JPH03502327A - ３’‐デアミノドキソルビシンのエステル体、そのリポソーム組成物およびその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３°−デアミノドキソルビシンのエステル体、そのリポソーム組成物およびその 使用方法 本発明はドキソルビシン誘導体、そのリポソーム製剤および腫瘍細胞成長阻害の ためのそれらの使用方法に関する。

ドキソルビシンは効果的な抗腫瘍剤として知られている。その誘導体のいくつか もまたそのような効果を持つことが知られている。

しかしながら、心臓毒性や骨髄毒性などの望ましくない副作用がそれらの使用を 制限している。ドキソルビシンをリポソームに封入することにより肝臓腫瘍に対 するその抗腫瘍活性が増加し、その心臓毒性が低下することが、数人の研究者に よりすでに報告されている。

しかしながら、ドキソルビシンは親水性が高いためにその封入化およびリポソー ム様ドキソルビシンの安定性が劣っており、その結果満足できるリポソーム様ド キソルビシン製剤を得るための既知の研究はすべて失敗している。

ドキソルビシンの抗腫瘍活性を持ちかつリポソーム封入化に対しもりと適した化 合物は臨床上大いに有用であり、このような化合物が以前より長期にわたって熱 望されている。

本発明は一般式： の化合物およびその薬学的に許容しうる塩を包含する。式中、Ｒは炭素数１〜２ ０のアシル基である。

本発明による化合物はリポソームに容易に封入され得る。得られるリポソームは 安定性が高く、これまで行った試験ではドキソルビシンそのものよりもインビボ で高い活性を示した。

本発明の化合物およびリポソーム製剤は腫瘍細胞成長阻害の方法に使用できる。

該方法はその化合物およびそのリポソーム製剤の有効量を、通常は薬学的に許容 しうる担体あるいは希釈剤と共にヒトに投与することを包含する。

本発明による化合物は以下の一般式を持つ。

Ｏ＾ 〔式中、Ｒは炭素数１〜２０のアシル基である〕上記化合物の薬学的に許容しう る塩もまた本発明に包含される。式中Ｒは脂肪族が望ましい。例えばｎが０〜１ ８である一Ｇｏ（ＣＨ，）ｎＣＨｓが好ましい。また、ラウロイル基、ミリスト イル基、ノくルミトイル基、ステアロイル基のような長鎖アシル基がとくに有用 である。多くの他のアシル基も同様に有用である。

以下に本発明による化合物である？−〇−（２，６−シデオキシーα−Ｌ−リキ ソ−ヘキソピラノシル）１４−Ｑ−ｐ＜ルミトイルアトリアミジノンの合成法を 例示する。基質７−０（２，６−シデオキシーα−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシ ル）アドリアミシノンをり。

ホートン、Ｗ、プリーダ、０．バレラのＪ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　　３７ （８）、８５３〜８５８、（１９８４）に記載の方法により５工程で調製した。

該論文に記載の合成法は、２つの前駆体、７−０−（３，４−シールシリルアト リアミジノンの−っから調製する場合は、中間体、ｌル）アドリアミシノンに基 づく。

１４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルアドリアミシノン（化合物Ａ） アドリｙミシノ：／（０，３５９，０，８５ミリモル）のＤＭＦ（２ｊＩａ）溶 液にイミダゾール（０，１５ｇ、２．２ミリモル）とｔｅｒｔ−ブチルクロロジ メチルシラン（０，１３ｇ、０．８６ミリモル）を加え、混合液を２５℃で撹拌 した。２時間後、上記と同量のイミダゾールとシリル化試薬を加えた。混合物を １時間室温で撹拌し、次いでＣＨ，ＣＬ（２００ｘ１２）テ希釈し、５％ＨＣＩ （５０ｘ１２）とＨｔＯ（５０ｍ＋２）で洗浄し、約０．５９の炭酸ナトリウム を含有した硫酸マグネシウムで乾燥した。

混合物を濾過し濾液を蒸留した。残渣に無水ＥｔＯＨを加えると結晶化した。収 １に０．２７ｇ。母液を蒸発させ、残渣をシリカゲル（３０ｇ）のカラムクロマ トグラフィーでトルエン−アセトンの９：ｌの混液で溶出して精製した。Ｒｆ： ０．５１（３：１．　　トルエン−アセトン）の物質を含有した分画を集め蒸留 した。そのエーテル溶液にヘキサンを加え、沈澱物として１４−シリル化アドリ アミシノン（０゜１９）を得た。総収量は０．３７９（８２，５％）、ｍｐ２０ ５℃。

