JPH037300A

JPH037300A - グリチルレチン酸の誘導体およびその製造法

Info

Publication number: JPH037300A
Application number: JP17799489A
Authority: JP
Inventors: Tsutomu Furuya; 古谷　力; Tatsuo Aizawa; 会澤　辰男; Kokichi Tamura; 幸吉田村; Nobuhiro Otake; 大嶽　信弘
Original assignee: Maruzen Kasei Co Ltd
Current assignee: Maruzen Kasei Co Ltd
Priority date: 1989-03-01
Filing date: 1989-07-12
Publication date: 1991-01-14

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、医薬品として有用な新規グリチルレチン酸誘
導体およびその製造法に関するものである。

〔従来の技術〕

甘草から抽出されるグリチルリチンは、抗炎症剤、抗潰
瘍剤、抗アレルギー剤等に広く利用されているが、その
薬理作用は、グリチルリチンのアグリコンであるグリチ
ルレチン酸に基づくものであることが明らかにされつつ
ある。しかしながら、グリチルレチン酸は、長期間摂取
するといわゆる偽アルドステロン症による高血圧症、低
ナトリウム血症、浮腫など好ましくない副作用を招くの
で、それ自体を医薬として服用することはできない。

〔発明が解決しようとする課題〕

グリチルレチン酸から副作用のない医薬品となり得る誘
導体を得ようとする試みは幾つかあるが、薬品として有
用で製造も容易なものが得られた例は少ない。

本発明の目的は、従来知られていなかった新頬グリチル
レチン酸誘導体とその製造法を提供し、グリチルレチン
酸のすぐれた薬理作用を従来よりも広く活用できるよう
にすることにある。

〔課題を解決するｌ；めの手段〕

上記目的を達成することに成功した本発明は、下記一般
式で表される新規グリチルレチン酸誘導体：（式中、Ｒ
は水素原子または水酸基、Ｇｌｃはグルコース残基を表
す）すなわち、２トヒドロキシグリチルレチン酸β−Ｄ−グ
ルコシルエステルおよび２３．２８−ジヒドロキシグリ
チルレチン酸β−トグルコシルエステルを提供するもの
である。

上記グリチルレチン酸誘導体は、下記のような理化学的
性質を有する。

２８−ヒドロキシグリチルレチン酸β−Ｄ−グルコシル
エステル： ■　色および形状：無色固形物 ■　旋光度［α１１　：　ｌ　４６°（ｃ＝　０．４２
．　Ｍｅｏｌｌ）■　赤外吸収　νｍ　ｍ　ｍ　＋　Ｃ
Ｉｌ−’　（Ｋ　Ｂ　ｒ錠剤法）：　３４００（Ｏｌｌ
）２８００〜３０００　（ＣＨｚ）、　１７４０　（Ｃ
ｏｏ−Ｇｌｃ）１６６０　（ｃ＝ｃ−ｃ＝ｏ） ■ＦＡＢ−マススペクトルｍ／ｚ：　６７１　（［Ｍ＋
Ｎｘド）■Ｎ　Ｍ　Ｒ：　Ｃ−Ｃｆ（ｓ　（３［１，ｓ
）δ０．７＋、Ｑ、Ｈ，１，Ｎ、Ｌ、２６（８Ｈ，ｓ）
δ１．＋４　　Ｃ＝ＣＨ（１■、ｓ）δＳ、８７＝ＣＨ
（ＩＨ，ｂｄ）δ３．０３　　ｉｃＨ（ｌＨ，ｓ）δ２
．３６（１■、ｄｄ）δ２．６２　　（ｌｉｔ、ｄ）δ
６．Ｈ（ｌ［ｌ、ｍ）δ３．９Ｏ−ＣＨ２−ＯＨ（ＩＩ
Ｉ、ｄ）δ３．３６　（ｌｉｔ、ｄ）δ３．５６−ＣＨ
！−ＯＨ（ＩＨ，ｄｄ）δ４．２２　（ＩＨ，ｄｄ）δ
４．３２＝ＣＨ−ＯＨ（ｌｆｌ、ｄｄ）δ３．３４２３
、Ｈ−ジヒドロキシグリチルレチン酸β−Ｄ−グルコシ
ルエステル ■　色および形状：無色固形物 ■　旋光度［αｌＢ：１３０°（ｃ＝　１．６６、　Ｍ
ｅＯＨ）■　赤外吸収　ｖ　、、、、ｃｔｓ−’（ＫＢ
ｒ錠剤法）：　３４００（０１１）２８００〜３０００
　（ＣＢ２）、　１７６０　（ＣＯＯ−Ｇｌｃ）１６６
０　（Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｏ） ■ＦＡＢ−マススペクトルｍ／ｓ　：　６８７　（［Ｍ
＋Ｎｓド）■Ｎ　Ｍ　Ｒ：　Ｃ−ＣＨｓ　（３Ｈ，ｓ）
δ１．目、１．２３，１．Ｈ（６１１，Ｓ）δ０．９６
　　Ｃ＝ＣＨ（１１１，ｓ）δ５．８１＝ＣＨ（ＩＢ、
ｂｄ）δ３．Ｏ１＝ＣＨ（ＩＨ，ｓ）δ２．４８（１■
、ｄｄ）δ２，６３　　（Ｉｌｌ、ｄ）δ６．２７　　
（１■、１）δ３．９ｌ−ＣＨ２−ＯＨ（ｌｔｌ、ｄ）
δコ、６＋、４．１ＣＨ，−０Ｈ（１■、ｄｄ）９４．
２４，４．３４＝ＣＨ−ＯＨδ４．１５これらの新規グリチルレチン酸誘導体はグリチルレチン
酸と同様の薬効を示すが、グリチルレチンと違って、偽
アルドステロン症を発現させないと考えられる。

