JPH0625277A - 新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６産生菌、新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６及びその製造法 - Google Patents
新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６産生菌、新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６及びその製造法Info
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- JPH0625277A JPH0625277A JP4203172A JP20317292A JPH0625277A JP H0625277 A JPH0625277 A JP H0625277A JP 4203172 A JP4203172 A JP 4203172A JP 20317292 A JP20317292 A JP 20317292A JP H0625277 A JPH0625277 A JP H0625277A
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 北海道当別の土壌から単離されたストレプト
ミセス属に属し、テストステロン−５α−レダクターゼ
阻害物質ＳＮＡ−４６０６を産生する放線菌ＳＮＡ−４
６０４産生菌。この菌を培養し、培養菌体からテストス
テロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６
を採取する方法。次の構造式で示されるＳＮＡ−４６０
６。 【化１】 【効果】 テストステロン−５α−レダクターゼ阻害活
性を有し、脱毛症、前立腺肥大症等男性ホルモンが関与
する疾患の予防あるいは治療に有用である。
ミセス属に属し、テストステロン−５α−レダクターゼ
阻害物質ＳＮＡ−４６０６を産生する放線菌ＳＮＡ−４
６０４産生菌。この菌を培養し、培養菌体からテストス
テロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６
を採取する方法。次の構造式で示されるＳＮＡ−４６０
６。 【化１】 【効果】 テストステロン−５α−レダクターゼ阻害活
性を有し、脱毛症、前立腺肥大症等男性ホルモンが関与
する疾患の予防あるいは治療に有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規テストステロン−
５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６産生菌、
新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮ
Ａ−４６０６及びその製造方法に関する。本発明に係る
物質は、脱毛症や前立腺肥大症等、男性ホルモンが関与
する疾患の予防剤ならびに治療剤として有用である。
５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６産生菌、
新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮ
Ａ−４６０６及びその製造方法に関する。本発明に係る
物質は、脱毛症や前立腺肥大症等、男性ホルモンが関与
する疾患の予防剤ならびに治療剤として有用である。
【０００２】
【従来の技術】アンドロゲンとして知られているステロ
イドホルモン、すなわち５α−ジヒドロテストステロン
（以下、５α−ＤＨＴと略称する）は、テストステロン
からテストステロン−５α−レダクターゼによって生体
内で合成される。この５α−ＤＨＴは、主に男性の生殖
器である前立腺で合成され、男性における雄性機能発現
に関わっている。しかし、本来の雄性機能発現以外に男
性型脱毛症、皮膚分泌機能亢進ならびに前立腺肥大症等
の発症原因と考えられている。このような事実から、こ
れら疾患の治療には、５α−ＤＨＴ合成酵素であるテス
トステロン−５α−レダクターゼの活性を阻害する作
用、あるいは、５α−ＤＨＴがアンドロゲン受容体に結
合することを阻害する作用を有するオキセンドリン、酢
酸クロルマジノン、カプロン酸ゲストリノン等の抗アン
ドロゲン剤が用いられている。しかしながら、市販の抗
アンドロゲン剤は、いずれもステロイドホルモン誘導体
であり、長期間投与された場合、ホルモン作用を示すこ
とが知られている。したがって、安全性の観点からは、
ステロイド骨格を有する化合物以外の抗アンドロゲン剤
の開発が強く要望されている。
イドホルモン、すなわち５α−ジヒドロテストステロン
（以下、５α−ＤＨＴと略称する）は、テストステロン
からテストステロン−５α−レダクターゼによって生体
内で合成される。この５α−ＤＨＴは、主に男性の生殖
器である前立腺で合成され、男性における雄性機能発現
に関わっている。しかし、本来の雄性機能発現以外に男
性型脱毛症、皮膚分泌機能亢進ならびに前立腺肥大症等
の発症原因と考えられている。このような事実から、こ
れら疾患の治療には、５α−ＤＨＴ合成酵素であるテス
トステロン−５α−レダクターゼの活性を阻害する作
用、あるいは、５α−ＤＨＴがアンドロゲン受容体に結
合することを阻害する作用を有するオキセンドリン、酢
酸クロルマジノン、カプロン酸ゲストリノン等の抗アン
ドロゲン剤が用いられている。しかしながら、市販の抗
