JPH036160B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、グアニジノ基を保護することによる
ペプチドの製造法に関する。

【式】を含有する原 料化合物（例えばアルギニンなどを）を用いてペ
プチドを製造するためには、グアニジノ基を保護
しておく必要がある。グアニジノ基の保護は、従
来、ニトロ基またはトシル基を導入することによ
り行なわれてきた。 これらの従来法においては、保護基を脱離する
際の収率が低く、また、トシル基を脱離させるに
は、液体アンモニア−金属ナトリウムあるいは無
水弗化水素などを用いて強い条件で行なわなけれ
ばならないのでペプチドの他の部分が分解し副生
物が生じ、目的とするペプチドの収率の低下をき
たす等の欠点があつた。 本発明者らは、これら欠点を解消する方法とし
て先にグアニジノ基の保護基として、メタンスル
フオン酸で容易に除去できるｐ−メトキシベンゼ
ンスルフオニル、メジチレンスルフオニル基等を
利用する方法（特開昭51−100030）を紹介し、実
用に供した。その後も、本発明者らはグアニジノ
基の保護について研究をつづけたところ、グアニ
ジノ基の保護基として、４−メトキシ−２，６−
ジメチルベンゼンスルフオニル基を用いると、ペ
プチド縮合後、緩和な酸処理によつても該保護基
を脱離できることを見い出し、さらに研究をした
結果本発明を完成した。 すなわち本発明は、グアニジノ基を有するペプ
チドの製造にあたり、グアニジノ基含有原料化合
物（例：アルギニン）のグアニジノ基を４−メト
キシ−２，６−ジメチルベンゼンスルフオニル基
で保護して、ペプチド合成した後保護基を酸で脱
離せしめることを特徴とするペプチドの製造法で
ある。 本発明においては、次の一般式（） （式中ＲはＨまたは−アミノ基の保護基を表わ
す）で示されるアルギニン誘導体およびその塩が
有利に用いられる。 本発明において、グアニジノ基含有化合物のグ
アニジノ基に４−メトキシ−２，６−ジメチルベ
ンゼンスルフオニル基を導入するに際しては、グ
アニジノ基含有化合物のα−アミノ基を保護した
反応に供せられる。このα−アミノ基の保護基
は、従来から公知の保護基、例えば一般式（）
におけるＲで示される保護基としてカルボベンゾ
キシ基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル
基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、
ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−アミロキシカル
ボニル基、９−フルオレニルメトキシカルボニル
基、イソニコチニルオキシカルボニル基、ｏ−ニ
トロフエニルスルフエニル基、２−（ｐ−ビフエ
ニル）−イソプロピルオキシカルボニル基を常法
により導入したものがあげられ、特にアルギニン
をカルボベンゾキシ基、ｔ−ブトキシカルボニル
基で保護したものが有利に用いられる。 次に、α−アミノ基が保護されたグアニジノ基
含有化合物のグアニジノ基に４−メトキシ−２，
６−ジメチルベンゼンスルフオニル基を反応させ
る。この反応はグアニジノ基含有化合物に４−メ
トキシ−２，６−ジメチルベンゼンスルフオン酸
基をグアニジノ基含有化合物１当量に対し約１〜
５当量、さらに好ましくは約１〜２当量になるよ
うに反応させるのがよい。 ４−メトキシ−２，６−ジメチルベンゼンスル
フオン酸基は、通常そのハロゲニド形で反応に供
せられる。ハロゲニドとしては、クロリド、フル
オリド、プロミド、ヨージドのいずれも使用でき
る。通常、反応は塩基の存在下に行うのが好まし
い。塩基としては、たとえば水酸化ナトリウム水
酸化カリウム、水酸化リチウムなどが挙げられ、
グアニジノ基含有化合物１当量に対し約１〜10当
量、さらに好ましくは約１〜５当量用いられる。
該反応は、通常適当な溶媒たとえば、水，アセト
ン，ジオキサン，ジメチルホルムアミド，テトラ
ヒドロフラン，あるいはそれらの混合溶媒中など
で行うのがよい。該反応は、−10℃乃至25℃、好
ましくは−５℃乃至10℃で行なわれる。 このようにして得られる４−メトキシ−２，６
−ジメチルベンゼンスルフオニル基で保護された
グアニジノ基を有する化合物は、遊離のままある
いは常法に従つてシクロヘキシルアミン、ジシク
ロヘキシルアミン、ナトリウムなどの塩としてペ
プチド縮合に供せられる。 本発明において、グアニジノ基を４−メトキシ
−２，６−ジメチルベンゼンスルフオニル基で保
護されたグアニジノ基を有する化合物とは、前記
の一般式（）で示されるアルギニン誘導体およ
びその塩である。 このようにして得られる４−メトキシ−２，６
−ジメチルベンゼンスルフオニル基で保護された
グアニジノ基を有する化合物は常套手段によりペ
プチド縮合反応させる。この常套手段としては、
例えばM.Bodansky 及びM.A.Ondetti著，ペプ
チド・シンセシス（Peptide Synthesis），Inter
science，New York，1966年；F.M.Finn及びK.
