JPH0381218A - 神経成長因子分泌誘導剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、医薬、特に老午性痴呆症あるいはアルツハイ
マー病等における神経退行性疾患の治療または予防に有
用な神経成長因子分泌誘導剤に関する。

［従来技術］ 社会の高齢化が進む中で、種々の脳機能改善作用剤が提
案されている。

神経成長因子（ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏ
ｒ）（以下ＮＧＦと略記する）は発生過程における交感
および知覚神経細胞や脳神経細胞の分化促進因子として
生体の生存に必須な栄養因子と考えられている。

またこのＮＧＦは物質（タンパク質）としての性質が解
明されている［ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　ｒ世、５
３８（１９８３）］。

老午性痴呆病やアルツハイマー病等の患者においては、
ＮＧＦの合皮、分泌は極めて低レベルであるか欠如して
いる。そこでＮＧＦを老午痴呆症やアルツハイマー病等
の神経退行性疾患に用いてこれらを治療する試みが行わ
れている［ネイチャ（Ｎａｔｕｒｅ）、３２９．６５（
１９８９）］。しかし生体内におけるＮＧＦの合成、分
泌は通常低レベルであり、これを生体から単離したり、
クローニングして治療等に必要な量を産生ずることは極
めて困難である。

一方ＮＧＦは交感および知覚神経細胞や脳神経細胞にお
いて生合成されることが知られている［バイオケミカル
・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲ
ｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）１３
６．５７（１９８６）］。そこで、各種神経細胞や脳神
経細胞のＮＧＦの分泌を高める方策が種々試みられてい
る。たとえばカテコール化合物によるＮＧＦ分泌誘導が
試みられている［月刊薬事、　２９．４９（１９８７）
］。しかしこれらの化合物はその作用強度や細胞毒性な
どの点から未だ満足すべきものではない。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明者らはこのような観点から１．カテコール系化合
物に代わりうるＮＧＦ分泌促進剤を発掘すべく鋭意研究
を行い、毒性の極めて低い安全な置換１．４−ベンゾキ
ノンおよび置換１．４−ヒドロキノン誘導体が強いＮＧ
Ｆ分泌誘発作用を有することを見いだした。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、−数式 ［式中Ｒ１は低級アルキル基を　Ｒ２は水素あるいは置
換されていてもよいアルキルまたはアルケニル基を示す
。Ｒ３およびＲ４はそれぞれ低級アルキル基または低級
アルコキシ基を示すか、またはＲ３とＲ４とで一個のブ
タジェニレン基を示す。ＸｌＸ２はそれぞれエステル化
またはエーテル化されていてもよい水酸基を示す。］で
表される化合物を有効成分とする神経成長因子分泌誘導
剤、に関する。

前記−数式（Ｉ）および（Ｉ＋）中、Ｒ１で表される低
級アルキル基としては、たとえばメチル。

エチル、プロピル、ブチル基など炭素数１〜４のものが
あげられる。Ｒ２で表される置換されていてもよいアル
キル基のアルキルとしてはたとえばメチル、エチル、プ
ロピル、ブチル、ペンチル。

ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル。

ウンデシル、ドデシル、トリデシル、ペンタデシル、ヘ
プタデシル、エイコシル、トコシルなど炭素数１〜２２
の鎖状炭化水素残基を、置換されていてもよいアルケニ
ル基のアルケニルとしてはたトエハエテニル、ｌ−プロ
ペニル、３−メチル−２−ブテニル、２，６−シメチル
ー２，６−オクタジェニルなど炭素数２〜１５の鎖状炭
化水素残基を示し、その二重結合は通常１〜３個でこれ
らの二重結合は共役していてもよい。Ｒ２で表される置
換されていてもよいアルキル基、アルケニル基の置換基
としてはたとえば水酸基、カルボキシル基、アルコキシ
カルボニル基（例、メトキシカルボニル、エトキシカル
ボニル、プロピオニルオキシカルボニル、ブトキシカル
ボニルなどの炭素数１〜４のもの）、アリール（例、フ
ェニル、ｌ−ナフチル、２−す７チル、インダニルなど
）、複素環基（例、２−ピリジル、３−ピリジル、２−
チエニル、３−チエニルなど）、ハロゲン（フッ素、塩
素、臭素、ヨウ素）などがあげられる。該置換基がアリ
ールおよび複素環基である場合にはこれらはさらに環上
の任意の位置に１または２以上の置換基を有していても
よく該置換基としては。

たとえば無置換の（Ｃ＋〜Ｃ４）アルキル（例、メチル
、エチル、プロピル、ブチル）、水酸基、カルボキシル
、（ＣＺ〜ＣＳ）アルコキシカルボニル（例、メトキシ
カルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニ
ル、ブトキシカルボニル）などがあげられる。またアル
キル基、アルケニル基の置換基の置換位置はそのいかな
る位置でもよいが、１位またはω位が好ましい。Ｒ３お
よびＲ４で表される低級アルキルとしては、ｔ；とえば
それぞれメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブ
チル。

