される場合、我々は、最も普通に
は、アミダーゼ活性が、酵素製剤に応じて、１，５倍か
ら３５倍も非可逆的に増大されることを発見した。この
効果は５５〜６５℃の範囲内、特に５８〜６２℃の範囲
内の温度；４〜９の範囲内、特に６〜７の範囲内のｐＨ
；及び０．１〜２００ｍ９／ｌｎｌの範囲内のタンノモ
ク濃度；において最も太きい。このような条件下では、
アミダーゼの著しい変性はほとんど生じない。加熱は、
適当には、若干の例において２０分ないし１０時間、特
に３０分ないし１８０分の時間実施する。増大した活性
を生じさせるには、細胞または無細胞酵素を、それらが
本発明方法によって生産された直後に、まだはそれより
も少し後に加熱することができる。本発明方法（第１及
び第２）は、前述のように、あるいは下記の四工程を有
する同様なプロセスとして実施することができる。
これらの四工程は、発酵槽中で誘発アミダーゼを有する
細胞を増殖させる第１発酵工程；細胞を１０〜２０％の
乾燥固形分のスラリーに濃縮する第２・遠心分離工程；
細胞を前述の範囲内の温度への加熱に付す第３・熱衝撃
（ヒートショック）工程；及び破砕片金倉む沈澱物を酵
素含有上澄液から分離する第４・分離工程；である。
細胞を増殖させる第１発酵工程；細胞を１０〜２０％の
乾燥固形分のスラリーに濃縮する第２・遠心分離工程；
細胞を前述の範囲内の温度への加熱に付す第３・熱衝撃
（ヒートショック）工程；及び破砕片金倉む沈澱物を酵
素含有上澄液から分離する第４・分離工程；である。
アクリルアミドを分解させるだめの本発明の方法におい
て、アミダーゼは、あらゆるタイプのアクリルアミドポ
リマー、殊に三つの基本的化学タイプのラテックス、中
に存存する遊離アクリルアミド残留物を低減させるのに
用いられうる。ラテックスを処理する場合、アミダーゼ
溶１にラテックスに添加し、そして１〜１０，０００単
位／ラテックスに９、好ましくは１００〜ｚｏｏｏ単位
／ラテックスに９のルベルにおいて、攪拌または同様な
混合法によってラテックス内に分散させる。アミダーゼ
をラテックスと共にインキュベートすると、遊離アクリ
ルアミドがアクリル酸またはその塩に変化する。１０℃
〜１００℃、殊に３０℃〜８０℃のインキュベーション
温度が好ましい。ラテックスは適当には、３〜１０のｐ
Ｔ（範、囲、好ましくは５〜７のｐｉ（範囲にわたり処
理される。
て、アミダーゼは、あらゆるタイプのアクリルアミドポ
リマー、殊に三つの基本的化学タイプのラテックス、中
に存存する遊離アクリルアミド残留物を低減させるのに
用いられうる。ラテックスを処理する場合、アミダーゼ
溶１にラテックスに添加し、そして１〜１０，０００単
位／ラテックスに９、好ましくは１００〜ｚｏｏｏ単位
／ラテックスに９のルベルにおいて、攪拌または同様な
混合法によってラテックス内に分散させる。アミダーゼ
をラテックスと共にインキュベートすると、遊離アクリ
ルアミドがアクリル酸またはその塩に変化する。１０℃
〜１００℃、殊に３０℃〜８０℃のインキュベーション
温度が好ましい。ラテックスは適当には、３〜１０のｐ
Ｔ（範、囲、好ましくは５〜７のｐｉ（範囲にわたり処
理される。
本発明の方法で生産されるアミダーゼは、アクリルアミ
ドをアクリル酸へ変える。従ってこの反応は、アクリル
酸を製造する手段として、あるいは適当な塩またはアル
コールの存在下で実施されるときにはアクリル酸の塩ま
たはエステルを製造するのに使用できる。
ドをアクリル酸へ変える。従ってこの反応は、アクリル
酸を製造する手段として、あるいは適当な塩またはアル
コールの存在下で実施されるときにはアクリル酸の塩ま
たはエステルを製造するのに使用できる。
本発明の方法により生産されるアミダーゼは、殊に前述
のように加熱された場合に、極めて高い活性を示すっ従
ってアクリルアミド分解のだめの本発明の方法の使用は
、ポリアクリルアミドポリマーの有用性の範囲を大きく
拡げる。
のように加熱された場合に、極めて高い活性を示すっ従
ってアクリルアミド分解のだめの本発明の方法の使用は
、ポリアクリルアミドポリマーの有用性の範囲を大きく
拡げる。
本発明の第１及び第２の方法を以下の実施例により説明
する。
する。
実施例１
連続培養において栄養制限下に増殖している微生物は、
極めて低い希釈速度における増殖によって可成りの統制
された（指向性ある）選択的圧力の下に置かれうる。な
んとなれば帷持される制限栄養の濃關が棲めて低いから
である。この制限栄養の改善された資化を有する微生物
は、そのような状況中での使用のために強く選択されよ
