JPH0387178A - 新規エンドデキストラナーゼ、その製造方法及び本酵素を用いたイソマルトオリゴ糖の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は新規エンドデキストラナーゼ、その製造方法及
び本酵素を用いたイソマルトオリゴ糖の製造方法に関す
る。

［従来の技術］ 近年、各種オリゴ糖が食品工業界等で機能性食品素材と
して注目されている。これらのオリゴ糖の一種であるイ
ソマルトトリオースは、難う触性甘味剤、腸内のビフィ
ズス菌増殖因子、あるいは研究用試薬、また、保ｄ性が
極めて高いので有効な保湿剤などとしての用途が期待出
来、その効率的な製造法の開発が甲まれている。

イソマルトトリオースを製造する方法としては、従来よ
りデキストランを鉱酸で部分加水分解する方法が知られ
ているが、この方法ではイソマルトトリオースが選択的
に取得できず、その収率も極めて低い。また、精製工程
も煩雑であり、工業的方法としては適していなかった。

他の方法として、デキストランを加水分解し、主として
イソマルトトリオースを生成するデキストラナーゼを利
用した、酵素法によるイソマルトトリオースの製造も検
討されている。

デキストランを加水分解し、主としてイソマルトトリオ
ースを生成するデキストラナーゼとしては、ブレビバク
テリウム・フスクム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔ。

ｅｒｉｕｍ　ｆｕｓｃｕｍ　ｖａｒ、　ｄｅｘｔｒａｎ
ｌｙｔｉｃｕｍ）が生産する細菌性エキソ型酵素［Ｂｉ
ｏｃｈｉｍ、　肋泄□　Ａｃｔａ世、６１〜７０　ｆ１
９７４）］が知られている。しがしながら、ブレビバク
テリウム起源のデキストラナーゼは、精製工程の煩雑さ
に加えて、酵素の回収率ならびに精製酵素の示す比活性
も低く、工業的生産には適していなかった、。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明は、上記従来技術の問題点に鑑みてなされたちの
であり、その目的は、ブレビバクテリウム起源でない新
たなエンドデキストラナーゼ生産菌を利用することによ
り高力価の新規なエンドデキストラナーゼを提供するこ
と、」１記エンドデキストラナーゼ生産菌を用いてエン
ドデキストラナーゼを高収率で工業的に製造する方法を
提供すること、更に、上記エンドデキストラナーゼを用
いてイソマルトトリオースを主体としたイソマルトオリ
ゴ糖を効率的に製造する方法を提供することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、デキストランに作用し、王としてイソマ
ルトトリオースを生成する酵素を生産する微生物の検索
を行った結果、糸状菌フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍｌ
属に属するｌ菌株が、デキストランに作用して主として
イソマルトトリオースを生成する酵素を、効率よく菌体
外に大量生産することを認め、本発明を完成するに至っ
た。

本菌株の菌学的性質を以下に述べる。

（１）各種培養培地における生育状態 ■麦芽寒天培地 本菌の麦芽寒天培地上での生育速度は、２５°Ｃ１３日
間ではコロニーの直径が０．５〜１．５　ｃｍに達し、
７日間では２．０〜３．０　ｃｍに達する。性状は白色
・ビロード状であり、分生子の形成は良好である。

■ポテト・スクロース寒天培地 本閑のポテト・スクロース寒天培地上での生育速度は、
２５℃、３日間ではコロニーの直径が１．０〜２．０　
ｃｍに達し、７日間では３．０〜５．０ｃｍに達する。

性状は白色・ビロード状であり、分生子の形成は良好で
ある。

■オートミール寒天培地 本閑のオートミール寒天培地上での生育速度は、２５°
Ｃ１３日間ではコロニーの直径が０５〜１　ｃｍに達し
、７日間では１．５〜２．０ｃｍに達する。性状は白色
・ビロード状であり、分生子の形成は少ない。

（２）生理的性質 ■生育ｐＨ ｐｌ＋４．５〜８．０のｐｌ＋領域で生育てきるが、生
育に至適なｐＨは５．０〜６．５である。

■１５〜４５℃の温度域で生育できるが、生育に至適な
温度は２０〜３０℃である。

■その他の卯著な特徴 デキストラン含有培地での培養ににす、エンドデキスト
ラナーゼを菌体外に誘導生産する。

（３）形態的特徴 ■分生子柄 分生子は側生である。

■フィアライド モノフィアライドである。

■分生子 大型分生子と小型分生子を有する。大型分生子は２５〜
３２×４〜５ＩＬｍで、腕曲しており、ショルダーを有
する。小型分生子は５〜７×２〜３μｍである６大を分
生子と小型分生子は０〜３個の隔壁を有する。

