JPS62228099A

JPS62228099A - 新規なゴナドリベリン誘導体

Info

Publication number: JPS62228099A
Application number: JP61309288A
Authority: JP
Inventors: アニコー　ホルバート; ヂョルヂュ　ケーリ; タマーシュ　グリアーシュ; イシュトバーン　テプラーン; シャーンドル　ヴィグ; ヂョルヂィ　ボオェコオェニィ　ネーエマヨル
Original assignee: Innofinance Altalanos Innovacios Penzintezet
Current assignee: Innofinance Altalanos Innovacios Penzintezet
Priority date: 1986-01-03
Filing date: 1986-12-27
Publication date: 1987-10-06
Anticipated expiration: 2009-04-27
Also published as: FR2595705A1; DE3700166A1; FI85866B; HUT43090A; US4758552A; GB8700017D0; FI865347L; FR2595705B1; CH670830A5; IT8719002A0; JPH0631314B2; GB2185025A; HU194913B; GB2185025B; BE906056A; FI85866C; ES2004036A6; SE8700016D0; SE8700016L; FI865347A0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、下記一般式、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ□−Ｘ２
−Ｘ３−Ｐｒｏ−Ｘ４（Ｔ　）（但し、Ｘ□は、２−ア
ミノ安息香酸基又は３−アミノ安息香酸基；ｘ２は、ロ
イシル基、１〜リプトフイル基又はフェニルアラニル基
；ｘ３は、アルギニル基、ロイシル基、グルタミニル基
；ｘ４は、グリシルアミド甚又はエチルアミド基）からなるゴナドリベリンノナペプチドエチルアミド又は
デカペプチ１ヘアミド誘導体、およびその酸付加塩、お
よびこれを有効成分とする薬剤組成物に関する。

また、本発明は、」二記一般式（１）の新規化合物、お
よびその塩の製造方法を提供することに関する。

（従来の技術）本明細書中で用いられる略号は、次のごとき意味を有す
るものであるが、こオしは、ペプチド化学（例えばジャ
ーナル・オブ・バイオロジー・アンド・ケミストリー（
Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）２４ユ、　５２７（１
９６６）参照）における命名法に準じている。

又として　　　　　　　　　　　　　（−Ｘ−として）
Ｇｌｐ　：ピログルタミン酸　　　　　　（ピログルタ
ミル）Ｈｊ、ｓ　：ヒスチジン　　　　　　　　（ヒス
チジル）Ｔｒｐニトリブトファン　　　　　　　（１−
リプトフイル）Ｓｅｒ　：セリン　　　　　　　　　　
　　（セリル）Ｔｙｒ　：チロシン　　　　　　　　　
　（チロシル）Ｇ１ｙニゲリシン　　　　　　　　　（
グリシル）Ｐｈｅ　：フェニルアラニン　　　　　　（
フェニルアラニル）Ｌｅｕ　：ロイシン　　　　　　　
　　　（ロイシル）Ｐｒｏ　ニブロリン　　　　　　　
　　　（プロリル）Ｇ１．ｕ　：グルタミン酸　　　　
　　　　（グルタミル）Ｇｌｎ　：グルタミン　　　　
　　　　　（グルタミニル）Ａｒｇ　：アルギニン　　
　　　　　　　（アルギニル）Ｍａｂ　：　３−アミノ
安息香酸Ａａ：アントラニル酸ＢＯＣ：第３ブチルオキシカルボニルＢｚ１．　：ベンジルＤＣＣニジシクロへキシル力ルボジイミ１（＝７＝ＤＣＵ　ニジシクロヘキシル尿素ＤＩＣニジイソプロピルカルポジイミドＤＭＦ　ニジメ
チルホルムアミドＤＮＰ　ニジニトロフェニルＥ＾：エチルアミドＥｔ：エチル１（ＰＬＣ：高性能液体クロマトグラフィＭｅ＝メチルＯＮＰ　：　４−ニトロフェニルｏｐｃｐ　：ペンタクロロフェニル０ＦＦＰ　：ペンタフルオロフェニルＴＥへ−トリエチルアミンＴＦＡ：ｔ−リフルオロ酢酸Ｔｌ（Ｆ　：テ１−ラヒドロフランＴＬＣ：薄層クロマトグラフィＴＯｓニドシルｌｖ：紫外線Ｚ：ベンジルオキシカルボニルゴナドリベリン（文献上、ゴナドトロピン解放ホルモン
、Ｇ　ｎ　Ｒｔ（、黄体化および卵胞刺激ホルモン放出
ホルモン（ＬＨ／ＦＳＨ−Ｒ１１）とも呼ばれ、化学一
般式、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇ　
］　ｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇ］、ｙ−ＮＨ２か
らなるもの）、およびその公知の誘導体は、黄体化およ
び卵胞刺激ホルモン（ＬＨおよびＦＳＨ）を解放又は放
出する能力を有することが一般的特徴となっている。

１９８０年代の初めにおいて、魚類および鳥類中のゴナ
ドリベリンの構造は、哺乳動物中のゴナドリベリンのも
のと異なっていることが知られた〔ジェイ・エイ・キン
グ（Ｊ、　Ａ、　Ｋｉｎｇ）およびアール・ピー・ミラ
ー（ＲｏＰ、　Ｍｉｌ］、ａｒ）　：ジャーナル・オブ
・バイオロジー・アンド・ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏ
ｌ。

Ｃｈｅｍ、）２５７．１０７２２（１，９８２）　；サ
ウスアフリカン・ジャーナル・オブ・サイエンス（Ｓｏ
ｕｔｈ−Ａｆｒｉｃａｎ　Ｊ。

ｏｆ　５ｃｊ−ｅｎｃｅ）７８．１．２４（Ｉ９８２）
　；エヌ・シャーウッド（１１１，５ｈｅｒ警ｏｏｄ　
）等：プロシーデングス・イン・ナショナルアカデミ−
・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　８０．２７９４（
Ｉ９８３）参照〕。

これらの差異は、鳥類の場合は８位のアミノ酸に、また
魚類の場合は、７又は８位のアミノ酸に影響がある。

さらに、６位にグリシンが存在する代りに、疎水性脂肪
族又は芳香族側鎖を有するＤ−アミノ酸を含むゴナドリ
ベリン誘導体は、ゴナドリベリンよりも優れた効果を有
することも文献上知られている〔ジェイ・サンドウ（Ｊ
、　Ｓａｎｄｏｗ）等＝「排卵の制御」、ニド・バター
ワース（Ｅｄ、　Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ）、ロンドン
、１９７８．４９−７０頁；エイ・ヴイ・シャリ−（Ａ
、　Ｖ、　５ｈａｌｌい等：アニュアル・オブ・リビュ
ー・オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　
Ｂｊｏｃｈｅｍ、）。

４７、８９（１９７８））。

さらに、ゴナドリベリンの生物学的活性が、１０位のグ
リシンアミド基を脂肪族鎖を含むアミド基で置換するこ
とにより高められることも知られている〔エム・シュジ
ノ（Ｍ、　Ｊｕｊｉｎｏ）等：ジャーナル・オブ・メデ
シナルケミストリー（、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ。

川、　１１４４（Ｉ９７３））。

二フ・エイ・モナニー（Ｆ、ＡｏＭｏｍａｎｙ）は、そ
のデカペプチドの可能なあらゆるコンホメーションのエ
ネルギー量を調査し、６位のグリシン又は叶アラニンで
Ｕ字形（β一回転）に折曲した分子の空間配列の場合に
、エネルギー量が最小となることを見出した〔ジャーナ
ル・オブ・アメリカンケミストリー・オブ・ソサイアテ
ィ（Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、）　９８．２９９０（１，９７６）　；および
ｊｂｉｄｅｍ　９８．２９９６（１９７６））。

アール・エム・フレイジンジャ− （Ｒ，Ｍ、　Ｆｒｅｉｄｉｇｅｒ）等は、下記一般式（
ＴＶ）のＧ　ｎ　ＲＩ（誘導体を製造した。

ここで、その空間構造は６位のグリシンを、γ−ラクタ
ムで置換することにより固定される。この化合物の生物
学的活性は、天然のゴナドリベリンのものより増大して
いる。

