JPH0368040B2

JPH0368040B2 -

Info

Publication number: JPH0368040B2
Application number: JP22887987A
Authority: JP
Inventors: Tsunematsu Takemoto; Shigenobu Arihara; Toshio Odajima; Shinichi Hayashi; Kiju Nishimoto; Noriko Takagi; Yoshe Watanabe
Original assignee: ROOTO SEIYAKU KK
Current assignee: ROOTO SEIYAKU KK
Priority date: 1987-09-11
Filing date: 1987-09-11
Publication date: 1991-10-25
Also published as: JPS6399094A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は抗癌作用を有する新規ダンマラン系化
合物に関する。

本発明に係る化合物は以下の式（）で表わさ
れる：〔式中、gluはβ−Ｄ−グルコピラノシル基を
表わす〕。

本発明者らは、副作用の少ない優れた抗癌剤を
得る目的で種々検討した結果、アマチヤヅルに含
まれるダンマラン系のサポニン類に優れた抗腫瘍
活性を示す物質が存在することを見い出し先に特
許出願したが（特願昭56−157925号、昭和56年10
月２日出願）、更に研究を続けた結果、これらの
サポニン類を酸、アルカリあるいは酵素などで加
水分解して得られるプロサポゲニンあるいはサポ
ゲニンの内、前記式（）で示される化合物が強
い抗腫瘍活性を有することを見い出し、本発明を
完成するに至つた。

式（）で示される化合物は本発明者らによつ
て見い出された新規化合物である。この化合物
（）は、本発明者らにより、Mh−２と命名さ
れた。

現在臨床に用いられている多くの抗癌剤は、い
わゆる細胞毒であつて、腫瘍細胞を殺滅するほ
か、正常細胞にも大きな損傷を与えるので、強い
副作用を避けることができない。本発明に係る式
（）で示される化合物は、後に詳述する様に、
子宮頚部癌細胞、黒色腫瘍細胞、肺癌細胞の増殖
を10μｇ／ml以下の微量で顕著に抑制し、また腹
水癌細胞を移植したマウスに連続投与すると対照
群に比較して明らかな延命効果を示すほか、腫瘍
細胞の増殖を抑制する10μｇ／mlの濃度では、ほ
とんど細胞に損傷を与えないという顕著な特徴を
有するものである。

式（）で示される化合物は、既述した様に、
アマチヤヅルサポニンを加水分解して得られるプ
ロサポゲニンであつて、これらは極めて毒性の低
い化合物である。このことは、アマチヤヅルが古
くから食用、飲用に供せられて来たことから明ら
かである。即ち、アマチヤヅルは中国の明の時代
から救荒本草に記載されてきた植物で、飢饉の時
の食糧として、野菜として、あるいはアマチヤの
代用品として用いられてきた。その毒性は極めて
低く、アマチヤヅル乾燥エキスの急性毒性をラツ
トを用いて調べた結寡、経口投与のLD₅₀は10
ｇ／Kg、腹腔内投与でも1.85ｇ／Kgであり、また
８ｇ／Kg／日の割合で１カ月間連続投与しても、
一般症状、体重、飼料摂取量、飲水量、尿、血
液、組織体重、病理学的所見などに何ら異常は認
められなかつた。この様に、アマチヤヅルエキス
の毒性の低い事は、その主成分たるサポニン、お
よびそれが生体内で酸や酵素類によつて加水分解
されて生じるプロサポゲニンやサポゲニンの毒性
が極めて低いことを示すものである。

式（）の化合物は、後記実施例１に記載した
方法で製造することができる。

式（）の化合物は、極めて安定であり、経口
および非経口用の種々の剤型、例えば錠剤、丸
剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤、注射剤、シロツ
プ剤、軟膏剤などに製剤化することができる。こ
これらの製剤を製造するには、有効成分としての
式（）の化合物を、乳糖、デンプン、シヨ糖、
デキストリン、セルロース類、カンテン、ステア
リン酸マグネシウム、ケイ酸アルミニウム、タル
ク、アラビアゴム、ゼラチン、トラガント、水、
ベジタブルオイル、ポリアルキレングリコール、
流動パラフイン、ラノリン、ワセリン等の常用さ
れる医薬的担体と混合して適宜の剤型にすればよ
い、必要に応じて保存剤、安定化剤、乳化剤、溶
解補助剤などを混合してもよい。式（）の化合
物の投与量は、患者の年令、疾病の状態、体重、
年令、投与方法などによつて左右されるが、成人
に対する経口投与量は通常約50mg〜500mg／日で
ある。腹腔内投与、筋肉内投与、あるいは腫瘍部
位に直接投与する場合には、上記の用量を基準と
して、適宜増減すればよい。

本発明に係る化合物の適用範囲としては、皮膚
癌、子宮癌、肝癌、肺癌、胃癌、腹水癌などが挙
げられる。

以下に本発明に係る式（）の化合物の薬理実
験について記載する。

試験１子宮頚部癌細胞に対する作用培養液：培養液はHAMの合成培地Ｆ−10およ
びＬ−15の３：１の混液に、牛胎児血清を添加し
て用いた。血清濃度は、培養細胞数が最大値の1/
２になるように予め検討し、２％に設定した。