上記グリチルレチン酸誘導体は、グリチルレチン酸また
はグリチルレチン酸塩（以下、グリチルレチンという）
を含む培地でユーカリ属植物の細胞を培養すると細胞中
に生成するので、培養液から適宜の手段で採取すること
ができる。以下、この製造法について述べる。

ユーカリ細胞の培養に用いる培地としては、植物の組織
培養に通常使用される培地、すなわち、無機成分および
炭素源を必須成分として含有し、ほかに植物ホルモン類
、ビタミン類、アミノ酸類等が適宜配合されたものを用
いることができる。無機成分としては、通常、窒素、リ
ン、カリウム、鉄、亜鉛、モリブデン、ホウ素、コバル
ト、ヨウ素、カルシウム、マグネシウム、マンガン、塩
素、ナトリウム等が使用される。炭素源としては、ショ
糖その他の炭水化物の他に、有機酸等が使用される。植
物ホルモンには、インドール酢酸（ＩＡＡ）、ナフタレ
ン酢酸（ＮＡＡ）　、２．４−ジクロロフェノキシ酢酸
（２，４−１１）等のオーキシン類、カイネチン（Ｋ）
、ベンジルアデニン（ＢＡ）等のサイトカイニン類が用
いられる。具体的には、植物の組織培養に使用されてい
るムラシゲ・スクーグ（Ｍｕｒａｓｉｇｅｓｔｏｏｇ）
の培地、リンスマイヤー・スクーグ（Ｌｉｅｓｎｕｉｅ
ｒ　＆　５ｋｏｏ（）の培地、ホワイト（Ｗｈｉｔｓ）
の培地、ガンポルグ（Ｇ！ｍｌ＋ｏｒｇ）のＢ５培地等
に、前記した炭素源および植物ホルモンを添加し、さら
に、必要に応じて前記ビタミン類、アミノ酸類、ココナ
・ソツミルク、酵母エキス等の天然物を添加して調製さ
れた培地を使用することができる。本発明の製造法にお
けるユーカリ細胞の培養には、これらの中でも特にムラ
シゲ・スクーグの培地を用いて調製した培地が好ましく
、その組成例を下記に示す。