アンドロゲン剤は、いずれもステロイドホルモン誘導体
であり、長期間投与された場合、ホルモン作用を示すこ
とが知られている。したがって、安全性の観点からは、
ステロイド骨格を有する化合物以外の抗アンドロゲン剤
の開発が強く要望されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、ステロ
イド骨格を有する化合物以外の抗アンドロゲン作用、す
なわちテストステロン−５α−レダクターゼ阻害活性を
有する物質を微生物の代謝産物に求め、種々検討を重ね
たところ、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ｓｐ．）に属する菌株が優れたテストステロン−
５α−レダクターゼ阻害活性を有する新規化合物を産生
することを見出し、本発明を成すに至った。したがっ
て、本発明は新規テストステロン−５α−レダクターゼ
阻害物質の産生菌を提供することを課題とする。また、
本発明は新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害
物質を提供することを課題とする。さらにまた、本発明
は新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質の
製造法を提供することを課題とする。
イド骨格を有する化合物以外の抗アンドロゲン作用、す
なわちテストステロン−５α−レダクターゼ阻害活性を
有する物質を微生物の代謝産物に求め、種々検討を重ね
たところ、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ｓｐ．）に属する菌株が優れたテストステロン−
５α−レダクターゼ阻害活性を有する新規化合物を産生
することを見出し、本発明を成すに至った。したがっ
て、本発明は新規テストステロン−５α−レダクターゼ
阻害物質の産生菌を提供することを課題とする。また、
本発明は新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害
物質を提供することを課題とする。さらにまた、本発明
は新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質の
製造法を提供することを課題とする。
【０００４】
【発明を解決するための手段】本発明の新規テストステ
ロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６を
生産する菌株ＳＮＡ−４６０６は、北海道当別の土壌か
ら分離された菌である。この菌株ＳＮＡ−４６０６は、
前記北海道当別の土壌を抗生物質含有培地に入れ、出現
する放線菌コロニーから採取される。この菌株ＳＮＡ−
４６０６は、下記のような菌学的性質を有する。
ロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６を
生産する菌株ＳＮＡ−４６０６は、北海道当別の土壌か
ら分離された菌である。この菌株ＳＮＡ−４６０６は、
前記北海道当別の土壌を抗生物質含有培地に入れ、出現
する放線菌コロニーから採取される。この菌株ＳＮＡ−
４６０６は、下記のような菌学的性質を有する。
【０００５】１）形態上の性質 走査型電子顕微鏡による観察では、基生菌糸が分断した
り、胞子を形成することはなく、気菌糸上に分節胞子の
長い連鎖が形成されており、その形態は螺旋状である。
胞子は非運動性であり、胞子表面は平滑である。
り、胞子を形成することはなく、気菌糸上に分節胞子の
長い連鎖が形成されており、その形態は螺旋状である。
胞子は非運動性であり、胞子表面は平滑である。
【０００６】２）各種培地上の生育状態 シュクロース硝酸塩、グルコース・アスパラギン、グリ
セリン・アスパラギン（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．５）、スタ
ーチ（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．４）、チロシン（ＩＳＰ培地
Ｎｏ．７）、栄養、イースト・麦芽（ＩＳＰ培地 Ｎ
ｏ．２）、オートミール（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．３）及び
ペプトン・イースト・鉄（ＩＳＰ培地Ｎｏ．６）の９種
の寒天培地を用いて、２７℃、１４日間培養したとこ
ろ、表１に示すように、いずれの培地においても、よく
伸長し、分岐する基生菌糸と気菌糸を形成し、良好な生
育を示したが、グルコース・アスパラギン寒天培地、ス
ターチ寒天培地、イースト・麦芽寒天培地及びペプトン
・イースト・鉄寒天培地で特に良好な生育を示した。基
生菌糸は淡黄色の色調を呈し、灰褐色から濃紺の色調を
呈する気菌糸を着生する。可溶性色素及びメラニン色素
は生産しない。
セリン・アスパラギン（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．５）、スタ
ーチ（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．４）、チロシン（ＩＳＰ培地
Ｎｏ．７）、栄養、イースト・麦芽（ＩＳＰ培地 Ｎ
ｏ．２）、オートミール（ＩＳＰ培地 Ｎｏ．３）及び
ペプトン・イースト・鉄（ＩＳＰ培地Ｎｏ．６）の９種
の寒天培地を用いて、２７℃、１４日間培養したとこ
ろ、表１に示すように、いずれの培地においても、よく
伸長し、分岐する基生菌糸と気菌糸を形成し、良好な生
育を示したが、グルコース・アスパラギン寒天培地、ス