１４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルー７−０−（３，４−ジー０−アセ チル−２，６−シデオキシーα−Ｌ−リキソ−へキソピラノンル）アドリアミン ノン（化合物Ｂ）この化合物を２つの異なる方法で調製した。

（ａ）化合物Ａ（５４１，２Ｍ９．１．０２ミリモル）、黄色酸化第二水銀（８ ０７巧）、臭化水銀（５５ｍｇ）および粉末分子ふるい４Ａ（２ｇ）のＣＨ＊Ｃ １ｔ（３０ｘｆり混合液を２５℃で０．５時間撹拌し、ついで４２６ｚｇ（２ミ リモル）の３．４−ジー０−アセチル−し−フカルのＣＨ，ＣＩ、溶液から調製 したその塩化物の溶液を加えた。混合物を２５８Ｃで一夜撹拌し、５０ｘＱのＣ Ｈ２Ｃｌ、で希釈し、セライトで濾過した。濾液を１０％ヨウ化カリウム水溶液 （３０ｘ□て２回、ついで過剰量のＨ２Ｏで２回洗浄した。有機層を硫酸マグネ シウムで乾燥し、濾過、ついで減圧蒸留して赤色油状物を得た。核油状物をアセ トン−エチルエーテル−ヘキサンで結晶化して目的物を収量６２７ｍｇ（８２， ５％）で得た。ｍｐ１３２　１３４℃。

７−０−（３，４−ジー０−アセチル−２，６−シデオキシーα−Ｌ−リキソ− へキソピラノシル）アドリアミシノン（化合物Ｃ）化合物ｃ（０，４４ｇ、０． ７ミリモル）を無水ＤＭＦ（２１ｆ２）に溶解した。該溶液にイミダゾール（０ ，１２９，１，フロミリモル）とｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（０， １３７９，０，９１ミリモル）を加え混合液を室温で２０時間撹拌した。ＴＬＣ でモニターするといくらかの出発原料が残っていることが判明したので、さらに シリル化試薬（０，０６ｇ、０．４ミリモル）を加えた。さらに２時間後、出発 京料は消失しｆコ。混合物を８２０（３０ＭＣ）Ｌ：注ぎＣＨ，ＣＩ、（１００ ｘＱ）’Ｔ：２回抽出した。抽出物を５％ＨＣ１（５０ｚ１２）、Ｈ＊　Ｏ（５ ０ｚ１２）および１０％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム で乾燥、ついで蒸留した。残渣をＣＨ，Ｃ１ｔ（２１１２）に溶解しヘキサンを 加えて再沈澱させて目的物を収量０．４４９（８４，６％）で得た。

１４−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−７−０−（２，６−シデオキシー α−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシル）アドリアミシノン（化合物Ｄ） 化合物Ｂ（０，４０９，０，５４ミリモル）をＭｅＯＨ（３０ｘ□に溶解し、ナ トリウムメトキシドの２５％ＭｅＯＨ溶液（０，３１３１１！、１．３５ミリモ ル）と共に２５℃で１時間撹拌した。混合液を、ドライアイスを加えて中性とし 、減圧蒸留して１５ｉＱにした。溶液をＣＨ。

ＣＩ、（２００ｘＩ２）で希釈し、Ｈ，Ｏ（５０酎）で２回抽出し、硫酸マグネ シウムで乾燥、ついで蒸留した。残渣を少量の熱ＭｅＯＨに溶解し冷却して固体 の沈澱物を収量０．３１９（８８％）で得た。該沈澱物は合成の次ぎの工程に十 分な程度に純粋であった。該固体を最少量のＣＨ，Ｃ１，に溶解しエーテルを加 えることによりさらに精製した。