Ｎ０３Ｎ　Ｈ４Ｎ　Ｏ。

ＫＨ，ＰＯ４Ｈ，ＢＯ３ＩＮＩＭＯＯ。

ＣｏＣｌ＊・６　Ｈ２０ＣａＣＬ・２　Ｈ２０Ｍ　（Ｓ　Ｏ＋・７Ｈ２０Ｍ　ａ　Ｓ　Ｏ＋・４Ｈ２０Ｚ　ｍ　Ｓ　Ｏ４・７Ｈ７ＯＣｎ　Ｓ　Ｏ＊・５Ｈ２ＯＮｉ２・ＥＤＴＡＦｅＳＯ４・７Ｈ２０１９００亀ｔ／α ｌ　６５０７０６．２０．８３０．２５０．０２５４０７０２２．３１０．６０．０２５３７．３２７．８イノシトール　　　　　　　　　　１００チアミン塩酸
塩　　　　　　　　　　　０．１ニコチン酸　　　　　
　　　　　　　　０．５ピリドキンン塩酸塩　　　　　
　　　　０．５ベンジルアデニン　　　　　　　　　　
１．０シヨ糖　　　　　　　　　　　　　　３０　ｇ／
ｎ９）（５，７（以下、この培地をＭＳＢＡＩ培地という）また、本発
明の製造法において用いるユーカリ属植物は、特に限定
されるものではないが、適当なものとしては、Ｅｕｃｓ
ｌｙｌｕｓ　ｐｅｒｒｉｎｉｓ＋＋ａ、ＥｕｃａｌｙＬ
ａｓ　ｇｌｏｂｕｌｕｓｌＥｕｃｉｌｙＬｕｓ　ｃｉｔ
ｒｉｏｄｏｒｘ、Ｅｕｅｘｌｙｔａｓ　ｃｘｌｏｐｈｙ
ｌｌａ、　ＥｕｃａＩｙｋｕＳ　ｄｉｖｅｓ、　Ｅｕｃ
ｓｌｙｌｕｓ　ｐｏｌｙｂｒａｃｊｅａ、　Ｅｕｃ！１
ｙｔｕｓｒａｄｉａｔｘ等を挙げることができる。

上述の培地を用いて行うユーカリ属植物細胞の培養は、
いわゆるカルス培養である。すなわち、ユーカリ属植物
の若い組織の切片を茎や葉の部分あるいは種子から取り
、１；とえば７０％アルコールで滅菌すると共に表面の
ワックス分を除去し、滅菌水で洗浄後、１０％サラシ粉
で２回洗浄し、その後、適当な大きさに切断してＭＳＢ
Ｉ寒天培地に植え付け、カルスを誘導する。得られたカ
ルスを液体培地に接種し、温度１５〜４０°Ｃ１好まし
くは２０〜３０°Ｃの暗所中で、好気的条件下で２〜４
週間振盪培養する。

グリチルレチンは、エタノール溶液にしておき、上述の
ような液体培養における細胞数が好ましくは最大に達し
た後、移植したユーカリ細胞１重量部に対してグリチル
レチンｏ、ｏｏｔ〜０．１重量部の割合で添加する。同
時に、グルコースを０．１〜１重量部、添加してもよい
（ただし、グリチルレチンのグルコシル化に必要なグル
コースは、培地中の他の炭素源からも合成されるので、
グルコースは本発明の製造法に用いる培地の必須成分で
はない。）。引続き３日ないし十数日間振盪培養すると
、添加されたグリチルレチンはユーカリ属植物細胞に吸
収されたのち細胞中で配糖体化され、さらには酸化され
て、前記一般式のグリチルレチン酸誘導体を生じる。培
養中、ユーカリ細胞は茎葉や根などの器官に分化せず、
カルスのままである。

培養液からグリチルレチン酸誘導体を採取するには、生
成したグリチルレチン酸誘導体を含有する細胞を遠心分
離により培地から分離し、得られた細胞をホモゲナイザ
ー等で処理して破砕し、固形物を濾別後、濾液から抽出
、クロマトグラフィー等、任意の分離精製手段によりグ
リチルレチン酸誘導体を巣離する。

〔発明の効果〕

本発明の新規グリチルレチン酸誘導体は、偽アルドステ
ロン症など好ましくない副作用の恐れのない抗炎症剤、
抗潰瘍剤、抗アレルギー剤等に広く利用されることが期
待される。

ユーカリ属植物の細胞内代謝反応を利用する本発明の製
造法は、複雑な化学合成反応によらずにこの新規グリチ
ルレチン酸誘導体を得ることができ、経済性と安全性の
点で優れている。

