JPH0358784A - 新規なシクロマルトデキストリナーゼ及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規酵素シクロマルトデキストリナーゼ、及
びその製造方法並びにそれを生産する新規バチルス属細
菌に関する。

〔従来の技術〕

環状マルトオリゴ糖であるアルファシクロデキストリン
、ベータンク口デキストリン、ガンマシクロデキストリ
ンを開環し、直鎖状マルトオリコ糖を生成ずる機能は、
細菌バチルスポリミクザ、ン，−ドモナスＭＳ■、かび
アスペルギルスオリザエなどが生産するアミラーゼ、ま
たは細菌バヂルスセレウス、バチルスマセランスナトカ
生産スるシクロデキストリングリコシルトランスフェラ
ーゼ（ＣＧＴａｓｅ）に存在することが知られている。

一方、シクロマルトデキストリナーゼは、高分子グルコ
ースポリマーである、デンプン、アミロース、アミ口ペ
クチン、デキストリンなどに全く作用せず、従って上記
のアミラーゼとは異なる酵素である。また、デンプン、
アミロース、アミロペクチンから環状マルトオリコ糖（
アルファンクロデキスｌ・リン、ベータンク口デキスト
リンなど）を生成しないので、既知のシクロデキスｌ−
　’Ｊンクルコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ
）とも異なる酵素である。

シクロマルトデキストリナーゼは６ないし８個のグルコ
ースが連結した環状構造をもつアルファシクロデキスト
リン（グルコース６個から或る）、ベータシクロデキス
トリン（同じく７個から或る）ガンマシクロデキス１・
リン（同じく８個から或る）に特異的に作用し、そのア
ルファ−Ｌ　　４一結合部を加水分解し、その構造を開
環することにより、６ないし８個のグルコースが直鎖状
に連結したマルトオリゴ糖、即ち、マルトヘキサオース
（グルコース６個が直鎖状に連結）、マルｌ・ヘプタオ
ース（同７個が連結）、及び、マルトオクタオース（同
８個が連結）に変換する機能を有する。更に当該酵素の
作用範囲は、生成したこれら三種の直鎖マルトオリゴ糖
にも及び、その結果直鎮マルトオリゴ糖は低分子のクル
コース２個ないし８個から或る直鎖状マルトオリコ糖及
びグルコースを生成するにいたる。

シクロマルトデキストリナーセは、微生物、動植物界に
おける分布が限られているため、その研究や応用開発の
例は極めて少ない。現在までのところハチルスコアギュ
ランスが生産する酵素が知られているにすぎないＣＳ，
　Ｋｉｔａｈａｔａ，　ｅｔ，　ａ！八ｇｒｉｃ，　　
Ｂｉｏｌ，　　Ｃｈｅｍ．，４７（７），１４４１−１
４４７、（１９８３）　　：］　　。

〔発明が解決しようとする課題〕

したがって、本発明の目的は新規なシクロマルトデキス
トリナーゼ及びその製造方法並びにそれを生産する微生
物を提供することである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、新規なシクロマルトデキストリナーゼを
生産する微生物を、広く自然界より探索し、土壌より分
離したバチルス属に属するハチルスＮｏ．　１．　９　
９菌株が新規なシクロマルトデキストリナーゼを生産す
ることを見い出し、本発明を完或するに至った。

即ち、本発明は、ンク口マルトデキストリナゼを生産す
るハチルス属に属する新菌株Ｎｏ．　１　９　９株、こ
の菌株をアルカリ性培地で培養することによリ新規なシ
クロマルトデヰストリナーゼを生産する方法並びにかく
して得られる新規酵素を提供するものである。

次に本発明のハチルス属Ｎｏ．　１　９　９菌株の菌学
的性質、その培養法及び本発明のシクロマルトデキス｝
　ＩＪナーゼの理化学的性質について詳細に説明する。

（微生物） 本発明のシクロマルトデキストリナーゼを生産する微生
物はハチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属ずるンクロマ
ルトデキストリナーセの生産能を有する菌種であり、そ
の一例として、ハチルスｓｐ，　　Ｎｏ．　１　９　９
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐ，　Ｎｏ．　１１９）菌（以
下”Ｎｏ．　１　９　９株″という）を挙げることがで
きる。本発明には、Ｎｏ１９９株の自然的及び人工的変
異株は勿論、ハチルス属に属する菌種で後述のシクロマ
ルトデキストリナーゼの生産能を有する微生物はすべて
使用することができる。

