JPH03500366A - 低分子量キシラナーゼ糖タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ロ止ｊ二＝−！ｌタノバタＪＬ 本発明の分野は、微生物によって生成されるキシラナーゼ類のような、植物のキ シランに作用するキシラナーゼ酵素類である。

植物へミセルロースキシランの主に内部の（１→４）−β−Ｄ−キシロシル結合 を加水分解するエンドキシラナーゼ類（１，４−β−Ｄ−キシランキシラノハイ ドロラーゼ）は、カビ、細菌、植物および無を推動物から分離されている。しが し放線菌材は２多くの自然科学および商業上にとって重要であるにもかかわらず 、放線菌からのエンドキシラナーゼに関する研究はほとんど見られない。

最初に知られた文献では、イイヅカ（Ｉ　１ｚｕｋａ＞およびカワミナミ（Ｋ口 ａｍｉｎａｓｉ）（１９６５年）が、ストレプトマイセス・キシロファージ（Ｓ ｔｒｅ肚姐註弦Ｌ１ンコＩ」、凪）由来のエンドキシラナーゼを報告した。最初 にキシランからキシロビオースおよび大きいキシロオリゴサツカライド類が生成 されたが、最後にはキシロビオースおよびＤ−キシロースが得られた。さらに後 に、フサカベら（Ｋｕｓａｋａｂｅ　ｅｔ　ａｌ）（１９７７年）は、２つの報 告において、ストレプトマイセス（江１吐姐り竺）由来の同様な酵素の最適活性 および安定性を測定した。このエンドキシラナーゼは、およそ４０５００の分子 量を持つことが判った。該酵素は、最初にキシランから中間的な長さのキシロオ リゴサツカライドが生じた後、Ｄ−キシロースおよびキシロビオースを生成し、 且つキシロトリオースからキシロビオースは生成するがＤ−キシロースは生成し ないので、明らかにキシロシルトランスフェラーゼ活性を持っていた［フサカベ 、カワグチら（Ｋｕｓａｋａｂｅ、Ｋａｗａｇｕｃｈｉ　ｅｔ　ａｌ）（１９７ ７年）；およびフサカベ、ヤスイら（Ｋｕｓａｋａｂｅ、Ｙａｓｕｉ　ｅｔ　ａ ｌ）（１９７７年）］。またナカジマら（Ｎａｋａｊｉｍａ　ｅｔ　ａｌ）（１ ９８４年）は、分子量約４３，０００ダルトンの同様なストレプトマイセスのエ ンドキシラナーゼについて記述している。

ナショナル・ケミカル・ラボラトリ−（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｅｗｉｅａｌ　 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ａｔ　Ｐｕｎｅ、Ｉｎｄｉａ）の研究者らは、カイニア （９■ｎ上り属の放線菌株の酵素生成株の分離を報告した［スライニバサンら（ Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ　ｅｔ　ａｌ＞（１９８３年）］。この菌株は識別分類“ ＮＣ１，８２−５−１”とし、ナショナル・ケミカル・ラボラトリ−（以下、Ｎ ＣＬと記述する）の内部で研究されてきた［スライニバサンら（Ｓｒｉｎｉｖａ ｓａｎ　ｅｔ　ａり（１９８４年）コ、カイニア（Ｃｈａｉｎｉａ）菌株ＮＣＬ 　８２−５−１は、ＮＣＬの外部では入手できず、且つ非公共ベースでＮＣＬに よって管理されている。

本出願は、キシラン源を含む培地上の菌株ＮＣＬ−８２−５−１の発酵により得 られる新しいエンドキシラナーゼの発見、固体から発酵液の分離、且つ該発酵液 をクロマトグラフィーの分離系にかけて本発明でキシラナーゼ■と称する本発明 のエンドキシラナーゼを分離および精製することにもとづいている。この酵素は 、低分子量の糖タンパク質である。知られている限りでは、キシラナーゼ■は、 今までに報告されたあらゆるキシラナーゼの内で最も少ない分子量をもつ。キシ ラナーゼ■は、実質上純粋な形で得られている。ダルトン表示によるこの絶対分 子量は９０００未満であり、且つ５０００を越える。得られたデータより、推測 した分子量は６０００±１０００ダルトンである。他にも標準同定項目を測定し た。おおよそのアミノ酸含量およびアミノ酸数が判り、且つ該グリコジル化した タンパク質の大部分のアミノ酸主鎖の配列を決定した。実際に、正確な配列をタ ンパク質の主要部分を繰り返し分析することにより確認した。