〔実施例〕実施例１Ｍ５ＢＡＩ培地に０．９ｇ／ＩＩの寒天を加えた寒天培
地上で３週間ごとに継代を行なったツキヌキユーカリ（
Ｅｕｃａｌｙｊｕｓ　ｐｅｒｒｉｎｉａｎａ）のＢＡＩ
株［Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６．７１５　（１
９Ｈ）コを２５０ｍ１の滅菌ＭＳＢＡＩ液体培地の入っ
たｌ１１容三角フラスコ３２本にフラスコ１本あたりユ
ーカリ細胞新鮮重量的１５ｇを接種し、温度２５℃の暗
所で、レンプロシェーカー（７６ストロ一クス／ｍ１ｎ
）を用いて３週間振盪培養した。その後、各フラスコに
グルコース３ｇの水溶液（１，２，５ｍｌの蒸留水に溶
かしてから濾過滅菌したもの）を加え、更にグリチルレ
チン酸１５０ｍ（のエタノール溶液を、３回に分けて１
日おきに添加した（全フラスコに対する合計添加量は４
．８ｇとなる）。引き続き振盪培養を行い、３回目のグ
リチルレチン酸を加えてから１０日後に、培養細胞およ
び培地を収穫した。培養細胞は新鮮重量として１５４３
．６ｇ、培地は約６Ｃであった。

得られた培養細胞１５００ｇにメタノール３１１を加え
、ホモゲナイザー処理（１万ｒｐｍ　ｘ　５　ｍ）を２
回施して細胞を破砕した。得られた細胞破砕液を濾過し
たのち減圧濃縮し、約５００ｍ１にした。得られた濃縮
液に蒸留水ｉＮを加え、酢酸エチル１．５区で２回抽出
して、酢酸エチルに可溶の不純物を除いた（この操作で
除去された不純物は、主としてトリテルペンからなる。

酢酸エチル層に溶は込んだグリチルレチン酸誘導体の量
を調べるため、抽出液を合わせ、無水硫酸ソーダで乾燥
し、溶媒を減圧留去後、乾固物をクロロホルムに溶解し
てシリカゲルカラムにかけ、クロロホルム／メタノール
／蒸留水（５：　１　：　０．１）で溶出処理したとこ
ろ、２８−ヒドロキシグリチルレチン酸β−Ｄ−グルコ
シルエステル８５ａ＋ｇを得た。）。酢酸エチルによる
分配抽出後の水層をｎ−ブタノール１．５Ｑで２回抽出
し、抽出液を合わせて無水硫酸ソーダで乾燥し、溶媒を
減圧留去後、乾固物を展開溶媒に溶解してシリカゲルカ
ラムにかけ、クロロホルム／メタノール／蒸留水（５・
１　：　０．１）で溶出させ、溶媒を減圧留去、乾固す
ることにより、２トヒドロキシグリチルレチン酸β−Ｄ
−グルコシルエステル６０８ｍ！、２３．２８−ジヒド
ロキ／グリチルレチン酸β−Ｄ−グルコシルエステル５
０＋１を得ｌこ。

また、ユーカリ細胞を除いた後の培地にも微量のグリチ
ルレチン酸誘導体の存在が認められたので、培地を多孔
性樹脂ＨＰ−２０（三菱化成株式会社）３００１に通液
してグリチルレチン酸の代謝物を吸着させた後、メタノ
ールで溶出させた。グリチルレチン酸の代謝物を含む溶
出液を減圧濃縮後、乾固物を展開溶媒に溶解してシリカ
ゲルカラムに通し、クロロホルム／メタノール／蒸留水
（５：　１　：　０．１）で溶出させた。

溶出液から溶媒を留去、乾燥すると、２トヒドロキング
リチルレチン酸β−Ｄ−グルコシルエステル２８．５Ｂ
１２３．２８−ジヒドロキシグリチルレチン酸β−Ｄ−
グルコシルエステル３ｍｇが得られた。