Hofmann著ザ・プロテインズ（The Proteins），
第２巻，H.Nenrath，R.Hill編集，Academic
Press Inc，New York，1976年；泉屋信夫他著
“ペプチド合成”丸善(株)1975年などに記載された
方法、たとえばアジド法，クロライド法，酸無水
物法，混酸無水物法，DCC法，活性エステル法，
ウツドワード試薬Ｋを用いる方法，カルボジイミ
ダゾール法，酸化還元法，DCC／HONB法など
が挙げられる。 次に、ペプチド縮合後、本発明の保護基を酸に
よつて脱離させる。この脱離方法としては、無水
弗化水素法、メタンスルフオン酸法、トリフルオ
ロメタンスルフオン酸法等の公知の酸処理方法が
適用できる。さらに、本発明方法の場合には、新
しい酸処理方法としてトリフルオロ酢酸が有利に
使用でき、特にチオアニソールまたはアニソール
の存在下でトリフルオロ酢酸を用いると脱離反応
が非常に有利に進行する。 上記のトリフルオロ酢酸およびチオアニソー
ル，アニソールは溶媒をかね保護基を脱離しうる
に十分な量を用いればよい。たとえば、保護され
たグアニジノ基を有する化合物１当量に対し１〜
10⁵当量，さらに好ましくは１〜10³当量用いら
れ、脱離反応は、酢酸、クロロホルム、メチレン
クロリドなどの溶媒中で行つてもよく、また温度
は−10℃乃至300℃程度、さらに好ましくは10゜乃
至100℃程度で行なわれる。 本発明方法は、グアニジノ基を有するいかなる
ペプチドの製造にも適用できる。具体的な例とし
ては、以下の実施例にも示すとおり、Dea−
Gly¹⁰−〔Ｄ−Leu⁶〕−LH−RH−ethylamide（特
公昭53−14072参照）、Des−Gly¹⁰−LH−RH−
ethylamide（特公昭53−24423参照），Tuftsin
〔Nature，228，672（1970）参照〕，Substance
Ｐ，Kyotorphinなどの生理活性ペプチドを有利
に製造できる。その他のペプチドとして、MSH，
ACTH，Glucagon−Secretin Bradykinin，
Dynorphin，ａ−Neoendorphinおよびそれらの
活性断片なども有利に製造できる。 本発明方法において用いる４−メトキシ−２，
６−ジメチルスルフオニル基は、従来行なわれて
いた酸処理によるグアニジノ保護基の脱離方法は
もちろんのこと、さらに緩和な条件下でも容易に
脱離される。例えば、トリフルオロ酢酸のような
緩和な酸処理は、従来知られたグアニジノ保護基
の脱離には適用することができないが、４−メト
キシ−２，６−ジメチルスルフオニル基で保護し
た場合はよく脱離が進行し充分に適用できる。と
ころで、従来の方法により、ｐ−メトキシベンゼ
ンスルフオニル基、メジチレンスルフオニル基で
グアニジノ基を保護しペプチド縮合後、メタンス
ルフオン酸を用いて保護基を脱離する場合、その
ペプチド中に、アスパラギンやアスパラギン酸残
基を含有する場合には、サクシンイミド型の副反
応が生ずることがあり、またセリンやスレオニン
残基が存在するとＮ→Ｏアシル転位が起る。本発
明方法の場合、これらのアミノ酸残基を含むペプ
チドであつてもトリフルオロ酢酸のような緩和な
酸を用いることにより上記のような副反応が起こ
ることなく脱離することができる。 次に、本発明を実施例および試験例を挙げてさ
らに詳しく説明する。それぞれの実施例の合成工
程は末尾の表にまとめて記載した。なお、本明細
書においては４−メトキシ−２，６−ジメチルベ
ンゼンスルフオニル基をMDSと略記することが
あり、またアミノ酸、ペプチド、保護基、活性基
等に関し、IUPAC−IUB commission on
Biological、Nomenclatureに基づく略号あるい
は当該分野における慣用略号で表示する場合があ
る。それらを例示する。 pGlu：ピログルタミン酸；His：ヒスチジン；
Trp：トリプトフアン；Ser：セリン；Tyr：チ
ロシン；Leu：ロイシン；Gly：グリシン；
Arg：アルギニン；Pro：プロリン；Lys：リジ
ン；Gln：グルタミン；Phe：フエニルアラニ
ン；Met：メチオニン；Thr：スレオニン（以上
特に表示のない場合はアミノ酸はＬ体をさすもの