キシラナーゼ■は、木材繊維を加工する用途にとって重要な特性をＧつ、それは 、セルロースには明らかに酵素活性を持たずに、キシランに特異的な酵素活性を もっことである。この小さい分子サイズは、木材繊維にキシラナーゼ■の浸透を 可能にし、キシランを選択的に分解することができる。キシラナーゼ■は、キシ ランをキシロオリゴサツカライド類に転換する。またキシラナーゼ■は、セルロ ース誘導体またはスターチのような他のオリゴサツカライド類に対して明らかに 酵素活性をもたないために、他の基質のキシランに作用させることができる。

添付している図は、キシラナーゼ類のクロマトグラフィーによる分離のプロット である８図１は、発酵培地がらのエンドキシラナーゼ活性の最初の分離を示し、 そのピークは、大きい分子のキシラナーゼも共に含んでいることを示している。

図２は、このエンドキシラナーゼ活性をさらに二つのフラクションへの分解を表 しており、第一のピークは大きい分子のキシラナーゼ（キシラナーゼＩ）であり 、且つ第二のピークは、本発明である小さい分子のキシラナーゼ（キシラナーゼ ■）である。

本発明は、５０００を超え、且つ９０００未溝の分子量（ダルトン表示）をもつ 実質上純粋な糖タンパク質である新しいエンドキシラナーゼに関するものである 。キシラナーゼ■とじて引用しであるこの酵素は、セルロースには明らかに酵素 活性をもたずに、キシランに特異的な酵素活性をもつことを特徴としている。続 いて記述しである方法により、キシラナーゼ■を本質的に均質といえるまで精製 することができる。該キシラナーゼ■は後記しである２４個のアミノ酸配列によ りさらに特徴づけられている。

好適なキシラナーゼ■の調製方法は、永続的に公共的に入手できるようになるで あろうカイニア（Ｃｈａｉｎｉａ）菌株ＮＣＬ−８２−５−１の使用を必要とす る。キシラナーゼ■の調製のための菌株ＮＣＬ−８２−５−１の利用は、以下に 述べる実験実施例により詳細に説明されているような一般的方法を必要とする。

ＮＣＬ−８２−５−１は、適切な培地中で成長した時、細胞外にグルコースイソ メラーゼ類、キシロースイソメラーゼ類およびキシラナーゼ類を分泌するカイニ ア（Ｃｈａｉｎｉａ）属の強膜形成放線菌類である０例えば、ふすま−酵母エキ ス培地は、細胞外に２５０００のオーダーの明白な相対的な分子量をもつ大きい 分子のキシラナーゼＩ、且つ本発明である小さい分子のキシラナーゼ■を含有す るエンドキシラナーゼを生成させるために使用することができる。

ＮＣＬ−８２−５−１を培養するために使用できる発酵培地は、スライニバサン ら（Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ　ｅｔ　ａｌ）＜１９８３年）およびスライニバサン ら（Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ　ｅｔ　ａｌ）（１９８４年）に記述されている。接 種培養物を調製するために、カイニア（吐亘凪幻菌株を、ポテトデキストロース 寒天および麦芽エキスグルコースペプトン寒天培地で培養するおよび／または維 持することができる。断続的な二次培養が、成育性を維持するために望まれる。

キシラナーゼ生成のための液体発酵培地は、キシラン源を含むべきである。

例えば、ふすまおよび植物源を含む同様なキシランを使用することができる。さ らに具体的には、５％ふすまおよび１％酵母エキスから、適切な培地を調製する ことができる。出発ｐＨは約５．８でよく、且つ該発酵を約２８℃の温度で行う ことができる０発酵は、細胞外にキシラナーゼ類が遊離するまで続ける０発酵時 間は９０〜１２０時間が適切であるが、さらに短いまたは長い時間でも行うこと ができる０発酵の経過は、試料を採取し、且つ細胞外のキシラナーゼ活性の試験 を行うことにより追跡することができる。