う。そのような改善された資化は、制限栄養の一次同化
に関与するより高いレベルの酵素の産生によって引き起
こされうる。
極めて低い希釈速度における増殖によって可成りの統制
された（指向性ある）選択的圧力の下に置かれうる。な
んとなれば帷持される制限栄養の濃關が棲めて低いから
である。この制限栄養の改善された資化を有する微生物
は、そのような状況中での使用のために強く選択されよ
う。そのような改善された資化は、制限栄養の一次同化
に関与するより高いレベルの酵素の産生によって引き起
こされうる。
我々は、細胞の培養が本発明の第１の方法の条件下で行
なわれるときに、より高くなったレベルのアミダーゼ酵
素を含む微生物株が得られることを発見した。
なわれるときに、より高くなったレベルのアミダーゼ酵
素を含む微生物株が得られることを発見した。
適当には、培養中に、アミダーゼを含むメチロフイルス
・メチロトロフスＡＳＩ親株の細胞、あるいはアミダー
ゼを誘発しうる細胞を、回分培養液から、窒素源として
のアミド（例えばアセトアミド）の存在の下で窒素制限
下の連続培養へ移し、そして０，０１〜０．１５／時、
殊に０．０２５／時の極めて低い希釈速度での連続培養
液中で培養する。この希釈速度での増殖期間、例えば２
００〜５００時間の後に、指向された（統制された）選
択圧力は、高いレベルのアミダーゼ活性を含む細胞を選
択することになる。かかる期間の後、希釈速度を０．０
５〜０．５５／時、殊に０．１／時の第２の希釈速度に
上昇させ、この速度レベルに１００〜５００時間維持す
る。この後に、単一属性の微生物を非汚染方式で分離し
て、窒素源としてのアミドの存在下Ｎ制限の条件下で０
．１／時の希釈速度で再増殖させる。同様な条件下で増
殖された親菌株と比較して高いレベルのアミダーゼ活性
を有する微生物を選択し、これを本発明の分解法及びア
クリル酸製法において用いることができる。この操作に
よって得られた菌株はメチロフイルス・メチロトロフス
株ＭＭ６である（下表参照）。
・メチロトロフスＡＳＩ親株の細胞、あるいはアミダー
ゼを誘発しうる細胞を、回分培養液から、窒素源として
のアミド（例えばアセトアミド）の存在の下で窒素制限
下の連続培養へ移し、そして０，０１〜０．１５／時、
殊に０．０２５／時の極めて低い希釈速度での連続培養
液中で培養する。この希釈速度での増殖期間、例えば２
００〜５００時間の後に、指向された（統制された）選
択圧力は、高いレベルのアミダーゼ活性を含む細胞を選
択することになる。かかる期間の後、希釈速度を０．０
５〜０．５５／時、殊に０．１／時の第２の希釈速度に
上昇させ、この速度レベルに１００〜５００時間維持す
る。この後に、単一属性の微生物を非汚染方式で分離し
て、窒素源としてのアミドの存在下Ｎ制限の条件下で０
．１／時の希釈速度で再増殖させる。同様な条件下で増
殖された親菌株と比較して高いレベルのアミダーゼ活性
を有する微生物を選択し、これを本発明の分解法及びア
クリル酸製法において用いることができる。この操作に
よって得られた菌株はメチロフイルス・メチロトロフス
株ＭＭ６である（下表参照）。
実施例２
ケモスタット培養における指向された（統１り１された
）選択は、正しい選択圧力を作用させることができれば
、酵素の触媒効率を改善するのにも使用できる。
）選択は、正しい選択圧力を作用させることができれば
、酵素の触媒効率を改善するのにも使用できる。
我々は、本発明の第２の方法の条件下で細胞の培養を行
なうと、改善された触媒効率の高レベルのアミダーゼを
含む細胞が得られることを発見した。適当には培養中に
、アミダーゼを含むメチロフイルス・メチロトロフスＡ
ＳＩ親株の細胞、またはアミダーゼを誘発させうる細胞
、あるいは好ましくはメチロフイルス・メチロトロフス
ＭＭ６のような本発明の第１の方法で得られた菌株の細
胞、を、回分培養液から、酵素のだめの低品位（プアー
な）基質であるアミド、例えば窒素源としてのアクリル
アミドの存在下で窒素制限下の連続培養液へ移し、０．
０１〜０．１５７時、殊に０．０２５／時の極めて低い
希釈速度の連続培養液中で培養する。この希釈速度での
増殖期間、例えば２００〜５００時間後に、指向された
選択圧力は、改善された触媒効率（増加した交替数また
は低減したＫｍあるいは両者）の高レベルのアミダーゼ
を含む細胞全選択することになろう。
なうと、改善された触媒効率の高レベルのアミダーゼを
含む細胞が得られることを発見した。適当には培養中に
、アミダーゼを含むメチロフイルス・メチロトロフスＡ
