JPH034797A - 部位特異的突然変異または化学的誘導化を利用するシステイン残基の修飾による成長ホルモンの安定化 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、組み換え体動物成長ホルモン（ｒｅｃｏｍｂ
ｉｎａｎｔ　　ａｎｉｍａｌ　　ｓｏｍａｔｏｔｒｏｐ
ｐｉｎｓ）の４つ（４）のシスティンアミノ酸残基のう
ち少なくとも１つ（１）が置換、修飾、欠失または誘導
化されている、新規な修飾または誘導化された組み換え
体動物成長ホルモンに関する。成長ホルモンは組み換え
で産生されかつされ続けているが、しばしばそれらの成
長ホルモンは動物に選択的に投与するために配合するこ
とが困難である。このような発現された成長ホルモンと
異なり、成長ホルモン中に存在する４つのシスティン残
基を、他のアミノ酸による置換によるか、あるいはシス
ティンの誘導化により、変更または排除すると、動物へ
の投与に許容されうる方法で配合するための安定性が増
大した、生物学的に活性な化合物が生ずることが発見さ
れた。

本発明は、要約すれば、次の通りである：本発明は、新
規な修飾または誘導化された組み換え体動物成長ホルモ
ンに関する。本発明は、また、部位特異的突然変異を利
用して成長ホルモンのシスティンアミノ酸残基の１つ〜
４つを１または２以上の異なるアミノ酸残基で置換して
システィン残基を修飾または欠失するか、あるいは（１
）前記成長ホルモンの小さいループ中の両者のアミノ酸
残基、大きいループ中の両者のアミノ酸残基または前記
成長ホノｖモンの両者のループ中の４つのアミノ酸残基
を誘導化することによって、組み換え体動物成長ホルモ
ンを安定化する方法を提供する。

しＩ；がって、本発明の目的は、組み換え体動物成長ホ
ルモン中の４つのシスティンアミノ酸残基の少なくとも
１つが他のアミノ酸により置換、修飾、欠失または化学
的に誘導化されている、新規な動物成長ホルモンを提供
することである。本発明の他の目的は、動物成長ホルモ
ンのシスティン残基の２つ（２）、３つ（３）またはす
べての４つ（４）を置換および／または誘導化すること
、およ□びそれらの新規な化合物を提供することである
。２つのシスティンは小さいループ中に存在し、そして
２つは大きいループ中に存在する。

また、本発明の他の目的は、生物学的に有効でありかつ
投与のために安定である、前記置換、修飾、排除および
／または誘導化された動物成長ホルモンを提供すること
である。本発明の他の目的は、成長促進量の修飾または
誘導化された組みれうるそれらの塩類、および製剤学的
に許容されうるそれらの塩類、および製剤学的に許容さ
れうる固体または液状担体からなり、５日以上の延長し
た期間にわたって動物の成長速度を増加するために有効
である、生物学的に活性な組み換え体動物成長ホルモン
の組成物を提供することである。

本発明のこれらの目的および他の目的は、以下の本発明
の詳細な説明から明らかとなるであろう。

本発明は、成長ホルモンのシスティンアミノ酸残基の１
〜４つがアルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタ
ミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、アラ
ニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、バリン、フ
ェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、メチオニ
ン、セリン、スレオニンまたはプロリンから別々に選択
される１〜４つのアミノ酸残基により置換されているか
、あるいはすべての４つのシスティンがシスティン酸変
換されているか、あるいは小さいループ中の両者のシス
ティンまたは大きいループ中の両者のシスティンまたは
前記ループの両者中のすべての４つのシスティンが、（
ＣＨ，ＣＯＯＨ）、［（ＣＨ（Ｃｏ２Ｈ）、（ＣＨ２）
、Ｃ０２Ｈ］、（ＣＨ，ＣＯＮ　Ｒ３Ｒ＋）、（Ｒ５）
、［（ｃ　Ｒ２）　、Ｓ　Ｏ−３］、（ＣＨＣ）１２Ｃ
ＯＮＲ，ＣＯ）、（Ｃ１（２）、ＮＨ２Ｆい　（ＣＨ２
０ＣＯＣＨ！Ｒ５）または（ＳＲ８）から選択される置
換基で誘導化されており：Ｒ。

オヨびＲ，は各々）（、［（ＣＨ２）、ＧＯ２Ｈ］、［
ＣＨ（Ｃｏ２Ｈ）（ｃＨ，）、ＣＯ，Ｈ］　、Ｃ，−Ｃ
，アルキル（前記アルキル基は０〜６のヒドロキシル基
で置換されていてもよい）またはポリエチレングリコー
ルであり；Ｒ６はＣ，−Ｃ，アルキルまたはＣ，−Ｃ，
アルコキシメチルであり、そしてＲ５はＣ，−Ｃ，アル
キル、ポリエチレングリコールまたはフェニル（前記フ
ェニルは１つまたは２つのカルボン酸またはスルホン酸
基で置換されていてもよい）であり；ｎは０〜４の整数
であり−ｍは２〜４の整数であり、モしてＸは１〜３の
整数であり；ただし前記組み換え体動物成長ホルモンの
シスナインアミノ酸残基が誘導化されているとき、前記
成長ホルモンの小さいループ中の両者のシスティン残基
または大きいループ中の両者のシスティン残基は同一の
基で置換されており、そして、また、小さいループ中の
システィンアミノ酸残基上の置換基（不安定なかつＣ−
末端に近接する）は前記成長ホルモンの大きいループ中
のシスティンアミノ酸残基上の置換基（安定なかつＮ−
末端に近接する）と同一であるか、あるいは異なること
ができ、そしてさらに１つのシスティンアミノ酸残基が
システィン酸に酸化されるとき、前記成長ホルモン中の
すべての前記システィン残基はシスティン酸に酸化され
ている、新規な修飾された（置換または排除されたシス
ティン）または誘導化された組み換え体動物成長ホルモ
ンに関する。

本発明は、また、組み換え体動物成長ホルモンの５５．
１６６．１８３または１９１位置に位置するシスティン
アミノ酸残基の１または２以上を、アルギニン、リジン
、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グル
タミン、ヒスチジン、アラニン、グリシン、イソロイシ
ン、ロイシン、バリン、フェニルアラニン、ドリフトフ
ァン、チロシン、メチオニン、セリン、スレオニンまた
はプロリンで置凍し、そして前記システィン残基のすべ
ての４つを酸化することによって、組み換え体動物成長
ホルモンの凝集（ａｇｇｒｅｇａ　ｔ　１ｏｎ）を抑制
（ｉｎｈｉｂｉｔ）する方法を提供する。

本発明は、さらに、組み換え体動物成長ホルモンの５５
および１６６位置または１８３および１９１位置におけ
るシスティンアミノ酸残基の間のジサルファイド架橋を
還元し、次いで５５および１６６位置および／または１
８３および１９１位置における還元された架橋のシステ
ィンの各々を同一誘導体で誘導化することからなり、た
だし５５および１６６位置におけるシスティン上の誘導
体は１８３および１９１位置におけるシスティン上の置
換基と同一であるか、あるいは異なることができる、組
み換え体動物成長ホルモンの凝集を抑制する方法を提供
する。本発明の新規な誘導化された組み換え体動物成長
ホルモンの調製において使用する置換基は、次のものを
包含する：（ＣＨ，Ｃ００Ｈ）、［（ＣＨ（Ｃｏ、Ｈ）
（ＣＨ２）、Ｃｏ、Ｈ］、（ＣＨ２ＣＯＮ　Ｒ３Ｒ４）
、（Ｒ５）、［（ＣＨ２）、５０−ｘ］、（ＳＲ６）、
（ＣＨＣＨ２ＣＯＮＲ，ＣＯ）　　　、　　　（ＣＨ２
）、、　　ＮＲ，Ｒい　　ま　ｔこは（ＣＨ２０ＣＯＨ
，Ｒ，）、ここでＲ１およびＲ３は各’ｒＨ，［（ＣＨ
２）−ＣＯｚＨ］、　［ＣＨ（ＣＯｚｉｉ）　　（ＣＨ
２）ヨＣｏ、Ｈ］　、ｃ＋−ｃａアルキル（前記アルキ
ル基は０〜６のヒドロキシル基で置換されていてもよい
）またはポリエチレングリコールであり；Ｒ６はＣ，−
Ｃ，アルキルまたはＣ３Ｃ，アルコキシメチルであり、
モしてＲ５はＣ１−ｃ６アルキル、ポリエチレングリコ
ールまたはフェニル（前記フェニルは１つまたは２つの
カルボン酸またはスルホン酸の基で置換されていてもよ
い）であり；ｎはＯ〜４の整数であり；ｍは２〜４の整
数であり、モしてＸは１〜３の整数である。

本発明によれば、好ましい新規な動物成長ホルモンは、
成長ホルモンの小さいループ中のジサルファイド架橋が
還元されており、そして１８３および１９１位置におけ
るシスティンが（ＣＨ，Ｃ００Ｈ）、［（ＣＨ（Ｃｏ２
Ｈ）（ＣＨ，）、ｃ○２Ｈ１、＜　ＣＨ２，ＣＯＮ　Ｒ
３Ｒ４）、（Ｒ６）、（ＣＨ２）−５ｏ−３または（Ｓ
Ｒ６）から選択された置換基で誘導化されており、ここ
でＲ１、Ｒ１、Ｒ６、Ｒ６，ｎおよびＸが上に定義した
とおりである、組み換え体ブタ、ウシ、ヒツジ、ヒトお
よびトリ成長ホルモンである。

また、システィンは１つないしすべてのシスティンから
排除される。

本発明に関連するプラスミド、ＤＮＡ配列および微生物
のすべては、特記しない限り、アメリカン・サイアナミ
ド・カンパニー（Ａｍｅｒｉｃａｎ　　Ｃｙａｎａｍｉ
ｄ　　Ｃｏｍｐａｎｙ）の培養物収集所（米国ニュージ
ャーシイ州プリン七トンにおいて維持されている）の受
託され、そしてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレ
クション（ＡＴＣＣ）（Ａｍｅ　ｒ　１ｃａｎ　　Ｔｙ
ｐｅ　　Ｃｕ　１ｔｕｒｅ　　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、
米国マリランド州２０９５２０ツクビレ）に受託されて
いる。

本発明の好ましい修飾した組み換え体動物成長ホルモン
は、下に示すが、追加のＡｓｐ−Ｇｉｎの追加の置換基
をもたないか、あるいは他の置換基をもつ組み換えで誘
導化した成長ホルモンは、同様によく、本発明に従い調
製される。アミノ酸の鎖の長さの欠失、アミノ酸の鎖の
長さへの付加、アミノ酸（システィンの外に）の置換、
活性部分をもつ断片などをもつ他の動物成長ホルモンは
、本発明の領域内にすべて入る。ここにおけるアミノ酸
残基の番号はＭｅ　ｔ−Ａｓ　ｐ−Ｇ　ｌ　ｎ類似体に
関するが、番号は４つのシスティン残基により形成され
るジサルファイド架橋を同定するために当業者によりそ
れに応じて変更される。

組み換えブタ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓｐ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ
−Ａ　ｌａ−Ｍｅ　ｔ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｓｅ
ｒ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　１　ａ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−
Ｖａ　ｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｈ１
ｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉ　ｓ　−Ｃｌ　ｎ−Ｌｅｕ−Ａ　ｌ　
ａ−Ａ　ｌ　ａ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇ
　１ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｔｙｒ
−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ
ｒｇ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−１１ｅ−５ Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　Ｉａ−Ａ
　１ａ−Ｐｈｅ−Ｒ２−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｇ　ｌ　ｕ−
Ｔｈｒｌ　１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−
Ｇ　ｌ　ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇ　１ｕ−Ａ　１ａ−Ｇ
　Ｉｎ−Ｇ　ｌｎ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａ　ｌ
　−Ｇ　Ｉｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−３ｅ
ｒ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＬｅｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−５ｅｒ
；−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｙ−Ｐｒｏ−Ｖａ　ＩＧ　
ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｒｇ−Ｖａ　ｌ　−
Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　１−
Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈｒ−３ｅ　ｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ
−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−Ｃ；　ｌ　ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ
−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｂｚ−Ｇ　Ｉｕ−Ｇ　
ｌｙ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　ｌａ−Ｌｅｕ−Ｍｅ　ｔ
−Ａｒｇ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ａｓｐ−Ｇ　
ｌｙ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｙ−
Ｇ　Ｉｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈｒ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−
Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−６
６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　Ｉｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｒｚ　、−Ｐｈｅ
−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈｉ　５−Ｌｙｓ
−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ’−Ａ
ｒｇ−１８３１９１ Ｖａ　Ｉ　−Ｍｅ　ｔ−Ｌｙｓ−Ｒ＋　−Ａｒｇ−Ａｒ
ｇ−Ｐｈｅ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１ｕ−Ｓｅｒ−３ｅｒ−
Ｒ、。

Ａｌａ−、Ｐｈｅ−ＯＨ０ 組み換え体ウシ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
Ａ　ｌａ−Ｍｅ　ｔ　−３ｅ　ｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅ　ｒ　
−Ｇ　１ｙＬｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ａ　１
　ａ−Ｖａ　ｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉｎ
−Ｈｉ　ｓ　−ＬｅｕＨｉ　ｓ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−
Ａ　Ｉａ−Ａ　Ｉａ−Ａ　５ｐ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙ
ｓ−Ｇ　１ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｕ　−Ａｒｇ−Ｔｈｒ
−Ｔｙｒ−Ｉ　１　ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　Ｉｕ−Ｇ　１ｙ−
Ｇ　ｌ　ｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−３ｅ？　−１１ｅ５ Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇ　Ｉｎ−Ｖａ　１−Ａ　
ｌ　ａ−Ｐｈｅ−Ｒ２−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｇ　ｌ　ｕ−
ＴｈｒＩ　１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−
Ｇ　１ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇ　Ｉｕ−Ａ　１ａ−Ｇ　
Ｉｎ−Ｇ　１ｎ−Ｌｙｓ−５ｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｃ
；　Ｉｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−Ｓｅｔ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｓ−Ｇ　Ｉｎ−５ｅｒ−
Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｎ
−Ｐｈｅ−ＬｅｕＳｅ　ｒ−Ａｒｇ　−Ｖａ　Ｉ　−Ｐ
ｈｅ−Ｔｈ　ｒ−Ａ　５ｎ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　Ｉ
　−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈ　ｒＳｅｒ−Ａｓｐ−Ａ　
ｒｇ−Ｖａ　Ｉ　−Ｔｙｒ　−Ｇ　Ｉｕ−Ｌｙｓ　−Ｌ
ｅｕ　−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌ　ｕＧ　１ｕ
−Ｇ　ｌｙ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ａ　ｌａ−Ｌｅｕ−Ｍｅ
　ｔ　−Ａｒｇ　−Ｇ　Ｉｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ａｓ
ｐＧ　Ｉ　ｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ−Ｇ
　Ｉｙ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉｎ−
Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−
Ｔｈ　ｒ−Ａｓｎ−Ｍｅ　ｔ　−Ａ　ｒｇ−５ｓ　ｒ　
−Ａｓｐ−Ａｓ　ｐ−６６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
に　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｒ２，−Ｐｈｅ−
Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｌｙｓ−Ｔ
ｈｒ（：　ｌ　ｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ１
８３　　　　　　　　　　　　　　　　　　１９１Ｖａ
　ｌ　−Ｍｅ　Ｌ　−Ｌｙｓ　−Ｒ、−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｇ　Ｉｕ−Ａ　１ａ−Ｓｅｒ−
Ｒ、ａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＯＨ。

組み換え体ヒツジ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓ　ｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ
−Ａ　Ｉａ−Ｍｅ　Ｌ　−Ｓｅ　ｒ−Ｌｅｕ　−Ｓｅ　
ｒ　−Ｇ　１ｙＬｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　ｌ　ａ−Ａｓｎ　
−Ａ　Ｉａ−Ｖａ　１−Ｌｅｕ−Ａｒ　ｇ−Ａ　Ｉａ−
Ｇ　Ｉ　ｎ　−Ｈｉｓ　−Ｌｅｕ　−Ｈｉ　ｓ−Ｇ　ｌ
　ｎ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉａ−Ａ　１ａ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−
Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｌｌ−Ａ
ｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ　−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−
Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−１１ｅ
５ Ｇ　ｌ　ｎ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＧＩｎ−Ｖａ　ｌ　−Ａ
　Ｉａ−Ｐｈｅ−Ｒ、−Ｐｈｅ−３ａｒ−Ｇ　ｌ　ｕ−
Ｔｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ：Ｔｈ　ｒ
−Ｇ　１ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ａ　Ｉａ−
Ｇ　Ｉｎ−Ｇ　１ｎ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ
−Ｇ　ｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−３ｅｒ
−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ　−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−３ｅ
ｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇ　
Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−５ｅ　ｒ−Ａ　ｒｇ−Ｖａ　Ｉ
　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅ　ｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ
　１−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈｒ　−３ｅ　ｒ−Ａｓｐ
−Ａ　ｒｇ−Ｖａ　ｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇ　１ｕ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ　−Ｇ　１ｕ−Ｇ　
１ｕ−Ｇ　ｌ　ｙ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｌｅ
ｕ−Ｍｅ　ｔ−Ａｒｇ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌ　ｕ
−Ａｓｐ−Ｖａ　ｌ　−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ　
１ａ−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　Ｉｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−
Ｇ　１ｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ　−Ｐｈｅ
−Ａｓｐ−Ｔｈ　ｒ−Ａ　ｓｎ−Ｍｅ　ｔ　−Ａ　ｒｇ
　−５ｅ　ｒ−Ａｓｐ−Ａｓｐ６６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−Ａｓｎ−Ｔｙｒ
　−Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅ　ｒ−Ｒ２，−Ｐ
ｈｅ−Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓ　ｐ−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−
Ｌｙｓ−Ｔｈ　ｒ　−Ｇ　ｌｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ　−１８３１９１ Ｖａ　ｌ　−Ｍｅ　ｔ　−Ｌｙｓ−Ｒ、−Ａｒｇ−Ａｒ
ｇ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｇ　１ｕ−Ａ　１ａ−３ｅｒ
−Ｒ１゜Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＯＨ０ 組み換え体ウマ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　Ｌ　−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
Ａ　ｌａ−Ｍｅ　Ｌ−Ｐ　ｒｏ−Ｌｅｕ　−３ｅ　ｒ−
５ｅｒ　−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　Ｉａ−Ａｓｎ　−Ａ　
１ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉ
ｎ−Ｈｉｓ　−ＬｅｕＨｉ　ｓ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌｅｕ
　−Ａ　Ｉａ−Ａ　１ａ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ　−
Ｌｙｓ−Ｇ　１ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ａｒｇ−Ａ　
Ｉａ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−
Ｇ　Ｉｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−１１ｅ−５ Ｇ　ｌ　ｎ−Ａ　５ｎ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　ｌ　ｎ　−Ａ　
１ａ−Ａ　Ｉａ−Ｐｈｅ−Ｒ２−Ｐｈｅ−３ｅ　ｒ−Ｇ
　１ｕ−Ｔｈ　ｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ
−Ｔｈ　ｒ　−Ｇ　Ｉｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇ　１ｕ−
Ａ　１ａ−Ｇ　１ｎ−Ｇ　ＩｎＡ　ｒ　ｇ−３ｅｒ　−
Ａｓｐ−Ｍｅ　ｔ　−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ　
ｒｇ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＬｅｕ−１１ｅ
−Ｇ　ｔｒｉ−３ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｐ
ｒｏ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　ｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−
Ａｒｇ−Ｖａ　１−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−
Ｌｅｕ−Ｖａ　１−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈｒ　−３ｅ
　ｒ−Ａｓｐ−Ａｒ　ｇ−Ｖａ　１−Ｔｙｒ　−Ｇ　１
ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　
ｌｕ　−Ｃ；　１ｕ−Ｇ　ｌｙ−１１ｅ−Ｇ　Ｉ　ｎ−
Ａ　Ｉａ−１−ｅｕ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｒｇ−Ｇ　１ｕ−
Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−ＡｓｐＧ　ｌｙ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−
Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｇ　Ｉｎ−＋　１ｅ−
Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　１ｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−
Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｈ　ｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−
Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−６６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｒ２，−Ｐｈｅ−
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｌｙｓ−Ａ
　１ａ−Ｇ　ｌｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−
１８３１９１ Ｖａ　Ｉ　−Ｍｅ　ｔ−Ｌｙｓ−Ｒ、−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｐｈｓ−Ｖａ　１−Ｇ　Ｉｕ−３ｅｒ−５ｅｒ−Ｒ、
。

Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＯＨ０ 組み換え体ヒト成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓ　ｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ
−Ｔｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−５ｅ　ｒ−Ａｒｇ
−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ａ　ｌａ−Ｍｅ　
Ｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｅ
ｕ−Ｈ’ｉ　ｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｐｈ
ｅ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｇ　Ｉｎ−Ｇ　１ｎ−Ｐ
ｈｅ−Ｇ　ｌｕＧ　１ｕ−Ａ　ｌａ、−Ｔｙｒ−［１ｓ
−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉｕ−Ｇ　１ｎ−Ｌｙｓ−Ｔｙ
ｒ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−６ Ｌｅｕ　−Ｇ　ｌｎ−Ａｓｎ−Ｐ　ｒｏ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔ
ｈｒ−５ｅ　ｒ−Ｌｅｕ−Ｒ、−Ｐｈｅ−５ｅ　ｒ　−
Ｇ　１ｕ−５ｅｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−
５ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｕ−Ｔｈｒ
−Ｇ　１ｎ−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌ
ｅｕ−Ｇ　Ｉｕ−Ｌｅｕ−Ｌａｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−Ｓ
ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｉ　１．ｅ−Ｇ　Ｉｎ
−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｐｒｏ−Ｖａ　
ｌ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｖ
ａ　１−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−
Ｖａ　１−Ｔｙｒ−Ｇ　１ｙ−Ａ　Ｉａ−３ｅｒ−Ａｓ
ｐ−５ｅ　ｒ−Ａｓｎ−Ｖａ　１−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａ　５ｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−
Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈｒ−Ｌｅ
ｕ−Ｍｅ　ｔ−Ｇ　ｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−
Ａｓｐ−Ｇ　ｌｙ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−
Ｇ　１ｙ−Ｇ　Ｉｎ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉ
ｎ−Ｔｈ　ｒ　−Ｔｙ　ｒ−５ａｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−
Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｈｉ　５−Ａｓｎ−
Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙ　５
−Ａｓｎ−Ｔｙ　ｒ　−Ｇ　ｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔ
ｙ　ｒ　−＋６７ Ｒ、、−Ｐｈｅ−Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｍｅ　Ｌ
　−Ａ　５ｐ−Ｌｙｓ　−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　Ｉｕ−Ｔｈ
ｒ−Ｐｈｅ−８４ Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　Ｉｎ−Ｒ１−
Ａｒｇ−３ｅｒ−Ｖａ　１−Ｃ；　１ｕ−Ｇ　１ｙ−３
ｅｒ９１ Ｒ，、−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ０ 組み換え体トリ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
Ａ　ｌａ−Ｍｅ　ｔ　−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅ　ｒ−Ａ
ｓｎ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−
Ｖａ　ｌ　−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｈ
１ｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉ　５−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ　ｌ　ａ
−Ａ　ｌａ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇ
　Ｉｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔｙ
ｒ　−１１ｅ−Ｐ　ｒｏ−Ｃ１，ｕ−Ａｓｐ−Ｇ　１ｎ
−Ａｒ　ｇ−Ｔｙｒ　−Ｔｈ　ｒ−Ａｓｎ５ Ｌｙｓ−Ａｓｎ−３ｅｒ　＝Ｇ　Ｉｎ−Ａ　１ａ−Ａ　
Ｉａ　−Ｔｙ　ｒ−Ｒ、−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｇ　Ｉｕ−
Ｔｈ　ｒ　−１ｌ　ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　Ｉａ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｈｒ−Ｇ　！　ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａ　１ａ
−Ｇ　Ｉｎ−Ｇ　１ｎ−Ｌｙｓ−５ｅ　ｒ−Ａｓｐ−Ｍ
ｅ　ｔ　−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−Ｐ
ｈｅ−３ｅ　ｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　ＩＬｅｕ−１１ｅ−Ｇ
　Ｉｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−４ｈｒ−Ｐｒｏ−Ｖ
ａ　Ｉ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｔｙｒ−ＬｅｕＳｅ　ｒ−Ｌｙｓ
−Ｖａ　ｌ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅ
ｕ−Ｖａ　Ｉ　−Ｐｈｅ−Ｇ　１　ｙ−Ｔｈ　ｒ−３ｅ
ｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ　−Ｖａ　Ｉ　−Ｐｈｓ−Ｇ　１ｕ
−Ｌｙｓ　−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１
ｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　ｌｙ−！　ｌ　ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　
ｌａ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ　−Ａｒｇ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｌｅｕ
−Ｇ　ｌｕ−Ａｓｐ−Ａｒ　ｇ−５ｅｔ　−Ｐ　ｒｏ−
Ａ　ｒ　ｇ−Ｇ１．ｙ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｎ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｅｕ−Ａ　ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ　−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−
Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａ
ｒｇ−Ａｓｎ−Ｇ　Ｉｕ−Ａｓｐ−６６ Ａ　ｌ　ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓ　ｎ　−Ｔ
ｙｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅ　ｒ−Ｒ２、
−ＰｈｅＬｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ　−Ｈｉ　ｓ
　−Ｌｙｓ−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　Ｉｕ−Ｔｈ　ｒ　−Ｔｙ
ｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−１８３１９１ Ｖａ　１−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｒ、−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐ
ｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　１ｕ−５ｅｒ−Ａｓｎ−Ｒ＋。

Ｔｈｒ−１１ｅ−ＯＨ。

ここで前記組み換え体動物成長ホルモンのＲ１、Ｒｌａ
、Ｒ２およりＲ２，の各々は、独立に、アルギニン、リ
ジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、
グルタミン、ヒスチジン、アラニン、グリシン、イソロ
イシン、ロイシン、／クリ７、フェニルアラニン、トリ
プトファン、チロシン、メチオニン、セリン、スレオニ
ン、プロリンまたはシスティンから選択されるアミノ酸
残基を表す：ただし上に示す成長ホルモン中のＲ１、Ｒ
ｌａ、Ｒ２およびＲ２，はシスティン以外のアミノ酸残
基を表す。

本発明のことに好ましい修飾された組み換え体動物成長
ホルモンは、成長ホルモンの１８３および１９１におけ
るか、あるいは組み換え体ヒト成長ホルモン１８４およ
び１９１におけるＲ、およびＲ１の置換基の一方または
双方がシスティン以外のアミノ酸を表すものである。

部位特異的突然変異 本発明の上の修飾した（置換した）組み換え体動物成長
ホルモンの調製は、部位特異的突然変異により達成され
る。特定の定めた部位におけるＤＮＡのクローニングし
たセグメントのＤＮＡ配列の変更の現在利用されている
技術は、そのＤＮＡの一本鎖の形態の産生を要求する。

−末鎖ＤＮＡをその一部分に対して相補的である合成オ
リゴヌクレオチドにアニーリングし、ただしオリゴヌク
レオチドはその中に不一致の領域をもつ。不一致の領域
は、通常、オリゴ、ヌクレオチドの中央部分に位置する
。次いで、アニーリングした混合物は、Ｔ４　　ＤＮＡ
リガーゼリガーゼおよびアデノ・ノン５′　トリホスフ
ェートの存在下に、Ｅ、ｃｏｌｉＤＮＡのポリメラーゼ
■、大きい断片およびデオキシヌクレオチドトリホスフ
ェートの添加により、二本鎖としかつ共有結合的に閉じ
る。次いで、二本鎖ＤＮＡを適当なＥ、ｃｏｌｉ菌株中
に形質転換し、ここでＤＮＡの不一致領域を修復し、そ
して複製する。クローンの２つの集団が得られる。

どの鎖を修復合成のための鋳型として選択するかに依存
して、クローンは野生型または変更した（突然変異した
）配列を含有する。突然変異した配列を含有するクロー
ン、すなわち、オリゴヌクレオチドの配列に相当するも
のを、放射性標識オリゴヌクレオチドへのハイブリダイ
ゼーションにより選択する。オリゴヌクレオチドと野生
型配列との間の不一致のために、放射性標識オリゴヌク
レオチドは突然変異した配列を含有するクローンにより
安定に結合する。したがって、適当な温度におけるイン
キュベーションは、野生型のクローンと突然変異したク
ローンと分別する。次いで、同定されたクローンにおけ
る変更は、関連する領域のＤＮＡ配列決定により確証さ
れる。次の説明において、組み換え体ブタ成長ホルモン
を本発明の修飾および誘導化した組み換え体動物成長ホ
ルモンおよびそれらの調製の方法の代表どして選択する
。

ベクターバクテリオファージＭ１３ｍｐＨ（ＡＴＣＣ受
託番号、受託　　　　　　　　　）全塗土する一本鎖の
形態にブタ成長ホルモン（ｒｐＳＴ）遺伝子のクローニ
ングは、第１図に線図的に示す一般手順に従って達成さ
れる。

ブタ成長ホルモンを含有するＤＮＡの断片は、バクテリ
アの発現プラスミドｐＥＦＦ−９０２（ＡＴＣＣ受託番
号、受託　　　　　　　　　）から、制限酵素ＥｃｏＲ
［によびＨｉｎｄｌＩＩで切断することによって分離さ
れる。次いで、ｒｐＳＴ遺伝子含有断片をアガロースゲ
ルの電気泳動により精製する。Ｍ１３ｍｐＨ複製形態（
ＲＦ）のＤＮＡをＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消
化し、仔つシ腸アルカリ性ホスファターゼで処理し、そ
して大きい断片をアガロースゲルの電気泳動により精製
する。次いで、２つの精製した断片を一緒に混合物し、
そしてＴ、４　　ＤＮＡリガーゼと結合する。この混合
物をＥ、ｃｏｌｉ　　ＪＭＩＯＩ（ＡＴＣＣ受託番号、
受託　　　　　　　　　）中に形質転換し、そして得ら
れるプラークのいくつかを増殖する。複製の形態（ＲＦ
）のＤＮＡを標準のアルカリ性溶菌手順により調製し、
そして構造を適当な制限酵素で消化することによって決
定する。期待する断片を含有するクローンを分離し、そ
してＭ１３ｍｐ　ｌ　１ｐｓＴ　（ＡＴＣＣ受託番号、
受託　　　　　　　　　）と表示する。ＤＮＡ配列の分
析を使用してクローンを同定する。

次いで、Ｍｌ　３ｍｐ　ｌ　ｌ　ｐＳＴ中のｒｐＳＴ遺
伝子の突然変異誘発は、下に記載しかつ第２図に示すよ
うに達成する。突然変異誘発のプログラムの目的は、他
のアミノ酸により関連するシスティン残基の置換により
小さいループのジサルファイド架橋、大きいループのジ
サルファイド架橋または両者を形成することができない
ｒｐＳＴ分子を発生することである。大きいループジサ
ルファイドは、ｒｐＳＴ遺伝子における位置５５および
１６６におけるシスティンの間に位置する。小さいルー
プのジサルファイドは１８３および１９１に位置するシ
スティンの間である。番号のシステムは記載する通りで
ある。２つの基本的プロトコルを使用して、要求される
突然変異体を得、そして各々の例を後述する。

第１方法において、小さいループジサルファイド結合に
おけるシスティンの置換は長い合成オリゴヌクレオチド
を使用して達成する。この方法において、ＡＡｌと表示
するオリゴヌクレオチドを使用し、そしてこれは次の配
列を有する：５’　　ＧＴＣＡＴＧ　　ＡＡＧ　　ＧＣ
Ｇ　　ＣＧＣＣＧＣＴＴＣＧＴＧ　　ＧＡＧ　　ＡＧＣ
ＡＧＣＧＣＴ　　ＧＣＣＴＴＣＴＡＧ　　３’これはｐ
ＳＴ遺伝子の配列を変更し、ここで位置１８３における
システィンのためのコドンはＴＧＴからアラニンの遺伝
情報を指定するＧＣＧに変換され、そして位置１９１に
おけるシスティンはＴＧＴから、また、アラニンの遺伝
情報を指定するＧＣＴに変換される。したがって、小さ
いループにおけるシスティンの両者はアラニンに変換さ
れる。−末鎖Ｍ１３ｍｐＨｐＳＴ　　ＤＮＡは、標準の
プロトコルにより精製された７アージから調製される。

第２図は突然変異誘発法の概要である。１．　ＯＯＯｎ
　ｇの一本鎖Ｍｌ　３ｍｐ　１１　ｐＳＴＤＮＡを、ア
デノシン５″　トリホスフェートおよびポリヌクレオチ
ドキナーゼで５′　リン酸化されている、５０％ｇのＡ
ＡＩオリゴヌクレオチドと混合する。この混合物を６５
°Ｃに７分間加熱し、次いで室温に１０分間保持する。

このプロトコルはオリゴヌクレオチドを一本鎖ＤＮＡに
アニーリングする。次いで、アニーリングしたＤＮＡ％
ＡＴＰ、ｄＮＴＰ　（４つのデオキシリボヌクレオチド
５′　トリホスフェートの混合物）、Ｔ４　　ＤＮＡリ
ガーゼおよびＤＮＡポリメラーゼＩの大きい断片の添加
により、共有結合的に閉じた形態の二本鎖に変換する。

この混合物をを室温において１時間インキュベージ３ン
する。次いで、この混合物を標準の塩化カルシウムの手
順により、Ｅ、　ｃｏｌｉ　　ＪＭＩＯＩ中に形質転換
する。３７℃において一夜インキユベーションした後、
プラークはＪＭＩ　Ｏ１の菌叢上に見られる。プラーク
をニトロセルロースのフィルター上に持ち上げ、そして
標準のプロトコルによりハイブリダイゼーションために
処理する。ＡＡＩＤと表示する第２オリゴヌクレオチド
を突然変異体の検出に使用する。

ＡＡＩＤは次の配列５’　　ＣＡＴＧ　　ＡＡＧＧＣＧ
　　ＣＧＣＣＧＣＴＴ　　３’　　を有する。

それをｃ−３２Ｐ−ＡＴＰおよびポリヌクレオチドキナ
ーゼで５′末端において放射線標識する。ハイブリダイ
ゼーションは一夜３７°Ｃにおいて５×ｓＳｃ　（ｌｘ
ｓｓｃは０．１５モルの塩化ナトリウム、０．０１５モ
ルのクエン酸ナトリウム　ｐＨ７，０である）、１×デ
ンハルト溶液［０，０２％（Ｗ／Ｖ）のフィコール（Ｆ
ｉｃｏｌｌ）、０．０２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルフ
ミン、０゜０２％のポリビニルピロリドン］　、１５０
ｇ／ｍＱのｔＲＮＡ中で実施する。ハイブリダイゼーシ
ョン後、フィルターを順次に５ＸＳＳＣで４°Ｃにおい
て、ＴＡＣ［ＴＡＣは３モルの塩化テトラメチルアンモ
ニウム、５０ミリモルの（トリス）」　ヒドロキシメチ
ルコアミノメタン　ｐＨ８，０，１ミリモルのＥＤＴＡ
　（エチレンジアミノテトラ酢酸）、０．１％（Ｗ／Ｖ
）のドデシル硫酸ナトリウムである１で３７°Ｃにおい
ておよび最後にＴＡＧ中で所望の温度において洗浄する
。この最後の洗浄は特異性を決定する。ＡＡＩＤのため
、温度ま５２．２°Ｃである。Ｘ線に露出後、ＡＡＩＤ
に対して完全に相補的であるクローンのみが観察される
。これらのクローンのいくつかをＤＮＡの配列決定によ
り分析する。これらのすべては第１突然変異を含有する
が、それらのいずれも第２（システィン１９１において
）突然変異を含有しない。

位置＋９１におけるシスティンを突然変異するために、
Ａｌと表示する第２オリゴヌクレオチドを使用する。Ａ
ｌは次の配列を有する：５’　　　ＧＡＧ　　ＡＧＣＡ
ＧＣＧＣＴ　　ＧＣＣＴＴＣＴＡＧ　　３’ 突然変異誘発の方法は前述のものに同一であるが、ただ
し鋳型ＤＮＡはＭｌ　３ｍｐ　ｌ　１　ｐＳＴＡ３（こ
れはアラニンに変換した位置１８３におけるシスティン
を有するＡＡＩの突然変異誘発から分離したクローンで
ある）であり、そしてハイブリダイゼーションはＡ１を
使用する。最終の洗浄温度は５６°Ｃである。ＤＮＡの
配列決定は、同定したクローンは期待する配列を有する
。突然変異したクローンはＭ１３ｍｐＨｐＳＴＡ３４　
（ＡＴＣＣ受託番号、受託　　　　　　　　　）と表示
する。ＤＮＡ配列は第３図に示されている。

第２方法において、小さいループのジサルファイドの置
換は同一方向に２つのオリゴヌクレオチドを使用するこ
とにより得られ、そして第４図に線図で示されている。

２つのオリゴヌクレオチドは次の配列を有する： ５’　ＧＴＣＡＴＧ　ＡＡＧ　ＧＡＡ　ＣＧＣＣにＣＴ
ＴＣ３’　ＧＬＵ３ＬＵ ５’　ＧＡＧ　ＡＧＣＡＧＣＧＡＧ　ＧＣＣＴＴＣＴＡ
Ｇ　３’　ＧＬＵ４ＬＵ 鋳型の一本１ｔｌｌＤＮＡはＭ１３ｍｐＨｐＳＴ（ＡＴ
ＣＣ受託番号、受託　　　　　　　　　）である。２つ
のオリゴヌクレオチドおよび、同一方向の、鋳型ＤＮＡ
を、前のように、アニーリングし、伸長し、そして結合
する。この混合物をＥ、ｃ。

ｌｉ　　ＪＭＩＯＩ中に形質転換する。この方法におけ
る差は、２つのリフト（ｌ　ｉ　ｆ　ｔ）を各板（ｐｌ
　ａ　ｔ　ｅ）から取ることである。各リフトを３２ｐ
標識ＧＬＵ３またはＧＬＵ４に別々にハイブリダイゼー
ションする。最終の洗浄温度は５６°Ｃである。両者オ
リゴヌクレオチドに対して陽性であるプラークのみを取
り上げる。ＤＮＡの配列決定は、Ｃｙｓ１８３およびＣ
ｙｓ１９１の両者がグルタミン酸に変換９れていること
を明らかにする。このクローンをＭｌ　３ｍｐ　ｌ　１
ｐＳＴＡＥ３４　（ＡＴＣＣ受託番号、受託　　　　　
　　　　）と表示する。この方法を使用して、前述の２
つの適当なオリゴヌクレオチドおよびＭ１３ｍｐＨｐＳ
Ｔを使用することにより、大きいループのジサルファイ
ドの形成を防止する突然変異を得る。明らカナよるに、
鋳型ＤＮＡとしてＭ１３ｍｐＨｐＳＴＡ３４およびＣｙ
ｓ５５およびＣ，ｙｓ１６６をアラニンに変更するため
に適当な２つのオリゴヌクレオチドを使用することによ
り、システィン残基のすべてをアラニンに変換されてい
るクローンを得る。

次いで、変更した（突然変異の）クローンを、第５図に
線図的に示すバクテリアの発現プラスミドｐＲＯ２１１
（ＡＴＣＣ受託番号、受託）中に再構成する［欧州特許
（Ｅ　Ｐ）１７３．２８０号に記載されている］。Ｍ１
３クローンをＥｃｏＲＩおよびＨ４ｎｄｌＩＩで切断し
、モしてｐＳＴ遺伝子断片を分離する。ｐＲ○２１１を
同一酵素で消化し、仔つシ腸アルカリ性ホスファターゼ
で処理し、そして大きい断片を分離する。２つの片を一
緒にＴ４　　ＤＮＡリガーゼで結合し、そして適当なバ
クテリア菌株、例えば、Ｅ、ｃｏ　ｌ　ｉ　　Ｎ９９ｃ
　Ｉ　（ＡＴＣＣ受託番号、受託　　　　　　　　　）
中に形質転換する。この菌株において、野生型にリプレ
ッサーが存在する。これはｐＲＯ２１１中のＰ　Ｌ’プ
ロモーターからの発現を防止する。いったん適当な構成
が分離されると、それを温度感受性にリプレッサーを含
有するバクテリア菌株、例えば、（ＡＴＣＣ受託番号、
受託　　　　　　　　　）Ｅ、ｃｏｌｉ４２００中に移
す。これらの菌株において、ｐＳＴの発現は温度に依存
する。、４２°Ｃにおいて、リプレッサーは不活性であ
り、そして発現は起こる。

この段階において、ｐＳＴを欧州特許（ＥＰ）１７３．
２８０号に記載されている手順により調製し、ここで発
現は起こる（参照のため、ここに加える）。ｐＳＴの発
現はこれらの特定のＥ、ｃ。

１１の菌株に限定されない。適当な性質をもつ他の菌株
を代わりに使用する。プラスミド発現ベクターはＡＴＣ
Ｃに受託されている。バクテリア菌株は別々に受託され
ている。

他のアミノ酸の置換は、適当なコドンおよびオリゴヌク
レオチドを利用して上の手順により行う。

同様に、これらの手順を使用して種々の動物成長ホルモ
ンを修飾する。

上の手順により容易に調製される修飾された組み換え体
動物成長ホルモンは、次のとおりである：　　（Ａｌａ
　　５５，１６６）ｒｐＳＴ；　　（Ｓｅｔ５５、　１
６６）ｒｐｓＴ；　　（Ａｌａ　　　１８３゜１９１）
ｒｐＳＴ；　　（Ｇｌｕ　　　１８３．　１９１）ｒｐ
ＳＴ；　　（Ｇｌｕ　　　１８３　　　　　　Ａｌａ　
　　１９１）ｒｐＳＴ；　　（Ｓｅｔ　　　１８３．　
１９１）ｒｐＳＴ；および（Ｇｌｕ　　１８３　−　　
Ｓｅｒ　　１９１）ｒｐＳＴ。

誘導化された動物成長ホルモン 誘導化された動物成長ホルモン、好ましい組み換え体、
は、水またはグアニジン塩酸塩、重炭酸ナトリウムの水
溶液、これは水性塩基、例えば、水酸化ナトリウムまた
は水酸化アンモニウムでｐＨ８，４で調節した、中に動
物成長ホルモンを溶解または分散することによって調製
される。次いで、この溶液にジチオスレイトール、すな
わち、（ＤＬ−スレオ−１，４−ジメルカプト−２，３
ブタンジオール）をゆっくり添加する。この添加は、一
般に、室温において窒素雰囲気下に実施する。次いで、
得られる溶液に、ヨウドアセトアミド、ヨウド酢酸、ナ
トリウムテトラチオネート、メチルメタンチオスルホネ
ート、■、３−グロパンスルホンまたは他の誘導化剤を
添加する。この混合物を約１〜４時間撹拌し、次いで限
外濾過により脱塩する。この溶液を濃縮し、次いで水、
水性グアニジン塩酸塩などによる再希釈のいくつかのサ
イクルにかけ、次いで限外濾過する。次いで、最終の濾
過からの残留物を凍結乾燥して誘導化ｒｐＳＴを生成す
る。