（発明が解決しようとする問題点）この発明は、公知のものより生物学的活性がより大きく
、哺乳類のみならず、魚類、両生類の繁殖に有効な新規
なゴナドリベリン誘導体を提供することである。

この発明の他の目的は、６位のグリシンの代りに、生物
学的活性を促進する芳香環を含む新規な形のアミノ酸を
組み込む方法、さらに最も好ましい空間配列に固定する
と同時に、ラセミ化のむぞれを回避する方法を提供する
ことである。

（問題点を解決するための手段）本発明は、ゴナドリベリンの６位のグリシン基の代りに
、下記一般式（Ｖ）の２−アミノ安息香酸基（アントラ
ニル酸）、 υ 又は下記一般式（Ｖｌ）の３−アミノ安息香酸基、υ を組み込むことにより、上記目的を達成し得ることを見
出し、完成するに至った。

さらに、本発明は、１０位のグリシンアミド基を炭素原
子数１〜４のアルキルアミド基で置換することにより、
ゴナドリベリン誘導体の生物学的効果が増大することを
見出したことに基づくものである。

さらに、本発明は、ゴナドリベリンの８位または７およ
び８位のアミノ酸を、ある種のアミノ酸で置換すること
により、１甫乳動物のみならず、他の種の動物の繁殖に
有効なゴナドリベリンを生成し得ることを見出したこと
に基づくものである。

本発明は、上記事実に基づいて、上記一般式（Ｉ）のノ
ナペプチドエチルアミド又はデカペプチドアミド化合物
、およびその塩を製造する方法を提供するものであって
、その方法は、以下の工程からなることを特徴とする。

すなわち、（ａ）適宜保護されたアミノ酸を、段階的又
は断片的縮合により縮合し、適宜保護基を除去する工程
、又は（ｂ）固相ペプチド合成法により、上記の適宜保護され
たアミノ酸を固相担体に対し、適当な順序で段階的に縮
合し、さらに最終生成物を酸性、又はアルカリ性分裂に
より上記固相担体から分離し、上記分裂の前後において
、同時に上記保護基を適宜除去する工程からなる。

上記方法において、好ましい」二部工程（、）は。

下記一般式（ＩＩ）、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｎ３（旧の
ペンタペプチドアジドを、下記一般式（ｍ）、Ｘ、−Ｘ
２−Ｘ３−Ｐｒｏ−Ｘ４（ｍ）（但し、ｘｌ、ｘ２、Ｘ
３、Ｘ４は前記同様）のテトラペプチド又はペンタペプ
チドと縮合させることからなるものである。

上記工程（ｂ）において、固相担体として、ベンズヒド
リルアミン樹脂又はクロロメチル化ポリスチレン樹脂を
用いることが好ましい。

また、保護基を有する最終生成物の分離は、フッ化水素
により、又はエチルアンモニア添加分解（ｅｔｈｙｌａ
ｍｍｏｎｏｌｙｓｉｓ）によって行なうことが好ましｂ
λ。

このようにして得られたノナ−又はデカペプチドアミド
は、所望により、薬剤として使用可能な酸と反応させて
酸付加塩に変形させること、あるいは所望により、酸付
加塩を塩基と反応させて遊離塩基を解放させることもで
きる。

また、本発明は、上記一般式（１）の化合物又はその酸
付加塩を有効成分として含む治療用又は生物学的生殖用
の薬剤組成物を提供するものである。

さらに、本発明は、上記薬剤組成物の製法として、上記
一般式（１）の化合物又はその酸付加塩を一般に用いら
れている賦形剤、又は担体と混合する方法を提供するも
のである。

牛の場合、一般式（Ｉ）のゴナドリベリン誘導体は筋肉
内、皮下、静脈投与として５ないし２００μｇの投与量
を用い、魚類の場合は、筋肉内又は皮下投与により、０
．１〜１００μｇの投与量を用いることが好ましい。

本発明における一般式（１）の新規なゴナドリベリン誘
導体、およびその製法の重要な利点は、以下の通りであ
る。

（ａ）牛および魚類に対する生殖実験によれば、公知の
ゴナドリベリン誘導体よりも、作用効果がよりすぐれて
いる。

（ｂ）６位に組み込まれた新しい置換基は、不整中心を
含まないからラセミ化が生ずるおそれがなく、最終製品
の製造が容易かつ安価となる。

（ｃ）２−および３−アミノ安息香酸基の製造コストは
、公知のＧ　ｎ　Ｒｔ（誘導体で同様の役割をするＤ−
アミノ酸のものより安価となる。

（ｄ）上記工程（ａ）で出発物質として用いられる一般
式（Ｉｆ）のペンタペプチ１く成分は、各最終生成物の
共通する中間体である。

以下、本発明の実施例について説明するが、薄層クロマ
トグラフィ（ＴＬＣ）のＲ，値は、記号４ｌＨｆＩ＋の
上方の数字で表わした下記溶媒系を用い、キーゼルゲル
シー）−（ＤＣアルフオリエン（Ａｌｕｆｏｌｊ、ｅｎ
）、メルック（Ｍｅｒｃｋ）により判定したものである
。

１、酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝３０：２０：６
：２、酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝６０：２０：
６：３、酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝１２Ｑ：２
０：（１：４、酢酸エチル／ピリジン／酢酸／水＝２４
０：２０：６：５、　　ｎ−ブタノール／酢酸／水／酢
酸エチル−１，：　１　：　１：１６、　　ｎ−ブタノール／酢酸／水＝４：１：１７、イ
ソプロパツール／１Ｍ酢酸＝２＝１８、酢酸エチル／ピ
リジン／酢酸／水＝５：５：１：３９、アセトン／トル
エン＝１：１１０、クロロホルム／酢酸＝２４：２１１、ブタノン／ピリジン／水＝６５　：　１５　：　
２０１２ｏ　　クロロホルム／メタノール／酢酸＝８５
　：　ＩＱ　：　５１３．ｎ−ブタノール／酢酸／アン
モニア（ｌ水酸化アンモニウム１容量部と水４容量部と
からなるもの）＝６：１：１：２工程（ａ）　：　ＢｏＣ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−
ＯＭｅ　（分子量：６２２．６２）の製造。

Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−０Ｈ２１，１２ｇ（５０ミ
リモル）をＤＭＦ１００ｍＱ中に溶かし、これを０℃に
冷却し、次にＤＣＣｌｏ、３２ｇ（５０ミリモル）およ
びＮ−ヒドロキシベンゾ１〜リアゾール７．６６　ｇ　
（５０ミリモル）をこれに攪拌下で添加した。これを、
０℃で１０分間、攪拌したのち、析出したＤＣＵを濾別
した。

ＤＭＦ　７０ｍＱ、中に溶かしたＨ−Ｔｒｐ−ＯＭｅ、
　ｌ＋ｃ１１２，７４　ｇ（５０ミリモル）の溶液を、
０℃に冷却したのち、これにＴＥＡ　６．９４ｍＱ（５
０ミリモル）を加え、５分間攪拌してから、析出したト
リエチルアミン塩酸塩を濾別した。

上記の得られた２つの溶液を一緒にし、０℃で一晩攪拌
し、析出したＤＣＵを濾別し、溶液を蒸発乾燥させた。

得られた油状残渣を酢酸エチル５００ｍＱ中に溶解し、
次に氷冷した１Ｍ硫酸水素す１〜リウム溶液１００ｍＱ
を用いて、これを３回、次に飽和炭酸水素ナトリウム溶
液１００ｍΩを用いて、これを５回、最後に塩化ナトリ
ウムの１０％溶液１００ｍＱを用いて、これを２回、の
抽出をおこなった。

得られた有機質相を、無水硫酸マグネシウムを用いて乾
燥し、濾過したのち蒸発乾燥させた。この油状残渣を、
石油エーテルを用いて完全に粉砕し、得られた粉体を濾
過、乾燥させた。