Ｒｆ：０．２（１：Ｉ、　　トルエン−アセトン）、ｍｐ２２７８Ｃ７−０−（ ２，６−シブオキシ−し一リキソーへキソビラノシル）アドリアミンノン（化合 物Ｅ） 化合物Ｄ（０，２０ｇ、０．３ミリモル）をＣＨ２Ｇ１１（ｌ　０１ｌ）、オキ ソラン（２０ｆｆ１２）およびピリジン（Ｑ、２１ｆ２）の混合液に溶解し、１ Ｍフッ化テトラブチルアンモニウム（０，４５ｘＱ、　０．４５ミリモル）を加 えた。１時間後、混合液を４００ａ＋ＱのＣＨ，Ｃ１，で希釈し５０ＲＱ部の飽 和ＮａＣ１，５％ＨＣＩ、Ｈｔ　Ｏおよび１０％炭酸水素ナトリウムで抽出した 。抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し蒸留した。ＣＨ。

Ｃ１ｔの濃縮溶液から結晶化させ、化合物Ｅを収量８６１Ｎｇで得た。母液をエ ーテルで希釈してさらに５２ｍｇを得た。総酸率８３％、ｍｐ１７５℃。

７−０−（２，６−シデオキシーα−Ｌ−リキソ−へキソビラノシル）−１４− ０−パルミトイルアドリアミシノン（化合物ＷＲ−１）上で調製した７−０−（ ２，６−シデオキシーα−Ｌ−リキソ−へキソピラノシル）アドリアミシノン（ １０８，０１９，０，１９５ミリモル）を無水ピリジン（３ＩｌＩＱ）に溶解し ｆこ。塩化バルミトイル（９２ｍ９．０．３３５ミリモル）〔ファルツアンドバ ウエルインク（Ｐ　ｆａｌｔｚ　ａｎｄＢ　ａｕｅｒ　Ｉ　ｎｃ、）製〕を加え 、反応液を室温で撹拌しＴＬＣ（）ルエンーアセトン、ｌ：１）でモニターした 。ＴＬＣはシリカゲル６０Ｆ−２５４（Ｅ、メルク、グーモスタット、ＧＦＲ） で予め被覆したプラスチックノート（０，２２＋ｅｘ）とガラスプレート（０， ２５＋ｕ）で行った。プレートに２Ｍ硫酸をスプレーしついで加熱することによ り成分を検出した。

９０分後、さらに塩化バルミトイル（５５ｘｙ、０．２０　ミリモル）を追加し た。２時間後に反応液を水に注いで反応を終了せしめ、ついでジクロロメタンで 抽出した。有機層を１０％塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、ついで水で２回 順次洗浄した。溶液を硫酸ナトリウムで一夜乾燥した。濾過し５０℃で減圧蒸留 して赤い濃厚な油状物の形成を見た。

該油状物をシリカゲル６０（２３０〜４００メツシユ）（Ｅ、メルク、グーモス タット、ＧＦＲＸ２２ｇ）のカラムクロマトグラフィーにかけ、まずトルエン− アセトンの２＝１混合液（５０酎）、次いでｌ：１混合液で溶出して赤色固体の ７−０−（２，６−シデオキシーα−Ｌ−リキソ−へキソピラノシル）−１４− ０−パルミトイルアドリアミシノンを収量５９ｉｙ’（３２，４％）で得た。１ Ｈと１３ＣのＮＭＲスペクトルをＩＢＭ　ＮＲ／２００ＡＦスペクトロメーター を用いて各々２００ＭＨｚと５０ＭＨｚで記録した。

Ｉ３ＣＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌり２０６．４（Ｃ−１３）、１８６゜９． １８６．５（Ｃ−５，１２）、１７３．２（Ｃ＝Ｏ〜エステル）、１６１．０（ Ｃ−４）、１５６．２．１５５．７（（、−６，１１）、１３５゜６．１３５． ４．１３３．９．１３３．７（Ｃ−２，６ａ、　　１０ａ、　　１２ａ）、１２ ０．８（Ｃ−４ａ）、１１９．７（Ｃ−１）、１１８．４（Ｃ−３）、１１１． ５．１１１．０３、（Ｃ−５ａ、　　１１ａ）、１ｏ　１．１（ｃ−ｌ’）、７ ７．３（Ｃ＝Ｏ）、７１．０．６９．４．６７．１，６５．７（ｘ２）、＊（Ｃ −３’、４′、５°、７．１４）、５６　、６　（ＯＭｅ）、３５゜２．３３． ９．３３．７．３２．５．３１．９．２９．６（強度〉ｘ５）、２９゜４．２９ ．３．２９゜ｌ、２４．９．２４．７．２２．６（Ｃ−８，１０，２°、ＣＨ， バルミトイル鎖）、１６．７（Ｃ，−６’）、１４　、１　（ＣＨ３−バルミト イル鎖） ＊ＣＨとＣＨ２の重複した信号。再集束ＩＮＦＰＴ実験により確認済み。