以上の所見をもとに、「菌類図鑑上・下」、宇田用俊−
１椿啓介ばか著、講談社、１９７７年刊行などにより分
類し、本菌株をＦｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ、と同定した。

なお、上記菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所に
、徹工研菌寄第１０９７６号（ＦＥＲＭＰ−１０９７６
）として寄託されている。

本発明におけるエンドデキストラナーゼの製造方法の骨
子とするところは、」１記のような糸状菌フザリウム（
Ｆｕｓａｒｉｕｍｌ属に属するエンドデキストラナーゼ
生産菌またはその突然変異株を培養培地に接種し、所定
の培養条件下で培養した後、当該培養物から菌体を除去
し、簡便な分離・精製法により高力価のデキストラナー
ゼを高収率で採取するようにしたことにある。

以下に、本発明で得られた新規エンドデキストラナーゼ
の諸性質について記・１反する。

（１）作用 本酵素はデキストランに作…し、主としてαイソマルト
トリオースを生成する。

（２）基質特異性 本酵素は主として細菌性多糖デキストランを加水分解す
る。一方、可溶性デンプン、アミロペクチン、プルラン
、カードラン、ラミナリン、キシランなどには作用を示
さない。

（３）至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 本酵素はｐＨ４，０〜１１．５の広範囲で作用し、至適
ｐＨは６．４付近にある（　０．２５％ファルマシア社
製デキストランＴ２Ｏ００に３０”Ｃ，７分間作用させ
た）。

５　ｍＭ　ＫＣｌ−ＮａＯＨ緩衝液中で、本酵素はｐＨ
１１，０においても約４０％の相対活性発現を示した。

したがって、本酵素が高アルカリ領域においても高活性
を発現することが確認された。また、本酵素はｐＨ４，
５〜１０．０の広範囲で安定である（各種ｐＨの２５　
ｍＭ　ＭｃＴ］ｖａｉｎｅ緩衝液中で４℃、２４時間放
置後、それぞれの残存活性を測定した）。

（４）作用温度範囲及び至適作用温度 本酵素はほぼ２０〜５５℃の範囲で作用し、至適作用温
度は３５℃付近である（０．２５％デキストランＴ２Ｏ
００、ｐＨ６，４，５分間反応）。

（５）温度安定性 本酵素をｐＨ６，４で、１０分分間様温度で加熱処理後
、それぞれの残存活性を測定した。その結集、４５℃ま
では１００％、５０”Ｃで約２５％の残存活性を示し、
５５℃でほぼ完全に失活した。

（６）酵素力価の測定法 エンドデキストラナーゼ活性測定における反応組成は１
％デキストラン丁２０００溶液０．５　ｍｌ、２５　ｍ
ＭＭｃｉｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６，４）　１．０　
ｍｌおよび酵素溶液０．５　ｍｌからなり、３０℃で一
定時間反応させる。

反応混液１．Ｏｍｌにつき、酵素反応により生成された
還元糖をＳｏｍｏｇｙｉ−Ｎｅｌｓｏｎ法を用いて定量
する。

この条件下で１分間にＩＬＬｍｏｌのグルコースに相当
する還元力を生成せしめる酵素量を１単位と定義する。

（７）エンドデキストラナーゼの精製方法　０ Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ、を液体培地にて２５°Ｃ，５
日間ジャーファメンターを用いて培養し、その培養液３
℃を高速冷却遠心（８，０００Ｘ　Ｈ）にかけ、除菌す
る。４℃で、」二清液に冷エタノールを加え、３０〜６
０％濃度で沈澱する画分を高速冷却遠心（８，０００ｘ
　ｇ　）にかけて集めた。次いて、このエタノール沈澱
物を直ちに、２５　ｍＭ　ＭｃＩｌｖａｊｎｅ緩衝液（
ｐＨ６，４）に溶解し、同」二緩衝液で充分に平衡化し
たＤＥＡＥ−１−ヨバール６５０Ｓを充填したカラム（
４，４Ｘ　５５　ｃｍ）にのせた。１００　ｍＭ　Ｍｃ
Ｉｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６，］）にて溶出される活
性画分を集めた。この両分を濃縮・透析後、２５ｍＭ　
ＭｃＴｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６，４）で充分に平衡
化したバイオゲルＰ−１００を充填したカラム（＋、８
　ｘ　１’２０　ｃｍ　）にかけ、ゲル濾過を行った。