ターチ寒天培地、イースト・麦芽寒天培地及びペプトン
・イースト・鉄寒天培地で特に良好な生育を示した。基
生菌糸は淡黄色の色調を呈し、灰褐色から濃紺の色調を
呈する気菌糸を着生する。可溶性色素及びメラニン色素
は生産しない。
【０００７】
【表１】 各培地における生育状態の観察 ──────────────────────────────────── 培 地 ３日 ７日 １４日 ──────────────────────────────────── シュクロース硝酸塩 ＋／− ＋ ＋ グリセリン・アスパラギン ＋／− ＋ ＋ スターチ ＋／− ＋ ＋＋ チロシン ＋／− ＋ ＋ 栄養 ＋／− ＋ ＋ イースト・麦芽 ＋／− ＋ ＋＋ オートミール ＋／− ＋ ＋ ペプトン・イースト・鉄 ＋／− ＋ ＋＋ ──────────────────────────────────── −；生育せず、＋／−；＋又は−の判定が困難、＋；生
育を認める、＋＋；良好な生育
育を認める、＋＋；良好な生育
【０００８】３）生理的性質 ａ）生育温度；イースト・麦芽寒天培地において、１７
−３７℃で生育し、４２℃では生育できず、最適温度は
３２℃前後であった。 ｂ）ゼラチンの液化；陰性 ｃ）澱粉の分解；陽性 ｄ）脱脂乳のペプトン化；陽性 ｅ）メラニン様色素の生成；陰性
−３７℃で生育し、４２℃では生育できず、最適温度は
３２℃前後であった。 ｂ）ゼラチンの液化；陰性 ｃ）澱粉の分解；陽性 ｄ）脱脂乳のペプトン化；陽性 ｅ）メラニン様色素の生成；陰性
【０００９】４）炭素源の同化性 プレドハム・ゴットリーブ寒天培地にＤ−グルコース、
Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノース、
Ｄ−フラクトース、シュクロース、イノシトール、ラフ
ィノース及びＤ−マンニトールの９種を各々１％添加し
て観察した。その結果を表２に示す。
Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノース、
Ｄ−フラクトース、シュクロース、イノシトール、ラフ
ィノース及びＤ−マンニトールの９種を各々１％添加し
て観察した。その結果を表２に示す。
【００１０】
【表２】 各炭素源における同化性 ───────────────────────── 炭素源 ───────────────────────── Ｄ−グルコース 同化する Ｄ−キシロース 同化する Ｌ−アラビノース 同化する Ｌ−ラムノース 同化する Ｄ−フラクトース 同化する シュクロース 同化する イノシトール 同化する ラフィノース 同化する Ｄ−マンニトール 同化する ─────────────────────────
【００１１】５）細胞壁組成 長谷川らの方法〔ジャーナル・ジェネラル・アプライド
・ミクロバイオロジー、２９、３１９（１９８３）〕に
より、菌体中の２，６−ジアミノピメリン酸を分析した
結果、ＬＬ型であり、細胞壁タイプＩ型であった。
・ミクロバイオロジー、２９、３１９（１９８３）〕に
より、菌体中の２，６−ジアミノピメリン酸を分析した
結果、ＬＬ型であり、細胞壁タイプＩ型であった。
【００１２】以上の分析結果から、ＳＮＡ−４６０６株
はストレプトミセス属に類するものと考えられ、ストレ
プトミセス ｓｐ．ＳＮＡ−４６０６と命名した。本発
明者らは、上述した性質を有するＳＮＡ−４６０６株を
他の公知の株と区別するため、工業技術院微生物工業技
術研究所に受託番号微工研菌寄第１２９１２号（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１２９１２）として寄託した。
はストレプトミセス属に類するものと考えられ、ストレ
プトミセス ｓｐ．ＳＮＡ−４６０６と命名した。本発
明者らは、上述した性質を有するＳＮＡ−４６０６株を
他の公知の株と区別するため、工業技術院微生物工業技
術研究所に受託番号微工研菌寄第１２９１２号（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１２９１２）として寄託した。
【００１３】一般的に放線菌は、その性質が変異し易
く、自然変異することもあるし、また紫外線照射、コバ
ルト６０照射、化学変異誘導剤等の人工的な変異処理で
容易に変異させることもできる。本発明においても、Ｓ
ＮＡ−４６０６株が変異した株であってもＳＮＡ−４６
０６物質の生産能を有する菌株であれば全て利用するこ
とが可能である。本発明では、これらの菌株をもテスト
ステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０
６産生菌のなかに包含する。
く、自然変異することもあるし、また紫外線照射、コバ
ルト６０照射、化学変異誘導剤等の人工的な変異処理で
容易に変異させることもできる。本発明においても、Ｓ
ＮＡ−４６０６株が変異した株であってもＳＮＡ−４６
０６物質の生産能を有する菌株であれば全て利用するこ
とが可能である。本発明では、これらの菌株をもテスト
ステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０
６産生菌のなかに包含する。
【００１４】本発明のＳＮＡ−４６０６株は次の方法で
土壌から分離採取した。北海道当別の土壌１ｇを９ｍｌ
の滅菌蒸留水に懸濁したのち、本土壌懸濁液を１０5 〜
１０9 倍に希釈した。これら希釈液は、グルコース０．
５％、塩化ナトリウム０．０５％、燐酸一水素カリウム
０．０５％、硫酸マグネシウム・７水和物０．０５％、