上記Ｎｏ．　１　９　９株は、山梨県甲府市で採取され
た土壌中より分離された土壌細菌であり、工業技術院微
生物工業技術研究所に平或元年７月２１日付寄託され、
その微生物受託番号は、微工研菌寄第１０８８４号（Ｆ
ＥＲＭ　　Ｐ’−１０８８４）である。

Ｎｏ．　１　９　９株は、次の菌学的性質を有する。

〔菌学的性質〕

培地は全て１％炭酸ナトリウムを加え、ｐ）１１０に調
整したものを用いた。

（１）形　態 大きさが（０．２　〜０．５）　ｘ　（１．５　〜５）
　ｐｍの桿菌である。胞子を形成し、胞子の大きさはく
０．５〜１）Ｘ　（１〜１．５）μｍであり、卵形で胞
子のうはふくらんでいる。運動性があり、べん毛を有す
る。ダラム染色は陽性であり、抗酸性は陰性である。

（２）生育状態 ■肉汁寒天平板培養 生育は良好で、円形、偏平状で周縁は金縁、不透明であ
り、光沢を有し、薄い黄褐色を呈する。

■肉汁寒天斜面培養 糸状または拡帯状に生育し、肉汁寒天平板培養と同様の
形状を呈し、培地中に色素を分泌しない。

■肉汁液体培養 生育良好で、わずかに沈査が認められ、表面に菌膜を形
或する。

■肉汁ゼラチン培養 生育良好で、ゼラチンを加水分解する。

■リトマスミルク アルカリ培地のため、色の変化は明らかでない。

（３）生理学的性質 ■硝酸塩の還元　　　：陽　性 ■脱窒反応　　　　　；陰　性 ■ＭＲテスト　　　　：培地がアルカリ性のためメチル
レッドの変色 は認められない ■ＶＲテスト　　　　ご陰　性 ■インドールの生成　；陰　性 ■硫化水素の生成　　：陰　性 ■デンプンの加水分解：陽　性 ■クエン酸の利用　　：利用しない （コーザー及びクリステンセンの培地）■無機窒素源の
利用　：利用しない 〈硝酸塩及びアンモニウム塩〉 ［相］色素の生成　　　　：陰　性 ■ウレアーゼ　　　　：陰　性 ■オキシダーゼ　　　：陽　性 ■カタラーゼ　　　　：陽　性 ■生育範囲　　　　　：ｐ８７〜１ｌ 温度　２０〜４５℃ ：好気性 ：発　酵くグルコース） ：Ｌ−アラビノース、Ｄ キシロース、Ｄ−グ ルコース、Ｄ−マンノ ース、Ｄ−フラクト− ■酸素に対する態度 ［相］ＯＦテスト Ｏ糖類からの酸及び ガスの生成の有無 Ｑ ス、マルトース、シュ ークロース、ラクトー ス、トレハロース、Ｄ マンニトール、デン プンを利用し、酸を生 或するが、ガスの生成 はない。

Ｄ−ガラクトース、Ｄ ソルビトール、イノ シトール、グリセリン は利用しない。

（４）その他の性質 ■塩化ナトリウム耐性：１０％塩化ナトリウムで生育 ■ＤＮＡのＧＣ含量　：３５．８モル％以上の菌学的性
質を、バージ一〇マニュアル・オブ・システマティック
・バクテリオロジー第２９（１９８６）の分類方法に従
って、バチルス属の公知の菌種と比較した。

１ ０ その結果、本発明の菌株は、バチルスサーキュランスと
類似しているが、オキシダーゼが陽性の点、アルカリ性
下での生育の点、１０％ＮａＣ　Ｒ存在下での生育の点
において、明らかに相違している。

