JPH0390099A - トキソプラズマ増殖抑制剤 - Google Patents
トキソプラズマ増殖抑制剤Info
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- JPH0390099A JPH0390099A JP1224677A JP22467789A JPH0390099A JP H0390099 A JPH0390099 A JP H0390099A JP 1224677 A JP1224677 A JP 1224677A JP 22467789 A JP22467789 A JP 22467789A JP H0390099 A JPH0390099 A JP H0390099A
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- peptide
- toxoplasma
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、トキソプラズマ増殖抑制作用を有する生理活
性ペプチドに関するものである。
性ペプチドに関するものである。
（発明の背景）
トキソプラズマ（ｎ■１並懸）は広く世界各地域の補乳
類、鳥類等のほとんどあらゆる細胞内に寄生しうる原虫
の一種で、ヒトにおける脳髄膜炎をはじめ各種の先天性
、後天性障害を引き起こし、また家畜の病原体としても
恐れられている。
類、鳥類等のほとんどあらゆる細胞内に寄生しうる原虫
の一種で、ヒトにおける脳髄膜炎をはじめ各種の先天性
、後天性障害を引き起こし、また家畜の病原体としても
恐れられている。
このトキソプラズマは健康な宿主のマクロファージに摂
取されても、−数機生物と異なり、マクロファージの殺
機能から逃避し、内部出芽による分裂増殖を繰り返す。
取されても、−数機生物と異なり、マクロファージの殺
機能から逃避し、内部出芽による分裂増殖を繰り返す。
一方、トキソプラズマ過免疫動物では、マクロファージ
内での虫体の増殖抑制、虫体への殺作用が観察されてお
り、その血清中には該動物の正常細胞内のトキソプラズ
マ増殖を抑制する液性因子（リンホカイン）が存在する
ことが知られている（文献１；以下説明中に参照される
文献は本明細書末尾に参考文献として列挙する）。
内での虫体の増殖抑制、虫体への殺作用が観察されてお
り、その血清中には該動物の正常細胞内のトキソプラズ
マ増殖を抑制する液性因子（リンホカイン）が存在する
ことが知られている（文献１；以下説明中に参照される
文献は本明細書末尾に参考文献として列挙する）。
またトキソプラズマ過免疫動物の牌臓細胞をトキソプラ
ズマ原虫溶解抗原（−■址尖懸１ｙｓａｔｅａｎｔｉｇ
ｅｎ ： Ｔ Ｌ Ａ ）の存在下で培養した培養土清
中にも、同種細胞内でのトキソプラズマ増殖を抑制する
リンホカインが存在することがわかっている（文献２．
３）。
ズマ原虫溶解抗原（−■址尖懸１ｙｓａｔｅａｎｔｉｇ
ｅｎ ： Ｔ Ｌ Ａ ）の存在下で培養した培養土清
中にも、同種細胞内でのトキソプラズマ増殖を抑制する
リンホカインが存在することがわかっている（文献２．
３）。
このリンホカインはＴリンパ球産生物質と推察される分
子量３〜４万の糖蛋白で、Ｔ ｏｘｏ−ＧＩＦ（ｎ回圧
］且懸Ｇｒｏｗｔｈ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｆａｃｔ
ｏｒ ； トキソプラズマ増殖抑制因子）と呼ばれてい
る（文献２．３）。このＴ ｏｘｏ−ＧＩＦはマクロフ
ァージ内での増殖のみならず他の体細胞でのトキソプラ
ズマ増殖をも抑制する。しかし宿主と同じ動物種の細胞
内における原虫の増殖を阻止するのみで、異種の動物で
の増殖は阻止できない（文献３，４）。
子量３〜４万の糖蛋白で、Ｔ ｏｘｏ−ＧＩＦ（ｎ回圧
］且懸Ｇｒｏｗｔｈ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｆａｃｔ
ｏｒ ； トキソプラズマ増殖抑制因子）と呼ばれてい
る（文献２．３）。このＴ ｏｘｏ−ＧＩＦはマクロフ
ァージ内での増殖のみならず他の体細胞でのトキソプラ
ズマ増殖をも抑制する。しかし宿主と同じ動物種の細胞
内における原虫の増殖を阻止するのみで、異種の動物で
の増殖は阻止できない（文献３，４）。
このような種族特異性があるため、Ｔｏｘｏ−ＧＩＦは
ヒトや宿主以外の動物のトキソプラズマ感染症の予防、
治療に用いることができなかった。
ヒトや宿主以外の動物のトキソプラズマ感染症の予防、
治療に用いることができなかった。
このような状況下で本発明者らが見いだしたトキソプラ