とし、Ｄ体はその旨明記する。但しGlyを除
く）；Ｚ：カルボベンゾキシ；Boc：ｔ−ブトキ
シカルボニル；Et：エチル；HONBおよび
ONB：Ｎ−ハイドロキシ−５−ノルボルネン−
２，３−ジカルボキシイミドおよびそのエステ
ル；HOBt：Ｎ−ハイドロキシベンツトリアゾー
ル；DCC：Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド；H₂／Pd：接触還元；TFA：トリフルオ
ロ酢酸；CHA：シクロヘキシルアミン；
OTCP：２，４，５−トリクロロフエニルエステ
ル；OSu：Ｎ−ハイドロキシスクシンイミドエス
テル 参考例 １ (1) Ｚ−Arg（MDS）−OH−CHA saltの合成 Ｚ−Arg−OH46.2ｇ（0.15M）を4N
NaOH150mlとアセトン400の混液に、室温でで
溶かし、氷冷する。これに４−メトキシ−２，６
−ジメチルベンゼンスルフオニルクロリド70.7g
（0.30M）をアセトン150mlに溶かした溶液を１時
間かけて滴下する。室温で２時間かきまぜたあ
と、反応液に結晶クン酸を加えて酸性とする。ア
セトン留去し、生じた油状物を酢酸エチルで抽出
する。酢酸エチル層は水で２回洗浄する。重曹水
で、酢酸エチル層から目的物を抽出する。水層を
クエン酸で酸性としたあと、生ずる油状物を酢酸
エチルで抽出する。酢酸エチル層は十分水で洗浄
し、乾燥後、酢酸エチルを減圧で留去すると、
63gの油状物を得る。これを酢酸エチル300mlに
溶かし、冷時、シクロヘキシルアミン（CHA）
14.3mlを加え、室温に一晩放置し、生ずる結晶を
取し、アセトリトリルから再結晶する。 収量 48.0g（52.8％”，融点140〜141℃ 旋光度：〔α〕²³ _D＋5.7゜（ｃ＝0.5，メタノール中） 薄層クロマトグラフイー（TLC）：Rf1 （CHCl₃：メタノール：酢酸＝９：１：0.5）＝
0.25 元素分析値：C₂₃H₃₀O₇N₄S・C₆ H₁₃Nとして 計算値：Ｃ 57.50；Ｈ 7.15；Ｎ 11.56； Ｓ 5.29 実験値：Ｃ 57.23；Ｈ 6.96；Ｎ 11.66 Ｓ 5.32 (2) Ｈ−Arg（MDS）−OH）の合成 Ｚ−Afg（MDS）−OH−CHA salt4.23g
（0.007M）を150mlのメタノールに溶かし、パラ
ジウム黒を触媒として、常法に従つて接触還元を
行う。触媒を別し、液は減圧で濃縮する。残
留物に水を加え、生ずる結晶を取する。水から
再結晶する。 収量 2.15g（80.5％），融点120〜122℃（分解） 旋光度：〔α〕²³ _D−7.8°（ｃ＝0.7，メタノール） TLC：Rf₂（酢酸エチル：ピリジン｛酢酸：
水＝30：20：６：11）＝0.16，Rf₄ （ｎ−ブタノール：酢酸エチル：酢酸：水＝
１：１：１：１）＝0.52 元素分析値：C₁₅H₂₄O₅N₄S.1/2H₂Oとして 計算値：Ｃ 47.23；Ｈ 6.61；Ｎ 14.69； Ｓ 8.41 実験値：Ｃ 47.68；Ｈ 6.58；Ｎ 14.69； Ｓ 8.47 (3) Boc−Arg（MDS）−OHの合成 Ｈ−Afg（MDS−OH1.12g（0.003M）を1.65ml
の水に溶かし、冷時、トリエチルアミン0.63ml
（0.0045M）を加える。これにｔ−ブチル Ｓ−
４，６−ジメチルピリジン−２−イルチオ−ルカ
−ボネイト793mg（0.0033M）をジオキサン1.65
mlに溶かした溶液を激しくかきまぜながら加え
る。室温で、12時間かきまぜたあと、ジオキサン
を留去し、残留物を水でうすめ、水層を酢酸エチ
ルで洗浄する。すいて水層を6M塩酸で、冷時酸
性にし、生ずる油状物を酢酸エチルで抽出する。
酢酸エチル層は水で２回洗浄したあと、乾燥し、
酢酸エチルを減圧で留去する。生ずる結晶に石油
ベンジンを加えて取する。酢酸エチルから再結
晶する。 収量 1.35g（95.7％），融点175〜176℃（分解） 旋光度：〔α〕²⁶ _D＋3.5゜（ｃ＝0.5，メタノール中） TLC：Rf₁＝0.34 元素分析値：C₂₀H₃₂O₇N₄Sとして 計算値：Ｃ 50.83；Ｈ 6.83；Ｎ 11.86； Ｓ 6.79 実験値：Ｃ 50.96；Ｈ 7.07；Ｎ 11.56； Ｓ 6.63 試験例 Ｈ−Arg（MDS）−OH100μmoleを(1)トリフル