使用の方法 有利には、本発明の新規な動物成長ホルモンは、動物、
ことに肉生産動物の成長速度を改良し、そしてこれによ
り剤料の利用効率を増加するｔ；めに有用である。これ
らの化合物は、また、前記動物の胴体の量を増大する、
すなわち、前記動物の脂肪のない肉対脂肪の比を増加す
るために有効である。そのうえ、本発明の化合物は乳を
出す動物における乳の生産を増加し、そしてヒツジにお
ける羊毛の生産および毛皮のために飼育する他の動物を
改良するために有効である。

本発明の修飾（置換）したまたは誘導化した成長ホルモ
ンは、前述の生物学的改良を達成するための動物の処理
に有効であるが、本発明の修飾または誘導化された動物
成長ホルモンの改良された有効性および有用性は、一部
分、前記成長ホルモンの修飾または誘導化により生成す
る成長ホルモンの凝集の抑制に起因する。このような抑
制は、本発明により記載されるように修飾または誘導化
されてない自然成長ホルモンまたは組み換え体成長ホル
モンを使用して、容易にまたは有効に達成ない、顕著に
改良された持続した放出系の調製を可能とする。

また、本発明の修飾または誘導化した成長ホルモンは高
度に安定であり、そして二量体の形成による凝集を本質
的に含まないことが発見された。

そのうえ、本発明の修飾または誘導化された成長ホルモ
ンは、それら自体、有意に改良された持続した放出の組
成物の調製において使用することを可能とする。

自然の動物成長ホルモンは単一の日で凝集することが発
見されたが、本発明の修飾または誘導化された成長ホル
モンを′含有する非経口的組成物は、修飾または誘導化
された成長ホルモンを１０日以上の間放出し続ける。

組成物 実際に、本発明の組成物は、一般に、動物に、生物学的
に活性な非経口的組成物の形態で注射することによって
投与される。本発明の組み換え体動物成長ホルモンの投
与に有用な非組成物の例は、ゲル、ペースト、微小球、
マイクロカプセル、移植体などである。そのままで、物
質を制御した方法で放出し、こうして投与の頻度を減少
する、生物学的に活性な物質の投与形態を提供すること
においてかなり興味がある。

生物学的に活性な高分子の持続した放出の組成物の開発
は、高分子の作用のこみいったモードおよび複雑な構造
のために、特別な問題を提供する。

こうして、生物学的に活性な成長ホルモンを含有する、
有効な持続した放出の組成物の開発が要求される。

このタイプの投与にを用な組成物は、修飾またよ誘導化
した動物成長ホルモンを希釈水酸化アンモニウム中に溶
解し、次いでアルカリ金属安息香酸塩、乳酸塩、炭酸塩
などをそれに添加することによって調製される。その後
、非イオン性界面活性剤を前記溶液と混合し、そして得
られる混合物を噴霧乾燥する。次いで、こうして形成し
た固体を溶融した脂肪またはろうまたはそれらの混合物
と混合し、そして得られる溶融した混合物を、入る空気
および溶融しｔ；相を融点以上の温度に維持する加熱ジ
ャケットを装備した空気／液体噴霧ノズルを通して噴霧
する。微小球を溶融した滴として冷却する。これらを１
系列の篩で約４５〜１８０ミクロンの所望の範囲で集め
、そして使用のため保持する。所望の大きさの範囲でな
い微小球を再循環する。あるいは、均質な混合物を遠心
ディスク上に供給し、そしてこうして形成した微小球を
上のように集めるか、あるいは溶融した混合物を冷却し
、そして所望の平均粒子大きさの範囲に微粉砕する。

次いで、生物学的に活性な微小球は、動物への注射のた
めに製剤学的にかつ薬理学的に許容されうる液状賦形剤
中に分散する。この微小球−液状組成物は、一般に、皮
下注射により、動物の皮膚の下に通常類、首または耳付
近に投与する。

本発明の修飾または誘導化した動物成長ホルモンは、ま
た、生物適合性移植体として調製し、動物の皮膚の下に
普通のペレット移植ガンを使用して注射する。これらの
組成物は、粉末状の修飾または誘導化された成長ホルモ
ンをろう、例えば、カスターろう（ｃａｓｔｏｒ　　ｗ
ａｘ）と混合するか、あるいはコポリ（グリコリド／ラ
クチド）、水酸化マグネシウム、およびプロピレンオキ
シドとプロピレングリコールとの縮合により形成した疎
水性基剤を使用して調製したエチレンオキシドの縮合物
の混合物と混合することによって調製される。次いで、
こうして形成された組成物をベレット化プレス中に導入
し、そして直径約０．３１ｃｍ（１／８インチ）の円筒
形ベレットに成形する。

こうして形成されたペレットは普通のペレット移植ガン
で投与する。

次の実施例によって、本発明をさらに説明する。

実施例１ Ａ、Ａｌと表示するオリゴヌクレオチドは、次の配列を
有する・ ５’　　　ＧＴＣＡＴＧ　　ＡＡＧ　　ＧＣＧ　　ＣＧ
ＣＣＧＣＴＴＧ　　ＧＴＧ　　ＧＡＧ　　ＡＧＣＡＧＣ
ＧＣＴ　　ＧＣＣＴＴＣＴＡＧ　　３’これはｒｐＳＴ
の配列を変更させ、位１１８３にお（するシスティンの
コドンはＴＧＴからアラニンの遺伝情報を指定するＧＣ
Ｇに変換され、そして位置１９１におけるシスティンは
ＴＧＴがらアラニンの遺伝情報を指定するＯＣＴに変換
される。

したがって、小さいループ中のシスティンの両者はアラ
ニンに変換される。−末鎖Ｍ　１．３　ｍ　ｐ　１１ｐ
ｓ”ｒ　　ＤＮＡは標準のプロトコルにより精製した７
アージから調製される。ＩＸアニーリング緩衝液（ＩＸ
アニーリング緩衝液は７５ミリモルのＫＣｌ　　５ミリ
モルのトリス　ｐＨ８，０）を含有する１０１１の最終
の体積でアデノシン５′　トリホス７エートおよびポリ
ヌクレオチドキナーゼで前置て５′　リン酸化した、５
０ｎｇのＡＡＩと、１１０００ｎの一末鎖Ｍ１３ｍｐＨ
ｐＳＴ　　ＤＮＡを混合する。この混合物を６５°Ｃに
７分間加熱し、次いで室温に１０分間保持する。このプ
ロトコルはオリゴヌクレオチドを一本鎖ＤＮＡにアニー
リングする。次いで、アニーリングしたＤＮＡを、２０
１１　　Ｈ２Ｏ，４１１１０Ｘ充填（ｆｉｌｌｉｎ）緩
衝液、（ＬＸ充填緩衝液は２７５ミリモルのＭｇＣｌ２
　　ｐ８７．５　２ミリモルのＤＴＴ）１．ｉｌｌ　　
２０ミリモルのＡＴＰ。

ｐＲ○２１１　　ｄＮＴＰ（各々２ミリモルの濃度の４
つのデオキシリボヌクレオチド５′　トリホスフェート
の混合物）、２Ｕ　　Ｔ４　　ＤＮＡリガーゼおよび２
０　　ＤＮＡ　　ポリメラーゼ■大きい断片［単位の定
義についてはニュー・イングランド・バイオラプス（Ｎ
ｅｗ　　Ｅｎｇｌａｎｄ　　Ｂｉ。

ｌ　ａ　ｂ　ｓ）のカタログ、１９８６参照］の添加に
より、共有結合的に閉じた形態の二本鎖に変換する。こ
の混合物を室温において１時間インキュベーンヨンする
。次いで、この混合物を標準の塩化カルシウム手順によ
りＥ、ｃｏｌｉ　　ＪＭＩＯＩ中に形質転換する。３７
°Ｃにおいて一夜インキユベーンヨンした後、プラーク
をＪＭＩＯＩの菌叢上に見ることが出来る。プラークを
ニトロセルロースのフィルター上に持ち上げ、そして標
準のプロトコルによるハイブリダイゼーションのために
処理する。ＡＡＩＤと表示する第２オリゴヌクレオチド
を突然変異の検出に使用する。ＡＡＩＤは次の配列を有
する：５’　　　ＣＡＴＧ　　ＡＡＧＧＣＧ　　ＣＧＣ
ＣＧＣＴＴ　　３’　。それを５′においてｄ−３２Ｐ
−ＡＴＰおよびポリヌクレオチドキナーゼで放射線標識
する。ハイブリダイゼーションは３７°Ｃにおいて５Ｘ
ＳＳＣ，ＩＸＸノンルト溶液、１５ｏ１ｇ／ｍ（２のｔ
　ＲＮＡ中で一夜である。フィルターを順次に５ＸＳＳ
Ｃ中で４°Ｃにおいて、ＴＡＣ中で３７°Ｃにおいて、
そして最後にＴＡＣ中で所望の温度において洗浄する。

この最後の洗浄は特異性を決定する。ＡＡＩＤについて
、温度は５２．５°Ｃである。Ｘ線への露出後、ＡＡＩ
Ｄに対して完全に相補的であるクローンのみが観察され
る。これらのクローンのいくつかをＤＮＡ配列決定によ
り分析する。それらのすべては第１突然変異を含有する
が、それらのいずれも第２（システィン１９１における
）突然変異を含有しない。位置１９１におけるシスティ
ンを突然変異させるために、ＡＩと表示する第２オリゴ
ヌクレオチドを使用する。Ａｌは次の配列を有する： ５’　　　ＧＡＧ　　ＡＧＣＡＧＣＧＣＴ　　ＧＣＣＴ
ＣＣＴＡＧ　　３″ 突然変異誘発の方法は、ＡＡＩＤを使用する上の実施例
１に記載する方法と同一であるが、ただし鋳型はＭ１３
ｍｐＨｐＳＴＡ３　（これはアラニンに変換された位置
１８３を有するＡＡＩ突然変異誘発から分離されたクロ
ーンである）であり、そしてハイブリダイゼーションに
はＡＩを使用する。最後の洗浄温度は６２°Ｃである。

ＤＮＡ配列決定は、同定されたクローンが期待する配列
を有することを明らかにする。突然変異したクローンは
Ｍ１３ｍｐＨｐＳＴＡＥ３４と表示する。

実施例２ 小さいループのジザルファイド架橋の置換は、同一反応
における２つのオリゴヌクレオチドを使用することによ
って得られる。２つのオリゴヌクレオチドは、次の配列
を有する： ５’　ＧＴＣＡＴＧ　ＡＡＧ　ＧＡＡ　ＣＧＣＣＧＣＴ
ＴＣ３’　ＧＬＵ３ＬＵ ５’　ＧＡＧ　ＡＧＣＡＧＣＧＡＧ　ＧＣＣＴＴＣＴＡ
Ｇ　３’　ＧＬＵ　４ＬＵ 鋳型の一本鎖ＤＮＡはＭ１３ｍｐＨｐＳＴである。２つ
のオリゴヌクレオチドおよび、同一方向の、鋳型ＤＮＡ
を、前のように、アニーリングし、伸長し、そして結合
する。この混合物をＥ。

ｃａｄｉ　　ＪＭＩＯＩ中に形質転換する。この方法に
おける差は、２つのリフト（１１ｆｔ）を各板（ｐ　Ｉ
　ａ　ｔ　ｅ）から取ることである。各リフトを３２ｐ
標識ＧＬＵ３またはＧＬＵ４に別々にハイブリダイゼー
ションする。最終の洗浄温度は５６°Ｃである。両者オ
リゴヌクレオチドに対して陽性であるプラークのみを取
り上げる。ＤＮＡの配列決定は、Ｃｙｓ１８３およびＣ
ｙｓ１９１の両者がグルタミン酸に変換されていること
を明らかにする。この方法を使用して、前述の２つの適
当なオリゴヌクレオチドおよびＭ１３ｍｐ　ｌ　１ｐｓ
Ｔを使用することにより、大きいループのジサルファイ
ドの形成を防止する突然変異を得る。明らかなよるに、
鋳型ＤＮＡとしてＭ１３ｍｐＨｐＳＴＡ３４およびＣｙ
ｓ５５およびＣｙｓ１６６をアラニンに変更するために
適当な２つのオリゴヌクレオチドを使用することにより
、システィン残基のずべてをアラニンに変換されている
クローンを得る。

実施例３ バクテリアの発現プラスミドへの再構成変更した（突然
変異の）クローンを、バクテリアの発現プラスミドｐＲ
０２１１中に再構成する（欧州特許１７３，２８０号に
記載されている）（その開示をここに引用によって加え
る）。Ｍ１３クローンをＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩ
Ｉで切断し、そしてｐＳＴ遺伝子断片を分離する。ｐＲ
Ｏ２１１を同一酵素で消化し、仔つシ腸アルカリ性ホス
ファターゼで処理し、そして大きい断片を分離する。２
つの片を一緒にＴ４　　ＤＮＡリガーゼで結合し、そし
て適当なバクテリア菌株、例えば、Ｅ、ｃｏ　ｌ　ｉ　
　Ｎ９９ｃ　Ｉ”中に形質転換する。この菌株において
、野生型遺りプレノサーが存在する。これはｐＲ０２１
１中のＰ２プロモーターからの発現を防止する。いった
ん適当な構成が分離されると、それを濃度感受注λリプ
レッサーを含有するバクテリア菌株、例えば、４２０Ｑ
中に移す。これらの菌株において、ｒｐＳＴの発現は温
度に依存する。４２°Ｃにおいて、リプレッサーは不活
性であり、そして発現は起こる。この段階において、ｒ
ｐＳＴを欧州特許１７３，２８０号に記載されている手
順により調製し、ここで発現は起こる（参照のため、こ
こに加える）。ｐＳＴ遺伝子の発現はＥ、、ｃｏｌｉ　
　４２００に限定されない。任意の適当なＥ、ｃｏｌｉ
菌株を利用することができる。

実施例１．２および３の手順に従うが、位置１８３およ
び１９１におけるシスティンの代わりにアラニン、セリ
ン、グルタミン酸、アルギニン、トリプトファンまたは
アスパラギンのための適当なコドンを使用することによ
り、システィンのＴＧＴをセリンのためのＴＣＮ、ＡＧ
ＣまたはＡＧＴ１グルタミン酸のＩ；めのＧＡＧまたは
ＧＡＡ。

ＡｒｇのためのＣＧＮ、ＡＧＡまたはＡＧＧ、アスパラ
ギンのｔこめのＡＡＴまたはＡＡＣ，アラニンのための
ＧＣＮ、またはトリプトファンのためのＴＧＧに前記位
置において変換する。

実施例４ １００ｍｇの組み換え体ブタ成長ホルモン（ｒｐｓ”ｒ
）および３３ｍＱの７モルのグアニジンＨＣ１の溶液を
調製し、そしてｒ＋ＨをＮａＯＨで８゜４に調節する。

この溶液に１８ｍｇ（２０当量）のジチオスレイトール
を添加し、そして反応混合物を窒素雰囲気下に室温にお
いて１時間撹拌する。

次いで、との溶液に８４ｍｇ　（１００当量）のヨウド
アセトアミドを添加し、そして反応混合物を室温におい
て４時間撹拌する。反応混合物を３５ｍＱのＨ２Ｏで希
釈し、そしてグアニジン塩酸塩および過剰の試薬をアミ
コン（Ａｍｉｃｏｎ）８４００型の撹拌したセル中でア
ミコンＵＭ２ｆｆｌ（分子量のカットオフはぼ１０００
ダルトン）で限外濾過する。再希釈および再濾過のいく
つかのサイクル後、残留する水溶液を一定重量に凍結乾
燥してほぼＩ　００ｍｇの綿毛状の白色固体が生成する
。

非還元性条件下の５ＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の電気泳動の
生成物の移動度はｒｐＳＴと異なる。生成物は上に示し
た誘導化した組み換え体ブタ成長ホルモンである。

実施例５ （Ｃａｍ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）ｒｐＳＴの調製 脱気した０、０２モルのＮａＣｌ　　（２２５ｍ１２　
）の溶液に、３．３７５ｇの組み換え体ブタ成長ホルモ
ン（ｒｐＳＴ）を添加し、そしてｐＨを希ＮａＯＨで８
．１に調節し、この溶液のｐＨを８゜ｌに維持しながら
、３１．５ｍＱの水中に溶解した１８ｍｇ／ｒｒｌの０
．９４６３ｇのジチオスレイトールをこのｒｐＳＴ溶液
に添加する。この混合物を室温において１時間放置し、
次いでｐ　Ｈを８．４に上昇させる。次いで、４０．５
ｍ（＋の水中に溶解した５、７ｇのヨウドアセトアミド
を滴々添加し、その間ｐＨを８．４に維持する。微細な
沈澱がこの添加の間形成し、これを遠心により除去する
。透明な上澄み液を取り出し、モしてセフ７デツクス（
Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−２５カラムに通過させて、過剰
の低分子量の物質を除去する。高分子量のｒｐＳＴ分画
３４２．８ｇを集め、そして凍結乾燥して２’、２ｇ　
（Ｃａｍ−Ｃｙｓ１８３．１９１）ｒｐＳＴを得る。

実施例６ （Ｃｍ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）ｒｐＳＴの調製 ２００ｍｇの組み換え体ブタ成長ホルモン（ｒｐｓＴ）
およびｌｏｏｍ（２の０．５ＮのＮａ、Ｃ０１（水性水
酸化アンモニウムでｐＨをほぼ８゜４に調節した）の溶
液に、１５ｍｇのジチオスレイトールを添加し、そして
反応混合物を室温において１時間撹拌する。５０ｍｇの
ヨウド酢酸を添加し、そして反応混合物を室温において
２時間撹拌する。反応混合物をアミコン（Ａｍｉｃｏｎ
）８４００型の撹拌したセル中でアミコンＵＭ２ｖで限
外濾過して脱塩する。再希釈および再濾過のいくつかの
サイクル後、残留する水溶液を一定重量に凍結乾燥する
。はぼ２００ｍｇの綿毛状の白色固体を回収する。得ら
れる生成物は上に示した誘導化した組み換え体ブタ成長
ホルモンである。

上の手順に従うが、組み換え体ブタ成長ホルモンの代わ
りに、組み換え体ウシ成長ホルモン、組み換え体ヒツジ
成長ホルモン、組み換え体ウマ成長ホルモン、組み換え
体ヒト成長ホルモンまたは組み換え体トリ成長ホルモン
を使用すると、それぞれ、次のものが得られる： １）（Ｃｍ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）ｒｂＳＴ２）
（Ｃｍ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）ｒｏＳＴ３）（Ｃ
ｍ−Ｃｙｓ　　１８３．１９１）ｒｈｏＳ４）（Ｃｍ−
Ｃｙｓ　　１８３，１９１）ｒｈＳＴ５）（Ｃｍ−Ｃｙ
ｓ　　１８３，１９１）ｒａＳＴ実施例７ ２００ｍｇの組み換え体ブタ成長ホルモン（ｒｐＳＴ）
および５０ｍＱの７Ｎのグアニジ７８　Ｃ１の溶液を調
製し、そしてｐＨをＮａＯＨで８゜４に調節する。この
溶液に３３ｍｇのジチオスレイトールを添加し、そして
反応混合物を室温において１時間撹拌する。次いで、こ
の溶液に２００ｍｇのナトリウムテトラチオネートを添
加する。

ｐＨは直ちに約６に低下し、そしてこれをＮａＯ■］で
８．４に戻す。次いで、反応混合物を２時間撹拌する。

この溶液をアミコンＵＭ２膜で限外濾過する。反応混合
物をほぼ２０ｍＱに濃縮し、次いで３Ｎのグアニジン塩
酸塩で約４０ｍＱに再希釈し、そして再濾過する。この
溶液を約２０ｍ１２に濃縮した後、Ｈ２Ｏで希釈し、そ
して再濃縮する。この方法をさらに２回反復し、そして
残留物を一定重量に凍結乾燥する。はぼ２００ｍｇの白
色生成物が得られる。この生成物は上に示した誘導化し
た組み換え体ブタ成長ホルモンである。

火鳳男１ （−０３Ｓ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）ｒｐＳＴの調
製 １００ｍＱのＨ２Ｏ中の２５０ｍｇの組み換え体ブタ成
長ホルモンの溶液（ｐＨをＮａＯＨでほぼ８，４に調節
した）に、７０ｍｇのジチオスレイ）・−ルを添加する
。この溶液を室温において１時間撹拌する。還元したｒ
ｐＳＴの溶液に、４゜Ｑｍｇのナトリウムテトラチオネ
ートを添加し、そしてこの溶液を室温において４時間撹
拌する。

反応混合物をアミコンＵＭ２膜で濾過し、そして約２０
ｍＱに濃縮する。これを約２００ｍＱのＨ２Ｏで希釈し
、そして濃縮する。この手順をさらに２回反復する。最
終の溶液を一定重量に凍結乾燥して、約２４０　ｒｎ　
ｇの白色粉末を得る。これは上に示した誘導化しに組み
換え体ブタ成長ホルモンである。