上で調製した、ＷＲ−１と命名した化合物を、シミリストイルホスファチジルコ リン、シミリストイルホスファチジルグリセロールおよび該ＷＲ−１を重量比１ ０．５＋４．５：１でクロロホルム溶液で混合することにより、多層リポソーム に封入した。クロロホルムを回転蒸留し、脂質とＷＲ−１を含有したドライ脂質 フィルムを得た。

該ドライ脂質フィルムに通常生理食塩溶液（ｓ　ｎ／ｕ　ＷＲ−ｔ　）を加えて １分間手で振って多層リポソームを成型した。

リポソーム様ＷＲ−１はまた、ｔ−ブタノールに脂質とＷＲ−１を溶解し凍結乾 燥することにより凍結乾燥粉末状で得ることができる。該粉末を通常生理食塩溶 液に再分配し、１分間撹拌すると、リポソームが形成される。

リポソームの大きさをコールタ−カウンター（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｃｏｕｎｔｅｒ ）で測定した。小胞の大きさはｌから３μｍの間であった。脂質小胞中へのＷＲ −１の封入は、リポソーム様ＷＲ−１を遠心分離して得た上清とベレット中の薬 物含量を測定することにより評価した。薬物は２５０ｎｍでのＵＶ吸光度により 測定できた。封入効率は９９％以上であった。脂質小胞の安定性は４℃で１４日 間後の放出されたＷＲ−１量を測定することにより評価した。安定性は９９％以 上であった。

リポソーム様ＷＲ−１の抗腫瘍活性を１，１２１０白血病とＭ５０７６網状肉腫 の肝臓メタスターゼに対してインビポで調べた。ＢＤＰＩマウスを開始日に百万 個のＬ１２１０細胞で腹腔内接種した。

処置は第１日目に腹腔内注射の単投与により行った。至適投与量と信じられるリ ポソーム様ＷＲ　−　１　（６　０ｘ９／ｋｇ）で％Ｔ／Ｃ値（処理動物の平均 生存数／対照動物の生存数ＸＩＯＯ）は６００以上で、第６０日目に処置動物の ５０％以上が生存していた。対照動物の平均生存日数はｇ日間であった。Ｉｏｎ ／ｋｇの至適投与量でのドキソルビシンでは％Ｔ／Ｃ値は１８７で、第６０日目 まで生存していた動物はその６′分の１のみであった。

Ｃ５７ＢＬ／Ｇマウスを２ｘｌ　Ｏ’個のＭ　５　０　７　６細胞で開始日に腹 腔内接種した。処置を第４、８および１２日目に腹腔内投与で行った。２０Ｈ／ ｋｇのリポソーム様ＷＲ−１を第４、８および１２日目に投与することにより、 ％Ｔ／Ｃ値は１７５となり、一方至適投与量の８１ｉ９／ｋ９のドキソルビシン を第４、８および１２日目に投与した場合は％Ｔ／Ｃ値は１２８であった。