ズマ免疫動物血清の加水分解による低分子量ポリベチド
物質は種族特異性のないトキソプラズマ増殖抑制物質と
して画期的なものであった（文献５，６．７）。このト
キソプラズマ免疫動物血清由来加水分解物はオビオアク
チン（Ｏｂｉｏ−ａｃｔｉｎ ）とよばれている（文献
８）。このオビオアクチンは分子量３，０００〜５．０
００のポリペプチド物質であり同種細胞だけでなく、異
種細胞内におけるトキソプラズマ増殖を抑制する（文献
９）。
ズマ免疫動物血清の加水分解による低分子量ポリベチド
物質は種族特異性のないトキソプラズマ増殖抑制物質と
して画期的なものであった（文献５，６．７）。このト
キソプラズマ免疫動物血清由来加水分解物はオビオアク
チン（Ｏｂｉｏ−ａｃｔｉｎ ）とよばれている（文献
８）。このオビオアクチンは分子量３，０００〜５．０
００のポリペプチド物質であり同種細胞だけでなく、異
種細胞内におけるトキソプラズマ増殖を抑制する（文献
９）。
さらにオビオアクチンはトキソプラズマ以外の他の原虫
や細菌、ウィルス等に対する抗微生物活性、さらには抗
腫瘍活性をも有するもので、免疫賦活剤としての用途を
開くものであった（文献５．６，７．１７）。
や細菌、ウィルス等に対する抗微生物活性、さらには抗
腫瘍活性をも有するもので、免疫賦活剤としての用途を
開くものであった（文献５．６，７．１７）。
発明者はさらに、このオビオアクチンを精製してその活
性中心を明らかにし、その知見からＧ １ｙ−Ｇ ｌｕ
−Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕな
ど一連の新たな抗トキソプラズマペプチドを合成した（
文献１８；特願昭６２−３３０１４２）。
性中心を明らかにし、その知見からＧ １ｙ−Ｇ ｌｕ
−Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕな
ど一連の新たな抗トキソプラズマペプチドを合成した（
文献１８；特願昭６２−３３０１４２）。
今回、発明者はこれら新規生理活性ペプチドの類縁体を
探索する過程で、より短かいペプチドでもトキソプラズ
マ増殖抑制作用を有する新たな生理活性ペプチドを見出
した。これは、より活性中心に迫った抗トキソプラズマ
ペプチドをより簡単なステップで低コストで大量生産が
できることを示す。またペプチドの溶解性、安定性を改
善する目的で種々の修飾を試みたところ、アミド化した
ペプチドにトキソプラズマ増殖抑制作用を有するものを
見出し、より有用な抗トキソプラズマペプチドの存在を
明らかにした。本発明はこのような知見に基き完成され
たものである。
探索する過程で、より短かいペプチドでもトキソプラズ
マ増殖抑制作用を有する新たな生理活性ペプチドを見出
した。これは、より活性中心に迫った抗トキソプラズマ
ペプチドをより簡単なステップで低コストで大量生産が
できることを示す。またペプチドの溶解性、安定性を改
善する目的で種々の修飾を試みたところ、アミド化した
ペプチドにトキソプラズマ増殖抑制作用を有するものを
見出し、より有用な抗トキソプラズマペプチドの存在を
明らかにした。本発明はこのような知見に基き完成され
たものである。
（発明の目的）
すなわち本発明は、より活性中心に迫ったちので、かつ
低コストで大量生産ができるトキソプラズマ増殖抑制作
用を有する新規生理活性ペプチドを提供することを目的
とする。
低コストで大量生産ができるトキソプラズマ増殖抑制作
用を有する新規生理活性ペプチドを提供することを目的
とする。
また本発明は、溶解性安定性に優れ、薬剤としての有用
性に優れた新規生理活性ペプチドを提供することを目的
とする。
性に優れた新規生理活性ペプチドを提供することを目的
とする。
（発明の構成）
本発明のこの目的は、下記のいずれかのアミノ酸配列か
らなり、トキソプラズマ増殖抑制作用を有する生理活性
ペプチド、 Ｇ ｌｙ Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ １ｕＧｌｙ
−Ｇ ｌｕ−Ｇｌｕ Ｇｌｙ−Ｇｌｕ Ｇ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ
ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｎｌ２により達成される。なお
左末端のアミノ酸はＮ末端アミノ酸であり、右末端のア
ミノ酸はＣ末端のアミノ酸である。従って第４列のペプ
チドのＣ末端側のアミノ酸（Ｇ ｌｕ−ＮＨｔ ）は、
ａ−Ｃｏ○Ｈ基がアミド化されていることを示す。
らなり、トキソプラズマ増殖抑制作用を有する生理活性