得られた結晶性生成物を、石油エーテルを用いて酢酸エ
チルから再結晶させ、目的製品を得た。

収量は２７．７０ｇ（８９％）、融点（以下、ｍ、ｐ、
と略称する）は１１９〜１２２℃であった。

〔α〕ら２＝＋Ｍ、１°（Ｃ＝１、ＤＭＦ）Ｒｆ’　＝
０．６２　；　Ｒｆ’　＝０．４１゜工程（ｂ）　：　
Ｈ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭｅ、２ＨＣ１（分
子量：５２２．４９（遊離塩基；　５９５．４１（ジヒ
ドロクロリド）〕の製造。

４Ｎ塩化水素メタノ一ル溶液１００ｍｆｌを、メタノー
ル１００ｍｆｌに２４．９　ｇ　（４０ミリモル９のＢ
ｏｃ−Ｈｉｓ−（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭｅジペプチド
を溶かした溶液中に添加した。

この混合物を室温下で３０分間放置した。

その結果、ジペプチドエステル塩酸塩が析出した。この
析出物を濾別し、エーテルで洗い乾燥させた結果、目的
化合物が２］、、９］、ｇ（９２％収率）が得られた。

ｍ、ｐ、　＝　１９８〜２０２℃。

〔α〕八”＝０．４９°（Ｃ＝１、ＤＭＦ）Ｒ，３＝　
０．４６　；　Ｒｆ４＝　０．１８゜工程（ｃ）　：　
Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭｅ　（分子
量：６３３．６０）の製造。

Ｌ−ピログルタミン酸４．８５．、（３６，８ミリモル
）、ＤＣＣ７，５８ｇおよびＮ−ヒドロキシベンゾＩ−
リアゾール５．６３　ｇを、ＤＭＦ　１００ｍｆｌに溶
かした混合物を、温度５〜１０℃で１０分間攪拌し、つ
いでＤＣＵ析出物を濾別した。

他方、ＴＥＡ　９．７２ｍｆｌ（７０ミリモル）を、ト
旧ｓ　（ＤＮＰ）＝２０− −Ｔｒｐ−ＯＭｅ、２ＨＣ］、　２０．８４ｇ（３５ミ
リモル）（ＤＭＦ　１００ｍＱに溶かしたもの）の溶液
中に添加した。次に５分間攪拌したのち、析出したトリ
エチルアミン塩酸塩を濾別した。

上記の２つの溶液を一緒にし、室温で一晩攪拌した。翌
日、アセトン９０ｍＲを加え、不溶性の析出物を濾別し
た。蒸発ののち得られた油状残渣を酢酸エチルを用いて
、完全に粉砕し、ついて乾燥させた。

この乾燥した結晶を２５ｍＱの水で３回洗ったのち、再
び乾燥させた。この得られた生成物を、加熱酢酸エチル
を用いて再結晶させて目的化合物を得た。

収量は１８．４２ｇ（８３，１％）であり、ｍ、ｐ、＝
　１４８−　］、５１°Ｃであった。

〔α〕♂３＝＋５．２°（Ｃ＝１、ＤＭＦ）Ｒｆ’　＝
０．５３　；　Ｒｆ’　＝０．３８゜工程（ｄ）　：　
Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−ＯＭｅ　（分子量：　４６６
．５０）の製造。

ＤＭＦ　１００ｍｆｌおよび水１００ｍＱ中に溶かした
Ｇｌｐ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−Ｔｒｐ−ＯＭｅ保護トリペ
プチド１５．８４ｇ（２５ミリモル）の溶液に、メルカ
プ１へエタノール４ｍΩを加え、ついで、ＴＥＡを添加
してｐＨ＝８に調整した。この溶液を室温にて３０分間
放置したのち、減圧下に蒸発乾燥した。

得られた油状残渣を、エーテルで完全に粉砕し、ついで
濾過、乾燥させた。得られた生成物をメタノールの少量
に溶かし、エーテルを加えて結晶化した。

析出した結晶を濾過、乾燥させ、目的化合物１０．９２
ｇ（９３，６％の収率）を得た。

ｍ、ｐ、　＝　２２８〜２３２°Ｃ０〔α〕も２＝　＋４．０４°（Ｃ＝０．４２、ＤＭＦ）
Ｒｆ”＝０．３０゜工程（ｅ）　：　Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｎ２１１３
（分子ｆＺ　：　４６６．５］、）の製造。

９８％ヒドラジン水利物２０ｍＱを、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−
Ｔｒｐ−ＯＭｅ　Ｉ−リペプチド９．３３ｇ（２０ミリ
モル）をメタノール２５０ｍＱに溶かした溶液中に添加
した。この混合物を４０℃で３時間、攪拌したのち、室
温で一晩攪拌した。翌日、析出物を濾別し、冷エタノー
ルで洗い、ついで乾燥して目的化合物を７．５８ｇ（８
１，２％の収率；　ｍ、ｐ、　＝　１６６−１６９℃）
を得た。

〔α〕ら”＝−２２，３°（Ｃ＝０．５、ＤＭＦ）Ｒｆ
１＝０．５０　；　Ｒｆ”　＝０．１４゜工程（ｆ）　
：　Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｒ−ＯＭｅ（
分子量＝７１６．８１）の製造。

ＤＭＦ　６０ｍＱに溶かしたＧｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−
Ｎ２Ｈ３（上記工程（ｅ）で製造したもの）７．０ｇ（
１５ミリモル）を含む溶液を０℃に冷却し、これに、６
Ｎ塩酸溶液７．５ｍｎ（４５ミリモル）を攪拌下で加え
た。次に亜硝酸ナトリウム１．．０３５ｇ（１５ミリモ
ル）の濃水溶液を上記混合物中に徐々に滴下し、ついで
０℃で１５分間攪拌した。

さらにＤＭＦ　１５Ｊ中に４．７８ｇ（１，５ミリモル
）のＩｌｌｌ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｏ，ＨＣｌを溶かした
溶液を加え、ついでＴＥＡ６．２５ｍＭ（４５ミリモル
）を加えてｐＨを中性に調整した。

この混合物を０〜４℃で一晩攪拌し、ついで減圧下で蒸
発乾燥した。得られた油状残渣をエーテルを用いて完全
に粉砕し、乾燥させて、目的化合物１２．１ｇ（１００
％の収率）を得た。このものはＴＬＣにおいて２つの小
さい汚染スポラ１へが見られたが、これは精製すること
なしにヒドラジドに変換され、これをメタノールから再
結晶化した。この目的化合物はｍ、ｐ、　＝　１．８８
−１９０℃を示した。

〔α〕も”＝−３，４８°（Ｃ＝１、ＤＭＦ）Ｒ，１＝
０．５８　；　Ｒ，”＝０．２６゜工程（ｇ）　：　Ｇ
ｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｎ２Ｈ３（分
子量＝７１６．８）の製造。

２００ｍｆｌのメタノールに粉状粗Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔ
ｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−ＯＭｅペンタペプチドエステル
１．２ｇを溶かした溶液に、９８％ヒドラジン水和物’
Ｊ、ＯｍＱを添加し、この混合物を３時間、４０℃にて
攪拌した。ついで、室温で１晩攪拌したのち、析出物を
濾過し、さらに濃硫酸を用い乾燥器中で乾燥した。乾燥
した結晶を０．５Ｎ塩酸２５０ｎ＋ＦＩ中に溶かし、飽
和炭酸すｌ−リウム溶液を加えてｐＨ＝８に調整し、こ
れを２時間、０℃にて放置した。生成した結晶質析出物
を濾過し、氷冷水で洗い、乾燥させて目的化合物６．１
．２ｇ（２工程のものを一緒に計算して５６．９％の収
率）を得た。ｍ、ｐ、　＝　２０５〜２０６°Ｃ８〔α
）ｉ）”　＝　２１．５１°（Ｃ＝１、ＤＭＦ）Ｒｆ’
＝０．３９　；　Ｒｆ”＝Ｏ，ｉ４゜このヒドラジン窒
素の分析の結果、３．７９％および３．７６％（計算値
は３．９１％）を示した。

工程（ｈ）　：　Ｈ−Ｇ］−ｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ、Ｔ
ＦＡ（分子量：　３６７．３（Ｂｏｃ：　３７０．４９
））の製造。