得られた単一の活性画分を集め、濃縮し、高度に精製さ
れたエンドデキストラナーゼを得た。

（８）分子量 ５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＯＳＰＡ
ＧＥ）法により推定されたエンドデキストラナ１ ゼの分子量は約８８．０００である。

（９）等電点（ｐＴ） １、、　Ｋ　ｒ３社製等電点雷気泳動袈置（１１０ｍｌ
用カラム）により測定された精製エンドデキストラナー
ゼの等電点は４．５０である。

（１０）阻害及び活性化 ５　ｍＭの水銀、銀、鉄、銅などの重金属イオンにより
、またこれと同一濃度のＮ−ブロモスクシンイミドなど
により該酵素の活性が阻害される。

一方、５　ｍＭのカルシウムイオンにより該酵素の活性
が賦活される。

（１１）アミノ酸組成（モル比％） アルギニン４．２４、リジン４．３１．　ヒスチジン２
、■５、フェニルアラニン４．０４、チロシン３７３、
ロイシン６．８２、インロイシン５，８７、メチオニン
０４７、バリン７．５６、アラニン９．１６、グリシン
８．６９、プロリン６．３４、グルタミン酸８．０８、
セリン６．５＋、スレオニン７．３１．アスパラギン酸
１２．２６、トリプトファン１．９４、シスチン０．５
２次に、当該エンドデキストラナーゼを生産せし２ める為の培養方法について述べる。

デキストラナーゼを製造するためには、前記した糸状菌
ＦｕｓΩｒｉｏｍ　ｓｐ　　などの糸状菌フザリウム（
Ｆｕｓａｒｉｕｍｌ属に属するエンドデキストラナーゼ
生産菌またはその突然変異株を、培養培地に接種して培
養する。水閘の培養方法については、液体培養おＪ：び
固形倍谷のいずれにおいてｂ可能であるが、工業的生産
には好気的に液体培養するのが好ましい。

当該菌の培地の栄養源は、一般に微生物培養に用いられ
るものを使用することが可能である。また、細菌性多糖
デキストランを唯一の炭素源に用いると、当該エンドデ
キストラナーゼを誘導生成せしめることができる。

窒素源としては、有機窒素含有物として各種アミノ酸、
肉エキス、ペプトン、マルトエキス、尿素などが、また
、無機窒素化合物としては塩化アンモニウム、リン酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウムなど
が単独または組合わせて用いることができる。その他、
無機塩類、ビ　３ クミン類などを適時添加するとよい。

培養温度は２０〜３０°Ｃが適しており、より好ましく
は２４〜２７℃がよい。培養開始時のｐＨは４．５〜８
．０が適しているが、より好ましくはｐＨ５，０〜６．
５がよい。培養日数は５〜７日間が好ましい。

上記のような培養条件下で、充分にデキストラナーゼを
産生せしめた培養物から、遠心分離により菌体を除去す
れば、粗酵素液が得られる。

このようにして得られた粗酵素液は、そのままでも製品
として充分に使用可能であるが、さらに粗酵素液を公知
の分離・精製方法、例えば限外濾過膜濃縮法、エタノー
ルなどによる有機溶媒沈澱法、硫酸アンモニウムなどに
よる塩析法、カラムクロマト分画法、アフィニティーク
ロマト分画法、等電点電気泳動法などを、単独あるいは
適宜組合わせることによって、当該エンドデキストラナ
ーゼの精製酵素液を採取することが可能である。次にそ
の一例を示す。

まず、培養液中の菌体等を遠心分離で除去し、無細胞上
清液を得る。この上清液を粗酵素として４ 利用することも可能である。この」二清液に冷エタノー
ルを加え、３０〜６０％濃度で沈澱する両分を２５ｍＭ
　Ｍｃｒｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６，４）に溶解し、
ｒ］　Ｅ　Ａ　Ｅトヨパール６５０Ｓカラムにのセる。