酵母エキス０．０５％、Ｌ−アスパラギン０．０５％、
スターチ０．５％、硫酸第一鉄・７水和物０．００１
％、寒天１．５％の栄養寒天培地に抗生物質ナイスタチ
ン５ｐｐｍ、シクロヘキサミド５ｐｐｍ、ノボビオシン
０．３ｐｐｍ、リファンピシン０．５ｐｐｍの濃度にな
るように調製した抗生物質含有培地９ｍｌに１ｍｌ添加
し混合後、寒天平板とし３２℃で７日間培養した。寒天
平板上に出現した放線菌コロニーを白金耳によりかきと
り、上記の組成の寒天斜面培地に接種し１４日間、２７
℃で培養した。本スラントを種菌とした。
土壌から分離採取した。北海道当別の土壌１ｇを９ｍｌ
の滅菌蒸留水に懸濁したのち、本土壌懸濁液を１０5 〜
１０9 倍に希釈した。これら希釈液は、グルコース０．
５％、塩化ナトリウム０．０５％、燐酸一水素カリウム
０．０５％、硫酸マグネシウム・７水和物０．０５％、
酵母エキス０．０５％、Ｌ−アスパラギン０．０５％、
スターチ０．５％、硫酸第一鉄・７水和物０．００１
％、寒天１．５％の栄養寒天培地に抗生物質ナイスタチ
ン５ｐｐｍ、シクロヘキサミド５ｐｐｍ、ノボビオシン
０．３ｐｐｍ、リファンピシン０．５ｐｐｍの濃度にな
るように調製した抗生物質含有培地９ｍｌに１ｍｌ添加
し混合後、寒天平板とし３２℃で７日間培養した。寒天
平板上に出現した放線菌コロニーを白金耳によりかきと
り、上記の組成の寒天斜面培地に接種し１４日間、２７
℃で培養した。本スラントを種菌とした。
【００１５】さらに、上述したＳＮＡ−４６０６生産株
を培養し、目的とするＳＮＡ−４６０６物質を得る方法
については、以下に説明する。ストレプトミセス属に属
するＳＮＡ−４６０６物質生産株の培養は、通常の放線
菌の培養方法が採用し得る。栄養培地としては、生育に
必要な炭素源、窒素源、無機物、微量栄養成分を含むも
のであれば、天然培地、合成培地、半合成培地の何れで
も使用可能である。炭素源としては、グルコース、フル
クトース、シュロース、ガラクトース等の糖類や澱粉等
が単独あるいは組み合わせで使用可能である。また、菌
の資化性によっては、炭化水素、アルコール類、クエン
酸等の有機酸類も使用し得る。窒素源としては、塩化ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等の無
機化合物、尿素、グルタミン酸ナトリウム等の有機化合
物、あるいは、培養基として一般的に使用される大豆粉
末、乾燥酵母、ペプトン、肉エキス、プロテオース−ペ
プトン、カザミン酸、大豆ペプトン、コーンスティープ
リカー等が単独あるいは組み合わせで用いられる。無機
物としては、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、リン酸塩、硫酸銅、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、
硫酸鉄等が必要に応じて単独あるいは組み合わせで用い
られる。また、必要に応じて、ビオチン、パントテン
酸、ピリドキシン、ナイアシン、イノシン等の栄養成分
を加えることも可能である。さらに、培養時に発生する
泡を消去するためにシリコン油等の消泡剤を添加してお
くこともできる。培養方法は、一般的に行われる培養方
法が採用し得るが、振盪培養、あるいは通気攪拌培養が
最も適している。培養温度は２０〜３５℃、好ましくは
２５〜３０℃付近が良好である。ＳＮＡ−４６０６物質
は、培養開始から４８〜９６時間で生産量がピークとな
るため、その時点で培養を止め、目的物質を単離、精製
する。
を培養し、目的とするＳＮＡ−４６０６物質を得る方法
については、以下に説明する。ストレプトミセス属に属
するＳＮＡ−４６０６物質生産株の培養は、通常の放線
菌の培養方法が採用し得る。栄養培地としては、生育に
必要な炭素源、窒素源、無機物、微量栄養成分を含むも
のであれば、天然培地、合成培地、半合成培地の何れで
も使用可能である。炭素源としては、グルコース、フル
クトース、シュロース、ガラクトース等の糖類や澱粉等
が単独あるいは組み合わせで使用可能である。また、菌
の資化性によっては、炭化水素、アルコール類、クエン
酸等の有機酸類も使用し得る。窒素源としては、塩化ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等の無
機化合物、尿素、グルタミン酸ナトリウム等の有機化合
物、あるいは、培養基として一般的に使用される大豆粉
末、乾燥酵母、ペプトン、肉エキス、プロテオース−ペ
プトン、カザミン酸、大豆ペプトン、コーンスティープ
リカー等が単独あるいは組み合わせで用いられる。無機
物としては、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、リン酸塩、硫酸銅、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、
硫酸鉄等が必要に応じて単独あるいは組み合わせで用い
られる。また、必要に応じて、ビオチン、パントテン
酸、ピリドキシン、ナイアシン、イノシン等の栄養成分
を加えることも可能である。さらに、培養時に発生する
泡を消去するためにシリコン油等の消泡剤を添加してお
くこともできる。培養方法は、一般的に行われる培養方
法が採用し得るが、振盪培養、あるいは通気攪拌培養が
最も適している。培養温度は２０〜３５℃、好ましくは
２５〜３０℃付近が良好である。ＳＮＡ−４６０６物質
は、培養開始から４８〜９６時間で生産量がピークとな
るため、その時点で培養を止め、目的物質を単離、精製
する。