オロ酢酸（２ml）とチオアニソール（0.1ml）の
混液中、50℃、１時間、(2)トリフルオロ酢酸（２
ml）とチオアニソール（0.1ml）の混液中、室温
（21℃），５時間、(3)トリフルオロ酢酸（２ml）と
アニソール（0.1ml）の混液中、50℃，１時間、
(4)トリフルオロ酢酸（２ml）中、50℃，１時間の
各条件下で処理し、それぞれトリフルオロ酢酸を
減圧で留去後、残留物を水に溶かし、エーテルで
一回洗浄したあと、全体を100mlに秤量し、アミ
ノ酸分析に供し、生成したアルギニンの量を測定
した。結果は表１に示した。

【表】 実施例 １ Ｚ−Arg（MDS）．Pro−NHEtの合成 Ｚ−Pro−NHEt 2.76g（0.01M）を70mlのメタ
ノールに溶かし、ｐ−トルエンスルフオン酸
1.90g（0.01M）を加え、パラジウム黒を触媒とし
て、常法に従つて接触還元を行う。触媒を別
し、液は濃縮する。残留物をジメチルホルムア
ミド50mlに溶かし、氷冷下、トリエチルアミン
1.40〓（0.01M）を加え、ついで、Ｚ−Arg
（MDS）−OH〔Ｚ−Arg（MDS）−OH−CHA salt
6.06g（0.01M）から調製〕ととハイドロキシベン
ツトリアゾール1.54g（0.01M）を加えて溶かす。
ジシクロヘキシルカルボジイミド2.06g（0.01M）
を加え、そのまま24時間かきまぜる。生じた尿素
を別し、液は真空で濃縮する。残留物に酢酸
エチルを加え、酢酸エチル層は重曹水，0.2N塩
酸で洗浄する。酢酸エチルを減圧で留去し、残留
物は石油ベンジンで粉末として別する。これを
シリカゲルのクロマトグラフイーで精製する。 （展開溶媒：クロロホルム） 収量 3.5g（56.6％），融点65〜67℃ 旋光度：〔α〕²³ _D−13.8゜（ｃ＝0.5，ジメチルホルム
アミド） TLC：Rf₁＝0.47 元素分析値：C₂₉H₄₂O₇N₆Sとして 計算値：Ｃ 56.29；Ｈ 6.84；Ｎ 13.58； Ｓ 5.18 実験値：Ｃ 56.56；Ｈ 6.81；Ｎ 13.40； Ｓ 4.93 実施例 ２ Ｚ−Leu−Arg（MDS）−Pro−NHEtの合成 Ｚ−Arg（MDS）−Pro−NHEt3.16g（0.0051M）
を70mlのメタノールに溶かし、ｐ−トルエンスル
フオン酸969mg（0.0051M）を加え、パラジウム
黒を触媒として、常法に従つて接触還元を行う。
解媒を別し、液は濃縮する。残留物を30mlの
ジメチルホルムアミドに溶かし、冷時、トリエチ
ルアミン0.71ml（0.0051M）を加え、ついでＺ−
Leu−ONB2.40g（0.0051M×1.1）を加え、そのま
ま12時間かきまぜる。溶媒を真空で留去し、残留
物を酢酸エチルに溶かす。酢酸エチル層は重曹
水、0.2N塩酸で洗浄し、乾燥後、減圧留去する。
残留物にエーテルを加え、生ずる沈殿を取す
る。酢酸エチルとエーテルから再沈殿する。 収量 2.5g（67.0％），融点95〜100℃ 旋光度：〔α〕²³ _D−22.0゜（ｃ＝0.6，ジメチルホルム
アミド） TLC：Rf₁＝0.50 元素分析値：C₃₅H₅₃O₈N₇Sとして 計算値：Ｃ 57.44；Ｈ 7.31；Ｎ 13.40； Ｓ 4.38 実験値：Ｃ 57.60；Ｈ 7.29；Ｎ 13.15； Ｓ 4.28 実施例 ３ pGlu−His−Trp−Ser−Tyr−（Ｄ）Leu−
Leu−Arg（MDS）−Pro−NHBtの合成 Ｚ−Leu−Arg（MDS）−Pro−NHEt732mg
（0.001M）を50mlのメタノールに溶かし、パラジ
ウム黒を触媒として、常法に従つて、接触還元を
行う。触媒を別し、液は濃縮する。残留物を
10mlのジメチルホルムアミドに溶かし、これに
pGlu−His−Trp−Ser−Tyr−（Ｄ）−Leu−
OH816mg（0.001M）とHONB717mg（0.004M）
を加えて溶かす、氷−食塩で−10℃に冷却し、ジ
シクロヘキシルカルボジイミド412mg（0.002M）
を加え、−10℃で３時間，０℃で10時間、室温で
24時間かきまぜる。生じた尿素を別し、液は
真空で濃縮する。残留物にエーテルを加え、生ず