実施例９ （ＭｅＳ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）ｒｐＳＴの調製 ２００ｍｇの組み換え体ブタ成長ホルモン（ｒｐＳＴ）
をｉ　００　ｍ（１０’）Ｌｌ、０水中に溶解する。

この溶液を１５　ｍ　ｇのジチオスレイトール（ＤＴＴ
）を添加し、そして反応混合物を室温において１時間撹
拌する。還元が完結した後、２４μａのメチルメタンチ
オスルホネートを添加し、そして反応混合物を室温にお
いて４時間撹拌する。反応の間、ｐＨを必要に応じて１
％のＮａＯＨの添加により８．４に調節する。この溶液
を０Ｍ２膜で限外濾過し、そして約２０ｍＣに濃縮する
。残留物を２００ｍＱのＨ２Ｏで希釈し、そして再濃縮
する。次いで、この溶液を凍結乾燥して２１０ｍｇの前
述の生成物、すなわち、上に示した誘導化した組み換え
体ブタ成長ホルモンが得られる。

上の手順に従うが、組み換え体ブタ成長ホルモンの代わ
りに、組み換え体ウシ成長ホルモン、組み換え体ヒツジ
成長ホルモン、組み換え体ウマ成長ホルモン、組み換え
体ヒト成長ホルモンまたは組み換え体トリ成長ホルモン
を使用すると、それぞれ、次のものが得られる： １）（ＭｅＳ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）組み換え体
ウシ成長ホルモン ２）（ＭｅＳ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）組み換え体
ヒツジ成長ホルモン ３）（ＭｅＳ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）組み換え体
ウマ成長ホルモン ４）（ＭｅＳ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）組み換え体
ヒト成長ホルモン ５）（ＭｅＳ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）組み換え体
トリ成長ホルモン 実施例１０ Ｌｏｏｍ（２のＨ２Ｃ中の２００ｍｇの組み換え体ブタ
成長ホルモンの溶液（ｐＨ＝８．４に調節した）に、１
５ｍｇのジチオスレイトールを添加し、そして反応混合
物を室温において窒素雰囲気下に１時間撹拌する。この
溶液に、５０ｍｇ（７）１゜３−プロパンスルホンを添
加し、そしてこの溶液を室温において６時間撹拌する。

ｐＨを８．４に１％のＮａＯＨの添加により維持する。

粗生成物を０Ｍ２膜の限外濾過により約２０ｍ＋２に濃
縮する。これを２回２００ｒｎ＋２に希釈し、そして再
濃縮する。最終の溶液を凍結乾燥して２００μｇの白色
固体の前述の生成物、すなわち、上に示した誘導化した
組み換え体ブタ成長ホルモンが得られる。

有利に、上の手順に従い、組み換え体ブタ成長ホルモン
の代わりに、適当な組み換え体動物膚長ホルモンを使用
すると、次のものが得られる：１）（ＨＯ，ＳＣＨ，Ｃ
Ｈ，ＣＨ２−Ｃ，ｙＳ　　１８３゜１９１）組み換え体
ウシ成長ホルモン ２）（ＨＯ３ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＣｙＳ　　１８３
゜１９１）組み換え体ヒツジ成長ホルモン３　）　　（
ＨＯｓ　Ｓ　ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｃｙ　ｓ　　ｌ　８
３　。

１９１）組み換え体ウマ成長ホルモン ４）（ＨＯ３ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｃｙｓ　　１８３
１９１）組み換え体ヒト成長ホルモン ５）（ＨＯｉＳＣＨ，ＣＨ，ＣＨｚ−Ｃｙ　ｓ　　１８
３゜１９１）組み換え体トリ成長ホルモン リン酸塩緩衝液ｐＨ７，４（ｌｏｏｏｒｒｌに蒸留中に
溶解したＮａＨ，ＰＯ，Ｈ２Ｏ３，４５ｇ、Ｎａ２８Ｐ
Ｏ＋　　　３．５５ｇ、ＮａＣ１９゜ ５０ｇ）中の組み換え体動物成長ホルモン誘導体（ｌｏ
Ｏｍｇ／ｍαまで）の濃厚溶液を調製する。

これをミリポア（Ｍｉ　Ｉ　Ｉ　ｉ　ｐｏ　ｒｅ）無菌
ミレックス（Ｍｉ　ｌ　ｌ　ｅｘ）−０，２２μｍのフ
ィルター単位で濾過し、そしてアリコートを管に入れる
。

これらを４５°Ｃの炉に入れ、そして必要な間隔で取り
出す。次いで、内容物をリン酸塩緩衝液で希釈する。上
澄み液をＨＰＬＣによりモノマーおよび二量体について
アッセイする。質量のバランスを実施し、沈澱した物質
を記録する。結果を最初の濃度と比較し、そして安定性
のプロフィルを記載する。

あるいは、ｐＨ７，４において劣った安定性を示す成長
ホルモン誘導体を好ましさに劣るｐＨ（４〜１０）にお
いて溶解するか、あるいは懸濁液として評価する。

ｒｐＳＴ工業用 ９３、Ｈ７，２）　　９２．４（２７，６）９２．０（
３４，９）　＊８５．９（２９，４）８９．５（３１，
０） ｒｐｓＴ工業用 ｒｐＳＴ工業用 （Ｃａｍ−Ｃｙｓ １８３−１９１）ｒｐＳＴ ７９．８（２０，７） ８１．５（１８，６）　　− ７５，２（２，０） 本ＰＢＳ緩衝液中に抽出した。残りはすべてＣＢＳ中に
抽出した。

異型 ｒｐＳＴのカルボキシメチル誘導体 ｒｐＳＴのメチルサルファイド誘導体 ｒｐＳＴのヒドロキシコハク酸誘導体 ｒｐＳＴ工業用バッチ 可溶性分画（二量体） ２　日　　　　　７日 ９２．８（５，３）　　　８５．６（５，９）７７．６
（２，４）　　　６３．５（３，０）９１．５（７，８
）　　　６９．９（５，６）８９．５（１６，６） ７５．５（３０，９） 実施例１２ 噴霧乾燥による微小球中への混入のために適当な大きさ
の範囲の新規な組み換え体動物成長ホルモンの調製は、
組み換え体動物成長ホルモン誘導体を希水酸化アンモニ
ウム中に溶解し、次いで所望の塩、例えば、安息香酸ナ
トリウムの溶液を添加することによって達成する。非イ
オン性界面活性剤、例えば、エチレンオキシドおよびプ
ロピレンオキシドのブロックコポリマーを添加し、そし
て一定しておだやかに撹拌しながら溶解する。次いで、
この溶液を噴霧乾燥する。ブチ（Ｂｕｃｈｌ）小型噴霧
乾燥器＃１９０をこの目的に使用できる。

熔融した脂肪、ろうまたはそれらの混合物中の、こうし
て調製した活性成分および添加剤の均質な混合物を調製
し、そして得られる混合物を、入る空気および熔融した
相を融点より高い温度に維持する加熱ジャケットを装備
した空気／液体噴霧ノズルを通して噴霧する。微小球は
熔融した滴として形成し、冷却し、そして約４５〜１８
０ミクロンの所望の大きさの範囲のｌ系列の篩上に集め
る。

所望の大きさ範囲でない微小球を再循環のために集める
。あるいは、均質混合物を遠心ディスク上に供給し、そ
してこうして形成した微小球を上のように集めるか、あ
るいは熔融した混合物を冷却し、そして所望の平均粒子
大きさ範囲に粉砕する。

本発明の組成物における使用に適当なろうおよび脂肪は
、一般に、４０°Ｃより高い融点を有する。

これらのろうは、グリセリドを含有しない以外、脂肪お
よび油類は組成が一般に類似する、室温において固体で
ある、高分子量の低融点の有機混合物または化合物とし
て定義される［ザ・コンデンスド・ケミカル・ディクシ
ョナリー（Ｔｈｅ　　Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ　　Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ　　Ｄｉｃｔ！０ｎａｒＶ）、第１Ｏ版、ペー
ジ１０９４、Ｖａｎ　　Ｎｏ５ｔｒａｎｄ　　Ｒｅ１ｎ
ｈｏｌｄ　　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ］。あるものは炭化
水素である：他のものは脂肪酸およびアルコールのエス
テルである。それらは脂質のなかに分類される。ろうは
熱可塑性であるが、高級ポリマーでないので、フラスチ
ックの族に入ると考えられない。共通の性質は撥水性；
滑らかなテキスチャー；無毒；不都合な臭いおよび色を
もたないである。それらは燃焼性であり、そして優れた
誘電性を有する。はとんどの有機溶媒中に溶解し、水中
に不溶性である。主なタイプは次のとおりである： ｒ１天然 １１動物性［蜂ろう、ラノリン、セラックワンクス、チ
ャイニーズ・インセクト・ワックス（Ｃｈｉｎｅｓｅ　
　１ｎｓｅｃｌ　　ｗａｘ）］。

２、植物性（カルナウバ、カンデリラ、ヤマモモ、サト
ウキビ）。

３、好物 （ａ）化石または地ろう（オシケライト、セレンン、モ
ンタンろう）。

（ｂ）石油ろう（パラフィン、微結晶質系統）（スラン
クワックスまたはスケールワックス）。

ＩＩ、合成 ｌ、エチレン系ポリマーおよびポリオールエーテル−エ
ステル（ｒＣａｒｂｏｗａｘ）Ｊソルビトール）。

２、塩素化ナフタレン（ｒＨａ　Ｉ　ｏｗａｘ）Ｊ。

３、フィッシャー−トログシ合成による炭化水素タイプ
。

本発明の脂肪は、高級脂肪酸、例えば、ステアリ酸およ
びパルミチン酸のグリセリルエステルとして定義するこ
とができる。このようなエステルおよびそれらの混合物
は室温において固体であり、そして結晶質構造を示す。

脂肪と油との間に化学的差は存在せず、唯一の区別は脂
肪が室温において固体であり、そして油が液体であると
いうことである。用語「脂肪」は通常特別にトリグリセ
リドを意味するが、「液体」はすべてを包含する。

脂肪は、好ましくは、長鎖ｃ　、、−ｃ　ｚｓ脂肪酸、
アルコール、エステル、塩、エーテルまたはそれらと、
主としてステアレート、パルミテート、ラウレート、リ
ルエート、ニルネート、オレエート、および残留物また
それらの混合物との混合物である、５０°Ｃより高い融
点をもつものは最も好ましい。グリセロールトリステア
レートは最も好ましい脂肪である。さらに、脂肪酸の新
油性塩類、例えば、ステアリン酸マグネシウムなどは、
また、適当である。

本発明の微小球は、製剤学的におよび薬理学的に許容さ
れうる液体中に分散させて、非経口的投与のための放出
が遅い組成物を形成する。賦形剤は水性の緩衝系または
油系である。油は植物性または動物性の油である。好ま
しい油は中性のトリグリセリドの液状脂肪である。中性
油は残留酸を含有しないものである。本発明の組成物中
の使用に適当な賦形剤は、次のものを包含する：水性系
、例えば、緩衝化生理的塩類溶液：有機溶媒、例えば、
グリコールおよびアルコール；および水不混和性液体、
例えば、油、投与する活性成分の溶解度に依存する。得
られるデータを表Ｉに報告する。

表Ｉ 微小球の組成 ＭＳ ＧＭＳ／大豆油 ＤＳ Ｎａラウレート（１，４） Ｎａベンゾエート（１，６）界面活性 剤Ｂ（０，１２） ＧＴＳ／ＧＤＳ（１９：１） Ｎａベンゾエート（０，６）界面活性 剤Ｂ（０，０５） ＧＴＳ／ＧＤＳ（９：　ｌ） 界面活性 剤Ｂ（０，１） ＧＴＳ／蜜ろう（９：１） ＧＴＳ／ＧＭＳ（１９：　１　） ＧＴＳ／大豆油（１９＋１） Ｎａベンゾエート（１，４）　− ＧＭＳ／カルナバ （１：２） ＭＳ ＭＳ ＭＳ ＰＥＧ６０００（９，の ＰＥ０６０００（４，の ＰＥＧ６０００（０，８） 一ト（８，０） −ト（１，５７） −ト（１６，０） ジエチレングリ コールモノステ アレート （２：１） Ｎａベンゾエート（０，８）　− （３，７５） 一ト（９，０） 実施例１３ 胆汁酸の微小球 ｒｐＳＴ誘導体および胆汁酸の緩衝液をブチＩ９０型噴
霧乾燥器で噴霧乾燥する。このｅ！ｍ粒子の粉末（１０
部）を、被覆物質の塩化メチレン溶液（１部）中に懸濁
する。この懸濁液を噴霧乾燥する。被覆した微小球を、
注射前に、適当な懸濁賦形剤中に懸濁する。これらの組
成物を表［１に記載する。組み換え体動物成長ホルモン
の１８３および１９１位置（ヒトについて１８４および
１９１位置）における小さいループ中のシスティンがア
ラニン、セリン、グルタミン酸、アルギニン、リジンな
どで置換されている、修飾された組み換え体ブタ、ウシ
、ヒツジ、ウマ、ヒトおよびオリ成長ホルモンを包含す
る、本発明の他の誘導化または修飾した組み換え体動物
成長ホルモンは、表ＩＩの記載に従って微小球として調
製される。

移植体は、所望の動物成長ホルモン誘導体および所望の
希釈剤の粉砕した均質な混合物の十分な量を秤量するこ
とによって、調製される。次いで、この混合物をカーバ
ープレス（Ｃａｒｖｅｒ　　ｐｒｅｓｓ）で１０００−
５０００ｐｓ　ｉｇにおいて直径０．４７６ｃｍ　（３
部１６インチ）または０、３１８　ｃｍ　（１部８イン
チ）の円筒形ダイまたは回転錠剤プレスで要求されるポ
ンチおよびダイを使用して、圧縮する。次いで、こうし
て調製された移植体を、生物分解性または非生物分解性
の被膜で手順ＡおよびＢにより被覆する。

手順Ａ 非生物分解性シリコーンポリマー 清浄な等級のシリコーンエラストマー（１０部）を硬化
剤（１部）と、時計皿上でスパチュラで混合する。これ
をデシケータ−内で３０分間脱気する。移植体をピンセ
ットの端でつかみ、シリコーンポリマー中に巻き込み、
アルミニウムはく上に端で配置し、そして４０°Ｃにお
いて５時間硬化する。端の一方または双方をカミソリの
刃で除去して、被覆された円筒の「軸（ｓｈａｆｔ）」
を残す。

あるいは、移植体をヘキサン中に分散された２０％〜４
０％の医学用接着剤［商品名５ＩＬＡＳＴＩＣ”、ダウ
・コーニング（Ｄｏｗ　　Ｃｏｒｎ；ｎｇ）］で浸漬被
覆し、そして４０〜５０°Ｃにおいて一夜乾燥および硬
化した後、基剤の端の一方または双方から被膜を除去す
る。

手順Ｂ 生物分解性被膜 ポリマーまたはコポリマー（１部）をクロロホルム（３
〜８部）中に溶解する。各移植体をビンセットの端でつ
かみ、ポリマー溶液中に浸漬し、次いでクロロホルムを
室温において蒸発させる。

各移植体を２回被覆する。被膜を室温において一夜乾燥
した後、ポリマーの端をカミソリの刃で除去し、被覆さ
れた長い円筒形の「軸」を残す。

移植配合物 ０．５ ０．５ ０ ８ ５ ４１．５ ４１．５ ０ ０ ０ ０ あるいは、ｒｐＳＴまたは他の組み換え体動物成長ホル
モンを水溶液の形態で界面活性剤、緩衝塩および／また
は防腐剤と配合する。次いで、この溶液をブチ１９０型
噴霧乾燥器で噴霧乾燥して、小さい粒子サイズの粉末を
得る。次いで、この粉末を脂肪またはろうと溶融配合し
、そして円筒形移植体に成形する。次いで、上のように
調製された移植体を生物分解性または非生物分解性のポ
リマーで手順ＡまたはＢを使用して被覆する。

移植体配合物 ｒｐＳＴ　　グリセリル 誘導体％　トリアセテート％ ２８　　　　６９．９ １５　　　　８２．９ ５０　　　　４８．５ 界面活性 剤％ ０．１５ ０．１５ 安息香酸 ナトリウム％ ２．０ ２．０ １．５ 実施例１５ １．３ｍ（２のＣａＣ１，に、９２．４ｍｓのコポリ（
グリセリド／ラクチド）コポリマー、５゜３ｍｇのプロ
ピレンオキシドおよびエチレンオキシドの非イオン性ブ
ロンクコポリマー［ｐ　ｌ　ｕ　ｒｏｎｉｃ　　１２７
、ＢＡＳＦ　　Ｗｙａｎｄｏｔｔｅｅ　　Ｃｏｒｐ、）
から市販されている、平均分子Ｊｉ１２，５００、融点
５６およびブルックフィールド粘度３１００　（ｃｐｓ
）”］　、５５．３ｍの２００メツシユのＭ　ｇ　（Ｏ
Ｈ）　！および７４゜６ｍｇの粉末状の（Ｃａｎ−Ｃｙ
ｓ　　１８３，１９１）ｒｐＳＴを添加する。この混合
物を撹拌し、大きい表面のベトリ皿上に注ぎ、モしてＣ
ａＣ１２を室温において蒸発させ、次いで真空乾燥する
。

乾燥した残留物を集め、そしてや＜　ｌｏｏｏｐｓｉｇ
におけるカーバープレスを使用して直径０゜３１８ｃｍ
（１／８インチ）の円筒形の移植体に成形する。こうし
て形成した移植体は各々６０〜７０ｍｇの重量であり、
そしてＩ−１と表示する。

第２組の移植体を、ボルテックスーゲニー（Ｖｏ　ｒ　
ｔ　ｅｘ−ｇｅｎ　ｉ　ｅ）ミキサー内で、１２８ｍｇ
の粉末状カスターろう（ｃａｓｔｏｒｗａｘ）（−２７
０メツシユ）および３２ｍｇの（ＣａｍＣｙｓ　　１８
３．１９１）ｒｐＳＴと混合することによって調製する
。次いで、こうして調製した混合物を前述の方法で直径
０．３１８ｃｍ（１／８インチ）の円筒形移植体に成形
する。ベレットは各々６０〜７０ｍｇの重量であり、モ
して■−２と表示する。

第３組の移植体を、また、前述の手順により９５ｍｇの
一２７０メツシュのカスターろうおよび６４ｍｇの粉末
状（Ｃａｍ−Ｃｙｓ　　１８３，１９１）ｒｐＳＴを使
用して調製する。前述のように調製した０、　３１８　
ｃｍ　（１／８インチ）の直径の円筒形移植体は６０〜
７０ｍｇの重量であり、そしてＩ−３と表示する。

次いで、こうして調製した移植体を生体外溶解の評価に
かける。移植体の各々を別々のＬＯｍＱめリン酸塩緩衝
液（０，０５％のアジ化ナトリウムを含む、ｐＨ７，４
）を含有するプラスチック管に入れ、そして管を震盪す
る水のラック内に配置し、ここで管を震盪し、その間単
位中の水の温度を３９°Ｃに維持する。管を１日震盪し
、次いで溶液を容管から取り出し、ＨＰ　Ｌ　Ｃにより
ｒｐＳＴについて分析し、そして溶液を廃棄する。新し
いリン酸塩緩衝液を容管に添加し、その後管をさらに３
日間震盪する。容管からの溶液を再びｒｐＳＴについて
ＨＰＬＣにより分析し、そして再び溶液を廃棄する。新
しいリン酸塩緩衝液を再び容管に添加し、管を再び３日
間震盪し、次いでｒｐＳＴについて再び分析する。

これらの決定において使用した移植体は、得られた結果
と一緒に下に記載する。リン酸塩緩衝液は、蒸留水中に
１００１００Ｏに溶解した、Ｎ　ａ　Ｈ，Ｐ○＊’　Ｈ
２Ｏ３−４５ｇ１Ｎａ２ＨＰ０４　３．５５ｇ、ＮａＣ
］　　’１　５ｇである。