ＳＩ親株の細胞、またはアミダーゼを誘発させうる細胞
、あるいは好ましくはメチロフイルス・メチロトロフス
ＭＭ６のような本発明の第１の方法で得られた菌株の細
胞、を、回分培養液から、酵素のだめの低品位（プアー
な）基質であるアミド、例えば窒素源としてのアクリル
アミドの存在下で窒素制限下の連続培養液へ移し、０．
０１〜０．１５７時、殊に０．０２５／時の極めて低い
希釈速度の連続培養液中で培養する。この希釈速度での
増殖期間、例えば２００〜５００時間後に、指向された
選択圧力は、改善された触媒効率（増加した交替数また
は低減したＫｍあるいは両者）の高レベルのアミダーゼ
を含む細胞全選択することになろう。
この期間の後、希釈速度を００５〜０．５５／時、殊に
０゜１／時の第２の希釈速度に上昇させ、この速度レベ
ルに１００〜５００時間維持する。この後、単一属性の
微生物を汚染されないように単離し、審素源としてのア
ミドの存在下で窒素制限の条件下０．１／時の希釈速度
で再増殖させる。親菌株（すなわちＡＳＩまたはＭＭ
６ ）と比較して改善された触媒効率の高レベルのアミ
ダーゼ活性全有する微生物ヲ遺択し、これを本発明の分
解法及びアクリル醒製法において使用することができる
。
０゜１／時の第２の希釈速度に上昇させ、この速度レベ
ルに１００〜５００時間維持する。この後、単一属性の
微生物を汚染されないように単離し、審素源としてのア
ミドの存在下で窒素制限の条件下０．１／時の希釈速度
で再増殖させる。親菌株（すなわちＡＳＩまたはＭＭ
６ ）と比較して改善された触媒効率の高レベルのアミ
ダーゼ活性全有する微生物ヲ遺択し、これを本発明の分
解法及びアクリル醒製法において使用することができる
。
この操作によって得られた菌株は、メチロフイルス・メ
チロトロフスＭＭ ８ （下表参照）であるっ菌株ＭＭ
６及びＭＭ ８ば、親（基本）ＡＳ’ｌ菌株と比較して
、下表のような性質を有する。
チロトロフスＭＭ ８ （下表参照）であるっ菌株ＭＭ
６及びＭＭ ８ば、親（基本）ＡＳ’ｌ菌株と比較して
、下表のような性質を有する。
ＭＭ６ ９６ １０．１８ ５〜
６ ２５ＭＭ８ ３２０ １２
２．７ ２６上記表は、ＭＭ６及びＭＭ
８は、アミダーゼとして存在する全タンパクの割合が非
常に高い微生物であることを示している。ミバエリス定
数Ｋ ｍ （ｒｉ酵素をその最大速度の１／２で（ａ能
させる基質濃度を表わす。
６ ２５ＭＭ８ ３２０ １２
２．７ ２６上記表は、ＭＭ６及びＭＭ
８は、アミダーゼとして存在する全タンパクの割合が非
常に高い微生物であることを示している。ミバエリス定
数Ｋ ｍ （ｒｉ酵素をその最大速度の１／２で（ａ能
させる基質濃度を表わす。
菌株ＭＭ６及びＭＭ８は、特許出願のだめの微生物の寄
託の国際承認に関するプダベスト条約に条項の下に１９
８９年８月２３日付でナショナル・コレクションズ・オ
ブ・インダストリアル・アンド・マリン・バクテリアＬ
ｔａ（Ｎｃｔｖｇ）（英国スコツトランド、アバディー
ンＡＢ２１ＲＹ、マチャー・ドライブ２３ ａｔ） に寄託され、 それ ぜれＮＣＩＭＢ ０１８１ 及びＮＣＩＭＢ４０１８２ の受託番号が与えられている。
託の国際承認に関するプダベスト条約に条項の下に１９
８９年８月２３日付でナショナル・コレクションズ・オ
ブ・インダストリアル・アンド・マリン・バクテリアＬ
ｔａ（Ｎｃｔｖｇ）（英国スコツトランド、アバディー
ンＡＢ２１ＲＹ、マチャー・ドライブ２３ ａｔ） に寄託され、 それ ぜれＮＣＩＭＢ ０１８１ 及びＮＣＩＭＢ４０１８２ の受託番号が与えられている。
（外４名）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、指向されたケモスタット選択を用いて高レベルのア
ミダーゼ酵素を含む微生物を生産する方法であつて、 アミダーゼ酵素を含む微生物またはその酵素を誘発させ
うる微生物を、窒素源としてのアミドを含む適当な増殖
培地中で窒素制限条件下に、０．１〜１．１５／時の範
囲内の低い希釈速度で、見掛けのアミダーゼ活性レベル
を実質的に増加させるに足る時間にわたり培養する上記
方法。 ２ 指向されたケモスタット選択を用いて、改善された
動的性質のアミダーゼ酵素を高レベルで含む微生物を生
産する方法であつて、 アミダーゼ酵素を含む微生物またはその酵素を誘発させ
うる微生物、あるいは請求項１記載の方法で生産された
高レベルのアミダーゼ酵素を含む微生物を、低品位のア
ミダーゼ基質であるアミドを窒素源として含む適当な増