ペプチド、 Ｇ ｌｙ Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ １ｕＧｌｙ
−Ｇ ｌｕ−Ｇｌｕ Ｇｌｙ−Ｇｌｕ Ｇ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ
ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｎｌ２により達成される。なお
左末端のアミノ酸はＮ末端アミノ酸であり、右末端のア
ミノ酸はＣ末端のアミノ酸である。従って第４列のペプ
チドのＣ末端側のアミノ酸（Ｇ ｌｕ−ＮＨｔ ）は、
ａ−Ｃｏ○Ｈ基がアミド化されていることを示す。
これらは固相法や液相法などの従来より公知の方法によ
り合成できる（文献１５．１６）。
り合成できる（文献１５．１６）。
アミド化ペプチドの場合には、以下のような方法によっ
て合成できる。
て合成できる。
同相法による合成では、パラメチルベンズヒドリルアミ
ン樹脂を用いて骨格となる基本ペプチドを合成し、その
後フッ化水素処理して樹脂から脱離させると共にアミド
体を生成する。
ン樹脂を用いて骨格となる基本ペプチドを合成し、その
後フッ化水素処理して樹脂から脱離させると共にアミド
体を生成する。
液相法の場合は、Ｎ Ｈ２基を予め保護基でマスクして
からＣ０ＯＨ基にＮ−ヒドロキシスクシンイミドを導入
し、その後、アンモノリシスさせてＣ０ＯＨ基をアミド
化する。このアミド化ＧｌｕにＺ （ＯＭｅ） −Ｇｌ
ｕ（ＯＢｚｌ）及びＺ （ＯＭｅ）−Ｇｌｙを順次活性
カップリング法で反応させ、基本骨格を伸長することが
できる。
からＣ０ＯＨ基にＮ−ヒドロキシスクシンイミドを導入
し、その後、アンモノリシスさせてＣ０ＯＨ基をアミド
化する。このアミド化ＧｌｕにＺ （ＯＭｅ） −Ｇｌ
ｕ（ＯＢｚｌ）及びＺ （ＯＭｅ）−Ｇｌｙを順次活性
カップリング法で反応させ、基本骨格を伸長することが
できる。
（実施例）
Ｔｏｘｏ−ＧＩＦ ’ 生゛１８去Ｔ ｏｘｏ−
ＧＩＦ活性の測定は本発明者らの方法で行なった（文献
１１．１２）。
ＧＩＦ活性の測定は本発明者らの方法で行なった（文献
１１．１２）。
成熟ＢＡＬＢ／Ｃ系雌マウス腹腔内に滅菌０．１％グリ
コーゲン加生理食塩水１ｍｌを注入し、５日後に冷ハン
クス液（Ｒａｎｋｓ’ ｂａｌａｎｃｅｄ ５ａｌｔ
５ｏｌｕｔｉｏｎ ；ＨＢＳＳ）にて腹腔内を洗浄し腹
腔内滲出細胞（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｅｘｕｄａｔｅ
ｃｅｌｌ）を採取した。遠心操作（２５０Ｇ、５分）
により２回洗浄後、細胞をｌ ｘ ｔｏ’ ｃｅｌｌｓ
／ｍｌの割合で１０％熱非働化子牛血清（ＣＳ）添加１
９９培養液（ＴＣ−１９９）に浮遊させた。この細胞浮
遊液を１ｍｌずつ径１５ｍｍの円形カバーグラスを落し
込んだ培養シャーレ（Ｍｕｌｔｉ−ｄｉｓｈ−ｔｒａｙ
、 ＦＢ−１６−２４−ＴＣ，米国Ｌｉｎｂｌ。
コーゲン加生理食塩水１ｍｌを注入し、５日後に冷ハン
クス液（Ｒａｎｋｓ’ ｂａｌａｎｃｅｄ ５ａｌｔ
５ｏｌｕｔｉｏｎ ；ＨＢＳＳ）にて腹腔内を洗浄し腹
腔内滲出細胞（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｅｘｕｄａｔｅ
ｃｅｌｌ）を採取した。遠心操作（２５０Ｇ、５分）
により２回洗浄後、細胞をｌ ｘ ｔｏ’ ｃｅｌｌｓ
／ｍｌの割合で１０％熱非働化子牛血清（ＣＳ）添加１
９９培養液（ＴＣ−１９９）に浮遊させた。この細胞浮
遊液を１ｍｌずつ径１５ｍｍの円形カバーグラスを落し
込んだ培養シャーレ（Ｍｕｌｔｉ−ｄｉｓｈ−ｔｒａｙ
、 ＦＢ−１６−２４−ＴＣ，米国Ｌｉｎｂｌ。
Ｃｈｅｍｉｃａ１社製）内に分注し、５％炭酸ガス培養
器内で培養した。混入する赤血球やリンパ球系細胞を除
去するために、各培養シャーレを２時間ごとに３回、Ｈ
ＢＳＳで静かに洗浄後、−夜炭酸ガス培養器内で培養し
てカバーグラス上にマクロファージのモル−ヤを形成さ
せた。
器内で培養した。混入する赤血球やリンパ球系細胞を除
去するために、各培養シャーレを２時間ごとに３回、Ｈ
ＢＳＳで静かに洗浄後、−夜炭酸ガス培養器内で培養し
てカバーグラス上にマクロファージのモル−ヤを形成さ
せた。
このモル−ヤをＴｃ−１９９培養液で再び洗浄した後、
トキソプラズマＲＨ株栄養型虫体なマクロファージｌＸ
ｌ０’個当たりｌＸｌ０’個となるように添加・感染さ
せた。細胞内に穿入しなかった遊離虫体は感染１時間後
にＨＢＳＳで洗浄除去した。
トキソプラズマＲＨ株栄養型虫体なマクロファージｌＸ
ｌ０’個当たりｌＸｌ０’個となるように添加・感染さ
せた。細胞内に穿入しなかった遊離虫体は感染１時間後