発酵が完了すると、該カイニア（Ｃｈａｉｎｉａ）の細胞を水性発酵培地から遠 心分離、−過または他の方法によって分離する。この細胞のないキシラナーゼ類 を含有している培地を、さらにエンドキシラナーゼであるキシラナーゼ■を回収 するために処理する。好適な方法では、大きい分子のキシラナーゼＩおよび所望 する小さい分子のキシラナーゼ■を含むキシラナーゼ類を沈澱させるために、清 澄化した培地にエタノールを加えるのがよい、この沈澱したキシラナーゼ類を再 溶解し、且つクロマトグラフィーの分離系にかける。これによって該キシラナー ゼ■が、高度に精製された形で調製され得る。

実験実施例 先ｍ劇 ＬＬＩＬ： 蒸留水１０Ｃ）＋Ｉ中の成育および発酵培地に、ふすま５．０ｇおよび酵母エキ ス１．０ｇを含有させた。培地を１２１℃で４０分間、高圧蒸気滅菌した。２％ ポテトデキストロース寒天平板培地上に培養し、成育した７日間培養した培養菌 をフラスコに接種した。該フラスコをさらに７２時間インキュベートし、且つ接 種物として使用した。該実験のフラスコを上述の接種物で接種し、且つロータリ ーシェーカー（２０Ｏｒｐｍ）で３０℃で１２０時間インキュベートした。培養 ｒ液を遠心分離（７００ｘｇ）後、透明な上澄液として集めた。

シー　−ゼ　： 生成した還元糖を、３．５−ジニトロサリチル酸試薬［ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ） 、１９５９年］および、ネルソンーソモギー法［ネルマン（Ｎｅｌｓｏｎ）、１ ９４４年］によって定量し、キシロース当量としてキシラナーゼ活性を測定した 。

シー　−ゼ　の　お　び カイニア（Ｃｈｓ＋１ｎｉａ）　ｓｐ、（ＮＣＬ−８２−５−１）を、主要炭素 源としてふすまを含む上述の培地に成育させた。記述したように１２０時間培養 後、該細胞および固体残渣を７００　Ｘｇで２０分間の遠心分離により液体培地 から除去した。

１１へ１１ 以下のステップはとくに記載しない限り、０〜４℃で材料および方法に記述した ように、４℃に冷却した３倍容の蒸留エタノールで該酵素を沈澱させることによ り、該培養ｒ液（３５０ｍｌ、３１００　Ｕ）ヲｆｉ！シタ。該沈澱物を遠心分 離により回収し、減圧下で乾燥させ、さらに使用するまで一１０℃で貯蔵した。

キシラナーゼ活性の回収率はおよそ８５〜９０％であった。

と元り乙しニ ステップＩで得られた酵素のアルコール沈澱物（１，５８ｇ、２８００１１）を 、ｐＨ７，１の５０ミリモルりん酸ナトリウム緩衝液の５０ｍ１に溶解した。該 沈澱物からの不溶性固体粒子を遠心分離により分離し、且つ該透明酵素液をさら にバッチ処理のＤＥＡＥ−セルロースで精ＩＮ　ＮａＯＲおよびＩＮ　ＨＣＬで 予備活性させたＤＥＡＥ−セルロースをｐＨ７，１の５０ミリモルりん酸ナトリ ウムＭ衡液で平衡化した。２９０ｍ１のＤＥＡＥ−セルローススラリー（１＋ｓ ｌあたり乾燥重量２５ｍｇを含む）を濾過することにより得られた固体ＤＥＡＥ −セルロースケークを、５０ｍ１の酵素溶液（２８００１１）に懸濁した。この 処理は３０分間常に撹拌しながら行い、該スラリーをワットマンＮｏ、１（Ｗｂ ａｔｓ＋ｉｎ　Ｎｏ、１）の−紙を用いて濾過した。該炉液を集め、ＤＥＡＥ− セルロースケークは同様の緩衝液を各回２５艷１用いて２回再懸濁させ、該酵素 ぐ８７５　Ｕ）を回収した。