移植体の調製および表示 移植体中の ｐＳＴ 移植体の由来 −１ −２ −３ −４ −５ −６ 移植体の重量 ６９．６ｍｇ ６８．７ｍｇ ６２．８ｍｇ ６３．３ｍｇ ６６．８ｍｇ ６６．２ｍｇ （理論）ｍｇ ２９．２３ｍｇ ２８．８５ｍｇ １２．５６ｍｇ １２．６６ｍｇ ２６．７２ｍｇ ２６．４８ｍｇ 放出媒質 の体積 匣且 ０ １０　　　１ ０ ０ 生体外溶解の結果 Ｉ−Ｉ　　Ｉ−２Ｉ−３Ｉ−４ ％　　　％　　　％　　　％ ＝ｔＳ　　二量体　二量体　二量体 開始　　開始　　開始　　開始 １．５９　　１．１８４　０．４８５　０．４９９（低
いＸｌ、３％）　（低い、（低い、測定　　測定 せず）　せず） ０．４１７　０．４５９　０．０６３　０．０６８（低
い’）　　（１，７％）（低い）　（低い）０．０４４
　０．０３８　０．００７　０．００７（低い、（低い
、（低い、　（低い、 測定　　測定　　測定　　測定 せず）　せず）　せず）　せず） −５ ％ 二量体 開始 １．６０５ （低い） ０．１３６ （低い） ０．０１９ （低い、 測定 せず） −５ ％ 二量体 開始 １．５７０ （低い） ０．１４０ （低い） ０．０１９ （低い、 測定 せず） ■ ｐｓ’ｒの累積放出 累積 放出ｍｇ １１．７２ １６．１０ １６．５４ Ｉ−３＋ｌ−４ ４，９２ ５，５８ ５，６５ ■−５＋ １５．８８ １７．２６ １７．４５ −６ 累積 もとの放出の％ ４０．４％ ５５．４％ ５６．９％ ３９−０２％ ４４．２５％ ４４．８１　％ ５９．７ ６４．８９％ ６５．６　　％ 実施例１６ マイクロカプセル化組み換え体動物成長ホルモンの調製 ポリ（ラクチドーコーグリコリド）、０．８５ｇを２９
．８ｇのクロロホルム中に溶解し、そして２分間渦形成
する。次いで、２５ミクロンのステンレス鋼の篩に通し
た乾燥した組み換え体動物成長ホルモン誘導体（Ｃａｍ
−Ｃｙｓ　　１８３゜１９１）ｒｐｓＴ、０．１５０ｇ
を、このポリマー／クロロホルム溶液に添加し、そして
３加熱渦形成する。タンパク質の得られる懸濁液を、機
械的撹拌装置を有する５０ｒｙｌの丸底容器に供給する
。撹拌速度は周囲温度において７００ｒｐｍにセットす
る。追加の３．２ｇのクロロホルムを使用して最初の容
器をすすぐ。次いで、合計のクロロホルムの量は３２．
９５ｇである。次いで、シリコーン油（３５０ｃｓ）を
添加して（８分かけて１３．１ｇ）ポリ（ラクチドーコ
ーグリセリド）を沈澱させる。フラスコの内容物を４０
．のフラスコ内の１７２０ｇのへブタンに移し、機械的
に撹拝する。３時間後、硬化した微小球を１系列のステ
ンレス鋼の篩に通して濾過し、そして真空下に乾燥する
。

組み換え体動物成長ホルモンの５５．１６６．１８３ま
たは１９１における１または２以上のシスティン、アミ
ノ酸残基が異なるアミノ酸残基で置換いる修飾された組
み換え体動物成長ホルモンあるいは５５尾１６６位置の
一方または双方または１８３および１９１の間のサルフ
ァイド架橋の一方または双方が還元され、そして誘導化
された、マイクロカプセル化に有用な他のポリマーおよ
び溶媒を下に記載する。

物質の記載において使用した略語は、次のとおりである
： 八　　　　−重合した試料として Ｂ　　　　−再沈澱した試料 ｇｌｙ　　　−グリコリド １ａｃｔ　　−ラクチド ｃａｐ　ｒｏ繻カプロラクトン ＴＭＣ−）リメチレンカーボネーｉ・ ＰＨＢ　　　−ポリヒドロキシブチレートＰＨＶ　　　
＝ポリヒドロキシバレレートＰＥＯ−ポリエチレンオキ
シド 修飾および誘導化組み換え成長ホルモンのマイクロカプ
セル化に有用なポリマー ポリマー Ｇｌｙ／ｄｌ−ラクチド Ｇｌｙ／ｄｌ−ラクチド Ｇｌｙ／ｄｉ〜ラクチド Ｇｌｙ／ｄｌ−ラクチド Ｇｌｙ／ｄｌ〜ラクチド Ｇｌｙ／ｄｉ−ラクチド Ｇｌｙ／ａｌ−ラクチド Ｇｌｙ／ｄｌ−ラクチド Ｇｕｙ／Ｌ−ｆａｃｔ ｄｉ−ｆａｃｔ。

ｄｌ−１ａｃｔ ＰＨＢ ＰＨＢ／ＨＶ Ｃａｐｒｏ／ｌ−１ａｃｔ Ｃａｐｒｏ／１−ｆａｃｔ Ｃａｐｒｏ／１−ｆａｃＬ １ｎｈ （溶媒） ０．３６Ａ（ＨＦＩＰ） ０．５２Ａ（ＨＦＩＰ） ０．６３Ｂ（ＨＦＩＰ） ０．６６Ｂ（ＨＦＩＰ） ０．６１Ａ（ＨＦＩＰ） ０．２２”（ＨＦＩＰ） ０．２６Ｂ（ＨＦＩＰ） ０．２７”（ＨＦＩＰ） ０．２”（ＣＨＣＱ３） ０．４６”（ＨＦＩＰ） ０．２７”（ＨＦＩＰ） ２．９２Ａ（ＨＦＡＳ） ３．２７Ａ（ＨＦＡＳ） ０．４５Ａ（ＣＨＣＩ２３） ０．４６Ａ（ＣＨＣ１２３） ０．５１Ａ（ＣＨＣら） 組成 （重量％） ４３．６１５６．４Ａ ４２．４１５７．４＾ ４３．３１５６．７” ４１．２１５８．８” ４１．６１５８．４Ａ ４１．５１５８．５” ４０．６１５９．４” ４０．７１５９．３Ｂ ４８１５２” ００Ｂ ００Ｂ ００Ａ ７０／３０Ａ ８４．６／１５．４＾ ８４．０／１６．０Ａ ８５．２／１４．８Ａ Ｃａｐｒｏ／Ｉ−ｆａｃｔ　　　　００５ＯＡ（ＣＨＣ
Ｉ２３）Ｃａｐｒｏ／１−ｆａｃｔ　　　　０−３９Ａ
（ＣＨＣ（２３）Ｃａｐｒｏ／１−１ａｃｔ　　　　０
０３６’（ＣＨＣＩ２．）Ｃａｐｒｏ／１−ｆａｃｔ　
　　　０９３１”ＣＣＨＣＱｘ）Ｃａｐｒｏ／ｇｌｙ　
　　　　　０．３４Ａ（ＣＨＣ（２，）ｇｌｙ／ＰＥＯ
８，０００／ＴＭＣＯ，３３”（ＣＨＣＱ、）ｇｌｙ／
ＰＥＯ８，０００／ＴＭＣｏ、３８”（ｃｎｃａ、）ｇ
ｌｙ／ｄｉ−ラクチド／ ＰＥＯ８，００００，３５”（ＣＨＣＩ２３）１−１ａ
ｃＬ／ＴＭＣ０６２６”（ＣＨＣ（＋、）０．２３”（
ＣＨＣＱ、） Ａ）−重合した試料として Ｂ）＝再沈澱した試料とじて ８４．４／１５．６Ａ ８５、１／１４．９Ａ ８６．１／１３．９Ａ １１．４／８８．６” ８４．０／１６．０Ａ ５０．３／８．４／４１．３” ５８．２／４．８／３７．０Ｂ ３５．８１５４．４／９．８” ８５．４／１４．６８ ６９／３１Ｂ 実施例Ｉ７ 動物の成長速度を変更するだめの本発明の種々の修飾（
置換）または誘導化した組み換え体動物成長ホルモンの
効能は、下垂体切除（ｈ　ｙ　ｐ　ｏ　ｘ）ラットのア
ッセイを利用して決定する。下垂体切除したラットはそ
れ自身の成長ホルモンを産生ぜず、そして注射したウシ
成長ホルモンに対して感受性である。測定する応答はあ
る期間、例えば、１０日である。

下垂体切除したシロネズミ（ＴａｃｏｎｉｃＦａｒｍｓ
、Ｓｐｒａｇｕｅ　　Ｄａｗｌｅｙ誘導）の各々に、０
．２ｍ＋２の記載する配合物中のブタ成長ホルモンの８
００マイクログラム（８０μｇ／日）の１０日の投与量
を与えるために十分な量の実施例ｘｘｉ＝おいて調製し
た組成物を注射する。

あるいは、下垂体切除シロネズミの各々を８０マイクロ
グラムのブタ成長ホルモン誘導体を毎日注射する。

試験手順 試験の前に、動物を秤量し、そして試験に使用する動物
を体重に基づいて選択する。体重が群の平均の体重から
１標準偏差である動物のみを選択する。次いで、得られ
る群を、コンピューター発生不規則化手順により８ラツ
ト／群から成る処置群に不規則に分割する。次いで、試
験動物をきれいなかごに移し、そして４ラツト／かごで
収容する。研究の最初の日に、試験動物を秤量し、そし
て過剰の体重の増加または損失（±５ｇ）の動物を取り
替える。次いで、動物を試験群に割り当て、そして処置
する。

１０日の試験期間の終わりに、各動物の合計の体重増加
を記録し、そして各処置について平均の体重増加／ラッ
トを決定する。これらの実験の結果を、下表ＸＸに要約
し、これらの誘導体の生物活性を示す。

下垂体切除ラットのデータ 成長ｇ Ｏ−２２−４ 日　　　　　　　日 ｒｐＳＴ　　　　　　　　　７．５　　５−６（Ｃ５−
６（Ｃａ　１８３，１９１）ｒｐＳＴ　　？、６　　５
．３（サルファイド−Ｃｙｓ １８３．１９１） ｒｐＳＴ　　　　　　　　　８．９　　４．８（Ａｌａ
１８３，１９１）ｒｐＳＴ　　７．１　　　６．３（Ｓ
ＣＩＩｓ−Ｃｙｓ　１８３，１９１）ｒｐＳＴ　７．０
　　６．４（Ｓ−ＣＨｚＣＯＯ−−Ｃｙｓ　１８３．１
９１）ｒｐＳＴ　　　　　　　　　５．９　　５−６（
Ｓ−ＣＩ（２ＣＨ２ＣＨ，Ｓｏ、−−Ｃｙｓ１８３．１
９１）　ｒ　ｐ　Ｓ　Ｔ　　　　　６．９　　５．３誘
導体 ７−１０　　合計 日 １０．１　　　３０ ８．４　　　　２９．７ １１．１ ８．１ ３２．９ ９．３ ６．９ ６．５ ９．５ ２９．２ ２９．８ ９．１ ７．９ ２８．５ ６．８ ９．０ ２８．０ 上のデータから明らかなように、修飾または誘導化組み
換え体ブタ成長ホルモンの各々は生物学的に活性であり
、そして動物のきわめてすぐれた成長を提供する。

実施例１８ 誘導化組み換え体ブタ成長ホルモンを与えるブタの胴体
の評価 ブタを個々のおりに収容する。ブタの最初の体重はほぼ
６０ｋｇである。ブタを１００ｋｇの平均体重で層殺す
る。試験組成物の耳基部の注射は、４日の調節期間後に
開始する。ブタに標準の「Ｃｙホグ（Ｈｏｇ）規定食」
を任意に与え、そして水を任意に与える。

成長の性能は毎週の基準で決定する。次のデータを集め
る：平均の毎日の増加、平均の毎日の飼料摂取、および
飼料効率。

はぼ５０ｋｇの増加後、ブタを層殺し、そして胴体（ｃ
ａｒｃａｓｓ）を評価する。次のデータを屠殺場におい
て集める：温かい（ｈｏｔ）胴体の重量、半鍵様筋（ｓ
ｅｍｉ　ｔｅｎｄ　１ｎｏｓ　ｉＳ）の重量、器官（肝
臓、腎臓、心臓１０重量および腎臓周辺脂肪層の重量。

２４時間冷却後、次の測定値を記録する：胴体の長さ、
背部脂肪（ｂａｃｋ　ｆ　ａ　ｔ）深さ　［第１リブ、
最後のリブ、最後のぜい肉（ｌａｓｔ　　ｌｕｍｂａｒ
　　ｖｅｒｔｅｂｒａ、ｅ）、第１０リプにおける３／
４深さ、Ｐ−２］　、腹部の深さ、膣内領域（ｌｏｉｎ
　　ｅｙｅ　　ａｒｅａ）、色、堅さ、マーブリング（
ｍａｒｂｌｉｎｇ）および筋肉のスコア。

この評価において、陰性の対照には生理的塩類溶液の毎
日の注射を与え、ＣＡＭ−ｒｐＳＴは上の実施例７に記
載する（Ｃａｍ−Ｃｙｓ　　１８３゜１９１）ｒｐＳＴ
であり、そして陽性の対照には自然ｐｓＴを毎日注射す
る。

胴体の評価−（Ｃａｍ−Ｃｙｓ　　１８３．１９１）ｒ
ｐｓＴ ６ブタ／処置を個々に収容し、そしてそれぞれ４４から
９４ｋｇまでの生体重量の処置に投与する。成長および
選択した胴体のデータを相対的効能の計算と一緒に下に
記載する。

最終のブタの成長の性能および選択した胴体の特性への
カルボアミドメチル化ｒｐＳＴ（ＣＡＭ−ｒｐＳＴ）の
作用（最小自乗法の平均）」 平均の毎日の増加、ｋｇ 平均の毎日の飼料の採取、ｋｇ 増加／飼料 肝臓、ｇ 脂肪量、 第１０リブ背部脂肪、Ｃｍ Ｐ−２背部脂肪、ｃｌｌ！ 半綻様筋の重量、ｇ 膣内領域、ａｍ’ 陰性の対照 、９９ ３．１１ ．３２ １７２６．１ ７６２．４ ２．２２ １．８０ ３５９．５ ３８．６ ＣＡＭ−ｒｐＳＴ １．０７ ３．０３ ．３５ １８９２．８ ７６５．５ ２．００ ３５０ ３５３．１ ３９．０ 陽性の対照 １．０９ ２．７５ ．４０ ２０８５．５ ５６３．３ ■、８８ １．４５ ３８７　、９ ３９．６ 実施例１９ ブタを個々のステンレス鋼の代謝かごに収容する。ブタ
をかごに入れたとき、耳基部における注射を開始する。

ブタを５日間新しい環境に調節させる。この期間後、飼
料の摂取を監視し、そしてすべてのブタが各日に同一量
の飼料（Ｃｙホグ規定食）を消費するように調節する。

糞便および尿の収集は一定の摂取後少なくとも３日後に
開始する。ブタには毎日２回の等しい量を供給し、そし
て水は任意に与える。

合計の糞便および尿を５日間集める（収集は毎朝行う）
。Ｎの損失を減少するために、３５ｍ（ｉのＨＣＩをプ
ラスチックの収集バケツに実験の収集期間の開始時およ
び毎日の収集後に添加する。

集めた尿を一定に希釈し、体積を記録し、次いでサンプ
リングしく５０ｍ（２）、標識し、そして分析まで凍結
する。糞便を毎日集め、標識したプラスチック袋中に入
れ、そして分析まで凍結する。

食べ残しを、また、集め、秤量し、そして凍結する。飼
料の小さい試料を毎日取り、凍結し、そして分析の前に
プールする。

飼料および糞便の試料を１００°Ｃで一夜乾燥する（か
、あるいはこれより低い室温においてそれより長い時間
乾燥する）。乾燥した飼料および糞便の試料はウィリイ
（Ｗｉｌｅｙ）ミルで粉砕し、そして２日間空気に平衡
化する。飼料および糞便の乾燥物質およびＮ含量を決定
する。すべての試料を自動化キールプール（Ｋｊｅｌｄ
ａｈｌ）手順を使用して窒素について分析する。尿はそ
のまま分析し、そして合計の毎日の尿の窒素の分泌を決
定する。累を除外して、すべてのＮ値は乾燥物質基準で
表す。

ブタの体重は調節の第１日、収集の第１日および収集期
間の完結時に記録する。これはブタが正のエネルギーバ
ランスにあることを保証する。

窒素のバランス 窒素のバランスの研究におけるＣＡＭ−ｒｐＳＴの評価
は、３種類の実験について合計１２頭の成長するブタを
含んだ：ｌ、陰性の対照（毎日の生理的塩類溶液の注射
）；２、ＣＡＭ−ｒｐＳＴ。

３ｍｇ／日；および３、陽性の対照、３ｍｇの「自然Ｊ
ＰＳＴ、糞便および尿は２週の調節期間後７０間集めた
。結果および相対的活性の計算は、次のとおりである： 成長するブタへのカルボアミドメチル化ｒｐＳＴ（ＣＡ
Ｍ−Ｃｙｓ）および［自然Ｊ　ＰＳＴの作用規準 窒素の摂取、ｇ／ｄ 窒素の分泌、ｇ／ｄ糞便 尿 窒素の吸収、ｇ／ｄ 窒素の消化能力、％ 窒素の保持、ｇ／ｄ 平均の毎日の増加、ｇ ＊　ＣＡＭ−ＰＳＴ　−（Ｃａｍ−Ｃｙｓ陰性の対照 ４１．８６ ５．２５ ２３．０６ ３６．６１ ８７．４６ １３．５６ ３２８．６ １８３、１９１）ｒｐＳＴ ＣＡＭ−ｒｐＳＴ ４１．３６ ５．２１ １６．７４ ６．１５ ８７．４３ １９．４１ ３８３．９ 陽性の対照 ４１．８３ ４．６５ １５．１２ ３７．１８ ８８．８８ ２２．０６ ４０１．８ 実施例２０ 安息香酸ナトリウム（７％Ｗ　／　Ｗ　）およびエチレ
ンオキシドおよびプロピレンオキシドのブロックコポリ
マー（０，５％ｗ／ｗ）を含有するＣａｍ−Ｃｙｓ　　
””、”’）ｒｐＳＴの混合物を、実施例１３に記載す
る噴霧乾燥手順により調製する。

こうして調製した混合物（７，２８ｇ）を、カプリル酸
、カプリン酸およびカプロン酸のトリグリセリドの混合
物（Ｍｉｇｌｙｏ　Ｉ”８１３）／大豆油（７１ｍＱ）
の４／１ｗ／ｗ混合物中のグリセリルトリステアレート
（１９，５ｇ）の撹拌した溶液に７５〜８０°Ｃにおい
て添加する。この混合物を７５〜８０°Ｃにおいて均質
になるまで撹拌し、次いで冷却する。得られる組成物は
、重量基準で、Ｃａｍ−Ｃｙｓ　　”’、”’）ｒｐＳ
Ｔ６．９６％、安息香酸ナトリウム　０．５１％、界面
活性剤（ブロックコポリマー）　　０．０３％および賦
形剤　７３．０％から構成される装置一般に、動物に皮
下注射により、前記動物の頭または首の領域における皮
下に投与される。

実施例２１ ビーカー内の１４０ｇの超精製した大豆油に、１２ｇの
アルミニウムモノステアレートを添加する。この混合物
を均一になるまで撹拌し、そして３０分にわたりほぼ１
４０°Ｃに加熱し、このとき大豆油中のモノステアレー
トの見掛けの溶解が起こる。ビーカーをヒーターから取
り出し、そしてほぼ６０°Ｃに冷却する。次いで、噴霧
乾燥した（Ａａ−Ｃｙｓ　　”’、”’）ｒｐＳＴを撹
拌しながら添加して、均質に分布した懸濁液を生成する
。

粘性混合物を３０ｍσの使い捨て注射器に充填する。各
注射器内の充填体積は２０ｍ（ｌであり、これは３５０
ｍｇの（Ａ　ｌ　ａＣｙ５１８３．　ＩＩＩ）ｒｐＳＴ
を含有する。注射器にゲル混合物を充填した後、Ｍｉ成
物はクリーム状の硬質に固化するが、押し出し可能なゲ
ルである。次いで、包装した注射器を使用するまで冷蔵
庫に貯蔵する。

実施例２２ Ａｌａ−Ｃｙｓ　　”’、’タ’ｒｐＳＴを使用するペ
ーストの調製 ゴマ油（４，１８ｇ）およびゲルシレ（Ｇｅｌｕｃｉｒ
ｅ）４６１０７（Ｃａｔｔｌｅｆｏｓｓｅ−０，７４ｇ
）を、撹拌棒を使用して、ガラス容器内で混合する。次
いで、これを撹拌しながら均質になるまで６５°Ｃに加
熱する。撹拌棒を除去し、そして０．０５２ｇのＡｌａ
−Ｃｙｓ　　”３”’ｒｐＳＴを添加して配合物を形成
する。

実施例２３ Ａ　Ｉ　ａ　　Ｃｙ　５　　”３＋　”’を０．０９モ
ルのトリス溶液中に２１．５ｍｇのｒｐＳＴ／ｍＱで、
４０°ＣおよびｐＨ９，５において溶解する。これを撹
拌しながら１モルのＺｎＣｌ□の添加により亜鉛塩に転
化する。亜鉛塩は沈澱する。それを遠心により１０，０
００Ｘｇにおいて３０分間で回収し、４０°Ｃに溶液を
維持する。こＪｌを凍結乾燥して粉末を得る。ビーカー
内の１４０ｇのゴマ油に、１２ｇのアルミニウムモノス
テアレートを添加する。内容物を１５５°Ｃに撹拌しな
がら加熱する（モノステアレートが溶解するまで）。ビ
ーカーをヒーターから除去し、そして放冷する。冷却す
ると、溶液はゲルとなる。このゲルをボールミル（高剪
断撹拌機およびステンレス鋼の球を装備する）中に供給
する。ミルを真空にし、そして組成物が４０％の亜鉛粉
末を含有するまで、亜鉛粉末をゆっくり添加する。亜鉛
粉末のメジアン直径が１０ミクロン以下に減少するまで
、撹拌を統ける。ステンレス鋼の球をゲルから除去し、
そしてゲルを注射器に入れる。

上に言及したＤＮＡ菌株は、１９８８年８月２３日にＡ
ＴＣＣに受託された。それらはｍｐＨｐＳＴＡＥ３４Ａ
ＴＣＣＮｏ、４０４８２）、ｐＲ０２１１（ＡＴＣＣＮ
ｏ、４０４８３）およびｐｉｇ２４（ＡＴＣＣＮｏ、４
０４８４）である。当業者は認識するように、これらの
ＤＮＡは適当な発現系中に挿入して、本発明の成長ホル
モンまたはその突然変異体を得ることができる。