にＨＢＳＳで洗浄除去した。
このカバーグラスに各試料を含む培養液（マクロファー
ジｌＸｌ０’個当たり１ｍ１）を添加し、４８時間培養
した後、ＭＢｙ−（ｉｉｅｍｓａ染色して細胞内のトキ
ソプラズマ数を算定した。カバーグラス上の一定視野で
の細胞１００個当たりについて、含有虫体数が０個であ
る細胞の数、含有虫体数が１個から５個である細胞の数
、含有虫体数が６個以上である細胞の数をそれぞれ数え
百分率を求める。同様な操作をカバー・グラスの他の４
ケ所の視野でも行ない、合計５ケ所での値からそれぞれ
の平均値と標準偏差を求めてトキソプラズマ含有細胞出
現率とした。
ジｌＸｌ０’個当たり１ｍ１）を添加し、４８時間培養
した後、ＭＢｙ−（ｉｉｅｍｓａ染色して細胞内のトキ
ソプラズマ数を算定した。カバーグラス上の一定視野で
の細胞１００個当たりについて、含有虫体数が０個であ
る細胞の数、含有虫体数が１個から５個である細胞の数
、含有虫体数が６個以上である細胞の数をそれぞれ数え
百分率を求める。同様な操作をカバー・グラスの他の４
ケ所の視野でも行ない、合計５ケ所での値からそれぞれ
の平均値と標準偏差を求めてトキソプラズマ含有細胞出
現率とした。
また活性の別の表現方法として、試料添加によるトキソ
プラズマ（Ｔｐ）含有細胞（百分率）の減少の割合から
Ｔ ｏｘｏ−ＧＩＦ活性を百分率で表示した。
プラズマ（Ｔｐ）含有細胞（百分率）の減少の割合から
Ｔ ｏｘｏ−ＧＩＦ活性を百分率で表示した。
Ｔ ｏｘｏ−ＧＩＦ活性（％）
ｌＯＯ
試料は各粉末試料を、３ｍｌの１０％Ｃ３−Ｔｃ１９９
培地に溶解し、０．４５μｍ孔の膜フィルタで濾過滅菌
したちのを用いた。
培地に溶解し、０．４５μｍ孔の膜フィルタで濾過滅菌
したちのを用いた。
Ａ ペプチドのＴ ｏｘｏ−ＧＩＦ
以下のオリゴペプチドを合成しＴ ｏｘｏ−ＧＩＦ活性
を測定した。
を測定した。
Ｇ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ
ｌｕ −Ｇ ｌｕ（Ｇｌｙｃｉｌ−ｐｅｎｔａ−Ｇｌ
ｕｔａｍｉｎａｔｅ； １Ｇ１ｙ＋５Ｇｉｕ ）Ｇ
ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌ
ｕ（Ｇｌｙｃｉｌ−ｔｅｔｒａ−Ｇｌｕｔａｍｉｎａｔ
ｅ； １Ｇ１ｙ＋４Ｇｌｕ ）Ｇ ｌｙ Ｇ ｌｕ
−Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ（Ｇｌｙｃｉｌ−ｔｒｉ−Ｇ
ｌｕｔａｍｉｎａｔｅ； ＩＧ１ｙ＋３０１ｕ ）Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ （Ｇｌｙｃｉｌ−ｄｉ−Ｇｌｕｔａｍｉｎａｔｅ ；
１Ｇｌｙ＋２Ｇｌｕ ）Ｇｌｙ−Ｇｌｕ （Ｇｌｙｃｉｌ−ｍｏｎｏ−ＧＬｕｔａｍｉｎａｔｅ
： １Ｇ１ｙ＋ＩＧＬｕ ）これらの合成ペプチド
を０．７ｍＭの濃度で培養液（１０％−ＣＳ−Ｔｃ１９
９）に溶解して、マウス腹腔マクロファージを用いてＴ
ｏｘｏ−ＧＩＦ活性を測定した。
ｌｕ −Ｇ ｌｕ（Ｇｌｙｃｉｌ−ｐｅｎｔａ−Ｇｌ
ｕｔａｍｉｎａｔｅ； １Ｇ１ｙ＋５Ｇｉｕ ）Ｇ
ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌ
ｕ（Ｇｌｙｃｉｌ−ｔｅｔｒａ−Ｇｌｕｔａｍｉｎａｔ
ｅ； １Ｇ１ｙ＋４Ｇｌｕ ）Ｇ ｌｙ Ｇ ｌｕ
−Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ（Ｇｌｙｃｉｌ−ｔｒｉ−Ｇ
ｌｕｔａｍｉｎａｔｅ； ＩＧ１ｙ＋３０１ｕ ）Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ （Ｇｌｙｃｉｌ−ｄｉ−Ｇｌｕｔａｍｉｎａｔｅ ；
１Ｇｌｙ＋２Ｇｌｕ ）Ｇｌｙ−Ｇｌｕ （Ｇｌｙｃｉｌ−ｍｏｎｏ−ＧＬｕｔａｍｉｎａｔｅ
： １Ｇ１ｙ＋ＩＧＬｕ ）これらの合成ペプチド
を０．７ｍＭの濃度で培養液（１０％−ＣＳ−Ｔｃ１９
９）に溶解して、マウス腹腔マクロファージを用いてＴ
ｏｘｏ−ＧＩＦ活性を測定した。
結果を下記の第１表に示す。
第
１
表
合成ペプチドのトキソプラズマ増殖抑制活性（０，７ｍ
Ｍ） Ｔｐ −５７ｐ ２＝６ Ｔｐ／ｃｅｌｌ （Ｔｃ−１９９４１０％Ｃ５） Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−ＧｌｕＧｌｙ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ Ｇｌｙ−Ｇｌｕ １１．０＝！＝１１．３ ２５．８±４．９ ６９．６±１６．１ ８６．２±４．１ ２１．６±６．４ ４２．２±３．７ ２０．６±１０，８ １１．８± ３．３ ６７．４±１２．０ ３２．２±４．１ ９．８±６．３ ２．０± １．６ （Ｍｅａｎ±Ｓ、Ｄ、） 第１表に示されるように各ペプチドのＴ ｏｘｏ−ＧＩ