る沈殿を取する。アセトニトリルから２回再沈
殿する。 収量 1.15g（81.6％），融点105〜110℃（分解） 旋光度：〔α〕²³ _D−28.2゜（ｃ＝0.6，ジメチルホルム
アミド），TLC：Rf₂＝0.20 元素分析値：C₆₈H₉₃O₁₅N₁₆S.H₂Oとして 計算値：Ｃ 57.33；Ｈ 6.72；Ｎ 15.73； Ｓ 2.25 実験値：Ｃ 57.29；Ｈ 7.18；Ｎ 15.32； Ｓ 2.02 実施例 ４ pGLu−His−Trp−Ser−Tyr−（Ｄ）Leu−
Leu−Arg−Pro−NHEtの合成 pGlu−His−Trp−Ser−Tyr−（Ｄ）−Leu−
Leu−Afg（ADS）−Pro−NHEt300mgを0.5mlのチ
オアニソールと10mlのトリフルオロ酢酸の混液に
溶かし、50〜55℃で、１時間放置する。トリフル
オロ酢酸を減圧で留去し、残留物にエーテルを加
え、生ずる沈殿を取する。これを少量の水に溶
かし、アンバーライトRA−410（酢酸型）のカラ
ム（1.5×10cm）を通過させる。通過液と洗液を
合し、そのままカルボキシメチルセルロースのカ
ラム（1.5×12cm）に注ぎ込む。50mlの水でカラ
ムを洗つたあと、水（500ml）と0.15M酢酸アン
モニウム（500ml，PH6.9）の間で直線勾配をかけ
て溶出する。主要溶出画分（240〜390ml）を集め
て凍結乾燥する。これを少量のＮ酢酸に溶かし、
セフアデツクスLH−20のカラム（2.5×120cm）
にかけ、同じ溶媒系で展開する。主要溶出画分
（290〜350ml）を集めて凍結乾燥する。 収量 120mg 旋光度：〔α〕²³ _D−34.1゜（ｃ＝0.4，５％酢酸） TLC：Rf₃（ｎ−ブタノール：ピリジン：酢
酸：水＝30：20：６：24）＝0.56 アミノ酸分析（酸分解）：His 1.01(1)； Arg＋エチルアミン1.75（１＋１）；Trp0.90
(1)；Ser0.86(1)；Glu1.05(1)；Pro1.04(1)；
Leu2.03；Tyr1.11(1)，平均回収率85.0％ 実施例 ５ pGlu−His−Trp−Ser−Tyr−Gly−Leu−
Arg（MDS）−Pro−NHEtの合成 Ｚ−Leu−Arg（MDS）−Pro−NHEt476mg
（0.00065M）とpGlu−His−Trp−Ser−Tyr−
Gly−OH494mg（0.00065M）を用い、実施例３
と同様の方法で調製した。 収量 710mg（80.9％），融点135〜140℃（分解） 旋光度：〔α〕²³ _D−26.7゜（ｃ＝0.5，ジメチルホルム
アミド），Rf₂＝0.16 元素分析値：C₆₄H₈₅O₁₅N₁₆S・H₂Oとして 計算値：Ｃ 56.16；Ｈ 6.41；Ｎ 16.38； Ｓ 2.34 実験値：Ｃ 56.15；Ｈ 6.71；Ｎ 16.11； Ｓ 2.18 実施例 ６ pGlu−His−Trp−Ser−Tyr−Gly−Leu×
Arg−Pro−NHEtの合成 pGlu−His−Trp−Ser−Tyr−Gly−Leu−
Arg（MDS）−Pro−NHEt300mgを用い。実施例
４と同様の方法で合成した。 収量 122mg 旋光度：〔α〕²³ _D−55.2゜（ｃ＝0.5，５％酢酸水） TLC：Rf₄＝0.48（アビセル） アミノ酸分析（酸分解）：His1.02(1)；Arg＋エチ
ルアミン，1.83（１＋１）；Trp1.01(1)；Ser0.81
(1)；Glu1.04(1)；Pro1.00(1)；Leu1.03(1)；Tyr1.03
(1)；Gly1.06(1)，平均回収率90.0％ 実施例 ７ Boc−Arg（MDS）−Pro−Lys（Boc）−Pro−
OHの合成 Ｈ−Pro−OMeにＺ−Lys（Boc）−ONBとＺ−
Pro−ONBを順次縮合することにより合成した
油状のＺ−Pro−ONB590mg（0.001M）をメタノ
ール50mlに溶かし、パラジウム黒を触媒として、
常法に従つて、接触還元を行う。触媒を別し、
液は減圧で濃縮する。残留物を10mlのジメチル
ホルムアミドに溶かし、これにBoc−Arg
（MDS）−OH473mg（0.001M）とハイドロキシベ
ンツトリアゾール153mg（0.001M）を加え、室温
