JPH0374678B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野 本発明は、新規な抗生物質SF−2398物質及び
その製造法に関するものである。更に詳しく述べ
れば、新規な抗生物質SF−2398物質及びストレ
プトミセス属に属するSF−2398物質生産菌を培
養し、培養物からSF−2398物質を採取すること
よりなる新抗生物質SF−2398物質の製造法に関
するものである。 発明の構成 本発明者らは、種々のグラム陽性菌、陰性菌、
カビに抗菌活性を有する新規、かつ有用な抗生物
質を探索した結果、ストレプトミセス属に属する
菌株の培養物中に新規抗生物質SF−2398物質が
生産されていることを見出だし、その有用物質を
培養物中から純粋に単離し、その理化学的性状及
び生物学的性状を確定することにより、本発明を
完成させた。 本発明に使用されるSF−2398物質生産菌の一
例としては、本発明者らにより千葉県君津市の土
壌より新たに分離されたSF−2398株がある。SF
−2398株の菌学的性状は次の通りである。 形態 基生菌糸はよく伸長分枝し通常の条件下では
分断しない。気菌糸の着生は極めて貧弱であ
る。放線菌の培養に通常用いられる寒天培地に
おいて、気菌糸は肉眼的には観察できず、わず
かに、グリセロール・アスパラギン寒天とオー
トミール寒天で光学顕微鏡観察により気菌糸着
生が認められ、気菌糸先端に胞子連鎖も確認さ
れた。気菌糸の分岐は単純分岐で車軸分岐は見
られない。気菌糸先端の胞子連鎖は、螺旋状
で、ループ状あるいはフツク状も認められる。
胞子の運動性は観察されない。胞子嚢、菌核な
どの特殊構造は基生菌糸、気菌糸のいずれにも
観察されない。電子顕微鏡による観察では、胞
子は卵型ないし楕円型で、大きさは、0.5〜0.8
×0.7〜1.2μm、表面構造はトゲ状（spiny）で
ある。胞子は通常10胞子前後連鎖する。 各種培地上の生育状態 SF−2398株の各種寒天培地上での生育状態
は第１表に示す通りである。培養は28℃で行な
い、観察は14〜21日培養後に行なつた。

【表】 認められる。
生理的性質 (1) 生育温度範囲：イースト麦芽寒天において
15〜40℃の温度範囲で生育し、26〜32℃にお
いて良好に生育する。 (2) ゼラチンの液化：陽性 (3) スターチの加水分解：陽性 (4) 硝酸塩の還元：陽性 (5) 脱脂乳に対する作用：ペプトン化、疑固と
もに陰性 (6) 耐塩性：1.5％食塩添加では生育するが、
３％以上では生育しない。 (7) メラニン様色素の生成：陰性 炭素源の利用性 (1) 利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクト
ース、Ｄ−マンニトール (2) 利用が疑わしい：Ｄ−キシロース、Ｌ−ラ
ムノース (3) 利用しない：Ｌ−アラビノース、ラフイノ
ース、シユクロース、ｉ−イノシトール 菌体分析 全菌体の加水分解物中のジアミノピメリン酸
はLL型であつた。 以上の菌学的性状から、SF−2398株は放線菌
の中でストレプトミセス属に属する菌株である。
本発明者らはSF−2398株をストレプトミセス・
エスピー・SF−2398（Streptomyces sp.SF−
2398）と称することとした。SF−2398株は微工
研に微工研菌寄第8118号（FERM Ｐ−8118）と
して受託されている。 SF−2398株は他の放線菌の場合にみられるよ
うに、その性状が変化しやすい。例えば、SF−
2398株の、またはこの株に由来する突然変異株
（自然発生または誘発性）、形質接合体または遺伝
子組換え体であつても、抗生物質SF−2398物質
を生産するものは総て本発明に使用できる。本発
明の方法では、前記の菌を通常の微生物が利用し
うる栄養物を含有する培地で培養する。栄養源と
しては、従来放線菌の培養に利用されている公知
のものが使用できる。例えば炭素源として、グル
コース、水あめ、デキストリン、澱粉、糖みつ、
動・植物油等を使用できる。また窒素源として、
大豆粉、小麦はい芽、コーンステイープリカー、
綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸
アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用でき
る。その他、必要に応じ、ナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩
素、燐酸、硫酸、及びその他のイオンを生成する
ことができる無機塩類を添加することは有効であ
る。また菌の発育を助け、抗生物質SF−2398物
質の生産を促進するような有機および無機物を適
当に添加することができる。 培養法としては。好気的条件下での培養法、特
に深部培養法が最も適している。培養に適当な温
度は、15〜40℃であるが、多くの場合、26〜32℃
付近で培養する。抗生物質SF−2398物質の生産
は培地や培養条件により異なるが、振盪培養、タ
ンク培養とも通常２〜10日の間でその蓄積が最高
に達する。培養物中の抗生物質SF−2398物質の
蓄積量が最高になつた時に培養を中止し、培養液
中から目的物質を単離精製する。 培養液中からの抗生物質SF−2398物質の単離
は後記実施例に示すごとく、本抗生物質の理化学
的性状を考慮して種々の方法を単独あるいは適宜
組み合わせることによつて行なわれる。アンバー
ライトXAD−２（ローム・アンド・ハース社製）、
ダイヤイオンHP−20（三菱化成社製）等の合成
吸着剤、セフアデツクスLH−20（フアルマシア
社製）、トヨパールHW−40（東洋曹達社製）等の
ゲル濾過剤、酢酸エチル、ベンゼル等による溶媒
抽出法、シリカゲル、アルミナ、フロリジル等に
よるカラムクロマトグラフイー等が有効であるが
以下の方法が効率的である。 即ち培養液より菌体その他の固形物を珪そう土
等の濾過助剤を用いて濾過し、濾液中の有効成分
をダイヤイオンHP−20に吸着させ樹脂を水洗
後、50％アセトン水で溶出する。活性画分を減圧
濃縮し、アセトンを溜去した濃縮液をPH5.0にし
酢酸エチルにて有効成分を抽出する。さらに0.4
％炭酸水素ナトリウム溶液で逆転抽出し、さらに
PH5.0にし酢酸エチルで充填した活性炭を通過さ
せ、脱色後、濃縮乾固する。さらにセフアデツク
スLH−20のクロマトグラフイーを行ない、SF−
2398物質の純品を得ることができる。以下にSF
−2398物質の理化学的性状を示す。 １） 元素分析値： 遊離酸 炭素66.14％，水素8.31％ ２） 分子式及び分子量： FD−MSm／Z711（Ｍ＋Na）より推定される遊
離酸の分子式C38H56 O11（分子量688） ３） 融点： 遊離酸 85℃ ナトリウム塩290℃まで変化を認めない。 ４） 比旋光度： ［α］²⁰ _D＝−134.6゜（Cl，メタノール） ５） 紫外部吸収スペクトル： 第１図に示す通りメタノール中で237nm （Ｅ１％ 1cm680）に極大吸収を示す。 ６） 赤外部吸収スペクトル： 第２図に遊離酸のスペクトルを示し、その吸
収値（cm^-1）は以下のとおりである。 3400，2950，2920，2850，1700，1640，1610，
1420，1380，1260，1170，1080，1060，1030，
980，940，880，840第３図にナトリウム塩のス
ペクトルを示し、その吸収値（cm^-1）は以下の
とおりである。 3400，2950，2900，2850，1710，1640，1560，
1400，1360，1330，1300，1240，1180，1140，
1020，960，920，880，830 ７） 溶解性： メタノール、アセトン、酢酸エチルに可溶。 クロロホルム、水に不溶。 ８） 呈色反応： レミユー、ヨウ素、硫酸試薬 陽性 ニンヒドリン、グレイグ・リーバツク、塩化第
２鉄試薬 陰性 ９） 薄層クロマトグラフイーのRf値： シリカゲル60F₂₅₄（メルク社製） クロロホルム：メタノール（５：１） 0.47 ベンゼン：メタノール（１：１） 0.58 ｎ−ブタノール：メタノール：水（４：１：