Ｆ活性値は、Ｉ Ｇｌｙ＋ ４ Ｇｌｕでは−２，５％
、１Ｇｌｙ＋３Ｇｌｕでは１４．５％、Ｉ Ｇ１ｙ＋
２ Ｇｌｕでは６５．０％、Ｉ Ｇｌｙ＋ Ｉ Ｇｌｕ
では８４．１％であり、Ｉ Ｇ１ｙ＋４ Ｇｌｕはトキ
ソプラズマ増殖抑制活性が見られないものの、より短か
い各ペプチドＩ Ｇｌｙ＋ ３ Ｇｌｕ、ＩＧｌｙ＋２
Ｇｌｕ及びＩＧ１ｙ＋ＩＧｌｕでは短くなるにつれて強
くなるトキソプラズマ増殖抑制活性が認められた。
Ｍ） Ｔｐ −５７ｐ ２＝６ Ｔｐ／ｃｅｌｌ （Ｔｃ−１９９４１０％Ｃ５） Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−ＧｌｕＧｌｙ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ Ｇｌｙ−Ｇｌｕ １１．０＝！＝１１．３ ２５．８±４．９ ６９．６±１６．１ ８６．２±４．１ ２１．６±６．４ ４２．２±３．７ ２０．６±１０，８ １１．８± ３．３ ６７．４±１２．０ ３２．２±４．１ ９．８±６．３ ２．０± １．６ （Ｍｅａｎ±Ｓ、Ｄ、） 第１表に示されるように各ペプチドのＴ ｏｘｏ−ＧＩ
Ｆ活性値は、Ｉ Ｇｌｙ＋ ４ Ｇｌｕでは−２，５％
、１Ｇｌｙ＋３Ｇｌｕでは１４．５％、Ｉ Ｇ１ｙ＋
２ Ｇｌｕでは６５．０％、Ｉ Ｇｌｙ＋ Ｉ Ｇｌｕ
では８４．１％であり、Ｉ Ｇ１ｙ＋４ Ｇｌｕはトキ
ソプラズマ増殖抑制活性が見られないものの、より短か
い各ペプチドＩ Ｇｌｙ＋ ３ Ｇｌｕ、ＩＧｌｙ＋２
Ｇｌｕ及びＩＧ１ｙ＋ＩＧｌｕでは短くなるにつれて強
くなるトキソプラズマ増殖抑制活性が認められた。
また最も活性の高いＩ Ｇ１ｙ＋ Ｉ Ｇｌｕについて
、前回の出願においてＴ ｏｘｏ−ＧＩＦ活性の存在を
明らかにしたＩ Ｇ１ｙ＋ ５ Ｇｌｕとの比較を行な
った。
、前回の出願においてＴ ｏｘｏ−ＧＩＦ活性の存在を
明らかにしたＩ Ｇ１ｙ＋ ５ Ｇｌｕとの比較を行な
った。
第
表
１Ｇ１ｙ＋５Ｇｌｕ及びＩ Ｇ１ｙ＋ Ｉ Ｇｌｕのト
キソプラズマ増殖抑制活性 （０，７ｍＭ１ ｒｐ −５Ｔｐ ≧６ Ｔｐ／ｃｅｌｌ （％） （Ｔｃ二１９９＋１０％Ｃ５） １ Ｇ１ｙ＋ ５ Ｇｌｕ ６６．６±１５．３ ３１．８±１４．０ １．６± １．９ ６４．０ １ Ｇ１ｙ＋ Ｉ Ｇｌｕ ５１．４± ５．９ ４１．６±７．７ ７．８±３．４ ５２．４ （ＭｅａｎｆＳ、Ｄ、） 第２表に示すように、Ｉ Ｇｌｙ＋ Ｉ Ｇｌｕは１Ｇ
ｌｙ十５Ｇｌｕと同程度のＴ ｏｘｏ−ＧＩＦ活性を示
し、ＩＧｌｙ＋ ５ Ｇ ｌｕと同様のトキソプラズマ
増殖抑制作用や免疫賦活作用を有する薬剤としての用途
が期待できることがわかった。なお試料濃度０．７ｍＭ
を重量濃度に換算すると、１ Ｇ１ｙ＋ ５ Ｇｌｕで
は０．５０ｍｇ／ｍｌ、Ｉ Ｇｌｙ＋ Ｉ Ｇｌｕでは
０．１４ｍｇ／ｍｌとなり、Ｉ Ｇｌｙ＋Ｉ Ｇｌｕは
重量当りでＩ Ｇ１ｙ＋ ５ Ｇｌｕの約１／３の量で
同程度の抑制効果が得られることを示している。このこ
とは薬剤として投与する際により少ない投与量で良いこ
とを示している。
キソプラズマ増殖抑制活性 （０，７ｍＭ１ ｒｐ −５Ｔｐ ≧６ Ｔｐ／ｃｅｌｌ （％） （Ｔｃ二１９９＋１０％Ｃ５） １ Ｇ１ｙ＋ ５ Ｇｌｕ ６６．６±１５．３ ３１．８±１４．０ １．６± １．９ ６４．０ １ Ｇ１ｙ＋ Ｉ Ｇｌｕ ５１．４± ５．９ ４１．６±７．７ ７．８±３．４ ５２．４ （ＭｅａｎｆＳ、Ｄ、） 第２表に示すように、Ｉ Ｇｌｙ＋ Ｉ Ｇｌｕは１Ｇ
ｌｙ十５Ｇｌｕと同程度のＴ ｏｘｏ−ＧＩＦ活性を示
し、ＩＧｌｙ＋ ５ Ｇ ｌｕと同様のトキソプラズマ
増殖抑制作用や免疫賦活作用を有する薬剤としての用途
が期待できることがわかった。なお試料濃度０．７ｍＭ
を重量濃度に換算すると、１ Ｇ１ｙ＋ ５ Ｇｌｕで
は０．５０ｍｇ／ｍｌ、Ｉ Ｇｌｙ＋ Ｉ Ｇｌｕでは
０．１４ｍｇ／ｍｌとなり、Ｉ Ｇｌｙ＋Ｉ Ｇｌｕは
重量当りでＩ Ｇ１ｙ＋ ５ Ｇｌｕの約１／３の量で
同程度の抑制効果が得られることを示している。このこ
とは薬剤として投与する際により少ない投与量で良いこ
とを示している。
アミド ペプチドのＴ ｏｘｏ−ＧＩＦ公知の固相法に
よりアミド化ペプチド、Ｇｌｙ−Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ
−Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −ＮＨ２を合
成した。すなわち、パラメチルベンズヒドリルアミン樹
脂（導入量１４５ｍモル、アプライドバイオシステム社
製）にＢｏｃ−Ｇｌｕ （○ｃＨｅｘ）ｔ−ブトキシカ
ルボニル−グルタミン酸）及び、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ （ｔ
−ブトキシヵルボニルーグリシン）をＤＣＣ−ＨＯＢＴ
法（ジシクロへキシルカルボジイミド−ヒドロキシベン
ゾトリアゾロール法）にて順次カップリングさせ、保護
ペプチド樹脂を得た。この樹脂を乾燥した後、０℃で１
時間フッ化水素処理して保護基を除去するとといもに、
樹脂から脱離させた。得られたペプチドは大量分取用高
速液体クロマトグラフィーで精製し高純度の精製物を得
た。
よりアミド化ペプチド、Ｇｌｙ−Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ
−Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −ＮＨ２を合
成した。すなわち、パラメチルベンズヒドリルアミン樹
脂（導入量１４５ｍモル、アプライドバイオシステム社
製）にＢｏｃ−Ｇｌｕ （○ｃＨｅｘ）ｔ−ブトキシカ
ルボニル−グルタミン酸）及び、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ （ｔ
−ブトキシヵルボニルーグリシン）をＤＣＣ−ＨＯＢＴ
法（ジシクロへキシルカルボジイミド−ヒドロキシベン
ゾトリアゾロール法）にて順次カップリングさせ、保護
ペプチド樹脂を得た。この樹脂を乾燥した後、０℃で１
時間フッ化水素処理して保護基を除去するとといもに、
樹脂から脱離させた。得られたペプチドは大量分取用高
速液体クロマトグラフィーで精製し高純度の精製物を得
た。
このアミド化ペプチド、Ｇ ｌｙ Ｇ ｌｕ −Ｇ
ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −ＮＨ２
を０．７ ｍＭ （０，５０ｍＭ ）の濃度で培養液（
１０％−Ｃ８−Ｔｃ１９９）に溶解して、ＢＡＬＢ／Ｃ
マウス（８週齢）の腹腔マクロファージを用いてＴ ｏ
ｘｏ−ＧＩＦ活性を測定した。
ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −ＮＨ２
を０．７ ｍＭ （０，５０ｍＭ ）の濃度で培養液（
１０％−Ｃ８−Ｔｃ１９９）に溶解して、ＢＡＬＢ／Ｃ
マウス（８週齢）の腹腔マクロファージを用いてＴ ｏ
ｘｏ−ＧＩＦ活性を測定した。
第３表に示すようにアミド化ペプチドもトキソプラズマ
増殖抑制活性を有し、しかもその活性はアミド化される
前のＧ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ
−Ｇｌｕ−Ｇｌｕと同程度かむしろ高いものであった。
増殖抑制活性を有し、しかもその活性はアミド化される
前のＧ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ
−Ｇｌｕ−Ｇｌｕと同程度かむしろ高いものであった。
そこで、アミド化ペプチドの濃度依存性を調べた。第４
表に示すように０．０５ｍｇ／ｍ１以上の濃度でＴ ｏ
ｘｏ−ＧＩＦ活性を示し、０．５ ｍｇ／ｍｌの濃度で
活性はほぼ飽和していた。１ 、０ ｍｇ／ｍｌ濃度で
は細胞の凝縮と剥離を示す細胞障害像が認められた。こ
の結果は非アミド化ペプチドＧ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −
Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕと同様
であった（文献１８）。
表に示すように０．０５ｍｇ／ｍ１以上の濃度でＴ ｏ
ｘｏ−ＧＩＦ活性を示し、０．５ ｍｇ／ｍｌの濃度で
活性はほぼ飽和していた。１ 、０ ｍｇ／ｍｌ濃度で
は細胞の凝縮と剥離を示す細胞障害像が認められた。こ
の結果は非アミド化ペプチドＧ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −
Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕと同様
であった（文献１８）。
このように溶解性と安定性に優れると考えられるアミド
化ペプチド、Ｇ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ
ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｎ）Ｉｇも非アミ
ド化ペプチドと同様に薬剤として使用できると考えられ
る。
化ペプチド、Ｇ ｌｙ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ
ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｇ ｌｕ −Ｎ）Ｉｇも非アミ
ド化ペプチドと同様に薬剤として使用できると考えられ
る。
（発明の効果）
以上のように本発明の生理活性ペプチドは、トキソプラ
ズマ増殖抑制作用を有する薬剤として使用でき、従来の
ちのよりもより活性中心に迫ったもので、かつ低コスト
で大量生産ができる。
ズマ増殖抑制作用を有する薬剤として使用でき、従来の
ちのよりもより活性中心に迫ったもので、かつ低コスト
で大量生産ができる。
また、アミド化ペプチドは溶解性・安定性に優れ、薬剤
としての有用性に優れる。
としての有用性に優れる。
参考文献
１ 、５ｅｔｈｉ、に、に、 ｅｔ ａｌ、 Ｊ、Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、 １３１゜１１５１−１５５８． （１
９７５１２、５ｈｉｒａｈａｔａ、Ｔ、、Ｓｈｉｍｉｚ
ｕ、に、＆ ５ｕｚｕｋｉ、Ｎ。
ｍｕｎｏｌ、 １３１゜１１５１−１５５８． （１
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Ｚ、Ｐａｒａｓｉｔｅｎｋｄ、 ４９．１１−２３
（１９７６１３、Ｎａｇａｓａｗａ、Ｈ，ｅｔ ａｌ、
Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ、 １５６゜３０７−３１９
（１９８０１ ４、Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ、Ｙ、 ｅｔ ａｌ、 Ｚｂｌ
、Ｂａｋｔ、Ｈｙｇ、Ａ ２５０゜３８３−３９１
（１９８１） ５、特開昭５７−１４２９２２号 ６、特開昭５７−１４４９８３号 ７、米国特許第４４８２５４３号 ８、 ５ｕｚｕｋｉ、Ｎ、 ｅｔ ａｌ、 Ｚｂｌ
、Ｂａｋｔ、Ｈｙｇ、１．Ａｂｔ。
（１９７６１３、Ｎａｇａｓａｗａ、Ｈ，ｅｔ ａｌ、
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、Ｂａｋｔ、Ｈｙｇ、Ａ ２５０゜３８３−３９１
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Ｏｒｉｇ、Ａ ２５０． ３５６−３６６ （１９
８４）９、 ５ｕｚｕｋｉ、Ｎ、 ｅｔ ａｌ、
Ｚｂｌ、Ｂａｋｔ、Ｈｙｇ、１．Ａｂｔ。
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Ｚｂｌ、Ｂａｋｔ、Ｈｙｇ、１．Ａｂｔ。
Ｏｒｉｇ、Ａ ２５６． ３６７−３８０ （１９
８４）１０、 Ｉｇａｒａｓｈｉ、１． ｅｔ ａ
ｌ、 Ｚｂｌ、Ｂａｋｔ、Ｈｙｇ、１．Ａｂｔ。
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Ｏｒｉｇ、Ａ ２４４． ４７２−４８２ （１９
７９）１１、 Ｎａｇａｓａｗａ、Ｈ，ｅｔ ａｌ、
Ｊｐｎ、Ｊ、Ｖｅｔ、Ｓｃｉ、 ４３３０７−３
１９ （１９８１） １２、 ５ａｋｕｒａｉ、Ｈ，、ｅｔ ａｌ、 Ｊｐｎ
、Ｊ、Ｔｒｏｐ、Ｍｅｄ、Ｉ（ｙｇ。
７９）１１、 Ｎａｇａｓａｗａ、Ｈ，ｅｔ ａｌ、
Ｊｐｎ、Ｊ、Ｖｅｔ、Ｓｃｉ、 ４３３０７−３
１９ （１９８１） １２、 ５ａｋｕｒａｉ、Ｈ，、ｅｔ ａｌ、 Ｊｐｎ
、Ｊ、Ｔｒｏｐ、Ｍｅｄ、Ｉ（ｙｇ。
且、 １８３−１９５ （１９８２１１３、Ｂｅｎ
５ｏｎ Ｒ，Ｊ、、 ｅｔ ａｌ、 Ｐｒｏｃ、Ｎ
ａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。
５ｏｎ Ｒ，Ｊ、、 ｅｔ ａｌ、 Ｐｒｏｃ、Ｎ
ａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。
ＵＳＡ、 ７２． ６１９−６２２ （１９７５）
１４、 Ｂｏｈｌｅｎ、Ｐ、 ｒＭｅｔｈｏｄ ｉ
ｎ ＥｎｚｙｍｏｌｏｙＪ ９１゜７−２６ １５、 Ｋｅｎｔ、Ｓ、Ｂ、、 ｅｔ ａｔ。
１４、 Ｂｏｈｌｅｎ、Ｐ、 ｒＭｅｔｈｏｄ ｉ
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Ｕ、Ｒａｇｎａｒｓｅｎ ｇ ｒＰｅｐｔｉｄｅｓ
１９８４Ｊ （Ａｌｍｑｖ−ｉｓｔ ａｎｄ Ｗｉｋ
ｓｅｌｌ、５ｔｏｃｋｈｏｌｒｎ、Ｓｗｅｄｅｎ、