よって本菌株は公知の菌株とは区別されるため、パチル
ス属に属する新菌株と判断し、ハチルス属Ｎｏ．　１　
９　９と命名した。

（培養法及び精製法） 本発明のシクロマルトデヰストリナーゼを得るに当って
は、バチルス属に属する上記酵素生産菌を、アルカリ性
培地を用いるほかは、酵素を生産する通常の方法で培養
すればよい。培養の形態は、液体培養でも固体培養でも
よく、工業的に有利に培養するためには、前記生産菌の
胞子懸濁液又は培養液を培地に接種し、振とう培養、あ
るいは通気撹拌培養を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはなく、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源その他を培地
中に含有させることができる。炭１ １ 素源としては、澱粉、酵母エキス、デキストＩＪン、グ
リセリン、グルコース、シュークロース、ガラクトース
、イノシトール、マンニトールなどが、また窒素源とし
ては、ペプトン、犬豆粉、肉エキス、米ぬか、麩、尿素
、コーンスティープリカーその他の有機の窒素化合物が
用いられる。その他、無機塩類、たとえば食塩、燐酸塩
類、硫酸塩類、カリウム、カルンウム、マクネンウム、
亜鉛、マンガン、鉄等の金属塩類等を適宜に添加しても
よく、必要に応じて消泡剤として、動、植、鉱物油等を
添加してもよい。培養温度、培養時間等の培養条件は使
用菌の発育に適し、しかも本酵素の生産が最高となるよ
うな条件が選ばれろ。たとえば、培地のｐＨはアルカリ
側、好ましくは８以上、更に好ましくは９〜１１、最も
好ましくは１０がよく、温度は、３０〜４５℃、好まし
くは３７〜４０℃がよい。しかし、これらの培養絹或物
、培地の水素イオン濃度、培養温度、撹拌条件などの培
養条件は使用する菌株の種類や、外部の条件などに応じ
て好ましい結果が得られるように適宜調節され１ ２ るべきであることはいうまでもない。このようにして得
られる培養物から、本酵素を得るには、代謝産物を採取
するのに通常用いられる手段を適宜に利用して採取し得
る。たとえば、本酵素と不純物との溶解度差を利用する
手段、イオン結合力の差を利用する手段、吸着親和力の
差を利用する手段、分子量の差を利用する手段のいずれ
も、それぞれ単独、又は、適宜組合せて、あるいは反復
して使用される。具体的には、本酵素は、細胞中にその
大部分が存在するので、その培養液を濾過あるいは遠心
分離して、集めた細胞を超音波、超高圧、ホモゲナイザ
ー等により破砕し、得られた細胞抽出液を各種のイオン
交換クロマトグラフィーゲル濾過クロマトグラフィー、
吸着クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、セ
ルロース分配クロマトグラフィー等を組合せて精製すれ
ばよい。

かくして得られる本発明の新規なシクロマルトデキスト
リナーゼは以下の理化学的性質を有する。

１３ 〔理化学的性質〕 （１）作用及び基質特異性 環状マルトオリコ糖のアルファ−１　４−グルコシド結
合を切断し、直鎖状マルトオリゴ糖類を生成する。本酵
素はさらに生成した直鎖状マルトオリコ糖類のアルファ
−１．４−クルコシド結合を切断し、低次の直鎖状マル
トオリコ糖類及びグルコースを生成ずる。

第１表に、環状マルトオリゴ糖であるアルファシクロデ
キストリン、ベータシクロデキス｝・リン、ガンマシク
ロデキストリンを基質としたときの酵素反応後の各マル
トオリゴ糖の比率の例を示した。

第１表より、アルファシクロデキストリンよりマルトヘ
ヰサオースを含む直鎖状マルトオリゴ糖が生威し、ベー
タシクロデキストリンよりマルトヘブクオースを含む直
鎖状マルトオリゴ糖が生威し、ガンマシクロデキストリ
ンよりマルトオクタオースを含む直鎖状マルトオリゴ糖
が生成することが明らかである。

１４ 即ち、本酵素は、基質である環状マルトオリゴ糖のグル
コース基の数に依ることなく、アルファ−１．４−グル
コシド結合の１ケ所が切断された直鎖状マルトオリゴ糖
を含む直鎖状オリゴ糖類を生成することを特徴とする。