殖培地中で窒素制限条件下に、０．０１〜０．１５／時
の希釈速度で、見掛けのアミダーゼ活性レベルを実質的
に増加させるに足る時間にわたり培養する上記方法。 ３、低品位のアミダーゼ基質がアクリルアミドである請
求項１または２に記載の方法。 ４、微生物がメチロフイルス・メチロトロフス（Ｍｅｔ
ｈｙｌｏｐｈｉｌｕｓｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｕｓ）
種の菌株である請求項１〜３のいずれかに記載の方法。 ５、菌株がメチロフイルス・メチロトロフスＡＳ１（Ｎ
ＣＩＢ１０５１５）である請求項４記載の方法。 ６、微生物を３４〜３８℃の範囲内の温度で培養する請
求項１〜５のいずれかに記載の方法。 ７、微生物を５．８〜７．６の範囲内のｐＨにおいて培
養する請求項１〜６のいずれかに記載の方法。 ８、微生物、または培養により生産されたアミダーゼを
含む微生物の細胞不含有エキスを、次に、６〜７の範囲
内のｐＨ及び０．１〜２００ｍｇ／ｍｌの範囲内のタン
パク濃度において、５５〜６５℃の範囲内の温度に加熱
する請求項１〜７のいずれかに記載の方法。９、請求項
１〜８のいずれかに記載の方法によつて生産された高レ
ベルのアミダーゼを含む微生物。 １０、メチロフイルス・メチロトロフス菌株ＮＣＩＭＢ
４０１８１及びＮＣＩＭＢ４０１８２、ならびにそれら
から誘導された変異株及び突然変異株。 １１、アクリルアミド含有媒質中のアクリルアミドを分
解する方法であつて： アクリルアミド含有媒質を、アクリルアミドを分解させ
ることができる酵素と、その酵素にとつてアクリルアミ
ドを分解するのに適当な条件下で、接触させることから
なり、かつその酵素が請求項１〜８のいずれかに記載の
方法により生産されたアミダーゼ酵素であることを特徴
とする上記アクリルアミド分解方法。 １２、ポリアクリルアミドポリマー中に存在する未反応
アクリルアミドあるいは廃水中に存在するアクリルアミ
ドを、分解するための請求項１１記載の方法。 １３、アクリルアミド含有媒質を、アクリルアミドをア
クリル酸へ分解させることができる酵素と、その酵素に
とつてアクリルアミドを分解してアクリル酸またはその
塩もしくはエステルとするのに適当な条件下で、接触さ
せることからなり、かつその酵素が請求項１〜８のいず
れかに記載の方法により生産されたアミダーゼ酵素であ
ることを特徴とする、アクリル酸またはその塩もしくは
エステルを製造する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8908874.4 | 1989-04-19 | ||
| GB898908874A GB8908874D0 (en) | 1989-04-19 | 1989-04-19 | Method for the production of amidase enzyme |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0347070A true JPH0347070A (ja) | 1991-02-28 |
Family
ID=10655310
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2104363A Pending JPH0347070A (ja) | 1989-04-19 | 1990-04-19 | アミダーゼ酵素の生産方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0393916A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0347070A (ja) |
| AU (1) | AU5364390A (ja) |
| FI (1) | FI901946A7 (ja) |
| GB (1) | GB8908874D0 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210011908A (ko) | 2018-05-23 | 2021-02-02 | 스미토모 긴조쿠 고잔 가부시키가이샤 | 가스 방출 롤 및 그 제조 방법 그리고 가스 방출 롤을 사용한 처리 장치 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9020081D0 (en) * | 1990-09-14 | 1990-10-24 | Allied Colloids Ltd | Polymerisation processes |