で12時間反応する。生じた尿素を別し、液は
真空で濃縮する。残留物を酢酸エチルに溶かし、
酢酸エチル層は重曹水，0.2N塩酸で洗浄する。
乾燥後、減圧で酢酸エチルを留去する。残留する
油状物〔Boc−Arg（MDS）−Pro−Lys（Boc）−
Pro−OMe〕は石油ベンジンでよく洗つて、10ml
のメタノールに溶かす。冷時、２mlのＮ−苛性ソ
ーダを加え、室温で２時間ケン化を行う。Ｎ−塩
酸２mlを冷時、滴下し、反応液を水でうすめ、生
ずる油状物を酢酸エチルで抽出する。酢酸エチル
層は水で洗浄し、乾燥する。減圧で、酢酸エチル
を留去し、残留物は石油ベンジンで粉末として
取する。酢酸エチルとエーテルから再沈殿する。 収量 530mg（58.3％），融点85〜90℃ 旋光度：〔α〕²⁶ _D−35.6゜（ｃ＝0.5，ジメチルホルム
アミド），TLC：Rf₁＝0.33 元素分析値：C₄₂H₆₈O₁₂N₈Sとして 計算値：Ｃ 54.94；Ｈ 7.58；Ｎ 12.21； Ｓ 3.49 実験値：Ｃ 55.02；Ｈ 7.65；Ｎ 12.08 Ｓ 3.63 実施例 ８ Boc−Arg（MDS）−Pro−Lys（Boc）−Pro−
Gln−Gln−Phe−Phe−Gly−Leu−Met−
NH₂の合成 Boc−Gln−Gln−Phe−Phe−Gly−Leu−Met
−NH₂〔J.Bergmann，Ｍ，Bienert，H.
Niedvich，B.Mehlis and P.Oehme，
Experientia，30，401（1974）〕485mg（0.0005M）
をトリフルオロ酢酸（4.5ml）と水（0.5ml）の混
液に溶かし、10℃で20分間ふりまぜる。0.5mlの
Ｎ−塩酸を加え、減圧留去を行う。残留物にエー
テルを加え生ずる沈殿を取し、苛性ソーダ上で
乾燥する。乾燥粉末を15mlのジメチルホルムアミ
ドに溶かし、冷時、トリエチルアミン0.07ml
（0.0005M）を加える。これにBoc−Arg（MDS）
−Pro−Lys（Boc）−Pro−OH448mg（0.0005M）
とHONB179mg（0.001M）を加えて溶かす。ジ
シクロヘキシルカルボシイミド155mg（0.0075M）
を加え、そのまま24時間かきまぜる。生じた尿素
を別し、液は濃縮する、残留物に水を加え、
生ずる沈殿を取する。エタノールから２回沈殿
する。 収量 500mg（56.8％），融点245〜247℃）（分解） 旋光度：〔α〕²⁶ _D−34.0゜（ｃ＝0.5ジメチルホルムア
ミド），TLC：Rf₂＝0.83 元素分析値：C₈₃CH₁₂₆O₂₀N₁₈S₂として 計算値：Ｃ 56.64；Ｈ 4.22；Ｎ 14.32； Ｓ 3.63 実験値：Ｃ 56.50；Ｈ 7.15；Ｎ 14.28 Ｓ 3.73 実施例 ９ Ｈ−Arg−Pro−Lys−Pro−Gln−Gln−Phe−
Phe−Gly−Leu−Met−NH₂（SubStancep）
の合成 Boc−Arg（MDS）−Pro−Lys（Boc）−Pro−
Gln−Gln−Phe−Phe−Gly−Leu−Met−
NH₂100mgをチオアニソール１mlとトリフルオロ
酢酸10mlの混液に溶かし、50℃で２時間振りまぜ
る。トリフルオロ酢酸を減圧で留去し、残留物に
エーテルを加え、生ずる沈殿を取する。苛性ソ
ーダ上、真空で乾燥したあと、少量の水に溶か
し、アンバーライトIRA−410（酢酸型）３mlを加
え、しばらく振りまぜる。樹脂を別し、液は
凍結乾燥する。凍結乾燥粉末を少量の30％酢酸水
に溶かし、セフアデツクスＧ−25のカラム（2.5
×120cm）に注ぎ込む。同じ溶媒系で展開し、主
要溶出画分（240〜280ml）を集めて、凍結乾燥す
る。 収量 67mg 旋光度：〔α〕²⁴ _D−80.7゜（ｃ＝0.5，５％酢酸） TLC：Rf₃＝0.53（アビセル）アミノ酸分析
（酸分解）：Lys0.99(1)；Arg0.99(1)；Gln2.03
(2)；Pro2.10(2)；Gly0.99(1)；Met0.99(1)；
Leu0.98(1)；Phe1.96(2) 平気回収率90.4％ 実施例 10 Ｚ−Pro−Arg（MDS）−OHの合成 Ｈ−Arg（MDS）−OH3.72g（0.01M）をジメチ