１ ５ 基質濃度二０．２％（Ｗ／Ｖ） 反応緩衝液：１００ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ６反応温度
＝４０℃ 酸　　素　　量二基質１ｍｅに対し、１．８単位マルト
オリコ糖分析法：高速液体クロマトグラＧ１：グルコー
ス Ｇ２：マルトース Ｇ３：マルトトリオース Ｇ４：マルトテトラオース Ｇ５：マル１・ペンタオース Ｇ６：マルトヘキザオース Ｇ７：マル１・ヘプタオース Ｇ８：マルトオクタオース １６ ＡＱＡ フイ （２）至適ｐ｝ｌ及び安定ｐＨ範囲 下記の活性測定法に基き、基質のｐＨに対する影響を調
べた。第２表に、活性の最大値を１００％として各ｐＨ
での相対活性を示した。これより至適ｐＨはｐＨは５５
〜６．５であることがわかる。

第２表 １ ７ （註）基質に用いた緩衝液 ｐＨ４．５　〜５．５　　：　１　０　０ｍＭ酢酸緩衝
液ｐＨ６．　０　〜８．　０　　：　１　０　０ｍＭり
ん酸緩衝液ｐＨ８．５　〜１０．０　：　１　０　０ｍ
Ｍグリシンー水酸化ナトリウム緩衝液 ｐＨの安定性については第３表に示した。これは、種々
のｐＨの緩衝液を酵素液に加えて、４０℃に３０分間加
熱したのち、残存している活性を測定したもので、各ｐ
Ｈの未加熱の酵素活性を１００％として相対活性で表し
たものである。

第３表より、安定ｐＨ範囲はおよそｐｔｌ６〜１０と、
アルカリ側で比較的安定であることがわかる。

１８ 第３表 く註）緩衝液 ｐＨ４〜５：５ １１８６〜８：５ ｐｔｌ９〜１１；５ ナ ＯｍＭ酢酸緩衝液 ＯｍＭりんＭ緩衝液 ＱｍＭグリシンー水酸化 トリウム緩衝液 （３）作用適温の範囲 下記の活性測定法に準じて、各温度における酵素反応を
行なった。第４表に、その結果を示したが、ここでは４
０℃における活性を１００１ ９ ％とし、相対活性で表した。

第４表より明らかなごとく、本酵素の作用適温は４０〜
５０℃である。

第４表 （４）温度安定性 ｐＨ６で１０分間、各温度にて熱処理後、残存活性を調
べた。未処理の酵素活性を１００％とし、その残存活性
を第５表に示した。

第５表に示すごとく、本酵素は３０〜５０℃で安定であ
る。

２０ 第５表 （５）失活の条件 第２表に示すごと＜、ｐＨ４で４０℃にて３０分間熱処
理すると、本酵素は、ほとんど失活する。

（６）等電点 本酵素は、ｐＨ５付近に等電点をもつ。

（７）分子量 トヨバールＨＷ５５Ｆを用いたゲル濾過で分子量を求め
たところ、約１２０，０００であった。

ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動により得られた分
子量は約６８．　０　０　０であった。

２ １ （８）精製 本酵素は、培養終了後、遠心分離により菌体を集め、そ
の後、当分野公知の分離精製手段、例えばイオン交換体
ゲル濾過剤等を用いて精製することができる。

本酵素の精製法については、後記実施例で具体的に説明
する。

〔活性測定法〕

反応基質には、環状マルトオリゴ糖の内、ベタシクロデ
キストリンを用いる。

０２％（Ｗ／Ｖ）のベータシク口デキストリンを含む、
１００ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ６．　０　）　　１　ｄ
ニ、０．　１　ｄの酵素溶液を加え、混合し、４０℃で
３０分間反応させる。

反応後、予め１００ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ　６．　０
　）を０．　８　９　ｍｌ入れておいた試験管に、反応
液を０．１１−加え全量を１−とじ、すみやかに、３０
ｍＭ水酸化ナトリウム溶液を３．５ｍｌ加える。次いて
、００２％（Ｗ／Ｖ）フェノールフタレインヲ含ム５ｍ
Ｍの炭酸ナトリウム溶液を０．５証加える。室温２２ にて、正確に３０分間放置後、５５０ｎｍでの吸光度を
測定する。

数種の既知量のベータシクロデキス｝　ＩＪンを含む１
００ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ　６．　０　）にツイて、
酵素溶液を蒸留水に代えて、同様の操作を行い、検量線
を作戊する。