プロリンエチルアミド１．Ｏｇ（７０ミリモル）（Ｚ−
Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ　７２ミリモルを水素化して得られた
もの）をＤＭＦ　１００ｍｆｌに溶かし、ＴＥＡを添加
してｐＨ＝８に調整した。次に、ＤＭＦ　１００ｍｆｌ
にＢｏｃ−Ｇ］、ｎ−０ＮＰ　３２　ｇ　（８７ミリモ
ル）を溶かした溶液を攪拌下でさらに添加した。

得られた油状残渣を３ｏ％ＴＦＡを５０ｍΩ含むジクロ
ロメタン溶液中に溶かし、これを室温にて２０分間放置
した。のちに減圧下で上記溶液を蒸発させ、得られた油
状残渣をエーテルを用いて完全に粉砕した。その固体生
成物をエーテルで洗い、減圧下に乾燥して目的化合物１
５．９ｇ（６２％の収率）を得た。

このものの融点はその著しい吸湿性から測定することが
できなかった。

〔α〕♂’　＝−４４，４°（Ｃ−１、メタノール）Ｒ
，’　＝０．３２　；　Ｒｆ’　＝０．３７　；　Ｒオ
”３＝０．２１゜工程（５）　：　Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇ］、
ｎ−Ｐｒｏ−ＮＩＩＥｔ　（分子量：５１’８．５７）
の製造。

Ｈ−Ｇ］、ｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ　　７　ｇ　（２６ミ
リモル）をＤＭＦ　５０ｍＱ中に溶かし、これを０°Ｃ
に冷却したのち、ＴＥＡを加えてｐＨ＝８に調整した。

次にＤＭＦ　４０ｍＱにＺ−Ｌｅｕ−ペンタクロロフェ
ニルエステル１４　ｇ　（２７，３ミリモル）を溶かし
た溶液をさらに加え４°Ｃにて一晩攪拌した。

翌日、この混合物を減圧下で蒸発し、残渣を酢酸エチル
７０ｍＱに溶かした。この有機質溶液を１．５ｎ＋Ｑの
０．０ＩＮ水酸化ナトリウムの冷水溶液で３回抽出し、
１５ｎ＋Ｑの水で３回洗った。この水酸化ナトリウムお
よび水での抽出液を一緒にし、酢酸エチル１０社で２回
洗った。この酢酸エチル抽出溶液を一緒し、無水硫酸ナ
トリウムを用いて乾燥し、減圧下で蒸発させた。残渣を
エーテルで完全に粉砕し、得られた固相物を濾過し、エ
ーテルを洗い、減圧下で乾燥させて目的化合物を１０．
４ｇ（収率７７％、ｍ、ｐ、　＝８４〜８８°Ｃ）を得
た。

〔α〕ら０＝−３２，８°（Ｃ＝１、メタノール）Ｒｆ
２＝０．９０工程（ｊ）　：　Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇ］、ｎ−Ｐｒｏ−ＮＩ
ＩＥｔ、ＨＢｒ（分子量：４６５．５）の製造。

氷酢酸に溶かした臭化水素の４Ｎ溶液７０＋ｎｆｌを、
氷酢酸５０ｍ１２にＺ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨ
Ｅｔ　７．６ｇ（１４，６ミリモル）を含む溶液中に加
え、この混合物を室温にて９０分間放置した。次にこの
混合物を攪拌下で水冷エーテル８００ｍＩｌ中に徐々に
注入した。３０分後、攪拌を止め、沈積した析出物を濾
過し、五酸化りんを用いて乾燥させ、目的化合物７−９
ｇ（ｍ、ｐ、　＝　１．４７℃）を得た。

〔α〕も’　＝−７２，８°（Ｃ＝１．２Ｎ酢酸）Ｒｆ
２＝　０．３０　；　Ｒｔ１１＝　０．８２゜工程（ｋ
）　：　Ｂｏａ−アントラニル酸（分子量２３７．２７
）の製造。

ＤＭＦ　２０ｍＱにアントラニル酸４ｇ（３０ミリモル
）を溶かした溶液にＴＥＡを加えてｐＨ＝８に調整した
。これに第３ブチルオキシ炭酸塩９ｒを加えたのち、こ
の反応混合物を室温にて一晩攪拌した。これを蒸発乾燥
させ、得られた濃い油状残渣を酢酸エチル＝２７− ５０ｍＱ中に溶解した。その有機質相を氷冷した０、０
１Ｎ硫酸２０ｍＱで３回洗い、ついで水２０ｔＱで３回
洗った。次に上記酢酸エチル溶液を無水硫酸すＩ−リウ
ムを用いて乾燥し、減圧下で蒸発させた。この油状残渣
は冷凍室内にて保持させたところ結晶化した。得られた
目的化合物は５．７ｇ（収率８０％）でｍ、ｐ。

は９１〜９３℃であった。

Ｒｅ９＝　０．８７　；　Ｒｆ”。＝　０．７９゜工程
（１）　：　Ｂｏａ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−
ＮＨＥｔ　（分子量＝６０３．８５）の製造。

ＤＭＦ　１０ｍｆｌにＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｎ
ＨＥｔ臭酸塩２．３ｇ（５ミリモル）を溶かした溶液を
０℃に冷却し、ついでＴＥＡを添加してｐＨ＝８に調整
した。次にＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール７５０ｍ
ｇ（５，５ミリモル）およびＤＣＣ１，１ｇ（５，５ミ
リモル）を加えたのち、ＤＭＦ　５ｍ１２にＢｏｃ−ア
ントラニル酸１．３　ｇ　（５，５ミリモル）を溶かし
た溶液を、これに徐々に滴下し、次に、この反応混合物
を室温にて４８時間攪拌した。その結果析出したＤＣＵ
を濾過し、溶液を減圧下に蒸発した。得られた残渣を酢
酸エチル５０ｍｆｌに溶かし、１０％クエ＝２８− ン酸２０ｍＱで３回洗い、ついで水２０ｍ（ｔで３回、
飽和炭酸水素ナトリウム２０ｍＱで３回、最後に飽和塩
化ナトリウム溶液２０＋＋＋Ｑで１回、それぞれ洗った
。上記酢酸エチル相を無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥
し、ついで減圧下に蒸発した。得られた油状残渣をエー
テルで粉砕した結果、青黄色の粉状析出物が得られ、こ
れを濾過し、エーテルで洗い目的化合物２．４ｇ（収率
８０％）を得た。

ｍ、ｐ、　＝１１９〜１２１°Ｃ，Ｒｆ’＝０．９１゜
アミノ酸の分析の結果、以下の値を得た。

Ｇｌｎ　Ｏ，９７；　Ｐｒｏ　１．０３　；　Ｌｅｕ　
１．００　；　Ａａ　Ｏ，９２゜工程（ｍ）　：　Ｈ−
Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ、　ＴＦＡ（
分子量＝５９９．６３）製造。

ジクロロメタンに溶かしたトリフルオロ酢酸の３０％溶
液１０ｍｆｌにＢｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇ］、ｎ−Ｐｒ
ｏ−ＮＨＥｔ　６０３ｍｇ（１ミリモル）を溶かし、こ
の溶液を室温にて２０分間攪拌した。ついで、減圧下で
、ＴＦＡを急速に除去し、残渣をエーテルの添加により
粉砕し、乾燥させて、目的化合物を５．１５ｍｇ　（収
率８６％）を得た。

Ｒｆｓ＝０．５２工程（ｎ）　：　Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔ
ｙｒ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ　（分
子量：　１．１８８．４８）の製造。