ｉ−ブチル、　５８Ｃ−ブチル、ｔ−ブチル、アミル、
ヘキシルなど（ｃ　ｔ””　ｃ　ｓ）アルキルがあげら
れ、とりわけ（Ｃ＋〜Ｃ５）アルキルが好ましい。これ
らの低級アルキル基は置換基を有していてもよく、該置
換基としては水酸基、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、
ヨウ素）、ニトロ、トリフルオロメチル、カルボキシル
、（ｃｚ−ｃｓ）アルコキシカルボニル（メトキシカル
ボニル、エトキシカルボニルなど）。

３−ピリジル、１−イミダゾリル、５−チアゾリルなど
があげられる。またＲ３およびＲ４で表される低級アル
コキシとしてはメトキシ、エトキシ。

プロポキシ、ｌ−プロポキシなどの（Ｃｔ〜ＣＳ）アル
コキシがあげられる。Ｒ３とＲ′とでブタジェニレンを
示すときはＲ３とＲ◆のそれぞれが結合する炭素ととも
にベンゼン環を形成し、形成されたベンゼン環はその環
上の任意の位置に１〜３個の置換基を有していてもよ＜
、核置換基としては、たとえば低級（Ｃｒ−Ｃ３）アル
キル（例、メチル。

エチル、プロピルなど）、低級（Ｃ＋〜ＣＳ）アルコキ
シ（例、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど）、水酸
基、ニトロ、ハロゲンなどがあげられる。

前記−数式（１１）においてＸＩおよびＸ２で表される
エーテル化されたヒドロキシル基としてはアルコキシ、
アラルキルオキシなどがあげられる。

該低級アルコキシとしてはたとえばメトキシメトキシ、
エトキシ、プロポキシ、ｉ−プロポキシ。

ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、　５ｅｅ−ブ
トキシ、アミルオキシ、ヘキシルオキシなどの化テトラ
ヒドロピラニルオキシ、テトラヒドロフリルオキシなど
（ＣＩ−ＣＩ）アルコキシがあげられ、とりわけ（Ｃ＋
〜Ｃａ）アルコキシが好ましい。アラルキルオキシとし
てはたとえばベンジルオキシなどがあげられる。またエ
ステル化されたヒドロキシル基としてはたとえばカルボ
ン酸アシルオキシ。

リン酸アシルオキシなどがあげられる。該カルボン酸ア
シルオキシのカルボン酸アシルとしてはたとえばホルミ
ル、アセチル、プロピオニル、イソブチリル、デカノイ
ル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシルカルボニル
などの鎖状もしくは環状の炭素数３〜ＩＯのアルカノイ
ル、たとえばベンゾイルなどのアリールカルボニルの他
４級化さレテいてもよいニコチノイル、コハク酸半アシ
ルなどがあげられる。

化合物（１）および（１１）はその有する置換基の種類
により塩を形成していてもよく、たとえば有機酸（例、
酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マレイン酸など）もし
くは無機酸（塩酸、硫酸、リン酸など）などの酸との塩
や、アルカリ金属（カリウム、ナトリウムなど）アルカ
リ土類金属（カルシウム、マグネシウムなど）、アンモ
ニアなどとの塩などがあげられ、とりわけ生理学的に許
容される塩が好ましい。

化合物（Ｉ）および（Ｉ＋）はたとえばケミカル・アン
ド・ファルマシューティカル・プルチン（Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃａｕｔｉｃａｌ　Ｂｕｌ
ｌｅｔｉｎ）、３０．２７９７（１９８２）　、同じ＜
　３３．４４２２（１９８５）、特開昭５１−１２８９
３２、特開昭６３−０４５２５７．特開昭５７−１０９
７３９．特開昭６１−０４４８４０に記載の方法など公
知方法により製造することができる。

本発明においては、上記化合物（１）、ＣＩ＋）の中で
とりわけ中枢移行性の高い化合物たとえば６−（１０−
ヒドロキシデシル）−２，３−ジメトキシ−５−メチル
−１，４−ベンゾキノン、６−（１０−ヒドロキシデシ
ル）−２，３−ジメトキシ−５−メチル−１，４−ヒド
ロキノンおよび２゜３．５−）リフチル−１，４−ベン
ゾキノンが好ましい。