ＩＦ］ｌＩｍＭＭｃＩ］ｖａｉｎｃ緩衝液（ｐＨ６，１
）で溶出される活性画分をバイオゲルＰ−１００カラム
でゲル濾過を行い、精製エンドデキストラナーゼを得る
。

本発明のイソフル１−オリゴ糖の製造方決は、こうして
得られたエンドデキストラナーゼを、デキストランに作
用させて、イソマルトトリオースを主体とするイソマル
トオリゴ糖を生成させることを特徴としている。この場
合、エンドデキストラナーゼは、前記のようにして培養
された培養物として、または培養物から調製された粗酵
素液として、さらには精製された酵素として、デキスト
ランに作用させることができる。

このようにして生成されたエンドデキストラナーゼを用
い、イソマルトトリオースを製造するための酵素反応は
、好ましくは３０〜５０℃、ｐ＋（５，０〜８，０、反
応時間は４〜１８時間、デキストランにこ度は　５ ２〜８％で行うとよい。反応液中の生成糖組成はイソマ
ルトテトラオース以上のもの約３０％、イソマルトトリ
オース約６０％、イソマルトース約７％、グルコース約
３％であった。

また、予めデキストランＴ２Ｏ００を希塩酸などで部分
加水分解したものに、本精製エンドデキストラナーゼを
作用させると、短時間内にイソマルトトリオースを主体
としたイソマルトオリゴ糖を効率よく生成・取得できる
ことが判明した。

［実施例］ 次に、以下の実施例にＪ：す、木兄ＩＶｌを具体的に説
明する。

実施例１　粗酵素液の調製１ １０％　デキストラン（８糖７０）　、０．２％ＮＨ４
Ｎ０．、Ｏ１％ＫＨ□ＰＯ４，０，０５％ｕｇｓｏ４　
・７Ｈ□０．０．０４％（：ａＣ１ｚ２Ｈ２０，０，３
％　ポリペプトン、０．３％　イーストエクストラクト
からなる培養培地（ｐＨ５，５１３℃を、　５Ｃのジャ
ーファーメンタ−に仕込み、糸状菌Ｆｕｓａｒｉｕｍ　
ｓｐ、を１．１　ｖｖｌｌ、１１０　ｒｒｌｍにて２５
℃、５日間培養した。培養後、培養液を高速冷却連続遠
心６ 分離にかけて菌体を除去し、無細胞上清液を得た。この
」二清液は５．２Ｑｔ位／ｍｌのデキストラナーゼを含
有していた。本活性は前述したブレビバクテリウム属の
生産するデキストラナーゼ（４２単位／ｍｌｌ　と比較
して明らかに高い。

実施例２　粗酵素液の調製２ 実施例１で得られた除菌液を３０〜６０％濃度の冷エタ
ノールで処理し、生した沈澱を２５　ｍＭＭｃＩ　１ｖ
ａｉ　ｎｅ緩衝液（ｐＨ６，４１に溶解せしめ、粗酵素
液５０ｍ１を得た。この酵素液は５８．１単位／ｍｌの
エンドデキストラナーゼ活性を含自していた。

実施例３　酵素の精製 実施例２で得られた＋１１Ｑｌ素液のうち、４８．４　
ｍｌを２５　ｍＭ　ＭｃＴＩｖａｉｎｃ　ｉ３衝ＴＪＡ
Ｉ　（Ｉ’ｌｌ　［ｉ、　４１　て充分にｉｔ’衡化し
たＤＥＡＥ−１−ヨパール６５０Ｓを充填したカラム（
４，４ｘ　５５　ｃｍｌ　にのせ、本酵素を吸着せしめ
た後、Ｉｎｎ　ｍＭ　ＭｃＴＩｖａｉｎｃ緩ｆＩｉ液（
ｐＨｌｉ、Ｉｌ　にて溶出。

される活性画分を集めた。この活性画分を濃縮・這析後
、２５　ｍＭ　Ｍｃｌｌｖａｉｒ＋ａ　緩衝液（ｐＩ）
ら４）で充分に平衡化したバイオゲルＰ−１００を充填
したカラ７ ム（１，８ｘ　　１２０　ｃｍｌにのぜ、ゲル濾過を行
った。

得られた単一の活性画分を集め、コロジオンバッグで濃
縮し、精製エンドデキストラナーゼを得た。本精製酵素
について、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ
）およびＳＯ３−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥ）を行ったところ、それぞれ単一のタン
パク質染色バンドのみが認められた。これらの精製操作
によって、本エンドデキストラナーゼが電気泳動的に均
一な標品にまで精製されたことが明らかとなった。