【００１６】培養液からＳＮＡ−４６０６物質を回収す
るには、理化学的な性質を考慮して行われる。ＳＮＡ−
４６０６物質は培養菌体中に存在するので、培養液を遠
心分離、あるいは濾過して菌体を分離し、その菌体から
溶媒抽出、さらにはイオン交換、吸着、分配、ゲル濾過
等の各種クロマト処理、透析、沈殿、限外濾過等の処理
を単独あるいは組み合わせで行い、回収、精製する。
るには、理化学的な性質を考慮して行われる。ＳＮＡ−
４６０６物質は培養菌体中に存在するので、培養液を遠
心分離、あるいは濾過して菌体を分離し、その菌体から
溶媒抽出、さらにはイオン交換、吸着、分配、ゲル濾過
等の各種クロマト処理、透析、沈殿、限外濾過等の処理
を単独あるいは組み合わせで行い、回収、精製する。
【００１７】一般的な回収、精製方法として、次の方法
を例示できる。培養終了後、遠心分離または濾過によっ
て菌体と培養液を分離する。菌体からアセトンやメタノ
ール等の適当な溶媒で目的物質を抽出した抽出液を減圧
下で濃縮して溶媒を除去した後、酢酸エチル等の溶媒で
さらに目的物質を抽出する。この抽出液の溶媒を留去
し、残渣をｎ−ヘキサンまたは石油エーテルで洗浄し、
シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行う。次いでク
ロロホルム・メタノール混液で溶出し、ＳＮＡ−４６０
６画分を回収する。そして、この画分を逆相高速液体ク
ロマトグラフ処理に付して目的とするＳＮＡ−４６０６
物質を精製する。
を例示できる。培養終了後、遠心分離または濾過によっ
て菌体と培養液を分離する。菌体からアセトンやメタノ
ール等の適当な溶媒で目的物質を抽出した抽出液を減圧
下で濃縮して溶媒を除去した後、酢酸エチル等の溶媒で
さらに目的物質を抽出する。この抽出液の溶媒を留去
し、残渣をｎ−ヘキサンまたは石油エーテルで洗浄し、
シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行う。次いでク
ロロホルム・メタノール混液で溶出し、ＳＮＡ−４６０
６画分を回収する。そして、この画分を逆相高速液体ク
ロマトグラフ処理に付して目的とするＳＮＡ−４６０６
物質を精製する。
【００１８】このようにして得られたＳＮＡ−４６０６
物質は、下記の理化学的性質を有する。 理化学的性質 １）分子式 Ｃ52Ｈ84Ｏ18 ２）分子量 ９９６ ３）融点 １７１〜１７２℃ ４）旋光度 −４４．８°（Ｃ＝０．５、メタノール中） ５）ＦＡＢマススペクトル １０１９（Ｍ＋Ｎａ） ６）紫外吸収スペクトル ２５３ｎｍ（ｌｏｇＥ＝４．４９、メタノール中） ７）赤外吸収スペクトル 図１のとおり ８） 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル 図２のとおり ９）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（２５ＮＨｚ）ｐｐｍ、内
部標準ＴＭＳ（重水素化クロロホルム・重水素化メタノ
ール） ７．０、９．２、１３．７、１５．４、１６．８、１
９．５、３３．１、３６．８、３８．６、４１．８、４
３．０、４４．０、６６．３、６７．０、７０．３、７
１．２、７１．５、７７．９、９３．８、１００．１、
１２１．７、１３２．２、１４６．０、１７０．３ １０）構造式
物質は、下記の理化学的性質を有する。 理化学的性質 １）分子式 Ｃ52Ｈ84Ｏ18 ２）分子量 ９９６ ３）融点 １７１〜１７２℃ ４）旋光度 −４４．８°（Ｃ＝０．５、メタノール中） ５）ＦＡＢマススペクトル １０１９（Ｍ＋Ｎａ） ６）紫外吸収スペクトル ２５３ｎｍ（ｌｏｇＥ＝４．４９、メタノール中） ７）赤外吸収スペクトル 図１のとおり ８） 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル 図２のとおり ９）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（２５ＮＨｚ）ｐｐｍ、内
部標準ＴＭＳ（重水素化クロロホルム・重水素化メタノ
ール） ７．０、９．２、１３．７、１５．４、１６．８、１
９．５、３３．１、３６．８、３８．６、４１．８、４
３．０、４４．０、６６．３、６７．０、７０．３、７
１．２、７１．５、７７．９、９３．８、１００．１、
１２１．７、１３２．２、１４６．０、１７０．３ １０）構造式
【化３】
【００１９】本発明の化合物の平面構造は、化３に示し
た通りである。本発明の化合物には、多数の不斉炭素が
存在し種々の立体配置を持つことが考えられる。また、
相対配置については環状ラクトンの二重結合が、トラン
スまたはシス配置、側鎖のメチルも同様にそれぞれトラ
ンス及びシスがある。水酸基も同様である。構造上２種
のピラン環もその置換基の配置により種々の構造があ
る。誘導体は、水酸基のメチル化体並びにピラン環のア
セチル化体がある。これらの化合物がテストステロン−
５α−レダクターゼ阻害活性を有する限り、本発明のテ
ストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４
６０６のなかに包含される。
た通りである。本発明の化合物には、多数の不斉炭素が
存在し種々の立体配置を持つことが考えられる。また、
相対配置については環状ラクトンの二重結合が、トラン
スまたはシス配置、側鎖のメチルも同様にそれぞれトラ
ンス及びシスがある。水酸基も同様である。構造上２種
のピラン環もその置換基の配置により種々の構造があ
る。誘導体は、水酸基のメチル化体並びにピラン環のア