ルホルムアミド50mlに溶かし、冷時、トリエチル
アミン1.40ml（0.01M）を加え、ついでＺ−Pro
−ONB4.5g（0.011M）を加え、室温で12時間かき
まぜる。酢酸５mlを反応液に加え、溶媒を真空で
留去する。残留物を酢酸エチルに溶かし、酢酸エ
チル層は水で２回洗浄する。酢酸エチルを減圧で
留去し、残留物に石油ベンジンを加え、粉末とし
て取する。酢酸エチルと石油ベンジンから再沈
殿する。 収量 5.6g（93.3％），融点75〜80℃ 旋光度：〔α〕²³ _D−16.0゜（ｃ＝0.6，ジメチルホルム
アミド），TLC：Rf₁＝0.22 元素分析値：C₂₈H₃₇O₈N₅Sとして 計算値：Ｃ 55.71；Ｈ 6.18；Ｎ 11.60； Ｓ 5.31 実験値：Ｃ 56.18；Ｈ 6.58；Ｎ 11.26 Ｓ 4.73 実施例11 Ｈ−Pro−Arg（MDS）−OHの合成 Ｚ−Pro−Arg（MDS）−OH5.4g（0.009M）を
100mlのメタノールに溶かし、バラジウム黒を触
媒として、常法に従つて接触還元を行う。触媒を
別し、液は濃縮する。残留物を水に溶かし、
冷所に放置する。生ずる結晶を取する。 収量 2.80g（66.0％）融点173〜174℃（分解） 旋光度：〔α〕²³ _D−15.8゜（ｃ＝0.6，ジメチルホルム
アミド），TLC：Rf₂＝0.03，Rf₄＝0.46 元素分析値：C₂₀H₃₂O₆N₅Sとして 計算値：Ｃ 51.05；Ｈ 6.86；Ｎ 14.88； Ｓ 6.81 実験値：Ｃ 51.22；Ｈ 6.95；Ｎ 14.99 Ｓ 6.86 実施例 12 Ｚ−Lys（Boc）−Pro−Arg（MDS）−OHの合
成 Ｈ−Pro−Arg（MDS）−OH2.35ｇ（0.005M）
を30mlのジメチルホルムアミドに溶かし、冷時、
トリエチルアミン0.7ml（0.005M）を加え、つい
でＺ−Lys（Boc）−OTCP2.80g（0.005M）を加
え、室温で12時間かきまぜる。３mlの酢酸を反応
液に加え、ジメチルホルムアミドを真空で留去す
る。残留物を酢酸エチルに溶かし、酢酸エチル層
は水で２回洗浄する。溶媒を減圧で留去し、残留
物にエーテルを加え、生ずる沈殿を取する。酢
酸エチルとエーテルから再沈殿する。 収量 3.30g（79.3％），融点85〜90℃ 旋光度：〔α〕²³ _D−19.3゜（ｃ＝0.6，ジメチルホルム
アミド）TLC：Rf1＝0.25 元素分析値：C₃₉H₅₇O₁₁N₇S・1/2H₂Oとして 計算値：Ｃ 55.70；Ｈ 6.95；Ｎ 11.66； Ｓ 3.81 実験値：Ｃ 55.77；Ｈ 7.03；Ｎ 11.77 Ｓ 3.65 実施例 13 Boc−Thr−Lys（Boc）−Pro−Arg（MDS）−
OHの合成 Ｚ−Lys（Boc）−Pro−Arg（MDS）−OH3.0g
（0.0036M）をメタノール100mlに溶かし、パラジ
ウム黒を触媒として、常法に従つて、接触還元を
行う。触媒を別し、液は減圧で濃縮する。残
留物を50mlのジメチルホルムアミドに溶かし、冷
時、トリエチルアミン0.50ml（0.0036M）を加え
る。これにBoc−Thr−ONB〔Boc；Thr−
OH877mg（0.004M）から調製〕を加え、室温で
12時間かきまぜる。３mlの酢酸を反応液に加え、
溶媒を真空で留去する。残留物を酢酸エチルに溶
かし、酢酸エチル層は水で２回洗浄する。酢酸エ
チルを減圧で留去し、残留物はエーテルで粉末と
して、取する。酢酸エチルとエーテルから再沈
殿する。 収量 2.3g（71.0％），融点85〜90℃ 旋光度：〔α〕²³ _D−20.2゜（ｃ＝0.6，ジメチルホルム
アミド），TLC：Rf₁＝0.14 元素分析値C₄₀H₆₆O₁₃N₈Sとして 計算値：Ｃ 53.44；Ｈ 7.40；Ｎ 12.46； Ｓ 3.57 実験値：Ｃ 53.30；Ｈ 7.65；Ｎ 12.47； Ｓ 3.36 実施例 14 Ｈ−Thr−Lys−Pro−Arg−OH（Tuftsin）の
合成 BoC−Thr−Lys（Boc）−Pro−Arg（MDS）−
OH300mgを0.5mlのチオアニソールとトリフルオ
ロ酢酸10mlの混液に溶かし、、50℃で１時間放置
する。トリフルオロ酢酸を減圧で留去し、残留物