本発明によるリポソーム製剤はリン脂質、時にはコレステロールのような脂肪物 質、および上記のアンスラサイクリンを包含する。

本製剤は好ましくは１対１０から１対３０の間の割合で、さらに好ましくは１対 ｌ５の割合でアンスラサイクリンとリン脂質を包含する。

前記の実験例で列挙したリポソーム小胞の製剤に適したリン脂質の他にも、以下 の１つまたはそれ以上の物質もまた用いることができる。

ホスファチジルグリセロール ホスファチジルコリン スフィンゴミエリン ホスファチジル酸 ホスファチジルセリン 卵ホスファチジルコリン ジラウリ口イルホスファチジルコリン ジミリストイルホスファチジルコリン ジパルミトイルホスファチジルコリン ノステア口イルホスファチジルコリン １一ミリストイル−２−バルミトイルホスファチジルコリン１−パルミトイル− ２一ミリストイルホスファチジルコリン１−ハルミトイル−２−ステアロイルホ スファチジルコリンｌ−ステアロイルー２−パルミトイルホスファチジルコリン ジオレオイルホスファチジルコリン ジラウリ口イルホスファチジルグリセロールノミリストイルホスファチジルグリ セロールジパルミトイルホスファチジルグリセロールジステア口イルホスファチ ジルグリセロールジオレオイルホスファチジルグリセロールジミリストイルホス ファチジル酸 ジミリストイルホスファチジル酸 ジバルミトイルホスフ７チジル酸 ジミリストイルホスファチジルエタノールアミンジパルミトイルホスファチジル エタノールアミンジミリストイルホスファチジルセリン ジパルミトイルホスファチジルセリン 脳ホスファチジルセリン 脳スフィンゴミエリン ジパルミトイルスフィンゴミエリン ジステア口イルスフィンゴミエリン 現在のところ好ましいリポソーム製剤はノミリストイルホスファチジルグリセロ ールとジミリストイルホスファチジルコリンを好ましくは約１対１０から約ｌＯ 対１の割合で包含する。最も好ましい割合は現在のところ約３対７である。

本発明のリポソームは多層、単層あるいは不定層の構造を持つ。

本発明によるリポソーム封入化合物と薬学的に許容しうる担体あるいは希釈剤か ら成る薬学的組成物は癌のような病状の治療に用いることができる。

本発明のよる方法は上記の化合物あるいは組成物を宿主に投与することを特徴と する。投与方法は好ましくは非経口で、静脈内、動脈内、筋肉内、リンパ内、腹 腔内、皮下、胸膜腔内および髄腔的注射か望ましく、あるいは局所投与または経 口投与がのぞましい。該投与は好ましくは定期的に、例えば２週間の間１日２回 投与することが望ましい。治療は腫瘍が退縮あるいは消失するまで続け、外科手 術や異なる薬剤での化学療法のような他の腫瘍治療法と共に用いることができる 。

本特許出願に述べた実験例や開示は本発明を説明するためのものであり、本発明 の総ての可能な態様をあまねく示すものではない。

本分野の技術者であれば例示の実験例から容易に本発明の範囲内の他の態様を想 定できるものである。

国際調査報告 ＩｅｗＲａ＋ｎｅ＋＋＾・１．１＝ＡＩＩｅ、　　ＰＣＴ／ＵＳ　８９１００１ ９６国際調査報告　　　ＰＣＴ／ＵＳ　＋３９１００１９４

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは炭素数１〜２０のアシル基である〕の化合物およびその薬学的に許 容しうる塩。
2. ２．Ｒが脂肪族である請求項１の化合物。
3. ３．Ｒが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３（ｎは０〜１８）である請求項１の化合物。
4. ４．Ｒがパルミトイル基である請求項１の化合物。
5. ５．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは炭素数１〜２０のアシル基である〕の化合物あるいはその薬学的に 許容しうる塩から選ばれた化合物をリポソームに封入してなる組成物。
6. ６．Ｒが脂肪族である請求項５の組成物。
7. ７．Ｒが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３（ｎは０〜１８）である請求項５の組成物。
8. ８．Ｒがパルミトイル基である請求項５の組成物。
9. ９．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは炭素数１〜２０のアシル基である〕の化合物およびその薬学的に許 容しうる塩から選ばれた化合物の有効量を宿主に投与することを特徴とする、宿 主に於ける腫瘍細胞の成長を阻害する方法。
10. １０．Ｒが脂肪族である請求項９の方法。
11. １１．Ｒが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３（ｎは０〜１８）である請求項９の方法。
12. １２．Ｒがパルミトイル基である請求項９の方法。
13. １３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは炭素数１〜２０のアシル基である〕の化合物およびその薬学的に許 容しうる塩から選ばれた化合物を含有する組成物の有効量を宿主に投与すること を特徴とし、さらに該化合物がリポソームに封入されていることを特徴とする、 宿主に於ける腫瘍細胞の成長を阻害する方法。
14. １４．Ｒが脂肪族である請求項１３の方法。
15. １５．Ｒが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３（ｎは０〜１８）である請求項１３の方法 。
16. １６．Ｒがパルミトイル基である請求項１３の方法。