ｐＨ７，１の５０ミリモルりん酸ナトリウム緩衝液で予備平衡化したＤＥＡＥ− フラクトゲル−ＴＳＫ−６５０Ｓカラム（２，０Ｘ９０．Ｏｃｍ）で、ＤＥＡＥ −セルロース処理（ステップ■）により濃縮した酵素溶液を再びクロマトグラフ 分離した・該カラムを該緩衝液で洗浄し、４ｓ＋のフラクションを１０分間毎に 集めた。充填した試料の帯黄色の色素はカラムの上部に吸着された。吸着されて いないキシラナーゼを含有するフラクションを集め（８０ｍｌ）、限外濾過によ り１２ｍ１（７６５Ｕ）に濃縮した。このステップにおいて精製した酵素は、図 １に示したようなキシラナーゼ活性の単一ピークを与えた。

ステップ■により濃縮した酵素溶液を、さらにセファデックスＧ−５０カラム（ ２，５〜１１０ｃｍ）により精製した。

ｐＨ７，１の５０ミリモルりん酸ナトリウムｗＬ衝液を、該酵素の充填に加えて 溶出にも使用した。該キシラナーゼ活性およびタンパク質の溶出の曲線を図２に 示した。

フラクションをステップ■で記述したような流速で集めた。キシラナーゼＩおよ びキシラナーゼ■（低分子量）として表した２つのキシラナーゼ類が、それぞれ １３５〜１７０階＋（６６Ｕ）および２６５〜３３５＋＋＋Ｉ（２６５Ｌｌ）で ２つのピークとして分離された。これらの２つの酵素タンパク質の比は、３０　 ニア　０であり、且つこれらの酵素活性の比は、２０　：８０であった。精製し たキシラナーゼＩおよびキシラナーゼ■の比活性は、それぞれ２０．０および３ １．５　Ｕ／Ｂタンパク質であった。

先ｚ１土−−Ｍｌおよ囚きシラナーゼ　のＭＪＬキシラナーゼＨの精製を、ＬＫ Ｂ等電点電気泳動法分析によりさらに確認した。キシラナーゼＨのタンパク質試 料をｐＨが３．５〜９．５の範囲の標準タンパク質と共に測定された。２０〜３ ｏＡ１ｇの試料をポリアクリルアミドスラブゲルに充填し、８時間、電気泳動を 行った。該キシラナーゼ■の分離は、ｐ　Ｈ４，３のディスクゲル；気泳動で単 一のタンパク質のバンドを示し、その均質性を示していた。

表Ａでは、各ステップでのキシラナーゼ■の各段階における精製方法、回収率お よび比活性を要約したものである。

シラナ〜ゼ■の分子量は、６０００ダルトンである。ピリジルエチル化した後の 該分子量は５ｏｏｏダルトンである。同じ分子量の標準品を用いるセファデック スＧ−５０−５０のカラムクロマトグラフィーにより、該分子量は５０００ダル トンである。

（４）　フラクトゲルＨＷ−４０５を用いるカラもクロマトグラフィーにより、 該分子量は９０００ダルトンである。

１叉ＺバＩＪＫ、　（７）韮ｊ−： キシラナーゼ■の糖タンパク質の性質を測定するために、異なる２つの方法を用 いた。

（ａ）　モール：エ　ノール：Ｐ　ｉＬポリアクリルアミドゲル電気泳動の後、 タンパク質を固定することに加えて、スクロース、グリセロールおよび他の不純 物のような低分子量物質を除去するために該ゲルをインプロパツール：酢酸：水 （２５：１０：６５）の固定溶液に浸した。さらに上述の固定溶液で調製した０ 、２％チモールに該ゲルを１時間浸した。固定溶液で再洗浄した後の該ゲルを、 硫酸：エタノール（８０：２０Ｖ／Ｖ）の濃度の溶液に移し、３５℃で３時間維 持した。キシラナーゼ■の糖タンパク質は、黄色地に赤色のバンドとして現れた 。

（ｂ）　コンカナバリンＡセファロースのアフィニティークロマトグラフィー コンカナバリンＡセファロース４Ｂは、特にα−Ｄ−マンノピラノシルおよび／ またはα−Ｄ−グルコピラノシル残基または内部の２−Ｑ−Ｄ−マンノピラノシ ル残基を含む糖タンパク質に対して親和性をもつ、キシラナーゼ■が、コンカナ バリンＡアフィニティセファロース４Ｂカラム（０，６Ｘ　８　、Ｏｃｍ）のク ロマトグラフィーにより分析された時、最初に溶出したフラクションに活性が検 出されたため、キシラナーゼ■は吸着が認められなかった。このことは、キシラ ナーゼ■が、α−Ｄ−マンノピラノシルまたはα−Ｄ−グルコピラノシル残基と は別の糖成分を含有するであろうことを示唆している。