| CA2066378C (en) * | 1991-04-24 | 2000-09-19 | David J. Hardman | Dehalogenation of organohalogen-containing compounds |
| US5145890A (en) * | 1991-08-30 | 1992-09-08 | Rohm And Haas Company | Method for reducing the carboxylester content of an emulsion polymer |
| WO1997006248A1 (en) * | 1995-08-09 | 1997-02-20 | Allied Colloids Limited | Processes for the production of amidase |
| GB9602415D0 (en) * | 1996-02-07 | 1996-04-03 | Allied Colloids Ltd | Polyacrylamide particles |
| US6060265A (en) * | 1996-12-18 | 2000-05-09 | Cytec Technology Corporation | Methods for the detoxification of nitrile and/or amide compounds |
| US5863750A (en) * | 1996-12-18 | 1999-01-26 | Cytec Tech Corp | Methods for the detoxification of nitrile and/or amide compounds |
| US6248551B1 (en) * | 1997-03-28 | 2001-06-19 | Institut Pasteur | Helicobacter aliphatic amidase AmiE polypeptides, and DNA sequences encoding those polypeptides |
| GB9716764D0 (en) * | 1997-08-07 | 1997-10-15 | Allied Colloids Ltd | Acrylamidase enzymes |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8630012D0 (en) * | 1986-12-16 | 1987-01-28 | Ici Plc | Decomposition of acrylamide |
-
1989
- 1989-04-19 GB GB898908874A patent/GB8908874D0/en active Pending
-
1990
- 1990-04-10 EP EP90303869A patent/EP0393916A1/en not_active Withdrawn
- 1990-04-18 FI FI901946A patent/FI901946A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1990-04-18 AU AU53643/90A patent/AU5364390A/en not_active Abandoned
- 1990-04-19 JP JP2104363A patent/JPH0347070A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210011908A (ko) | 2018-05-23 | 2021-02-02 | 스미토모 긴조쿠 고잔 가부시키가이샤 | 가스 방출 롤 및 그 제조 방법 그리고 가스 방출 롤을 사용한 처리 장치 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0393916A1 (en) | 1990-10-24 |
| GB8908874D0 (en) | 1989-06-07 |
| FI901946A0 (fi) | 1990-04-18 |
| AU5364390A (en) | 1990-10-25 |
| FI901946A7 (fi) | 1990-10-20 |
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