ＤＭＦ　１．ＯｍＱにＧｌｐ−Ｈｉ、５−Ｔｒｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｙｒ−Ｎ２Ｈ３ペンタペプチド（工程（ｇ）で得
られたもの）３５８ｍｇ（０，５ミリモル）を加え、こ
れを０℃に冷却したのち、６Ｎ塩酸０．３４ｍΩ、さら
に亜硝酸ナトリウム３７．７ｍｇを含む濃水溶液を攪拌
下で滴下した。５分後、Ｈ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｎ）ｌＥｔ、ＴＦＡテトラペプチド２３０ｍｇ（
０，５ミリモル）（ＤＭＦ　１ｍＲに溶かしたもの）お
よびＴＥＡ　０．３４ｍＱを０℃で添加した。必要に応
じ、反応混合物にＴＥＡを加えて中和し、０°Ｃで２時
間攪拌したのち、室温まで暖めた。次に減圧下で上記Ｄ
ＭＦを除去し、残渣を０．２Ｎ酢酸溶液とし、セファデ
ックスＧ−２５カラム（２Ｘ　９５ｃｍ）を用いクロマ
ミルグラフィにより分離した。この分離ののち、ＵＶ吸
収（２８０ｎｍ）およびＴＬＣを用いて測定した。適当
な分画を集め、凍結乾燥して目的化合物を得た（３１５
ｍｇ、収率５２％）。

Ｒｆ”　＝０．５８　；　Ｒｆ’　＝０．８３　；　Ｒ
ｆ’　＝０．７２アミノ酸分析の結果は以下の通りであ
る。

Ｓｅｒ　Ｏ，９１；Ｇｌｎ　２．０３；Ｐｒｏ　Ｏ，９
５；Ｌｅｕ　］、、ＯＯ；Ｔｙｒ１．１０　；　Ｈｉｓ
　　１．０２　；　Ｔｒｐ　　Ｏ，８１；　Ａａ　　Ｏ
，９５゜矢Ｗ々（八ａ６．　ｄｅｓ　Ｇ１．ｙ”）−ゴナドリベリンエ
チルアミドの製造。

工程（ａ）　；　Ｚ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ
Ｅｔ　（分子量；４６５．４７）の製造。

Ｚ−Ａｒｇ（ＮＯ□）−Ｏｆ４７．３３　ｇ　（２９，
７ミリモル）およびＮ−ヒドロキシ−ベンゾ１〜リアゾ
ール１．０３４ｇを、ＴＨＦ７０ｍＱにプロリンエチル
アミド３．２４ｇ（２２，８ミリモル）を溶かした溶液
に加えた。この反応混合物を氷水バス中にて冷却し、次
に、ＴＨＦ　５０ｍ＋ｌ）にＤＣＣ５，３４ｇ（２５，
８ミリモル）を溶かした溶液をこれに攪拌下で滴下した
。この混合物を水冷下で５時間攪拌し、室温で２０時間
攪拌し、ついで濾過したのちＴＨＦで洗った。濾液を減
圧下で蒸発し、残渣をクロロホルムに溶かし、水酸化ア
ンモニウム／水（１：５）混合液３５ｍＱで３回、水２
０＋ｎＱで２回、ＩＮ塩酸３５ｍｆｌで３回、最後に水
２０ｍ１ｌｌで３回、連続的に洗った。上記クロロホル
ムによる溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した
のちクロロホルムで洗い、っ＝３１− いで濾液を蒸発した。残渣をＴＨＦ　３５ｍＱと酢酸エ
チル５０ｍＱとからなる混合液中に溶かし、濾過し、Ｔ
ＨＦと酢酸エチルとからなる混合物（１：２）３０ｍＱ
で洗った。この溶液を蒸発させたのち、エチルエーテル
１．００ｍＭを、この固相の気泡質残渣に加えた。

得られた生成物を濾過し、エーテルで洗い、減圧下で乾
燥して目的化合物９．６９　ｇ　（９８％の収率）を得
た。ｍ、ｐ、＝１２５℃。

〔α〕♂’＝＝−４２，５°（Ｃ＝１、メタノール）Ｒ
１３＝　０．５　；　Ｒｐ１２＝　０．７２゜工程（ｈ
）　：　Ｚ−Ｌｅｕ−ＡｒＨ（Ｎｏ２）−Ｐｒｏ−ＮＨ
Ｅｔ　（分子量＝５７８．６５）の製造。

氷酢酸３０ｍＭ中にＺ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−Ｐｒｏ−、
ＮＨＥｔ５．６　ｇ（］、１．７３ミリモル）を溶かし
た溶液に、氷酢酸に臭化水素を溶かした４Ｎ溶液５５ｎ
＋Ｑ、を加えた。この反応混合物を室温にて９０分間放
置したのち、ａｂｓエーテル２５０ｍＱを加え、これを
１時間放置した。次に上澄液を分離したのち、エーテル
１００ｍＱ、を残渣に加えた。これを１５分間放置した
のち、この混合物を濾過し、さらにエーテルを完全に洗
った。得られた固相の吸湿性物質を五酸化リンおよび水
酸化ナトリウムを用い減圧下で乾燥させた。その結果、
やや吸湿性の生成物６　、４４　、、を得た。

上記のジペプチドエチルアミド臭酸塩６．０／Ｉ　ｇ（
１１，０ミリモル）をタロロホルム１５０社中にｌｔ！
８？蜀させ、ついでＴＥＡを５．５ｍｇ加えた。この懸
濁物は徐々に溶解したが、これにＴＥＡをさらに２　、
５ｍ（１加えて完全な溶液とした。次に、クロロホルム
６５ｍＱに２−Ｌｅｕ−ＯＰＣＰ　６．４　ｇを加えた
溶液を上記反応溶液に滴下し、それを−晩攪拌した。翌
日、この混合液をＩＮ塩酸で、次に飽和塩化ナトリウム
溶液および２Ｎ水酸化アンモニウム溶液で、最後に再び
飽和塩化ナトリウム溶液で抽出をおこなった。その有機
質相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で蒸発させ
た。得られた残渣をエーテルで完全に粉砕し、その固形
分を濾別し、エーテルで洗い、減圧下で乾燥した結果、
粗生成物５．５　ｇ　（８４，６％の収率９を得た。

この得られた保護された１〜リペプチドエチルアミドを
若干温めつつ酢酸エチル３０ｍ＜ｉ中に溶かし、活性炭
を用いて透明化し、酢酸エチル］、Ｏｎ＋Ｑで２回洗っ
た。この濾液にエチルエーテル７５社を滴下した。生成
した油状の沈積物は急速に固化した。約２時間放置した
のち、この混合物を濾過し、酢酸エチル／エーテル（２
：３）混合液で洗い、さらにエーテルで洗ったのち、減
圧下で乾燥して目的化合物４．１ｇ（収率７４．３％）
を得た。

ｍ、ｐ、＝１１６−］−１１８°Ｃ１α〕も’＝５７．０°（Ｃ＝１、メタノール）Ｒｆ３
＝０．７４　；　Ｒｆ４＝０．４９゜工程（ｃ）　：　
Ｈ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　（ＮＯｚ　）−Ｐｒｏ−ＮＩＩＥ
ｔ、ＨＢｒ　（分子量：　５３７．４）の製造。

氷酢酸に臭化水素を溶かした溶液ＩＱｍ１２にＺ−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ　（Ｎｏ２）−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ　トリペプ
チド１．１８ｇ（２ミリモル）を含む溶液を室温にて１
時間攪拌した。これに無水エーテル］、００ｍ１ｌｉを
加えたのち、得られた粉状析出物を濾別し、得られた青
黄色粉体を乾燥して吸湿性の目的化合物１　、３０、−
を得た。Ｒｆ、＝０．１４゜工程（ｄ）　：　Ｂｏｃ−
Ａａ−ＯＰＥＰ（分子ｆｉｌ　：　４０３．３２）の製
造。

ＴＨＦ　２０ｍＱにＢｏｃ−アントラニル酸２．／ｌ　
ｇ　（１０ミリモル）を溶かした溶液を０℃に冷却し、
ついでＤＣＣ２，２ｇ　（１１ミリモル）およびペンタ
フルオロフェノール２．０　ｇ　（ＴＨＦ　１０ｍｆｌ
に溶かしたもの）を攪拌下で添加した。この混合物を０
℃にて３時間、さらに室温にて一晩攪拌した。この溶液
を濾過し、析出物を酢酸エチル３０ｍΩに溶かし、つい
で水冷の１０％クエン酸１０ｍＱで３回、冷水１０＋＋
＋Ｑで３回、飽和炭酸水素ナトリウム１０ｍΩで３回、
最後に水］−０Ｊで３回、連続的に洗った。上記酢酸エ
チル相を無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥したのち、濾
過し、ついで減圧下で蒸発した。これを４℃に保ったと
ころ、油質残渣は結晶化した。この得られた目的化合物
は収量が３．０６ｇ（収率７６％）であった。