１」二１１１１滅−二 キシラナーゼＨのアミノ酸組成をベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）アミノ酸自動分 析計を用いて測定した。得られた結果を表Ｂに示す。メチオニン、イソロイシン 、ロイシン、フェニルアラニンおよびリジンの非常に近似したモル濃度は、すべ て各１個のアミノ酸残基を示し、且つヒスチジンおよびシスティンのモル濃度は 異常に低いが、これも１個の残基を示している。測定はできなかったが、アミノ 酸配列から推測される１個のトリプトファン残基を加えて、総残基数は４２であ る。

アミノ　の　゛　： キシラナーゼ１１（１０ＩＩｇ＞のアミノ酸配列を気相アミノ酸配列自動決定装 置で測定した。配列分析の前に、キシラナーゼＨの窒素末端アミノ酸が停止され ているかいなりζかを知ることが必須であった。これはジメチルアミノアゾベン ゼンインチオシアネート試薬を用いるチャン（Ｃｈｓ＋ｎｇ）（１９８３年）に 従って測定した。窒素末端アミノ酸には、いかなる停止基もないことが判った。

キシラナーゼ■の部分的なアミノ酸配列を図表Ａに示し、且つ配列決定データか らのアミノ酸組成を表Ｂに示す、この配列決定データは、該酵素の窒素末端がア ラニンであり、また炭素末端がプロリンであることを示していた。配列決定装置 により検出された総アミノ酸残基数は４０であった。

図表　Ａ シー　−ゼ　の　５アミノ　＋ｃ） （１１）示した配列は窒素末端アミノ酸（＾ｌａ）から４０番目のアミノ酸（Ｐ ｒｏ）に延びていたが、炭素末端への配列は完全なものではない。

（ｂ）３７番目のアミノ酸は、おそらくセリンであるがグルタミン酸である可能 性もある。

（ｃ）標準的な３つの文字の記号を使用しな；へｌａ−アラニン、＾ｓｎ−アス パラギン、　Ａｓｐ−アスパラギン酸。

Ｇｌｎ−グルタミン、　Ｇｌｙ−グリシン、　ｌ１ｅ−イソロイシン、　Ｌｅｕ −ロイシン、　Ｎｅｔ−メチオニン、　Ｐｈｅ−フェニルアラニン、　Ｐｒｏ− プロリン、　５ｅｒ−セリン、　Ｔｈｒ−スレオニン、　Ｔｒｐ−）リプトファ ン。

Ｔｙｒ−チロシンおよびＶａｔ−バリン図表Ａの該アミノ酸配列は、７番目のア ミノ酸（八ｓｎ）から３０番目のアミノ酸（Ｌｅｕ）の２４個のアミノ酸配列を 繰り返し分析することによって確認したものである。該分子の残りの部分は、一 般的に正しいと信じられるが、アミノ酸分析計の固有の曖昧さにより、いくつか のアミノ酸の変動も有り得る。しかし、図表Ａはキシラナーゼ■の間違いのない 同定を提供している。

表Ｂ モル％　残基数　部分的な配列 トリプトファン　（ｃ）　（ｃ）　１ 精製したキシラナーゼ■は、−１５℃で貯蔵した時、ＰＨ６，０で安定であった 。１年間を越えても活性の有意な損失は見られなかった。

該酵素は、カルボキシメチルセルロース、Ｐ紙、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ− キシロサイドおよびセロビオースになんら作用を示さなかった。

ｌｌＬ土： キシラナーゼ■に対するｐＨの影響を５０ミリモルクエンＭ緩衝液（ｐＨ３，５ 〜６．０）および５０ミリモルりん酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６，５〜８．０） を用いて試験を行った。キシラナーゼ■の活性の至適ｐ）（は、５０℃で６．０ であることが判った。

Ｗ支： キシラナーゼ■に刻する温度の影響を、４〜８０℃の範囲で調べた。溶性キシラ ンに対するキシラナーゼＨの活性の至適温度は、ｐ、Ｈ６゜Ｏで６０℃であるこ とが判った。