検量線を用いて、反応後のベータンクロデキストリン残
存量を求め、分解したベータシクロデキストリン量を算
出する。

１単位の酵素とは、上記反応条件下より算出された値を
基に換算した数値で定義した。

即ち、６０分間でベータシクロデキストリンを１マイク
ロモル分解する酵素量を１単位とした。

〔発明の作用と効果〕

前述した様に、本発明の新規なンクロマルトデキストリ
ナーゼ及びそれを生産するバチルス属Ｎｏ１９９株の発
見によって、これまで一種類しか知られていなかったシ
クロマルトデキス｝　ＩＪナーゼの研究、応用に関して
、新しい場を提供することができる。

２３ ンクロテ゛ヰストリンの中でも、特にグルコース６個か
ら或るアルファシクロデキストリン、及びグルコース７
個から或るベータシクロデキストリンはデンプン原料か
ら容易に製造することができ、現在、我国では大量に低
価で生産されている。これらアルファシクロデキストリ
ン及びベータシクロデキストリンを原料に直鎖状マルト
オリゴ糖を生産できれば、グルコースが１から７個の一
定範囲の鎮長をもつ直鎖状マルトオリゴ糖の生産は、従
来のデンプンを原料とする場合に比べて格段に簡略化、
迅速化できることになる。何故ならば、デンプンを原料
とする場合は分枝状デキス｝ＩＪンが生成するので分枝
構造を切断するため更にそのための酵素（例えばプルラ
ナーゼなど）の使用が避けられない。あるいは最終生成
物に未分解のデンプンや分枝状デキストリンが残存し不
純物を含むことになる。

安価大量に供給されるシクロデキス｝　ＩＪンを原料に
、本発明による酵素を作用させることにより、直鎖状マ
ルトオリゴ糖のみを含む純度の高い生産２４ 物を一段階の反応にまり生成することが可能となる。即
ち、食品工業に於で砂糖に代る甘味剤として広く使われ
ているマルトオリゴ糖の生産に新たな生産方法を提供す
ることになる。

従来、直鎖状マルトオリコ糖の生成を目的として本酵素
を使用した例は知られていない。また、本酵素がアルカ
リ培地で生育するバチルス菌によって生産されることを
見出した例は知られていない。

〔実施例〕

実施例１ 可溶性デンプン２．５ｇ，ポリペプトン１．２５ｇ，酵
母エキス１．２５ｇ，りん酸一水素カリウム０．２５ｇ
、硫酸マグネシウム（７水塩）０．０５ｇに２２５一の
水を加え、１２０℃で１５分間殺菌し、３０〇一容の三
角フラスコ５本に４５−ずつ分注する。

炭酸ナトリウム０．　１　ｇ、０．２　５　ｇ，　０．
５　ｇ，０．７５ｇ，１ｇをそれぞれ水５ｍｉ！に溶か
し、１２０℃で１５分間殺菌し、先の５本の三角フラス
コにそれぞれ加える。これで、炭酸ナ｝　＋Ｊウムを０
．２２５ ％、０５％、１％、１．５％、２％ずつ含む培地となる
。このときのｐＨはそれぞれ、ｐＨ８．　６　、ｐＨ９
．　８、ｐＨ　１　０．　３　、ｐＨ　１　０．　６　
、ｐＨ　１　０．　８であった。

これらの培地に、予め１８〜２０時間前培養したＮｏ．
　１　９　９菌を接種し、３７℃において２４時間振と
う培養を行った。

遠心分離によって菌体を集め、蒸留水で洗浄後、それぞ
れ２５−の５０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ７．　５＞に懸
濁した。懸濁液を超音波破砕し、遠心分離により、上清
を採取し、無細胞抽出液を得た。

これらの粗酵素液について活性を測定したところ、炭酸
ナトリウム含有率０．２％、０．５％、１％、１．５％
、２％の培養条件で、それぞれ０．５Ｕ／ｄ、２．ＩＵ
／一、１　０．　Ｏ　Ｕ／一、１　ｇ．　Ｏ　Ｕ／ｄ、
５，６Ｕ／ａｌｌ！の活性値を得た。