１） 0.69 10） 中性、酸性、塩基性の区別：酸性 11） 物質の色及び外観：白色粉末 12） ¹H NMRスペクトル： 重メタノール中400MHzで測定したスペクト
ルは第４図に示す通りであり、そのδ値
（ppm）は以下のとおりである。 0.65（ｄ，3H），0.70（ｔ，3H），0.95（ｄ，3H），
1.10（ｍ）1.35（ｍ），1.50（ｍ），1.60（ｓ，3H），
2.10（ｍ）2.1（ｍ），2.20（ｍ），2.40（ｍ），2.45
（ｍ），3.30（ｍ，1H），3.90（ｍ，1H），4.45
（ｍ，1H），5.35（dd，1H），5.45（ｍ，1H），
5.60（ｄ，1H），5.70（ｓ，1H），6.10（ｄ，1H），
6.30（brs，1H），6.80（dd，1H） 13） ¹³C NMRスペクトル： 重メタノール中100MHzで測定したスペクト
ルは第５図に示す通りであり、そのδ値
（ppm）は以下のとおりである。 176.07，173.38，173.38，170.48，152.43，
151.88，139.24，137.74，135.43，133.90，
129.41，127.96，122.86，122.04，97.03，
84.30，79.75，76.87，76.29.44.10，36.83，
35.48，34.83，33.05，32.78，32.54，31.29，
30.68，30.38，28.72，25.49，23.48，22.74，
17.99，15.25，14.71，14.31，13.02 以上述べた理化学的性状および第２表に示す生
物学的性状と本発明化合物に類似する既知抗生物
質のそれとを比較したが、該当する物質はなく
SF−2398物質は新規な抗生物質と判断された。 以下に本発明の実施例を示すが、これらは単な
る一例であつて本発明を限定するものではない。
ここに例示しなかつた多くの変法あるいは修飾手
段を用い得ることはもちろんのことである。 実施例 １ 種培地としてスターチ2.0％、グルコース1.0
％、小麦はい芽0.6％、ポリペプトン0.5％、酵母
エキス0.3％、大豆粉0.2％、炭酸カルシウム0.1％
を含む培地を用いた。又生産培地として、スター
チ2.5％、小麦はい芽2.0％、コーンステイープリ
カー0.5％、塩化ナトリウム0.25％、燐酸水素２
カリウム0.1％を含む培地を用いた。尚、殺菌前
PH7.0に調整して使用した。 前記種培地20mlを分注した100ml容三角フラス
コを120℃で30分間殺菌し、これにストレプトミ
セス・エスピー・SF−2398株（FERM Ｐ−
8118）の斜面培養の４〜５白金耳を接種し、28℃
４日間振盪培養し、第１種培養とした。ついで種
培地80mlを分注した500ml容三角フラスコを120℃
で30分間殺菌し、前記第１種培養４mlを接種し、
28℃２日間振盪培養し、これを第２種培養とし
た。さらに種培地500mlずつを分注した2L容カブ
型フラスコ２本を120℃で30分間殺菌し、第２種
培養30mlずつを接種し、28℃で２日間振盪培養
（往復式）し、これを第３種培養とした。予め120
℃で30分間殺菌した20Lの生産培地を含む30L容
ジヤーフアーメンター２基に前記の第３種培養
500mlずつを接種し、28℃４日間通気（20L／
分）、撹拌（初期300rpm、41時間以降450rpm）
培養した。培養終了後、濾過助剤として珪そう土
を加えて濾過し、濾液30Lを得た。 実施例 ２ 実施例１で得られた培養濾液30Lをダイヤイオ
ンHP−20 3Lを充填したカラムに通過させるこ
とにより有効成分を吸着させた。カラムを脱イオ
ン水10Lにて水洗後、有効成分を50％アセトン水
にて溶出した。活性画分を集め減圧濃縮し10Lと
し、6N塩酸でPH5.0に調整後、酢酸エチル5Lにて
抽出した。次いで有効成分を0.4％炭酸水素ナト
リウム溶液3Lで転溶後、PH5.0に調整し、酢酸エ
チル1Lで抽出し、抽出液を水洗後、無水硫酸ナ
トリウムで脱水し、酢酸エチルにて充填した活性
炭200mlの塔を通過させ、活性炭を酢酸エチルで
洗つた後、通過液及び洗液を合併し、濃縮乾固し