セチル化体がある。これらの化合物がテストステロン−
５α−レダクターゼ阻害活性を有する限り、本発明のテ
ストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４
６０６のなかに包含される。
【００２０】本発明のテストステロン−５α−レダクタ
ーゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６のテストステロン−５α
−レダクターゼ阻害活性については、Ｔ．リアングらの
方法〔エンドクリノロジー（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇ
ｙ）、１１７、５７１（１９８５）〕に従い、次のよう
にして測定した。８週齢ＳＤラット雄の前立腺を採取し
た後、２０ｍＭリン酸緩衝液中、４℃でグラス−グラス
ホモジナイザーによって前立腺組織を粉砕した。そし
て、この溶液を遠心分離（１０，０００×ｇ、２０分
間）処理して沈殿物を分離した。この沈殿物にテストス
テロン−５α−レダクターゼ活性が認められた。さら
に、遠心分離処理を２回繰り返し行い、余分な組織を除
去した後、ジチオスレイトール１ｍＭを含む２０ｍＭリ
ン酸緩衝液中に蛋白質量として１０ｍｇ含有するよう沈
殿物を懸濁して酵素液とした。
ーゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６のテストステロン−５α
−レダクターゼ阻害活性については、Ｔ．リアングらの
方法〔エンドクリノロジー（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇ
ｙ）、１１７、５７１（１９８５）〕に従い、次のよう
にして測定した。８週齢ＳＤラット雄の前立腺を採取し
た後、２０ｍＭリン酸緩衝液中、４℃でグラス−グラス
ホモジナイザーによって前立腺組織を粉砕した。そし
て、この溶液を遠心分離（１０，０００×ｇ、２０分
間）処理して沈殿物を分離した。この沈殿物にテストス
テロン−５α−レダクターゼ活性が認められた。さら
に、遠心分離処理を２回繰り返し行い、余分な組織を除
去した後、ジチオスレイトール１ｍＭを含む２０ｍＭリ
ン酸緩衝液中に蛋白質量として１０ｍｇ含有するよう沈
殿物を懸濁して酵素液とした。
【００２１】テストステロン−５α−レダクターゼ阻害
活性は、本酵素液に基質である14Ｃ−テストステロン１
μＭ、ＳＮＡ−４６０６物質１０〜１００μＭ及びＮＡ
ＤＰＨ５０μＭを入れた試験管中で、３７℃、６０分間
反応させて生成した14Ｃ−５α−ＤＨＴをシリカゲル薄
層クロマトグラフィーで分離した後、シンチレーション
カウンターによって放射活性を測定し、ＳＮＡ−４６０
６物質を添加しない場合の放射活性を１００％として阻
害率を算出した。ＳＮＡ−４６０６物質のテストステロ
ン−５α−レダクターゼに対する阻害活性ＩＣ50は、
６．６μＭと極めて強い阻害活性を示したことから、こ
のＳＮＡ−４６０６物質は、男性ホルモン亢進によって
引き起こされる前立腺肥大症や皮膚機能亢進等の疾患の
予防または治療に有効であることが判明した。
活性は、本酵素液に基質である14Ｃ−テストステロン１
μＭ、ＳＮＡ−４６０６物質１０〜１００μＭ及びＮＡ
ＤＰＨ５０μＭを入れた試験管中で、３７℃、６０分間
反応させて生成した14Ｃ−５α−ＤＨＴをシリカゲル薄
層クロマトグラフィーで分離した後、シンチレーション
カウンターによって放射活性を測定し、ＳＮＡ−４６０
６物質を添加しない場合の放射活性を１００％として阻
害率を算出した。ＳＮＡ−４６０６物質のテストステロ
ン−５α−レダクターゼに対する阻害活性ＩＣ50は、
６．６μＭと極めて強い阻害活性を示したことから、こ
のＳＮＡ−４６０６物質は、男性ホルモン亢進によって
引き起こされる前立腺肥大症や皮膚機能亢進等の疾患の
予防または治療に有効であることが判明した。
【００２２】次に本発明を実施例を挙げて具体的に説明
する。
する。
【実施例】グルコース ２％、可溶性澱粉 １％、肉エ
キス ０．１％、乾燥酵母 ０．４％、塩化ナトリウム
０．２％、リン酸二水素カリウム ０．００５％、寒
天１．５％を含む滅菌寒天斜面培地に、ストレプトミセ
ス ｓｐ．ＳＮＡ−４６０６株（微工研菌寄第１２９１
２号）を接種し、２７℃、１４日間培養して種培養スラ
ントとした。次に、栄養培地（グルコース ２％、可溶
性澱粉 １％、肉エキス ０．１％、大豆粉末 ２．５
％、乾燥酵母 ０．４％、塩化ナトリウム ０．２％、
リン酸二水素カリウム ０．００５％及び水１００ｍ
ｌ）を入れた５００ｍｌ容三角フラスコを滅菌した後、
種培養スラントから１〜２白金耳を取って培養基に接種
し、２７℃、２００ｒｐｍの条件で５日間、震盪培養を
行い、ジャーファーメンター培養に用いる種培養液とし
た。
キス ０．１％、乾燥酵母 ０．４％、塩化ナトリウム
０．２％、リン酸二水素カリウム ０．００５％、寒
天１．５％を含む滅菌寒天斜面培地に、ストレプトミセ
ス ｓｐ．ＳＮＡ−４６０６株（微工研菌寄第１２９１
２号）を接種し、２７℃、１４日間培養して種培養スラ
ントとした。次に、栄養培地（グルコース ２％、可溶
性澱粉 １％、肉エキス ０．１％、大豆粉末 ２．５
％、乾燥酵母 ０．４％、塩化ナトリウム ０．２％、
リン酸二水素カリウム ０．００５％及び水１００ｍ
ｌ）を入れた５００ｍｌ容三角フラスコを滅菌した後、
種培養スラントから１〜２白金耳を取って培養基に接種
し、２７℃、２００ｒｐｍの条件で５日間、震盪培養を