本発明の化合物を上記したような神経成長因子分泌誘導
剤として用いるにあたっては、自体公知の方法にしたが
ってたとえば、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤、座
剤など種々の剤型で、人を含む哺乳動物に経口的もしく
は非経口的に投与しうる。投与量は対象疾患の種類、症
状などにより差異はあるが、−殻内に成人においては、
経口投与の場合、−日につきＯ−１ｍｇ〜５００ｍｇ、
好ましくは５ｍｇ〜２００ｍ９である。

本発明の神経成長因子分泌誘導剤は人を含む哺乳動物の
脳機能障害の治療および予防に有用であり、その対象疾
患としてはたとえば家族性自律神経障害、神経線維腫瘍
、神経芽細胞腫、褐色細胞腫、老人性痴呆症、アルツハ
イマー病などがあげられる。

［作用および実施例］ 以下の実験例および実施例により、本発明の作用および
実施態様を具体的に説明する。

実験例１ ｉ）実験材料および方法 アストロダリア細胞を用いるＮＧＦ生合戊合成究はアル
ツハイマー型老人痴呆症との関連で極めて興味深い問題
である。そこで、マウスアストログリア細胞（ＭＢ−８
細胞）を用いて、本発明に係る化合物のＮＧＦ生合威促
進活性を検討した。このとき、増殖期の細胞より正常の
脳内の状態に近いと考えられる静止期のＭＢ−８細胞を
用いた。

ａ）実験材料 アストロダリア（ＭＢ−８）細胞は、国立精神神経セン
ター（古川昭栄博士）より恵与された。

Ｄ　Ｍ　Ｅ　Ｍ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉ
ｅｄ　Ｅａｇｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ）は日本製薬社製、牛
胎児血清（Ｆｅ２）はポクネック（Ｂｏｃｋｎｅｋ）社
製、硫酸ストレプトマイシン、ベンジルペニシリンカル
シウムは明治製菓株式会社より購入した。２４穴マルチ
ウエルプレートはファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）社製を使
用した。他の試薬はすべて市販の特級量を用いた。

ｂ）実験方法 ＭＢ−８細胞の培養 ８日齢マウス脳からのアストログリア細胞（ＭＢ−８細
胞）をｌＯ％ＦＣ３，グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリ
ン（１００ｕｎｉｔｓ／＋＋ｆｆ）、およびストレプト
マイシン（１００μｇ／ｍＱ’）を含むＤＭＥＭ中、炭
酸ガス培養器中（３７°０，５％Ｃ０８）で培養した。

これを数回繰り返し、コンフルエント状態（万邦状態）
に達した後、Ｆｅ２の代わりに０．５％ＢＳＡを含むＤ
ＭＥＭ中で約１０日間培養し、静止期に導入した。この
細胞を、種々の化合物を添加した０゜５％ＢＳＡを含む
ＤＭＥＭ中で２４時間培養し、その培養上清を集め、そ
の中に含まれるＮＧＦ量を以下に述べるマウスβＮＧＦ
の酵素免疫測定法により測定した。

１ｉ）ＮＧＦの酵素免疫測定法（Ｅｎｚｙｍｅ　ＩＩＩ
Ｉｍｕｎｏａｓｓａｙ：Ｅ　Ｉ　Ａ） ポリスチレンマイクロタイタープレート（ファルコンＦ
ａｌｃｏｎ３９１０．９６ｗｅｌ　１）に０．０５Ｍト
リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，３）で希釈したＰｒｏｔｅ
ｉｎ　Ａ−５ｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−４Ｂで調整した
抗マウスβＮＧＦ抗体免疫グロブリフ　Ｇ　（Ｉ　ｇ　
Ｇ　Ｘ１０ｇｇ／ｍ（２）をｉｏμｇづつ加え室温で２
時間放置し、抗マウスβＮＧＦ抗体１ｇＧを吸着させた
。抗体溶液を回収した後プレートは１００μａづつの洗
浄緩衝液（０，４Ｍ塩化ナトリウム、０．１％ＢＳＡ、
０．１％アジ化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグネシウムを
含む０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，６）で３回
洗浄した後、１５０μａの洗浄緩衝液を添加し室温１時
間ブロッキングした。洗浄緩衝液を吸引除去した後、各
ウェルに試料あるいはＮＧＦの標準溶液２５μＱ（試料
と同一の緩衝液で希釈したもの）を加えて室温で４時間
放置した。１００μαづつの洗浄緩衝液でプレートを３
回洗浄した後、洗浄緩衝液で希釈したビオチン化抗βＮ
ＧＦ抗体液（３５ｎｇ／ｍＱ）を３０ｍｆｆづつ加えて
、４℃−晩装置した。洗浄後、β−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ標識ストレプトアビジン（２００倍希釈したもの）３
０μαを加え、室温で１時間放置した。固相に固定され
たβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性は、基質として４−
メチルウンベリフェリル−β−ガラクトシドを用いて酵
素反応の結果生成する４−メチルウンベリフェロンの蛍
光強度を測定した。すなわち３回洗浄後、基質（ｌ　Ｏ
ｕｇ／ｍＱ）　３０μａづつ加えて室温で３時間反応さ
せた後、０．１Ｍグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（
ｐ　Ｈ１０，３）ｌ　５０μＱを加えて酵素反応を停止
し、これをさらに、予め反応停止液２゜０ｍＱを入れた
試験管に移し蛍光強度を励起波長３６０ｎｍ、測定波長
４５０ｎｍで測定した。蛍光光時計の蛍光強度はｌμｙ
／ｍＱのキニーネを含む０．ＩＮ硫酸の蛍光強度を１０
０に調整した。