本発明の新規な動物成長ホルモンのあるものを発現する
Ｅ、ｃｏｌｉ　　ＫＩ２バクテリア菌株は、また、１９
８８年８月２３日にＡＴＣＣに受託された。バクテリア
菌株は、次のものを包含する：Ｅ、ｃｏｌｉ　　菌株１
６５５　（Ａ、ＴＣＣＮｏ。

６７７６２）、１６５５／ｐＲＯｐｓＴＡ３４　（ＡＴ
ＣＣＮｏ、６７７６３）、１６５５／ｐＲ○ｐＳＴＥ３
４　（ＡＴＣＣＮｏ、６７７６４）、１６５５／ｐＲＯ
ｐｓＴ　（ＡＴＣＣＮｏ、６７７６５）、４２００　（
ＡＴＣＣＮｏ、６７７６６）　、４２００／ｐＲＯｐｓ
ＴＡ３４　（ＡＴＣＣＮｏ、６７７６７）、４２００／
ｐＲＯｐｓＴＥ３４　（ＡＴＣＣＮｏ、６７７６８）　
、４２０／ｐＲＯｐｓＴ（ＡＴＣＣＮｏ、６７７６９）
、４２５５　（ＡＴＣＣＮｏ、６７７７０）、４２５５
／ｐＲＯｐｓＴＡ３４　（ＡＴＣＣＮｏ、６７７７１）
、４２５５／ｐＲＯｐｓＴＥ３４　（ＡＴＣＣＮｏ、６
７７７２）、４２５５／ｐＲ０ｐＳＴ　（ＡＴＣＣＮｏ
、６７７７３）　、４３００　（ＡＴＣＣＮｏ、６７７
７４）、１９８９年７月１４日に受託されたｐ　ＲＯｐ
　Ｓ　Ｔ−３ＸＡＫ１８２ＵＡＧ　（ＡＴＣＣ６８０５
６）および１９８９年７月１４日に受託されたｐＲＯｐ
ｓＴＳＸ１８３，１９１ｄｅｌ　（ＡＴＣＣ６８０５７
）。

実施例２４ 告 Ｃ１８３ｄｅ　ｌと表示する合成オリゴヌクレオチドは
、次の配列を有する： ５″　　ＣＧＧ　　ＧＴＣＡＴＧ　　ＡＡＧ　　ＡＧＡ
　　ｃａｃ　　ＴＴＣＧＴＧ　　ＧＡＧ　　３″このオ
リゴヌクレオチドはｒｐＳＴ遺伝子の類似のＤＮＡ配列
と２つの面で異なる。第１に、位置１８３におけるシス
ティンコド′ンをエンコードするＤＮＡはオリゴヌクレ
オチドにおいて欠失されている。第２に、位置１８４に
おけるアルギニンコドンをエンコードするＤＮＡはオリ
ゴヌクレオチドにおいてＣＧＣからＡＧＡに変換されて
おり、その後者はまたアルギニンをエンコードスル。

したがって、位置１８３に存在するシスティンは欠失さ
れる。

一本鎖ｐＧＥＭ−３ｚ　　（ｆ十）ｐｓＴ−３ＸＤＮＡ
は、突然変異誘発のための基質である。このＤＮＡは商
業的に入手可能なファージミド（ｐｈａｇｅｍｉｄ）、
ｐＧＥＭ−３ｚ　（ｆ　＋）中に含有される修飾おれた
ｒｐＳＴ遺伝子から構成されている。ｒｐＳＴ遺伝子の
修飾は、ＤＮＡ配列を変更して、解読領域の位置２２５
−２３０における５ｃａＩ制限工ンドヌクレアーゼ切断
部位の導入を可能とし、そして位置２８５−２９０にお
けるＸｂａｌ制限エンドヌクレアーゼ切断部位の導入を
可能とする。ＤＮＡ配列におけるこれらの変更は、ｒｐ
ｓＴタンパク質のアミノ酸配列を変化させない。標準の
手順を使用してこれらの制限エンドヌクレアーゼで切断
したＥｃｏＲＩ’／Ｈ４ｎｃｌｌｌｌ断片は、７ア一ジ
ミドｐＧＥＭ−３ｚ（ｆ＋）ｐｓＴ−５Ｘを生ずる。−
末鎖ｐＳＴ−３ｚ（ｆ＋）　　ＤＮＡは標準のプロトコ
ルにより精製したファージから調製される。２０００ｎ
ｇのこのＤＮＡを１１００ｎのＣ１８３ｄｅ１オリゴヌ
クレオチドと混合し、後者は前置て５′においてアデノ
シン５′　トリホスフェートおよびポリヌクレオチドキ
ナーゼでリン酸化されている。この混合物を１×アニー
リング緩衝液（ｌ×アニリング緩衝液は７５ミリモルの
ＫＣＩおよび５ミリモルのトリス−Ｃ１、ｐＨ８，０で
ある）中のｌＯμＱの合計の体積中に含有される。この
混合物を６５°Ｃに７分間加熱し、次いで室温において
１０分インキュベーションする。この手順はオリゴヌク
レオチドを一本鎖の基質のＤ　Ｎ　Ａ　ｉ：アニリング
する。アニーリングした分子を、２２μＱのＨ２Ｏ，１
μＱの２０ミリモルのＡＴＰｌ　２単位のＤＮＡリガー
ゼおよびＤＮＡポリメラーゼＩの大きい断片の各々［単
位の定義については、ニュー・イングランド・バイオラ
プス（Ｎｅｗ　　Ｅｎｇｌａｎｄ　　Ｅ３ｉｏ＋ａｂｓ
）のカタログ、１９８６参照］、２μＱの２ＱｘｄＮＴ
Ｐ　（各々２ミリモルの濃度における４つのデオキシリ
ボヌクレオチド５′　トリホスフェートの混合物）およ
び４μＱのＩＯＸ充填緩衝液（ｌ×充填緩衝液は２７゜
５ミリモルのトリス−ＣＩ　　ｐＨ７，５，１５ミリモ
ルのＭｇＣ１，，２ミリモルのＤＤＴ）の添加により、
共有結合的に閉じた二本１１ＤＮＡに変換する。室温に
おいて１時間インキュベーションした後、反応混合物の
半分をＨＢＩＱＩの能力細胞中に標準の形質転換のプロ
トコルにより導入する。３７°Ｃ１こおいて一夜インキ
ュベーションしに後、ココニーをニトロセルロースのフ
ィルター上へ移し、そしてその５′末端にガンマ−３２
ｐ　　ＡＴＰおよびオリゴヌクレオチドキナーゼで放射
線標識することによって所望の突然変異の検出によりハ
イブリダイゼーションのために処理する。３７°Ｃにお
いて５ｘＳＳＣＳ　ＬＸＸノンルト溶液および１５０μ
ｇ／ｍＱの酵母ｔ　ＲＮＡ中で３時間予備ハイブリダイ
ゼーションした後、放射線標識したオリゴヌクレオチド
を添加し、そしてＤＮＡと３７°Ｃにおいて一夜フイル
ター上でハイブリダイゼーションする。フィルターを３
０分間３７°Ｃにおいて５ＸＳＳＣ中で洗浄し、次いで
３０分間ＴＡＣ中で６１．５°Ｃにおいて洗浄する。こ
の後者の洗浄の間、プラスミドＤＮＡが所望の突然変異
を含存するコロニーのみは放射線標識したオリゴヌクレ
オチドプローブとハイブリダイゼーションし続ける。こ
れらのコロニーを洗浄したフィルターをＸ線フィルムに
露光後検出する。プラスミドＤＮＡをもとのペトリ平板
からのこれらのコロニーのいくつかから調製し、前述の
ようにＨＢＩＯ１能力細胞中に導入し、そして上のよう
に放射線標識したオリゴヌクレオチドプローブで再スク
リーニングする。プラスミドＤＮＡｔＤＮＡがプローブ
とハイブリダイゼーションするコロニーから調製し、そ
して所望のＤＮＡ配列について分析する。分析したすべ
てのクローンはＣ１８３ｄｅｌ突然変異を含有する。ｐ
ＧＥＭ−３ｚ　（ｆ＋）ｐＳＴ−３ＸＣ１８３ｄｅ　］
と表示する、１つのクローンからのプラスミドＤＮＡを
ＪＭＩＯＩ能力細胞中に形質転換により導入し、そして
−末鎖ＤＮＡを単一の形質転換から誘導した精製したフ
ァージから調製する。

位ｆｆ１９１においてシスティンをエンコードするＤＮ
Ａを欠失するために、Ｃ１９１ｄｅｌと表示する次のオ
リゴヌクレオチドを合成する：５″　ＴＴＣＧＴＧ　　
ＧＡＧ　　ＡＧＣＴＣＧ　　ＴＴＣＴＡＧ　　ＴＴＧ　
　３’このオリゴヌクレオチドは、ｒｐＳＴにおける類
似のＤＮＡと２つの面で異なる。第１に、位置１９１に
おけるシスティンコドンをエンコードするＤＮＡはオリ
ゴヌクレオチドにおいて欠失されている。第２に、位１
１９０におけるセリンをエンコードするＤＮＡはオリゴ
ヌクレオチドにおいてＡＢＣからＴＣＧに変換されてお
り、後者はまたセリンをエンコードスル。

ｐＧＥＭ−３ｚ　（ｆ十）ｐＳＴ−３ＸＣ１８３ｄｅｌ
からの鋳型−末鎖ＤＮＡおよびＣ１９１ｄｅ１オリゴヌ
クレオチドを、前のようにアニーリングし、伸長し、そ
して結合する。この混合物をＨＡＩＯＩ能力細胞中に導
入し、そして形質転換体を正確にＣ１８３ｄｅ　Ｉにつ
いて記載したように突然変異の存在について分析する。

Ｃ１９１ｄｅｌオリゴヌクレオチドを放射線標識プロー
ブとして使用する。ハイブリダイゼーションおよび洗浄
の条件は、正確にＣ１８３ｄｅ　ｌについて記載したと
おりである。Ｃ１９１ｄｅ　］を含有するいくつかのク
ローンをＤＮＡ配列の分析から同定する。Ｃ１８３およ
びＣ１９１の欠失を含有するプラスミドＤＮＡを、ｐＧ
ＥＭ−３ｚ　（ｆ＋）ｐＳＴ−３ＸＣ１８３，１９１ｄ
ｅｌと表示する。

本発明の主な特徴および態様は、次の通りである。

１１組み換え体動物成長ホルモン中の４つのシスティン
アミノ酸残基の少なくとも１つが置換、修飾、排除また
は誘導化されていることを特徴とする、組み換え体動物
成長ホルモン。

２、小さいループにおける２つおよび大きいループにお
ける２つの４つ（４）のシスティンのうちで、少なくと
も１つ（１）は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸
、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジ
ン、アラニン、グリシン、インロイシン、ロイシン、バ
リン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、
メチオニン、セリン、スレオニンまたはプロリンかう個
々に選択されるアミノ酸により置換されている、上記第
１項記載の組み換え体動物成長ホルモン。

３、小さいループにおける２つおよび大きいループにお
ける２つの４つ（４）のシスティンのうちで、少なくと
も１つ（１）は欠失されている、上記第１項記載の組み
換え体動物成長ホルモン。

４．４つのシスティンはシスティン酸に修飾されている
、上記第１項記載の組み換え体動物成長ホルモン。

５、小さいループにおける２つ（２）または大きいルー
プにおける２つ（２）または両者のループにおけるすべ
ての４つ（４）のシスティンは、（ＣＨ，Ｃ００Ｈ）；
　　［（ＣＨ（Ｃｏ、Ｈ）（ＣＨ２）　−ＣＯ！Ｈ］、
（ＣＨ，Ｃ０ＮＲ，Ｒ，）、（Ｒ６）［（ｃ　Ｒ２）　
、Ｓ　０−３１、（ＣＨＣ）（！　ＣＯＮ　Ｒ５ｃｏ）
　　、　　［（ＣＨｚ）　　−Ｎ　　Ｒｓ　Ｒ４コ　、
　　（ＣＨ，ＯＣ○ＣＨ２Ｒ，）または（ＳＲ，）から
選択される置換基で誘導化されており；Ｒ３およびＲ４
は各々Ｈ１［（ＣＨｚ）−ＣＯ２Ｈ２、［ＣＨ（ＣＯ！
Ｈ）（ＣＨｚ）−ｃ○２Ｈ］　、Ｃ＋−Ｃａアルキル（
前記アルキル基はＯ〜６のヒドロキシル基で置換されて
いてもよい）またはポリエチレングリコールであり：Ｒ
ｓはＣ、−Ｃ、アルキルまたはＣ，−Ｃ４アルコキシメ
チルであり、そしてＲ，は゛ＣＴＣｓアルキノ呟ポリエ
チレングリコールまたはフェニル（前記フェニルは１つ
または２つのカルボン酸またはスルホン酸基で置換され
ていてもよい）であり；ｎは０〜４の整数であり；ｍは
２〜４の整数であり、モしてＸは１〜３の整数であり；
ただし前記組み換え体動物成長ホルモンのシスティンア
ミノ酸残基が誘導化されているとき、前記成長ホルモン
の小さいループ中の両者のシスティン残基または大きい
ループ中の両者のシスティン残基は同一の基で置換され
ており、そして、また、小さいループ中のシスティンア
ミノ酸残基上の置換基は前記成長ホルモンの大きいルー
プ中のシスティンアミノ酸残基上の置換基と同一である
か、あるいは異なることができる、上記第１項記載の組
み換え体ウシ成長ホルモン。

６、前記動物成長ホルモンは（Ａｌａ１８３”）ｒｐＳ
Ｔ；　　（Ａｌａ　　”’、”’）ｒｂＳＴ；（Ａ　　
ｌ　　ａ　　１８３．　　ｌう’）ｒｏＳＴ；（Ａｌａ
　　　”３”’）ｒａＳＴ；　　（Ｓｅｔ　　”’、目
’）ｒｐｓＴ、（３ｅｒ１８３．目’）ｒｂＳＴ；　（
Ｓｅｒ　　Ｉ８”’）ｒｏＳＴ；　（Ｓｅ　ｔ　　”’
、Ｉ”）’　ｒａＳＴ；（Ｇｌｕ　　’″３．″すｒｐ
ＳＴ；　（Ｇｌｕ”ｊ、”’）ｒｂＳＴ；　（Ｇｌｕ　
　”３．”’）ｒ。

ＳＴ；　　（Ｇｌｕ　　　””、　　’）　　ｒａｓＴ
；　　（Ｇｌｕ”３−Ａｌａ　　”’）ｒｐＳＴ；　　
（Ｇｌｕ　　”’−Ａｌａ　　　”’）　　ｒｂＳＴ；
　　（Ｇｌｕ　　　”’−Ａｌａ　　”’）ｒｏＳＴ；
　（Ｇｌｕ　　”３−Ａｌａ　　’う’）ｒａＳＴ；（
Ｇｌｕ　　　”３−５ｅｔ　　　”’）ｒｐＳＴ；（Ｇ
ｌｕ　　””−５ｅｒ　　”すｒｂｓＴ；　　（Ｇｌｕ
　　　””−５ｅｒ　　　”’）　　ｒｏＳＴ；　　（
Ｇｌｕ　　”３−３ｅｔ　　”’）ｒａＳＴ；　（Ａｒ
ｇ１４３、　ＩｔつｒｐＳＴ；　（Ｔｒｐ　　”３．目
’）ｒｐＳＴ；　（Ａｓｐ　　”３．”’）ｒｐＳＴお
よび（Ａｓｎ　　１８３．１１Ｉ）　ｒｐ５Ｔである、
上記第１項記載の修飾組み換え体動物成長ホルモン。

７、前記組み換え体動物成長ホルモンは、組み換えブタ
成長ホルモン Ｈ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−＾１ａ
−Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−５ｅｒＬｅｕ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−八ｒ
ｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｇ　Ｉ
ｎ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉａ−Ａ　Ｉａ−Ａｓｐ−Ｔｈ　ｒ−
Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇ　１ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｕ−Ａｒｇ
−Ａ　１ａ−Ｔｙｒ−＋　１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　Ｉｕ−Ｇ
　Ｉｙ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−１１ｅ−
Ｃ：Ｃ： Ｇ　１ｎ−Ａｓｎ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　１ａ−Ａ
　１ａ−Ｐｈｅ−Ｒ、−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｇ　１ｕ−Ｔ
ｈｒ　−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈ　ｒ
−Ｇ　１　ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｕ−Ａ　Ｉａ−
Ｇ　Ｉｎ−Ｇ　ｌｎ−Ａｒｇ−３ｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａ　
ｌ　−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−Ｐｈｅ−
Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−
３ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−Ｖａ　ｌ
−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｒ　ｇ−Ｖ
ａ　ｌ　−Ｐｈｅ　−Ｔｈ　ｒ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｌｅ
ｕ−Ｖａ　１−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｙ−ＴｈｒＳｅｒ−Ａｓ
ｐ−Ａｒｇ−Ｖａ　ｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇ　１ｕ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇ　
ｌ　ｕ−Ｇ　１　ｙ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　ｌａ−Ｌ
ｅｕ−Ｍｅ　ｔ−Ａｒｇ−Ｃ１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−
Ａｓｐ−Ｇ　ｌｙ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ
−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　ｌ　ｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ
　Ｉｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ　−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−
Ａ　５ｐ−Ｔｈ　ｒ　−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ　−
５ｅｒ−Ａ　５ｐ−Ａ　ｓｐ６６ Ａ　Ｉａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　Ｉｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｒ２、−ＰｈｅＬ
ｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｌｙｓ−Ａ　
１ａ−Ｇ　ｌｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ１８
３　　　　　　　　　　１９１ Ｖａ　ｌ　−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｒ＋　−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　Ｉｕ−５ｅｒ−３ｅｒ−Ｒ
＋。

Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＯＨ。

組み換え体ウシ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｌａ
−反ｅｔ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−
Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−Ｖａ　ｌ　−Ｌ
ｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−ＣＩ　ｎ−Ｈ１ｓ−Ｌｅｕ−
Ｈｉ　ｓ−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌｅｕ　−Ａ　Ｉ　ａ−Ａ　１
ａ−Ａ　５ｐ−Ｔｈ　ｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ　−Ｇ　Ｉｕ
−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−１１ｓ
−Ｐｒｏ−Ｇ　Ｉｕ−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｒｇ−Ｔ
ｙｒ−５ｅｒ−１１ｅＡｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−１１ｓ
−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　ｌｎ−Ａｒｇ−Ｔ
ｙｒ−３ｅｒ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇ
　Ｉｎ−Ｖａ　Ｉ−Ａ　１ａ−Ｐｈｅ−Ｒ２−Ｐｈｅ−
５ｅｒ（：　１ｕ−Ｔｈｒｌ　１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ
−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇ　Ｉｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇ　１
ｕ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　１ｎ−Ｇ　１ｎ−Ｌｙｓ−５ｅｒ−
Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−
Ｉ　Ｉｅ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＬｅｕ−１１ｓ−Ｇ
　Ｉｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−
Ｌｅｕ−Ｇ　１ｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−３ｅ　ｒ−Ａ　ｒ
ｇ−Ｖａ　ｌ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌ
ｅｕ−Ｖａ　Ｉ−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈｒ　−Ｓｅ　
ｒ−Ａｓｐ−Ａ　ｒｇ−Ｖａ　ｌ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｇ　
１ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　
１ｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　ｌｙ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ａ　ｌａ
−Ｌｅｕ−Ｍｅ　ｔ−Ａｒｇ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　
Ｉｕ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ
　１ａ−Ｇｌ　ｙ−Ｇ　１ｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ
−Ｇ　１ｎ−Ｔｈｒ−丁ｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ
−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−５ｅｒ−
Ａｓｐ−Ａｓｐ−６６ Ａ　ｌ　ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙ　
ｒ　−Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅ　ｒ　−Ｒ２ｍ
　−ＰｈｅＡｒ　ｇ−Ｌｙｓ　−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈ１
ｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ　−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｔｈ　ｒ　−Ｔｙ
　ｒ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒ　ｇ−１８３１９１ Ｖａ　ｌ−Ｍｅ　ｔ−Ｌｙｓ−Ｒｌ−Ａｒｇ−Ａ　ｒｇ
−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ａ　Ｉａ−３ｅｒ−
Ｒｌ。

Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｏｆ（。

組み換え体ヒツジ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　Ｌ　−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
Ａ　ｌ　ａ−Ｍｅ　ｔ−Ｓｅ　ｒ−Ｌｅｕ−５ｅ　ｒ−
Ｇ　１ｙＬｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ
−Ｖａ　１−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　１ｎ−Ｈ
１ｓ−Ｌａｕ−Ｈｉ　ｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ａ　ｌａ
−Ａ　１ａ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉ
ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｕ−５ Ｇ　Ｉｎ−Ａ　５ｎ−Ｔｈｒ　−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｖａ　ｌ
　−Ａ　ｌ　ａ−Ｐｈｅ−Ｒ、−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｇ　
ｌ　ｕ−Ｔｈｒ　−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ
−Ｔｈｒ−Ｇ　１ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇ　１ｕ−Ａ　
１ａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｙｓ−５ｅｒ　−Ａｓｐ
−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１，
ｅ−３ｅ　ｒ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＬｅｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉ
ｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｌ
ｅｕ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａ　ｒｇ−
Ｖａ　１−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−
Ｖａ　ｌ　−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈ　ｒ　−Ｓａｒ−
Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａ　Ｉ　−Ｔｙｒ−Ｇ　Ｉｕ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　ｕ　
−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ａ　ｌａ−Ｌ
ｅｕ−Ｍｅ　ｔ−Ａｒｇ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌ　
ｕ−Ａｓｐ−Ｖａ　１−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａ　ｒｇ−Ａ
　１ａ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　Ｉｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ
−Ｇ　ｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈａ
−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｒ　ｇ−５
ｅｒ　−Ａ　５ｐ−Ａｓｐ−６６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒ　−Ｒ２，−Ｐｈｅ
−Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｌｙｓ
　−Ｔｈ　ｒ−Ｇ　Ｉｕ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−
Ａｒｇ８３１９１ Ｖａ　ｌ−Ｍｅ　ｔ　−Ｌｙｓ−Ｒ、−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ａ　１ａ−Ｓｅｒ−
Ｒ、。

Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＯＨ。

組み換え体ウマ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ−Ａ　５ｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
Ａ　ｌａ−Ｍｅ　ｔ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−５ｅｒ
−Ｌｅｕ　−Ｐｈａ−Ａ　Ｉａ−Ａｓｎ　−Ａ　１ａ−
Ｖａ　ｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｈｉ
　５−Ｌｅｕ−Ｈｉ　ｓ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ａ　１
ａ−Ａ　１ａ−Ａｓｐ−Ｔｈ　ｒ　−Ｔｙ　ｒ　−Ｌｙ
ｓ−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ
−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　
Ｉｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−＋　１ｅ−５ Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　１ａ−Ａ
　Ｉａ−Ｐｈｅ−Ｒ２−Ｐｈｅ−５ｅｒ（；　１ｕ−Ｔ
ｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−ＡＩａ−Ｐｒｏ−丁ｈｒ−Ｇｌ
ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ
−Ａｒ　ｇ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｍｅ　ｔ　−Ｃ；　Ｉｕ
−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−
Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ　−Ｇ　１ｎ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａ　ｒ　ｇ−Ｖａ　１−Ｐｈｅ−
Ｔｈｒ−Ａ　５ｎ−３ｅ　ｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　１−Ｐｈ
ｅ−Ｇｌ　ｙ−Ｔｈｒ−５ｅ　ｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖ
ａ　Ｉ　−Ｔｙｒ−Ｇ　１ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｒ　
ｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１．ｕ−Ｇ　ｌｙ
−１１ｅ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ａ　ｌａ−Ｌｅｕ−Ｍｅ　ｔ　
−Ａ　ｒ　ｇ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ａｓｐ−
Ｇ　ｌｙ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ−Ｇ　１
ｙ−Ｇ　ｌｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔ
ｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｈ
　ｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ａｓｐ−Ａｓ
ｐ−６６ Ａ　Ｉａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｒ２、−Ｐｈｅ−
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈｉ　５−Ｌｙｓ−
Ａ　Ｉａ−Ｇ　ｌｕ　−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａ
ｒｇ−１８３１９１ Ｖａ　ｌ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｒ、−Ａｒｇ−Ａ　ｒｇ−
Ｐｈｅ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　１ｕ−３ｅｒ−５ｅｒ−Ｒ、
ａＡＩａ−Ｐｈｅ−ＯＨ。

組み換え体ヒト成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｍｅ　ｔ−
Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−Ａ　Ｉａ−Ｈ１ｓ−Ａ　ｒｇ−Ｌｅ
ｕ　−Ｈｉｓ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉａ−Ｐｈｅ
−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｇ　１ｎ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈ
ｅ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−目ｅ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｙｓ−Ｇ　ｆｕ−Ｇ　１ｎ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−５
ｅｒ−Ｐｈｅ−６ Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈｒ
　−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｒ、−Ｐｈｅ−Ｓｅ　ｒ　−Ｇ　
１ｕ−５ｅｒ　−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−５
ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｇ　Ｉｕ−Ｇ　１ｕ−Ｔｈｒ−
Ｇ　ｉｎＧ　Ｉｎ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−
Ｇ　Ｉｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−５ｅｒ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−５ｅｒ−
Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｐｒｏ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　
１ｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−Ｓｅｒ　−Ｖａ　ｌ
　−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ
ｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇ　１ｙ−Ａ　１ａ−５ｅｒ−Ａｓｐ
−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｖａ　１−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ
−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１
ｕ−Ｇ　１ｙ−１１ｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｍ
ｅ　ｔ−Ｇ　ｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｕ−Ａｓｐ
−Ｇ　Ｉ　ｙ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ　−Ｇ
　Ｉ　ｙ−Ｇ　Ｉｎ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ　−Ｇ　
Ｉｎ−Ｔｈｒ（ｙｒ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ
−Ｔｈｒ　−Ａｓｎ−３ｅｒ−）１　ｉ　５−Ａｓｎ−
Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｓｕ−Ｌｙｓ−
Ａｓｎ−Ｔｙ　ｒ　−Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙ
ｒ　−６７ Ｒ、、−Ｐｈｅ−Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｍｅ　ｔ
−Ａ　５ｐ−Ｌｙｓ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　ｌｕ　−Ｔｈ　ｒ
−Ｐｈｅ−８４ Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｒｌ
−Ａｒｇ−３ａｒ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　１ｕ−Ｇｌｙ−３ｅ
ｒ−９１ Ｒ１，−Ｇ　１ｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ。

組み換え体トリ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　Ｌ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａ
　１ａ−Ｎｅ　ｔ　−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｓｎ
−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−Ｖａ
　ｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｈ１ｓ−
Ｌｅｕ−Ｈｉ　ｓ　−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ　１ａ−Ａ　
１ａ−Ｇ　１ｎ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ　−Ｇ　Ｉ
ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ＩｕＡｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−１１ｅ
−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ａｓｐ−Ｇ　ｉｎ−Ａｒｇ−Ｔｙ
ｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ５ Ｌｙｓ　−Ａ　５ｎ−５ｅ　ｒ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ａ　１
ａ−Ａ　Ｉａ−Ｔｙｒ−Ｒ２−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｇ　１
ｕ−Ｔｈ　ｒ−Ｉ　１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ−
Ｔｈｒ−Ｇ　１ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａ　１ａ
−Ｇ　Ｉｎ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｙｓ　−Ｓｅ　ｒ　−Ａｓｐ
−Ｍｅ　Ｌ　−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−
Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　ＩＬｅｕ−１１ｅ−Ｇ
　１ｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｖ
ａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−３ｅ　ｒ−Ｌｙｓ−Ｖ
ａ　ｌ　−Ｐｈｅ−Ｔｈ　ｒ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ
−Ｖａ　Ｉ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｙ−Ｔｈ　ｒ−３ｅ　ｒ−
Ａ　ｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａ　ｌ　−Ｐｈｅ　−Ｇ　１ｕ−
Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−
Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇ　ｌｙ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　ｌａ−
Ｌｅｕ−Ｍｅ　ｔ−Ａ　ｒｇ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　
１ｕ−Ａｓｐ−Ａ　ｒｇ−３ｓ　ｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−
Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｃｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ−Ｔｈ　ｒＴｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−
Ａｓｐ−１１ｅ−Ｈ４ｓ−１、ｅｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−
Ｇｌｕ−Ａｓｐ−６６ Ａ　ｌ　ａ−Ｌｅｕ　−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−Ａ　５ｎ−
Ｔｙｒ　−Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅ　ｒ−Ｒｚ
　、　−Ｐｈａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ　−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−
Ｈｉ　ｓ　−Ｌｙｓ−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　ｌｕ−Ｔｈｒ−
Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−１８３１９１ Ｖａ　ｌ−Ｍｅ　ｔ−Ｌｙｓ−Ｒ、−Ａｒｇ−Ａｒｇ−
Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　１ｕ−３ｅｒ−Ａｓｎ−Ｒ、、
−Ｔｈｒ−Ｉ　Ｉｅ−ＯＨ０ ここでＲ１およびＲ１，はＣｙ　ｓ、Ｃｙ　ｓ　（ＣＨ
２Ｃ００Ｈ）　、Ｃｙ　ｓ　　［ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）　　
（ＣＨ２）　−ＣＯＺ）（］　　、ＣＹ　Ｓ　　（ＣＨ
２ＣＯＮＲ３Ｒ４）　、（、Ｙｓ　　（Ｒ，）　、Ｃｙ
　ｓ　　（ＣＨ，）、ＳＯ−、、Ｃｙｓ（ＣＨＣＨ２Ｃ
０ＮＲ３ＣＯ）　、ＣｙＳ　　（ＣＲ２）ｍＮＲ３Ｒ１
０Ｍ　Ｓ　（ＣＨ２０ＣＯＣＨ２Ｒ８）　、またはＣｙ
ｓ（ＳＲａ）であり；Ｒ２およびＲ２ａはＣｙ　ｓ、Ｃ
ｙ　ｓ　（ＣＨ２ＣＯＯＨ）　、Ｃｙ　ｓ　　［ＣＨ（
ＣＯｚＨ）（ＣＨ２）、Ｃ０２Ｈコ、Ｃｙｓ（ＣＲ２Ｃ
ＯＮＲ３Ｒ４）　、ＣＶ３　（Ｒ５）　、ＣＶ３　（Ｃ
Ｈり、ＳＯ−，、Ｃｙ　ｓ　（ＣＨＣＨＩＣＯＮＲ，Ｃ
Ｏ）　、Ｃｙ　ｓ　（ＣＨ，）、ＮＲ，Ｒ４，ＣＶ　ｓ
　（ＣＨ２０ＣＯＣＨ２Ｒ５）　、またはＣｙｓ（ＳＲ
ｓ）であり；Ｒ３およびＲ４は各々Ｈ１［（ＣＨｚ）、
ＣＯ，Ｈｌ、　［（ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）（ＣＨ２）ヨＣＯ
□Ｈ］　、Ｃ，−Ｃ，アルキル（前記アルキルは０〜２
つのヒドロキシル基で置換されていてもよい）またはポ
リエチレングリコールであり；ＲＳはＣＩ−Ｃ，アルキ
ルまたはＣ，−Ｃ４アルコキシメチルであり、そしてＲ
ｏはＣ，−Ｃ，アルキル、ポリエチレングリコールまた
はフェニル（前記フェニルは１つまたは２つのカルボン
酸またはスルホン酸基で置換されていてもよい）であり
；ｎはθ〜４の整数であり；ｍは２〜４の整数であり；
そしてＸは１〜３の整数であり；ただしＲ１およびＲｌ
ｍがＣｙｓであるとき、Ｒ１およびＲ１は誘導化された
Ｃｙｓでなくてはならず；そしてＲ２およびＲオ、がｃ
ｙｓであるとき、Ｒ１およびＲ１，は誘導化されたＣｙ
ｓでなくてはならず；そして、また、Ｒ１およびＲｌａ
、あるいはＲ８およびＲ２，のいずれかがＣｙｓである
とき、ジサルファイド架橋は前記Ｒ１およびＲＩ　ｍあ
るいは前記Ｒ２およびＲ２，により表される２つのＣｙ
ｓ官能の間で形成される、上記第５項記載の組み換え体
動物成長ホルモン。

８、Ｒ８およびＲ１１はＣｙ　ｓ　（ＣＨ２００Ｈ）で
あり、そしてＲ２およびＲ２ａはＣ’ｙ　ｓである、上
記第７項記載の組み換え体動物成長ホルモン。

９、Ｒ３およびＲ１，はＣｙｓ（Ｒｓ）であり、Ｒ８は
Ｃ，−Ｃ，アルキルまたはＣ，−Ｃ，アルコキシメチル
であり、そしてＲ２およびＲ２，はＣｙｓである、上記
第７項記載の組み換え体動物成長ホルモン。

ｔｏ−Ｒ＋およびＲ１，はＣｙｓ（ＳＲｉ）であり、Ｒ
６はＣ，−Ｃ，アルキル（前記アルキル基は約Ｏ〜２つ
のヒドロキシル基で置換されていてもよい）プロピレン
グリコールまたはフェニル（前記フェニルは１つまたは
２つのカルボン酸またはスルホン酸の置換基で置換され
ていてもよい）であり、そしてＲ２およびＲｌｍはＣｙ
ｓである、上記第７項記載の組み換え体動物成長ホルモ
ン。

１１、Ｒ１およびＲ１，はＣｙ　ｓ　（ＣＨ２）、５０
−１であり、ｎは１〜４の整数であり、そしてＲ２およ
びＲ２，はＣｙｓである、上記第７項記載の組み換え体
動物成長ホルモン。

１２、Ｒ１およびＲ１，はＣｙ　ｓ　（ＣＨ，Ｃ０ＮＲ
３Ｒ４）であり、Ｒ３８よびＲ１は各々Ｈ，Ｃ，−Ｃ。

アルキル、ポリエチレングリコール、［（ＣＨ２）、Ｃ
Ｏ，Ｈｌ　または［ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）　　（ＣＨｚ　）
　−Ｃ０２Ｈ］であり、Ｘは１〜３の整数であり、そし
てＲ２およびＲ２ｍはＣｙｓである、上記第７項記載の
組み換え体動物成長ホルモン。

１３、Ｒ３およびＲ１，はＣｙ　ｓ　　［ＣＨ（ＣＯ２
Ｈ）（ＣＨ２）、ＣＯ２Ｈ］　であり、Ｘは１または２
であり、そしてＲ２およびＲ２ａはＣ，ｙｓである、上
記第７項記載の組み換え体動物成長ホルモン。

１４、Ｒ２およびＲ１はＣｙｓ（Ｒｓ）であり、Ｒ６は
Ｃ＋ＣａアルキルまたはＣ，−Ｃ，アルコキシメチルで
あり、そしてＲ１およびＲｌａはＣｙｓである、上記第
７項記載の組み換え体動物成長ホルモン。

１５、Ｒ２およびＲ２ａはＣｙｓ（ＳＲｓ）であり、Ｒ
８はＣ＋Ｃａアルキル（前記アルキル基は約０〜２つの
ヒドロキシル基で置換されていてもよい）プロピレング
リコールまたはフェニル（前記フェニルは１つまたは２
つのカルボン酸またはスルホン酸塩の換基で置換されて
いてもよい）であり、モしてＲ，およびＲ１，はＣｙｓ
である、上記第７項記載の組み換え体動物成長ホルモン
。

１６、Ｒ２およびＲ２，はＣｙ　ｓ　（ＣＲ２）　、５
Ｏ−１であり、ｎは１〜４の整数であり、そしてＲ工お
よびＲ１，はＣｙｓである、上記第７項記載の組み換え
体動物成長ホルモン。

１７、Ｒ２およびＲ２，はＣｙ　ｓ　（ＣＨ２ＣＰ　Ｎ
　Ｒ３Ｒ４）であり、Ｒ３はＨ，Ｃ，−Ｃ，アルキルま
たはプロピレングリコールであり、Ｒ４はＣ，−Ｃ。

アルキルまたはポリエチレングリコールであり、そして
Ｒ１およびＲｌｍはＣｙｓである、上記第７項記載の組
み換え体動物成長ホルモン。

１８、前記成長ホルモンは（ＣＨｓ　Ｓ　　Ｃｙ　５１
１１３、１９１）組み換え体ブタ成長ホルモンである、
上記第７項記載の組み換え体動物成長ホルモン。

１９、前記成長ホルモンは、（ＨＯ，５ＣＨＩＣＨ２Ｃ
Ｈ２Ｃｙｓ　　”’、”’）ｍみ換を体ブタ成長ホルモ
ンである、上記第７項記載の組み換え体動物成長ホルモ
ン。

２０、Ｒ１およびＲｌａはＣｙｓ　（ＣＨＣＨｚＣＯＮ
Ｒ３ＣＯ）であり、そしてＲ１はＣ，−Ｃ６アルキルで
あり、そしてＲ２およびＲ１，はＣｙｓである、上記第
５項記載の組み換え体動物成長ホルモン。

２１、Ｒ１およびＲ１，は（ＣＨｚ）　、Ｎ　Ｒｓ　Ｒ
４であり、ｍはｌであり、Ｒ１はＨであり、Ｒ４はＣ１
Ｃ６アルキルであり、そしてＲ２およびＲ２ａはＣｙｓ
である、上記第５項記載の組み換え体動物成長ホルモン
。

２２、Ｒ１およびＲ１１は（ＣＨ２０ＣＯＣＨｚ　Ｒｓ
　）であり、Ｒ６はＣ＋　　Ｇｏアルキルであり、そし
てＲ２およびＲＡＭはＣｙｓである、上記第５項記載の
組み換え体動物成長ホルモン。

２３、組み換え体動物成長ホルモンを、水中にあるいは
グアニジン塩酸塩または重炭酸ナトリウムを含有する水
溶液中に溶解し、前記溶液のｐＨを８．４の値に調節し
、前記ｐＨ調節溶液をジチオスレイトールで処理し、そ
の後、こうして形成した混合物をハロアセトアミド、ハ
ロ酢酸、アルカリ金属テトラチオネート、Ｃ，−Ｃ４ア
ルキルメタンチオスルホネートまたはＣ，−Ｃ，アルキ
ルスルホンで処理し、得られる混合物を限外濾過により
脱塩し、そして得られる脱塩混合物を再希釈、再濾過お
よび凍結乾燥し、これによりシスティン残基におけるサ
ルファイド架橋の少なくとも一方または双方を還元し、
そしてシスティンアミノ酸残基を誘導化することを特徴
とする、組み換え体動物成長ホルモンの凝集を抑制する
方法。

２４、前記組み換え体動物成長ホルモンは、組み換えブ
タ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
Ａ　ｌａ−Ｍｅ　ｔ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅ　ｒ−３ｅ
ｒ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−Ｖ
ａ　ｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｒｌ−Ｈ１
ｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉ　ｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉａ−
Ａ　Ｉ　ａ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇ　１
ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌｕＡｒｇ−Ａ　Ｉａ−Ｔｙｒ−１１
ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｒｇ−
Ｔｙｒ−５ｅｒ−１１ｅ−５ Ｇ　ｌ　ｎ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｎ−Ａ　Ｉａ−
Ａ　Ｉ　ａ−Ｐｈｅ−Ｒ，−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｇ　１ｕ
−Ｔｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ
−Ｇ　Ｉｙ（ｙｓ−Ａｓｐ−Ｇ　１ｕ−Ａ　１ａ−Ｇ　
Ｉｎ−Ｇ　ｌｎ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａ　ｌ　
−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒ　ｇ−Ｐｈｅ−３
ｅｒ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＬｅｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−５ｅ
ｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−Ｖａ　１−Ｇ
　Ｉｎ−Ｐｈｅ−ＬｅｕＳｅｒ−Ａ　ｒｇ−Ｖａ　ｌ　
−Ｐｈｅ−Ｔｈ　ｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　
ｌ　−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉｙ−Ｔｈ　ｒ　−９ｅｒ−Ａｓｐ
−Ａ　ｒｇ−Ｖａ　１−Ｔｙｒ−Ｇ　Ｉｕ−Ｌｙｓ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｙｓ−Ａ　５ｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌｕ　−Ｇ　］
　ｕ−Ｇ　ｌｙ−１１ｓ−Ｇ　１ｎ−Ａ　Ｉａ−Ｌｅｕ
−ＩＪｅｔ−Ａ　ｒｇ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−
ＡｓｐＧ　ｌｙ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ−
Ｇ　１ｙ−Ｇ　Ｉｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　ｌ
ｎ−Ｔｈｒ−Ｔ　ｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓ
ｐ−Ｔｈ　ｒ　−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｓｅ　ｒ−
Ａ　５ｐ−Ａｓｐ−１６６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ　−Ｒ２、−Ｐｈｅ
−Ｌｙｓ−Ｌｙ　ｓ−Ａ　５ｐ−Ｌｅｕ−Ｈｉ　５−Ｌ
ｙｓ　−Ａ　ｌａ　−Ｇ　１ｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅ
ｕ−Ａ　ｒｇ−１８３１９１ Ｓ Ｖａ　ｌ−Ｍｅ　ｔ−Ｌｙｓ−Ｒ＋　−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ−Ｖａ　ＩＧ　Ｉｕ−５ｅｒ−３ｅｒ−Ｒ、。

Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＯＨ０ 組み換え体ウシ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｌａ
−Ｍｅむ一５ｅｒ−Ｌａｕ−５ｅｒ−ＧｌｙＬｅｕ−Ｐ
ｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ａ　１ａ−Ｖａ　ｌ−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｈ１ｓ−Ｌｅｕ−Ｈ１
ｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ａ　１ａ−Ａ　１ａ−Ａｓｐ−
Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇ　１ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌｕ
−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　Ｉｕ
−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−１１
ｅ５ Ｇ　ｌ　ｎ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇ　Ｉｎ−Ｖａ　１−Ａ
　１ａ−Ｐｈｅ−Ｒ２−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｇ　１ｕ−Ｔ
ｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇ
　１ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇ　１ｕ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉ
ｎ−Ｇ　１ｎ−Ｌｙｓ−３ｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　
Ｉｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−５ｅｒ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−５ｅｒ　−Ｔ
ｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｎ−
Ｐｈｅ−ＬｅｕＳｅ　ｒ−Ａ　ｒｇ−Ｖａ　１−Ｐｈｅ
−Ｔｈ　ｒ−Ａ　ｓｎ　−３ｅ　ｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　１
−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈ　ｒ　−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａ
ｒｇ−Ｖａ　１−Ｔｙｒ　−Ｇ　１ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ
−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ
−目ｅ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉａ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−
Ｇ　Ｉｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｕ−Ａｓｐ−Ｇ　ｌｙ−Ｔｈ
ｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ　−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　ｌ　
ｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈｒ　−
Ｔｙ　ｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ　−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｈ　
ｒ−Ａ　ｓｎ−Ｍｅ　ｔ　−Ａ　ｒｇ−３ｅ　ｒ−Ａｓ
ｐ−Ａｓｐ−６６ Ａ　Ｉａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ　
−Ｇ　１　ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅ　ｒ−Ｒ２，−Ｐ
ｈｅ−Ａ　ｒ　ｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ　
−Ｌｙｓ　−Ｔｈ　ｒ−Ｇ　１ｕ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙ　ｒ
−Ｌｅｕ−Ａｒ　ｇ１８３　　　　　　　　　　　　　
　　　　１９１Ｓ Ｖａ　ｌ　−Ｍｅ　ｔ−Ｌｙｓ−Ｒ１−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　１ｕ−Ａ　１ａ−３ｅｒ−Ｒ
ｒ。