Ｒ（９＝０．９０　；　Ｒｆ１０＝０．８５゜工程（ｅ
）　：　Ｂｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−ＡｒＢ（Ｎｏ２）−Ｐ
ｒｏ−ＮｔｌＥｔ（分子量：　６７５．７５）の製造。

ＤＭＦ　５ｍｆｌにＨ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ＮＯ□）−Ｐ
ｒｏ−Ｎ）ＩＥｔ　、　ＨＢｒ　トリペプチド塩１．０
７ｇ（２ミリモル）を溶かした溶液を０℃に冷却し、つ
いでＤＭＦ　５ｍＱにＴＥＡ　０．２８＋Ｊ（２ミリモ
ル）およびＢｏｃ−Ａａ−ＯＰＥＰ　８０６ｍｇ（２ミ
リモル）を溶かした溶液を加えた。この溶液をＴＥＡの
添加によりｐＨ＝８に調整し、昇温させ、ＴＥＡ添加に
よりｐＨ＝８に保ちながら２０℃にて４８時間攪拌し続
けた。

ついで減圧下でＤＭＦを除去し、残渣を酢酸エチル５０
ｍＱ中に溶かし、ついで１０％クエン酸で３回、水２０
ｍｆｌで３回、飽和炭酸水素ナトリウム２０ｍＱで３回
、最後に飽和塩化ナトリウム２０ｍＱで１回、連続的に
洗った。上記酢酸エチル溶液を無水硫酸ナトリウムで乾
燥させたのち、濾過し、さらに減圧下で蒸発させた。得
られた油状残渣をエーテルで粉砕化し、その固相分を濾
過して目的化合物１．．０５ｇ　（４２率７７．８％）
を得た。

Ｒｆ３＝０．９０　；　Ｒ，ｇ＝０．９１　；　Ｒｆ’
０＝０．９６゜工程（ｆ）　：　Ｂｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ　（分子量＝６３０．７４
）の製造。

５０％酢酸５０ｍｆｌにＢｏＣ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｃ
　（ＮＯ□）−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔテトラペプチド］、、
Ｏｇ　（１，，５ミリモル）を溶かした溶液を４時間に
わたり１０％パラジウム担持チャーコール触媒４００ｍ
ｇの存在下で水素添加処理した。ついで、この触媒を濾
別したのち溶液を蒸発させて、残渣をエーテルで完全に
粉砕し、目的化合物を７７７ｍｇ　（収率８２．５％）
得た。

Ｒｆ”＝０．４５゜工程（ｇ）　：　Ｈ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−
ＮＨＥｔ、　（ＴＦＡ）２（分子量：　７２４．６７）
の製造。

ＴＦＡ　５＋＋＋＋ＱにＢｏｃ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ−ＮＨＩＥｔテトラペプチド６３０ｍｇ（］ミ
リモル）を溶かした溶液を室温にて２０分間攪拌した。

このＴＦＡをついで急速に減圧下にて急速に除去したの
ち、残渣をエーテルで粉砕し、ついで濾過、乾燥して目
的化合物を６４８．５ｍＨ（収率８９．５％）を得た。

Ｒｆ”　＝０．３４　：　Ｒｆ″＝０．７６エ程（ｈ）
　：　Ｇｌｐ−Ｈｊ、ｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａ
ａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ　、　ＣＨ３Ｃ
Ｏ２Ｈ（分子量：　１，２７６．５４）の製造：ＤＭＦ
　１０ｍＱにＧｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ
−Ｎ２Ｈ３ペンタペプチド（上記実施例１の工程（ｇ）
で得たもの）３５８ｍＨ（０，５ミリモル）を溶かした
溶液を一１０℃に冷却し、最初に６Ｎ塩酸０．３４ｍｆ
ｌ、次に亜硝酸ナトリウムを３７．７ｍｇ含む濃縮した
水溶液をそれぞれ攪拌下にて滴下した。５分後、ＤＭＦ
　ＩｍｆｌにＨ−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨ
Ｅｔ、（’］下Ａ）２テトラペプチド３６２．３ｍｇ（
０，５ミリモル）を溶かした溶液およびＴＥＡ　０．３
４ｍＱを一１０°Ｃで添加した。この混合物を一５℃に
て１時間攪拌し、さらに０℃で］時間攪拌し、ついで放
置して室温迄加熱した。次に、ＤＭＦを減圧下で急速に
除去し、残渣を０．２Ｎ酢酸に溶かし、セファデックス
Ｇ−２５カラム（２Ｘ　９５ｃｍ）にてクロマトグラフ
イーにより精製した。適当な分画を集め、凍結乾燥して
目的化合物を３６５．７ｍｇ（収率５７．３％）を得た
。

Ｒｆ’　＝０．６５　；　Ｒｆ’　＝０．４９　；　Ｒ
ｆ″＝０．６９゜又、アミノ酸分析結果は以下の通りで
あった。

Ｓｅｒ　Ｏ，８７；Ｇｌｕ　Ｏ，９９；Ｐｒｏ　］、、
０２；Ｌｅｕ　１．００；ＴｙｒＯ，９７；　Ｈｊ、ｓ
　１．．０３　；　Ｔｒｐ　Ｏ，８２；　Ａａ　Ｏ，９
］　；、　Ａｒ（５１，ｏ］、。

実施例式（Ｍａｂ’）−ゴナドリベリンの製）前工程（ａ）　：
　Ｂｏｃ−３−アミノ−安息香酸（Ｂｏｃ−Ｍａｂ）　
（分子量：　２３７．２５）の製造。

ＤＭＦ　１．０ｍＱに３−アミノ−安息香酸］−，Ｏｇ
　（７，５ミリモル）を溶かし、これにＴＥＡを添加し
てｒ、１Ｈ＝８に調整した。ついで第３ブチルオキシ炭
酸塩２．５ｇを加え、この混合物を１日攪拌した。つい
でこの反応混合物を実施例１の工程（ｋ）と同様に処理
し、目的化合物１．４ｇ（収率８０．９％）を得た。

ｍ、ｐ、＝９２°Ｃ３Ｒｆ１０＝０．８８　；　Ｒｆ”　＝０．８４゜工程（
ｂ）　：　Ｂｏｃ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｎｏ２）
−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ。

（分子量：　７０４．７８）の製造。

ＤＭＦ　１０ｍｆｌにＨ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　（ＮＯ□）
−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２，ＴＦＡ塩〔エム・ヤナイハ
ラ（Ｍ、　Ｙａｎａｊ、ｈａｒａ）等：ジャーナル・オ
ブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ、　Ｍｅｄ。

Ｃｈｅｍ、）　１６，３７３（１９７３））１．５　ｇ
　（２，５ミリモル）を含有する溶液をＯ′Ｃに冷却し
、これにＴＥＡを加えてｐ　Ｈ＝８に調整した。ついで
Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール３８３ｍｇ（２，
５ミリモル）およびＤＣＣ５１５ｍｇ（２，５ミリモル
）をこの溶液に加え、さらにこれに、ＤＭＦ　３ｍＱに
Ｂｏｃ−Ｍａｂ　５９３ｍｇ（２，５ミリモル）を溶か
した溶液を滴下した。この反応溶液を室温にて攪拌しな
がら４８時間保った。ついで、析出したＤＣＵを濾過し
、溶液を減圧下で蒸発させた。油状残渣は酢酸エチル３
０ｎ＋Ｑに溶かし、１０％クエン酸１．０ｍＱで３回、
水１０ｍＱで３回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液１．０
　ｍ　Ｄ、で３回、最後に飽和塩化ナトリウムｌＯｍｆ
ｌで１回、連続的に洗った。この酢酸エチル相を無水硫
酸す１ヘリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させた。