てSF−2398物質の白色粗粉末2.7ｇを得た。 更に上記粉末１ｇを２mlのメタノールに溶か
し、メタノールにて充填してセフアデツクスLH
−20 500mlのカラムに通し、メタノールで展開し
た。20mlフラクシヨンでフラクシヨンNo.22〜26に
有効物質が溶出した。この活性フラクシヨンを集
めた減圧下で濃縮乾固するとSF−2398物質の白
色粉末800mgが得られた。本物質は前記の理化学
的性状を有する。 発明の効果 次に、SF−2398物質の真菌に対する最小発育
阻止濃度（MIC）を第２表に示した。

【表】

【表】 これらの結果から明らかなようにSF−2398物
質は、真菌に抗菌力を有しており真菌症治療剤と
しての有用性が期待される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、SF−2398物質のメタノール溶液で
の紫外部吸収スペクトルである。第２図は、SF
−2398物質遊離酸の臭化カリウム錠での赤外部吸
収スペクトルである。第３図は、SF−2398物質
ナトリウム塩の臭化カリウム錠中での赤外部吸収
スペクトルである。第４図は、SF−2398物質の
重メタノール溶液中での ¹H NMRスペクトルで
ある。第５図は、SF−2398物質の重メタノール
溶液中の ¹³C NMRスペクトルである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学的性質を有するSF−2398物質
   及びその塩 １） 元素分析値： 遊離酸 炭素66.14％，水素8.31％ ２） 分子式及び分子量： FD−MS ｍ／Z711（Ｍ＋Na）より推定され
   る遊離酸の分子式C38H56 O11（分子量688） ３） 融点： 遊離酸 85℃ ナトリウム塩 290℃まで変化を認めない。 ４） 比旋光度： ［α］²⁰ _D＝−134.6゜（Cl，メタノール） ５） 紫外部吸収スペクトル： 第１図に示す通りメタノール中で237nm （Ｅ１％ 1cm680）に極大吸収を示す。 ６） 赤外部吸収スペクトル： 第２図に遊離酸のスペクトルを示し、その吸
   収値（cm^-1）は以下のとおりである。 3400，2950，2920，2850，1700，1640，1610，
   1420，1380，1260，1170，1080，1060，1030，
   980，940，880，840 第３図にナトリウム塩のスペクトルを示し、
   その吸収値（cm^-1）は以下のとおりである。 3400，2950，2900，2850，1710，1640，1560，
   1400，1360，1330，1300，1240，1180，1140，
   1020，960，920，880，830 ７） 溶解性： メタノール、アセトン、酢酸エチルに可溶。 クロロホルム、水に不溶。 ８） 呈色反応： レミユー、ヨウ素、硫酸試薬 陽性 ニンヒドリン、グレイグ・リーバツク、塩化第
   ２鉄試薬 陰性 ９） 薄層クロマトグラフイーのRf値： シリカゲル60F₂₅₄（メルク社製） クロロホルム：メタノール（５：１） 0.47 ベンゼン：メタノール（１：１） 0.58 ｎ−ブタノール：メタノール：水（４：１：
   １） 0.69 10） 中性、酸性、塩基性の区別：酸性 11） 物質の色及び外観：白色粉末 12） ¹H NMRスペクトル： 第４図に示す通りでありそのδ値（ppm）は
   以下のとおりである。 0.65（ｄ，3H），0.70（ｔ，3H），0.95（ｄ，3H），
   1.10（ｍ），1.35（ｍ），1.50（ｍ），1.60（ｓ，3H）
   ，
   2.10（ｍ）2.1（ｍ），2.20（ｍ），2.40（ｍ），2.45
   （ｍ）3.30（ｍ，1H），3.90（ｍ，1H），4.45（ｍ，
   1H），5.35（dd，1H），5.45（ｍ，1H），5.60
   （ｄ，1H），5.70（ｓ，1H），6.10（ｄ，1H），
   6.30（brs，1H），6.80（dd，1H） 13） ¹³C NMRスペクトル： 第５図に示す通りでありそのδ値（ppm）は