実施例２ 可溶性デンプン１０ｇ，ポリペプトン５ｇ１酵母エキス
５ｇ１りん酸一水素カリウム１ｇ、硫酸マグネシウム（
７水塩）０．２ｇに水９００−を加え、１２０℃で１５
分間殺菌する。炭酸ナトリウ２６ ム１５ｇを水１００−に溶かし、１２０℃で１５分間殺
菌し、加える。３００一容三角フラスコに１００−ずつ
分注し、予め１８〜２０時間前培養したＮｏ．　１　９
　９菌を１−ずつ接種し、３７℃において２４時間振と
う培養を行った。

遠心分離により菌体を集め、蒸留水で洗浄後、５００一
の５０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ　７．　５　）に懸濁し
た。懸濁液を超音波破砕し、遠心分離により上浦を採取
し、１　５．　７　Ｕ／ｍｆ！．タンパクの比活性をも
つ無細胞抽出液を得た。

この粗酵素液に核酸除去剤Ｃ−９　（栗田工業製）の５
％溶液を５一加え、冷蔵庫内で一夜放置し、沈殿物を遠
心分離により除いた。

硫酸アンモニウムによる塩析分画を４０〜７０％飽和の
条件で行った。これを５０ｍＭりん酸緩衝液（ｐＨ　７
．　５　）で透析後、同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ　
｝ヨバール６５０Ｍ（東ソー製）に通すと、酵素は吸着
され、これを０から０．５Ｍ濃度までの塩化ナトリウム
を含む同緩衝液でグラジエント溶出を行った。活性のあ
る両分を０．１Ｍの塩化２７ ナトリウムを含む５０ｍ），（りん酸緩衝液（ｐＨ　７
．　５　）で透析後、同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ｝
ヨパール６５０Ｍに通した。これを０．　１から０．５
Ｍまでの塩化ナトリウムを含む同緩衝液でグラジェント
溶出を行った。活性画分を透析により塩化ナトリウムを
除いた後、濃縮後、０．１ＭＮａＣ［を含む５ＱｍＭり
ん酸緩衝液（ｐＨ７．５）で平衡化したトヨパールＨＷ
５５Ｆ（東ソー製）を用いゲル濾過を行った。活性画分
を５０ｍＭりん酸緩衝液（ｐｆｌ６．　２＞で透析後、
同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ｝ヨパール６５０Ｍに通
した。コレニ、０から０．３Ｍａ度迄の塩化ナトリウム
を含む同緩衝液でグラジェント溶出を行った。活性画分
を集め、ポリアクリルアミド電気泳動を行ったところ、
単一のバンドが検出された。比活性は８６０Ｕ／ｍｇタ
ンパクであった。

２８

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有するシクロマルトデキス
   トリナーゼ。 （イ）作用及び基質特異性 環状マルトオリゴ糖のアルファ−１，４− グルコシド結合を切断し、直鎖状マルトオリゴ糖類を生
   成する。 （ロ）至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 至適ｐＨは５．５〜６．５である。 安定ｐＨ範囲は約ｐＨ６〜１０である。 （ハ）作用適温の範囲 作用適温は４０〜５０℃である。 （ニ）温度安定性 ｐＨ６において、３０〜５０℃で安定である。 （ホ）失活の条件 ｐＨ４で４０℃にて３０分間熱処理すると、失活する。 （ヘ）等電点 等電点は５付近である。 （ト）分子量 トヨパールＨＷ５５Ｆを用いたゲル濾過に よる分子量は約１２０，０００であり、ＳＤＳ−ポリア
   クリルアミド電気泳動による分子量は約６８，０００で
   ある。
2. （２）バチルス属に属するシクロマルトデキストリナー
   ゼ生産菌を培養し、培養物からシクロマルトデキストリ
   ナーゼを採取することを特徴とする請求項（１）記載の
   シクロマルトデキストリナーゼの製造方法。
3. （３）シクロマルトデキストリナーゼ生産菌がバチルス
   ｓｐ．Ｎｏ．１９９（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．Ｎｏ．１
   ９９）である請求項（２）記載の方法。
4. （４）バチルスｓｐ．Ｎｏ．１９９（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
   ｓｐ．Ｎｏ．１９９）。