Ａｌａ−Ｐｈｅ−０）１　； 組み換え体ヒツジ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ　−Ａ　５ｐ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒ
ｏ−Ａ　ｌａ−Ｍｅ　ｔ　−５ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅ　ｒ
　−Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−Ａ
　１ａ−Ｖａ　ｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉ
ｎ−Ｈ１ｓ−ＬｅｕＨ１ｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ａ　１
ａ−Ａ　１ａ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇ　
１ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｕＡｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−＋
１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｃ：ｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−丁
ｙｒ−５ｅｒ−１１ｅ−５ Ｇ　Ｉ　ｎ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇ　Ｉｎ−Ｖａ　ｌ　−
Ａ　Ｉａ−Ｐｈｅ−Ｒ、−Ｐｈｅ−５ｅｒ　−Ｇ　ｌ　
ｕ−Ｔｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−＾１ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ
−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−
Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌ　ｕ
−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒ　ｇ−＋　１　ｅ−５ｅｒ−Ｌ
ｓｕ”ＬｅｕＬｅｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−５ｅｒ−Ｔｒ
ｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｎ−Ｐ
ｈｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ　−Ａ　ｒｇ−Ｖａ　ｌ　−Ｐｈ
ｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌａｕ−Ｖａ　ｌ　−Ｐ
ｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ　−
Ｖａ　１−Ｔｙｒ　−Ｇ　１ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙ
ｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　ｌｙ−
１１ｅ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉａ−Ｌｅｕ−Ｍｅ　Ｌ−Ａｒｇ
−Ｇｌ　ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ａｓｐ−Ｖａ　Ｉ−Ｔ
ｈｒ−Ｐｒｏ−Ａ　ｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　ｌ
ｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　１ｎ−Ｔｈｒ−Ｔ　
ｙｒ−Ａ　５ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｈ　ｒ−
Ａｓｎ−Ｍｅ　ｔ−Ａｒｇ−５ｅ　ｒ−Ａｓｐ−Ａｓｐ
−６６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　Ｉｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｒ！、　−Ｐｈｅ
−Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ　−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｌｙ
ｓ−Ｔｈｒ　−Ｇ　ｌｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａ
ｒｇ　−１８３１９１ Ｖａ　１−Ｍｅ　ｔ−Ｌｙｓ−Ｒｒ　−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　Ｉｕ−Ａ　Ｉａ−Ｓｅｒ−Ｒ
ｒ　、　−Ａ　１ａ−Ｐｈｅ−ＯＨ。

組み換え体トリ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−
Ａ　Ｉ　ａ−Ｍｅ　ｔ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−３ｅｒ　−Ａ
ｓｎ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　Ｉａ−Ａｓｎ　−Ａ　Ｉａ
−Ｖａ　ｌ　−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ　−Ｇ　Ｉｎ
　−Ｈ１ｓ−Ｌｅｕ　−Ｈｉ　５−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ
　１ａ−Ａ　１ａ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ
　−Ｇ　１ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔ
ｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ａｓｐ−Ｇ　ｌｎ
−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−５ Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ　−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　１　ａ−Ａ
　１ａ−Ｔｙｒ　−Ｒ２−Ｐｈｅ−３ｅｒ　−Ｇ　１　
ｕ−Ｔｈ　ｒ　−ｌ　１　ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　ｌａ−Ｐｒ
ｏ−Ｔｈ　ｒ　−Ｇ　１ｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−
Ａ　ｌ　ａ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｌｙｓ−３ｅｒ
−Ａｓｐ−Ｍｅ　ｔ　−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ
　ｒｇ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌａｕ−Ｖａ　１−Ｌａｕ−
１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ　−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｈ　
ｒ−Ｐｒｏ−Ｖａ　ｌ　−Ｇ　ｉｎ　−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ
−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａ　１−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ
−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａ　ｌ　−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔ
ｈｒＳｅｒ　−Ａｓｐ−Ａ　ｒ　ｇ−Ｖａ　１−Ｐｈｅ
−Ｇ　１ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ
−Ｇ　１　ｕＧ　ｌｕ　−Ｇ　１ｙ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ
　−Ａ　ｌａ−Ｌｅｕ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｒｇ−Ｇ　１ｕ
−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ａｓ　ｐ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｐｒ
ｏ−Ａ　ｒｇ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ
−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ−Ａｓ
ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｈｉ　ｓ−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇ　Ｉｕ−Ａｓｐ−６６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　Ｉｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｒ２，−ＰｈｅＬ
ｙｓ−Ｌｙｓ−八５ｐ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｖａ
　１−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−１８
３１９１ Ｖａ　ｌ−Ｍｅ　ｔ　−Ｌｙｓ−Ｒ、−Ａｒｇ−Ａ　ｒ
ｇ−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｇ　１ｕ−３ｅｒ−Ａｓｎ−Ｒ
＋。

Ｔｈｒ−［１ｅ−ＯＨ０ 組み換え体ウマ成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　ｔ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａ
　１ａ−ＩＪｅ　ｔ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅ　ｒ−５ｅ
ｒ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａ　ｌａ　−Ａ　５ｎ−Ａ　Ｉａ
−Ｖａ　１−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａ　ｌ　ａ−Ｇ　Ｉｎ−
Ｈ１ｓ−ＬｅｕＨｉ　ｓ　−Ｇ　１ｎ−Ｌｅｕ−Ａ　１
ａ−Ａ　１ａ−Ａｓｐ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｇ
　１ｕ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌｕＡｒｇ−Ａ　１ａ−Ｔｙｒ−
１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　ｌ　！／−Ｃ；　ｉｎ
−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−１１ｅ−５ Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Δ１ａ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａ　１ａ−
Ｐｈｅ−Ｒ２−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｇ　１ｕ−Ｔｈｒ−１
１ｅ−Ｐｒｏ−Ａ　１ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇ　１ｙ−
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｕ−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｎ−Ｇ　
ＩｎＡｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｍｅ　ｔ　−Ｇ　Ｉｕ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒ　ｇ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ
−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｇ　ｌ　ｎ−５ｅｒ−Ｔｒ
ｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｖａ　ＩＧ　１ｎ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒ　−Ａｒｇ　−Ｖａ　Ｉ　−Ｐ
ｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　Ｉ　−
Ｐｈｅ−Ｇ　１ｙ−Ｔｈ　ｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ
　＝Ｖａ　ｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ−Ａ　ｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｕ−
Ｇ　１ｙ−Ｉ　１　ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　ｌａ−Ｌｅｕ−
Ｍｅ　Ｌ−Ａ　ｒｇ−Ｇ　１ｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ａ
ｓｐ”Ｇ　Ｉ　ｙ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ　Ｉａ
−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　１ｎ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　
１ｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓ　ｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａ
ｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−３ｅｒ−Ａ
ｓｐ−Ａｓｐ−６６ Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−
Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｒ２，−Ｐｈｅ−
Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ａ　ｓ　ｐ−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｌ
ｙｓ−Ａ　１ａ−Ｇ　ｌｕ　−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅ
ｕ　−Ａ　ｒｇ−１８３１９１ ＶａＩ−ＭｅＬ−Ｌｙｓ−Ｒ，−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｈ
ｅ−Ｖａｌ−ＧＩｕ−Ｓｅｒ−３ｅｒ−Ｒ，。

Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＯＨ。

組み換え体ヒト成長ホルモン Ｈ−Ｍｅ　Ｌ　−Ａｓｐ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ
−Ｔｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｒｇ−
Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ａ　ｌａ−Ｍｅ　ｔ
　−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−Ａ　］　ａ−Ｈｉ　ｓ　−Ａ　
ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ　−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ　−Ａ　１
　ａ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ　−Ｇ　１ｎ
−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ｐｈｅ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｕ−Ａ　１ａ
−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１
ｎ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｐｈｅ−６ Ｌｅｕ　−Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈ
　ｒ−５ｅｒ　−Ｌｅｕ　−Ｒ、−Ｐｈｅ−５ｅｒ　−
Ｇ　ｌｕ　−５ｅｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ
−５ｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇ　１ｕ−Ｔ
ｈｒ−Ｇ　ＩｎＧ　Ｉｎ−Ｌｙｓ−３ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌ
ｅｕ−Ｇ　ｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−Ｓ
ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｇ　１ｎ−３
ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ｐｒｏ−Ｖａ　ｌ　
−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａ　ｒｇ−３ｅｒ−Ｖ
ａ　ｌ　−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ
−Ｖａ　ｌ　−Ｔｙｒ　−Ｇ　ＩｙＡ　１ａ−３ｅ　ｒ
−Ａｓｐ−３ｅｒ−Ａｓｎ−Ｖａ　ｌ　−Ｔｙｒ−Ａｓ
ｐ−Ｌａｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡｓｐＬｅｕ−Ｇ　１ｕ
−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ｔｈｒ−Ｌ
ｅｕ−Ｍｅｔ−Ｇ　Ｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌ　ｕ
−Ａｓｐ−Ｇ　ｌｙ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ
−Ｇ　１ｙ−Ｇ　Ｉｎ−１１ｅ−Ｐｈｅ−ＬｙｓＧ　Ｉ
ｎ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓ
ｐ−Ｔｈ　ｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｈ１ｓ−ＡｓｎＡｓｐ
−Ａｓ　ｐ−Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−Ａ
ｓｎ−Ｔｙｒ　−Ｇ　１ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ６
７ Ｒ２，−Ｐｈｅ−Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｍｓ　Ｌ
　−Ａｓｐ−Ｌｙｓ　−Ｖａ　１−Ｇ　１ｕ−Ｔｈｒ−
Ｐｈｅ　−８４ Ｌｅｕ−Ａｒｇ−１１ｅ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　ｌ　ｎ−Ｒ、
−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｖａ　ｌ−Ｇ　ｌ　ｕ−Ｇ　Ｉｙ−
３ｅｒ−９１ Ｓ Ｒ＋−−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ０ ここでＲ１およびＲ１１またはＲ２およびＲ２，で表さ
れるシスティン残基におけるサルファイド架橋の１つま
たは２つは還元されており、モしてシスティンアミノ酸
残基は、独立に、ＣＶｓｓ　Ｃｙｓ（ＣＨｘ　ＣＯＯＨ
）　、Ｃｙ　ｓ　（ＣＨｚ　ＣＯＮ　Ｒｓ　Ｒ，ａ　）
、Ｃｙ　ｓ　（Ｒｓ）　、Ｃｙ　ｓ　（ＣＨ２）ＩｓＯ
−３、ｃｙｓ　（ＣＨＣＨ２ＣＯＮＲｓＣＯ）　、Ｃｙ
　５（ＣＨｚ）−ＮＲ３ＲいＣｙ　ｓ　（Ｓｏ−、）　
、Ｃｙ　ｓ　（ＣＨ２０ＣＯＣＨ２Ｒ，）またはＣｙｓ
（ＳＲｓ）であり；Ｒ８およびＲ４は各々Ｈ，［（ＣＨ
ｚ）、Ｃ０２Ｈ］、［（ＣＨ（ｃｏｚＨ）（ＣＨｆｆ）
、ｃｏｚＨ］　、ｃ。

Ｃａアルキル（前記アルキルは０〜２つのヒドロキシル
基で置換されていてもよい）またはポリエチレングリコ
ールであり；Ｒ６はＣ，−Ｃ，アルキルまたはＣ，−Ｃ
，アルコキシメチルであり、モしてＲ６はＣ１Ｃａアル
キル、ポリエチレングリコールまたはフェニル（前記フ
ェニルは１つまたは２つのカルボン酸まにはスルホン酸
基で置換されていてもよい）であり；ｎは１〜４の整数
であり：そしてｍは１〜６の整数であり：ただしＲ１お
よびＲｌａがＣｙｓであるとき、Ｒ７およびＲｌａは誘
導化されたＣｙｓでなくてはな、らず；そしてＲ２およ
びＲ１，がＣｙｓであるとき、Ｒ３およびＲ１，は誘導
化されたＣｙｓでなくてはならず；そして、また、Ｒ１
およびＲ１１、あるいはＲ２およびＲ２，のいずれかが
Ｃｙｓであるとき、ジサルファイド架橋が前記Ｒ１およ
びＲ１，あるいは前記Ｒ２およびＲ２，により表される
２つのＣｙｓ官能の間で形成される、上記第２３項記載
の方法。

２５１．前記成長ホルモンのＣ−末端に最も近くかつ前
記組み換え体動物成長ホルモンの不安定な小さいループ
中の２つのシスティンアミノ酸残基の間で形成されたジ
サルファイド架橋を還元および誘導化する、上記第２４
項記載の方法。

２６、前記成長ホルモンのＮ−末端に存在しかつ前記組
み換え体動物成長ホルモンの安定な大きいループ中の２
つのシスティンアミノ酸残基の間で形成されたジサルフ
ァイド架橋を還元および誘導化する、上記第２４項記載
の方法。

２７、（１）成長ホルモンの大きいループ中の２つのシ
スティンアミノ酸残基および（２）前記成長ホルモンの
小さい不安定なループ中の２つのシスティンアミノ酸残
基の間で形成されたジサルファイド架橋の両者を還元お
よび誘導化する、上記第２４項記載の方法。

２８、組み換え体動物成長ホルモンのシスティンアミノ
酸残基の少なくとも１つないしすべての４つ（４）を、
アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、
アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、アラニン、グ
リシン、イソロイシン、ロイシン、バリン、フェニルア
ラニン、トリプトファン、チロシン、メチオニン、セリ
ン、スレオニンまたはプロリンから別々に選択される１
つ（１）ないし４つ（４）のアミノ酸残基で置換するこ
とを特徴とする、組み換え体動物成長ホルモンの凝集を
抑制する方法。

２９、成長ホルモンのＣ−末端に対して１８３および１
９１位置に位置する、前記成長ホルモンの不安定な小さ
いループ中のシスティンの１つ（１）または２つ（２）
を、アラニン、セリン、グルタミン酸、アルギニン、ト
リプトファンまたはアスパラギンから選択されるアミノ
酸で置換し、そして安定な大きいループ中の５５および
１６６位置におけるシスティンを置換しない、上記第２
８項記載の方法。

３０、組み換え体動物成長ホルモンのシスティンアミノ
酸残基の少なくとも１つ（１）ないしすべての４つ（４
）を欠失することを特徴とする、組み換え体動物成長ホ
ルモンの凝集を抑制する方法。

３１、組み換え体動物成長ホルモンのシスティンアミノ
酸残基の４つ（４）をシスティン酸に酸化することを特
徴とする、組み換え体動物成長ホルモンの凝集を抑制す
る方法。

３２．１８３および１９１位置に位置するシスティン酸
アミノ酸残基を、アルギニン、リジン、アスパラギン酸
、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジ
ン、アラニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、バ
リン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、
メチオニン、セリン、スレオニンまたはプロリンから個
々に選択されるアミノ酸で置換されている組み換え体動
物成長ホルモンからなることを特徴とする、製剤学的組
成物。

３３．１８３または１９１または両者の位置に位置する
システィンアミノ酸残基が欠失されている組み換え体動
物成長ホルモンからなることを特徴とする、製剤学的組
成物。

３４、成長促進量の修飾または誘導化された組みれうる
それらの塩類、および製剤学的に許容されうるそれらの
塩類、および製剤学的に許容されうる固体または液状担
体からなり、延長した期間にわたって動物の成長速度を
増加するために有効であることを特徴とする、製剤学的
組成物。

３５、前記組成物は前記動物に非経口的に投与される、
上記第３４項記載の組成物。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ブタ成長ホルモンのＭ１３ｍｐＨ中へのクロ
ーニングを示す。Ｍ１３ｍｐＨＲＦ　　ＤＮＡを制限酵
素ＥｃｏＲＩおよびＨｉ　ｎ　ｄＩＩＩで切断し、仔つ
シ腸アルカリ性ホスファターゼで処理する。発現プラス
ミドｐＥＦＦ−９０２を制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＨｉ
ｎｄＩＩＩで消化する。適当な断片を１％のアガロース
ゲルの電気泳動後で精製する。精製した断片を結合し、
モしてＥ、ｃｏｌｉ　　ＪＭＩＯＩ中に形質転換する。 得られるＭ１３ｍｐＨｐＳＴ−ＲＦ　　ＤＮＡの構造を
示す。 第２図は、ＡＡＩオリゴヌクレオチドおよびＭｌ　３ｍ
ｐ　１１　ｐＳＴ−一本鎖ＤＮＡを使用する、突然変異
誘発の概略的表示である。 第３図は、サンガー（Ｓａｎｇｅｒ）ジデオキシ連鎖停
止法を使用する、Ｍｌ　３ｍｐ　ｌ　ｌ５Ｔ−末鎖ＤＮ
ＡおよびＭｌ　３ｍｐ　ｌ　１ｐｓＴ３４−−本ｐＤＮ
ＡのＤＮＡ配列の分析を示す。左から右のレーンの順序
は、野生型ブタ成長ホルモン（ｐＳＴ）についてのＧＡ
ＴＣおよび引き続く突然変異ｐＳＴＡ３４についてのＧ
ＡＴＣである。 第４図は、オリゴヌクレオチドＧＬＵ３およびＧＬＵ４
およびＭ１３ｍｐｌ　１ｐＳＴ−一本鎖ＤＮＡを使用す
る、突然変異誘発の概略的表示である。 第５図は、突然変異したｐＳＴ遺伝子を含有するバクテ
リアの発現ベクターの構成の概略的表示であり。プラス
ミドは抗生物質アンピシリンに対する耐性（ａ　ｍ　ｐ
　”）を与える。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、組み換え体動物成長ホルモン中の４つのシステイン
   アミノ酸残基の少なくとも１つが置換、修飾、排除また
   は誘導化されていることを特徴とする、組み換え体動物
   成長ホルモン。 ２、組み換え体動物成長ホルモンを、水中にあるいはグ
   アニジン塩酸塩または重炭酸ナトリウムを含有する水溶
   液中に溶解し、前記溶液のｐＨを８．４の値に調節し、
   前記ｐＨ調節溶液をジチオスレイトールで処理し、その
   後、こうして形成した混合物をハロアセトアミド、ハロ
   酢酸、アルカリ金属テトラチオネート、Ｃ＿１−Ｃ＿４
   アルキルメタンチオスルホネートまたはＣ＿１−Ｃ＿６
   アルキルスルホンで処理し、得られる混合物を限外濾過
   により脱塩し、そして得られる脱塩混合物を再希釈、再
   濾過および凍結乾燥し、これによりシステイン残基にお
   けるサルファイド架橋の少なくとも一方または双方を還
   元し、そしてシステインアミノ酸残基を誘導化すること
   を特徴とする、組み換え体動物成長ホルモンの凝集を抑
   制する方法。 ３、組み換え体動物成長ホルモンのシステインアミノ酸
   残基の少なくとも１つないしすべての４つ（４）を、ア
   ルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ア
   スパラギン、グルタミン、ヒスチジン、アラニン、グリ
   シン、イソロイシン、ロイシン、バリン、フェニルアラ
   ニン、トリプトファン、チロシン、メチオニン、セリン
   、スレオニンまたはプロリンから別々に選択される１つ
   （１）ないし４つ（４）のアミノ酸残基で置換すること
   を特徴とする、組み換え体動物成長ホルモンの凝集を抑
   制する方法。 ４、組み換え体動物成長ホルモンのシステインアミノ酸
   残基の少なくとも１つ（１）ないしすべての４つ（４）
   を欠失することを特徴とする、組み換え体動物成長ホル
   モンの凝集を抑制する方法。 ５、組み換え体動物成長ホルモンのシステインアミノ酸
   残基の４つ（４）をシステイン酸に酸化することを特徴
   とする、組み換え体動物成長ホルモンの凝集を抑制する
   方法。 ６、１８３および１９１位置に位置するシステイン酸ア
   ミノ酸残基を、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、
   グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン
   、アラニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、バリ
   ン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、メ
   チオニン、セリン、スレオニンまたはプロリンから個々
   に選択されるアミノ酸で置換されている組み換え体動物
   成長ホルモンからなることを特徴とする、製剤学的組成
   物。 ７、１８３または１９１または両者の位置に位置するシ
   ステインアミノ酸残基が欠失されている組み換え体動物
   成長ホルモンからなることを特徴とする、製剤学的組成
   物。 ８、成長促進量の修飾または誘導化された組みれうるそ
   れらの塩類、および製剤学的に許容されうる固体または
   液状担体からなり、延長した期間にわたって動物の成長
   速度を増加するために有効であることを特徴とする、製
   剤学的組成物。