操作方法：各種濃度の被験試料の培養液溶液
4.5mlを径60mmの培養皿に取り、これに子宮頚部
癌細胞（HeLa S3）培養液懸濁液0.5ml（細胞数
５×10⁴個を含む）を加え、５％CO₂インキユベ
ーター内で４日間、37℃で培養した。培養液を吸
引して除き、生理食塩水で洗浄後、0.125％トリ
プシン−Hank′s溶液0.5mlを剥離液として加え、
培養皿に付着した細胞を剥離し、更に4.5mlの生
理食塩水を加えて細胞を懸濁させ、トーア自動血
球装置を用いて細胞数を測定した。結果を第１図
に示す。図から明らかな様に、化合物（）は、
10μｇ／ml以下の濃度で顕著な子宮頚部癌細胞の
増殖を抑制することがわかる。

試験２黒色腫瘍細胞に対する作用黒色腫瘍細胞（B16）培養液懸濁液0.5ml（細
胞数１×10⁵個を含む）を使用するほかは試験１
と同様の実験を行なつた。結果を第２図に示す。

試験３肺癌細胞に対する作用肺癌細胞（3LL）培養液懸濁液0.5ml（細胞数
１×10⁴個を含む）を使用するほかは試験１と同
様の実験を行なつた。結果を第３図に示す。

試験４腹水癌に対する作用２−メチルコランスレンを用いて白色マウス
（BALB／ｃ SrCL）に誘導した腹水癌細胞の腹
水懸濁液0.5ml（細胞数１×10⁶個を含む）を白色
マウス（BALB／ｃ，SrCL ６週令、雄）の腹腔
内に注入し、翌日より実験終了まで隔日に被験試
料の生理食塩水溶液（濃度：40mg／50ml）0.5ml
を腹腔内に注入し（投与量20mg／Kg／２日）、マ
ウスの生存日数を調べた。対照群には生理食塩水
を注入した。結果を第４図に示す。図から明らか
な様に、式（）の化合物投与群には、対照群に
比べて明らかな延命効果が認められた。

試験５細胞障害作用試験４の場合と同様にして得た腹水癌細胞の
Hank′s溶液懸濁液（１×10⁶個の細胞を含む）を
調製し、この懸濁液５mlに被験試料のエタノール
溶液（10μｇ／ml）10μを加え、37℃でインキ
ユベートした。インキユベート開始30分後から１
時間毎に細胞懸濁液100μを採取し、0.25％のト
リパンブルー溶液100μを加えて染色し、ヘモ
サイトを用いて総細胞数および染色されない生存
細胞数をカウントし、細胞生存率を求めた。結果
を第５図に示す。図から明らかな様に、被験試料
濃度が10μｇ／mlの場合、細胞の増殖は抑制する
ものの、細胞損傷作用はほとんど認められなかつ
た。

以下に本発明に係る化合物（）（Mh−２）
の製造実施例およびこの化合物を含有する抗癌剤
組成物の実施例を挙げる。

実施例１化合物（）（Mh−２）の製造２−α−ヒドロキシプロトパナキサジオール系
サポニンを主成分とし含有するアマチヤヅル総サ
ポニン２ｇを0.005M−NaH₂PO₄水溶液（pH4.0）
100mlに溶解し、セルラーゼ１ｇを加え、37〜38
℃で24時間撹拌した後、10％水性メタノール200
mlおよびセルラーゼ２ｇを加えて６日間撹拌す
る。この反応液をμボンダパツクC₁₈（日本ウオタ
ーズ社製）20ｇのカラムに入れ、50％水性メタノ
ール２で洗浄した後100％メタノール２で溶
出する。溶出液を減圧濃縮すると1.2ｇの残留物
が得られる。この残留物を、シリカゲル100ｇを
用いてカラムクロマトグラフイー（展開溶剤：ジ
クロロメタン／メタノール／酢酸エチル／水
（２：２：４：１））すると、Mh−２化合物
（）43mgおよびギノサポニンTN−１ 780mgが
得られる。

Mh−２は無色の結晶性粉末であり、その物理
化学的性状は以下の通りである。

融点：184〜６℃ 施光度：〔α〕_D＝＋20.6゜（Ｃ＝1.7、メタノール）溶解性：水、メタノールおよびエタノールに可
溶、酢酸エチルに難溶、ベンゼンおよびヘキ
サンに不溶。

1R（ν^KBr _naxcm^-1）：3400、1645、1155、1075、
1030、985（第６図参照）元素分析（C₃₆H₆₂O₉・2H₂Oとして）：ＣＨ計算値（％）：64.07 9.86 実測値（％）：64.35 9.81 実施例２錠剤 Mh−２ 5.0ｇ乳糖 12.4ｇ微結晶セルロース 12.4ｇコーンスターチ 0.1ｇステアリン酸マグネシウム 0.1ｇ上記成分をよく混合し、直打法により裸錠100
錠を製する。１錠（300mg）当たりMh−250mgを
含有する。

実施例３カプセル剤 Mh−２ 5.0ｇ乳糖 45.0ｇ上記成分をよく混和し、常法によりカプセル剤
250個を製する。カプセル１個は20mgのMh−２
を含有する。

実施例４顆粒剤 Mh−２ 20.0ｇ乳糖 376.0ｇステアリン酸マグネシウム 4.0ｇ上記の成分をよく混和し、乾式顆粒機により顆
粒400ｇを製する。顆粒１ｇはMh−250mgを含有
する。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図および第３図はそれぞれ子宮頚
部癌細胞、黒色腫瘍細胞および肺癌細胞の増殖に
対する化合物（）の抑制効果を示すグラフ、第
４図は腹水癌マウスに対する化合物（）の延命
効果を示すグラフ、第５図は化合物（）の細胞
障害作用の程度を示すグラフ、第６図はKBr法
による化合物（）の赤外吸収スペクトルであ
る。

Claims

【特許請求の範囲】１式：〔式中、gluはβ−Ｄ−グルコピラノシル基を
表わす〕で示される化合物。