以上の酵素精製過程に伴う総タンパク質量、酵素の総活
性量、活性回収率、比活性等の変化を第１表に示ず。こ
の表に示されるように、３℃の培養土清液より、本酵素
の精製標品１６．Ｏｍｇを活性回収率８６．７％で得た
。本精製酵素標品の力価（比活性）は１５２単位／ｍｇ
タンパク質であった。また、本精製酵素は前記の性質を
有していた。

（以下余白） 　８ 実施例４ １０αのデキストランＴ２Ｏ００（ファルマシア社製）
を１２．５　ｍＭ　Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６
，４１２５（］　ｍｍに溶解し、Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓ
ｐ、起源のエンドデキストラナーゼを基質１ｍｇ当り０
．０８５単位添加し、３５℃で３０分間、１．３，６．
１８．２７時間それぞれ反応を行った。反応液中の生成
糖組成の経時的な変化を高速液体クロマトグラフィーに
より分析した結果を第１図に示す。反応時間３０分にお
ける生成糖組成は、イソマルトテトラオース以上のもの
約４７．８％、イソマルトトリオース約５１％、イソマ
ルトース約１％、グルコース約０．２％であった。さら
に、反応時間６時間における生成糖組成は、イソマルト
テトラオース以上のもの約３３％、イソマルトトリオス
約６１％、イソマルトース約４％、グルコース約２％の
分布を示した。これ以後、反応時間が経過するにつれイ
ソマルトトリオースの収率は若干低下する傾向がみられ
た。なお、高速液体クロマトグラフィーの条件は以下の
如くである。

カラム：　Ａｍ１ｎｅｘ　ＨＰＸ−４２Ａ（７，８ｍｍ
　φｘ　３００　ｍｍ１０ 移動相：脱イオン水 流速−０，６ｍｌ／ｍｉｎ カラム圧：　３０　ｋｇ／ｃｍ” カラム温度ニア０℃ 検出器：示差屈折計、■品性製作所製、商品名ｒＲＩＤ
−６ＡＪ 分岐オリゴ糖はデキストランの酸による部分加水分解物
を標準物質として、ペーパークロマトグラフィーおよび
高速液体クロマトグラフィーにより構造確認を行ったと
ころ、すべてα−１，６−グルコシド結合からなるイソ
マルトオリゴ糖であった。

実施例５ デキストランＴ２Ｏ００（ファルマシア社製）　５．０
　ｇを０．２Ｎ塩酸８０　ｍｌに溶解し、９５°Ｃで４
時間加水分解した後に２Ｎ水酸化ナトリウムを添加して
、ｐＨ６，１に調整した。次いで、脱イオン水を加えて
、全量を１２５　ｍｌとした。上記したデキストランの
部分加水分解物１ｍｇ当り精製エンドデキストラナーゼ
０．０８５単位を添加し、３５℃で３０分間、■、３．
６．１８時間それぞれ反応を行った。反応液中の生成糖
組成の経時的な変化を高速液体クロマトグラフィーによ
り分析した。反応時間３０分における生成糖組成は、イ
ソマルトテトラオース以上のもの約１９％、イソマルト
トリオース約５１％、イソマルトース約１５％、グルコ
ース約１５％であった。さらに、反応時間３時間におけ
る生成糖組成は、イソマルトテトラオース以上のもの約
８％、イソマルトトリオース約６０％、イソマルトース
約１５％、グルコース約１７％の分布を示した。

なお、高速液体クロマトグラフィーの実施条件は実施例
４の場合と同一である。

実施例６ １Ｏ％シヨ糖、０．０５％ＭｇＳＯ４・７Ｈ７０，０，
２％に２ＨＰ０４．１％ポリペプトンからなる液体培地
（ｐＨ７，０，１２１に、う蝕原性連鎖球菌（Ｓｔｒｅ
　ｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔａｎｓｌ　を接種し、３７℃
にて５日間静置培養する。培養液中に生成された不溶性
物質を濾別し、脱イオン水にて充分洗浄した。残渣の懸
濁液（約８０　ｍｌｌをロータリーエバポレーターを用
いて減圧ン　り 濃縮しく６０”Ｃ１，凍結乾燥を施した。これら一連の
操作を経て、１℃の培養液より不溶性グルカンの凍結乾
燥標品的１．２ｇを得た。