１９８４ ）ｐ１８５゜ １６、 Ｋｅｎｔ、Ｓ、Ｂ、Ｈ，ｅｔ ａｌ。
１９８４Ｊ （Ａｌｍｑｖ−ｉｓｔ ａｎｄ Ｗｉｋ
ｓｅｌｌ、５ｔｏｃｋｈｏｌｒｎ、Ｓｗｅｄｅｎ、
１９８４ ）ｐ１８５゜ １６、 Ｋｅｎｔ、Ｓ、Ｂ、Ｈ，ｅｔ ａｌ。
Ｎ、Ｉｚｕｍｉｙａ 編ｒＰｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ」（Ｐｒｏ−ｔｅｉｎ Ｒｅ５ｅａｃｈ Ｆｏ
ｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｂ、Ｈ，０ｓａｋａ、Ｊａｐａｎ。
ｓｔｒｙ」（Ｐｒｏ−ｔｅｉｎ Ｒｅ５ｅａｃｈ Ｆｏ
ｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｂ、Ｈ，０ｓａｋａ、Ｊａｐａｎ。
１９８５１ ｐ２１７゜
０ｓａｋｉ、Ｈ，ｅｔ ａｌ、 Ｚｂｌ、Ｂａｋｔ、
Ｈｙｇ、１．Ａｂｔ、Ｏｒｉｇ。
Ｈｙｇ、１．Ａｂｔ、Ｏｒｉｇ。
Ａ ２５６． ３２８−３３４ （１９８４１特開
平１−１７５９９６号
平１−１７５９９６号
Claims (4)
- （１）下記アミノ酸配列からなり、トキソプラズマ増殖
抑制作用を有する生理活性ペプチド。 Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ - （２）下記アミノ酸配列からなり、トキソプラズマ増殖
抑制作用を有する生理活性ペプチド。 Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ - （３）下記アミノ酸配列からなり、トキソプラズマ増殖
抑制作用を有する生理活性ペプチド。 Ｇｌｙ−Ｇｌｕ - （４）下記アミノ酸配列からなり、トキソプラズマ増殖
抑制作用を有する生理活性ペプチド。 Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｎ
Ｈ＿２
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1224677A JP2712611B2 (ja) | 1989-09-01 | 1989-09-01 | トキソプラズマ増殖抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1224677A JP2712611B2 (ja) | 1989-09-01 | 1989-09-01 | トキソプラズマ増殖抑制剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0390099A true JPH0390099A (ja) | 1991-04-16 |
| JP2712611B2 JP2712611B2 (ja) | 1998-02-16 |
Family
ID=16817492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1224677A Expired - Fee Related JP2712611B2 (ja) | 1989-09-01 | 1989-09-01 | トキソプラズマ増殖抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2712611B2 (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5859953A (ja) * | 1981-10-02 | 1983-04-09 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規なペプチド |
-
1989
- 1989-09-01 JP JP1224677A patent/JP2712611B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5859953A (ja) * | 1981-10-02 | 1983-04-09 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規なペプチド |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2712611B2 (ja) | 1998-02-16 |
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|---|---|---|---|
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