行い、ジャーファーメンター培養に用いる種培養液とし
た。
【００２３】このようにして培養した種培養液２００ｍ
ｌを３０ｌ容量ジャーファーメンターに接種した。すな
わち、３０ｌ容量ジャーファーメンターに栄養培地（グ
ルコース ２％、可溶性澱粉 １％、肉エキス ０．１
％、大豆粉末 ２．５％、乾燥酵母 ０．４％、塩化ナ
トリウム ０．２％、リン酸二水素カリウム ０．００
５％及び水１８ｌ）を入れて滅菌した後、種培養液２０
０ｍｌを接種し、２７℃、３日間、３００ｒｐｍ、１ｖ
ｖｍで培養した。培養後、培養液を遠心分離（１０，０
００×ｇ）処理によって菌体成分と培養上清に分けた。
この際、菌体は湿重量で１．３８ｋｇ、培養上清は１４
ｌそれぞれ得られた。
ｌを３０ｌ容量ジャーファーメンターに接種した。すな
わち、３０ｌ容量ジャーファーメンターに栄養培地（グ
ルコース ２％、可溶性澱粉 １％、肉エキス ０．１
％、大豆粉末 ２．５％、乾燥酵母 ０．４％、塩化ナ
トリウム ０．２％、リン酸二水素カリウム ０．００
５％及び水１８ｌ）を入れて滅菌した後、種培養液２０
０ｍｌを接種し、２７℃、３日間、３００ｒｐｍ、１ｖ
ｖｍで培養した。培養後、培養液を遠心分離（１０，０
００×ｇ）処理によって菌体成分と培養上清に分けた。
この際、菌体は湿重量で１．３８ｋｇ、培養上清は１４
ｌそれぞれ得られた。
【００２４】このようにして得られた菌体をアセトン８
ｌに浸漬した後、濾過して菌体を分離し、テストステロ
ン−５α−レダクターゼ阻害活性を有する画分を抽出し
た。そして、このアセトン抽出液を減圧下、４０℃で２
ｌになるまで濃縮した。次にこの濃縮液を酢酸エチル２
ｌで２回振盪し、酢酸エチル溶液を集め、無水硫酸ナト
リウム４００ｇで脱水した後、濾過して硫酸ナトリウム
を除去し、減圧下、４０℃で濃縮、乾固して、テストス
テロン−５α−レダクターゼ阻害活性を有する粗活性画
分２．７ｇを得た。
ｌに浸漬した後、濾過して菌体を分離し、テストステロ
ン−５α−レダクターゼ阻害活性を有する画分を抽出し
た。そして、このアセトン抽出液を減圧下、４０℃で２
ｌになるまで濃縮した。次にこの濃縮液を酢酸エチル２
ｌで２回振盪し、酢酸エチル溶液を集め、無水硫酸ナト
リウム４００ｇで脱水した後、濾過して硫酸ナトリウム
を除去し、減圧下、４０℃で濃縮、乾固して、テストス
テロン−５α−レダクターゼ阻害活性を有する粗活性画
分２．７ｇを得た。
【００２５】この粗活性画分をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーによって分画した。すなわち、粗活性画分
をクロロホルム１０ｍｌに溶解し、シリカゲル（メルク
社製）３００ｇを充填したガラス製カラム３×５０ｃｍ
の上部に付した後、クロロホルム：メタノール＝９８：
２、９６：４、９４：６、９２：８の溶媒各２ｌずつを
流した。分画は２５０ｍｌずつ行い、分画画分７〜１５
を集めて減圧下、４０℃で濃縮、乾固し、濃縮物１．２
３ｇを得た。
トグラフィーによって分画した。すなわち、粗活性画分
をクロロホルム１０ｍｌに溶解し、シリカゲル（メルク
社製）３００ｇを充填したガラス製カラム３×５０ｃｍ
の上部に付した後、クロロホルム：メタノール＝９８：
２、９６：４、９４：６、９２：８の溶媒各２ｌずつを
流した。分画は２５０ｍｌずつ行い、分画画分７〜１５
を集めて減圧下、４０℃で濃縮、乾固し、濃縮物１．２
３ｇを得た。
【００２６】このようにして得られた濃縮物を１０ｍｇ
当たり１０ｍｌのメタノールに溶解し、分取用の逆相高
速液体クロマトグラフィー（カラム：資生堂カプセルパ
ックＣ18、３０×２５０ｍｍ）によって、溶媒がメタノ
ール：水＝８０：２０、流量２７ｍｌ、注入量０．８ｍ
ｌ、検出２５２ｎｍの条件で分取した。本発明のＳＮＡ
−４６０６物質は９分で溶出されるので、その画分を集
め、減圧下、４０℃で濃縮、乾固し、濃縮物７１ｍｇを
得た。さらに、上記の濃縮物を５０℃の酢酸エチル２ｍ
ｌに溶解し、室温に１８時間放置した後、グラスフィル
ターを用いて生成した結晶を分取した。次いで、この結
晶を減圧下で乾燥し、結晶６０ｍｇを得た。この物質の
理化学的性質を測定したところ、前記ＳＮＡ−４６０６
物質であることが確認された。
当たり１０ｍｌのメタノールに溶解し、分取用の逆相高
速液体クロマトグラフィー（カラム：資生堂カプセルパ
ックＣ18、３０×２５０ｍｍ）によって、溶媒がメタノ
ール：水＝８０：２０、流量２７ｍｌ、注入量０．８ｍ
ｌ、検出２５２ｎｍの条件で分取した。本発明のＳＮＡ
−４６０６物質は９分で溶出されるので、その画分を集
め、減圧下、４０℃で濃縮、乾固し、濃縮物７１ｍｇを
得た。さらに、上記の濃縮物を５０℃の酢酸エチル２ｍ
ｌに溶解し、室温に１８時間放置した後、グラスフィル
ターを用いて生成した結晶を分取した。次いで、この結
晶を減圧下で乾燥し、結晶６０ｍｇを得た。この物質の
理化学的性質を測定したところ、前記ＳＮＡ−４６０６
物質であることが確認された。
【００２７】
【発明の効果】本発明の実施により、新規なＳＮＡ−４
６０６物質を得ることができた。本物質は、強いテスト
ステロン−５α−レダクターゼ阻害活性を有するので、
男性ホルモン亢進によって引き起こされる前立腺肥大症
や皮膚機能亢進等の疾患の予防または治療等の医薬品用
途として有用である。
６０６物質を得ることができた。本物質は、強いテスト
ステロン−５α−レダクターゼ阻害活性を有するので、
男性ホルモン亢進によって引き起こされる前立腺肥大症
や皮膚機能亢進等の疾患の予防または治療等の医薬品用
途として有用である。