エーテルを用いて油状残渣を完全に粉砕したのち、白色
の結晶質析出物を濾別し、エーテルで洗って目的化合物
１．２ｇ（収率６８％）を得た。

ｍ、ｐ、　＝　１３２−１３３℃；　Ｒ，’　＝０．４
３工程（ｃ）　：　Ｂｏｃ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−ＡｒＨ−
Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｎｉｌ、、　（分子量：　６５９．７
８）の製造。

実施例２の工程（ｆ）と同様に処理して、ＢｏＣ−Ｍａ
ｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　（ＮＯ□）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｎ
Ｈ，ペンタペプチド１．０ｇ（１，５ミリモル）から保
護基を除去し、目的化合物を７７５ｍｇ　（収率：　７
８．３％）得た。

Ｒｆ２＝　０．５２工程（ｄ）　：　Ｈ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−ＮＨ２，（ＴＦＡ）２（分子量：　７５３．
７２）の製造。

ＴＦＡ　５ｎ＋ＱにＢｏｃ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−
Ｐｒｏ−Ｇ］、ｙ−ＮＨ□ペンタペプチドアミド６７０
ｍｇ（１ミリモル）を加え、この溶液を室温にて２０分
間攪拌した。ついでＴＦＡを減圧下で急速に除去し、油
状残渣をエーテルを用いて粉砕し、粉状物を濾過、乾燥
して目的化合物を６８９ｍｇ（収率９１．５％）得た。

Ｒｚ１＝　０．５０　；　Ｒｐ’　＝　０．５３　；　
Ｒｆ’　＝　０．４２゜工程（ｅ）　：　Ｇｌｐ−１（
ｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒ
Ｈ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨｚ　（分子量：　１２４４．
３９）の製造。

ＤＭＦ　１．Ｏｍｆｌに（ｉｌｐ−１（ｉｓ−Ｔｒｐ−
Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｎ２Ｂ、ペンタペプチド（実施例１の
工程（ｇ）で得たもの）３５８ｍｇ（０，５ミリモル）
を加え、この溶液を一１０℃に冷却した。

次にこれに、６Ｎ塩酸０．３４ｍＱ、さらに亜硝酸ナト
リウム３７．７ｍｇを含む濃水溶液を加えた。５分後、
ＤＭＦ　１＋ＪにＨ−Ｍａｂ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｎ）１２（ＴＦＡ）２ペンタペプチド３７７
ｍｇ（０，５ミリモル）を溶かした溶液を一１０°Ｃで
添加した。この反応混合液を０℃で２時間攪拌したのち
、放置して室温まで加熱した。翌日、この混合液を減圧
下で蒸発させた。さらに、この粗デカペプチド残渣を、
ブタノール／プロパツール／酢酸／水（１，５：１：４
：２０）混合液を用いてセファデックスＧ−２５カラム
（２Ｘ　９５ｃｍ）によりクロマトグラフィによる′Ｍ
製を行なった。さらにその分画を用い、ＴＬＣおよびＵ
Ｖ吸収による測定をおこなった。デカペプチドを含む分
画を凍結乾燥し、ついで希酢酸を用いて、この操作を繰
り返した。

その結果、目的化合物３２３ｍｇ　（収率５２％）を得
た。

Ｒｆ”　＝０．３１　；　Ｒｆ７＝０．４９　；　Ｒｆ
’　＝０．６２゜アミノ酸の分析結果は以下の通りであ
った。

Ｓｅｒ　Ｏ，９１；Ｇｌｕ　１．．０３；Ｐｒｏ　Ｏ，
９７；Ｇｌｙ　１．１０；Ｌｅｕ］、００；Ｔｙｒ　Ｏ
，９７；Ｈｉｓ　１．０５；Ｔｒｐ　Ｏ，８７；Ｍａｂ
　Ｏ，９０；Ａｒｇ　１．．１１−。

造動ｙづ１父この化合物は公知の固相ペプチド合成法により合成した
〔メリフィールド、アール・ビー（Ｍｅｒｒｉｆｊｅｌ
ｄ、　Ｒ，Ｂ、）　：ジャーナル・オブ・アメリカンケ
ミストリ・オブ・ソサイアテイ（Ｊ、　Ａｍ。

Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、）８５．２１４９（１９６３）
参照〕。

ベンズヒドリルアミン、ＨＣ］樹脂（０，４ミリモル／
ｇ、、　Ｐｊ、ｅｒｃｅ）を０．７５ｇ（０，３ミリモ
ル）をジクロロメタン中にて２時間、膨潤させた。つい
で、アミノ酸を用いたアシル化の工程において、以下の
サイクルを繰り返した。

各段階ののちにニンヒドリンテス１〜をおこなった〔イ
ー・カイザー（Ｅ、Ｋａｊ−ｓｅｒ）等：アナリテカル
バイオケミストリー（Ａｎａｌ、　Ｂｊ、ｏｃｈｅｍ、
　３４．５９５（１９７０）〕。上記サイクルは遊離ア
ミノ基が検出されたときは段階５から始めて繰り返した
。最後の段階を終えたのちのＧｌｐ−Ｈｊ−ｓ　（Ｔｏ
ｓ）−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ　（ｏＢｚｌ）−Ｔｙｒ（ｏＢｚ
ｌ）−Ａａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−Ｐｒｏ−Ｇ
］、ｙペプチド樹脂の重量から、目的化合物の収量は３
４４ｍｇ（ΔＷとして６５％）であることを示した（保
護されたペプチドの分子量は１７６４．９２である）。

工程（ｂ）フッ化水ｐＢ用いた全文保護基を除去すると同時にペプチドを液体無水フッ化水
素を用いる甲一工程により樹脂から分裂させた〔ニス・
サカイバラ（Ｓ、５ａｋａｊｂａｒａ）他：Ｂｕｌ、１
．　Ｓｏｃ、　Ｊａｐａｎ　４０．２１．６４（Ｉ９６
７））。前の工程（ａ）で得たペプチド樹脂に対し、ア
ニソール５ｍ＋２およびジチ第１〜レイトール１００ｍ
３を加えた。ついでフッ化水素２０ｍ＋Ｑをこの混合物
に加え、１時間攪拌を続けた。その後、窒素流を用いて
上記のフッ化水素を除去し、残渣をａｂｓ、エーテル中
に懸濁させ、ついで濾過した。この固相残渣を５０％酢
酸で洗ったのち、この濾液を温度３７℃で蒸発した。こ
のようにして得られたデカペプチドＨＦ塩（３７１ｍｇ
）を直接、ゲルクロマトグラフィーにかけた。

工程（Ｃ）ゲルクロマトグラフィー前の工程（ｂ）で得られた生成物を２０％酢酸を溶出液
としてセファデックスＧ−２５カラム（２，５Ｘ　１０
０ｃｍ）を用い精製した。この精製ののち、さらにＵＶ
吸収（２８０ｎｍ）およびＴＬＣに」二る測定をおこな
った。

デカペプチドを含む分画を集め、凍結乾燥させて目的生
成物を２０２＋ｎｇ　（５４％収率）を得た。

工程（ｄ）聚爪朋肚朋Ｃ１＆−シリカゲルＬＲＰ−１（１３−２４μｍ、ｌＩ
ｌｈａｔｍａｎ）型製剤用ＨＰＬＣカラム（２，５Ｘ　
４５ｃｍ）を用いた。平衡は１５％のメタノールおよび
８５％の２０％酢酸溶液からなる混合溶液を用いておこ
なった。平衡に達したのち、ゲルクロマトグラフィーに
より精製した生成物２０２ｍｇを上記混合物に溶かして
適用した。溶出はメタノール１５％と２０％酢酸８０％
とからなる混合物から始まって、メタノール２５％と２
０％酢酸７５％からなる混合物、メタノール４０％と２
０％酢酸６０％とからなる混合物、最後にメタノール８
０％と２０％酢酸２０％とからなる混合物を用いた直線
的勾配系によりおこなった。これらの操作は３．５　Ｘ
　１０５ｐａの圧力下で、流速２ｍＱ／分で行なった。