ｌ上− ］９８２年１２月２０日に、カイニア（Ｃｈａｉｎｉａ）菌株ＮＣＬ−８２−５ −１を、受は入れ番号２９８０で工業用微生物のナショナルコレクション、ナシ ョナルケミカルラボラトリ−に非公共性である制限された寄託で提出した。さら にカイニア（Ｃｈａｉｎｉａ）菌株ＮＣＬ−８２−５−１の寄託を、受は入れ番 号５３８１、２でＡＴＣＣ（＾ｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃ ｏ１１ｅｃｔｉｏｎ。

１２３０１　Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌ ａｎｄ、２０８５２．Ｉｌ、Ｓ、＾、）に行った。

１１笈１ イイズカ（Ｉｉｚｕｋａ）およびカワミナミ（Ｋａｗａｍｉｎａｍｉ）（１９６ ５年）、二ｌ−リ　ル　ヤー・パイ　ロジ　ル・ケミスト著−＾ｒ、Ｂｉｏ１． ｃｈｅ＋ｏ、、　２９：　５２０−５２４ページクサカベ、カワグチら（Ｋｕｓ ａｋａｂｅ、Ｋａａ＋ａＨｕｃｈｉ　ｅｔ　ａｌ）（１９７７ミラー（Ｍｉｌｌ ｅｒ）（１９５９年）、１ゴ２Ｊ−イ　ル・ケミストリー（＾ｎａ１．ｃｈｅｍ 、）、　３１　：　４２６ページネルソン（Ｎｅｌｓｏｎ）、ジャーナル・オブ ・バイオロジカル・ケミストｌ　−Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋ｍ、）（１９４４年 ）、　１５３　：　３７５−３８０ページ ナカジマら（Ｎａｋａｊｉｓａ　ｅｔ　ａｔ）（１９８４年）、ジャーナル・　 ブ・ファーメンー−ション＝　−／ＤＥ／”　−Ｊ、Ｆｅｒｍ、Ｔｅｃｈｎｏｌ 、）。

６２　：　２６９−２７６ページ ジ　ル・　ミスト’　−Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　、　１５３：　３７５ペー ジスライニバサンら（Ｓｒｉｎｉｖａｓｉｎ　ｅｔ　ａｌ）（１９８３年＞、　 へＬ１Ｌノロジー・し　−Ｂｉｏｔｅｅｈｏｌ　Ｌｅｔｔ、）、　５：　６１１ −６１４ページスライニバサンら（Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ　ｅｔ　ａｌ）（１９ ８４年）、庄Ｌ１元ノロジー・し　−Ｂｉｏｔｅｃｈｏ１．Ｌｅｔｔ、　、　６ ：　７１５−７１８ページバルタークら（Ｖａｒｔａｋ　ｅｔ　ａｌＨ１９８４ 年）、へ血土至ｌノロジー・レターＢｉｏｔｅｃｈｏ１．Ｌｅｔｔ、）、　６： 　４９３−４９４ページ）縄　（０７ｍ１） ２！ａＯｎｕ＋での＠光１ 活性　（Ｕ／ｍ１） ２８０ｎｏ＋での吸光度 国際調査報告

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）分子量が５０００を越え且つ９０００未満であり、且つ （ｂ）セルロースには明らかに酵素活性をもたずに、キシランには特異的に酵素 活性を有する、ことを特徴とする実質上純粋な糖タンパク質を含有してなるエン ドキシラナーゼ。
2. ２．本質的に均質に精製された、請求項１に記載のエンドキシラナーゼ。
3. ３．【配列があります】 Ｌｅｕ−（式中、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、 Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＶａｌはそれぞれ、アスパラギン、アス パラギン酸、グルタミン、グリシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン 、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンである）の２４ 個のアミノ酸配列によりさらに特徴づけられる、請求項１または２に記載のエン ドキシラナーゼ。
4. ４．（ａ）６０００±１０００の分子量；（ｂ）キシランをキシロオリゴサッカ ライド類に変換するための特異的な活性；および （ｃ）【配列があります】 Ｌｅｕ−（式中、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ．Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、 Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＶａｌはそれぞれ、アスパラギン、アス パラギン酸、グルタミン、グリシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン 、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンである）によっ て表されるアミノ酸配列を含有することにより特徴づけられる、糖タンパク質の 均質な調製を含有１してなるエンドキシラナーゼ。