にエーテルを加え、生ずる沈殿を取する。乾燥
後、少量の水に溶かし、アンバーライトIRA−
410（酢酸型）10mlと30分間ふりまぜる。樹脂を
別し、液は凍結乾燥する。乾燥粉末を少量の水
に溶かし、カルボキシメチルセルロースのカラム
（1.5×10cm）に注ぎ込む、水（300ml）と0.2M酢
酸アンモニウム（300ml，PH6.9）の間で、直線勾
配をかけて溶出する。主要溶出部分（290〜350
ml）を集めて、凍結乾燥する。粉末はＮ酢酸に溶
かし、セフアデツクスLH−20（2.5×120cm）のカ
ラムに注ぎ込み、同じ溶媒系で展開する。主要溶
出画分（270〜310ml）を集めて凍結乾燥する。 収量 180mg 旋光度：〔ａ〕²³ _D−63.1゜（ｃ＝0.6，５％酢酸） TLC：Rf₃＝0.22（アゼセル） アミノ酸分析（酸分析）：Lys1.00(1)；Arg1.02
(1)；Thr1.01(1)；Pro0.67(1)，平均回収率92.0％ 実施例15 Boc−Tyr−Arg（MDS）−OHの合成 Ｈ−Arg（MDS）−OH1.91g（0.005M）をジメチ
ルホムムアミド30mlに溶かし、冷時、トリエチル
アミン0.7ml（0.005M）を加え、Boc−Tyr−
OSu1.89g（0.005M）を加え、室温で12時間きま
ぜる。酢酸５mlを加え、ジメチルホルムアミドを
真空で留去する。残留物を酢酸エチルに溶かし、
酢酸エチル層は水で２回洗浄する。減圧で酢酸エ
チルを留去し、残留物にエーテルを加え、生ずる
沈殿を取する。酢酸エチルとエーテルから再沈
殿する。 収量 2.70g（84.9％），融点85〜90℃ 旋光度：〔α〕²³ _D＋0.6゜（ｃ＝0.5，ジメチルホルム
アミド），TLC：Rf₁＝0.14 元素分析値：C₂₉H₄₁O₉N₅Sとして 計算値：Ｃ 54.79；Ｈ 6.50；Ｎ 11.02； Ｓ 5.04 実験値：Ｃ 54.94；Ｈ 7.01；Ｎ 10.66 Ｓ 4.54 実施例 16 Ｈ−Tyr−Arg−OH（Kyotorphin）の合成 Boc−Tyr−Arg（MDS）−OH300mgをチオアニ
ソール0.5mlとトリフルオロ酢酸10mlの混液に溶
かし、50〜55℃で１時間放置する。トリフルオロ
酢酸を減圧で留去し、残留物にエーテルを加え、
生ずる沈殿を取する。これを少量の水に溶か
し、アンバーライトIRA−410（酢酸型）10mlと30
分間ふりまぜる。樹脂を別し、液は凍結乾燥
する。乾燥粉末を少量の水に溶かし、カルボキシ
メチルセルロースのカラム（1.5×10cm）に注ぎ
込む。水（300ml）と0.1M酢酸アンモニウム
（300ml，PH6.9）の間で、直線勾配をかけて溶出
を行う。主要溶出画分（100〜150ml）を集めて、
凍結乾燥する。乾燥粉末を少量のＮ酢酸に溶か
し、セフアデツクスLH−20（2.5×120cm）のカラ
ムに注ぎ込む。同じ溶媒系で展開し、主要溶出画
分を集めて、凍結乾燥する。 収量 150mg 旋光度：〔α〕²¹ _D−17.6゜（ｃ＝0.4，H₂O） TLC：Rf₃＝0.45（アゼセル） アミノ酸分析（酸分解）：Arg1.06(1)；Tyr0.64
(1)，平均回収率90.6％

【表】 ↓

pGlu−His−Trp−Ser−Tyr
−X−Leu−Arg−Pro−NHEt

【表】 ↓

H−Arg−Pro−Lys−Pro−Gl_Ｎ−Gl_Ｎ
−Phe−Phe−Gly−Leu−Met−NH_２

【表】 ↓
H−Thr−Lys−Pro−Agr−OH

【表】 ↓
H−Tyr−Arg−OH

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ グアニジノ基を有するペプチドの製造にあた
   り、グアニジノ基含有原料化合物のグアニジノ基
   を４−メトキシ−２，６−ジメチルベンゼンスル
   フオニル基で保護して、ペプチド縮合した後保護
   基を酸で脱離せしめることを特徴とするペプチド
   の製造法 ２ 酸としてトリフルオロ酢酸を用いる特許請求
   の範囲第１項記載の製造法 ３ チオアニソールまたはアニソールの存在下で
   保護基を脱離せしめることを特徴とする特許請求
   の範囲第１項または第２項記載の製造法。