また分画を２８０ｎｍの吸収により検査し、その含量は
ＴＬＣを用いてコントロールした。このようにして得ら
れた純粋な（Ａａ″）−ゴナドリベリン最終製品は凍結
乾燥後１２３ｍｇ　（収率６１．０％）であった。

ｍ、ｐ、　＝　１８５−１９２°Ｃ０〔α〕も’　＝−６３，２°（Ｃ＝１．０．ＩＮ酢酸）
Ｒｆ１＝０．１７゜アミノ酸分析の結果は以下の通りであった。

Ｓｅｒ　Ｏ，９２；　Ｇ］、ｕ　１．０３　；　Ｐｒｏ
　１．１．　；　Ｇ］、ｙ　Ｏ，９７；　ＬｅＩ４１．
００；Ｔｙｒ　Ｏ，９５；Ｈｉｓ　１．０８；Ｔｒｐ　
Ｏ，８３；Ａａ　Ｏ，９０；Ａｒｇｌ、、０５゜実施例５，６下記のような化合物を実施例４の方法を用いて製造した
。

実施例５および６の化合物のアミノ酸分析の結果は以下
の通りである。

実施例７筋肉内、皮下又は静脈内投与用の注射液の製剤。

（ａ）一般式（Ｔ）のゴナドリベリン誘導体を蒸留水、
生理食塩水又は緩衝液に濃度、１〜１０ｍｇ／ｎ＋Ｑ、
どなるように溶解した。この濾過により除菌し、ついて
ゴナドリベリン誘導体が５０〜５００μｇ含まれるよう
にしてアンプル内に充填し、凍結乾燥したのち最後にア
ンプルを封止した。

投与する前にアンプル内に１〜１．Ｏｍρの蒸留水を加
え溶液とした。これにより所望投与量を注射することが
できた。

（ｂ）一般式（１）のゴナドリベリン誘導体を生理食塩
水又はベンジルアルコールにそれぞれ２０〜５００μｇ
／ｍｆｌの濃度に溶かし、アンプルに充填し、密封した
。この溶液は直接投与するのに適したものであった。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記一般式（ I ）、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（但し、Ｘ＿１
は、２−アミノ安息香酸基又は３−アミノ安息香酸基；
Ｘ＿２は、ロイシル基、トリプトフィル基又はフェニル
アラニル基；Ｘ＿３は、アルギニル基、ロイシル基、グ
ルタミニル基；Ｘ＿４は、グリシルアミド基又はエチル
アミド基）からなるゴナドリベリンノナペプチドエチルアミド又は
デカペプチドアミド誘導体、およびその酸付加塩。
（２）下記一般式（ I ）、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（但し、Ｘ＿１
は、２−アミノ安息香酸基又は３−アミノ安息香酸基；
Ｘ＿２は、ロイシル基、トリプトフィル基又はフェニル
アラニル基；Ｘ＿３は、アルギニル基、ロイシル基、グ
ルタミニル基；Ｘ＿４は、グリシルアミド基又はエチル
アミド基）からなるゴナドリベリンノナペプチドエチルアミド又は
デカペプチドアミド誘導体、およびその酸付加塩を有効
成分として含む黄体化および卵胞刺激ホルモン放出用薬
剤組成物。
（３）下記一般式（ I ）、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（但し、Ｘ＿１
は、２−アミノ安息香酸基又は３−アミノ安息香酸基；
Ｘ＿２は、ロイシル基、トリプトフィル基又はフェニル
アラニル基；Ｘ＿３は、アルギニル基、ロイシル基、グ
ルタミニル基；Ｘ＿４は、グリシルアミド基又はエチル
アミド基）からなるゴナドリベリンノナペプチドエチルアミド又は
デカペプチドアミド誘導体、およびその酸付加塩を有効
成分とし、獣医薬として使用可能な添加剤を含んでなる
生殖促進用組成物。
（４）下記一般式（ I ）、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（但し、Ｘ＿１
は、２−アミノ安息香酸基又は３−アミノ安息香酸基；
Ｘ＿２は、ロイシル基、トリプトフィル基又はフェニル
アラニル基；Ｘ＿３は、アルギニル基、ロイシル基、グ
ルタミニル基；Ｘ＿４は、グリシルアミド基又はエチル
アミド基）からなるゴナドリベリンノナペプチドエチルアミド又は
デカペプチドアミド誘導体、およびその酸付加塩の製造
方法であって、（ａ）適宜保護されたアミノ酸を段階的又は断片的縮合
により縮合し、適宜保護基を除去する工程、又は（ｂ）固相ペプチド合成法により、上記の適宜保護され
たアミノ酸を固相担体に対し適当な順序で段階的に縮合
し、さらに最終生成物を酸性又はアルカリ性分裂により
上記固相担体から分離し、上記分裂の前後において同時
に上記保護基を適宜除去する工程、を具備してなることを特徴とする方法。
（５）上記工程（ａ）が下記一般式（II）の保護された
ペンタペプチドアジドを、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｎ＿３（I
I）下記一般式（III）のテトラペプチド又はペンタペプ
チド、Ｘ＿１−Ｘ＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（III）（但
し、Ｘ＿１、Ｘ＿２、Ｘ＿３、Ｘ＿４は前記同様）と縮
合させることからなる特許請求の範囲第（４）項に記載
の方法。
（６）固相担体が、ベンズヒドリルアミン樹脂又はクロ
ロメチル化ポリスチレン樹脂である特許請求の範囲第（
４）項に記載の方法。
（７）上記（ｂ）工程が、保護基を有する最終生成物の
固相担体からの分離をフッ化水素による処理、又は加エ
チルアンモニア分解を用いておこなわれる特許請求の範
囲第（４）項に記載の方法。
（８）下記一般式（ I ）、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（但し、Ｘ＿１
は、２−アミノ安息香酸基又は３−アミノ安息香酸基；
Ｘ＿２は、ロイシル基、トリプトフィル基又はフェニル
アラニル基；Ｘ＿３は、アルギニル基、ロイシル基、グ
ルタミニル基；Ｘ＿４は、グリシルアミド基又はエチル
アミド基）からなるゴナドリベリンノナペプチドエチルアミド又は
デカペプチドアミド誘導体、およびその酸付加塩を下記
のいずれかの工程、（ａ）適宜保護されたアミノ酸を段階的又は断片的縮合
により縮合し、適宜保護基を除去する工程、又は（ｂ）固相ペプチド合成法により、上記の適宜保護され
たアミノ酸を固相担体に対し適当な順序で段階的に縮合
し、さらに、最終生成物を酸性又はアルカリ性分裂によ
り上記固相担体から分離し、上記分裂の前後において、
同時に上記保護基を適宜除去する工程により製造し、さらに、それを薬剤として使用可能な担
体又は添加剤と混合することを特徴とする黄体化および
卵胞刺激ホルモン解放用医薬組成物の製造方法。
（９）下記一般式（ I ）、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｘ＿１−Ｘ
＿２−Ｘ＿３−Ｐｒｏ−Ｘ＿４（ I ）（但し、Ｘ＿１
は、２−アミノ安息香酸基又は３−アミノ安息香酸基；
Ｘ＿２は、ロイシル基、トリプトフィル基又はフェニル
アラニル基：Ｘ＿３は、アルギニル基、ロイシル基、グ
ルタミニル基；Ｘ＿４は、グリシルアミド基又はエチル
アミド基）からなるゴナドリベリンノナペプチドエチルアミド又は
デカペプチドアミド誘導体、およびその酸付加塩を下記
のいずれかの工程、（ａ）適宜保護されたアミノ酸を段階的又は断片的縮合
により縮合し、適宜保護基を除去する工程、又は（ｂ）固相ペプチド合成法により、上記の適宜保護され
たアミノ酸を固相担体に対し適当な順序で段階的に縮合
し、さらに、最終生成物を酸性又はアルカリ性分裂によ
り上記固相担体から分離し、上記分裂の前後において同
時に上記保護基を適宜除去する工程により製造し、さらにそれを、獣医薬として使用可能な
担体又は添加剤と混合することを特徴とする脊椎動物の
生殖作用促進用組成物の製造方法。