   以下のとおりである。 176.07，173.38，173.38，170.48，152.43，
   151.88，139.24，137.74，135.43，133.90，
   129.41，127.96，122.86，122.04，97.03，
   84.30，79.75，76.87，76.29，44.10，36.83，
   35.48，34.83，33.05，32.78，32.54，31.29，
   30.68，30.38，28.72，25.49，23.48，22.74，
   17.99，15.25，14.71.14.31，13.02 ２ ストレプトミセス属に属する抗生物質SF−
   2398物質生産菌を培地に培養し、培養物から下記
   の理化学的性質を有するSF−2398物質を単離す
   ることを特徴とする新抗生物質SF−2398物質の
   製造法。 １） 元素分析値： 遊離酸 炭素66.14％，水素8.31％ ２） 分子式及び分子量： FD−MS ｍ／Z711（Ｍ＋Na）より推定され
   る遊離酸の分子式C38 H56 O11（分子量688） ３） 融点： 遊離酸 85℃ ナトリウム塩 290℃まで変化を認めない。 ４） 比旋光度： ［α］²⁰ _D＝−134.6゜（Cl，メタノール） ５） 紫外部吸収スペクトル： 第１図に示す通りメタノール中で237nm（Ｅ１％ 1cm680）に極大吸収を示す。 ６） 赤外部吸収スペクトル： 第２図に遊離酸のスペクトルを示しその吸収
   値は（cm^-1）は以下のとおりである。 3400，2950，2920，2850，1700，1640，1610，
   1420，1380，1260，1170，1080，1060，1030，
   980，940，880，840 第３図にナトリウム塩のスペクトルを示し、
   その吸収値（cm^-1）は以下のとおりである。 3400，2950，2900，2850，1710，1640，1560，
   1400，1360，1330，1300，1240，1180，1140，
   1020，960，920，880，830 ７） 溶解性： メタノール、アセトン、酢酸エチルに可溶。 クロロホルム、水に不溶。 ８） 呈色反応： レミユー，ヨウ素，硫酸試薬 陽性 ニンヒドリン、グレイグ・リーバツク、 塩化第２鉄試薬 陰性 ９） 薄層クロマトグラフイーのRf値： シリカゲル60F₂₅₄（メルク社製） クロロホルム：メタノール（５：１） 0.47 ベンゼン：メタノール（１：１） 0.58 ｎ−ブタノール：メタノール：水（４：１：
   １） 0.69 10） 中性、酸性、塩基性の区別：酸性 11） 物質の色及び外観：白色粉末 12） ¹H NMRスペクトル： 第４図に示す通りでありそのδ値（ppm）は
   以下のとおりである。 0.65（ｄ，3H），0.70（ｔ，3H），0.95（ｄ，3H），
   1.10（ｍ），1.35（ｍ），1.50（ｍ），1.60（ｓ，3H）
   ，
   2.10（ｍ），2.1（ｍ），2.20（ｍ），2.40（ｍ），2.4
   5
   （ｍ），3.30（ｍ，1H），3.90（ｍ，1H），4.45
   （ｍ，1H），5.35（dd，1H），5.45（ｍ，1H），
   5.60（ｄ，1H），5.70（ｓ，1H），6.10（ｄ，1H），
   6.30（brs，1H），6.80（dd，1H） 13） ¹³C NMRスペクトル： 第５図に示す通りでありそのδ値（ppm）は
   以下のとおりである。 176.07，173.38，173.38，170.48，152.43，
   151.88，139.24，137.74，135.43，133.90，
   129.41，127.96，122.86，122.04，97.03，
   84.30，79.75，76.87，76.29，44.10，36.83，
   35.48，34.83，33.05，32.78，32.54，31.29，
   30.68，30.38，28.72，25.49，23.48，22.74，
   17.99，15.25，14.71，14.31，13.02