１ｉｉ）結果 ａ）マウスβＮＧＦの標準曲線 確立したＢ−５Ａシステムに基づくマウスβＮＧＦに対
するＥＩＡ系の標準曲線を第１図に示す。

測定は０　、１５　ｐｇ／ｍＱから９　ｎｇ／ｌｎＱの
範囲で行ったが、９　ｎｇ／ｍａ以上では曲線はプラト
ーになり、測定範囲は１　ｐｇ７ｍ（１〜９　ｎｇ／ｍ
Ｑであった。

まＩ；、バックグランドが低く、ｌ　Ｉ）９／＋１１１
２から９　ｎｇ／ｍＱで蛍光強度の差が約１００倍あり
、ＮＧＦ濃度の読み取りは容易であった。水洗の検出限
界は約ｌ　ｐｇ／ｆｆと極めて高感度であった。

ｂ）Ｍ　Ｂ　−８細胞のＮＧＦの合皮・分泌に及ぼす発
明化合物の効果 第２図に６−（１０−ヒドロキシデシル）−２゜３−ジ
メトキシ−５−メチル−１，４−ベンゾキノン（化合物
Ａ）および６−（１０−ヒドロキシデシル）−２，３−
ジメトキシ−５−メチル−１゜４−ヒドロキノン（化合
物Ｂ）のＮＧＦ分泌促進効果を示した。

第３図に２，３−ジメトキシ−５−メチル−１゜４−ベ
ンゾキノン（化合物Ｃ）およびユビキノン−２（化合物
Ｄ）のＮＧＦ分泌促進効果を示した。

第４図にビタミＫＯ（化合物Ｅ）および２．３．５−ト
リメチル−１，４−ヒドロキノン（化合物Ｆ）のＮＧＦ
分泌促進効果を示した。

実験例２（発明化合物の急性毒性試験）マウスを用いた
ＬＤ、。値 １群ｌＯ匹のマウスを用い、その半数が死亡するに要す
る被検薬の投与量（ｍｇ／ｋｇ、経口投与ＸＬＤ、。）
を求めた。結果を第１表に示す。

［以下余白］ 第１表 製剤例１ （１）　６−（１０−ヒドロキシデシル）−２，３−ジ
メトキシ−５−メチル− １，４−ベンゾキノン ０ｇ （２）乳糖　　　　　　　　　　　１９８ｇ（３）トウ
モロコシ澱粉　　　　　　４０ｇ（４）ステアリン酸マ
グネシウム　　　２ｇ（１）、（２）および１５９のト
ウモロコシ澱粉から作ったペーストとともに顆粒化し、
これに１０９のトウモロコシ澱粉と（４）を加え、混合
物を圧縮錠剤機で圧縮して、錠剤−錠当たり（１）２０
ｍｇを含有する直径５ｍｍの錠剤１０００個を製造した
。

［発明の効果］ 本発明において用いられる置換１．４−ベンゾキノン誘
導体（Ｉ）または置換１．４−ヒドロキノン誘導体（１
１）を含有してなる神経成長因子分泌誘導剤は毒性が低
く、安全である。有用な対象疾患名としては、たとえば
老午痴呆性症、アルツハイマー病などがあげられ、これ
らの疾病の予防または治療に用いることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＢ−５Ａシステムに基づくマウスβＮＧＦに対
するＥＩＡ系の標準曲線を、第２図〜第４図は本発明で
用いる化合物のＮＧＦ分泌誘発促進効果を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ または ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＾１は低級アルキル基を、Ｒ＾２は水素ある
   いは置換されていてもよいアルキルまたはアルケニル基
   を示す。Ｒ＾３およびＲ＾４はそれぞれ低級アルキル基
   または低級アルコキシ基を示すか、またはＲ＾３とＲ＾
   ４とで一個のブタジエニレン基を示す。Ｘ＾１、Ｘ＾２
   はそれぞれエステル化またはエーテル化されていてもよ
   い水酸基を示す。］で表される化合物を有効成分とする
   神経成長因子分泌誘導剤。