実施例２実施例１で用いたのと同じツキヌキユーカリのＢＡ１株
を２５０１のＭＳＢＡＩ液体培地の入った５ＯＯ１容三
角フラスコ１５０本にフラスコ１本あたりユーカリ細胞
新鮮重量的Ｌ５ｇを接種し、２５°Ｃの暗所で、７０回
／ｆｆ１Ｉ１１の回転振盪を行いながらｌＯ日間振盪培
養した。その後、各フラスコにグリチルレチン酸を３回
に分けて１日おきに、各回７５１！を２１のエタノール
に溶解して添加した（全フラスコに対する合計添加量は
３４ｇとなる）。引き続き振盪培養を行い、３回目のグ
リチルレチン酸を加えてから７日後に、培養液を遠心分
離して培養細胞約１０ｋｇを収穫した。

得られた培養細胞にメタノール１０１を加え、ホモゲナ
イザー処理（１万ｒｐｍｘ５ｍｉｅ）を２回施して細胞
を破砕した。得られた細胞破砕液を、濾過後、減圧濃縮
し、約２０００ｉ１にした。得られた濃縮液に蒸留水２
ｔを加え、酢酸エチル４悲で２回抽出してトリテルペン
類を分離した。次いで酢酸エチルによる分配抽出後の水
層をｎ−ブタノール４Ｌで２回抽出し、抽出液を合わせ
て無水硫酸ソーダで乾燥し、溶媒を減圧留去後、乾固物
を展開溶媒に溶解してシリカゲルカラムにかけ、クロロ
ホルム／メタノール／蒸留水（ｓ　：　ｌ：０．１．）
で溶出させ、溶媒を減圧留去、乾固することにより、２
トヒドロキシグリチルレチン酸β−Ｄ−グルコシルエス
テル３６　ＬＩｌ（、２３，２８−ジヒドロキシグリチ
ルレチン酸β−トグルコシルエステル５３　Ｑ　ｖＨ’
ｋｍｆ：。

実施例３種々のユーカリ属植物を用い、実施例２と同様にしてグ
リチルレチン酸誘導体を生成させ、グリチルレチン酸変
換能を調べた。なお、グリチルレチン酸誘導体の生成量
は、細胞破砕液および培地に′ついて高速液体クロマト
グラフィーで定量した。用いたユーカリ属植物は、Ｅｕ
ｃａＩｙＬＩＩｓ　（ＩｏｂＩＩｌｕｓ％Ｅｕｃａｌｙ
ｔＩＩｓ　ｃｉｔｒｉｏｄｏｒｓ、Ｅｕｃａｌｙｉｕｓ
　ｃｘｌｏｐｈｙｌｌａ、　Ｅｕｅａｌｙｔｕｓ　ｄｉ
ｖｓｓ、　Ｅｕｃｘｌｙｔｍｓｐｏｌｙｂｒａｃｔｅａ
。

およびＥｕｃａｌｙｔｕｓａｄｋａの６種類である。

結果は次のとおりであった。

（注）定量値単位：ｆｆ１ｇ［＋ｌ　：　２８−０Ｈ−グリチルレチン酸βＤ−グル
コシルエステル［２］　：　２３．Ｈ−ジ０■−グリチルレチン酸βＤ
−グルコンルエステル＋：ピークは検出されたが定量不能

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記一般式で表されるグリチルレチン酸誘導体：
▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは水素原子または水酸基、Ｇｌｃはグルコー
ス残基を表す）
（２）グリチルレチン酸またはグリチルレチン酸塩を含
む培地でユーカリ属植物の細胞を培養し、培養液より請
求項１記載のグリチルレチン酸誘導体を採取することを
特徴とする請求項１記載のグリチルレチン酸誘導体の製
造法。
（３）ユーカリ属植物としてＥｕｃａｌｙｔｕｓ　ｐｅ
ｒｒｉｎｉａｎａ、Ｅｕｃａｌｙｔｕｓ　ｇｌｏｂｕｉ
ｕｓ、Ｅｕｃａｌｙｔｕｓ　ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ、Ｅ
ｕｃａ−ｌｙｔｕｓ　ｃａｌｏｐｈｙｌｌａ、Ｅｕｃａ
ｌｙｔｕｓ　ｄｉｖｅｓ、Ｅｕｃａｌｙｔｕｓｐｏｌｙ
ｂｒａｃｔｅａ、Ｅｕｃａｌｙｔｕｓ　ｒａｄｉａｔａ
のいずれかを用いる請求項２記載の製造法。