上記不溶性グルカンを０２％含有する２５　ｍＭＭｃＴ
ｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６，４１２，４ｍｌに、Ｆｕ
ｓａｒｉｕｍｓｐ　　起源の精製エンドデキストラナー
ゼ（８液（２，５単位）を１００μｍ加え、３７℃で反
応させた。この反応条件下で経時的に生成される還元糖
をＳｏｍｏｇｙｉ−Ｎｅｌｓｏｎ法を用いて定量した。

ま゛た、不溶性グルカン中の全糖をフェノール硫酸法で
定量し、不溶性グルカンの分解率を算出した。

得られた結果を総合すると、Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ、
起源のエンドデキストラナーゼは、Ｓ　Ｌ　ｒ　ｅ　ｆ
、ｏ　ｃ　ｏ　ｃ　ｃ　ｕ　ｓｍｕｔａｎｓの産生する
不溶性グルカンを約２５％分解することが確認された。

［発明の効果］ 以上説明したように、本発明の一つによれば、糸状菌Ｆ
ｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ、の産生する高力価の新規エンド
デキストラナーゼを提供することができる。

また、本発明のもう一つによれば、糸状菌フザ３ リウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍｌ属に属するエンドデキスト
ラナーゼ生産菌またはその突然変異株を培養して、培養
物中からエンドデキストラナーゼを高収率で工業的に得
ることができる。

更に、本発明のもう一つによれば、上記エンドデキスト
ラナーゼをデキストランに作用させて、イソマルトトリ
オースを主体とするイソマルトオリゴ糖を効率的に生成
させることができる。

このイソマルトオリゴ糖は、難う触性甘味料、保況剤、
または腸内のビフィズス菌を活性化する因子などとして
、食品工業、化粧品工業等で有効に利用し得るちのであ
る。

更に、本発明のエンドデキストラナーゼは、５ｔｒｅ　
ｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｔａｎｓの産生する不溶性グル
カン分解能力をも有するので、歯磨き剤、義歯洗浄剤、
口臭除去剤などの口腔衛生関連商品への利用も可能であ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は２％デキストランＴ２Ｏ００溶液を基質として
、精製エンドデキストラナーゼを作用させた　４ 場合の生成糖組成の経時変化を示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的特性を有することを特徴とする新規
   エンドデキストラナーゼ。 （１）作用 本酵素はデキストランをエンド様式で加水分解し、主と
   してα−イソマルトトリオースを生成する。 （２）基質特異性 本酵素は主として細菌性多糖デキストランを加水分解す
   る。 （３）至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 本酵素はｐＨ４．０〜１１．５の広範囲で作用し、至適
   ｐＨは６．４付近にある。また、ｐＨ４．５〜１０．０
   の範囲で安定である。 （４）作用温度範囲及び至適作用温度 本酵素は温度２０〜５５℃の範囲で作用し、至適作用温
   度は３５℃付近である。 （５）温度安定性 本酵素をｐＨ６．４で、１０分間各種温度で加熱処理す
   ると、４５℃までは１００％、５０℃で約２５％の残存
   活性を示し、５５℃でほぼ完全に失活する。 （６）分子量 本酵素の分子量は約８８，０００である。 （７）等電点（ｐ￥Ｉ￥） 本酵素の等電点は４．５０である。 （８）アミノ酸組成（モル比％） アルギニン４．２４、リジン４．３１、ヒスチジン２．
   １５、フェニルアラニン４．０４、チロシン３．７３、
   ロイシン６．８２、イソロイシン５．８７、メチオニン
   ０．４７、バリン７．５６、アラニン９．１６、グリシ
   ン８．６９、プロリン６．３４、グルタミン酸８．０８
   、セリン６．５１、スレオニン７．３１、アスパラギン
   酸１２．２６、トリプトファン１．９４、シスチン０．
   ５２２、糸状菌フザリウム（￥Ｆｕｓａｒｉｕｍ￥）属
   に属するエンドデキストラナーゼ生産菌またはその突然
   変異株を培養培地に接種して、所定の培養条件下で培養
   し、該培養物からエンドデキストラナーゼを採取するこ
   とを特徴とするエンドデキストラナーゼの製造方法。 ３、請求項２記載の方法によって得られたエンドデキス
   トラナーゼを、デキストランに作用させて、イソマルト
   トリオースを主体とするイソマルトオリゴ糖を生成させ
   ることを特徴とするイソマルトオリゴ糖の製造方法。 ４、前記エンドデキストラナーゼを、この酵素を含む培
   養物、この培養物から調製された粗酵素液、または精製
   酵素として作用させる請求項３記載のイソマルトオリゴ
   糖の製造方法。