【図１】ＳＮＡ−４６０６物質の赤外吸収スペクトルを
示す。
示す。
【図２】ＳＮＡ−４６０６物質の 1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルを示す。
ルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (5)
- 【請求項１】 ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ ｓｐ．）に属し、下記構造式を有する新規テ
ストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４
６０６産生菌。 【化１】 - 【請求項２】 ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ ｓｐ．）に属する菌が、ストレプトミセス
ｓｐ．ＳＮＡ−４６０６（微工研菌寄第１２９１２号）
である請求項１記載の産生菌。 - 【請求項３】 下記構造式で示される新規テストステロ
ン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６。 【化２】 - 【請求項４】 ストレプトミセス属に属する新規テスト
ステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０
６生産菌を培養し、その菌体から新規テストステロン−
５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６を採取す
ることを特徴とする新規テストステロン−５α−レダク
ターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６の製造方法。 - 【請求項５】 ＳＮＡ−４６０６生産菌が、ストレプト
ミセス ｓｐ．ＳＮＡ−４６０６（微工研菌寄第１２９
１２号）である請求項４記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4203172A JPH0625277A (ja) | 1992-07-08 | 1992-07-08 | 新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６産生菌、新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4203172A JPH0625277A (ja) | 1992-07-08 | 1992-07-08 | 新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６産生菌、新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６及びその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0625277A true JPH0625277A (ja) | 1994-02-01 |
Family
ID=16469654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4203172A Pending JPH0625277A (ja) | 1992-07-08 | 1992-07-08 | 新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６産生菌、新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0625277A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6645611B2 (en) | 2001-02-09 | 2003-11-11 | 3M Innovative Properties Company | Dispensable oil absorbing skin wipes |
| US7157093B1 (en) | 1997-12-05 | 2007-01-02 | 3M Innovative Properties Company | Oil cleaning sheets for makeup |
| CN102344468A (zh) * | 2011-07-13 | 2012-02-08 | 马丁 | 一类新型的akt/pkb激酶激动剂的获得及其用途 |
-
1992
- 1992-07-08 JP JP4203172A patent/JPH0625277A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7157093B1 (en) | 1997-12-05 | 2007-01-02 | 3M Innovative Properties Company | Oil cleaning sheets for makeup |
| US6645611B2 (en) | 2001-02-09 | 2003-11-11 | 3M Innovative Properties Company | Dispensable oil absorbing skin wipes |
| CN102344468A (zh) * | 2011-07-13 | 2012-02-08 | 马丁 | 一类新型的akt/pkb激酶激动剂的获得及其用途 |
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